CN111440840A - 一种分析肿瘤细胞耐药性的方法 - Google Patents
一种分析肿瘤细胞耐药性的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111440840A CN111440840A CN201910038839.7A CN201910038839A CN111440840A CN 111440840 A CN111440840 A CN 111440840A CN 201910038839 A CN201910038839 A CN 201910038839A CN 111440840 A CN111440840 A CN 111440840A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cells
- polysaccharide
- drug
- resistant cells
- resistant
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 38
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 title claims abstract description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims abstract description 111
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 43
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims abstract description 43
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 claims abstract description 3
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims description 45
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 claims description 42
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 30
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 19
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 claims description 17
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 claims description 11
- -1 aminodextran Polymers 0.000 claims description 11
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims description 11
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 claims description 11
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 8
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 8
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims description 7
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N coumarin Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 6
- RFRMMZAKBNXNHE-UHFFFAOYSA-N 6-[4,6-dihydroxy-5-(2-hydroxyethoxy)-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxy-2-(hydroxymethyl)-5-(2-hydroxypropoxy)oxane-3,4-diol Chemical compound CC(O)COC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(OCCO)C(O)OC1CO RFRMMZAKBNXNHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 3
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 claims description 3
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 claims description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 3
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 claims description 3
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 claims description 3
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 claims description 3
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 claims description 3
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 claims description 3
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 claims description 3
- RQFQJYYMBWVMQG-IXDPLRRUSA-N chitotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](N)[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)N)[C@@H](CO)O1 RQFQJYYMBWVMQG-IXDPLRRUSA-N 0.000 claims description 3
- 229960000956 coumarin Drugs 0.000 claims description 3
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 claims description 3
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 claims description 3
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 claims description 3
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 claims description 3
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 3
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000002159 nanocrystal Substances 0.000 claims description 3
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 283
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 99
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 99
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 3
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 60
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 60
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 51
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 51
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 51
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 42
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 42
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 42
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 40
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 38
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 35
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N succinimide Chemical compound O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 23
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 22
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 22
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 22
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 21
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 18
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 16
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 16
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 15
- PFRGXCVKLLPLIP-UHFFFAOYSA-N diallyl disulfide Chemical compound C=CCSSCC=C PFRGXCVKLLPLIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 14
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 description 14
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 13
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 13
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 13
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 12
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 12
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 9
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 9
- 229910021389 graphene Inorganic materials 0.000 description 9
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 9
- BAPJBEWLBFYGME-UHFFFAOYSA-N Methyl acrylate Chemical compound COC(=O)C=C BAPJBEWLBFYGME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 7
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 7
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 7
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 7
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 7
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 6
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 5
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 5
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 5
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 5
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N Vinblastine Natural products O=C(O[C@H]1[C@](O)(C(=O)OC)[C@@H]2N(C)c3c(cc(c(OC)c3)[C@]3(C(=O)OC)c4[nH]c5c(c4CCN4C[C@](O)(CC)C[C@H](C3)C4)cccc5)[C@@]32[C@H]2[C@@]1(CC)C=CCN2CC3)C JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N 0.000 description 4
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 229960003048 vinblastine Drugs 0.000 description 4
- JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N vincaleukoblastine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 4
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 3
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 3
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 230000036457 multidrug resistance Effects 0.000 description 3
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 230000008261 resistance mechanism Effects 0.000 description 3
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 208000009052 Precursor T-Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 208000031673 T-Cell Cutaneous Lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 2
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 2
- 201000007241 cutaneous T cell lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002122 magnetic nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- CJHONYKSHLOYGX-UHFFFAOYSA-N methylsulfinylmethane;pyrrolidine-2,5-dione Chemical compound CS(C)=O.O=C1CCC(=O)N1 CJHONYKSHLOYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000005962 mycosis fungoides Diseases 0.000 description 2
- 208000025638 primary cutaneous T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000005971 DNA damage repair Effects 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N Deuterium Chemical compound [2H] YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- JIGUQPWFLRLWPJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acrylate Chemical compound CCOC(=O)C=C JIGUQPWFLRLWPJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N Methyl methacrylate Chemical compound COC(=O)C(C)=C VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 229910052805 deuterium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000003596 drug target Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- VVQNEPGJFQJSBK-KPAILUHGSA-N methyl 3,3-dideuterio-2-(trideuteriomethyl)prop-2-enoate Chemical compound [2H]C([2H])=C(C([2H])([2H])[2H])C(=O)OC VVQNEPGJFQJSBK-KPAILUHGSA-N 0.000 description 1
- RPQRDASANLAFCM-UHFFFAOYSA-N oxiran-2-ylmethyl prop-2-enoate Chemical compound C=CC(=O)OCC1CO1 RPQRDASANLAFCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNJWIWWMYCMZRO-UHFFFAOYSA-N pent‐4‐en‐2‐one Natural products CC(=O)CC=C PNJWIWWMYCMZRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5011—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing antineoplastic activity
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本发明公开了一种分析肿瘤细胞耐药性的方法，包括以下步骤：(a)提供一种多糖基纳米粒子；(b)将所述多糖基纳米粒子加入肿瘤细胞培养基中；(c)检测所述肿瘤细胞与所述功能性分子标记的多糖基纳米粒子的亲和力。本发明的分析方法，能够清楚、直观、高效地分析出耐药性肿瘤细胞；提供的多糖基纳米粒子与肿瘤细胞共孵后，采用流式细胞仪或激光共聚焦显微镜进行检测，通过检测结果来判断肿瘤细胞耐药性的强弱，以及耐药细胞所占的比例，方法简单高效。
Description
技术领域
本发明涉及肿瘤治疗领域，尤其涉及一种分析肿瘤细胞耐药性的方法。
背景技术
肿瘤严重危害人类健康，近年肿瘤的发病率及死亡率呈逐年上升趋势。目前临床肿瘤治疗主要包括手术切除、化学药物治疗、放射治疗、基因治疗和细胞治疗，其中使用化学药物治疗最为普遍。但其面临的问题是，使用化学药物时，容易使肿瘤细胞产生耐药性，从而导致肿瘤化疗失败，我们将这种在化疗过程中由一种化疗药物诱导产生的耐药性称为获得性耐药。除此之外，有些肿瘤细胞在化疗开始前就已存在耐药性，称之为天然耐药。获得性耐药又可分为原药耐药(仅对诱导药物产生耐药性)和多药耐药(对一种抗肿瘤药物产生抗药性的同时，对结构和作用机制不同的抗肿瘤药物产生交叉耐药性)两大类。国内外研究表明：肿瘤多药耐药是导致肿瘤化疗失败的主要原因。肿瘤多药耐药的形成机制非常复杂，一般一种肿瘤细胞内可存在多种耐药机制，且不同肿瘤细胞的耐药机制也不相同，即使是同一种肿瘤细胞的不同细胞株耐药机制也会不同。一般来说，肿瘤的耐药性涉及细胞内药物的浓度降低，药物靶分子的改变，代谢解毒，DNA损伤修复功能失衡等多种机制。
纳米颗粒由于其特定的纳米尺度，纳米粒子容易通过细胞膜进入细胞。多糖是具有良好生物相容性的生物大分子，分子结构中包含羟基、氨基等官能团，容易进行化学修饰或改性，在生物医学研究中备受青睐。基于我们对接枝聚合诱导自组装(GraftcoPolymerization Induced Self-Assembly,GPISA)高效制备多糖纳米粒子的研究基础(中国专利号201410138647.0)，通过对多糖纳米粒子进行荧光标记、改性或修饰，使多糖纳米粒子具有分析耐药性肿瘤细胞的能力，并且以此为手段研究肿瘤耐药性的发生发展机制以及肿瘤耐药细胞—非耐药细胞的相互作用机制都具有非常大的应用价值。
发明内容
有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是如何简单高效地分析出耐药性肿瘤细胞。
为实现上述目的，本发明提供了一种分析肿瘤细胞耐药性的方法，包括将多糖基纳米粒子应用到肿瘤细胞的步骤。
进一步地，包括以下步骤：
(a)提供一种多糖基纳米粒子；
(b)将多糖基纳米粒子加入肿瘤细胞培养基中；
(c)检测肿瘤细胞与多糖基纳米粒子的亲和力。
进一步地，在步骤(b)之前还包括步骤(d)，步骤(d)为对多糖基纳米粒子进行功能性修饰。
进一步地，步骤(d)中的功能性修饰所用到的功能性分子为荧光分子。
进一步地，荧光分子选自菁染料、罗丹明、荧光素、香豆素和荧光无机纳米晶中的一种或多种。
进一步地，多糖基纳米粒子与荧光分子按照质量比为50-2000:1进行混合。
进一步地，步骤(d)中的功能性修饰所用到的功能性分子为由荧光分子和选自聚乙二醇、半乳糖、透明质酸和抗体组成中的一种或多种组分组成。
进一步地，多糖基纳米粒子为同位素标记的多糖基纳米粒子。
进一步地，多糖基纳米粒子为同位素氘标记的多糖基纳米粒子。
进一步地，多糖基纳米粒子为磁性多糖基纳米粒子。
进一步地，多糖基纳米粒子中的多糖基来源于葡聚糖、氨基葡聚糖、壳聚糖、羟甲基壳聚糖、羧丙基壳聚糖、壳寡糖、海藻酸、水溶性淀粉、羧甲基葡聚糖，羧甲基纤维素、透明质酸、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素和羟乙基纤维素中的一种或多种。
进一步地，步骤(b)还包括将多糖基纳米粒子与肿瘤细胞孵育3-6h。
进一步地，耐药性肿瘤细胞包括人卵巢癌(OVCAR-3)紫杉醇耐药细胞、人卵巢癌(COC1)顺铂耐药细胞、人卵巢癌(A2780)紫衫醇耐药细胞、皮肤T细胞淋巴瘤(H9)阿霉素耐药细胞、人B细胞淋巴瘤(SU-DHL-4)阿霉素耐药细胞、人Burkitt's淋巴瘤(Namalwa)阿霉素耐药细胞、人急性T淋巴细胞白血病(Jurkat)阿霉素耐药细胞、人肺癌(A549)紫杉醇耐药细胞、人肺癌(A549)顺铂耐药细胞、人白血病(K562)阿霉素耐药细胞、人乳腺癌(MCF-7)耐阿霉素细胞、人乳腺癌(MCF-7)耐紫杉醇细胞、人结肠癌(HCT-8)长春碱耐药细胞、人结肠癌(HCT-8)紫杉醇耐药细胞、人结肠癌(HCT-8)氟尿嘧啶耐药细胞、人肝癌(Bel)氟尿嘧啶耐药细胞、人结肠癌(HCT116)耐奥沙利铂耐药细胞、人肺腺癌(PC-9)吉非替尼耐药细胞、人胃癌(SGC7901)顺铂耐药细胞、人胰腺癌(PATU-8988)氟尿嘧啶耐药细胞、人膀胱癌(BIU-87)阿霉素耐药细胞、人乳腺癌(MDA-MB-231)耐阿霉素细胞、人卵巢癌(A2780)顺铂耐药细胞、人子宫颈癌(Hela)阿霉素耐药细胞、人卵巢癌(SKOV3)顺铂耐药细胞、人乳腺癌(MCF-7)耐多柔比星脂质体耐药细胞、人头颈癌(HNC)顺铂耐药细胞的任意一种。应当说明，本发明适用于上述细胞，但不局限于这些细胞，原则上具有化疗耐药性的其他细胞均可适用。
进一步地，非耐药肿瘤细胞包括人卵巢癌(OVCAR-3)紫杉醇非耐药细胞、人卵巢癌(COC1)顺铂非耐药细胞、人卵巢癌(A2780)紫衫醇非耐药细胞、人肺癌(A549)紫杉醇非耐药细胞、人肺癌(A549)顺铂非耐药细胞、皮肤T细胞淋巴瘤(H9)阿霉素非耐药细胞、人B细胞淋巴瘤(SU-DHL-4)阿霉素非耐药细胞、人Burkitt's淋巴瘤(Namalwa)阿霉素非耐药细胞、人急性T淋巴细胞白血病(Jurkat)阿霉素非耐药细胞、人白血病(K562)阿霉素非耐药细胞、人乳腺癌(MCF-7)耐阿霉素细胞、人乳腺癌(MCF-7)耐紫杉醇细胞、人结肠癌(HCT-8)长春碱非耐药细胞、人结肠癌(HCT-8)紫杉醇非耐药细胞、人结肠癌(HCT-8)氟尿嘧啶非耐药细胞、人肝癌(Bel)氟尿嘧啶非耐药细胞、人结肠癌(HCT116)耐奥沙利铂非耐药细胞、人肺腺癌(PC-9)吉非替尼非耐药细胞、人胃癌(SGC7901)顺铂非耐药细胞、人胰腺癌(PATU-8988)氟尿嘧啶非耐药细胞、人膀胱癌(BIU-87)阿霉素非耐药细胞、人乳腺癌(MDA-MB-231)耐阿霉素细胞、人卵巢癌(A2780)顺铂非耐药细胞、人子宫颈癌(Hela)阿霉素非耐药细胞、人卵巢癌(SKOV3)顺铂非耐药细胞、人乳腺癌(MCF-7)耐多柔比星脂质体非耐药细胞中的任意一种。
本发明还提供了一种分析肿瘤细胞耐药性的试剂盒，包含多糖基纳米粒子。
进一步地，多糖基纳米粒子中的多糖基来源于葡聚糖、氨基葡聚糖、壳聚糖、羟甲基壳聚糖、羧丙基壳聚糖、壳寡糖、海藻酸、水溶性淀粉、羧甲基葡聚糖，羧甲基纤维素、透明质酸、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素和羟乙基纤维素中的一种或多种。
进一步地，多糖基纳米粒子经由功能性分子修饰，功能性分子为荧光分子。
进一步地，荧光分子选自菁染料、罗丹明、荧光素、香豆素和荧光无机纳米晶中的一种或多种。
进一步地，多糖基纳米粒子与荧光分子按照质量比为50-2000:1混合。
进一步地，多糖基纳米粒子经由功能性分子修饰，功能性分子为由荧光分子和选自聚乙二醇、半乳糖、透明质酸和抗体组成中的一种或多种组分组成。
进一步地，多糖基纳米粒子为同位素标记的多糖基纳米粒子。
进一步地，多糖基纳米粒子为磁性多糖基纳米粒子。
本发明的分析方法，能够清楚、直观、高效地分析出耐药性肿瘤细胞；
本发明提供的纳米粒子与肿瘤细胞共孵后，采用流式细胞仪或激光共聚焦显微镜进行检测，通过检测结果来判断肿瘤细胞的耐药性的强弱，以及耐药细胞所占的比例，方法简单高效。
以下将结合附图对本发明的构思、具体结构及产生的技术效果作进一步说明，以充分地了解本发明的目的、特征和效果。
附图说明
图1是本发明的一个较佳实施例的肿瘤耐药细胞和非耐药细胞的荧光强度结果图；
图2是本发明的一个较佳实施例的肿瘤耐药细胞和非耐药细胞的CD44表达示意图。
具体实施方式
以下参考说明书附图介绍本发明的多个优选实施例，使其技术内容更加清楚和便于理解。本发明可以通过许多不同形式的实施例来得以体现，本发明的保护范围并非仅限于文中提到的实施例。
一、制备多糖基纳米粒子
实施例1
将0.4g氨基葡聚糖溶于25mL水，加热至溶解。随后将温度降至30℃。通氮气1h，在氮气保护下加入含有0.05g硝酸铈铵的稀硝酸溶液。5min后加入0.06mL丙烯酸甲酯。0.5h后加0.012g二烯丙基二硫，反应4h。反应结束室温透析3d，得到氨基葡聚糖纳米粒子。
将氨基葡聚糖纳米粒子溶于水中，用碱调节pH为8.5，形成浓度为8mg/mL的氨基葡聚糖纳米粒子水溶液。将菁染料CY5.5琥珀酰亚胺溶于二甲基亚砜中，形成浓度为10mg/mL的菁染料CY5.5琥珀酰亚胺二甲基亚砜溶液(CY5.5-NHS溶液)。将氨基葡聚糖纳米粒子溶液与CY5.5-NHS溶液按照质量比为50-2000:1的混合比例进行混合。优选地，取8mL氨基葡聚糖纳米粒子溶液与30uL菁染料CY5.5琥珀酰亚胺混合。室温震荡6h，每次透析3h后换一次水，一共透析3d，最终得到菁染料CY5.5标记的氨基葡聚糖纳米粒子水溶液。
实施例2
将1g羟甲基壳聚糖溶于25mL水，加热至溶解。温度降至30℃。通氮气1h，在氮气保护下加入含有0.06g硝酸铈铵的稀硝酸溶液。5min后加入0.05mL丙烯酸甲酯。0.5h后加0.012g二烯丙基二硫，反应4h。反应结束透析3d，得到羟甲基壳聚糖纳米粒子。
将羟甲基壳聚糖纳米粒子溶于水中，形成浓度为5mg/mL的羟甲基壳聚糖纳米粒子水溶液。将菁染料CY5.5琥珀酰亚胺溶于二甲基亚砜中，形成浓度为10mg/mL的菁染料CY5.5琥珀酰亚胺二甲基亚砜溶液(CY5.5-NHS溶液)。将羟甲基壳聚糖纳米粒子溶液与CY5.5-NHS溶液按照质量比为50-2000:1的混合比例进行混合。优选地，取8mL羟甲基壳聚糖纳米粒子溶液与12uL菁染料CY5.5琥珀酰亚胺混合，室温震荡6h，每次透析3h后换一次水，一共透析3d，最终得到菁染料CY5.5标记的羟甲基壳聚糖纳米粒子水溶液。
实施例3
将0.5g葡聚糖(分子量为40,000Da)和0.5g壳聚糖溶于25mL水，加热至溶解。温度降至30℃。通氮气1h，在氮气保护下加入含有0.06g硝酸铈铵的稀硝酸溶液，5min后加入0.05mL丙烯酸甲酯，0.5h后加0.012g二烯丙基二硫，反应4h。反应结束透析3d，得到葡聚糖/壳聚糖纳米粒子。
将葡聚糖/壳聚糖纳米粒子溶于水中，形成浓度为10mg/mL的葡聚糖/壳聚糖纳米粒子水溶液。将石墨烯量子点溶于水中，形成浓度为2mg/mL的石墨烯量子点水溶液。将葡聚糖/壳聚糖纳米粒子水溶液与石墨烯量子点水溶液按照质量比为50-2000:1的混合比例进行混合。优选地，取8mL葡聚糖/壳聚糖纳米粒子水溶液与30uL石墨烯量子点水溶液混合，室温震荡6h，每次透析3h后换一次水，一共透析3d，最终得到石墨烯量子点标记的葡聚糖/壳聚糖纳米粒子水溶液。
实施例4
将0.237g葡聚糖(分子量为40,000Da)和0.013g氨基葡聚糖溶于25mL水，加热至溶解。温度降至30℃。通氮气1h，在氮气保护下加入含有0.06g硝酸铈铵的稀硝酸溶液，5min后加入0.07mL丙烯酸缩水甘油酯，0.5h后加0.012g二烯丙基二硫，反应4h。反应结束透析3d，得到葡聚糖/氨基葡聚糖纳米粒子。
将葡聚糖/氨基葡聚糖纳米粒子溶于水中，形成浓度为8mg/mL的葡聚糖/氨基葡聚糖纳米粒子水溶液。将菁染料CY3琥珀酰亚胺溶于二甲基亚砜中，形成浓度为10mg/mL的菁染料CY3琥珀酰亚胺溶液。将葡聚糖/氨基葡聚糖纳米粒子水溶液与菁染料CY3琥珀酰亚胺溶液按照质量比为50-2000:1的混合比例进行混合。优选地，取8mL葡聚糖/氨基葡聚糖纳米粒子水溶液与30uL菁染料CY3琥珀酰亚胺溶液混合，室温震荡6h，每次透析3h后换一次水，一共透析3d，最终得到菁染料CY3标记的葡聚糖/氨基葡聚糖纳米粒子水溶液。
实施例5
0.4g氨基葡聚糖溶于25mL水，加热至溶解。温度降至30℃。通氮气1h，在氮气保护下加入含有0.05g硝酸铈铵的稀硝酸溶液。5min后加入0.06mL丙烯酸乙酯，0.5h后加0.012g二烯丙基二硫，反应4h。反应结束透析3d，得到氨基葡聚糖纳米粒子。
将氨基葡聚糖纳米粒子溶于水中，形成浓度为8mg/mL的氨基葡聚糖纳米粒子水溶液。将羧基荧光素琥珀酰亚胺酯溶于二甲基亚砜中，形成浓度为10mg/mL的羧基荧光素琥珀酰亚胺酯溶液。将氨基葡聚糖纳米粒子水溶液与羧基荧光素琥珀酰亚胺酯溶液按照质量比为50-2000:1的混合比例进行混合。优选地，取8mL葡聚糖/氨基葡聚糖纳米粒子水溶液与30uL羧基荧光素琥珀酰亚胺酯溶液混合，室温震荡6h，每次透析3h后换一次水，一共透析3d，最终得到羧基荧光素琥珀酰亚胺酯标记的氨基葡聚糖纳米粒子水溶液。
实施例6
将聚乙二醇活性酯溶于二甲基亚砜中，形成浓度为10mg/mL的聚乙二醇活性酯溶液。将实施例2中的荧光标记的羟甲基壳聚糖纳米粒子水溶液与聚乙二醇活性酯溶液按照质量比为50-2000:1的混合比例进行混合。优选地，取2mL实施例2中的荧光标记的羟甲基壳聚糖纳米粒子水溶液与0.5mL聚乙二醇活性酯溶液混合，室温震荡6h，每次透析3h后换一次水，一共透析3d，最终得到聚乙二醇活性酯标记的的氨基葡聚糖纳米粒子水溶液。
实施例7
将透明质酸溶于水中，形成浓度为1mg/mL的透明质酸溶液。将实施例1中得到的荧光标记的氨基葡聚糖纳米粒子水溶液与透明质酸溶液按照质量比为50-2000:1的混合比例进行混合。优选地，取5mL实施例1中得到的荧光标记的氨基葡聚糖纳米粒子水溶液与0.1mL透明质酸溶液混合，室温震荡6h，每次透析3h后换一次水，一共透析3d，最终得到透明质酸标记的氨基葡聚糖纳米粒子水溶液。
实施例8
将半乳糖溶于水中，形成1mg/mL半乳糖溶液。将实施例3中得到的荧光标记的葡聚糖/壳聚糖纳米粒子水溶液与半乳糖溶液按照质量比为50-2000:1的混合比例进行混合。优选地，取5mL实施例3中得到的荧光标记的葡聚糖/壳聚糖纳米粒子水溶液与0.05mL半乳糖溶液混合，室温震荡6h，每次透析3h后换一次水，一共透析3d，最终得到半乳糖标记的葡聚糖/壳聚糖纳米粒子水溶液。
实施例9
将0.237g葡聚糖(分子量为40,000Da)和0.013g氨基葡聚糖溶于25mL水，加热至溶解。待温度降至30℃，加入含0.03g磁性纳米颗粒(MNPs)的水溶液，MNPs由水相共沉淀法制备。通氮气1h，在氮气保护下加入含有0.06g硝酸铈铵的稀硝酸溶液。5min后加入0.07mL丙烯酸甲酯，0.5h后加0.012g二烯丙基二硫，反应4h。反应结束透析3d，得到带磁性的葡聚糖/氨基葡聚糖纳米粒子。
将8mL葡聚糖/氨基葡聚糖纳米粒子(5mg/mL)与12uL菁染料CY5.5琥珀酰亚胺(CY5.5-NHS，10mg/mL DMSO溶液)混合，室温震荡6h，透析3d，得到CY5.5标记的磁性葡聚糖/氨基葡聚糖纳米粒子。
实施例10
将0.25g葡聚糖(分子量为40,000Da)溶于25mL水，加热至溶解。待反应温度降至30℃，通氮气1h。在氮气保护下加入含有0.06g硝酸铈铵的稀硝酸溶液，5min后加入含千分之一甲基丙烯酸甲酯-d5的0.08mL甲基丙烯酸甲酯，0.5h后加0.012g二烯丙基二硫，反应4h。反应结束透析三天，得到同位素标记的葡聚糖纳米粒子。
二、利用多糖基纳米粒子分析肿瘤细胞的耐药性
实施例11
人卵巢癌OVCAR-3紫杉醇耐药细胞与非耐药细胞混合铺到六孔板中，共同培养，共同培养。待细胞汇合度至70-80％时，取50uL/孔的菁染料CY5.5标记的羟甲基壳聚糖纳米粒子水溶液(4.26mg/mL)加到六孔板中，混合均匀，培养箱中培养4h。消化收集细胞，磷酸缓冲盐溶液洗一次，然后用磷酸缓冲盐溶液重悬细胞，流式细胞仪检测。比较人卵巢癌OVCAR-3紫杉醇耐药细胞与非耐药细胞的荧光强度。如图1所示，人卵巢癌OVCAR-3紫杉醇耐药细胞的荧光强度低于非耐药细胞的荧光强度，人卵巢癌OVCAR-3紫杉醇耐药细胞的数量与非耐药性细胞的数量比例为2:3。
实施例12
人卵巢癌OVCAR-3紫杉醇耐药细胞培养在培养瓶。待细胞汇合度至70-80％时，加入130uL菁染料CY5.5标记的羟甲基壳聚糖纳米粒子水溶液(4.26mg/mL)，混合均匀。培养箱中培养4h，消化收集细胞，磷酸缓冲盐溶液洗一次，然后用含5％血清磷酸缓冲盐溶液重悬细胞，流式细胞仪分离出高耐药细胞。
实施例13
人肺癌细胞A549紫杉醇耐药细胞与非耐药细胞混合铺到六孔板中，共同培养。待细胞汇合度至70-80％时，取50uL/孔的氨基葡聚糖纳米粒子溶液(4.26mg/mL)加到六孔板中，混合均匀。培养箱中培养4h。消化收集细胞，磷酸缓冲盐溶液洗一次。然后用磷酸缓冲盐溶液重悬细胞，流式细胞仪检测。比较人肺癌细胞A549紫杉醇耐药细胞与非耐药细胞的荧光强度。人肺癌细胞A549紫杉醇耐药细胞的荧光强度小于非耐药细胞的荧光强度。
实施例14
人白血病细胞K562阿霉素耐药细胞与非耐药细胞混合按40万个/孔铺到六孔板中。12-24h后，取50uL/孔的菁染料CY5.5标记的氨基葡聚糖纳米粒子水溶液(4.26mg/mL)加到六孔板中，混合均匀。培养箱中培养4h，收集细胞，磷酸缓冲盐溶液洗一次，然后用磷酸缓冲盐溶液重悬细胞，流式细胞仪检测。比较人白血病细胞K562阿霉素耐药细胞与非耐药细胞的荧光强度。人白血病细胞K562阿霉素耐药细胞的荧光强度小于非耐药细胞的荧光强度。
实施例15
人卵巢癌细胞A2780紫杉醇耐药细胞与非耐药细胞混合铺到六孔板中，共同培养。待细胞汇合度至70-80％时，按50ul/孔的菁染料CY5.5标记的羟甲基壳聚糖纳米粒子水溶液(4.26mg/mL)加到六孔板中，混合均匀。培养箱中培养4h，消化收集细胞，磷酸缓冲盐溶液冲洗一次，然后用磷酸缓冲盐溶液重悬细胞，流式细胞仪检测。比较人卵巢癌细胞A2780紫杉醇耐药细胞与非耐药细胞的荧光强度。人卵巢癌细胞A2780紫杉醇耐药细胞的荧光强度小于非耐药细胞的荧光强度。
实施例16
人乳腺癌MCF-7耐阿霉素耐药细胞与非耐药细胞混合铺到六孔板中，共同培养。待细胞汇合度至70-80％时，取50uL/孔石墨烯量子点标记的葡聚糖/壳聚糖纳米粒子水溶液(5mg/mL)加到六孔板中，混合均匀。培养箱中培养4h，消化收集细胞，磷酸缓冲盐溶液洗一次，然后用磷酸缓冲盐溶液重悬细胞，流式细胞仪检测。比较人卵巢癌细胞MCF-7耐阿霉素耐药细胞与非耐药细胞的荧光强度。人卵巢癌细胞MCF-7耐阿霉素耐药细胞的荧光强度小于非耐药细胞的荧光强度。
实施例17
人结肠癌HCT-8紫杉醇耐药细胞与非耐药细胞混合铺到六孔板中，共同培养。待细胞汇合度至70-80％时，按50ul/孔石墨烯量子点标记的葡聚糖/壳聚糖纳米粒子水溶液(5mg/mL)加到六孔板中，混合均匀。培养箱中培养4h，消化收集细胞，磷酸缓冲盐溶液洗一次，然后用磷酸缓冲盐溶液重悬细胞，流式细胞仪检测。比较人结肠癌HCT-8紫杉醇耐药细胞与非耐药细胞的荧光强度。人结肠癌HCT-8紫杉醇耐药细胞的荧光强度小于非耐药细胞的荧光强度。
实施例18
人肝癌Bel氟尿嘧啶耐药细胞与非耐药细胞混合铺到六孔板中，共同培养。待细胞汇合度至70-80％时，按50ul/孔的石墨烯量子点标记的葡聚糖/壳聚糖纳米粒子水溶液(5mg/mL)加到六孔板中，混合均匀。培养箱中培养4h，消化收集细胞，磷酸缓冲盐溶液洗一次，然后用磷酸缓冲盐溶液重悬细胞，流式细胞仪检测。比较人肝癌Bel氟尿嘧啶耐药细胞与非耐药细胞的荧光强度。人肝癌Bel氟尿嘧啶耐药细胞的荧光强度小于非耐药细胞的荧光强度。
实施例19
人结肠癌HCT-8氟尿嘧啶耐药细胞与非耐药细胞混合铺到六孔板中，共同培养。待细胞汇合度至70-80％时，按50ul/孔将菁染料CY5.5标记的羟甲基壳聚糖纳米粒子水溶液(5mg/mL)加到六孔板中，混合均匀。培养箱中培养4h，消化收集细胞，磷酸缓冲盐溶液洗一次，然后用磷酸缓冲盐溶液重悬细胞，流式细胞仪检测。比较人结肠癌HCT-8氟尿嘧啶耐药细胞与非耐药细胞的荧光强度。人结肠癌HCT-8氟尿嘧啶耐药细胞的荧光强度小于非耐药细胞的荧光强度。
实施例20
人膀胱癌BIU-87阿霉素耐药细胞与非耐药细胞混合铺到六孔板中，共同培养。待细胞汇合度至70-80％时，按50ul/孔将石墨烯量子点标记的葡聚糖/壳聚糖纳米粒子水溶液(5mg/mL)加到六孔板中，混合均匀。培养箱中培养4h，消化收集细胞，磷酸缓冲盐溶液洗一次，然后用磷酸缓冲盐溶液重悬细胞，流式细胞仪检测。人膀胱癌BIU-87阿霉素耐药细胞与非耐药细胞的荧光强度。膀胱癌BIU-87阿霉素耐药细胞的荧光强度小于非耐药细胞的荧光强度。
实施例21
人胰腺癌PATU-8988氟尿嘧啶耐药细胞与非耐药细胞混合铺到六孔板中，共同培养。待细胞汇合度至70-80％时，按50uL/孔将菁染料CY5.5标记的羟甲基壳聚糖纳米粒子水溶液(5mg/mL)加到六孔板中，混合均匀。培养箱中培养4h，消化收集细胞，磷酸缓冲盐溶液洗一次，然后用磷酸缓冲盐溶液重悬细胞，流式细胞仪检测。比较人胰腺癌PATU-8988氟尿嘧啶耐药细胞与非耐药细胞的荧光强度。人胰腺癌PATU-8988氟尿嘧啶耐药细胞的荧光强度小于非耐药细胞的荧光强度。
实施例22
人乳腺癌MCF-7耐紫杉醇耐药细胞与非耐药细胞混合铺到六孔板中，共同培养。待细胞汇合度至70-80％时，按50uL/孔将菁染料CY5.5标记的羟甲基壳聚糖纳米粒子水溶液(5mg/mL)加到六孔板中，混合均匀。培养箱中培养4h，消化收集细胞，磷酸缓冲盐溶液洗一次，然后用磷酸缓冲盐溶液重悬细胞，流式细胞仪检测。比较人乳腺癌MCF-7耐紫杉醇耐药细胞与非耐药细胞的荧光强度。人乳腺癌MCF-7耐紫杉醇耐药细胞的荧光强度小于非耐药细胞的荧光强度。
实施例23
人卵巢癌COC1顺铂耐药细胞与非耐药细胞混合铺到六孔板中，共同培养。待细胞汇合度至70-80％时，按50uL/孔将石墨烯量子点标记的葡聚糖/壳聚糖纳米粒子水溶液(5mg/mL)加到六孔板中，混合均匀。培养箱中培养4h，消化收集细胞，磷酸缓冲盐溶液洗一次，然后用磷酸缓冲盐溶液重悬细胞，流式细胞仪检测。比较人卵巢癌COC1顺铂耐药细胞与非耐药细胞的荧光强度。人卵巢癌COC1顺铂耐药细胞的荧光强度小于非耐药细胞的荧光强度。
实施例24
人肺癌A549顺铂耐药细胞与非耐药细胞混合铺到六孔板中，共同培养。待细胞汇合度至70-80％时，按50uL/孔将石墨烯量子点标记的葡聚糖/壳聚糖纳米粒子水溶液(5mg/mL)加到六孔板中，混合均匀。培养箱中培养4h，消化收集细胞，磷酸缓冲盐溶液洗一次，然后用PBS重悬细胞，流式细胞仪检测。比较人肺癌A549顺铂耐药细胞与非耐药细胞的荧光强度。人肺癌A549顺铂耐药细胞的荧光强度小于非耐药细胞的荧光强度。
实施例25
人结肠癌HCT-8长春碱耐药细胞与非耐药细胞混合铺到六孔板中，共同培养。待细胞汇合度至70-80％时，按50uL/孔将石墨烯量子点标记的葡聚糖/壳聚糖纳米粒子水溶液(5mg/mL)加到六孔板中，混合均匀。培养箱中培养4h，消化收集细胞，磷酸缓冲盐溶液洗一次，然后用磷酸缓冲盐溶液重悬细胞，流式细胞仪检测。比较人结肠癌HCT-8长春碱耐药细胞与非耐药细胞的荧光强度。人结肠癌HCT-8长春碱耐药细胞的荧光强度小于非耐药细胞的荧光强度。
实施例26
人胃癌SGC7901顺铂耐药细胞与非耐药细胞混合铺到六孔板中，共同培养。待细胞汇合度至70-80％时，按50uL/孔将菁染料CY5.5标记的羟甲基壳聚糖纳米粒子水溶液(5mg/mL)加到六孔板中，混合均匀。培养箱中培养4h，消化收集细胞，磷酸缓冲盐溶液洗一次，然后用磷酸缓冲盐溶液重悬细胞，流式细胞仪检测。比较人胃癌SGC7901顺铂耐药细胞与非耐药细胞的荧光强度。人胃癌SGC7901顺铂耐药细胞的荧光强度小于非耐药细胞的荧光强度。
实施例27
人乳腺癌MDA-MB-231耐阿霉素细胞与非耐药细胞混合铺到六孔板中，共同培养。待细胞汇合度至70-80％时，按50uL/孔将石墨烯量子点标记的葡聚糖/壳聚糖纳米粒子水溶液(5mg/mL)加到六孔板中，混合均匀。培养箱中培养4h，消化收集细胞，磷酸缓冲盐溶液洗一次，然后用磷酸缓冲盐溶液重悬细胞，流式细胞仪检测。比较人乳腺癌MDA-MB-231耐阿霉素细胞与非耐药细胞的荧光强度。人乳腺癌MDA-MB-231耐阿霉素细胞的荧光强度小于非耐药细胞的荧光强度。
实施例28
人子宫颈癌Hela阿霉素耐药细胞与非耐药细胞混合铺到六孔板中，共同培养。待细胞汇合度至70-80％时，按50uL/孔将石墨烯量子点标记的葡聚糖/壳聚糖纳米粒子水溶液(5mg/mL)加到六孔板中，混合均匀。培养箱中培养4h，消化收集细胞，磷酸缓冲盐溶液洗一次，然后用磷酸缓冲盐溶液重悬细胞，流式细胞仪检测。比较人子宫颈癌Hela阿霉素耐药细胞与非耐药细胞的荧光强度。人子宫颈癌Hela阿霉素耐药细胞的荧光强度小于非耐药细胞的荧光强度。
实施例29
人乳腺癌MCF-7耐多柔比星脂质体耐药细胞与非耐药细胞混合铺到六孔板中，共同培养。待细胞汇合度至70-80％时，按50uL/孔将菁染料CY5.5标记的羟甲基壳聚糖纳米粒子水溶液(5mg/mL)加到六孔板中，混合均匀。培养箱中培养4h，消化收集细胞，磷酸缓冲盐溶液洗一次，然后用磷酸缓冲盐溶液重悬细胞，流式细胞仪检测。比较人乳腺癌MCF-7耐多柔比星脂质体耐药细胞与非耐药细胞的荧光强度。人乳腺癌MCF-7耐多柔比星脂质体耐药细胞的荧光强度小于非耐药细胞的荧光强度。
实施例30
将人卵巢癌细胞OVCAR-3紫杉醇耐药细胞和非耐药细胞混合铺到六孔板中，共同培养。待细胞汇合度至70-80％时，将50uL菁染料CY5.5标记的氨基葡聚糖纳米粒子水溶液(4.26mg/mL)加到六孔板中，混合均匀。培养箱中培养4h，消化收集细胞，磷酸缓冲盐溶液洗一次，100uL磷酸缓冲盐溶液重悬，加入2uL荧光(Alexa Flour 488)标记的CD44抗体，30min后，离心，磷酸缓冲盐溶液洗一次，500uL磷酸缓冲盐溶液重悬，流式细胞仪检测。检测人卵巢癌细胞OVCAR-3紫杉醇耐药细胞和非耐药细胞的CD44表达的差异，如图2所示，发现人卵巢癌细胞OVCAR-3紫杉醇耐药细胞的CD44表达量要高于非耐药细胞。
实施例31
将人卵巢癌细胞A2780紫杉醇耐药细胞和非耐药细胞混合铺到六孔板中，共同培养，.细胞汇合度至70-80％时，将50uL菁染料CY5.5标记的氨基葡聚糖纳米粒子水溶液(4.26mg/mL)加到六孔板中，混合均匀。培养箱中培养4h，消化收集细胞，磷酸缓冲盐溶液洗一次，100uL磷酸缓冲盐溶液重悬，加入2uL荧光(Alexa Flour 488)标记的CD44抗体，30min后，离心，磷酸缓冲盐溶液洗一次，500uL磷酸缓冲盐溶液重悬，流式细胞仪检测。检测人卵巢癌细胞A2780紫杉醇耐药细胞和非耐药细胞的CD44表达的差异，发现人卵巢癌细胞A2780紫杉醇耐药细胞的CD44表达量要高于非耐药细胞。
实施例32
将人卵巢癌细胞OVCAR-3紫杉醇耐药细胞和非耐药细胞铺到六孔板中。待细胞汇合度至70-80％时，将50uL菁染料CY5.5标记的氨基葡聚糖纳米粒子水溶液(4.26mg/mL)加到六孔板中，混合均匀。培养箱中培养4h，消化收集细胞，磷酸缓冲盐溶液洗一次，100uL磷酸缓冲盐溶液重悬，加入2uL荧光(FITC)标记的CD133抗体，30min后，离心，磷酸缓冲盐溶液洗一次，500uL磷酸缓冲盐溶液重悬，流式细胞仪检测。检测人卵巢癌细胞OVCAR-3紫杉醇耐药细胞和非耐药细胞的CD133的表达差异，发现人卵巢癌细胞OVCAR-3紫杉醇耐药细胞的CD133表达量高于非耐药细胞。
实施例33
将人卵巢癌细胞A2780紫杉醇耐药和非耐药细胞混合铺到六孔板中，共同培养。待细胞汇合度至70-80％时，将50uL菁染料CY5.5标记的氨基葡聚糖纳米粒子水溶液(4.26mg/mL)加到六孔板中，混合均匀。培养箱中培养4h，消化收集细胞，磷酸缓冲盐溶液洗一次，100uL磷酸缓冲盐溶液重悬，加入2uL荧光(FITC)标记的CD133抗体，30min后，离心，磷酸缓冲盐溶液洗一次，500uL磷酸缓冲盐溶液重悬，流式细胞仪检测。检测人卵巢癌细胞A2780紫杉醇耐药和非耐药细胞的CD133的表达差异，发现人卵巢癌细胞A2780紫杉醇耐药的CD133表达量高于非耐药细胞。
实施例34
将同时混有人卵巢癌细胞OVCAR-3紫杉醇耐药和非耐药细胞铺到六孔板中。待细胞汇合度至70-80％时，将50uL实施例9得到的磁性多糖纳米粒子(5mg/mL)加到六孔板中，混合均匀。培养箱中培养4h。消化收集细胞，磷酸缓冲盐溶液洗一次，100uL磷酸缓冲盐溶液重悬，用MACS分离柱在MiniMACS分选器上分离，MiniMACS分选器和MACS分选柱均购自Miltenyi Biotec公司，分离得到的细胞用流式细胞仪进行复检，确定细胞纯度在95％以上。
以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。
Claims (10)
1.一种分析肿瘤细胞耐药性的方法，其特征在于，所述方法包括将多糖基纳米粒子应用到肿瘤细胞的步骤。
2.如权利要求1所述的分析肿瘤细胞耐药性的方法，其中，包括以下步骤：
(a)提供一种多糖基纳米粒子；
(b)将所述多糖基纳米粒子加入肿瘤细胞培养基中；
(c)检测所述肿瘤细胞与所述多糖基纳米粒子的亲和力。
3.如权利要求2所述的分析肿瘤细胞耐药性的方法，其中，在步骤(b)之前还包括步骤(d)，步骤(d)为对多糖基纳米粒子进行功能性修饰。
4.如权利要求3所述的分析肿瘤细胞耐药性的方法，其中，步骤(d)中的功能性修饰所用到的功能性分子为荧光分子。
5.如权利要求4所述的分析肿瘤细胞耐药性的方法，其中，所述荧光分子选自菁染料、罗丹明、荧光素、香豆素和荧光无机纳米晶中的一种或多种。
6.如权利要求4所述的分析肿瘤细胞耐药性的方法，其中，所述多糖基纳米粒子与所述荧光分子按照质量比为50-2000:1进行混合。
7.如权利要求3所述的分析肿瘤细胞耐药性的方法，其中，步骤(d)中的功能性修饰所用到的功能性分子为由荧光分子和选自于聚乙二醇、半乳糖、透明质酸和抗体中的一种或多种分子组成。
8.如权利要求2所述的分析肿瘤细胞耐药性的方法，其中，所述多糖基纳米粒子为同位素标记的多糖基纳米粒子。
9.一种分析肿瘤细胞耐药性的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含多糖基纳米粒子。
10.如权利要求9所述的分析肿瘤细胞耐药性的试剂盒，其中，所述多糖基纳米粒子中的多糖基来源于葡聚糖、氨基葡聚糖、壳聚糖、羟甲基壳聚糖、羧丙基壳聚糖、壳寡糖、海藻酸、水溶性淀粉、羧甲基葡聚糖，羧甲基纤维素、透明质酸、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素和羟乙基纤维素中的一种或多种。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910038839.7A CN111440840B (zh) | 2019-01-16 | 2019-01-16 | 一种分析肿瘤细胞耐药性的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910038839.7A CN111440840B (zh) | 2019-01-16 | 2019-01-16 | 一种分析肿瘤细胞耐药性的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111440840A true CN111440840A (zh) | 2020-07-24 |
| CN111440840B CN111440840B (zh) | 2024-04-26 |
Family
ID=71650477
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910038839.7A Active CN111440840B (zh) | 2019-01-16 | 2019-01-16 | 一种分析肿瘤细胞耐药性的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111440840B (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111944757A (zh) * | 2020-08-31 | 2020-11-17 | 四川大学华西医院 | 一种工程化卵巢癌体外模型及其应用 |
| CN113567404A (zh) * | 2021-06-11 | 2021-10-29 | 上海交通大学 | 一种分析肿瘤细胞耐药性的方法和试剂盒 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104974305A (zh) * | 2014-04-08 | 2015-10-14 | 上海交通大学 | 肿瘤微环境敏感多糖基纳米粒子的制备方法 |
| US20160213788A1 (en) * | 2013-09-09 | 2016-07-28 | Ningbo Institute Of Materials Technology & Engineering, Chinese Academy Of Sciences | Active targeting antitumor drug and preparation method therefor |
| US20180092858A1 (en) * | 2015-01-07 | 2018-04-05 | Brightgene Bio-Medical Technology Co., Ltd. | Hyaluronic Acid-Based Amphiphilic Polymer, Preparation Method and Application Thereof |
-
2019
- 2019-01-16 CN CN201910038839.7A patent/CN111440840B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20160213788A1 (en) * | 2013-09-09 | 2016-07-28 | Ningbo Institute Of Materials Technology & Engineering, Chinese Academy Of Sciences | Active targeting antitumor drug and preparation method therefor |
| CN104974305A (zh) * | 2014-04-08 | 2015-10-14 | 上海交通大学 | 肿瘤微环境敏感多糖基纳米粒子的制备方法 |
| US20180092858A1 (en) * | 2015-01-07 | 2018-04-05 | Brightgene Bio-Medical Technology Co., Ltd. | Hyaluronic Acid-Based Amphiphilic Polymer, Preparation Method and Application Thereof |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111944757A (zh) * | 2020-08-31 | 2020-11-17 | 四川大学华西医院 | 一种工程化卵巢癌体外模型及其应用 |
| CN113567404A (zh) * | 2021-06-11 | 2021-10-29 | 上海交通大学 | 一种分析肿瘤细胞耐药性的方法和试剂盒 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111440840B (zh) | 2024-04-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zhang | Molecularly imprinted nanoparticles for biomedical applications | |
| Mout et al. | Surface functionalization of nanoparticles for nanomedicine | |
| Wang et al. | The effect of surface poly (ethylene glycol) length on in vivo drug delivery behaviors of polymeric nanoparticles | |
| Li et al. | Glycopolymer-based nanoparticles: synthesis and application | |
| Navya et al. | Rational engineering of physicochemical properties of nanomaterials for biomedical applications with nanotoxicological perspectives | |
| Du et al. | Regulating the surface poly (ethylene glycol) density of polymeric nanoparticles and evaluating its role in drug delivery in vivo | |
| Cai et al. | Bio-nano interface: The impact of biological environment on nanomaterials and their delivery properties | |
| Robertson et al. | Purification of nanoparticles by size and shape | |
| Wu et al. | Improved SERS-active nanoparticles with various shapes for CTC detection without enrichment process with supersensitivity and high specificity | |
| Du et al. | Biocompatible magnetic and molecular dual-targeting polyelectrolyte hybrid hollow microspheres for controlled drug release | |
| CN111440840A (zh) | 一种分析肿瘤细胞耐药性的方法 | |
| Ghosh et al. | Fabrication and fluorescent labeling of guar gum nanoparticles in a surfactant free aqueous environment | |
| Huang et al. | Amphoteric natural starch-coated polymer nanoparticles with excellent protein corona-free and targeting properties | |
| Wang et al. | Cytotoxicity evaluation of pH-controlled antitumor drug release system of titanium dioxide nanotubes | |
| Pitakchatwong et al. | Thermo-magnetoresponsive dual function nanoparticles: An approach for magnetic entrapable–releasable chitosan | |
| Hu et al. | Preparation and Characterization of Novel Perfluorooctyl Bromide Nanoparticle as Ultrasound Contrast Agent via Layer‐by‐Layer Self‐Assembly for Folate‐Receptor‐Mediated Tumor Imaging | |
| Sawada et al. | Self-assembled nanogel of cholesterol-bearing xyloglucan as a drug delivery nanocarrier | |
| Li et al. | Dopamine-functionalized hyaluronic acid microspheres for effective capture of CD44-overexpressing circulating tumor cells | |
| Avatefi et al. | Amine-functionalized graphene quantum dots–hyaluronic acid nanocomposite as a high-resolution cancer cell bioimaging and biosensing system | |
| Harris et al. | Automated discovery of nanomaterials via drug aggregation induced emission | |
| Shamloo et al. | Synthesis and application of concanavalin A-conjugated green luminescent gold nanoparticle/fluorescent polydopamine nanoparticles for specific differentiation of cancer cells from normal cells using glycan bioreceptors | |
| CN105097174B (zh) | 一种木聚糖季铵盐纳米磁性颗粒及其制备方法 | |
| Khaleghi et al. | Synthesis and characterization of new magnetic modified inulin as an efficient nanocarrier for targeted gene delivery into HEK-293T cells | |
| Meng et al. | Dual-layer 3D DNA nanostructure: The next generation of ultrafast DNA nanomachine for microRNA sensing and intracellular imaging | |
| CN101045162B (zh) | 负载药物的聚氰基丙烯酸酯载药纳米粒的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |