CN111388474B - 密菌酯在制备用于预防和/或治疗辐射损伤的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及密菌酯在制备用于预防和/或治疗辐射损伤的药物中的应用。密菌酯在制备预防或治疗急性放射病、核与辐射损伤，以及肿瘤放射治疗引起的辐射损伤的药物的医药用途，或作为用于研究抗辐射损伤的工具药的应用。

Description

密菌酯在制备用于预防和/或治疗辐射损伤的药物中的应用

本申请是申请号为201810178801.5、申请日为2018年03月05日、发明创造名称为“β-甲氧基丙烯酸酯类化合物在制备用于预防和/或治疗辐射损伤的药物中的应用”的分案申请。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及密菌酯在制备用于预防和/或治疗辐射损伤的药物中的应用。

背景技术

核能与核技术在工农业生产、医疗卫生、科学研究及国防事业等各个领域的应用日益广泛，它们在给人类带来巨大利益的同时，也存在潜在威胁。核战争、涉核恐怖袭击、地震或海啸等引起核电站发生核泄漏，以及民用放射源、医疗照射等工作中由于管理不善或操作失误等都可导致人员受到射线照射。当机体在短时间内受到大剂量(>1Gy)电离辐射照射时会发生急性放射病(Acute Radiation Sickness,ARS)，或统称为急性放射损伤综合症(Acute Radiation Syndrome disease,ARS)。急性放射病是一种全身性疾病，根据受损器官的不同，分为骨髓型、肠型和脑型三型；根据受照时间长短不同放射病可分为急性、亚急性和慢性。急性放射病死亡率高，治愈困难，目前受照射剂量大于8Gy的患者尚无救活的先例。此外，肿瘤患者接受放射治疗过程中，射线杀灭肿瘤细胞的同时对正常细胞也造成损伤，常常因此而限制了放射治疗的实际应用。因此，为了对抗辐射损伤，给核能与核技术的高效应用提供安全保障，需要大力发展抗辐射损伤医药技术。

β-甲氧基丙烯酸酯是一类新型杀菌剂，主要用于农业(如谷物、水果和蔬菜等)杀真菌。它通过与细胞色素b的Q₀位点结合，阻断细胞色素b和细胞色素c1间的电子转移及质子跨膜转移，从而抑制线粒体呼吸作用，阻断ATP合成，结果导致能量循环中止，进而起到广谱杀菌作用。该类化合物最早为天然产物，如嗜球果伞素类最简单的是嗜球果伞素A(Strobilurin)。之后，相继出现化学合成品，如密菌酯(Azoxystrobin)和啶氧菌酯(Picoxystrobin),及嘧螨酯(Fluacrypyrim,FAPM)等。

发明内容

本发明的目的是提供β-甲氧基丙烯酸酯类化合物的药物新用途。

本发明所提供的β-甲氧基丙烯酸酯类化合物的药物新用途是其在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下(a1)和/或(a2)和/或(a3)和/或(a4)和/或(a5)和/或(a6)和/或(a7)：

(a1)预防或/和治疗各种原因引起的急性放射病，例如轻度骨髓型急性放射病、中度骨髓型急性放射病、重度骨髓型急性放射病、极重度骨髓型急性放射病和肠型放射病；

(a2)预防或/和治疗各种射线照射引起的骨髓抑制；

(a3)预防或/和治疗肿瘤放射治疗所引起的骨髓抑制；

(a4)预防或/和治疗与化学治疗或外科手术结合进行的放射治疗所引起的骨髓抑制；

(a5)预防或/和治疗核与辐射损伤；

(a6)预防或/和治疗肿瘤放射治疗引起的正常组织细胞的辐射损伤；

(a7)作为研究抗辐射损伤的工具药。

上述应用中，所述β-甲氧基丙烯酸酯类化合物为式I所示化合物或其异构体。

其中：

R¹代表苯氧基、取代的苯氧基、杂芳氧基、取代的杂芳氧基；

其中杂芳氧基中的杂芳环可为至少含有一个选自N、O和S的杂原子的5-6元单环或稠环芳香基，如嘧啶基，每个带有取代基的基团的取代基可选自卤素、羟基、氰基、硝基、芳香氧基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷硫基、一、二或三卤代的C_1-6烷基、氨基、C_1-6烷胺基、C_1-10烃酰氧基、C_1-10烃酰胺基、C_6-10芳酰氧基或C_6-10芳酰胺基；

R²为C₁-C₆烃基；R³为C₁-C₆烷基；

n为0或1。

具体地，所述式I所示化合物可为Fluacrypyrim(FAPM)或Azoxystrobin(AZO)。

式I化合物可以存在顺/反异构体，本发明涉及顺式形式和反式形式以及这些形式的混合物。如果需要，单一立体异构体的制备可根据常规方法拆分混合物，或通过例如立体选择合成制备。如果存在机动的氢原子，本发明也涉及式I化合物的互变异构形式。

本发明因此还涉及含有作为活性成份的有效剂量的至少一种式I化合物，或其药用盐和/或其立体异构体以及常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。

通常本发明药物组合物含有0.1－90重量％的式I化合物和/或其生理上可接受的盐。

药物组合物可根据本领域已知的方法制备。用于此目的时，如果需要，可将式I化合物和/或立体异构体与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人用的适当的施用形式或剂量形式。

本发明的式I化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。给药剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、脂质体、透皮剂、口含片、栓剂、冻干粉针剂等。可以是普通制剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。

为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高岭土、滑石粉等；粘合剂如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。

为了将给药单元制成栓剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。为了将给药单元制成胶囊，将有效成分式I化合物或其立体异构体与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明明胶囊或软胶囊中。也可将有效成分式I化合物或其立体异构体制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。

为了将给药单元制成注射用制剂，如溶液剂、乳剂、冻干粉针剂和混悬剂，可以使用本领域常用的所有稀释剂，例如，水、乙醇、聚乙二醇、1，3－丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。

本发明式I化合物或其异构体的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重及个体反应，所用的具体化合物，给药途径及给药次数等。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药。

附图说明

图1为β-甲氧基丙烯酸酯类化合物体外孵育对6.5Gyγ射线照射小鼠骨髓细胞凋亡的影响。**较Con组,P<0.01,##较IR组，P<0.01.

图2为FAPM体外孵育对6.5Gyγ射线照射骨髓细胞中造血干祖细胞凋亡的影响。**较Con组，P<0.01,^##较IR组，P<0.01，^#P<0.05.

图3为FAPM预防给药对6.5Gyγ射线照射小鼠骨髓造血干祖细胞凋亡的影响。

图4为FAPM预防给药对γ射线照射小鼠存活率的影响。

图5为FAPM预防给药对6.5Gyγ射线照射小鼠外周血象的影响。较IR组,*P<0.05,**P<0.01。

图6为FAPM预防给药对急性放射病小鼠造血干祖细胞数量的影响。**P<0.01,***P<0.001。

图7为FAPM预防给药对6.5Gy照射小鼠骨髓细胞集落形成能力的影响。较IR组,*P<0.05,**P<0.01。

图8为FAPM预防给药对受照射小鼠造血干细胞重建造血能力的影响。*P<0.05,***P<0.001。

图9为FAPM照射后给药对急性放射病小鼠的治疗作用。A，8.5Gyγ射线照射小鼠存活曲线；BCD，6.5Gyγ射线照射小鼠血象图，其中B血小板，C红细胞，D血红蛋白。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的试剂、生物材料等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

本说明书揭露预防和/或治疗电离辐射损伤的方法。

有此需要的群体包括可能即将受到辐射暴露，例如核武器袭击、核脏弹恐怖袭击，或即将进入放射污染区域，于(可能)辐射暴露前数天内或至少数小时接受有效量的β-甲氧基丙烯酸酯类化合物、其异构体，以及含有他们的药物组合物进行预防。

有此需要的个体包括已经受到可能会引起造血损伤的照射剂量的伤员或事故病人，于受照后即刻、数小时或至少1天内接受有效量的β-甲氧基丙烯酸酯类化合物、其异构体，以及含有他们的药物组合物进行治疗。

本说明书还揭露治疗因放射疗法所引起的骨髓抑制的方法。

放射疗法(radiation therapy)及放射治疗(radiotherapy)于本文可交换使用，且包括外照射(external irradiation)和内照射(internal irradiation)，亦指称为近接治疗(brachytherapy)、腔内近接治疗(intracavitary brachytherapy)，或组织间近接治疗(interstitial brachytherapy)。可虑及的放射源包括纯伽马(pure Gamma)、纯贝塔(pure Beta)，及混合放射。

在本文中使用，术语“化学治疗”及“化学治疗剂”可交换使用，以及意指显现抗癌效果且用在恶性肿瘤的治疗中的化学治疗剂或药。

在本文中使用，放射所引起的骨髓抑制包括全身照射或胸肺部、骨盆、躯干部等局部照射所引起的放射损伤。照射常造成急性放射病或骨髓造血抑制。症状可包括呕吐、造血细胞减少、贫血、血小板减少症、白细胞减少症、造血细胞增殖障碍、血小板减少性出血等。

本发明又另外方面关于以β-甲氧基丙烯酸酯类化合物、其异构体，以及含有他们的药物组合物预防和/或治疗有此需要的个体(例如，哺乳类、人类、马、狗、猫)的方法。确认个体是否有此等治疗的需求，可依个体本身或健康照射防护专业人员的评判，且可为主观的(例如，看法)或客观的(例如，藉由试验或诊断方法而可量测)。

有此需要的个体包括将要接受放射治疗的个体，不论是单独接受放射治疗或组合其它可导致骨髓抑制的化学药物治疗。此需要可能显现于个体接受放射治疗、化学治疗、或(数种)治疗的结合之前；个体正在接受放射治疗、化学治疗或(数种)治疗的结合；个体正在接受放射治疗、化学治疗、或(数种)治疗的结合之后。例如，个体可能正要、可能正在，或已经接受，放射治疗组合化学治疗。

在本文中使用，治疗有效量意指，当给药人类或非人类的个体时，有效提供治疗益处(比如，对症状的改良)的量，例如，有效改善贫血症状的量。

根据某些具体实例，β-甲氧基丙烯酸酯类化合物、其异构体，以及含有他们的药物组合物可用于各种治疗方案，此等方案可根据个体及治疗类型而变化。

β-甲氧基丙烯酸酯类化合物、其异构体，以及含有他们的药物组合物在治疗之前、期间，及/或之后给药。例如，可在个体的放射治疗首剂之前至少一天内给药、在放射治疗期间给药、在放射治疗停止后至少一天内给药。

较佳地在骨髓抑制治疗之前、治疗期间、以及治疗之后给药β-甲氧基丙烯酸酯类化合物、其异构体，以及含有他们的药物组合物。例如，从放射治疗、化学治疗的首剂及结合治疗之前的至少一天到放射治疗停止后、化学治疗停止后的至少一天的期间内给药。

根据特定具体实例，β-甲氧基丙烯酸酯类化合物可结合其它化合物一起给药，例如，化学治疗剂、抗发炎剂、解热剂、放射增敏剂、放射防护剂、泌尿道用剂、抗吐剂，及/或止泻剂。例如，顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、多西紫杉醇(docetaxel)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、氟尿嘧啶(flurouracil)、卡培他滨(capecitabine)、吉西他滨(gelncitabine)、伊立替康(irinotecan)、托泊替康(topotecan)、依托泊苷(etoposide)、丝裂霉素(mitomycin)、吉非替尼(geftinib)、长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、阿霉素(doxorubicin)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、塞来昔布(celecoxib)、罗非昔布(rofecoxib)、伐地考昔(valdecoxib)、布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen)、酮洛芬(ketoprofen)、地塞米松(dexamethasone)、泼尼松(prednisone)、泼尼松龙(prednisolone)、氢化可的松(hydrocortisone)、醋氨酚(acetaminophen)、米索石肖唑(misonidazole)、氨磷汀(amifostine)、坦索罗辛(tamsulosin)、非那吡啶(phenazopyridine)、昂丹司琼(ondansetron)、格拉司琼(granisetron)、阿洛司琼(alosetron)、帕洛诺司琼(palonosetron)、异丙嗪(promethazine)、丙氯拉嗪(prochlorperazine)、三甲氧苯醯胺(trimethobenzamide)、阿瑞吡坦(aprepitant)、地芬诺酯加阿托品(diphenoxylate with atropine)，巴柳氮(balsalizide),及/或洛哌丁胺(loperamide)。

本文揭露的方法，对有此需要的个体给药治疗有效量的β-甲氧基丙烯酸酯类化合物，以保护个体对抗放射所引起的全身性损伤也是有用的。例如，预防性的服用可在患者接受放射之前给药。

实施例1、β-甲氧基丙烯酸酯类化合物抑制射线引起的造血细胞凋亡

(1)β-甲氧基丙烯酸酯类化合物体外孵育明显减轻γ射线照射引起的小鼠骨髓有核细胞凋亡。

为了研究β-甲氧基丙烯酸酯类化合物对辐射引起的小鼠骨髓造血细胞凋亡的影响，本发明人选择了β-甲氧基丙烯酸酯类化合物Fluacrypyrim(FAPM)和Azoxystrobin(AZO)进行实验。将雄性C₅₇BL/6J小鼠颈椎脱臼处死后取股骨骨髓细胞，分离出骨髓有核细胞(BMNCs)用于实验。BMNCs分为正常对照(Con)、正常+给药组(Con+X)、照射对照(IR)和照射对照+给药组(IR+X)，其中X代表所用药物，此处分别为FAPM和AZO。其中IR组和IR+X组细胞经6.5Gyγ射线照射，Con组和Con+X组细胞进行假照射，Con+X和IR+X组细胞于照射前1h加入药物X并在37℃培养箱中培养1h。照射(假照射)后将细胞放回37℃培养箱中培养，9h后收集细胞，经Annexin V、PI标记后流式细胞术检测细胞凋亡率。实验重复三次。

结果发现，6.5Gyγ射线照射后9h BMNCs凋亡率显著增加，而加入FAPM 5μM或者AZO 30μM孵育小鼠BMNCs 1h均能显著减少6.5Gyγ射线照射引起的细胞凋亡(图1)。

(2)β-甲氧基丙烯酸酯类化合物FAPM体外孵育显著减轻γ射线照射引起的小鼠骨髓中造血干祖细胞凋亡。

在上述实验基础上，选择其中之一的化合物FAPM进行验证实验。BMNCs收集方法与分组同上。于照射后9h收集细胞，并通过Lin FITC、c-kit APC和Sca-1 PE-Cy7标记区分造血干祖细胞，通过Active caspase-3标记凋亡细胞，研究FAPM对6.5Gyγ射线照射小鼠骨髓有核细胞中造血干祖细胞凋亡的影响。实验重复三次。

结果如图2所示，FAPM 5μM体外孵育BMNCs 1h不仅显著减少6.5Gyγ射线照射引起的小鼠骨髓有核细胞凋亡，而且骨髓中造血干祖细胞的凋亡率较照射对照组亦明显下降。

(3)β-甲氧基丙烯酸酯类化合物FAPM体内给药显著减轻γ射线照射引起的小鼠骨髓中造血干祖细胞的凋亡。

基于上述研究结果，开展了体内实验：将15只雄性C57BL/6J小鼠分为正常对照(Normal)、照射对照(IR)和FAPM组，每组5只。IR组和FAPM组小鼠均全身照射6.5Gyγ射线。FAPM组小鼠于照射前2天开始每天一次腹腔注射50mg/kg，连续给药3次(-2d，-1d，-3h)，照射对照组注射溶剂。照射后6小时颈椎脱臼处死小鼠，取股骨骨髓细胞，经Annexin V等抗体标记检测骨髓有核细胞和造血干祖细胞的凋亡率。如图3所示，6.5Gyγ射线照射后照射对照组小鼠骨髓有核细胞(BMNCs)、造血干细胞(LSK)和造血祖细胞(LK)的凋亡率均显著增加，而FAPM预防给药组小鼠细胞凋亡率较照射对照组明显下降。

上述结果表明，β-甲氧基丙烯酸酯类化合物FAPM体外预处理或照射前预防给药均能显著减轻射线照射引起的小鼠骨髓有核细胞、造血干细胞和造血祖细胞凋亡。

实施例2、β-甲氧基丙烯酸酯类化合物预防给药对急性放射损伤小鼠存活的影响。

β-甲氧基丙烯酸酯类化合物FAPM显著提高急性放射损伤小鼠存活率。

为了研究β-甲氧基丙烯酸酯类化合物有无抗辐射损伤作用，以⁶⁰Coγ射线全身照射小鼠为模型(n＝10)进行实验，研究发现FAPM照射前2天开始每天一次腹腔注射50mg/kg，连续给药3次(-2d，-1d，-3h)，将8.0Gy全身照射小鼠存活率提高50％(100％vs.50％)，将8.5Gy全身照射小鼠存活率提高60％(60％vs.0)，见图4。这表明FAPM对急性放射病小鼠有显著的辐射防护作用。

实施例3、β-甲氧基丙烯酸酯类化合物预防给药对急性放射损伤小鼠外周血象的影响

FAPM预防给药显著促进照射小鼠外周血多系造血细胞恢复。

为研究FAPM对急性放射损伤小鼠造血功能的影响，将16只雄性C₅₇BL/6J小鼠分为照射对照(IR)和FAPM组，每组8只，小鼠均全身照射6.5Gyγ射线。FAPM组小鼠于照射前2天开始每天一次连续给药3次(-2d，-1d，-3h)，每次腹腔注射50mg/kg，照射对照组注射溶剂。分别于照射前及照射后不同时间检测外周血象。结果如图所示，6.5Gyγ射线全身照射后照射对照组小鼠外周血细胞数及血红蛋白含量均进行性持续下降，于照射后10-14天才开始逐渐恢复；FAPM给药组血小板、白细胞、红细胞数和血红蛋白含量的最低值较照射对照组明显增加，开始恢复时间提前，恢复进程加快(图5)。

实施例4、FAPM预防给药增加照射小鼠骨髓中造血干祖细胞的数量。

为研究FAPM对受照射小鼠造血干祖细胞数量的影响，将10只C₅₇BL/6J小鼠分成照射对照组(IR)和FAPM组，每组5只，小鼠均全身照射6.5Gyγ射线。FAPM组小鼠于照射前2天开始每天一次腹腔注射50mg/kg，连续给药3次(-2d，-1d，-3h)，照射对照组注射溶剂。照射后10天颈椎脱臼处死小鼠，取股骨骨髓有核细胞，经抗体标记后流式细胞术检测造血干祖细胞的含量。结果表明，照射后10天，FAPM给药组小鼠骨髓有核细胞计数、造血祖细胞(Lin^-c-kit⁺Sca-1^-)和造血干细胞(Lin^-c-kit⁺Sca-1⁺)的数量较照射对照组显著增加(P<0.001)，造血干细胞中的长期造血干细胞(Lin^-c-kit⁺Sca-1⁺Flt3^-CD34^-)和短期造血干细胞(Lin^-c-kit⁺Sca-1⁺Flt3^-CD34⁺)数目较对照组亦明显增加(P<0.01)，见图6。

实施例5、FAPM预防给药增强受照射小鼠骨髓造血细胞的集落形成能力。

体外集落形成实验结果表明，FAPM 50mg/kg照射前连续给药3天可以增加6.5Gyγ射线照射小鼠照射后10天骨髓有核细胞形成集落的能力。如图7所示，FAPM组总集落数较照射对照组明显增加(P<0.01)，其中粒巨噬系集落(CFU-GM)、爆式红系集落(BFU-E)、混合系集落(CFU-Mix)增加显著。

实施例6、FAPM预防给药增强受照射小鼠骨髓造血干祖细胞重建造血的能力。

为了研究FAPM预防给药对急性放射病小鼠造血干祖细胞重建造血能力的影响，我们开展了骨髓细胞竞争移植实验。雄性C57BL/6J小鼠分为正常对照组(Normal)，照射对照(IR)和FAPM给药组，IR组和FAPM组小鼠均全身照射6.5Gyγ射线，照射剂量率为61.68cGy/min。FAPM组小鼠于照射前2天开始每天一次腹腔注射50mg/kg，连续给药3次(-2d，-1d，-3h)，照射对照组注射溶剂。照射后10天颈椎脱臼处死小鼠，取股骨骨髓有核细胞作为供体细胞(CD45.2⁺)；另外取2只健康雄性CD45.1⁺小鼠骨髓有核细胞作为竞争细胞(CD45.1⁺)，将二者混合后经尾静脉注射给受体鼠(9.0Gyγ射线全身照射的CD45.1⁺小鼠)，注射细胞体积0.3ml，其中含3×10⁶个供体细胞和1.5×10⁵个竞争细胞。分别于骨髓细胞竞争移植后4、8、12和16周时流式细胞术检测受体鼠外周血细胞中CD45.1⁺和CD45.2⁺细胞的嵌合率(图8B)。结果如图8C所示，竞争移植后4-16周FAPM给药组小鼠嵌合率均显著高于照射对照组。移植后12周检测外周血中CD3⁺细胞、B220⁺细胞和Gr-1⁺CD11b⁺细胞比例，发现IR和FAPM组供体来源的各系细胞比例无显著差别，提示FAPM给药不影响小鼠骨髓造血干细胞分化能力。移植后16W处死小鼠取骨髓细胞流式细胞术检测造血干祖细胞的比例发现，FAPM组造血干细胞数显著高于IR组，表明FAPM给药增强造血干细胞的自我更新能力。移植后16W取IR组和FAPM组受体鼠骨髓细胞，经抗体标记后流式细胞术分选出CD45.2⁺HSC，将其二次移植给CD45.1受体鼠。观察受体鼠30天存活率，结果表明FAPM组受体鼠存活率显著高于IR组(见图8F)，这提示FAPM提高受照射小鼠造血干细胞长期重建造血的能力。

实施例7、β-甲氧基丙烯酸酯类化合物FAPM对急性放射病小鼠治疗作用研究

上述研究中，我们首次发现β-甲氧基丙烯酸酯类化合物预防给药对急性放射病小鼠有显著的辐射防护作用，在此基础上，我们进一步通过动物实验研究了FAPM照射后给药对急性放射损伤小鼠有无治疗作用。

首先通过动物存活实验证明：FAPM照射后给药可提高8.5Gyγ射线照射小鼠存活率。【将20只雄性C₅₇BL/6J小鼠全身照射⁶⁰Coγ射线8.5Gy，受照射小鼠随机分为照射对照组(IR)和FAPM治疗组，每组10只。其中FAPM组小鼠于照射后2h开始腹腔注射FAPM 50mg/kg，每天一次连续注射7次，照射对照组注射溶剂，观察小鼠30天存活情况。结果如图9A所示，FAPM治疗组小鼠存活率较照射对照组提高30％。】

进一步检测受照射小鼠血象表明：FAPM照射后给药明显减轻6.5Gyγ射线照射小鼠造血损伤，并促进多系造血细胞恢复。【10只雄性C₅₇BL/6J小鼠全身照射⁶⁰Coγ射线6.5Gy，受照射小鼠随机分为照射对照组(IR)和FAPM治疗组，每组5只。其中FAPM组小鼠于照射后2h开始腹腔注射FAPM 50mg/kg，每天一次连续注射7次，照射对照组注射溶剂，分别于照射前和照射后不同时间检测小鼠外周血象，比较两组差异。结果表明，与IR组相比，FAPM组小鼠外周血血小板数、红细胞数下降程度均减轻，最低值升高，且恢复进程加快(附图9B-9D)。】

Claims (1)

1.密菌酯在制备药品中的应用；所述药品的功能为如下（a1）和/或（a2）和/或（a3）和/或（a4）和/或（a5）和/或（a6）和/或（a7）：

（a1）预防或/和治疗各种原因引起的急性放射病；

（a2）预防或/和治疗各种射线照射引起的骨髓抑制；

（a3）预防或/和治疗肿瘤放射治疗所引起的骨髓抑制；

（a4）预防或/和治疗与化学治疗或外科手术结合进行的放射治疗所引起的骨髓抑制；

（a5）预防或/和治疗核与辐射损伤；

（a6）预防或/和治疗肿瘤放射治疗引起的正常组织细胞的辐射损伤；

（a7）作为研究抗辐射损伤的工具药。

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