CN111454366B

CN111454366B - 一种融合蛋白及其应用

Info

Publication number: CN111454366B
Application number: CN201910053214.8A
Authority: CN
Inventors: 陈有海; 万晓春; 陈倩; 张青梅; 夏蒙
Original assignee: Shenzhen Institute of Advanced Technology of CAS
Current assignee: Shenzhen Institute of Advanced Technology of CAS
Priority date: 2019-01-21
Filing date: 2019-01-21
Publication date: 2023-06-16
Anticipated expiration: 2039-01-21
Also published as: CN111454366A

Abstract

本发明涉及生物技术领域，公开了一种融合蛋白及其应用。本发明所述融合蛋白具有如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；或具有在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列基础上存在取代、缺失和添加中一种或两种以上情形，但生物活性不改变的氨基酸序列；或具有在SEQ ID NO：1氨基酸序列基础上进行修饰后的氨基酸序列。本发明所述融合蛋白可以抑制肺泡上皮细胞的凋亡，减少血清和肺泡灌洗液中促炎因子水平,提高抑炎因子水平，减少肺部炎症和组织病理改变，从而起到有效延缓疾病进展，降低疾病损伤的作用，可作为一种全新的治疗COPD的药物。

Description

一种融合蛋白及其应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种融合蛋白及其应用。

背景技术

慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease，COPD)是一种气流受限不完全可逆、呈进行性发展、与肺部炎症反应有关的疾病。COPD主要累及肺脏，但也可引起全身的不良效应。临床主要表现为慢性咳嗽、咳痰、气短或呼吸困难、喘息和胸闷，随着疾病的进展还会发生全身性炎症反应等，严重影响患者的劳动能力和生活质量。

COPD是一种常见、多发、不能完全逆转、高致残率和高致死率的慢性呼吸系统疾病，己成为一个全球性的重要的公共卫生问题。全球大概有6亿人患有慢性阻塞性肺疾病，每年大约有270万人死于该疾病。我国COPD患者超过3800万，40岁以上人群慢性阻塞性肺病患病率高达9.9％，每分钟有2.5个人死于COPD，每年因COPD死亡的人数超过100万，致残人数超过500万。COPD是威胁人们健康的肺部疾病，仅次于心血管疾病、癌症和脑血管病，据世界卫生组织预测，至2020年将上升为世界第三大致死原因，位居世界疾病经济负担的第5位。因此，开展COPD治疗新药的研发具有重要的实用价值和社会意义。

吸烟、空气污染、小气道感染、尘肺等是COPD重要的致病病因，而吸烟是COPD最主要的危险因素,国外约80～90％的患者由吸烟引起，我国为72％。全世界吸烟人群约13亿，而我国约有3亿多。有数据表明，至少25％的持续吸烟者会发展成为COPD患者。

COPD的发病机制目前主要有慢性气道和肺部炎症形成、蛋白酶/抗蛋白酶失衡以及氧化剂/抗氧化剂失衡等学说。COPD气道炎症的病因及形成机制是复杂的，目前的研究资料尚不能充分阐明其本质，但炎症主要累及了全部气道、肺泡壁、肺实质和肺部血管，涉及的细胞主要有巨噬细胞、中性粒细胞、上皮细胞、淋巴细胞等，激活的炎症细胞释放多种炎症介质和细胞因子，包括IL-8、IL-1、IL-6、TNF-a、GM-CSF、MMP-9等。多种炎症细胞、细胞因子和炎症介质相互作用共同参与炎症过程，导致气道壁的受损和肺气肿的发生。

随着COPD患者的不断增多，对于相关疾病药物的需求也相应地大大增加。目前COPD的主要治疗药物包括支气管扩张剂(抗胆碱能药物、β2AR激动剂)、糖皮质激素、抗生素、祛痰药等。其中抗生素是对抗感染性肺病；祛痰药是促进痰液排出；支气管扩张剂可松弛支气管平滑肌、扩张支气管、缓解气流受限，是控制COPD症状的主要治疗措施，但尚未有证据表明支气管扩张剂对拮抗炎症反应、有效的延缓或阻止疾病反复发作和进行性发展同样有效果。

糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)可拮抗炎症反应。GC穿过细胞膜后与靶细胞胞浆中的糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor,GR)结合，随后在核转位信号的引导下向核内移位，以GC-GR复合物的形式与糖皮质激素目的基因结合，后募集组蛋白去乙酰化酶2(Histone deacetylase2，HDAC2)至转录激活复合体，通过HDAC2的作用使炎性基因(如NF-κB)转录停止，从而抑制炎性细胞因子的产生。近年来，由于人们认识到COPD是一种气道炎症性疾病，使得糖皮质激素在COPD的治疗中应用日益广泛，2011版GOLD指南推荐长期吸入糖皮质激素用于严重和非常严重的COPD患者，以及经常发生急性加重且长效支气管扩张剂不能良好控制症状的患者。然而，在实际临床治疗中，与吸入糖皮质激素对哮喘的高效相比，皮质激素对COPD的治疗作用有限，即使大剂量吸入糖皮质激素甚至口服糖皮质激素也不能减缓COPD患者呈进行性进展的气流阻塞、或降低各种炎性细胞、细胞因子或蛋白酶的表达，仅10％的COPD患者对吸入型糖皮质激素有效，许多COPD患者存在糖皮质激素抵抗。

因此，现有治疗COPD的方法并不能有效的延缓或阻止疾病反复发作和进行性发展。因此，寻找有效的并且安全的抗炎药对治疗COPD有着重要的意义。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种融合蛋白，使其具备显著的治疗慢性阻塞性肺疾病的作用；

本发明的另外一个目的在于提供上述融合蛋白在慢性阻塞性肺疾病领域中的相关应用。

为了实现上述发明目的，本发明提供了如下技术方案：

一种融合蛋白，具有如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；或具有在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列基础上存在取代、缺失和添加中一种或两种以上情形，但生物活性不改变的氨基酸序列；或具有在SEQ ID NO：1氨基酸序列基础上进行修饰后的氨基酸序列。

SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列如下：

SSPSEGLCPPGHHISEDGRDCISCKYGQDYSTHWNDLLFCLRCTRCDSGEVELSPCTTTRNTVCQCEEGTFREEDSPEMCRKCRTGCPRGMVKVGDCTPWSDIECVHKEESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQ EGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK

作为优选，所述融合蛋白具有在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列基础上存在取代、缺失和添加中一种或两种以上情形，但生物活性不改变的氨基酸序列时，其具有与SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列有至少80％同一性的氨基酸序列；

作为优选，所述取代、缺失或添加为取代一个或多个氨基酸，缺失一个或多个氨基酸，或添加一个或多个氨基酸。

同时，本发明还提供了编码所述融合蛋白的核苷酸序列、包含该核苷酸序列的重组载体，以及转化有所述重组载体的宿主细胞。

本发明通过长期的研究，得到了一种新的融合蛋白，经试验验证发现，所述融合蛋白在大/小鼠慢性阻塞性肺疾病模型中可明显提高肺功能，减少肺组织病理损伤，减少肺部炎症，血清和肺泡灌洗液中促炎因子IL-8、IL-6、TNF-a减少，抑炎因子IL-10增多。

基于上述试验结果，本发明提供了所述融合蛋白在制备治疗慢性阻塞性肺疾病药物中的应用。依据该应用，本发明还提供一种治疗慢性阻塞性肺疾病的药物，包括本发明所述融合蛋白。

作为优选，所述药物还包括药学上可接受的辅料和/或不干扰所述融合蛋白生物活性的其他活性成分。

作为优选，所述药物为片剂、粉针剂、颗粒剂、口服液、注射液或胶囊。

由以上技术方案可知，本发明所述融合蛋白可以抑制肺泡上皮细胞的凋亡，减少血清和肺泡灌洗液中促炎因子水平,提高抑炎因子水平，减少肺部炎症和组织病理改变，从而起到有效延缓疾病进展，降低疾病损伤的作用，可作为一种全新的治疗COPD的药物。

附图说明

图1为实施例1中开始实验前和COPD造模结束时各组小鼠的体重变化图；其中，正常对照组(Normal control)、COPD模型组(Vehicle)、COPD模型组+地塞米松组(Dexamethasone)、COPD模型组+5mg/kg融合蛋白低剂量组(low)、COPD模型组+10mg/kg融合蛋白中剂量组(medium)、COPD模型组+20mg/kg融合蛋白高剂量组(high)；

图2为实施例1中各组小鼠的肺功能参数检测结果图；其中，正常对照组(Normalcontrol)、COPD模型组(Vehicle)、COPD模型组+地塞米松组(Dexamethasone)、COPD模型组+5mg/kg融合蛋白低剂量组(low)、COPD模型组+10mg/kg融合蛋白中剂量组(medium)、COPD模型组+20mg/kg融合蛋白高剂量组(high)；

图3为实施例1中各组小鼠的血清中细胞因子水平的检测结果图；其中，正常对照组(Normal control)、COPD模型组(Vehicle)、COPD模型组+地塞米松组(Dexamethasone)、COPD模型组+5mg/kg融合蛋白低剂量组(low)、COPD模型组+10mg/kg融合蛋白中剂量组(medium)、COPD模型组+20mg/kg融合蛋白高剂量组(high)；

图4为实施例1中各组小鼠的肺泡灌洗液中细胞因子水平的检测结果图；其中，正常对照组(Normal control)、COPD模型组(Vehicle)、COPD模型组+地塞米松组(Dexamethasone)、COPD模型组+5mg/kg融合蛋白低剂量组(low)、COPD模型组+10mg/kg融合蛋白中剂量组(medium)、COPD模型组+20mg/kg融合蛋白高剂量组(high)；

图5为实施例1中各组小鼠的肺组织炎症评分结果图；其中，正常对照组(Normalcontrol)、COPD模型组(Vehicle)、COPD模型组+地塞米松组(Dexamethasone)、COPD模型组+5mg/kg融合蛋白低剂量组(low)、COPD模型组+10mg/kg融合蛋白中剂量组(medium)、COPD模型组+20mg/kg融合蛋白高剂量组(high)；

图6为实施例2中各组大鼠的各项呼吸功能参数检测结果图；其中，正常对照组(Normal control)、COPD模型组(Vehicle)、COPD模型组+地塞米松组(Dexamethasone)、COPD模型组+5mg/kg融合蛋白低剂量组(low)、COPD模型组+10mg/kg融合蛋白中剂量组(medium)、COPD模型组+20mg/kg融合蛋白高剂量组(high)；

图7为实施例2中各组大鼠平均肺泡面积图；其中，正常对照组(Normal control)、COPD模型组(Vehicle)、COPD模型组+地塞米松组(Dexamethasone)、COPD模型组+5mg/kg融合蛋白低剂量组(low)、COPD模型组+10mg/kg融合蛋白中剂量组(medium)、COPD模型组+20mg/kg融合蛋白高剂量组(high)；

图8为实施例2中各组大鼠血清中细胞因子水平检测结果图；其中，正常对照组(Normal control)、COPD模型组(Vehicle)、COPD模型组+地塞米松组(Dexamethasone)、COPD模型组+5mg/kg融合蛋白低剂量组(low)、COPD模型组+10mg/kg融合蛋白中剂量组(medium)、COPD模型组+20mg/kg融合蛋白高剂量组(high)；

图9为实施例2中各组大鼠肺泡灌洗液中细胞因子水平检测结果图；其中，其中，正常对照组(Normal control)、COPD模型组(Vehicle)、COPD模型组+地塞米松组(Dexamethasone)、COPD模型组+5mg/kg融合蛋白低剂量组(low)、COPD模型组+10mg/kg融合蛋白中剂量组(medium)、COPD模型组+20mg/kg融合蛋白高剂量组(high)。

具体实施方式

本发明公开了一种融合蛋白及其应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所融合蛋白及其应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述融合蛋白及其应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

以下就本发明所提供的一种融合蛋白及其应用做进一步说明。

实施例1：本发明融合蛋白治疗小鼠慢性阻塞性肺疾病

雄性BALB/C小鼠60只，6-8周龄，体重18-22g，饲养于12h光照/12h黑暗的SPF级环境中，自由摄食和饮水，动物适应1周后进行实验。采用香烟烟雾暴露法建立小鼠COPD模型。将小鼠置于自制有机玻璃箱内，箱体侧壁各有一个通气孔，点燃5支香烟放入箱内自然燃烧，15分钟后打开熏烟箱顶盖，待烟雾完全散去，同时使小鼠休息5分钟。然后再次点燃5支香烟重复上述步骤。每天熏烟1次，每次1小时/15支烟，每周6天，共计91天。

将小鼠随机分为6组，分别为：正常对照组(Normal control)、COPD模型组(Vehicle)、COPD模型组+地塞米松组(Dexamethasone)、COPD模型组+5mg/kg融合蛋白低剂量组(low)、COPD模型组+10mg/kg融合蛋白中剂量组(medium)、COPD模型组+20mg/kg融合蛋白高剂量组(high)。每组10只，用药组连续熏烟7天后，第8天开始于熏烟1小时前给药，直至91天后熏烟结束。地塞米松1mg/kg灌胃给药，每天一次；融合蛋白静脉注射，每周两次；溶剂组(正常对照组以及COPD模型组)为生理盐水，静脉注射，每周两次；给药体积均为10ml/kg。实验过程中，每天观察小鼠状态并记录小鼠体重。

熏烟第91天，最后一次熏烟24小时内，用全身体积描计法检测小鼠肺功能，包括呼吸峰流速(Peak expiratory flow，PEF)、吸气峰流速(Peakinspiratory flow，PIF)和每分钟通气量(Minute ventilation，MV)。检测前小鼠在安静适宜环境中放置1小时，水、食物自由摄取。肺功能检测后12小时，用二氧化碳处死小鼠，心脏取血，血液室温静置1小时，3000rpm、4℃离心10分钟，取血清于1.5ml离心管中，-80℃保存。气管插管,胸后结扎右侧肺叶，使用注射器吸取0.9％生理盐水0.3ml从导管缓慢注入灌洗左肺，轻压肺部，以保证充分灌洗，5s后回抽液体，反复3次，回收率为70-85％，将回抽的液体在2000rpm、4℃离心10分钟，上清液保存于-80℃，用于相关细胞因子的检测；取下右侧肺上叶，放入4％PFA固定液中固定，石腊包埋、切片染色，光镜下观察肺组织的病理变化。用ELISA检测试剂盒检测小鼠血清、肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中IL-8、TNF-a的水平。

肺组织炎症评分标准：肺组织炎症严重程度按0-3分分级:0分＝无炎症反应；1分＝轻度炎症反应，支气管壁或血管壁、肺泡隔炎症细胞浸润呈点状分布；2分＝中度炎症反应，支气管壁或血管壁、肺泡隔炎症细胞浸润呈斑片状分布，浸润面积不超过肺横截面积的1/3；3分＝严重炎症反应，支气管壁或血管壁、肺泡隔炎症细胞浸润呈弥漫性分布，浸润面积为肺横截面积的1/3至2/3。

实验结果：

1、开始实验前和COPD造模结束时各组小鼠体重变化如图1所示：COPD模型组会使小鼠体重显著下降，而使用融合蛋白治疗，则能有效提高小鼠的体重。

2、熏烟第91天，最后一次熏烟24小时内，用全身体积描计法检测小鼠肺功能的结果如图2所示：与正常组相比，COPD模型组的PIF、PEF、MV都显著降低，说明气道阻力增加，存在明显气流受限、阻塞性肺通气功能障碍；与模型组相比，融合蛋白高剂量能明显改善肺功能；低中剂量组治疗效果无统计学意义；地塞米松组肺功能与模型组相比降低，说明其不仅未能改善COPD小鼠降低的肺功能，而且导致肺功能更加受损。

3、各组小鼠血清细胞因子IL-8、TNF-a的水平如图3所示：COPD模型组小鼠血清中IL-8、TNF-a比正常组明显升高；融合蛋白(高、中、低剂量)显著降低血清中TNF-a，融合蛋白高剂量显著降低IL-8水平，中低剂量IL-8有降低趋势，但变化无统计学意义；与模型组相比，地塞米松可显著降低小鼠血清中TNF-a和IL-8水平。

4、各组小鼠肺泡灌洗液中细胞因子IL-8、TNF-a的水平如图4所示：COPD模型组小鼠肺泡灌洗液中IL-8、TNF-a比正常组明显升高；融合蛋白高、中、低剂量均显著降低肺泡灌洗液中TNF-a水平(P<0.05)，融合蛋白高剂量显著降低IL-8水平，中低剂量组肺泡灌洗液中IL-8水平有降低趋势，但变化无统计学意义；与模型组相比，地塞米松可显著降低小鼠肺泡灌洗液中TNF-a和IL-8水平。

5、各组小鼠肺组织炎症评分结果如图5所示：正常组小鼠肺组织无明显炎症反应，支气管壁或血管壁、肺泡隔未见明显炎症细胞浸润；与正常组相比，COPD模型组小鼠肺组织炎症反应严重，支气管壁或血管壁、肺泡隔炎症细胞浸润呈弥漫性分布；与COPD模型组小鼠相比，融合蛋白高、中、低3个剂量组小鼠肺组织支气管壁或血管壁、肺泡隔炎症细胞浸润显著减轻；与COPD模型组小鼠相比，地塞米松组小鼠肺组织炎症反应无明显变化，支气管壁或血管壁、肺泡隔炎症细胞浸润呈弥漫性分布。

实施例2：本发明融合蛋白治疗大鼠慢性阻塞性肺疾病

48只SPF级雄性Sprague-Dauley(SD)大鼠，月龄20～22月，体重在500～600g。SD大鼠随机分为6组，每组8只。正常组：大鼠被置于熏烟装置中，用新鲜空气暴露代替香烟烟雾暴露，从造模第8天开始腹腔注射灭菌生理盐水1ml，每周2次，连续3周。COPD模型组：将大鼠置于密闭木箱内熏烟，香烟是带过滤嘴的牡丹牌烤烟型香烟，每次20支，每次1小时，1天2次，每周5天，共5周，熏烟过程中，CO的浓度被控制在280～350ppm范围，总悬浮粒子浓度被控制在70～110mg/m³。从造模第8天开始采用灭菌生理盐水1ml灌胃，每日1次，每周5天，连续3周。地塞米松组：造模过程与COPD组一样，从熏烟后第8天起给予地塞米松0.2mg/kg灌胃，每天1次，每次1ml，每周5天，连续3周。融合蛋白组：造模过程与COPD组一样，从熏烟后第8天起给予腹腔注射20mg/kg(高剂量组)或10mg/kg(中剂量组)或5mg/kg(低剂量组)本发明融合蛋白，每周2次，每次1ml，连续3周。所有大鼠均在造模后第36天以2％的戊巴比妥钠麻醉，进行气管插管，通过连接管接生理测试仪对大鼠的各项呼吸功能参数进行测定，包括呼气流速峰值(Peak expiratory flow rate，PEFR)、最大通气量(maximal ventilatoryvolume,MVV)和0.3秒用力呼气量/用力肺活量(forced expiratory volume in0.3second/forced vital capicity，FEV0.3/FVC％)。心脏采血，室温放置1小时，3000rpm，4℃离心10min，取上层血清，于-80℃冰箱保存。结扎右主支气管,缓慢地将无菌生理盐水5ml经气管把液体灌注入支气管及肺脏,再缓慢回抽液体,反复抽吸3次,回收灌注液约4ml，2000rpm，4℃离心10min,收集上清液置于-80℃冰箱保存。用ELISA检测试剂盒检测大鼠血清和肺泡灌洗液中的IL-8、IL-6、TNF-a、IL-10的浓度。取部分肺组织用4％PFA固定24小时，石蜡包埋、切片染色，在光镜下观察肺组织的病理变化。利用光学显微镜拍照，通过IPP图像分析软件算出平均肺泡面积。

比较各组大鼠外观形态发现：1)正常组：毛发有光泽，密度均匀，呼吸平稳，饮食摄水正常，动作灵活。2)COPD模型组：第5周末大鼠出现易打喷嚏，喘息急促，弓背滞伏，毛发干枯失去光泽，密度不均，行动迟缓，神情倦怠，食量活动减少。3)地塞米松组：大鼠出现喘息急促，弓背滞伏，毛发干枯失去光泽，不思饮食，个体瘦弱。4)融合蛋白低、中、高剂量组：个体较COPD模型组大，毛色有光泽，随着融合蛋白用药剂量的增加，大鼠的症状逐渐减轻，精神状态、饮食、行为逐渐趋向正常。比较各组大鼠肺组织外观形态发现：1)正常组：两肺体积正常、表面光滑、柔软较有弹性。2)COPD模型组：肺体积比正常组明显增大，两肺呈膨胀状态，颜色苍白，弹性减弱，肺表面略显不平，有多个体积大小不等的肺泡融合形成大泡，可见小囊泡状突起。3)地塞米松组：两肺体积增大，弹性减弱，表面不平。4)融合蛋白低、中、高剂量组：低剂量组的肺组织外观接近COPD模型组，但程度有所减轻；高剂量组的肺组织外观已接近正常组。

实验结果：

1、各组大鼠的各项呼吸功能参数测定结果如图6所示：COPD模型组、地塞米松组、融合蛋白低、中剂量组的PEFR、MVV和FEV0.3/FVC％均显著低于正常组，说明这4组大鼠存在气流阻塞；融合蛋白高剂量组的PEFR、MVV和FEV0.3/FVC％与正常组无显著性差异，明显高于COPD模型组。

2、各组大鼠平均肺泡面积如图7所示：COPD模型组、地塞米松组平均肺泡面积较正常组明显增大；融合蛋白高剂量组平均肺泡面积与正常组比较无统计学差异，但与COPD模型组比较有显著性差异。说明经过香烟烟雾暴露后，COPD模型组出现肺泡腔扩大，而融合蛋白能保护肺组织形态结构完好，并且这种保护作用有剂量依赖效应。

3、各组大鼠血清中细胞因子水平检测结果如图8所示：COPD模型组大鼠血清中的IL-8、IL-6、TNF-a较正常组明显升高，融合蛋白高剂量组大鼠血清中的IL-8、IL-6、TNF-a较COPD模型组明显下降，由此可见融合蛋白能降低COPD大鼠血清中的IL-8、IL-6、TNF-a水平。COPD模型组和地塞米松组血清中的IL-10较正常组降低，融合蛋白治疗后IL-10水平升高，并且随着剂量的增加而升高。

4、各组大鼠肺泡灌洗液中细胞因子水平检测结果如图9所示：COPD模型组大鼠肺泡灌洗液中的IL-8、IL-6、TNF-a较正常组明显升高，融合蛋白高剂量组大鼠肺泡灌洗液中的IL-8、IL-6、TNF-a较COPD模型组明显下降，由此可见融合蛋白能降低COPD大鼠肺泡灌洗液中的IL-8、IL-6、TNF-a水平。COPD模型组和地塞米松组肺泡灌洗液中的IL-10较正常组降低，融合蛋白治疗后IL-10水平升高，并且随着剂量的增加而升高。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110> 中国科学院深圳先进技术研究院

<120> 一种融合蛋白及其应用

<130> MP1900806

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 338

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Ser Ser Pro Ser Glu Gly Leu Cys Pro Pro Gly His His Ile Ser Glu

1 5 10 15

Asp Gly Arg Asp Cys Ile Ser Cys Lys Tyr Gly Gln Asp Tyr Ser Thr

20 25 30

His Trp Asn Asp Leu Leu Phe Cys Leu Arg Cys Thr Arg Cys Asp Ser

35 40 45

Gly Glu Val Glu Leu Ser Pro Cys Thr Thr Thr Arg Asn Thr Val Cys

50 55 60

Gln Cys Glu Glu Gly Thr Phe Arg Glu Glu Asp Ser Pro Glu Met Cys

65 70 75 80

Arg Lys Cys Arg Thr Gly Cys Pro Arg Gly Met Val Lys Val Gly Asp

85 90 95

Cys Thr Pro Trp Ser Asp Ile Glu Cys Val His Lys Glu Glu Ser Lys

100 105 110

Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly

115 120 125

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

130 135 140

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu

145 150 155 160

Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

165 170 175

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg

180 185 190

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

195 200 205

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu

210 215 220

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

225 230 235 240

Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

245 250 255

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

260 265 270

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

275 280 285

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp

290 295 300

Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

305 310 315 320

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu

325 330 335

Gly Lys

Claims

1.一种融合蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.权利要求1所述融合蛋白在制备治疗慢性阻塞性肺疾病药物中的应用。

3.编码权利要求1所述融合蛋白的核酸分子。

4.一种重组载体，其特征在于，包含权利要求3所述核酸分子。

5.一种宿主细胞，其特征在于，转化有权利要求4所述重组载体。

6.一种治疗慢性阻塞性肺疾病的药物，其特征在于，包括权利要求1所述融合蛋白。

7.根据权利要求6所述药物，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的辅料和/或不干扰所述融合蛋白生物活性的其他活性成分。

8.根据权利要求6所述药物，其特征在于，所述药物为片剂、粉针剂、颗粒剂、口服液、注射液或胶囊。