CN111419844A - cct020312作为治疗乳腺癌或者前列腺癌的药物应用 - Google Patents

cct020312作为治疗乳腺癌或者前列腺癌的药物应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111419844A
CN111419844A CN202010390020.XA CN202010390020A CN111419844A CN 111419844 A CN111419844 A CN 111419844A CN 202010390020 A CN202010390020 A CN 202010390020A CN 111419844 A CN111419844 A CN 111419844A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cells
cct020312
cancer
mda
prostate cancer
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202010390020.XA
Other languages
English (en)
Inventor
周维英
李小丽
于晓萍
周端方
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chongqing Medical University
Original Assignee
Chongqing Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chongqing Medical University filed Critical Chongqing Medical University
Priority to CN202010390020.XA priority Critical patent/CN111419844A/zh
Publication of CN111419844A publication Critical patent/CN111419844A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明属于生物医药技术领域，涉及CCT020312作为治疗癌症的药物应用，具体涉及CCT020312作为治疗乳腺癌或者前列腺癌的药物应用。CCT020312可激活PERK/eIF2α/ATF4信号通路，并同时下调AR表达，抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路，促进细胞周期G1期阻滞和细胞自噬，并诱导细胞凋亡，从而抑制前列腺癌和乳腺癌的发生和发展。CCT020312可为雄性激素受体依赖的难治性肿瘤的靶向治疗提供新的策略和思路，可应用于靶向性治疗前列腺癌和乳腺癌的医疗实践中。

Description

cct020312作为治疗乳腺癌或者前列腺癌的药物应用
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，涉及CCT020312作为治疗癌症的药物应用，具体涉及CCT020312作为治疗乳腺癌或者前列腺癌的药物应用。
背景技术
前列腺癌(prostate cancer,PCa)和乳腺癌(Breast cancer,BC)是危害男性和女性健康的性激素依赖的难治性肿瘤，具有高异质性的特点。目前治疗PCa的药物主要是雄激素受体(androgen receptor,AR)拮抗剂，如第一代的比卡鲁胺和第二代的恩杂鲁胺。但由于AR氨基酸突变或产生AR剪接变异体，使得比卡鲁胺这类药物与AR的亲和力降低，导致药物无法识别AR，患者出现耐药、预后差的情形。第二代AR拮抗剂恩杂鲁胺治疗效果较好，但对患者有中枢神经的毒副作用。另外，乳腺癌中的三阴性乳腺癌(triple negative breastcancer，TNBC)由于不表达雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体(HER2)，目前临床上无较好的靶向治疗药物。针对TNBC，传统的一线化疗药物，例如紫杉醇，在治疗TNBC方面效果不佳且毒副作用大。二线化疗药物，例如顺铂，在治疗TNBC效果较好，但是约有三分之一的患者在辅助治疗的3年内复发。因此，急需寻找新的治疗PCa和TNBC的靶向药物。
发明内容
本发明的目的在于提供CCT020312作为治疗乳腺癌或者前列腺癌的药物应用，CCT020312可针对乳腺癌和前列腺癌进行靶向性治疗。
为解决上述技术问题，本发明技术方案如下：
CCT020312作为治疗乳腺癌或者前列腺癌的药物应用。
采用上述技术方案，技术原理如下：CCT020312是近年新开发的选择性PERK/eIF2α通路激活剂。通过激活PERK/eIF2α通路，从而激活下游CHOP通路而诱导细胞凋亡，从而达到了杀伤癌细胞的效果。CCT020312作为一种具有促癌细胞凋亡的药物被研究和利用，但是对其研究仅仅限于PERK/eIF2α/ATF4通路。发明人将PERK/eIF2α/ATF4通路特异性激活剂CCT020312应用到前列腺癌(prostate cancer,PCa)和乳腺癌(Breast cancer,BC)的治疗中。体内和体外实验证明，CCT020312对这两种癌症细胞(肿瘤)均有较好的抑制作用，且较其他类型的癌症显示出较高的特异性和靶向性。发明人进而对CCT020312治疗前列腺癌和乳腺癌的分子机制进行了研究，发现CCT020312除了通过PERK/eIF2α/ATF4通路引起细胞凋亡之外，还可以促进前列腺癌细胞和乳腺癌细胞的自噬作用，并可以对上述两种癌细胞形成G1期阻滞，从而抑制癌细胞的增殖。更重要的是，CCT020312对雄性激素受体(AR)具有较强的抑制作用，可以特异性和靶向性地针对特定的前列腺癌和乳腺癌进行治疗。众所周知，雄性激素以及AR水平与前列腺癌和乳腺癌具有较强的相关性。体内雄激素通过AR作用于细胞，AR水平的异常升高均伴随着罹患前列腺癌或乳腺癌风险的增加。
CCT020312可以激活PERK通路，上调ATF4/CHOP的表达，引起细胞凋亡，还可以下调前列腺癌细胞和乳腺癌细胞的AR表达。CCT020312可对抗AR依赖的恶性肿瘤的快速增殖和功能维持。同时CCT020312还能阻滞细胞周期G1期、抑制细胞增殖信号通路、引起细胞自噬，进一步加强了对AR依赖的恶性肿瘤的抑制作用。
有益效果：
(1)CCT020312可针对乳腺癌和前列腺癌进行靶向性治疗，可对雄性激素受体形成抑制，用于治疗由雄性激素异常升高导致的前列腺癌和乳腺癌。
(2)CCT020312可通过多种机制对前列腺癌和乳腺癌进行治疗，增加了治疗效果。CCT020312能够激活PERK/eIF2α/ATF4信号通路，并同时下调AR表达，抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路，促进细胞周期G1期阻滞和自噬。CCT020312通过PERK/eIF2α/ATF4/CHOP通路诱导细胞凋亡从而抑制前列腺癌和乳腺癌发生发展。
(3)CCT020312有望成为治疗性激素依赖的前列腺癌和乳腺癌的潜在药物，为AR依赖的难治性肿瘤的靶向治疗提供新的策略和思路，也为其他基于内质网应激理论的药物研发提供参考。
(4)经实验验证，CCT020312的细胞毒性小，安全性好。
进一步，CCT020312的结构式为：
Figure BDA0002484433260000031
采用上述技术方案，CCT020312结构稳定，安全性较高。
进一步，所述乳腺癌为腔面雄激素受体型三阴性乳腺癌，所述前列腺癌为雄激素依赖型前列腺癌。
采用上述技术方案，三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer，TNBC)是指癌组织免疫组织化学检查结果为雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和原癌基因Her-2均为阴性的乳腺癌。这类乳腺癌占所有乳腺癌病理类型的10.0％-20.8％，具有特殊的生物学行为和临床病理特征，预后较其他类型差。雄激素受体作为类固醇激素受体家族中的一个成员,其与乳腺癌的发病机制密切相关,可成为三阴性乳腺癌这一亚群的治疗靶点。三阴性乳腺癌包括4个不同亚型：免疫调节型、腔面雄激素受体型、基底样免疫抑制型和间质型。腔面雄激素受体型三阴性乳腺癌(luminal androgen receptor TNBC，LARTNBC)和AR通路有着较为密切的关系，AR是该类型疾病的分子标记物和潜在靶点。雄激素依赖型前列腺癌是指前列腺癌细胞的生长具有依赖雄激素的生物学特性，多数前列腺癌患者在首次接受雄激素剥夺疗法后都有显著疗效。
CCT020312具有抑制雄性激素受体的作用，可以成为腔面雄激素受体型三阴性乳腺癌和雄激素依赖型前列腺癌的特异性治疗药物。
进一步，所述药物为雄性激素受体抑制剂。
采用上述技术方案，CCT020312具有抑制雄激素受体(androgen receptor,AR)的作用。AR是核受体转录因子，研究表明，异常的AR信号通路与前列腺癌的发生发展密切相关。乳腺癌与前列腺癌具有广泛的相似性生物学表型，研究显示AR与乳腺癌临床病理特征和生存预后的关系密切，在ER阳性乳腺癌中，AR信号通常拮抗ER信号的生长刺激效应，但在部分ER阴性的乳腺癌中，AR异常高表达，且与低存活率、浸润转移密切相关，其中最典型是LAR亚型的三阴性乳腺癌(TNBC)，在这类亚型乳腺癌中，AR信号通路对肿瘤细胞增殖与进一步恶化发挥了关键作用。实验结果(实施例3)表明CCT020312可显著降低MDA-MB-453(LARTNBC细胞系)和C4-2(雄激素依赖型前列腺癌细胞系)中AR的表达，从而抑制AR依赖的难治性肿瘤发生发展。
进一步，所述药物为癌细胞自噬促进剂。
采用上述技术方案，CCT020312可促进癌细胞自噬，进一步诱导癌细胞程序性死亡。凋亡和自噬是细胞程序性死亡的两种方式。自噬是细胞死亡的主要机制，同时也是细胞应激反应中除凋亡外的主要机制，诱导自噬可提高癌细胞对化疗和辐射敏感性。实验结果显示(实施例3)，CCT020312能增加细胞中自噬标志性蛋白LC-3和beclin1的表达。mTOR激酶是自噬诱导的关键调节因子，mTOR的磷酸化可抑制自噬，而mTOR的去磷酸化可促进自噬。实验结果也表明CCT020312可显著降低C4-2细胞和LNCaP细胞中p-mTOR(磷酸化的mTOR)水平。以上结果表明CCT020312可诱导癌细胞发生自噬。
进一步，所述药物为癌细胞凋亡促进剂。
采用上述技术方案，CCT020312是选择性PERK/eIF2α信号通路激活剂。低强度刺激激活PERK通路，通过诱导eIF2α磷酸化来促进细胞存活，而高强度刺激激活PERK会触发死亡途径，通过PERK/eIF2α/ATF4信号通路激活下游信号分子CHOP，导致细胞凋亡。
进一步，所述药物为癌细胞G1期阻滞剂。
采用上述技术方案，CCT020312可对癌细胞形成G1期阻滞剂，即将细胞周期停留在G1期，阻止细胞周期从G1期向S期转换，从而抑制癌细胞的增殖。细胞周期控制着机体的生长发育，当细胞接收到一些增殖信号的刺激时，细胞G1/S特异性周期蛋白CyclinD1被激活，并与周期蛋白依赖激酶CDK4或CDK6形成复合物，促进细胞周期G1期向S期的进程。当细胞增殖失去控制转变为癌细胞时，细胞G1/S的检查站点失灵，CyclinD1和CDK4/6表达升高，细胞进入无序增殖的状态，尤其在乳腺癌中表现异常明显。发明人检测了CCT020312对TNBC和PCa细胞周期的影响，流式检测结果(实施例2)表明CCT020312能够诱导LNCaP细胞和MDA-MB-453细胞的G1期阻滞。
进一步，所述药物为CDK4抑制剂或CDK6抑制剂。
采用上述技术方案，CCT020312可通过抑制CDK4和CDK6的表达来实现G1期阻滞。长期以来，靶向抑制CDK4和CDK6一直被认为是抑制肿瘤生长的非常有前景的治疗方法。发明人也检测了CCT020312对CDK4和CDK6的影响。WB结果(实施例3)显示CCT020312也可显著抑制CDK4和CDK6的表达。这些结果表明CCT020312通过抑制细胞周期蛋白依赖激酶CDKs的表达，诱导细胞周期G1期阻滞。
进一步，使用CCT020312处理MDA-MB-453细胞24h，CCT020312对MDA-MB-453细胞的IC50为7.047μM；使用CCT020312处理MDA-MB-453细胞48h，CCT020312对MDA-MB-453细胞的IC50为4.853μM；使用CCT020312处理CAL-148细胞24h，CCT020312对CAL-148细胞的IC50为10.29μM；使用CCT020312处理CAL-148细胞48h，CCT020312对CAL-148细胞的IC50为8.727μM。
采用上述技术方案，CCT020312对腔面雄激素受体型三阴性乳腺细胞具有体外抑制作用。
进一步，使用CCT020312处理C4-2细胞24h，CCT020312对C4-2细胞的IC50为9.77μM；使用CCT020312处理C4-2细胞48h，CCT020312对C4-2细胞的IC50为8.26μM；使用CCT020312处理LNCAP细胞24h，CCT020312对LNCAP细胞的IC50为9.06μM；使用CCT020312处理LNCAP细胞48h，CCT020312对LNCAP细胞的IC50为7.96μM。
采用上述技术方案，CCT020312对雄激素受体依赖型前列腺癌细胞具有体外抑制作用。
附图说明
图1为本发明实施例1的MDA-MB-453细胞的CCK-8实验结果；
图2为本发明实施例1的CAL-148细胞的CCK-8实验结果；
图3为本发明实施例1的C4-2细胞的CCK-8实验结果；
图4为本发明实施例1的LNCaP细胞的CCK-8实验结果；
图5为本发明实施例1的RTCA-S16实时无标记细胞增殖检测实验结果(MDA-MB-453细胞)；
图6为本发明实施例1的RTCA-S16实时无标记细胞增殖检测实验结果(CAL-148细胞)；
图7为本发明实施例1的RTCA-S16实时无标记细胞增殖检测实验结果(C4-2细胞)；
图8为本发明实施例1的RTCA-S16实时无标记细胞增殖检测实验结果(LNCaP细胞)；
图9为本发明实施例1的克隆实验结果(CAL-148细胞)；
图10为本发明实施例1的克隆实验结果(C4-2细胞)；
图11为本发明实施例2的流式细胞术检测结果(检测MDA-MB-453细胞的G1期阻滞)；
图12为本发明实施例2的流式细胞术检测结果的统计柱状图(检测MDA-MB-453细胞的G1期阻滞)；
图13为本发明实施例2的流式细胞术检测结果(检测LNCaP细胞的G1期阻滞)；
图14为本发明实施例2的流式细胞术检测结果的统计柱状图(检测LNCaP细胞的G1期阻滞)；
图15为本发明实施例2的流式细胞术检测结果(检测MDA-MB-453细胞的细胞凋亡情况)；
图16为本发明实施例2的流式细胞术检测结果的统计柱状图(检测MDA-MB-453细胞的细胞凋亡情况)；
图17为本发明实施例2的流式细胞术检测结果(检测C4-2细胞的细胞凋亡情况)；
图18为本发明实施例2的流式细胞术检测结果的统计柱状图(检测C4-2细胞的细胞凋亡情况)；
图19为本发明实施例2的WB检测结果(自噬相关蛋白，针对C4-2细胞)；
图20为本发明实施例2的WB检测结果(自噬相关蛋白，针对LNCaP细胞)；
图21为本发明实施例2的WB检测结果(细胞周期蛋白，针对MDA-MB-453细胞)；
图22为本发明实施例3的WB检测结果(针对MDA-MB-453细胞，检测不同药物浓度对PERK/eIF2α/ATF4/CHOP通路相关蛋白的影响)；
图23为本发明实施例3的WB检测结果(针对C4-2细胞，检测不同药物浓度对PERK/eIF2α/ATF4/CHOP通路相关蛋白的影响)；
图24为本发明实施例3的WB检测结果(针对MDA-MB-453细胞，检测不同药物的处理时间对PERK/eIF2α/ATF4/CHOP通路相关蛋白的影响)；
图25为本发明实施例3的WB检测结果(针对MDA-MB-453细胞，检测不同药物的处理时间对PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白的影响)；
图26为本发明实施例4的体内实验结果(裸鼠MDA-MB-453原位移植瘤抑制实验，展示肿瘤体积和处理时间的关系)；
图27为本发明实施例4的体内实验结果(裸鼠MDA-MB-453原位移植瘤抑制实验，展示体重和处理时间的关系)；
图28为本发明实施例4的体内实验结果(裸鼠C4-2皮下移植瘤抑制试验，展示肿瘤体积和处理时间的关系)。
具体实施方式
在实施例1-4中，使用到的主要细胞株和试剂情况如下：
三阴性乳腺癌(TNBC)细胞株(MDA-MB-453细胞和CAL-148细胞，均为LARTNBC细胞系)，以及前列腺癌(PCa)细胞株(LNCaP细胞和C4-2细胞，均为雄激素受体依赖型前列腺癌细胞系)均购于美国模式培养物集存库(ATCC)；DMEM、RPMI-1640、L15培养基以及胎牛血清购于Hyclone公司；lipofectamine2000购于Invitrogen；BALB/c Nude裸鼠购于北京华阜康生物科技公司；CCT020312、GSK2656157以及玉米油购于Med Chem Express公司；基质胶购于BD bioscience公司；一抗购于Cell Signaling Technology公司；MTT、BCA蛋白测定试剂盒、RIP裂解液和细胞周期凋亡检测试剂均购于上海碧云天生物技术有限公司；RTCA-S16实时无标记细胞功能分析仪购自美国艾森生物公司。
其中，细胞的培养方法为：MDA-MB-453细胞常规培养于含10％胎牛血清的L-15培养基中；CAL-148、LNCaP以及C4-2细胞常规培养于含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基中；四种细胞均置于37℃，5％CO2培养箱中孵育，每周传代1-2次。
另外，在以下的实施例中，数据分析用GraphPad Prism 5.0software处理，数据用mean±SD表示，用t检验进行统计学分析，p<0.05具有统计学差异。
实施例1：CCT020312抑制PCa和TNBC细胞活力和增殖
CCK-8实验：将细胞接种于96孔板中，每孔180μl，并设置空白对照组和阴性对照组,待细胞过夜贴壁后，加入不同浓度的CCT020312处理细胞24h或48h，弃上清，加入CCK-8溶液(CCK-8原液：培养基＝1：100)孵育1-2h后，用酶标仪在570nm下检测每孔的OD值。实验结果如图1-图4所示：CCK-8检测结果表明，CCT020312处理TNBC细胞(MDA-MB-453、CAL-148)和PCa细胞(LNCaP、C4-2)24h和48h后，细胞活力呈剂量依赖性的逐渐下降。经过统计和计算：CCT020312处理MDA-MB-453细胞24h后，CCT020312的IC50为7.047μM；CCT020312处理MDA-MB-453细胞48h后，CCT020312的IC50为4.853μM；CCT020312处理CAL-148细胞24h后，CCT020312的IC50为10.29μM；CCT020312处理CAL-148细胞48h后，CCT020312的IC50为8.727μM。CCT020312处理C4-2细胞24h后，CCT020312的IC50为9.77μM；CCT020312处理C4-2细胞48h后，CCT020312的IC50为8.26μM；CCT020312处理LNCAP细胞24h后，CCT020312的IC50为9.06μM；CCT020312处理LNCAP细胞48h后，CCT020312的IC50为7.96μM。
RTCA-S16实时无标记细胞增殖检测：设置RTCA仪器程序，将50ul完全培养基加至S16金属孔板，放入RTCA仪器中5min，测空白基线。再将癌细胞(四种)按各自铺板密度接种于S16金属板、室温静置30min后再放入RTCA仪器中，点击start。待细胞稳定贴壁，进入细胞对数增长期前，加入不同浓度CCT020312(浓度数值详见图5-图8)处理四种细胞，体外实时监测无标记细胞增殖情况。实验结果如图5-图8所示，活细胞实时检测结果表明，CCT020312可显著抑制四种癌细胞的生长。
克隆实验：将细胞按500个/孔细胞接种于6孔板中，待细胞贴壁后加入不同浓度(浓度数值详见图9和图10)CCT020312处理细胞12天后，弃上清，用4％多聚甲醛固定1h，弃上清，结晶紫染色30min后，弃上清，用PBS洗3次后，计数。实验结果如图9和图10所示，克隆实验结果也表明CCT02312可以显著抑制CAL-148细胞和C4-2细胞的增殖。
实施例2：CCT020312诱导PCa和TNBC细胞凋亡、自噬以及G1期阻滞
流式细胞术检测细胞周期：将细胞接种于6孔板，贴壁后加入不同浓度的CCT020312处理24h，胰酶消化细胞后，1000r/min离心5min，弃上清，PBS洗两次，离心，用预冷的70％无水乙醇固定过夜后进行流式检测。实验结果如图11-图14所示，CCT020312会引起MDA-MB-453细胞和LNCaP细胞的G1期阻滞，从而影响细胞周期，抑制癌细胞增殖。
流式细胞术检测细胞凋亡：将细胞接种于6孔板，贴壁后加入不同浓度的CCT020312处理24h，胰酶消化细胞后，1000r/min离心5min，弃上清，PBS洗两次，离心，用PBS重悬后进行流式检测。实验结果如图15-图18所示，CCT020312会促进MDA-MB-453细胞和C4-2细胞的凋亡，并且该促进作用呈剂量依赖的形式，随剂量的增加，促凋亡作用增加。
Western blot检测细胞自噬：将细胞接种于T25培养瓶中，待细胞贴壁后加入不同浓度CCT020312处理细胞24h后(检测自噬相关蛋白，选取的药物浓度分别为0、8、10、12μM(针对C4-2细胞)和0、10、12、14μM(针对LNCaP细胞)；检测细胞周期蛋白，选取的药物浓度分别为0、6、8和10μM(针对MDA-MB-453细胞))，收集细胞，用RIPA(加PMSF)冰上裂解1h后，4℃离心20min，取上清加5×loading buffer，100℃煮5min，使蛋白变性。经SDS－PAGE分离后转膜至PVDF膜，封闭、孵育一抗和二抗后显色。本实验检测了自噬标志性蛋白Beclin1、LC3、P62和Atg12的表达、抑制自噬抑制因子p-mTOR的表达(图19和图20)、以及G1期关键蛋白CDK4和CDK6的表达(图21)。根据实验结果可知，不同浓度CCT02312处理PCa细胞后，可显著升高自噬标志性蛋白Beclin1，LC3的表达，并抑制自噬抑制因子p-mTOR的表达。针对TNBC细胞株，我们也进行了细胞自噬蛋白的相关WB实验，发现CCT020312也可显著升高自噬标志性蛋白的表达(数据未示)。CCT020312也可显著降低G1期关键蛋白CDK4和CDK6的表达，从而引起G1期阻滞。
实施例3：CCT020312对PCa和TNBC细胞的信号通路的影响
使用不同浓度的CCT020312处理MDA-MB-453细胞和C4-2细胞24h后(针对MDA-MB-453细胞，使用的药物浓度为0μM、6μM、8μM和10μM；针对C4-2细胞，使用的药物浓度为0μM、8μM、10μM和12μM)，再使用Western blot检测CCT020312对PCa和TNBC细胞的信号通路的影响，检测流程同实施例2中的Western blot检测，只是将检测对象改为了PERK、p-PERK、ATF4、CHOP、p-eIF2α和eIF2α六种PERK/eIF2α/ATF4/CHOP通路相关蛋白。由于前列腺癌和乳腺癌同雄激素受体(AR)的表达量高度相关，所以本实施例同时对AR的蛋白表达量进行了检测。针对MDA-MB-453细胞，本实验例还使用8μMCCT020312对细胞(针对MDA-MB-453细胞)进行了不同时间的处理(0h、6h、12h和24h)，使用Western blot检测了处理时间对蛋白表达的影响。实验结果如图22、图23和图24所示，结果表明CCT020312升高PERK、p-PERK、ATF4、CHOP的表达，但是却明显降低AR的表达，且具有量效和时效关系。
本实施例还使用Western blot检测CCT020312对TNBC细胞中PI3K/AKT/mTOR通路的影响。针对MDA-MB-453细胞，使用8μMCCT020312对细胞进行了不同时间的处理(0h、6h、12h、24h和48h)，然后使用Western blot检测了PI3K、p-PI3K、mTOR、p-mTOR、AKT和p-AKT的蛋白表达量。实验结果如图25所示，结果表明CCT020312显著抑制p-PI3K,p-mTOR和p-AKT的表达，且具有时效关系。CCT020312处理MDA-MB-453细胞后，显著抑制MDA-MB-453的p-PI3K，p-AKT和p-mTOR的表达，并且具有时效性，证实CCT020312可抑制细胞经典增殖信号通路PI3K/AKT/mTOR，从而发挥抗肿瘤作用。
Real-Time PCR实验：将细胞接种于6孔板中，待细胞贴壁后加入不同浓度CCT020312处理不同时间后，弃上清，加入trziol裂解细胞提取RNA。按照逆转录试剂盒和定量PCR试剂盒说明书进行PCR检测。Real-Time PCR实验的结果(六种PERK/eIF2α/ATF4/CHOP通路相关蛋白基因表达以及PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白基因表达)和WB结果一致(结果未示)。
实施例4：体内实验
进行皮下移植瘤模型建立及给药实验，实验步骤如下：细胞消化，离心后重悬于双无抗的含基质胶的培养基(培养基和基质胶质量比为1:1)，MDA-MB-453细胞按4×106/100μl/只接种于裸鼠第8乳房垫，C4-2细胞按1×106/100μl/只接种于裸鼠右后肢皮下，按待肿瘤长至50-60mm3时，MDA-MB-453移植瘤模型腹腔注射24mg/kg CCT020312，C4-2移植瘤模型腹腔注射48mg/kg CCT020312，对照组不注射药物而是注射DMSO。每3天用游标卡尺测量肿瘤体积，并按照公式计算肿瘤体积：V(mm3)＝1/2×长×宽2。实验结果如图26-图28所示，生长曲线结果表明，CCT020312能显著抑制裸鼠MDA-MB-453原位移植瘤和C4-2皮下移植瘤的生长；裸鼠体重结果表明，与模型对照组比较，CCT020312对裸鼠体重无明显的影响。综上，CCT020312对乳腺癌MDA-MB-453原位移植瘤和C4-2皮下移植瘤的抑瘤率可达50％以上，并且裸鼠体重与溶剂对照组相比几乎无明显差异，说明CCT020312毒副作用小。
以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体结构及特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明结构的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。

Claims (10)

1.CCT020312作为治疗乳腺癌或者前列腺癌的药物应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，CCT020312的结构式为：
Figure FDA0002484433250000011
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述乳腺癌为腔面雄激素受体型三阴性乳腺癌，所述前列腺癌为雄激素依赖型前列腺癌。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物为雄性激素受体抑制剂。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物为癌细胞自噬促进剂。
6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物为癌细胞凋亡促进剂。
7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物为癌细胞G1期阻滞剂。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述药物为CDK4抑制剂或CDK6抑制剂。
9.根据权利要求1-8所述的应用，其特征在于，
使用CCT020312处理MDA-MB-453细胞24h，CCT020312对MDA-MB-453细胞的IC50为7.047μM；
使用CCT020312处理MDA-MB-453细胞48h，CCT020312对MDA-MB-453细胞的IC50为4.853μM；
使用CCT020312处理CAL-148细胞24h，CCT020312对CAL-148细胞的IC50为10.29μM；
使用CCT020312处理CAL-148细胞48h，CCT020312对CAL-148细胞的IC50为8.727μM。
10.根据权利要求1-8所述的应用，其特征在于，
使用CCT020312处理C4-2细胞24h，CCT020312对C4-2细胞的IC50为9.77μM；
使用CCT020312处理C4-2细胞48h，CCT020312对C4-2细胞的IC50为8.26μM；
使用CCT020312处理LNCAP细胞24h，CCT020312对LNCAP细胞的IC50为9.06μM；
使用CCT020312处理LNCAP细胞48h，CCT020312对LNCAP细胞的IC50为7.96μM。
CN202010390020.XA 2020-05-09 2020-05-09 cct020312作为治疗乳腺癌或者前列腺癌的药物应用 Pending CN111419844A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010390020.XA CN111419844A (zh) 2020-05-09 2020-05-09 cct020312作为治疗乳腺癌或者前列腺癌的药物应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010390020.XA CN111419844A (zh) 2020-05-09 2020-05-09 cct020312作为治疗乳腺癌或者前列腺癌的药物应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111419844A true CN111419844A (zh) 2020-07-17

Family

ID=71550916

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010390020.XA Pending CN111419844A (zh) 2020-05-09 2020-05-09 cct020312作为治疗乳腺癌或者前列腺癌的药物应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111419844A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114949223A (zh) * 2022-05-11 2022-08-30 中山大学附属第七医院(深圳) 一种perk激活剂在制备抑制脑胶质瘤发展药物中的应用及该药物
WO2022265950A1 (en) * 2021-06-15 2022-12-22 Genentech, Inc. Egfr inhibitor and perk activator in combination therapy and their use for treating cancer

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104083368A (zh) * 2014-05-19 2014-10-08 中山大学 G-1在制备基于g蛋白偶联受体30的三阴性乳腺癌靶向药物方面的应用
WO2017059113A1 (en) * 2015-09-29 2017-04-06 Duke University Compositions and methods for identifying and treating dystonia disorders
US20170304241A1 (en) * 2014-08-14 2017-10-26 Deutsches Zentrum Für Neurodegenerative Erkrankungen E.V. (Dzne) Perk activator for the treatment of neurodegenerative diseases
JP2019052125A (ja) * 2017-09-19 2019-04-04 国立大学法人大阪大学 パーキンソン病の処置用医薬、およびパーキンソン病の処置用医薬のスクリーニング方法
WO2019238873A1 (en) * 2018-06-13 2019-12-19 King Faisal Specialist Hospital & Research Centre A method of precision cancer therapy

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104083368A (zh) * 2014-05-19 2014-10-08 中山大学 G-1在制备基于g蛋白偶联受体30的三阴性乳腺癌靶向药物方面的应用
US20170304241A1 (en) * 2014-08-14 2017-10-26 Deutsches Zentrum Für Neurodegenerative Erkrankungen E.V. (Dzne) Perk activator for the treatment of neurodegenerative diseases
WO2017059113A1 (en) * 2015-09-29 2017-04-06 Duke University Compositions and methods for identifying and treating dystonia disorders
JP2019052125A (ja) * 2017-09-19 2019-04-04 国立大学法人大阪大学 パーキンソン病の処置用医薬、およびパーキンソン病の処置用医薬のスクリーニング方法
WO2019238873A1 (en) * 2018-06-13 2019-12-19 King Faisal Specialist Hospital & Research Centre A method of precision cancer therapy

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PROKAKIS, EVANGELOS;等: "USP22 promotes HER2-driven mammary carcinoma aggressiveness by suppressing the unfolded protein response", 《ONCOGENE》 *
STOCKWELL, S. R., 等: "Mechanism-based screen for G1/S checkpoint activators identifies a selective activator of EIF2AK3/PERK signalling", 《PLOS ONE》 *
XIAOLI LI，等: "CCT020312 Inhibits Triple-Negative Breast Cancer Through PERK Pathway-Mediated G1 Phase Cell Cycle Arrest and Apoptosis", 《FRONTIERS IN PHARMACOLOGY》 *
于晓萍: "选择性PERK/eIF2α通路激活剂CCT020312抗前列腺癌的作用及机制研究", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(硕士) 医药卫生科技辑》 *
李小丽，等: "内质网应激在去势抵抗性前列腺癌中抑制雄激素受体转录的分子机制研究", 《中国药理学会化疗药理专业委员会第十五届学术大会暨2018重庆化疗药物基础与前沿国际论坛会议手册》 *
李小丽: "诱导内质网应激下调LAR型三阴性乳腺癌中雄激素受体表达的作用及分子机制研究", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(博士) 医药卫生科技辑》 *
陈凤霞，等: "雄激素受体在三阴性乳腺癌发生发展中的作用", 《癌症进展》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022265950A1 (en) * 2021-06-15 2022-12-22 Genentech, Inc. Egfr inhibitor and perk activator in combination therapy and their use for treating cancer
CN114949223A (zh) * 2022-05-11 2022-08-30 中山大学附属第七医院(深圳) 一种perk激活剂在制备抑制脑胶质瘤发展药物中的应用及该药物
CN114949223B (zh) * 2022-05-11 2024-04-02 中山大学附属第七医院(深圳) 一种perk激活剂在制备抑制脑胶质瘤发展药物中的应用及该药物

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Zheng et al. MiRNA-30a-mediated autophagy inhibition sensitizes renal cell carcinoma cells to sorafenib
Yang et al. Antipermeability function of PEDF involves blockade of the MAP kinase/GSK/β-catenin signaling pathway and uPAR expression
Zhang et al. Overexpression of miR-4443 promotes the resistance of non-small cell lung cancer cells to epirubicin by targeting INPP4A and regulating the activation of JAK2/STAT3 pathway
CN111419844A (zh) cct020312作为治疗乳腺癌或者前列腺癌的药物应用
CN110393718B (zh) 阿托帕沙溴酸作为新型jak-stat3信号通路抑制剂的用途和研究方法
Lee et al. Regulatory effects of Siegesbeckia glabrescens on non-small cell lung cancer cell proliferation and invasion
Liu et al. Scutellarin suppresses patient-derived xenograft tumor growth by directly targeting AKT in esophageal squamous cell carcinoma
CN109321656B (zh) 蛋白depdc1作为诊断三阴乳腺癌的标记物的用途
Xu et al. XS-2, a novel potent dual PI3K/mTOR inhibitor, exhibits high in vitro and in vivo anti-breast cancer activity and low toxicity with the potential to inhibit the invasion and migration of triple-negative breast cancer
Zhao et al. Distinct EphB4-mediated mechanisms of apoptotic and resistance to dasatinib in human chronic myeloid leukemia and K562 cell lines
Li et al. The cytotoxic and mechanistic effects of aaptamine on hepatocellular carcinoma
CN109529041B (zh) 脾酪氨酸激酶作为肝内胆管细胞癌治疗靶点的应用
CN110882257B (zh) 一种麦角甾醇联合吉非替尼的用途
Wang et al. Angelicin impedes the progression of glioblastoma via inactivation of YAP signaling pathway
KR101889716B1 (ko) 신경교모세포종에 대한 저분자 화합물의 치료 용도
CN104083368A (zh) G-1在制备基于g蛋白偶联受体30的三阴性乳腺癌靶向药物方面的应用
Wang et al. Icaritin inhibits endometrial carcinoma cells by suppressing O-GlcNAcylation of FOXC1
CN109260197B (zh) 靛玉红类化合物和硼替佐米在制备治疗多发性骨髓瘤的药物中的用途
WO2019184306A1 (zh) 一种肿瘤转移药物治疗的靶标及其应用
Zheng et al. Calycosin (CA) inhibits proliferation, migration and invasion by suppression of CXCL10 signaling pathway in glioma
CN116531364B (zh) 扁柏双黄酮在制备用以抑制C-Myc表达的药物中的应用
CN113908279B (zh) Malt1基因作为标志物在制备治疗结直肠癌药物中的应用
CN114917217B (zh) 磷酸二酯酶4抑制剂ZL-n-91在制备治疗三阴性乳腺癌的药物中的应用
CN114164270B (zh) Crip2在检测前列腺癌对多西他赛耐药性及逆转前列腺癌对多西他赛耐药性中的应用
CN112843238B (zh) 包含微管蛋白抑制剂和Notch抑制剂的药物组合物及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination