CN111374989A - 用于治疗炎症性肠病的药物 - Google Patents

用于治疗炎症性肠病的药物 Download PDF

Info

Publication number
CN111374989A
CN111374989A CN202010183029.3A CN202010183029A CN111374989A CN 111374989 A CN111374989 A CN 111374989A CN 202010183029 A CN202010183029 A CN 202010183029A CN 111374989 A CN111374989 A CN 111374989A
Authority
CN
China
Prior art keywords
inflammatory bowel
cells
bowel disease
peripheral blood
immunotherapy
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202010183029.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111374989B (zh
Inventor
黄曦
王子晴
洪海
吴永坚
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fifth Affiliated Hospital of Sun Yat Sen University
Original Assignee
Fifth Affiliated Hospital of Sun Yat Sen University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fifth Affiliated Hospital of Sun Yat Sen University filed Critical Fifth Affiliated Hospital of Sun Yat Sen University
Priority to CN202010183029.3A priority Critical patent/CN111374989B/zh
Publication of CN111374989A publication Critical patent/CN111374989A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111374989B publication Critical patent/CN111374989B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明属于免疫治疗技术领域，公开了一种用于治疗炎症性肠病的药物，所述药物包括CD4‑CD8‑双阴性的T细胞。通过构建炎症性肠病的小鼠模型，然后抽取自体外周血，分离出DN T细胞，体外扩增培养后，再静脉注射回输给自体，能够达到缓解治疗肠道炎症的目的。本发明首次利用DN T细胞及其免疫治疗方法可以实现对炎症性肠病的免疫治疗，其方法具有减轻肠道炎症等优点，适于炎症性肠病的综合治疗，适用于临床推广应用。

Description

用于治疗炎症性肠病的药物
技术领域
本发明具体涉及免疫治疗技术领域，更具体的，涉及用于治疗炎症性肠病的药物。
背景技术
炎症性肠病（inflammatory bowel disease，IBD）属于自身免疫性疾病，是一种发生在肠道的，要终生治疗并且不可治愈的慢性特发性疾病，具有频繁复发和缓解的临床特点。近十年来，IBD在我国就诊人数呈逐步增加趋势，将成为我国消化系统常见病。IBD的常规药物疗法，例如抗炎剂、糖皮质激素和免疫抑制剂由于其在长期治疗期间的全身不良反应和毒性而受到限制。
细胞治疗是通过体外激活、扩增自体或异体的免疫效应细胞，再回输给患者，起到杀伤目标细胞和提高患者免疫功能等作用。细胞免疫治疗是未来炎症性肠病综合治疗的重要组成部分。
现有技术还没有关于治疗炎症性肠病的细胞免疫治疗方法。
发明内容
针对上述现有技术存在的缺陷，本发明的主要目的是提供一种用于治疗炎症性肠病的药物。
本发明的目的通过以下技术方案实现：
一种用于治疗炎症性肠病的药物，所述药物包括CD4-CD8-双阴性的T细胞。
优选的，所述CD4-CD8-双阴性的T细胞为CD3+CD4-CD8-双阴性T细胞（简称为DN T细胞）。
本发明首先通过构建炎症性肠病的小鼠模型，然后抽取自体外周血，分离出DN T细胞，体外扩增培养后，再静脉注射回输给自体，能够达到缓解治疗肠道炎症的目的。
优选的，所述CD3+CD4-CD8-双阴性T细胞来自外周血。
优选的，所述外周血为自体外周血。当然，与自体血型匹配的受试者的外周血也是可以的。
优选的，所述自体外周血的CD3+CD4-CD8-双阴性T细胞通过流式分选方法获得，同时经过体外扩增培养。
更优选的，所述体外扩增培养过程中加入白介素-2，能够刺激体DN T细胞的扩增；所述白介素-2的浓度为20ng/mL。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明通过构建炎症性肠病的小鼠模型，然后抽取自体外周血，分离出DN T细胞，体外扩增培养后，再静脉注射回输给自体，能够达到缓解治疗肠道炎症的目的。本发明首次利用DN T细胞及其免疫治疗方法可以实现对炎症性肠病的免疫治疗，其方法具有减轻肠道炎症等优点，适于炎症性肠病的综合治疗，适用于临床推广应用。
附图说明
图1为输入DN T细胞受体肠道病理切片；
图2为输入DN T细胞受体小鼠体重下降情况，其中DN T组即为回输组；
图3为输入受体小鼠的供体DN T细胞分泌情况；其中，PMA+Ion+BFA组代表小鼠DN T细胞体外刺激组，PMA为佛波酯，PMA和Ionomycin的共同作用可以起到激活细胞的作用。
BFA为蛋白转运抑制剂，阻止高尔基体将新分泌蛋白运输到细胞外，从而达到通过流式来检测细胞因子的目的；unstimulated代表未加刺激组。
具体实施方式
为了对本发明的技术特征、目的和效果有更加清楚的理解，现对照附图详细说明本发明的具体实施方式。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1 以小鼠为模型建立用于免疫治疗炎症性肠病的DN T细胞的方法
一、IBD小鼠模型的建立过程
使用葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium，DSS）诱导小鼠结肠炎模型，给小鼠饮用含3%（w/v）DSS水持续7天，再改用正常水饮用1天，构建小鼠结肠炎模型。每日检测小鼠体重及疾病活动度指数（DAI），用来评价小鼠结肠炎严重程度。DAI评分包括大便性状，直肠出血情况等。
二、向建立的小鼠模型中回输DN T细胞
用于免疫治疗炎症性肠病的DN T细胞的方法用到以下成分：（1）T细胞的特异性荧光抗体；（2）培养基（10%胎牛血清的1640培养基）；（3）白介素-2（20ng/ml）。
具体包括如下步骤：
S1. 抽取供体小鼠的外周血20ml，采用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞；
S2. 染色标记CD3+CD4-CD8-T细胞（简称为DN T细胞）；
S3. 流式分选仪分选纯化DN T细胞；
S4. 加入培养基和白介素-2（20ng/ml）体外培养14天，每隔3天换一次培养基和白介素-2；
S5. 生理盐水洗涤细胞3次，静脉注射至受体（IBD小鼠模型）体内。
S6. 疗效判定：以不注射细胞、向受体内注射PBS为对照，检测受体肠道病理情况和体重下降情况。
小鼠肠道病理切片的结果如图1，从图1中可以看出，与输入PBS组相比，回输组的肠道病理情况得到了明显改善。
小鼠体重下降情况的结果如图2，图2的左图为小鼠肠道长度统计结果，图2的右图为小鼠的体重统计结果，从图2可以看出，与输入PBS组相比，DNT组（即回输组）小鼠的体重下降缓解，且肠道长度较长。
流式细胞分选结果如图3，从图3可以看出，小鼠肠道中来自供体小鼠的DN T细胞可分泌细胞因子IL-4保护肠道。

