CN111378589A - 一种微生物菌剂及其制备方法和应用 - Google Patents

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李想
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张惠文
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    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
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    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates

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Abstract

本发明涉及农业生物技术领域，具体地说是一种微生物菌剂的制备方法和应用。菌剂的活性成分为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。该菌剂对玉米茎腐病有较好的防治效果，可以用于玉米茎腐病的生物防治。该菌剂制备工艺简单，且高效、无毒、环境友好。

Description

一种微生物菌剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及农业生物技术领域，特别是涉及一种微生物菌剂及其制备方法和应用。
背景技术
玉米茎腐病又称玉米茎基腐病、青枯病，是世界玉米产区发生较为普遍的一种系统侵染的土传病害，主要危害玉米植株的茎基部和根系。一般年份的发病率15％-20％，严重时可达70％以上，由此病害导致的产量损失一般在20％左右，严重的减产50％左右。近年来，随着玉米重迎茬面积不断增加，密植技术以及不抗病品种的应用等使得玉米茎腐病呈加重趋势，已成为制约玉米持续增产的重要限制因素之一。因此，迫切需要对这种病害进行科学防治。
研究表明，引起玉米茎腐病的病原菌种类比较多，主要包括不等鞭毛菌门(Heterokontophyta)的腐霉菌、半知菌亚门(Derteromycotina)的镰刀菌、干腐菌和部分细菌等。禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)是我国报道较多的玉米茎腐菌主要致病菌之一。
防治方法主要由以下几种：(1)合理施肥，生态防控；(2)加强田间管理；(3)因地制宜选择种植抗病、耐病优良品种；(4)化学防治：一些化学种衣剂进行种子包衣处理可以用来防治茎腐病；(5)生物防治：筛选对茎腐病有良好抑制效果且定殖力强的微生物，在生产种植过程中施用，达到抑制茎腐病发生的作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种微生物菌剂及其制备方法和应用。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种微生物菌剂含贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。
所述微生物菌剂含贝莱斯芽孢杆菌株的培养物、培养浓缩物、培养菌悬液、发酵液或发酵分离上清液。
所述的微生物菌剂的制备方法，将贝莱斯芽孢杆菌活化后接种于LB培养基中培养，得贝莱斯芽孢杆菌株的培养物、培养浓缩物、培养菌悬液、发酵液或发酵分离上清液。
将贝莱斯芽孢杆菌活化后接种于LB培养基中，于180r/min，37℃振荡培养2天，即得发酵液；
所述培养菌悬液为将上述发酵液经12000r/min离心1min后，弃上清液，沉淀悬浮于同体积的无菌水中，即得培养菌悬液。
具体为
1)LB培养基(g/L)制备：水1L，胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10g，摇动容器直至溶质溶解，用5mol/L NaOH调pH至7.0-7.2；固体培养基加入15-20g琼脂；
2)贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)在LB固体培养基上活化3次；
3)取1环于50ml LB液体培养基，于150-180r/min，35-37℃摇床培养2天；
4)发酵液经12000r/min离心1-2min后，弃上清液，沉淀悬浮于同体积的无菌水中，制备培养菌悬液。
所述微生物菌剂用于防治玉米茎腐病。
所述微生物菌剂用于防治由禾谷镰刀菌引起的玉米茎腐病。
本发明的微生物菌剂通过对禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)的抑菌实验，发现其能良好的抑制病原菌的生长，能对玉米茎腐病起到有效的防治作用。
本发明的微生物菌剂具有以下优点：1)本发明的微生物菌剂采用以菌抑菌的方式发挥作用，对人体无害，在很大程度上保护了生态环境和农产品的安全。2)本发明菌剂使用灵活、简单、高效。3)本发明的微生物菌剂可以有效防治玉米茎腐病。
附图说明
图1为对禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)的抑菌效果图；其中，图中A为贝莱斯芽孢杆菌；B为对照(LB液体培养基)；12为禾谷镰刀菌。
具体实施方式
实施例1
微生物菌剂的制备
1)LB培养基(g/L)制备：水1L，胰蛋白胨10g酵母提取物5gNaCl 10g，摇动容器直至溶质溶解.用5mol/L NaOH调pH至7.0-7.2；固体培养基加入20g琼脂；
2)贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)在LB固体培养基上活化3次；
3)取1环于50ml LB液体培养基，于180r/min，37℃摇床培养2天；
4)发酵液经12000r/min离心1min后，弃上清液，沉淀悬浮于同体积的无菌水中，制备培养菌悬液。
贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)为市售产品。
实施例2
抑菌实验
将禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)接种在马铃薯培养基(g/L)(马铃薯浸取液1L，葡萄糖20g，pH自然，固体培养基加入15g琼脂)上，28℃，培养4-5天，将活化的禾谷镰刀菌用打孔器在菌落边缘打出直径8.5mm的病原菌菌饼。将禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum)菌饼放置于马铃薯平板中央，在距离平皿边缘1.5cm处打2个直径为7mm的孔，接种贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)菌液和LB液体培养基(对照)，28℃恒温培养，7天以后观察，结果见图1。
由图1可见，贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)对病原菌具有较好的抑制效果。

Claims (6)

1.一种微生物菌剂，其特征在于：微生物菌剂含贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)。
2.按权利要求1所述的微生物菌剂，其特征在于：所述微生物菌剂含贝莱斯芽孢杆菌株的培养物、培养浓缩物、培养菌悬液、发酵液或发酵分离上清液。
3.一种权利要求1或2所述的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：
将贝莱斯芽孢杆菌活化后接种于LB培养基中培养，即得贝莱斯芽孢杆菌株的培养物、培养浓缩物、培养菌悬液、发酵液或发酵分离上清液。
4.按权利要求3所述的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：将贝莱斯芽孢杆菌活化后接种于LB培养基中，于150-180r/min，35℃-37℃振荡培养2天，即得发酵液；
所述培养菌悬液为将上述发酵液经12000r/min离心1-2min后，弃上清液，沉淀悬浮于同体积的无菌水中，即得培养菌悬液。
5.一种权利要求1所述的微生物菌剂的应用，其特征在于：所述微生物菌剂用于防治玉米茎腐病。
6.按权利要求5所述的微生物菌剂的应用，其特征在于：所述微生物菌剂用于防治由禾谷镰刀菌引起的玉米茎腐病。
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