CN111410679A - Daphnane型大环二萜类化合物制备及应用 - Google Patents

Daphnane型大环二萜类化合物制备及应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及药物领域，特别是涉及一种化合物或其药学上可接受的盐、异构体、前药、多晶型物或溶剂化物。本发明提供一种化合物或其药学上可接受的盐、异构体、前药、多晶型物或溶剂化物，所述化合物的化学结构式如式I、或式II所示。本发明所提供的化合物是一种从天然产物中提取的新化合物，所述化合物可以从芫花提取物中提取获得，可以应用在PI3K/Akt/mTOR通路介导的抑制肿瘤细胞(例如，结肠癌细胞)增殖，且表现出非常好的抗增殖促凋亡活性，从而具有良好的产业化前景。

Description

Daphnane型大环二萜类化合物制备及应用
技术领域
本发明涉及药物领域，特别是涉及一种化合物或其药学上可接受的盐、异构体、前药、多晶型物或溶剂化物，所述化合物可以由芫花提取物制备获得。
背景技术
结直肠癌(Colorectal cancer，CRC)是常见的发生于人体结肠部位的消化道恶性肿瘤，好发于直肠与乙状结肠交界处，以40～50岁年龄组发病率最高，男女之比为2～3：1，是严重威胁人类健康的一种恶性肿瘤疾病。《2014中国肿瘤登记年报》公布的统计数据亦显示，我国结直肠癌的发病率及死亡率一直呈上升趋势，肿瘤发病的排位中，结直肠癌首次超过胃癌，跃居全国恶性肿瘤的第二位，严重影响人类的生活质量和生命健康，因此加强治疗结直肠癌相关方面的研究，探索治疗结直肠癌的新方法，具有重要意义。
目前国内外结直肠癌有效的治疗方法主要包括手术治疗，药物化疗、靶向治疗、中医药治疗等手段。根治性手术治疗仍然是结肠癌的首选治疗方式，结直肠癌化疗最常用的药物有氟尿嘧啶类化合物(即5-氟尿嘧啶和卡培他滨)、亚叶酸钙、奥沙利铂和伊立替康。随着分子通路和生物进程机制在肿瘤发生发展过程中的不断明了，靶向治疗药物开始出现并逐渐应用于临床。尽管治疗结直肠癌的新技术和新方法不断出现，但治疗效果仍很不理想，复发和转移是导致患者死亡的重要原因。化疗和靶向药物治疗均能适当地延长癌症患者的生存时间，但不能够有效地治愈结直肠癌，而且这些药物都存在不同程度的不良反应和耐药性，所以加快研发新型的结直肠癌药物已刻不容缓。寻找关键分子治疗靶点及基于该靶点发现有效治疗药物对降低结直肠癌死亡率和改善生存预后具有重要意义。
发明内容
鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种化合物或其药学上可接受的盐、异构体、前药、多晶型物或溶剂化物，用于解决现有技术中的问题。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明一方面提供一种化合物或其药学上可接受的盐、异构体、前药、多晶型物或溶剂化物，所述化合物的化学结构式如式I、或式II所示：
Figure BDA0002417992670000021
其中，R1、R2各自独立地选自羟基、或R1、R2与桥接的氧原子一起形成稠合的三元环氧基；
R3选自-COR9，其中，R9选自C1-C4烷基、芳香基；
R4选自C1-10烯基、芳香基；
R5、R6各自独立地选自羟基、或R5、R6与桥接的氧原子一起形成稠合的三元环氧基；
R7选自-COR10，其中，R10选自C1-C4烷基、芳香基；
R8选自羟基、-COR11，其中，R11选自C1-10烯基。
在本发明一些实施方式中，R3选自-COR9，其中，R9选自C1-C4烷基、苯基；
R4选自C1-10二烯基、苯基；
R7选自-COR10，其中，R10选自C1-C4烷基、苯基；
R8选自羟基、-COR11，其中，R11选自C1-10二烯基、C1-10三烯基。
在本发明一些实施方式中，R9选自丁基、异丙基、苯基；
R4选自1,3-壬二烯基、苯基；
R10选自乙基、苯基；
R8选自羟基、2,4-癸二烯酰基、2,4,6-癸三烯酰基。
在本发明一些实施方式中，所述异构体选自对映异构体、非对映异构体、顺反异构体或立体异构体。
在本发明一些实施方式中，所述化合物的化学结构式可以选自：
Figure BDA0002417992670000031
本发明另一方面提供上述的化合物的制备方法，包括：由芫花提取物制备获得。
本发明另一方面提供上述的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、前药、多晶型物或溶剂化物在制备药物中的用途。
在本发明一些实施方式中，所述药物选自PI3K抑制剂、或PI3K/Akt/mTOR通路抑制剂；
和/或，所述药物选自用于治疗肿瘤的药物。
在本发明一些实施方式中，所述肿瘤优选选自结肠癌、直肠癌、或黑色素瘤。
本发明另一方面提供一种药物组合物，包括上述的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、前药、多晶型物或溶剂化物。
附图说明
图1显示为本发明实施例中化合物分离流程示意图。
图2显示为本发明实施例中DGP-1对不同人结肠癌细胞的抑制曲线示意图。
图3显示为本发明实施例中AO/PI染色法观察化合物DGP-1促进SW620细胞凋亡的结果示意图。
图4显示为本发明实施例中流式细胞术检测DGP-1对SW620凋亡的影响结果示意图。
图5显示为本发明实施例中Figure流式细胞术检测DGP-1对SW620凋亡的影响结果示意图，其中，(A)图为细胞周期图；(B)图为统计分析图。
图6显示为本发明实施例中DGP-1对SW620相关凋亡蛋白表达的影响结果示意图。
图7显示为本发明实施例中DGP-1对PI3K/AKT/mTOR通路关键蛋白和下游蛋白表达的影响结果示意图。
具体实施方式
为了使本发明的发明目的、技术方案和有益技术效果更加清晰，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容容易地了解本申请发明的其他优点及功效。
本发明发明人经过大量实践研究，提供了一种可以作为PI3K抑制剂的化合物，所述化合物能够抑制多种结肠癌细胞株的增值，且对细胞PI3K/Akt/mTOR信号传导有明显抑制作用，在此基础上完成了本发明。
本发明第一方面提供一种化合物或其药学上可接受的盐、异构体、前药、多晶型物或溶剂化物，所述化合物的化学结构式如式I、或式II所示：
Figure BDA0002417992670000041
其中，R1、R2各自独立地选自羟基、或R1、R2与桥接的氧原子一起形成稠合的三元环氧基；
R3选自-COR9，其中，R9选自C1-C4烷基、芳香基；
R4选自C1-10烯基、芳香基；
R5、R6各自独立地选自羟基、或R5、R6与桥接的氧原子一起形成稠合的三元环氧基；
R7选自-COR10，其中，R10选自C1-C4烷基、芳香基；
R8选自羟基、-COR11，其中，R11选自C1-10烯基。
除非另外指明，本发明的化合物的同位素标记的形式也包括在本发明的保护范围以内。例如，具有上述所给出的具有本发明结构的化合物中，至少一个氢原子被氘或氚替代，或至少一个碳被13C-或14C-富集的碳替代，或至少一个氮被15N-富集的氮替代。
本发明中，术语“盐”应当被理解为由本发明使用的任何形式的活性化合物，其中所述化合物可以为离子形式或带电荷或被偶联到反离子(阳离子或阴离子)或在溶液中。这个定义还可以包括活性分子与其它分子和离子的季铵盐和络合物，特别是通过离子相互作用的络合物。该定义尤其包括生理上可接受的盐，该术语可以被理解为与“药理学上可接受的盐”等同。
本发明中，术语“药学上可接受的盐”通常指当以适当的方式用于治疗时(特别是在人类和/或哺乳动物中应用或使用时)在生理学上可耐受的任何盐(通常来说，这意味着它是无毒的，特别是作为抗衡离子的结果是无毒的)。这些生理上可接受的盐可以是与阳离子或碱形成的，并且在本发明的上下文中，尤其是在人类和/或哺乳动物中施用时，它们应该被理解为由按照本发明所提供的至少一种化合物，通常为酸(去质子化的)，如阴离子和至少一种生理学上耐受的阳离子(优选无机阳离子)形成的盐。在本发明的上下文中，具体地可以包括与碱金属和碱土金属形成的盐、以及与铵阳离子(NH4 +)形成的盐，具体可以是包括但不限于与(单)或(二)钠、(单)或(二)钾、镁或钙形成的盐。这些生理上可接受的盐也可以是与阴离子或酸形成的，并且在本发明的上下文中，特别是在人类和/或哺乳动物中施用时，它们应该被理解为由按照本发明所提供的至少一种化合物，通常质子化的(例如在氮上)，如阳离子和至少一种生理上可耐受的阴离子形成的盐。在本发明的上下文中，具体地可以包括由生理上可耐受的酸形成的盐，即特定的活性化合物与生理上可耐受的有机或无机酸形成的盐，具体可以是包括但不限于与盐酸、氢溴酸、硫酸、甲磺酸、甲酸、乙酸、草酸、琥珀酸、苹果酸、酒石酸、扁桃酸、富马酸、乳酸或柠檬酸形成的盐。
由上述式I表示的本发明化合物可以包括取决于存在的手性中心的对映体或取决于存在的双键的异构体(例如Z,E)。单一异构体、对映异构体、非对映异构体或顺反异构体和它们的混合物均落入本发明的范围之内。
本发明中术语“前药”以其最广泛的意义使用，并且包括在体内可以转化为本发明的化合物的那些衍生物。制备指定的起作用化合物的前药的方法对于本领域技术人员来说应该是已知的，例如，可以参阅如Krogsgaard-Larsen等人，“药物设计和发现教科书”(Textbook of Drug design and Discovery)泰勒弗朗西斯出版社Taylor&Francis(2002年4月)中所公开的相关内容。
本发明中，术语“溶剂化物”通常指任何形式的根据本发明的活性化合物通过非共价键与另一分子(通常为极性溶剂)相结合，所获得的物质，具体可以是包括但不限于水化物和醇化物，例如甲醇化物。
本发明中，所述“烷基”通常指饱和脂肪族基团，它们可以是直链或支链。例如，C1-4烷基通常指包括1个、2个、3个、4个碳原子的烷基基团，所述烷基基团具体可以是包括但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基等。
本发明中，所述“烯基”通常指不饱和脂肪族基团，它们可以是直链或支链。例如，C1-10烯基通常指包括1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个碳原子的烯基基团，所述烯基基团具体可以是包括但不限于甲烯基、乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基等。这些烯基可以是多元烯基，即含有多个碳碳双键的烃类，例如，可以是壬二烯基、癸二烯基、癸三烯基等。
在本发明一些优选实施例中，R9选自C1-C4烷基、苯基。
在本发明一些更优选实施例中，R9选自丁基、异丙基、苯基。
在本发明一些优选实施例中，R4选自C1-10二烯基、苯基。
在本发明一些更优选实施例中，R4选自1,3-壬二烯基、苯基。
在本发明一些优选实施例中，R10选自C1-C4烷基、苯基。
在本发明一些更优选实施例中，R10选自乙基、苯基。
在本发明一些优选实施例中，R11选自C1-10二烯基、C1-10三烯基。
在本发明一些更优选实施例中，2,4-癸二烯酰基、2,4,6-癸三烯酰基。
在本发明一些进一步优选的实施例中，所述化合物可以是如下所示的化合物：
Figure BDA0002417992670000061
Figure BDA0002417992670000071
本发明第二方面提供本发明第一方面所提供的化合物的制备方法，包括：由芫花(Daphne genkwa Sieb.et Zucc)提取物制备获得。
本发明所提供的制备方法可以包括：提供芫花提取物。所述芫花提取物通常是芫花花蕾的提取物，提取物可以是醇提取物。提供芫花提取物的方法对于本领域技术人员来说应该是已知的，例如，对于醇提取物来说，通常可以通过醇类溶剂浸提获得，浸提所获得的产物通常可以进行浓缩，所述醇类溶剂通常可以是乙醇等。
本发明所提供的制备方法还可以包括：提供芫花提取物的萃取液。在提供芫花提取物的萃取液时，通常使用一些极性较小的溶剂，这些溶剂可以将Daphnane型大环二萜类化合物充分溶解。例如，这些溶剂通常可以是有机溶剂，具体可以是石油醚、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯等溶剂。
本发明所提供的制备方法还可以包括：将芫花提取物的萃取液进行分离纯化，以提供本发明第一方面所提供的化合物。合适的分离纯化方法对于本领域技术人员来说应该是已知的，例如，可以通过柱层析的方法对芫花提取物进行分离纯化，具体可以是例如，MCI柱层析、硅胶柱层析、凝胶柱层析、ODS柱层析以及高效液相色谱制备等方法。
本发明第三方面提供本发明第一方面所提供的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、前药、多晶型物或溶剂化物在制备药物中的用途。如上所述，本发明所提供的化合物可以有效抑制PI3K的活性或者表达量，从而对细胞PI3K/Akt/mTOR信号传导有明显抑制作用，可以作为PI3K抑制剂、或PI3K/Akt/mTOR通路抑制剂，从而可以用于治疗与PI3K、或PI3K/Akt/mTOR通路相关的各种疾病。此外，本发明所提供的化合物对多种肿瘤细胞(例如，结肠癌细胞系)具有显著的细胞毒作用，能够诱导肿瘤细胞G0/G1周期阻滞，诱导肿瘤细胞凋亡，具体可以通过bax/bcl-2、活化的caspase-3和caspase-9的比值和上调的PARP诱导肿瘤细胞凋亡，从而可以作为用于治疗肿瘤的药物，所述肿瘤具体可以是结肠癌、直肠癌、黑色素瘤等。
本发明第四方面提供一种药物组合物，包括本发明第一方面所提供的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、前药、多晶型物或溶剂化物，所述药物组合物还可以包括至少一种药学上可接受的载体。
本发明中，所述组合物可以包括一种或多种药学上可接受的载体，其通常指用于治疗剂给药的载体，它们本身不诱导产生对接受该组合物的个体有害的抗体，且给药后没有过分的毒性。这些载体是本领域技术人员所熟知的，例如，在Remington’sPharmaceutical Sciences(Mack Pub.Co.,N.J.1991)中公开了关于药学上可接受的载体的相关内容。具体来说，所述载体可以是包括但不限于盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、佐剂等中的一种或多种的组合。
本发明所提供的药物组合物中，所述化合物可以是单一有效成分，也可以与其他活性组分进行组合，构成联合制剂。所述其他活性组分可以是其他各种可以抑制PI3K活性、抑制PI3K/Akt/mTOR通路、或者用于治疗肿瘤的药物。组合物中活性组分的含量通常为安全有效量，所述安全有效量对于本领域技术人员来说应该是可以调整的，例如，所述化合物和药物组合物的活性成分的施用量通常依赖于患者的体重、应用的类型、疾病的病情和严重程度，例如，作为活性成分的所述化合物的施用量通常可以为0.1mg～1mg/kg/day、0.1mg～0.2mg/kg/day、0.2mg～0.3mg/kg/day、0.3mg～0.4mg/kg/day、0.4mg～0.5mg/kg/day、0.5mg～0.6mg/kg/day、0.6mg～0.7mg/kg/day、0.7mg～0.8mg/kg/day、0.8mg～0.9mg/kg/day、或0.9mg～1mg/kg/day。
本发明所提供的化合物可以适应于任何形式的给药方式，可以是口服或胃肠外给药，例如，可以是经肺、经鼻、经直肠和/或静脉注射，更具体可以是真皮内、皮下、肌内、关节内、腹膜内、肺部、口腔、舌下含服、经鼻、经皮、阴道、口服或胃肠外给药。本领域技术人员可根据给药方式，选择合适的制剂形式，例如，适合于口服给药的制剂形式可以是包括但不限于丸剂、片剂、咀嚼剂、胶囊剂、颗粒剂、滴剂或糖浆等，再例如，适合于胃肠外给药的制剂形式可以是包括但不限于溶液、悬浮液、可复水的干制剂或喷雾剂等，再例如，适合于直肠给药的通常可以是栓剂。
本发明第五方面提供一种治疗方法包括：向个体施用治疗有效量的本发明第一方面所提供的化合物、或本发明第四方面所提供的药物组合物。
本发明中，“个体”通常包括人类、非人类的灵长类，如哺乳动物、狗、猫、马、羊、猪、牛等，其可因利用所述制剂、试剂盒或联合制剂进行治疗而获益。
本发明中，“治疗有效量”通常指一用量在经过适当的给药期间后，能够达到治疗如上所列出的疾病的效果。
本发明所提供的化合物是一种从天然产物中提取的新化合物，所述化合物可以从芫花提取物中提取获得，可以应用在PI3K/Akt/mTOR通路介导的抑制肿瘤细胞(例如，结肠癌细胞)增殖，且表现出非常好的抗增殖促凋亡活性，从而具有良好的产业化前景。
下面通过实施例对本申请的发明予以进一步说明，但并不因此而限制本申请的范围。
实施例1
Daphnane型大环二萜类化合物的制备：
1)取芫花花蕾15kg，粉碎成粗粉。加入3倍体积量的95％乙醇，浸泡两周，减压抽滤，减压回收乙醇，余液浓缩至相对密度为1.20的稠膏。重复三次以上浸泡提取步骤，最终得芫花乙醇提取物2kg。
2)芫花乙醇提取物用3L水溶解，依次用等量的石油醚、乙酸乙酯各萃取三次。合并石油醚萃取液，减压浓缩，得到石油醚萃取物400g。
3)将石油醚萃取物应用XDA-7大孔树脂柱初步分段，分别用60％、85％、90％、95％、100％甲醇-水梯度洗脱，得各种阶段的洗脱液；再将各段用MCI柱进一步分段，以50％-100％梯度洗脱；然后采用Sephadex LH-20(氯仿：甲醇＝1:1)进行粗分离，再利用200-300目的柱色谱硅胶以石油醚：丙酮、石油醚：乙酸乙酯或氯仿：甲醇等溶剂体系梯度洗脱，再反复采用凝胶柱Sephadex LH-20、ODS柱纯化，最后经半制备高效液相色谱手段在(乙腈：水)或(甲醇：水)条件下进一步纯化，最终得到7个全新的单体化合物，具体分离流程参考图1。
分离产物的鉴定：
通过半制备HPLC分离纯化得到化合物DGP-1、DGP-2、DGP-3、DGP-4、DGP-5、DGP-6和DGP-7，这些化合物的结构及数据如下：
DGP-1：Daphgenkin A(1)，(4S,5R,6S,7S,8S,9R,10R,11R,12R,13S,14R,1'S)-12-苯甲酰基-4,5,6,7,20-五(羟基)-3-羰基-9,13,14-三元内酯-1'-癸基-瑞香烷-1Z,2'E,4'E-三烯烃，其结构及数据如下：
Figure BDA0002417992670000101
DGP-1:[α]25 D+61(c 0.1,MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)194(3.71),233(3.72)nm；ECD(c 1.0×10-4M,MeOH)λmax(Δε)226(-8.51),247(+4.62)nm；IR(KBr)νmax 3424,2955,2921,2852,1721,1693,1268,986,713cm-1；1H and 13C NMR(CDCl3)data,see Tables 1and 2；HRESIMS m/z 667.3122[M+H]+(calcd for C37H47O11,667.3113).
DGP-2：Daphgenkin B(2)，(4S,5R,6S,7S,8S,9R,10S,11R,12R,13S,14R)-12-苯甲酰基-4,5,6,7,9,13,20-七(羟基)-3-羰基-14-癸酰基-瑞香烷-1Z,2'E,4'E-三烯烃，其结构及数据如下：
Figure BDA0002417992670000102
DGP-2:[α]25 D+42(c 0.1,MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)237(3.69),260(3.78)nm；ECD(c 1.2×10-4M,MeOH)λmax(Δε)244(-16.71),271(+4.85)nm；IR(KBr)νmax 3417,2955,2925,22855,1692,1639,1270,1112,1027,712cm-1；1H and 13C NMR(CDCl3)data,see Tables1and 2；HRESIMS m/z 683.3083[M-H]-(calcd for C37H47O12,683.3073).
DGP-3：Daphgenkin C(3)，(4S,5R,6S,7S,8S,9R,10S,11R,12R,13S,14R)-12-乙酰基-4,5,6,7,9,13,20-七(羟基)-3-羰基-14-癸酰基-瑞香烷-1Z,2'E,4'E-三烯烃，其结构及数据如下：
Figure BDA0002417992670000111
DGP-3:white,amorphous powder；[α]25 D+40(c 0.1,MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)201(3.72),260(3.90)nm；ECD(c 1.2×10-4M,MeOH)λmax(Δε)197(+11.53),243(-11.06),267(+7.72)nm；IR(KBr)νmax 3418,2955,2926,2885,1697,1640,1376,1240,1030,926cm-1；1H and 13C NMR(CDCl3)data,see Tables 1and 2；HRESIMS m/z 621.2901[M-H]-(calcdfor C32H45O12,621.2917).
DGP-4：Daphgenkin D(4)，(4S,5S,6R,7S,8R,9R,10S,11R,12R,13R,14R)-12-乙酰基-4,5,9,13,14,20-六(羟基)-3-羰基-6,7-三元环-瑞香烷-1Z-烯烃，其结构及数据如下：
Figure BDA0002417992670000112
DGP-4:[α]25 D+48(c 0.1,MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)202(3.30)nm；ECD(c 0.8×10-4M,MeOH)λmax(Δε)196(+34.36),247(-8.81),267(+7.72)nm；IR(KBr)νmax 3352,2956,2919,2851,1735,1466,1375,1244,1026,736cm-1；1H and 13C NMR(CD3OD)data,see Tables1and 2；HRESIMS m/z 489.1544[M+Cl]-(calcd for C22H30O10Cl,489.1533).
DGP-5：Daphgenkin E(5)，(4S,5S,6R,7S,8R,9R,10S,11R,12R,13R,14R)-12-乙酰基-4,5,9,13,20-五(羟基)-3-羰基-14-癸酰基-瑞香烷-1Z,2'E,4'E-三烯烃，其结构及数据如下：
Figure BDA0002417992670000121
DGP-5:[α]25 D+36(c 0.2,MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)203(3.66),245(3.28),305(3.13)nm；ECD(c 1.0×10-4M,MeOH)λmax(Δε)196(+15.99),242(-10.05)nm；IR(KBr)νmax3355,2920,1714,1463,1236,1025cm-1；1H and 13C NMR(CDCl3)data,see Tables 1and 2；HRESIMS m/z 637.2430[M+Cl]-(calcd for C32H42O11Cl,637.2421).
DGP-6：Daphgenkin F(6)，(4S,5S,6R,7S,8S,9R,10R,11R,12R,13S,14R,1'S)-12-正丁酰基-4,5,20-三(羟基)-3-羰基-6,7-三元环-9,13,14-三元内酯-1'-苯甲酰基-瑞香烷-1Z-烯烃，其结构及数据如下：
Figure BDA0002417992670000122
DGP-6:[α]25 D+52(c 0.1,MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)203(3.41)nm；ECD(c 1.1×10-4M,MeOH)λmax(Δε)197(+30.70),244(-13.77)nm；IR(KBr)νmax 3384,2924,1734,1709,1374,1246,1173,1081,1003,736cm-1；1H and 13C NMR(CDCl3)data,see Tables 1and 2；HRESIMS m/z 567.2234[M-H]-(calcd for C31H35O10,567.2236).
DGP-7：Daphgenkin G(7)，(4S,5S,6R,7S,8S,9R,10R,11R,12R,13S,14R,1'S)-12-异丁酰基-4,5,20-三(羟基)-3-羰基-6,7-三元环-9,13,14-三元内酯-1'-苯甲酰基-瑞香烷-1Z-烯烃，其结构及数据如下：
Figure BDA0002417992670000131
DGP-7：[α]25 D+42(c 0.1,MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)203(3.86)nm；ECD(c 1.2×10-4M,MeOH)λmax(Δε)199(+37.74),246(-12.58)nm；1H and 13C NMR(CDCl3)data,seeTables 1and 2；HRESIMS m/z 567.2205[M-H]-(calcd for C31H35O10,567.2236).
表1.DGP-1至DGP-7的1H NMR(600MHz,δin ppm,J in Hz)数据
Figure BDA0002417992670000132
Figure BDA0002417992670000141
a溶剂为CDCl3.b溶剂为CD3OD.
表2.DGP-1至DGP-7的13C NMR(150MHz,δin ppm)数据
Figure BDA0002417992670000142
Figure BDA0002417992670000151
a溶剂为CDCl3.b溶剂为CD3OD.
实施例2
细胞培养：
SW620细胞系使用添加10％胎牛血清和1％双抗的L-15培养液(Gibco BRL，USA)，RKO细胞系使用添加10％胎牛血清和1％双抗的DMEM培养液(Gibco BRL，USA)，LoVo细胞系使用添加10％胎牛血清和1％双抗的F12k培养液(Gibco BRL，USA)，均培养于含5％CO2的饱和湿度为37℃恒温培养箱中。
MTT实验：
采用文献报道的方法(Carmichael J,DeGraff WG,Gazdar AF,Minna JD,Mitchell JB.Evaluation of a tetrazolium-based semiautomated colorimetricassay:assessment of chemosensitivity testing.Cancer Res.1987,47(4):936-942.)，分别将SW620、RKO、LoVo细胞以5×103个/mL密度接种于96孔培养板中，加入各种浓度的测试样品，在37℃，5％CO2，90％RH的条件下培养48h；然后加入20μL的5mg/mL MTT溶液，再孵育4h，平板离心，弃去上清，加150ul DMSO溶解MTT结晶,平板振荡数分钟后，以酶联免疫检测仪在570nm波长测吸光度OD值。结果如表3、图2所示，实验重复三次，结果采用GraphPadPrism 8软件计算IC50，采用SPSS 21软件以单因素方差分析进行统计。
表3.DGP-1，DGP-12，DGP-13和DGP-19的细胞毒活性(IC50,μM)
Figure BDA0002417992670000152
aIC50值为平均值±三个独立实验的标准误(SD)。
其中，化合物1为DGP-1，化合物12(yuanhuacine,芫花酯甲)、化合物13(yuanhualine，芫花内酯素)、化合物19(yuanhuacine B，芫花酯B)，5-FU是5氟尿嘧啶(阳性对照)，由表3和图2可知，DGP-1对SW620、RKO、LoVo细胞均有良好的抑制作用。
实施例3
采用AO/PI染色法观察化合物DGP-1促进SW620细胞凋亡的结果：
SW620细胞以5×105个细胞每孔的密度接种于6孔板，采用含10％胎牛血清和1％双抗的L-15培养液培养24h，弃去培养液，用PBS洗涤两次，加入含0、0.74、1.48、2.96、5.92和11.84μM DGP-1的无血清培养液在37℃，孵育培养24h。孵育结束后,弃去培养液，用PBS洗2次以充分洗涤除去培养液，加入200μM的AO和PI染料各100μL进行染色，避光室温孵育5min，吸弃染料，用PBS洗涤两次，加入200μL的PBS，在EVOS FL荧光显微镜下以200倍镜观察拍照。结果如图3所示，绿色梭形为正常细胞，红色为凋亡细胞，可见随药物浓度增加，细胞膜皱缩，细胞核固缩，最终在高浓度药物作用下，细胞大部分凋亡。
实施例4
采用流式细胞术检测化合物DGP-1促进SW620细胞凋亡的结果：
SW620细胞以5×105个细胞每孔的密度接种于6孔板，采用含10％胎牛血清和1％双抗的L-15培养液培养24h，弃去培养液，用PBS洗涤两次，加入含0、0.74、1.48、2.96、5.92和11.84μM DGP-1的无血清培养液在37℃，孵育培养24h。孵育结束后,弃去培养液，用PBS洗2次以充分洗涤除去培养液，按照试剂盒说明书进行操作，结果如图4。实验重复三次，结果采用Flowjo 10.0软件处理图像，采用SPSS 21软件以单因素方差分析进行统计，凋亡率为平均值±三个独立实验的标准误(SD)。***p<0.001表明加药组与空白对照组比均具有显著性差异，DGP-1对细胞凋亡早期和凋亡晚期均具有促进作用，对凋亡晚期的作用更加明显。
实施例5
采用流式细胞术检测化合物DGP-1促进SW620细胞周期的结果：
SW620细胞以5×105个细胞每孔的密度接种于6孔板，采用含10％胎牛血清和1％双抗的L-15培养液培养24h，弃去培养液，用PBS洗涤两次，加入含0、0.74、1.48、2.96、5.92和11.84μM DGP-1的无血清培养液在37℃，孵育培养24h。孵育结束后,弃去培养液，用PBS洗2次以充分洗涤除去培养液，按照试剂盒说明书进行操作，结果如图5。实验重复三次，结果采用Modfit 4.0软件处理图像，采用SPSS 21软件以单因素方差分析进行统计，周期百分比为平均值±三个独立实验的标准误(SD)。***p<0.001表明加药组与空白对照组比均具有显著性差异，药物可能通过阻滞G0/G1期检查点来抑制细胞增殖。
实施例6
采用WB检测化合物DGP-1对PI3K/Akt/mTOR通路蛋白表达的影响：
SW620细胞以5×105个细胞每孔的密度接种于6孔板，采用含10％胎牛血清和1％双抗的L-15培养液培养24h，弃去培养液，用PBS洗涤两次，加入含0、0.74、1.48、2.96、5.92和11.84μM DGP-1的无血清培养液在37℃，孵育培养24h。孵育结束后,弃去培养液，用PBS洗2次以充分洗涤除去培养液，每孔加入50μL含1％蛋白酶抑制剂和2％磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液裂解细胞，4℃12000rpm离心15min，吸取上清，用BCA蛋白定量法测定蛋白浓度。采用12％的SDS-PAGE分离胶电泳，0.22μM PVDF膜300mA恒流转膜，5％脱脂奶粉封闭1h后，加入1：1000的β-actin,Bax,Bcl-2,cleaved caspase-3,cleaved caspase-9,PARP,cleavedPARP,PI3K,Akt,p-Akt(Ser 473),mTOR,and p-mTOR(Ser 2448)等抗体4℃孵育过夜.TBST洗涤三遍，采用对应二抗室温孵育2h，ECL显影液显影。结果如图6所示，随着加药浓度增加，Bax/Bcl-2,cleaved caspase-3,cleaved caspase-9和cleaved PARP表达增加，DGP-1能促进细胞凋亡。如图7所示，p-PI3K，p-Akt和p-mTOR表达随药物浓度增加而降低，表明DGP-1可能是通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路关键蛋白磷酸化达到抑制细胞增殖的目的。实验重复三次，结果采用Image J软件处理图像，采用SPSS 21软件以单因素方差分析进行统计，蛋白表达百分比为平均值±三个独立实验的标准误(SD)。*p<0.05,**p<0.01和***p<0.001表明加药组与空白对照组比均具有显著性差异。
综上所述，本发明有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims (10)

1.一种化合物或其药学上可接受的盐、异构体、前药、多晶型物或溶剂化物，所述化合物的化学结构式如式I、或式II所示：
Figure FDA0002417992660000011
其中，R1、R2各自独立地选自羟基、或R1、R2与桥接的氧原子一起形成稠合的三元环氧基；
R3选自-COR9，其中，R9选自C1-C4烷基、芳香基；
R4选自C1-10烯基、芳香基；
R5、R6各自独立地选自羟基、或R5、R6与桥接的氧原子一起形成稠合的三元环氧基；
R7选自-COR10，其中，R10选自C1-C4烷基、芳香基；
R8选自羟基、-COR11，其中，R11选自C1-10烯基。
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R3选自-COR9，其中，R9选自C1-C4烷基、苯基；
R4选自C1-10二烯基、苯基；
R7选自-COR10，其中，R10选自C1-C4烷基、苯基；
R8选自羟基、-COR11，其中，R11选自C1-10二烯基、C1-10三烯基。
3.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R9选自丁基、异丙基、苯基；
R4选自1,3-壬二烯基、苯基；
R10选自乙基、苯基；
R8选自羟基、2,4-癸二烯酰基、2,4,6-癸三烯酰基。
4.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述异构体选自对映异构体、非对映异构体、顺反异构体或立体异构体。
5.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物的化学结构式可以选自：
Figure FDA0002417992660000021
6.如权利要求1～5任一权利要求所述的化合物的制备方法，包括：由芫花提取物制备获得。
7.如权利要求1～5任一权利要求所述的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、前药、多晶型物或溶剂化物在制备药物中的用途。
8.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述药物选自PI3K抑制剂、或PI3K/Akt/mTOR通路抑制剂；
和/或，所述药物选自用于治疗肿瘤的药物。
9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述肿瘤优选选自结肠癌、直肠癌、或黑色素瘤。
10.一种药物组合物，包括如权利要求1～5任一权利要求所述的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、前药、多晶型物或溶剂化物。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112538088A (zh) * 2020-12-22 2021-03-23 中山大学 一类抗前列腺癌的瑞香烷型二萜及其制备方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6080784A (en) * 1986-06-11 2000-06-27 Procyon Pharmaceuticals, Inc. Protein kinase C modulators N
WO2009096655A1 (en) * 2008-01-31 2009-08-06 Ewha University-Industry Collaboration Foundation Composition comprising the compound isolated from the flower extract of daphne genkwa for preventing and treating cancer disease and the use thereof
CN101704826A (zh) * 2009-09-15 2010-05-12 沈阳药科大学 一组中药芫花二萜原酸酯类化合物

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6080784A (en) * 1986-06-11 2000-06-27 Procyon Pharmaceuticals, Inc. Protein kinase C modulators N
WO2009096655A1 (en) * 2008-01-31 2009-08-06 Ewha University-Industry Collaboration Foundation Composition comprising the compound isolated from the flower extract of daphne genkwa for preventing and treating cancer disease and the use thereof
CN101704826A (zh) * 2009-09-15 2010-05-12 沈阳药科大学 一组中药芫花二萜原酸酯类化合物

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
李菲菲: "两种瑞香属植物芫花和黄瑞香的活性成分研究", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库（博士） 医药卫生科技辑》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112538088A (zh) * 2020-12-22 2021-03-23 中山大学 一类抗前列腺癌的瑞香烷型二萜及其制备方法
CN112538088B (zh) * 2020-12-22 2022-02-22 中山大学 一类抗前列腺癌的瑞香烷型二萜及其制备方法
WO2022134657A1 (zh) * 2020-12-22 2022-06-30 中山大学 一类抗前列腺癌的瑞香烷型二萜及其制备方法

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