Claims (6)

1.一种用于治疗炎症性肠病的药物，其特征在于，所述药物包括CD4-CD8-双阴性的T细胞。
2.根据权利要求1所述的用于治疗炎症性肠病的药物，其特征在于，所述CD4-CD8-双阴性的T细胞为CD3+CD4-CD8-双阴性T细胞。
3.根据权利要求2所述的用于治疗炎症性肠病的药物，其特征在于，所述CD3+CD4-CD8-双阴性T细胞来自外周血。
4.根据权利要求3所述的用于治疗炎症性肠病的药物，其特征在于，所述外周血为自体外周血。
5.根据权利要求4所述的用于治疗炎症性肠病的药物，其特征在于，所述自体外周血的CD3+CD4-CD8-双阴性T细胞通过流式分选方法获得，同时经过体外扩增培养。
6.根据权利要求5所述的用于治疗炎症性肠病的药物，其特征在于，所述体外扩增培养过程中加入白介素-2。
CN202010183029.3A 2020-03-16 2020-03-16 用于治疗炎症性肠病的药物 Active CN111374989B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010183029.3A CN111374989B (zh) 2020-03-16 2020-03-16 用于治疗炎症性肠病的药物

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010183029.3A CN111374989B (zh) 2020-03-16 2020-03-16 用于治疗炎症性肠病的药物

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111374989A true CN111374989A (zh) 2020-07-07
CN111374989B CN111374989B (zh) 2022-04-19

Family

ID=71213584

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010183029.3A Active CN111374989B (zh) 2020-03-16 2020-03-16 用于治疗炎症性肠病的药物

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111374989B (zh)

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040109847A1 (en) * 2002-07-15 2004-06-10 Lieping Chen Treatment and prophylaxis with 4-1BB-binding agents
CN101252941A (zh) * 2005-08-31 2008-08-27 Ith免疫治疗控股股份公司 治疗炎性肠病
CN101313061A (zh) * 2005-11-18 2008-11-26 大学健康网络 扩增双阴性t细胞的方法
CN101945666A (zh) * 2007-12-19 2011-01-12 Mivac发展股份公司 治疗自身免疫和过敏性疾病的组合物及方法
CN103608452A (zh) * 2011-03-25 2014-02-26 特克赛尔公司 调节性t细胞在治疗中的使用方法
CN105483083A (zh) * 2016-01-20 2016-04-13 首都医科大学附属北京友谊医院 双阴性t细胞的转化扩增方法
CN108367012A (zh) * 2015-09-21 2018-08-03 美国普瑞德制药有限公司 自体免疫性和自身炎症性疾病的治疗

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040109847A1 (en) * 2002-07-15 2004-06-10 Lieping Chen Treatment and prophylaxis with 4-1BB-binding agents
CN101252941A (zh) * 2005-08-31 2008-08-27 Ith免疫治疗控股股份公司 治疗炎性肠病
CN101313061A (zh) * 2005-11-18 2008-11-26 大学健康网络 扩增双阴性t细胞的方法
CN101945666A (zh) * 2007-12-19 2011-01-12 Mivac发展股份公司 治疗自身免疫和过敏性疾病的组合物及方法
CN103608452A (zh) * 2011-03-25 2014-02-26 特克赛尔公司 调节性t细胞在治疗中的使用方法
CN108367012A (zh) * 2015-09-21 2018-08-03 美国普瑞德制药有限公司 自体免疫性和自身炎症性疾病的治疗
CN105483083A (zh) * 2016-01-20 2016-04-13 首都医科大学附属北京友谊医院 双阴性t细胞的转化扩增方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HAILAN MENG ET AL.: "Double-negative T cells remarkably promote neuroinflammation after ischemic stroke", 《PNAS》 *
王新梅等: "人体外周血 CD3+CD4-CD8-双阴性T细胞体外扩增的实验研究", 《中国实验诊断学》 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN111374989B (zh) 2022-04-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Bai et al. IL-17A improves the efficacy of mesenchymal stem cells in ischemic-reperfusion renal injury by increasing Treg percentages by the COX-2/PGE2 pathway
Grégoire et al. mesenchymal stromal cell therapy for inflammatory bowel diseases
Campana et al. Regression of liver fibrosis
Ficht et al. Immune surveillance of the liver by T cells
KR102188605B1 (ko) 줄기세포의 면역조절성 효과의 조절 방법
Gazdic et al. Crosstalk between mesenchymal stem cells and T regulatory cells is crucially important for the attenuation of acute liver injury
Zhang et al. Mesenchymal stem cells alleviate rat diabetic nephropathy by suppressing CD103+ DCs‐mediated CD8+ T cell responses
US20210213067A1 (en) Methods for enhancing immunosuppression
Rabinovitch et al. Analysis of cytokine mRNA expression in syngeneic islet grafts of NOD mice: interleukin 2 and interferon gamma mRNA expression correlate with graft rejection and interleukin 10 with graft survival
Liao et al. Mesenchymal stromal cells mitigate experimental colitis via insulin-like growth factor binding protein 7-mediated immunosuppression
US20150343039A1 (en) Disease therapy using a tolerogenic pharmaceutical preparation
Imomjonovich et al. Immunogenesis of kidney transplantation, maintenance of vital signs of transplanted kidney
KR20200132722A (ko) 효율적 자연살해세포 배양방법 및 이의 배지첨가 키트
WO2024041162A1 (zh) Il4、il21、il27至少两种细胞因子处理获得的间充质干细胞及其外泌体和应用
Rearte et al. Mifepristone (RU486) restores humoral and T cell-mediated immune response in endotoxin immunosuppressed mice
Gu et al. New insights into iNKT cells and their roles in liver diseases
Lee et al. Glucocorticoids induce corneal allograft tolerance through expansion of monocytic myeloid‐derived suppressor cells
Alam et al. Selective inhibition of the cutaneous late but not immediate allergic response to antigens by misoprostol, a PGE analog
Nakamura et al. Malt1 inactivation attenuates experimental colitis through the regulation of Th17 and Th1/17 cells
Otsuka et al. IL-1β promotes osteoclastogenesis by increasing the expression of IGF2 and chemokines in non-osteoclastic cells
Yan et al. Bone Marrow–derived Endothelial Progenitor Cells Promote Hematopoietic Reconstitution After Hematopoietic Stem Cell Transplantation
CN111374989B (zh) 用于治疗炎症性肠病的药物
Reyes et al. Macrophages treated with antigen from the tapeworm Hymenolepis diminuta condition CD25+ T cells to suppress colitis
Shin et al. Inflammation‐Targeting Mesenchymal Stem Cells Combined with Photothermal Treatment Attenuate Severe Joint Inflammation
CN107119015B (zh) 外泌体、其制备方法及其在制备治疗肺癌的药物中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant