CN111406759B - 一种蜈蚣藻提取物及其在制备海洋污损生物防除剂中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种蜈蚣藻提取物及其在制备海洋污损生物防除剂中的应用。本发明的蜈蚣藻提取物以低剂量涂覆于固体表面时,即有明显的抑制藤壶和贻贝幼虫附着的作用,因此能够用于制备海洋污损生物防除剂。并且蜈蚣藻提取物是从蜈蚣藻中提取获得,为天然存在的有机化合物,不会污染水体环境和通过食物链传递导致其在生物体中的富集,对环境友好,安全性高,在有效抑制海洋生物附着的同时,不含铜和锡等重金属元素,从环境保护角度而言具有良好的社会效益,并且其来源广泛,分离制备途径简便,适合于大规模生产,推广潜力大,在海洋污损生物防除中具有良好的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及天然产物技术领域,具体涉及一种蜈蚣藻提取物及其在制备海洋污损生物防除剂中的应用。
背景技术
海洋污损生物会对各类涉海活动产生极为不利的影响,不仅造成船舶航行阻力增大,航速下降,燃料消耗加大,还会产生诸如堵塞海水管道系统、改变金属腐蚀过程、增大动力载荷效应、危害水产养殖设施及对象、降低产量和影响品质。因此,有效防止海洋污损生物的危害是一个极为重要的工作,在生产实践中具有重要的意义。
海洋污损生物中危害大且难清除的成员主要是具石灰质外壳营固着生活的无柄蔓足类(藤壶)和双壳类软体动物(贻贝和牡蛎)。在热带、亚热带沿岸海域,网纹藤壶除了是底栖生物群落中无柄蔓足类的典型代表外,同时在污损生物群落中还占据绝对优势;至于双壳类软体动物,翡翠股贻贝则是东海和南海污损生物群落中的重要组成。
典型海洋污损生物通常具备两个生活阶段,即从幼虫脱出卵膜发育至探索物体表面准备附着的浮游生活阶段和自幼虫选好定居位置、附着、变态成为幼体后的固着或附着生活阶段。基于污损生物危害始于其幼虫固着或附着之后,如能有效地抑制幼虫的附着,即可达到防除目的。因此,本发明的验证试验选择网纹藤壶和翡翠股贻贝作为实验对象,以期所获得的研究成果更具有科学合理性和广泛的代表性。
传统海洋污损生物防除技术存在成本高、有效期短、目标针对性差、可能会对环境产生危害等问题,开发新型无公害防污技术具有重要的理论和现实意义,海洋生物天然防污作用机制可为人们开发新型环保防污技术提供理论支持和借鉴。借助分布广泛、资源量大的海洋生物开发相关防污技术,不仅是一种新的尝试,而且原料来源充足,技术路线可行,具备在生产实践中应用的基础。
蜈蚣藻(Grateloupia filicina)隶属红藻门(Rhodophycophyta)隐丝藻科(Cryptonemiaceae)的,藻体呈紫红色,生长栖息在外海性海域风浪大的中、低潮带的岩石上或石沼中,季节变化明显,是世界性暖温带性藻类,在我国沿岸海域从南至北皆有分布,为一种具有开发前途的重要经济海藻,然而,对于其是否含有抗海洋污损生物幼虫附着的有效成分以及能否将其应用于海洋污损生物防除领域等方面的内容,目前未见任何报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种蜈蚣藻提取物及其在制备海洋污损生物防除剂中的应用。
本发明的蜈蚣藻提取物是从蜈蚣藻中提取获得的。具体是指蜈蚣藻以无水乙醇萃取后,经层析分离洗脱后得到的一种分离组分,其分离提取步骤包括:
(1)将蜈蚣藻切段用无水乙醇提取,乙醇提取液经减压蒸馏除去乙醇,得到粗提物浸膏;
(3)通过薄层色谱点板对比(展开剂CH2Cl2/MeOH=10/3,体积比,RF值0.45),合并组分15-18(乙酸乙酯/石油醚按体积比40:60、50:50、60:40、70:30洗脱得到的组分),再用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20色谱柱以MeOH/CH2Cl2按1:1体积比进行洗脱,除去色素,收集洗脱液,经浓缩干燥,即得到蜈蚣藻提取物。
本发明的蜈蚣藻提取物在涂覆量为10μg/cm2时,藤壶幼虫24时后的附着率为38.0%,显著低于对照组的61.7%,表明蜈蚣藻提取物对藤壶幼虫产生明显的抑制作用。在蜈蚣藻提取物涂覆量为10μg/cm2时,贻贝幼虫24小时后的附着率仅为7.1%,远远低于对照组的38.6%,表明蜈蚣藻提取物能有效地抑制贻贝幼虫的附着。由此可见蜈蚣藻提取物对蔓足类和双壳类动物的幼虫附着有很好的抑制作用。
因此,本发明提供了一种蜈蚣藻提取物在制备海洋污损生物防除剂中的应用。
所述的海洋污损生物为藤壶幼虫或贻贝幼虫。
所述的蜈蚣藻提取物用于防除海洋污损生物的涂覆量为10μg/cm2。
一种海洋污损生物防除剂,是以蜈蚣藻提取物为有效成分。
所述的海洋污损生物防除剂的使用方法是将防除剂涂覆于固体表面,蜈蚣藻提取物的涂覆量为10μg/cm2。
与现有技术相比,本发明具有如下有益效果:
本发明的蜈蚣藻提取物在低剂量涂覆于固体表面时,即有明显的抑制海洋生物附着的作用,因此能够用于制备海洋污损生物防除剂。并且这种蜈蚣藻提取物为天然存在的有机化合物,不会污染水体环境和通过食物链传递导致其在生物体中的富集,对环境友好,安全性高,在有效抑制海洋生物附着的同时,不含铜和锡等重金属元素,从环境保护角度而言具有良好的社会效益,并且蜈蚣藻来源十分广泛,这种蜈蚣藻提取物分离制备途径简便,适合于大规模生产,推广潜力大,在海洋污损生物防除中具有良好的应用前景。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明,而不是对本发明的限制。
实施例1
蜈蚣藻提取物的制备:
(1)将蜈蚣藻切成小段放入广口瓶中,用2倍体积的无水乙醇提取3次,合并所得的乙醇提取液,减压蒸馏除去乙醇,得到粗提物浸膏;
(3)通过薄层色谱点板对比(展开剂CH2Cl2/MeOH=10/3,体积比,RF值0.45),合并组分15-18(乙酸乙酯/石油醚按体积比40:60、50:50、60:40、70:30洗脱得到的组分),再用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20色谱柱以MeOH/CH2Cl2按1:1体积比进行洗脱,除去部分色素,收集洗脱液,经浓缩干燥,即得到蜈蚣藻提取物。
实施例2
实验组:将蜈蚣藻提取物(实施例1制得)用甲醇溶剂溶解,配制浓度为282.6μg/mL的溶液。在直径为6cm的培养皿中加入1mL该溶液,并使其均匀覆盖培养皿底部。待溶剂完全挥发后,涂覆于培养皿底部的蜈蚣藻提取物的剂量为10μg/cm2。加入13mL海水。
对照组:加1mL甲醇溶剂,使其均匀分布于培养皿底部,待挥发完全再加入13mL海水。
空白组:加入13mL海水。
实验组、空白组和对照组各设4个平行样。于各样品中分别加入30只网纹藤壶金星幼虫。置于温度为30℃左右的恒温培养箱内于黑暗环境中培养。培养24小时后对各组幼虫的附着和死亡状况进行统计分析。
表1列出了实验组、对照组和空白组金星幼虫的附着和死亡率。可见,在恒温培养箱中培养24小时后,空白组的幼虫附着率为68.7%,对照组61.7%,空白组和对照组金星幼虫的附着率无显著差异(P>0.05),表明甲醇溶剂挥发后不会遗留影响金星幼虫活性的有害物质。至于培养皿底部覆盖蜈蚣藻提取物的实验组,其金星幼虫的附着率为38.0%,小于对照组,且差异显著(P<0.05),表明蜈蚣藻提取物在10μg/cm2的剂量下能有效地抑制网纹藤壶金星幼虫的附着。另外,空白组、对照组和实验组的幼虫死亡率均为0,表明这种提取物在该剂量不会对幼虫产生毒杀作用。
表1:网纹藤壶金星幼虫24小时后的附着状况
组别 | 测试剂量 | 附着率(%) | 死亡率(%) |
空白组 | - | 68.7 | 0 |
对照组 | - | 61.7 | 0 |
实验组 | 10μg/cm<sup>2</sup> | 38.0 | 0 |
实施例3
实验组:将蜈蚣藻提取物(实施例1制得)用甲醇溶剂溶解,配制浓度为282.6μg/mL的溶液。在直径为6cm的培养皿中加入1mL该溶液并使其均匀覆盖培养皿底部。待溶剂完全挥发后,涂覆于培养皿底部的蜈蚣藻提取物剂量为10μg/cm2。加入13mL海水。
对照组:加1mL甲醇溶剂,使溶剂均匀分布于培养皿底部,待溶剂挥发完全,再加入13mL海水。
空白组:加入13mL海水。
实验组、空白组和对照组均设4个平行样,在各样品中加入约30个翡翠股贻贝面盘幼虫。在温度约为26℃的培养箱中于黑暗环境下培养。培养24小时后对各组幼虫的附着和死亡状况进行统计分析。
表2列出了实验组、对照组和空白组翡翠贻贝幼虫的附着和死亡率。可见,在恒温培养箱中培养24小时后,空白组的幼虫附着率约为38.2%,对照组约38.6%,空白组和对照组面盘幼虫的附着率无显著差异(P>0.05),表明甲醇溶剂挥发后不会遗留影响面盘幼虫活性的有害物质。而经蜈蚣藻提取物处理的实验组,其幼虫的附着率仅为7.1%,远远低于对照组,差异极其显著(P<0.01),表明这种化合物能有效地抑制翡翠贻贝幼虫的附着。另外,空白组、对照组和实验组的幼虫死亡率均为0,表明这种提取物在该剂量不会对幼虫产生毒杀作用。
表2:翡翠股贻贝面盘幼虫24小时后的附着状况
组别 | 测试剂量 | 附着率(%) | 死亡率(%) |
空白组 | - | 38.2 | 0 |
对照组 | - | 38.6 | 0 |
实验组 | 10μg/cm<sup>2</sup> | 7.1 | 0 |
以上仅是本发明的优选实施方式,应当指出的是,上述优选实施方式不应视为对本发明的限制,本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明的精神和范围内,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (3)
1.蜈蚣藻提取物在制备海洋污损生物防除剂中的应用,所述的蜈蚣藻提取物的制备步骤为:
(1)将蜈蚣藻切段,用无水乙醇提取,乙醇提取液经减压蒸馏除去乙醇,得到粗提物浸膏;
(2)粗提物浸膏用色谱柱分离,采用洗脱剂乙酸乙酯/石油醚按0~10:10~0体积比进行梯度洗脱,通过薄层色谱点板对比,展开剂CH2Cl2/MeOH=10/3,体积比,RF值0.45,合并乙酸乙酯/石油醚按体积比40:60、50:50、60:40、70:30洗脱得到的组分;
(3)再用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20色谱柱以MeOH/CH2Cl2按1:1体积比进行洗脱,除去色素,收集洗脱液,经浓缩干燥,即得到蜈蚣藻提取物。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述的海洋污损生物为藤壶幼虫或贻贝幼虫。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述的蜈蚣藻提取物用于防除海洋污损生物的涂覆量为10μg/cm2。
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