CN111419864B - 醋栗花色苷在制备诱导结肠癌细胞凋亡的药品中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及醋栗花色苷在制备诱导结肠癌细胞凋亡的药品中的应用。采用醋栗花色苷作为原料，单用或与其他具有诱导结肠癌细胞凋亡的药品联用制备抗肠癌药品。药品是口服液、片剂、胶囊、颗粒剂、针剂、软膏剂、凝胶剂剂型。醋栗花色苷的制备方法如下：将醋栗果实置于花色苷提取液中进行提取，得到乙醇醇提物，经大孔吸附树脂层析柜对醋栗提取物进行纯化，乙醇进行洗脱，旋转蒸发，浓缩，真空冷冻干燥，得醋栗花色苷。醋栗花色苷能够抑制Caco‑2细胞活性，具有细胞毒性，降低增值率。导致Caco‑2细胞细胞凋亡。因此可以证明醋栗花色苷具有抑制结肠癌的作用，可以按照国家标准用于防治结肠癌的药物的开发中。

Description

醋栗花色苷在制备诱导结肠癌细胞凋亡的药品中的应用
技术领域
本发明属于分子生物学领域，具体地涉及醋栗花色苷在制备用于诱导结肠癌细胞凋亡的药品中的应用。
背景技术
醋栗(Ribesmissouriense)果实营养丰富，含糖5％-11％、有机酸0.9％--2.3％，含有人体所需的18种氨基酸，B1、B2，还含有铁、磷、钾、钙、锌等微量元素，每100克鲜果含维生素C55毫克，维生素C的含量高出大多数水果几倍甚至上百倍，成熟果食甜美清香，是营养较丰富的水果蔬菜。浆果富含维生素C，对治疗再生障碍性贫血有一定疗效。果实有清热利尿功效，外敷可消炎，全草入药，有清热毒功效，尤其对扁桃体发炎疗效甚佳，花萼为定喘药。含有丰富的碳水化合物、膳食纤维，酸浆醇AB、酸浆果红素、生物碱、枸缘酸、胡萝卜素、酸浆果黄质、禾本甾醇、钝叶醇、环木菠萝烯醇，羊毛脂-8-3B-醇等，能够帮助补充营养、消食开胃。同时生物黄酮的含量很高，具有软化血管、降低血脂和血压、补钙和增强人体免疫力、抗癌等作用。醋栗果肉中的果胶能够保护胃黏膜，减少酒精、辣椒等物质的刺激，保护肠胃，对于肠胃不好的人来说具有很好的功效。
结肠直肠癌是胃肠道中常见的恶性肿瘤，早期症状不明显，随着癌肿的增大而表现排便习惯改变、便血、腹泻、腹泻与便秘交替、局部腹痛等症状，晚期则表现贫血、体重减轻等全身症状。其发病率和病死率在消化系统恶性肿瘤中仅次于胃癌、食管癌和原发性肝癌。
结直肠癌的发生与肠道炎症也密切相关，每次肠炎的发生，都会加速肠道上皮细胞的更新，容易诱导癌变细胞的产生。基于此，抗炎药成为科研人员关心的药物，阿司匹林(aspirin)是研究较多的药物之一，研究发现长期服用阿司匹林可有效降低结直肠癌的发生，可以达到50％下降，但是长期使用阿司匹林会导致消化道出血，产生较为严重的副作用，或许结合卵磷脂(lecithin)能够缓解其副作用。除此以外，常用抗炎药布洛芬(ibuprofen)也有一定效果，但是与阿司匹林有相同的副作用。而其它抗炎药，如塞来考昔(Celecoxib)，舒林酸(sulindac)，也依然在临床试验阶段。
因此，从天然植物中寻找具有生物活性的、预防结肠癌作用的物质应用于医药、食品和中具有重要的意义。
发明内容
本发明以寻求新型高效的诱导结肠癌凋亡药品的开发利用为目的，提出了醋栗花色苷在制备诱导结肠癌细胞凋亡的药品中的应用。
为实现上述目的，本发明的具体方案如下：1.醋栗花色苷在制备诱导结肠癌细胞凋亡的药品中的应用，醋栗花色苷单用或与其他具有诱导结肠癌细胞凋亡的药品联用制备抗肠癌药品。
优选地，上述的应用，所述的醋栗花色苷为醋栗冻干粉富含花色苷的部分。
优选地，上述的应用，所述的醋栗花色苷为醇提化合物。
优选地，上述的应用，所述的醋栗花色苷的制备方法包括如下步骤：将醋栗果实置于花色苷提取液中进行提取，得到乙醇醇提物，经大孔吸附树脂层析柜对醋栗提取物进行纯化，乙醇进行洗脱，旋转蒸发，浓缩，真空冷冻干燥，得醋栗花色苷提取物。
优选地，上述的应用，所述的花色苷提取液是以100mL50％的乙醇溶液、1mg纤维素酶和1mg果胶酶配制成pH＝3的花色苷提取液。
优选地，上述的应用，所述的大孔吸附树脂为大孔吸附树脂HP-2MGL。
优选地，上述的应用，所述的醋栗花色苷的使用浓度为700-800μg/ml，所述的使用浓度是将醋栗冻干粉溶解于PBS缓冲液配制成的醋栗花色苷溶液。
优选地，上述的应用，所述的药品是口服液、片剂、胶囊、颗粒剂、针剂、软膏剂、凝胶剂剂型。
本发明的有益效果是：本发明采用的是醋栗花色苷与Caco-2结肠癌细胞共培养。醋栗花色苷能够抑制Caco-2细胞活性，具有细胞毒性，降低增值率。导致Caco-2细胞细胞凋亡。醋栗花色苷能够抑制促炎因子TNF、IL-1β的表达。因此，醋栗花色苷具有诱导结肠癌细胞凋亡的功效，可作为开发新型高效的天然抗结肠癌药品的一个好选择。
附图说明
图1a不同浓度花色苷对Caco-2细胞形态影响结果。其中A代表DEME培养基处理Caco-2细胞，B代表700μg/ml醋栗花色苷处理Caco-2细胞，C代表750μg/ml醋栗花色苷处理Caco-2细胞，D代表700μg/ml醋栗花色苷处理Caco-2细胞，E代表200μg/ml EGCG处理Caco-2细胞。
图1b不同浓度花色苷对Caco-2细胞增值率作用结果。其中A代表A代表DEME培养基处理Caco-2细胞，B代表700μg/ml醋栗花色苷处理Caco-2细胞，C代表750μg/ml醋栗花色苷处理Caco-2细胞，D代表700μg/ml醋栗花色苷处理Caco-2细胞，E代表200μg/ml EGCG处理Caco-2细胞。与正常对照组比较##p<0.01。
图2不同浓度花色苷对Caco-2细胞Hoechst 33258染色结果。其中A代表A代表DEME培养基处理Caco-2细胞，B代表700μg/ml醋栗花色苷处理Caco-2细胞，C代表750μg/ml醋栗花色苷处理Caco-2细胞，D代表700μg/ml醋栗花色苷处理Caco-2细胞，E代表200μg/ml EGCG处理Caco-2细胞。
图3不同浓度花色苷对Caco-2细胞中促炎因子TNF、IL-1β、IL-10表达的影响。与正常对照组比较##p<0.01
具体实施方式
实施例1醋栗花色苷的提取
以100mL 50％的乙醇溶液、1mg纤维素酶和1mg果胶酶为提取溶剂配置成pH＝3的花色苷提取液，将10g醋栗果实置于100mL花色苷提取液中进行提取醋栗花色苷，得到乙醇醇提物，经HP-2MGL大孔树脂层析柜对醋栗提取物进行纯化，乙醇进行洗脱，旋转蒸发，浓缩，真空冷冻干燥，得醋栗花色苷提取物
经检测醋栗花色苷主要单体为，矢车菊素3-O-葡萄糖苷(cyanidin 3-O-glucoside)、矢车菊素3-O-芸香苷(cyanidin 3-O-rutinoside)、飞燕草素3-O-葡萄糖苷(delphinidin 3-O-glucoside)、飞燕草素3-O-芸香苷(delphinidin 3-O-rutinoside)。
实施例2醋栗花色苷诱导结肠癌细胞凋亡实验研究
1.细胞培养
结肠癌细胞株Caco-2常规培养于添加10％胎牛血清(10％FBS)和1％青霉素/链霉素胰蛋白酶EDTA的DMEM高糖培养基中，在37℃的5％CO2加湿空气中进行细胞收集和整个培养过程。细胞实验分组如下：
(1).正常对照组；DEME培养基处理Caco-2细胞(A)；
(2).醋栗花色苷低剂量组；醋栗花色苷剂量为700μg/ml (B)
(3).醋栗花色苷中剂量组：醋栗花色苷剂量为750μg/ml (C)；
(4).醋栗花色苷高剂量组：醋栗花色苷剂量为800μg/ml (D)；
(5).阳性对照组；茶多酚(EGCG；200μg/ml)处理Caco-2细胞(E)。
2.实验检验
Caco-2细胞按照分组，将细胞接种在96孔板中，接种密度为1×104，培养24h之后再与醋栗花色苷共培养。
(1).CCK8法检测细胞毒性
将Caco-2细胞以1×104的密度接种于96孔板中，加入700μg/ml-800μg/ml的醋栗花色苷溶液为实验组(醋栗花色苷低剂量组700μg/ml，中剂量组750μg/ml，高剂量组800μg/ml)，阳性对照加入EGCG，培养48h，实验结束前，加入CCK8，在450nm处读取吸光度值，计算细胞活力。醋栗花色苷处理组细胞数量减少，死亡细胞数量增加，细胞体积缩小。
(2).Hoechst 33258染色
按照实验计划分组，将Caco-2细胞按照4×105的细胞量培养于含有完全培养基的6孔板中，通过Hoechst 33258染色实验检验细胞凋亡情况，将细胞接种在6孔板中，接种密度为4×104，细胞培养48h后，加入0.5ml固定液，室温固定20min，加入Hoechst 33258染料，染色5min，随即将玻片置荧光显微镜下(200×)观察、拍照。
(3).ELISA法检测炎症因子
采用ELISA法检测Caco-2细胞中TNF、IL-1β、IL-10的表达情况。
六孔板中加入300μl的洗液洗板，加入200μl1xAssay Diluent，震荡封闭一小时。样品用1xAssay Diluent稀释，洗板，加入100μl标准品和待测样品室温孵育2h；洗板，加入1xDelection Antibody，100μl，室温孵育1h；洗板，加入1xAvidin-HRP 100μl室温孵育30min；洗板，加入100μlTMB，避光平衡20min；加入终止液100μl，450nm处读板。
3.结果分析
(1).不同浓度醋栗花色苷对Caco-2细胞形态影响结果如图1a所示,对Caco-2细胞增值率作用结果如图1b所示。
Caco-2在不同浓度的醋栗花色苷下培养48h，对照组细胞形态正常，轮廓清晰、密集，无细胞死亡(图1a(A))。醋栗花色苷处理组细胞数量减少，死亡细胞数量增加，细胞体积缩小(图1a(B)，(C)，(D)，(E))。醋栗花色苷对Caco-2细胞的抑制作用呈剂量依赖性(图1b)。Caco-2细胞的OD值随浓度的增加而降低，呈剂量-反应关系(P<0.01)。
(2).不同浓度醋栗花色苷对Caco-2细胞凋亡作用如图2所示。
如图2所示，Hoechst 33258探针穿透活细胞，与富含腺嘌呤和胸腺嘧啶的DNA结合，在荧光显微镜下发出蓝色荧光。荧光显微镜下，对照组细胞核呈弥散均匀荧光。在花色苷培养组和阳性对照组中，细胞凋亡，染色质固缩，细胞膜对Hoechst 33258染料的吸收和结合增加，细胞核或细胞质中出现密集的颗粒块状荧光。
(3).不同浓度醋栗花色苷对Caco-2细胞中促炎因子TNF、IL-1β、IL-10表达的影响如图3所示。
与对照组相比，醋栗花色苷处理组Caco-2细胞中促炎因子TNF、IL-1β的表达被显著下调(p<0.01)，而上调IL-10表达。由此可以证明。醋栗花色苷可以抑制结肠癌发展过过程中相关炎症性细胞因子的分泌，上调IL-10发挥抗炎抑癌作用，这也可能是醋栗花色苷改善结肠癌的原因之一。
实施例3
将醋栗花色苷冷冻干燥粉，根据国家有关药物制备相关规定或技术要求制备成软膏剂。
实施例4
将醋栗花色苷冷冻干燥粉，根据国家有关药物制备相关规定或技术要求制备成凝胶剂。
实施例5
将醋栗花色苷冷冻干燥粉，根据国家有关药物制备相关规定或技术要求制备成片剂。
实施例6
将醋栗花色苷冷冻干燥粉，根据国家有关药物制备相关规定或技术要求制备成胶囊剂。

Claims (2)

1.醋栗花色苷单用或与其他具有诱导结肠癌细胞凋亡的药品联用在制备抗结肠癌药品中的应用，其特征在于，醋栗花色苷诱导结肠癌细胞凋亡，
所述的醋栗花色苷的制备方法包括如下步骤：将醋栗果实置于花色苷提取液中进行提取，得到乙醇醇提物，经大孔吸附树脂层析柱对醋栗提取物进行纯化，乙醇进行洗脱，旋转蒸发，浓缩，真空冷冻干燥，得醋栗花色苷提取物；
所述的花色苷提取液pH=3，由100mL 50%的乙醇溶液、1mg纤维素酶和1mg果胶酶为提取溶剂配置而成，醋栗与花色苷提取液的料液比为1：10；
所述的大孔吸附树脂为大孔吸附树脂HP-2MGL；
所述的醋栗花色苷的使用浓度为700-800μg/ml。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药品是口服液、片剂、胶囊、颗粒剂、针剂、软膏剂、凝胶剂剂型。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107325138A (zh) * 2016-11-08 2017-11-07 东北林业大学 一种从黑加仑果渣中提取分离纯化四种主要花色苷的方法
CN108379252A (zh) * 2018-03-27 2018-08-10 辽宁大学 醋栗花青素在制备抗肝纤维化药品或保健品中的应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107325138A (zh) * 2016-11-08 2017-11-07 东北林业大学 一种从黑加仑果渣中提取分离纯化四种主要花色苷的方法
CN108379252A (zh) * 2018-03-27 2018-08-10 辽宁大学 醋栗花青素在制备抗肝纤维化药品或保健品中的应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Johanna Rajakangas等.Chemoprevention by white currant is mediated by the reduction of nuclear b-catenin and NF-jB levels in Min mice adenomas.《Eur J Nutr》.2008,第47卷115-122. *
苗雨.黑加仑果渣中花色苷的制备及其功能特性研究.《CNKI硕士电子期刊（工程科技Ⅰ辑）》.2009,摘要. *
赵圣书.黑加仑花色苷脂质体制备及功能评价.《CNKI硕士电子期刊（工程科技Ⅰ辑）》.2014,摘要. *

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