CN111363688A

CN111363688A - 一种提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法和用途

Info

Publication number: CN111363688A
Application number: CN202010180079.6A
Authority: CN
Inventors: 项炜; 韩旭; 姜钧茹
Original assignee: Tonghua Anruite Biopharmaceutical Co ltd
Current assignee: Tonghua Anruite Biopharmaceutical Co ltd
Priority date: 2020-03-16
Filing date: 2020-03-16
Publication date: 2020-07-03
Also published as: WO2021184955A1

Abstract

本发明涉及基因领域，尤其涉及一种提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法和用途。本发明涉及一种提高重组人白蛋白表达质量、减少降解的方法。通过在重组宿主细胞中过载表达蛋白二硫键异构酶（Protein Disulfide Isomerase，PDI），从而帮助减少蛋白分泌途径中被错误剪切，降低蛋白降解，提高外源蛋白表达质量。

Description

一种提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法和用途

技术领域

本发明涉及基因领域，尤其涉及一种提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法和用途。

背景技术

酵母表达体系具有发酵密度高、分泌能力强、糖基化程度低等优势，但在外源蛋白表达的同时也伴随着一定量蛋白酶的表达，从而使表达的外源蛋白出现了不同程度的降解，直接影响了后续的纯化工作和重组蛋白的质量。

酵母细胞中包含分泌途径蛋白酶（kex2蛋白酶、Yap3蛋白酶）和液泡蛋白酶（蛋白酶A、蛋白酶B、羧肽酶Y）。外源蛋白多肽链在核糖体合成，然后在信号肽的牵引下进入内质网进行折叠，经高尔基体进行加工修饰后，运输至细胞质膜分泌到胞外。而分泌途径蛋白酶是位于高尔基体或细胞质膜上的水解酶，高尔基体膜上的蛋白酶kex2负责蛋白信号肽的加工处理。细胞质膜上的天冬氨酸蛋白酶Yap3在kex2的作用下，特异性切割C端单个或成对的碱基氨基酸残基位点，是外源蛋白被错误剪切的主要原因。在发酵过程中，当细胞处于胁迫影响，位于酵母液泡内的蛋白酶过表达或细胞自溶破裂而释放到胞外，从而对分泌到胞外的重组蛋白产生降解作用。

人血清白蛋白（Human Serum Albumin，HSA）是一种单链球形蛋白质，由585个氨基酸构成。对于重组人白蛋白工程，蛋白质在前导肽作用下以全长分泌到细胞外尤其重要。然而，在重组人白蛋白发酵产物中发现了分子量约为45kDa、N-端氨基酸序列与人血清白蛋白一致的降解片段，并且片段C末端含有单个或成对的碱基氨基酸残基，这可能是由分泌途径天冬氨酸蛋白酶Yap3剪切产生的。

定义术语

“载体”指能将外源DNA带入宿主细胞，进行复制或最终使外源基因DNA得以表达的自主DNA。主要分为克隆载体和表达载体，前者主要用于基因的复制、扩增等，后者主要用于目的基因的表达。

“宿主细胞”指在转化或转导过程中接受外源基因的细胞。

“可操作的连接”指转录和翻译调控元件共价连接至编码序列，其空间排布使得调控元件可以指导编码序列的表达。

“信号肽”指新合成的多肽链中用于指导蛋白质跨膜转移的N端氨基酸序列。

“表达盒”指包含外源蛋白表达所需的所有必要元件的基因表达系统，包括启动子、外源基因克隆位点、信号肽序列、目的蛋白的成熟肽编码序列、终止子、筛选标记等。

“基因表达”指生物基因组中结构基因所携带的遗传信息经过转录、翻译等一系列过程，合成特定的蛋白质，进而发挥其特定生物学功能的过程。

“重组启动子”指经遗传修饰的或未经修饰的启动子，不天然存在于基因组中基因上游的启动子或野生型启动子。存在于目的基因编码序列5’端上游，与RNA聚合酶识别、结合的特异DNA序列，控制目的基因的转录。

“分子伴侣”指协助细胞内大分子结构正确折叠的蛋白质和多肽。

“Amp”Ampicillin，氨苄青霉素钠。

“AOX”Alcohol oxidase，醇氧化酶。

“BMGY”Buffered Glycerol-complex Medium，培养基。

“BMMY”Buffered Methanol-complex Mdeium，培养基。

“Da”Dalton，道尔顿。

“DNA”Deoxyribonucleic acid，脱氧核糖核酸。

“FDH”Formate dehydrogenase，甲酸脱氢酶。

“FLD”Formaldehyde dehydrogenase，甲醛脱氢酶。

“GAL”Galactose，半乳糖。

“GAP”Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，三磷酸甘油醛脱氢酶。

“His”Histidinol dehydrogenase，组氨酸脱氢酶。

“HSA” Human Serum Albumin，人血清白蛋白。

“LB”Luria bertani medium，培养基。

“MD”Minimal Dextrose medium，培养基。

“ml”milliliter，毫升。

“Mut^s”Methanol utilization slow，甲醇利用慢表型。

“Mut⁺” Methanol utilization plus，甲醇利用快表型。

“PCR”Polymerase chain reaction，聚合酶链式反应。

“PDI” Protein Disulfide Isomerase，蛋白二硫键异构酶。

“rpm”Rounds per minute，转/每分。

“SDS-PAGE”Sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳。

“SEQ ID NO.”Sequence Identity Document Number，序列编号。

“Western blot”，蛋白质免疫印迹。

“Yap”Yeast aspartic protease，酵母天冬氨酸蛋白酶。

“YPD”Yeast extract/peptone/dextrose-media，培养基。

“Zeo”zeocin，博来霉素。

发明内容

发明的目的：为了提供一种效果更好的提高重组人白蛋白表达质量减少降解的物质方法和用途，具体目的见具体实施部分的多个实质技术效果。

为了达到如上目的，本发明采取如下技术方案：

方案一：

一种提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法，其特征在于，通过在重组宿主细胞中过载表达蛋白二硫键异构酶，从而帮助减少蛋白分泌途径中被错误剪切，降低蛋白降解，提高外源蛋白表达质量。

方案二：

一种提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法，其特征在于，实现步骤其包含：

（1）编码至少一个重组人白蛋白的宿主细胞；

（2）过载表达蛋白二硫键异构酶的宿主细胞。

本发明进一步技术方案在于，所述的宿主细胞为酵母细胞。

本发明进一步技术方案在于，所述的酵母为如下酵母属的一种或者多种：汉逊酵母属（Hansenula）、毕赤酵母属(Pichia)和假丝酵母属(Candida)。

本发明进一步技术方案在于，所述的毕赤酵母属的细胞是巴斯德毕赤酵母细胞（Pichia pastoris）。

本发明进一步技术方案在于，编码蛋白二硫键异构酶的内源基因是经遗传修饰的或未经遗传修饰的。

本发明进一步技术方案在于，编码人白蛋白基因和蛋白二硫键异构酶基因的重组表达盒是在一个核酸构建体上或在两个不同选择标志的核酸构建体上。

本发明进一步技术方案在于，所述核酸构建体包括但不限于pHIL-D2、pPIC3.5、pHIL-S1、pPIC9、pPink-LC、pPink-HC、pPICZA、pPICZB、pPICZC、pPICZaA、pPICZaB和pPICZaC质粒。

本发明进一步技术方案在于，重组启动子包括但不限于AOX1启动子、GAP启动子、GAL启动子、FDH启动子和FLD启动子。

本发明进一步技术方案在于，宿主细胞中编码至少一个重组启动子修饰的人白蛋白。

本发明进一步技术方案在于，序列优选为包含至少一个选自SEQ ID NO.5所示优选序列的核苷酸交换。

本发明进一步技术方案在于，所述重组细胞中重组启动子修饰的蛋白二硫键异构酶过载表达。

本发明进一步技术方案在于，所述蛋白二硫键异构酶是酵母PDI，更优选为人PDI。

本发明进一步技术方案在于，人蛋白二硫键异构酶，序列优选为包含至少一个选自SEQ ID NO.13所示优选序列的核苷酸交换。

一种提高重组人白蛋白表达质量减少降解的物质，其特征在于，其为序列或者序列物质或者是序列所表达的物质，序列为如下任意一种或者多种序列：

SEQ ID NO.1 人白蛋白信号肽编码序列；

SEQ ID NO.2 人白蛋白信号肽优选序列；

SEQ ID NO.3 人白蛋白成熟肽编码序列；

SEQ ID NO.4 人白蛋白成熟肽优选序列；

SEQ ID NO.5 人白蛋白成熟肽优选序列；

SEQ ID NO.6 酵母蛋白二硫键异构酶信号肽编码序列；

SEQ ID NO.7 酵母蛋白二硫键异构酶成熟肽编码序列；

SEQ ID NO.8 酿酒酵母交配因子信号肽编码序列；

SEQ ID NO.9人蛋白二硫键异构酶信号肽编码序列；

SEQ ID NO.10人蛋白二硫键异构酶信号肽优选序列；

SEQ ID NO.11 人蛋白二硫键异构酶成熟肽编码序列；

SEQ ID NO.12 人蛋白二硫键异构酶成熟肽优选序列；

SEQ ID NO.13 人蛋白二硫键异构酶成熟肽优选序列；

SEQ ID NO.14 HSA-F引物序列；

SEQ ID NO.15 HSA-R引物序列；

SEQ ID NO.16 酵母PDI-F引物序列；

SEQ ID NO.17 酵母PDI-R引物序列；

SEQ ID NO.18 人PDI-F引物序列；

SEQ ID NO.19 人PDI-R引物序列。

SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.19 任意一种或者多种在提高重组人白蛋白表达质量减少降解中的用途。

利用SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.19任意一种或者多种序列基因操作后的宿主细胞。

利用SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.19任意一种或者多种序列基因操作后的宿主细胞表达的人白蛋白。

提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法制备中或者制备后的序列、质粒、细胞、产物在治疗疾病的方法。

提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法制备中或者制备后的序列、质粒、细胞、产物在治疗疾病中的用途。

提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法制备中或者制备后的序列、质粒、细胞、产物在发酵产业中的用途。

采用如上技术方案的本发明，相对于现有技术有如下有益效果：本专利能最大限度减少分泌蛋白的降解，本发明提供了通过构建过载表达蛋白二硫键异构酶的宿主细胞，减少蛋白分泌途径中被错误剪切，从而提高蛋白质量的方法。

附图说明

为了进一步说明本发明，下面结合附图进一步进行说明：

图1为重组质粒pPic9-HSA的结构示意图。

图2为重组质粒pPicZA-PDI的结构示意图。

图3为重组质粒pPic9-HSA-PDI的结构示意图。

图4为重组质粒pPicZA-HSA-PDI的结构示意图。

图5为实施例4的重组人白蛋白表达SDS-PAGE结果图。泳道1为重组工程菌IV，泳道2为重组工程菌V，泳道3为重组工程菌VI，泳道4为重组工程菌I，泳道5为重组工程菌III。蛋白二硫键异构酶过载表达的重组工程菌45kDa降解片段减少，且人蛋白二硫键异构酶过载表达的重组工程菌效果更明显。

图6为实施例5的重组人白蛋白表达western blot结果图。泳道1为重组工程菌I，泳道2为重组工程菌III，泳道3为重组工程菌IV，泳道4为重组工程菌V，泳道5为重组工程菌VI。可以观察到66.5kDa条带和45kDa降解条带均为重组人白蛋白条带，蛋白二硫键异构酶过载表达的重组工程菌45kDa降解片段减少，且人蛋白二硫键异构酶过载表达的重组工程菌效果更明显。

具体实施方式

本专利提供多种并列方案，不同表述之处，属于基于基本方案的改进型方案或者是并列型方案。每种方案都有自己的独特特点。

本发明目的在于提供减少蛋白分泌途径中被错误剪切，降低蛋白降解，提高外源蛋白表达质量的方法。

因此，本发明涉及用于提高外源蛋白表达质量的方法，其包含但不限于：

1）经遗传修饰的酵母细胞

所述酵母细胞重组启动子包含但不限于AOX1启动子、GAP启动子、GAL启动子、FDH启动子和FLD启动子。

所述酵母细胞包含但不限于汉逊酵母属（Hansenula）、毕赤酵母属（Pichia）、酿酒酵母属（Schizosacchromyces）、假丝酵母属（Candida）、裂殖酵母属（Schizosaccharomyces）、球拟酵母属（Torulopsis）和曲霉属（Aspergillus）。优选为毕赤酵母属，更优选为巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）。

所述酵母细胞的表型优选为甲醇慢利用型Mut^s，包括但不限于KM71、KM71H；或甲醇快利用型Mut⁺，包括但不限于GS115、X-33。

所述酵母细胞，编码蛋白二硫键异构酶的内源基因是经遗传修饰的或未经遗传修饰的。经遗传修饰的蛋白二硫键异构酶内源基因功能减弱或去除。

所述酵母细胞包含重组启动子可操作地连接于编码人白蛋白的至少一个基因，其中启动子优选为经遗传修饰的或未经修饰的可诱导酵母AOX1启动子。

所述酵母细胞包含重组启动子修饰的人蛋白二硫键异构酶或酵母蛋白二硫键异构酶的过载表达，其中启动子优选为经遗传修饰的或未经修饰的可诱导酵母AOX1启动子。

2）表达盒，其编码至少一个人白蛋白的重组核酸分子

所述表达盒，核酸构建体包括但不限于pHIL-D2、pPIC3.5、pHIL-S1、pPIC9、pPink-LC、pPink-HC、pPICZA、pPICZB、pPICZC、pPICZaA、pPICZaB和pPICZaC质粒。

重组启动子可操作地连接于信号肽编码序列（如SEQ ID NO.1所示），和人白蛋白成熟肽编码序列（如SEQ ID NO.3所示）。所述信号肽编码序列优选为包含至少一个选自SEQID NO.2所示优选序列的核苷酸交换，所述人白蛋白成熟肽编码序列优选为SEQ ID NO.4所示序列，或优选为包含至少一个选自SEQ ID NO.5所示优选序列的核苷酸交换。

3）表达盒，过载表达酵母蛋白二硫键异构酶

重组启动子可操作地连接于信号肽编码序列和酵母蛋白二硫键异构酶成熟肽编码序列。所述信号肽编码序列如SEQ ID NO.6所示，所述酵母蛋白二硫键异构酶成熟肽编码序列如SEQ ID NO.7所示。

4）表达盒，过载表达人蛋白二硫键异构酶

重组启动子可操作地连接于信号肽编码序列和人蛋白二硫键异构酶成熟肽编码序列（如SEQ ID NO.11所示）。

所述信号肽编码序列包括但不限于酿酒酵母交配因子信号肽编码序列（如SEQ IDNO.8所示）和人蛋白二硫键异构酶信号肽编码序列（如SEQ ID NO.9所示），其中人蛋白二硫键异构酶信号肽编码序列优选为SEQ ID NO.10所示序列。

所述人蛋白二硫键异构酶成熟肽编码序列优选为SEQ ID NO.12所示序列，或优选为包含至少一个选自SEQ ID NO.13所示优选序列的核苷酸交换。

依照但不限于本发明提供的方法，在适合生产重组人白蛋白的条件下，培养酵母细胞，诱导外源蛋白表达，重组人白蛋白降解片段明显减少。

菌株

大肠杆菌DH5a感受态细胞（康为世纪）用于所有大肠杆菌克隆实验。

重组人白蛋白宿主细胞是酵母细胞，优选巴斯德毕赤酵母细胞（Invitrogen），更优选GS115（组氨酸脱氢酶His4基因突变的Mut⁺毕赤酵母菌株）和KM71（组氨酸脱氢酶His4基因突变、AOX1基因被破坏的Mut^s毕赤酵母菌株）。

表达载体

表达载体需在宿主毕赤酵母细胞基因组特定位点以单拷贝或多拷贝形式整合，与染色体发生同源重组以实现外源基因的表达。优选pPic9酵母表达载体（Invitrogen）和pPicZA酵母表达载体（Invitrogen）。

试剂和培养基

StuI限制性内切酶（NEB）、PmeI限制性内切酶（NEB）、SacI限制性内切酶（NEB）、金牌超量无内毒素质粒大提试剂盒（康为世纪）、博来霉素zeocin（Invitrogen）、氨苄青霉素钠Ampicillin（上海生工生物工程股份有限公司）。

MD培养基、LB培养基、YPD培养基、BMGY培养基、BMMY培养基。

重组质粒

重组质粒pPic9-HSA，其结构示意图如图1所示。

重组质粒pPicZA-PDI（酵母PDI或人PDI），其结构示意图如图2所示。

重组质粒pPic9-HSA-PDI（酵母PDI或人PDI），结构示意图如图3所示。

重组质粒pPicZA-HSA-PDI（酵母PDI或人PDI），结构示意图如图4所示。

转化、筛选阳性克隆

使用DNA限制性内切酶PmeI、StuI或SacI线性化质粒，再依照毕赤酵母表达试剂盒（Invitrogen）操作手册中电穿孔方法转化酵母细胞，将细胞涂布在含相应抗生素或营养缺陷的选择平板上，30℃培养48至72小时。

挑取平板上生长的单菌落至培养液中培养后，提取基因组DNA，分别采用序列表中HSA-F（SEQ ID NO.14）和HSA-R（SEQ ID NO.15）、酵母PDI-F（SEQ ID NO.16）和酵母PDI-R（SEQ ID NO.17）、人PDI-F（SEQ ID NO.18）和人PDI-R（SEQ ID NO.19）等相应引物进行PCR，以筛选阳性克隆。

实施例1 构建仅含人白蛋白基因的工程菌

重组工程菌I

转化的重组质粒为pPic9-HSA，其结构示意图如图1所示。人白蛋白信号肽编码序列如SEQ ID NO.1所示，人白蛋白成熟肽编码序列如SEQ ID NO.4所示。

实施例2 构建共表达酵母蛋白二硫键异构酶的工程菌

重组工程菌II

分别将pPicZA-PDI（结构示意图如图2所示）和pPic9-HSA质粒分两次重组至KM71细胞基因组中，人白蛋白信号肽编码序列如SEQ ID NO.1所示，人白蛋白成熟肽编码序列如SEQID NO.3所示。酵母蛋白二硫键异构酶信号肽编码序列如SEQ ID NO.6所示，成熟肽编码序列如SEQ ID NO.7所示。

重组工程菌III

分别将pPic9-HSA-PDI（结构示意图如图3所示）和pPicZA-HSA-PDI（结构示意图如图4所示）质粒分两次重组至KM71细胞基因组中，人白蛋白信号肽编码序列如SEQ ID NO.1所示，人白蛋白成熟肽编码序列如SEQ ID NO.3所示。酵母蛋白二硫键异构酶信号肽编码序列如SEQ ID NO.6所示，成熟肽编码序列如SEQ ID NO.7所示。

实施例3构建共表达人蛋白二硫键异构酶的工程菌

重组工程菌IV

分别将pPicZA-PDI和pPic9-HSA质粒分两次重组至KM71细胞基因组中，人白蛋白信号肽编码序列如SEQ ID NO.1所示，人白蛋白成熟肽编码序列如SEQ ID NO.3所示。人蛋白二硫键异构酶信号肽编码序列如SEQ ID NO.9所示，成熟肽编码序列如SEQ ID NO.11所示。

重组工程菌V

转化的重组质粒为pPic9-HSA-PDI，结构示意图如图3所示。人白蛋白信号肽编码序列如SEQ ID NO.1所示，人白蛋白成熟肽编码序列如SEQ ID NO.3所示。人蛋白二硫键异构酶信号肽编码序列如SEQ ID NO.10所示，成熟肽编码序列如SEQ ID NO.12所示。

重组工程菌VI

分别将pPic9-HSA-PDI（结构示意图如图3所示）和pPicZA-HSA-PDI（结构示意图如图4所示）质粒分两次重组至KM71细胞基因组中，人白蛋白信号肽编码序列如SEQ ID NO.1所示，人白蛋白成熟肽编码序列如SEQ ID NO.3所示。人蛋白二硫键异构酶信号肽编码序列如SEQ ID NO.10所示，成熟肽编码序列如SEQ ID NO.12所示。

实施例4摇瓶中培养工程菌，诱导重组人白蛋白的表达

分别取各重组工程菌I、III、IV、V和VI，如表1所示。接种于40ml BMGY培养液中220rpm30℃培养过夜，取细胞液离心，将沉淀重悬于40ml BMMY培养液中，220rpm 25℃开始诱导，每24小时加入0.4%甲醇，72小时后10000rpm离心5分钟，收集上清。

将上清进行SDS-PAGE电泳检测（图谱见图5），可以观察到重组人白蛋白66.5kDa条带和45kDa降解条带。以重组工程菌I在诱导72小时后，45kDa蛋白表达量（100%）作为对照，对SDS-PAGE电泳图45kDa降解条带进行相对定量分析，结果如表2所示。

在蛋白二硫键异构酶过载表达的重组工程菌中，45kDa重组人白蛋白降解片段减少，且人蛋白二硫键异构酶过载表达的重组工程菌效果更明显。

实施例5摇瓶中培养工程菌，诱导重组人白蛋白的表达

分别取各重组工程菌I、III、IV、V和VI接种于40ml BMGY培养液中220rpm 30℃培养过夜，取细胞液离心，将沉淀重悬于40ml BMMY培养液中，220rpm 25℃开始诱导，每24小时加入0.4%甲醇，72小时后10000rpm离心5分钟，收集上清。

将上清采用兔抗HSA一抗进行western blot（图谱见图6），可以观察到66.5kDa条带和45kDa降解条带均为重组人白蛋白条带。45kDa重组人白蛋白降解片段减少，且人蛋白二硫键异构酶过载表达的重组工程菌效果更明显。

本发明涉及一种提高重组人白蛋白表达质量减少降解的物质方法和用途。在本说明书中，术语“重组人白蛋白”也可以称为“重组人血清白蛋白”和/或“重组人血白蛋白”和/或“rHA”和/或“rHSA”。术语“人血清白蛋白”是指从人血清中提取出来的人白蛋白，也可以称为“人血白蛋白”和/或“HSA”和/或“HA”和/或“pdHSA”。

人白蛋白主要的药理作用，包括调节组织与血管间水分的动态平衡，维持正常与恒定的血浆容量，同时还对某些离子和化合物有较高亲和力，与这些物质可逆结合，发挥转运功能。人白蛋白还为肌体提供了大量的氨基酸储备。由于人白蛋白的上述作用，使其可以应用于临床各学科，发挥多种治疗作用。人白蛋白临床主要用于调节血浆胶体渗透压、扩充血容量，治疗创伤性、出血性休克，严重烧伤及低蛋白血症，在中风，肝硬化肝腹水和肾病等常见疾病中都有着广泛的应用。除了直接在临床治疗领域，白蛋白还在疫苗生产所使用的培养基、药品辅料、诊断试剂、新型肿瘤长效制剂产品、化妆品、实验室生物试剂等多个方面都已经得到了极其广泛的应用。

人白蛋白的结构是一个心型结构的单链非糖基化蛋白，有585个氨基酸，17对二硫键，一个自由巯基，分子量为66438道尔顿。人白蛋白在人体中的半衰期为19~21天。人白蛋白的心形结构由三个主要结构域和六个被17个二硫键包裹的亚结构域组成，它们通过范德华力松散地结合在一起。从其晶体结构可以看出，二硫化物桥赋予螺旋状的球状结构刚度，但提供足够的灵活性，使蛋白质能够根据周围介质的变化进行构象变化。

人白蛋白常规的生产方法是从人血清中提取分离纯化出来，统称为人血清白蛋白。人血来源的人白蛋白受到血浆来源的数量限制和血浆供者的病毒污染以及个体抗体和蛋白差异的影响，其在临床使用中将存在较大的风险。因此，在很多国家的人血白蛋白使用说明书中都有病毒安全性声明，例如：“为预防因使用人血或血浆制品导致的感染所采取的标准措施包括供血者选择、单次供血的筛选或血浆池特殊感染标记的筛选及灭活/去除病毒的有效生产步骤的采用。即便如此，当选用由血液或血浆制备的医药产品时，被传染性致病因子感染的可能性不能排除。这包括了未知的或新出现的病毒和其它病原体”。因此，采用基因重组的方法是有效获取无病毒污染的白蛋白最好途径。

目前，最常用的可实现规模化生产的基因重组微生物表达人白蛋白的方式，主要是酵母表达系统，但由于酵母内源蛋白酶的表达，发现在发酵产物中存在重组人白蛋白降解片段，不仅影响了后续的纯化工作，还大大降低了蛋白表达质量。依照但不限于本发明提供的方法，在适合生产重组人白蛋白的条件下，培养酵母细胞，诱导蛋白表达，可以使重组人白蛋白质量提高，降解片段大大减少。

需要说明的是，本专利能够实现多种菌种的构建，类似的菌种也在本专利的保护范围内。

需要说明的是，本专利提供的多个方案包含本身的基本方案，相互独立，并不相互制约，但是其也可以在不冲突的情况下相互组合，达到多个效果共同实现。以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本领域的技术人员应该了解本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的范围内。

序列表

<110> 通化安睿特生物制药股份有限公司

<120> 一种提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法和用途

<160> 19

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 72

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

atgaagtggg taacctttat ttcccttctt tttctcttta gctcggctta ttccaggggt 60

gtgtttcgtc ga 72

<210> 2

<211> 72

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

atgaagtggg ttacttttat ttctttgttg tttttgtttt cttctgctta ctctagaggt 60

gtttttagaa ga 72

<210> 3

<211> 1758

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

gatgcacaca agagtgaggt tgctcatcgg tttaaagatt tgggagaaga aaatttcaaa 60

gccttggtgt tgattgcctt tgctcagtat cttcagcagt gtccatttga agatcatgta 120

aaattagtga atgaagtaac tgaatttgca aaaacatgtg ttgctgatga gtcagctgaa 180

aattgtgaca aatcacttca tacccttttt ggagacaaat tatgcacagt tgcaactctt 240

cgtgaaacct atggtgaaat ggctgactgc tgtgcaaaac aagaacctga gagaaatgaa 300

tgcttcttgc aacacaaaga tgacaaccca aacctccccc gattggtgag accagaggtt 360

gatgtgatgt gcactgcttt tcatgacaat gaagagacat ttttgaaaaa atacttatat 420

gaaattgcca gaagacatcc ttacttttat gccccggaac tccttttctt tgctaaaagg 480

tataaagctg cttttacaga atgttgccaa gctgctgata aagctgcctg cctgttgcca 540

aagctcgatg aacttcggga tgaagggaag gcttcgtctg ccaaacagag actcaagtgt 600

gccagtctcc aaaaatttgg agaaagagct ttcaaagcat gggcagtagc tcgcctgagc 660

cagagatttc ccaaagctga gtttgcagaa gtttccaagt tagtgacaga tcttaccaaa 720

gtccacacgg aatgctgcca tggagatctg cttgaatgtg ctgatgacag ggcggacctt 780

gccaagtata tctgtgaaaa tcaagattcg atctccagta aactgaagga atgctgtgaa 840

aaacctctgt tggaaaaatc ccactgcatt gccgaagtgg aaaatgatga gatgcctgct 900

gacttgcctt cattagctgc tgattttgtt gaaagtaagg atgtttgcaa aaactatgct 960

gaggcaaagg atgtcttcct gggcatgttt ttgtatgaat atgcaagaag gcatcctgat 1020

tactctgtcg tgctgctgct gagacttgcc aagacatatg aaaccactct agagaagtgc 1080

tgtgccgctg cagatcctca tgaatgctat gccaaagtgt tcgatgaatt taaacctctt 1140

gtggaagagc ctcagaattt aatcaaacaa aattgtgagc tttttgagca gcttggagag 1200

tacaaattcc agaatgcgct attagttcgt tacaccaaga aagtacccca agtgtcaact 1260

ccaactcttg tagaggtctc aagaaaccta ggaaaagtgg gcagcaaatg ttgtaaacat 1320

cctgaagcaa aaagaatgcc ctgtgcagaa gactatctat ccgtggtcct gaaccagtta 1380

tgtgtgttgc atgagaaaac gccagtaagt gacagagtca ccaaatgctg cacagaatcc 1440

ttggtgaaca ggcgaccatg cttttcagct ctggaagtcg atgaaacata cgttcccaaa 1500

gagtttaatg ctgaaacatt caccttccat gcagatatat gcacactttc tgagaaggag 1560

agacaaatca agaaacaaac tgcacttgtt gagctcgtga aacacaagcc caaggcaaca 1620

aaagagcaac tgaaagctgt tatggatgat ttcgcagctt ttgtagagaa gtgctgcaag 1680

gctgacgata aggagacctg ctttgccgag gagggtaaaa aacttgttgc tgcaagtcaa 1740

gctgccttag gcttataa 1758

<210> 4

<211> 1758

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

gatgcacaca agagtgaggt tgctcatcgg tttaaggatt tgggagaaga aaatttcaag 60

gccttggtgt tgattgcctt tgctcagtat cttcagcagt gtccatttga agatcatgta 120

aagttagtga atgaagtaac tgaatttgca aagacatgtg ttgctgatga gtcagctgaa 180

aattgtgaca agtcacttca tacccttttt ggagacaagt tatgcacagt tgcaactctt 240

cgtgaaacct atggtgaaat ggctgactgc tgtgcaaagc aagaacctga gagaaatgaa 300

tgcttcttgc aacacaagga tgacaaccca aacctcccac gattggtgag accagaggtt 360

gatgtgatgt gcactgcttt tcatgacaat gaagagacat ttttgaagaa gtacttatat 420

gaaattgcca gaagacatcc ttacttttat gccccggaac tccttttctt tgctaagagg 480

tataaggctg cttttacaga atgttgccaa gctgctgata aggctgcctg cctgttgcca 540

aagctcgatg aacttcggga tgaaggtaag gcttcgtctg ccaagcagag actcaagtgt 600

gccagtctcc aaaagtttgg agaaagagct ttcaaggcat gggcagtagc tcgcctgagc 660

cagagatttc caaaggctga gtttgcagaa gtttccaagt tagtgacaga tcttaccaag 720

gtccacacgg aatgctgcca tggagatctg cttgaatgtg ctgatgacag ggcggacctt 780

gccaagtata tctgtgaaaa tcaagattcg atctccagta agctgaagga atgctgtgaa 840

aagcctctgt tggaaaagtc ccactgcatt gccgaagtgg aaaatgatga gatgcctgct 900

gacttgcctt cattagctgc tgattttgtt gaaagtaagg atgtttgcaa gaactatgct 960

gaggcaaagg atgtcttcct gggcatgttt ttgtatgaat atgcaagaag gcatcctgat 1020

tactctgtcg tgctgctgct gagacttgcc aagacatatg aaaccactct agagaagtgc 1080

tgtgccgctg cagatcctca tgaatgctat gccaaggtgt tcgatgaatt taagcctctt 1140

gtggaagagc ctcagaattt aatcaagcaa aattgtgagc tttttgagca gcttggagag 1200

tacaagttcc agaatgcgct attagttcgt tacaccaaga aggtaccaca agtgtcaact 1260

ccaactcttg tagaggtctc aagaaaccta ggaaaggtgg gcagcaagtg ttgtaagcat 1320

cctgaagcaa agagaatgcc atgtgcagaa gactatctat ccgtggtcct gaaccagtta 1380

tgtgtgttgc atgagaagac gccagtaagt gacagagtca ccaagtgctg cacagaatcc 1440

ttggtgaaca ggcgaccatg cttttcagct ctggaagtcg atgaaacata cgttccaaag 1500

gagtttaatg ctgaaacatt caccttccat gcagatatat gcacactttc tgagaaggag 1560

agacaaatca agaagcaaac tgcacttgtt gagctcgtga agcacaagcc aaaggcaaca 1620

aaggagcaac tgaaggctgt tatggatgat ttcgcagctt ttgtagagaa gtgctgcaag 1680

gctgacgata aggagacctg ctttgccgag gagggtaaga agcttgttgc tgcaagtcaa 1740

gctgccttag gcttataa 1758

<210> 5

<211> 1758

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

gatgctcata agtctgaagt tgctcataga tttaaggatt tgggtgaaga aaactttaag 60

gctttggttt tgattgcttt tgctcaatac ttgcaacaat gtccatttga agatcatgtt 120

aagttggtta acgaagttac tgaatttgct aagacttgtg ttgctgatga atctgctgaa 180

aactgtgata agtctttgca tactttgttt ggtgataagt tgtgtactgt tgctactttg 240

agagaaactt acggtgaaat ggctgattgt tgtgctaagc aagaaccaga aagaaacgaa 300

tgttttttgc aacataagga tgataaccca aacttgccaa gattggttag accagaagtt 360

gatgttatgt gtactgcttt tcatgataac gaagaaactt ttttgaagaa gtacttgtac 420

gaaattgcta gaagacatcc atacttttac gctccagaat tgttgttttt tgctaagaga 480

tacaaggctg cttttactga atgttgtcaa gctgctgata aggctgcttg tttgttgcca 540

aagttggatg aattgagaga tgaaggtaag gcttcttctg ctaagcaaag attgaagtgt 600

gcttctttgc aaaagtttgg tgaaagagct tttaaggctt gggctgttgc tagattgtct 660

caaagatttc caaaggctga atttgctgaa gtttctaagt tggttactga tttgactaag 720

gttcatactg aatgttgtca tggtgatttg ttggaatgtg ctgatgatag agctgatttg 780

gctaagtaca tttgtgaaaa ccaagattct atttcttcta agttgaagga atgttgtgaa 840

aagccattgt tggaaaagtc tcattgtatt gctgaagttg aaaacgatga aatgccagct 900

gatttgccat ctttggctgc tgattttgtt gaatctaagg atgtttgtaa gaactacgct 960

gaagctaagg atgttttttt gggtatgttt ttgtacgaat acgctagaag acatccagat 1020

tactctgttg ttttgttgtt gagattggct aagacttacg aaactacttt ggaaaagtgt 1080

tgtgctgctg ctgatccaca tgaatgttac gctaaggttt ttgatgaatt taagccattg 1140

gttgaagaac cacaaaactt gattaagcaa aactgtgaat tgtttgaaca attgggtgaa 1200

tacaagtttc aaaacgcttt gttggttaga tacactaaga aggttccaca agtttctact 1260

ccaactttgg ttgaagtttc tagaaacttg ggtaaggttg gttctaagtg ttgtaagcat 1320

ccagaagcta agagaatgcc atgtgctgaa gattacttgt ctgttgtttt gaaccaattg 1380

tgtgttttgc atgaaaagac tccagtttct gatagagtta ctaagtgttg tactgaatct 1440

ttggttaaca gaagaccatg tttttctgct ttggaagttg atgaaactta cgttccaaag 1500

gaatttaacg ctgaaacttt tacttttcat gctgatattt gtactttgtc tgaaaaggaa 1560

agacaaatta agaagcaaac tgctttggtt gaattggtta agcataagcc aaaggctact 1620

aaggaacaat tgaaggctgt tatggatgat tttgctgctt ttgttgaaaa gtgttgtaag 1680

gctgatgata aggaaacttg ttttgctgaa gaaggtaaga agttggttgc tgcttctcaa 1740

gctgctttgg gtttgtaa 1758

<210> 6

<211> 66

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

atgcaattca actggaatat taaaactgtg gcaagtattt tgtccgctct cacactagca 60

caagca 66

<210> 7

<211> 1488

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

agtgatcagg aggctattgc tccagaggac tctcatgtcg tcaaattgac tgaagccact 60

tttgagtctt tcatcaccag taatcctcac gttttggcag agttttttgc cccttggtgt 120

ggtcactgta agaagttggg ccctgaactt gtttctgctg ccgagatctt aaaggacaat 180

gagcaggtta agattgctca aattgattgt acggaggaga aggaattatg tcaaggctac 240

gaaattaaag ggtatcctac tttgaaggtg ttccatggtg aggttgaggt cccaagtgac 300

tatcaaggtc aaagacagag ccaaagcatt gtcagctata tgctaaagca gagtttaccc 360

cctgtcagtg aaatcaatgc aaccaaagat ttagacgaca caatcgccga ggcaaaagag 420

cccgtgattg tgcaagtact accggaagat gcatccaact tggaatctaa caccacattt 480

tacggagttg ccggtactct cagagagaaa ttcacttttg tctccactaa gtctactgat 540

tatgccaaaa aatacactag cgactcgact cctgcctatt tgcttgtcag acctggcgag 600

gaacctagtg tttactctgg tgaggagtta gatgagactc atttggtgca ctggattgat 660

attgagtcca aacctctatt tggagacatt gacggatcca ccttcaaatc atatgctgaa 720

gctaacatcc ctttagccta ctatttctat gagaacgaag aacaacgtgc tgctgctgcc 780

gatattatta aaccttttgc taaagagcaa cgtggcaaaa ttaactttgt tggcttagat 840

gccgttaaat tcggtaagca tgccaagaac ttaaacatgg atgaagagaa actccctcta 900

tttgtcattc atgatttggt gagcaacaag aagtttggag ttcctcaaga ccaagaattg 960

acgaacaaag atgtgaccga gctgattgag aaattcatcg caggagaggc agaaccaatt 1020

gtgaaatcag agccaattcc agaaattcaa gaagagaaag tcttcaagct agtcggaaag 1080

gcccacgatg aagttgtctt cgatgaatct aaagatgttc tagtcaagta ctacgcccct 1140

tggtgtggtc actgtaagag aatggctcct gcttatgagg aattggctac tctttacgcc 1200

aatgatgagg atgcctcttc aaaggttgtg attgcaaaac ttgatcacac tttgaacgat 1260

gtcgacaacg ttgatattca aggttatcct actttgatcc tttatccagc tggtgataaa 1320

tccaatcctc aactgtatga tggatctcgt gacctagaat cattggctga gtttgtaaag 1380

gagagaggaa cccacaaagt ggatgcccta gcactcagac cagtcgagga agaaaaggaa 1440

gctgaagaag aagctgaaag tgaggcagac gctcacgacg agctttaa 1488

<210> 8

<211> 57

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

atgagattcc catccatctt cactgctgtt ttgttcgctg cttcttctgc tttggct 57

<210> 9

<211> 51

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

atgctgcgcc gcgctctgct gtgcctggcc gtggccgccc tggtgcgcgc c 51

<210> 10

<211> 51

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

atgttgagaa gagctttgtt gtgtttggct gttgctgctt tggttagagc t 51

<210> 11

<211> 1476

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

gacgcccccg aggaggagga ccacgtcctg gtgctgcgga aaagcaactt cgcggaggcg 60

ctggcggccc acaagtacct gctggtggag ttctatgccc cttggtgtgg ccactgcaag 120

gctctggccc ctgagtatgc caaagccgct gggaagctga aggcagaagg ttccgagatc 180

aggttggcca aggtggacgc cacggaggag tctgacctgg cccagcagta cggcgtgcgc 240

ggctatccca ccatcaagtt cttcaggaat ggagacacgg cttcccccaa ggaatataca 300

gctggcagag aggctgatga catcgtgaac tggctgaaga agcgcacggg cccggctgcc 360

accaccctgc ctgacggcgc agctgcagag tccttggtgg agtccagcga ggtggctgtc 420

atcggcttct tcaaggacgt ggagtcggac tctgccaagc agtttttgca ggcagcagag 480

gccatcgatg acataccatt tgggatcact tccaacagtg acgtgttctc caaataccag 540

ctcgacaaag atggggttgt cctctttaag aagtttgatg aaggccggaa caactttgaa 600

ggggaggtca ccaaggagaa cctgctggac tttatcaaac acaaccagct gccccttgtc 660

atcgagttca ccgagcagac agccccgaag atttttggag gtgaaatcaa gactcacatc 720

ctgctgttct tgcccaagag tgtgtctgac tatgacggca aactgagcaa cttcaaaaca 780

gcagccgaga gcttcaaggg caagatcctg ttcatcttca tcgacagcga ccacaccgac 840

aaccagcgca tcctcgagtt ctttggcctg aagaaggaag agtgcccggc cgtgcgcctc 900

atcaccctgg aggaggagat gaccaagtac aagcccgaat cggaggagct gacggcagag 960

aggatcacag agttctgcca ccgcttcctg gagggcaaaa tcaagcccca cctgatgagc 1020

caggagctgc cggaggactg ggacaagcag cctgtcaagg tgcttgttgg gaagaacttt 1080

gaagacgtgg cttttgatga gaaaaaaaac gtctttgtgg agttctatgc cccatggtgt 1140

ggtcactgca aacagttggc tcccatttgg gataaactgg gagagacgta caaggaccat 1200

gagaacatcg tcatcgccaa gatggactcg actgccaacg aggtggaggc cgtcaaagtg 1260

cacagcttcc ccacactcaa gttctttcct gccagtgccg acaggacggt cattgattac 1320

aacggggaac gcacgctgga tggttttaag aaattcctgg agagcggtgg ccaggatggg 1380

gcaggggatg atgacgatct cgaggacctg gaagaagcag aggagccaga catggaggaa 1440

gacgatgatc agaaagctgt gaaagatgaa ctgtaa 1476

<210> 12

<211> 1476

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

gacgccccag aggaggagga ccacgtcctg gtgctgcgga agagcaactt cgcggaggcg 60

ctggcggccc acaagtacct gctggtggag ttctatgccc cttggtgtgg ccactgcaag 120

gctctggccc ctgagtatgc caaggccgct ggtaagctga aggcagaagg ttccgagatc 180

aggttggcca aggtggacgc cacggaggag tctgacctgg cccagcagta cggcgtgcgc 240

ggctatccaa ccatcaagtt cttcaggaat ggagacacgg cttccccaaa ggaatataca 300

gctggcagag aggctgatga catcgtgaac tggctgaaga agcgcacggg cccggctgcc 360

accaccctgc ctgacggcgc agctgcagag tccttggtgg agtccagcga ggtggctgtc 420

atcggcttct tcaaggacgt ggagtcggac tctgccaagc agtttttgca ggcagcagag 480

gccatcgatg acataccatt tggtatcact tccaacagtg acgtgttctc caagtaccag 540

ctcgacaagg atggtgttgt cctctttaag aagtttgatg aaggccggaa caactttgaa 600

ggtgaggtca ccaaggagaa cctgctggac tttatcaagc acaaccagct gccacttgtc 660

atcgagttca ccgagcagac agccccgaag atttttggag gtgaaatcaa gactcacatc 720

ctgctgttct tgccaaagag tgtgtctgac tatgacggca agctgagcaa cttcaagaca 780

gcagccgaga gcttcaaggg caagatcctg ttcatcttca tcgacagcga ccacaccgac 840

aaccagcgca tcctcgagtt ctttggcctg aagaaggaag agtgcccggc cgtgcgcctc 900

atcaccctgg aggaggagat gaccaagtac aagccagaat cggaggagct gacggcagag 960

aggatcacag agttctgcca ccgcttcctg gagggcaaga tcaagccaca cctgatgagc 1020

caggagctgc cggaggactg ggacaagcag cctgtcaagg tgcttgttgg taagaacttt 1080

gaagacgtgg cttttgatga gaagaagaac gtctttgtgg agttctatgc cccatggtgt 1140

ggtcactgca agcagttggc tccaatttgg gataagctgg gagagacgta caaggaccat 1200

gagaacatcg tcatcgccaa gatggactcg actgccaacg aggtggaggc cgtcaaggtg 1260

cacagcttcc caacactcaa gttctttcct gccagtgccg acaggacggt cattgattac 1320

aacggtgaac gcacgctgga tggttttaag aagttcctgg agagcggtgg ccaggatggt 1380

gcaggtgatg atgacgatct cgaggacctg gaagaagcag aggagccaga catggaggaa 1440

gacgatgatc agaaggctgt gaaggatgaa ctgtaa 1476

<210> 13

<211> 1476

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 13

gatgctccag aagaagaaga tcatgttttg gttttgagaa agtctaactt tgctgaagct 60

ttggctgctc ataagtactt gttggttgaa ttttacgctc catggtgtgg tcattgtaag 120

gctttggctc cagaatacgc taaggctgct ggtaagttga aggctgaagg ttctgaaatt 180

agattggcta aggttgatgc tactgaagaa tctgatttgg ctcaacaata cggtgttaga 240

ggttacccaa ctattaagtt ttttagaaac ggtgatactg cttctccaaa ggaatacact 300

gctggtagag aagctgatga tattgttaac tggttgaaga agagaactgg tccagctgct 360

actactttgc cagatggtgc tgctgctgaa tctttggttg aatcttctga agttgctgtt 420

attggttttt ttaaggatgt tgaatctgat tctgctaagc aatttttgca agctgctgaa 480

gctattgatg atattccatt tggtattact tctaactctg atgttttttc taagtaccaa 540

ttggataagg atggtgttgt tttgtttaag aagtttgatg aaggtagaaa caactttgaa 600

ggtgaagtta ctaaggaaaa cttgttggat tttattaagc ataaccaatt gccattggtt 660

attgaattta ctgaacaaac tgctccaaag atttttggtg gtgaaattaa gactcatatt 720

ttgttgtttt tgccaaagtc tgtttctgat tacgatggta agttgtctaa ctttaagact 780

gctgctgaat cttttaaggg taagattttg tttattttta ttgattctga tcatactgat 840

aaccaaagaa ttttggaatt ttttggtttg aagaaggaag aatgtccagc tgttagattg 900

attactttgg aagaagaaat gactaagtac aagccagaat ctgaagaatt gactgctgaa 960

agaattactg aattttgtca tagatttttg gaaggtaaga ttaagccaca tttgatgtct 1020

caagaattgc cagaagattg ggataagcaa ccagttaagg ttttggttgg taagaacttt 1080

gaagatgttg cttttgatga aaagaagaac gtttttgttg aattttacgc tccatggtgt 1140

ggtcattgta agcaattggc tccaatttgg gataagttgg gtgaaactta caaggatcat 1200

gaaaacattg ttattgctaa gatggattct actgctaacg aagttgaagc tgttaaggtt 1260

cattcttttc caactttgaa gttttttcca gcttctgctg atagaactgt tattgattac 1320

aacggtgaaa gaactttgga tggttttaag aagtttttgg aatctggtgg tcaagatggt 1380

gctggtgatg atgatgattt ggaagatttg gaagaagctg aagaaccaga tatggaagaa 1440

gatgatgatc aaaaggctgt taaggatgaa ttgtaa 1476

<210> 14

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 14

atgaagtggg taacctttat ttcccttctt 30

<210> 15

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 15

taagcctaag gcagcttgac ttgcagc 27

<210> 16

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 16

ctatcgcttc tgaaccccgg tgcacctgtg ccgaaacgc 39

<210> 17

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 17

cgactggtct gagtgctagg gcatccactt tgtgggttcc 40

<210> 18

<211> 37

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 18

gctgaaggca gaaggttccg agatcaggtt ggccaag 37

<210> 19

<211> 38

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 19

ggctcctctg cttcttcgag gtcctcgagg tcgtcaac 38

Claims

1.一种提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法，其特征在于，通过在重组宿主细胞中过载表达蛋白二硫键异构酶，从而帮助减少蛋白分泌途径中被错误剪切，降低蛋白降解，提高外源蛋白表达质量。

2.一种提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法，其特征在于，实现步骤其包含：

编码至少一个重组人白蛋白的宿主细胞；

过载表达蛋白二硫键异构酶的宿主细胞。

3.如权利要求2所述的一种提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法，其特征在于，所述的宿主细胞为酵母细胞。

4.如权利要求2所述的一种提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法，其特征在于，所述的酵母细胞为如下酵母属的一种或者多种：汉逊酵母属（Hansenula）、毕赤酵母属(Pichia)和假丝酵母属(Candida)。

5.如权利要求4所述的一种提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法，其特征在于，所述的毕赤酵母属的细胞是巴斯德毕赤酵母细胞（Pichia pastoris）。

6.如权利要求2所述的一种提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法，其特征在于，编码蛋白二硫键异构酶的内源基因是经遗传修饰的或未经遗传修饰的。

7.如权利要求2-6任意所述的一种提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法，其特征在于，编码人白蛋白基因和蛋白二硫键异构酶基因的重组表达盒是在一个核酸构建体上或在两个不同选择标志的核酸构建体上。

8.如权利要求7所述的一种提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法，其特征在于，所述核酸构建体包括但不限于pHIL-D2、pPIC3.5、pHIL-S1、pPIC9、pPink-LC、pPink-HC、pPICZA、pPICZB、pPICZC、pPICZaA、pPICZaB和pPICZaC质粒。

9.如权利要求8所述的一种提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法，其特征在于，重组启动子包括但不限于AOX1启动子、GAP启动子、GAL启动子、FDH启动子和FLD启动子。

10.如权利要求8所述的一种提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法，其特征在于，宿主细胞中编码至少一个重组启动子修饰的人白蛋白。

11.如权利要求10所述的一种提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法，序列优选为包含至少一个选自SEQ ID NO.5所示优选序列的核苷酸交换：

优选序列1（4-6）： GCT 优选序列2（7-9）： CAT 优选序列3（13-15）： TCT 优选序列4（16-18）： GAA 优选序列5（28-30）： AGA 优选序列6（34-36）： AAG 优选序列7（43-45）： GGT 优选序列8（52-54）： AAC 优选序列9（55-57）： TTT 优选序列10（58-60）： AAG 优选序列11（61-63）： GCT 优选序列12（67-69）： GTT 优选序列13（76-78）： GCT 优选序列14（85-87）： CAA 优选序列15（88-90）： TAC 优选序列16（91-93）： TTG 优选序列17（94-96）： CAA 优选序列18（97-99）： CAA 优选序列19（118-120）： GTT 优选序列20（121-123）： AAG 优选序列21（124-126）： TTG 优选序列22（127-129）： GTT 优选序列23（130-132）： AAC 优选序列24（136-138）： GTT 优选序列25（148-150）： GCT 优选序列26（151-153）： AAG 优选序列27（154-156）： ACT 优选序列28（169-171）： GAA 优选序列29（172-174）： TCT 优选序列30（181-183）： AAC 优选序列31（187-189）： GAT 优选序列32（190-192）： AAG 优选序列33（193-195）： TCT 优选序列34（196-198）： TTG 优选序列35（202-204）： ACT 优选序列36（205-207）： TTG 优选序列37（211-213）： GGT 优选序列38（214-216）： GAT 优选序列39（217-219）： AAG 优选序列40（220-222）： TTG 优选序列41（223-225）： TGT 优选序列42（226-228）： ACT 优选序列43（232-234）： GCT 优选序列44（238-240）： TTG 优选序列45（241-243）： AGA 优选序列46（247-249）： ACT 优选序列47（250-252）： TAC 优选序列48（265-267）： GAT 优选序列49（268-270）： TGT 优选序列50（274-276）： GCT 优选序列51（277-279）： AAG 优选序列52（286-288）： CCA 优选序列53（289-291）： GAA 优选序列54（295-297）： AAC 优选序列55（301-303）： TGT 优选序列56（304-306）： TTT 优选序列57（313-315）： CAT 优选序列58（316-318）： AAG 优选序列59（322-324）： GAT 优选序列60（334-336）： TTG 优选序列61（337-339）： CCA 优选序列62（340-342）： AGA 优选序列63（346-348）： GTT 优选序列64（355-357）： GAA 优选序列65（364-366）： GTT 优选序列66（370-372）： TGT 优选序列67（385-387）： GAT 优选序列68（388-390）： AAC 优选序列69（394-396）： GAA 优选序列70（397-399）： ACT 优选序列71（406-408）： AAG 优选序列72（409-411）： AAG 优选序列73（415-417）： TTG 优选序列74（418-420）： TAC 优选序列75（427-429）： GCT 优选序列76（439-441）： CCA 优选序列77（448-450）： TAC 优选序列78（451-453）： GCT 优选序列79（454-456）： CCA 优选序列80（460-462）： TTG 优选序列81（463-465）： TTG 优选序列82（466-468）： TTT 优选序列83（475-477）： AAG 优选序列84（478-480）： AGA 优选序列85（481-483）： TAC 优选序列86（484-486）： AAG 优选序列87（496-498）： ACT 优选序列88（505-507）： TGT 优选序列89（520-522）： AAG 优选序列90（526-528）： GCT 优选序列91（529-531）： TGT 优选序列92（532-534）： TTG 优选序列93（544-546）： TTG 优选序列94（553-555）： TTG 优选序列95（556-558）： AGA 优选序列96（565-567）： GGT 优选序列97（574-576）： TCT 优选序列98（580-582）： GCT 优选序列99（583-585）： AAG 优选序列100（586-588）： CAA 优选序列101（592-594）： TTG 优选序列102（601-603）： GCT 优选序列103（604-606）： TCT 优选序列104（607-609）： TTG 优选序列105（613-615）： AAG 优选序列106（619-621）： GGT 优选序列107（631-633）： TTT 优选序列108（634-636）： AAG 优选序列109（637-639）： GCT 优选序列110（643-645）： GCT 优选序列111（646-648）： GTT 优选序列112（652-654）： AGA 优选序列113（655-657）： TTG 优选序列114（658-660）： TCT 优选序列115（661-663）： CAA 优选序列116（670-672）： CCA 优选序列117（673-675）： AAG 优选序列118（679-681）： GAA 优选序列119（685-687）： GCT 优选序列120（694-696）： TCT 优选序列121（700-702）： TTG 优选序列122（703-705）： GTT 优选序列123（706-708）： ACT 优选序列124（712-714）： TTG 优选序列125（715-717）： ACT 优选序列126（718-720）： AAG 优选序列127（721-723）： GTT 优选序列128（724-726）： CAT 优选序列129（727-729）： ACT 优选序列130（733-735）： TGT 优选序列131（736-738）： TGT 优选序列132（742-744）： GGT 优选序列133（748-750）： TTG 优选序列134（751-753）： TTG 优选序列135（766-768）： GAT 优选序列136（769-771）： AGA 优选序列137（772-774）： GCT 优选序列138（775-777）： GAT 优选序列139（778-780）： TTG 优选序列140（781-783）： GCT 优选序列141（787-789）： TAC 优选序列142（790-792）： ATT 优选序列143（799-801）： AAC 优选序列144（808-810）： TCT 优选序列145（811-813）： ATT 优选序列146（814-816）： TCT 优选序列147（817-819）： TCT 优选序列148（820-822）： AAG 优选序列149（823-825）： TTG 优选序列150（832-834）： TGT 优选序列151（841-843）： AAG 优选序列152（844-846）： CCA 优选序列153（847-849）： TTG 优选序列154（856-858）： AAG 优选序列155（859-861）： TCT 优选序列156（862-864）： CAT 优选序列157（865-867）： TGT 优选序列158（871-873）： GCT 优选序列159（877-879）： GTT 优选序列160（883-885）： AAC 优选序列161（889-891）： GAA 优选序列162（895-897）： CCA 优选序列163（901-903）： GAT 优选序列164（907-909）： CCA 优选序列165（910-912）： TCT 优选序列166（913-915）： TTG 优选序列167（934-936）： TCT 优选序列168（946-948）： TGT 优选序列169（949-951）： AAG 优选序列170（955-957）： TAC 优选序列171（961-963）： GAA 优选序列172（964-966）： GCT 优选序列173（973-975）： GTT 优选序列174（976-978）： TTT 优选序列175（979-981）： TTG 优选序列176（982-984）： GGT 优选序列177（994-996）： TAC 优选序列178（1000-1002）： TAC 优选序列179（1003-1005）： GCT 优选序列180（1009-1011）： AGA 优选序列181（1015-1017）： CCA 优选序列182（1027-1029）： GTT 优选序列183（1030-1032）： GTT 优选序列184（1033-1035）： TTG 优选序列185（1036-1038）： TTG 优选序列186（1039-1041）： TTG 优选序列187（1045-1047）： TTG 优选序列188（1048-1050）： GCT 优选序列189（1054-1056）： ACT 优选序列190（1057-1059）： TAC 优选序列191（1063-1065）： ACT 优选序列192（1069-1071）： TTG 优选序列193（1072-1074）： GAA 优选序列194（1078-1080）： TGT 优选序列195（1084-1086）： GCT 优选序列196（1090-1092）： GCT 优选序列197（1096-1098）： CCA 优选序列198（1105-1107）： TGT 优选序列199（1108-1110）： TAC 优选序列200（1111-1113）： GCT 优选序列201（1114-1116）： AAG 优选序列202（1117-1119）： GTT 优选序列203（1120-1122）： TTT 优选序列204（1132-1134）： AAG 优选序列205（1135-1137）： CCA 优选序列206（1138-1140）： TTG 优选序列207（1141-1143）： GTT 优选序列208（1147-1149）： GAA 优选序列209（1150-1152）： CCA 优选序列210（1153-1155）： CAA 优选序列211（1156-1158）： AAC 优选序列212（1159-1161）： TTG 优选序列213（1162-1164）： ATT 优选序列214（1165-1167）： AAG 优选序列215（1171-1173）： AAC 优选序列216（1177-1179）： GAA 优选序列217（1180-1182）： TTG 优选序列218（1186-1188）： GAA 优选序列219（1189-1191）： CAA 优选序列220（1192-1194）： TTG 优选序列221（1195-1197）： GGT 优选序列222（1198-1200）： GAA 优选序列223（1204-1206）： AAG 优选序列224（1207-1209）： TTT 优选序列225（1210-1212）： CAA 优选序列226（1213-1215）： AAC 优选序列227（1216-1218）： GCT 优选序列228（1219-1221）： TTG 优选序列229（1222-1224）： TTG 优选序列230（1228-1230）： AGA 优选序列231（1234-1236）： ACT 优选序列232（1240-1242）： AAG 优选序列233（1243-1245）： GTT 优选序列234（1246-1248）： CCA 优选序列235（1252-1254）： GTT 优选序列236（1255-1257）： TCT 优选序列237（1267-1269）： TTG 优选序列238（1270-1272）： GTT 优选序列239（1273-1275）： GAA 优选序列240（1276-1278）： GTT 优选序列241（1279-1281）： TCT 优选序列242（1288-1290）： TTG 优选序列243（1291-1293）： GGT 优选序列244（1294-1296）： AAG 优选序列245（1297-1299）： GTT 优选序列246（1300-1302）： GGT 优选序列247（1303-1305）： TCT 优选序列248（1306-1308）： AAG 优选序列249（1315-1317）： AAG 优选序列250（1321-1323）： CCA 优选序列251（1327-1329）： GCT 优选序列252（1330-1332）： AAG 优选序列253（1339-1341）： CCA 优选序列254（1345-1347）： GCT 优选序列255（1351-1353）： GAT 优选序列256（1354-1356）： TAC 优选序列257（1357-1359）： TTG 优选序列258（1360-1362）： TCT 优选序列259（1363-1365）： GTT 优选序列260（1366-1368）： GTT 优选序列261（1369-1371）： TTG 优选序列262（1375-1377）： CAA 优选序列263（1378-1380）： TTG 优选序列264（1384-1386）： GTT 优选序列265（1393-1395）： GAA 优选序列266（1396-1398）： AAG 优选序列267（1399-1401）： ACT 优选序列268（1405-1407）： GTT 优选序列269（1408-1410）： TCT 优选序列270（1411-1413）： GAT 优选序列271（1417-1419）： GTT 优选序列272（1420-1422）： ACT 优选序列273（1423-1425）： AAG 优选序列274（1426-1428）： TGT 优选序列275（1429-1431）： TGT 优选序列276（1432-1434）： ACT 优选序列277（1438-1440）： TCT 优选序列278（1444-1446）： GTT 优选序列279（1450-1452）： AGA 优选序列280（1453-1455）： AGA 优选序列281（1459-1461）： TGT 优选序列282（1465-1467）： TCT 优选序列283（1471-1473）： TTG 优选序列284（1477-1479）： GTT 优选序列285（1486-1488）： ACT 优选序列286（1495-1497）： CCA 优选序列287（1498-1500）： AAG 优选序列288（1501-1503）： GAA 优选序列289（1507-1509）： AAC 优选序列290（1516-1518）： ACT 优选序列291（1519-1521）： TTT 优选序列292（1522-1524）： ACT 优选序列293（1525-1527）： TTT 优选序列294（1531-1533）： GCT 优选序列295（1537-1539）： ATT 优选序列296（1540-1542）： TGT 优选序列297（1543-1545）： ACT 优选序列298（1546-1548）： TTG 优选序列299（1552-1554）： GAA 优选序列300（1558-1560）： GAA 优选序列301（1567-1569）： ATT 优选序列302（1573-1575）： AAG 优选序列303（1582-1584）： GCT 优选序列304（1585-1587）： TTG 优选序列305（1591-1593）： GAA 优选序列306（1594-1596）： TTG 优选序列307（1597-1599）： GTT 优选序列308（1600-1602）： AAG 优选序列309（1603-1605）： CAT 优选序列310（1609-1611）： CCA 优选序列311（1615-1617）： GCT 优选序列312（1618-1620）： ACT 优选序列313（1621-1623）： AAG 优选序列314（1624-1626）： GAA 优选序列315（1630-1632）： TTG 优选序列316（1633-1635）： AAG 优选序列317（1651-1653）： TTT 优选序列318（1654-1656）： GCT 优选序列319（1663-1665）： GTT 优选序列320（1666-1668）： GAA 优选序列321（1672-1674）： TGT 优选序列322（1675-1677）： TGT 优选序列323（1684-1686）： GAT 优选序列324（1693-1695）： GAA 优选序列325（1696-1698）： ACT 优选序列326（1699-1701）： TGT 优选序列327（1705-1707）： GCT 优选序列328（1708-1710）： GAA 优选序列329（1711-1713）： GAA 优选序列330（1717-1719）： AAG 优选序列331（1720-1722）： AAG 优选序列332（1723-1725）： TTG 优选序列333（1732-1734）： GCT 优选序列334（1735-1737）： TCT 优选序列335（1744-1746）： GCT 优选序列336（1747-1749）： TTG 优选序列337（1750-1752）： GGT 优选序列338（1753-1755）： TTG

。

12.如权利要求2所述的一种提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法，其特征在于，所述重组细胞中重组启动子修饰的蛋白二硫键异构酶过载表达。

13.如权利要求2所述的一种提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法，其特征在于，所述蛋白二硫键异构酶是酵母PDI或者人PDI。

14.如权利要求13所述的一种提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法，其特征在于，人蛋白二硫键异构酶，序列优选为包含至少一个选自SEQ ID NO.13所示优选序列的核苷酸交换：

人蛋白二硫键异构酶成熟肽优选序列：

优选序列1：（1-3） GAT 优选序列2：（4-6） GCT 优选序列3：（7-9） CCA 优选序列4：（10-12） GAA 优选序列5：（13-15） GAA 优选序列6：（16-18） GAA 优选序列7：（19-21） GAT 优选序列8：（22-24） CAT 优选序列9：（25-27） GTT 优选序列10：（28-30） TTG 优选序列11：（31-33） GTT 优选序列12：（34-36） TTG 优选序列13：（37-39） AGA 优选序列14：（40-42） AAG 优选序列15：（43-45） TCT 优选序列16：（49-51） TTT 优选序列17：（52-54） GCT 优选序列18：（55-57） GAA 优选序列19：（58-60） GCT 优选序列20：（61-63） TTG 优选序列21：（64-66） GCT 优选序列22：（67-69） GCT 优选序列23：（70-72） CAT 优选序列24：（79-81） TTG 优选序列25：（82-84） TTG 优选序列26：（85-87） GTT 优选序列27：（88-90） GAA 优选序列28：（91-93） TTT 优选序列29：（94-96） TAC 优选序列30：（97-99） GCT 优选序列31：（100-102） CCA 优选序列32：（109-111） GGT 优选序列33：（112-114） CAT 优选序列34：（115-117） TGT 优选序列35：（124-126） TTG 优选序列36：（127-129） GCT 优选序列37：（130-132） CCA 优选序列38：（133-135） GAA 优选序列39：（136-138） TAC 优选序列40：（139-141） GCT 优选序列41：（142-144） AAG 优选序列42：（145-147） GCT 优选序列43：（151-153） GGT 优选序列44：（157-159） TTG 优选序列45：（163-165） GCT 优选序列46：（172-174） TCT 优选序列47：（175-177） GAA 优选序列48：（178-180） ATT 优选序列49：（181-183） AGA 优选序列50：（187-189） GCT 优选序列51：（193-195） GTT 优选序列52：（196-198） GAT 优选序列53：（199-201） GCT 优选序列54：（202-204） ACT 优选序列55：（205-207） GAA 优选序列56：（208-210） GAA 优选序列57：（214-216） GAT 优选序列58：（217-219） TTG 优选序列59：（220-222） GCT 优选序列60：（223-225） CAA 优选序列61：（226-228） CAA 优选序列62：（232-234） GGT 优选序列63：（235-237） GTT 优选序列64：（238-240） AGA 优选序列65：（241-243） GGT 优选序列66：（244-246） TAC 优选序列67：（247-249） CCA 优选序列68：（250-252） ACT 优选序列69：（253-255） ATT 优选序列70：（259-261） TTT 优选序列71：（262-264） TTT 优选序列72：（265-267） AGA 优选序列73：（268-270） AAC 优选序列74：（271-273） GGT 优选序列75：（274-276） GAT 优选序列76：（277-279） ACT 优选序列77：（283-285） TCT 优选序列78：（286-288） CCA 优选序列79：（295-297） TAC 优选序列80：（298-300） ACT 优选序列81：（304-306） GGT 优选序列82：（310-312） GAA 优选序列83：（319-321） GAT 优选序列84：（322-324） ATT 优选序列85：（325-327） GTT 优选序列86：（334-336） TTG 优选序列87：（343-345） AGA 优选序列88：（346-348） ACT 优选序列89：（349-351） GGT 优选序列90：（352-354） CCA 优选序列91：（358-360） GCT 优选序列92：（361-363） ACT 优选序列93：（364-366） ACT 优选序列94：（367-369） TTG 优选序列95：（370-372） CCA 优选序列96：（373-375） GAT 优选序列97：（376-378） GGT 优选序列98：（379-381） GCT 优选序列99：（385-387） GCT 优选序列100：（388-390） GAA 优选序列101：（391-393） TCT 优选序列102：（397-399） GTT 优选序列103：（400-402） GAA 优选序列104：（403-405） TCT 优选序列105：（406-408） TCT 优选序列106：（409-411） GAA 优选序列107：（412-414） GTT 优选序列108：（418-420） GTT 优选序列109：（421-423） ATT 优选序列110：（424-426） GGT 优选序列111：（427-429） TTT 优选序列112：（430-432） TTT 优选序列113：（436-438） GAT 优选序列114：（439-441） GTT 优选序列115：（442-444） GAA 优选序列116：（445-447） TCT 优选序列117：（448-450） GAT 优选序列118：（454-456） GCT 优选序列119：（460-462） CAA 优选序列120：（469-471） CAA 优选序列121：（472-474） GCT 优选序列122：（475-477） GCT 优选序列123：（478-480） GAA 优选序列124：（481-483） GCT 优选序列125：（484-486） ATT 优选序列126：（490-492） GAT 优选序列127：（493-495） ATT 优选序列128：（502-504） GGT 优选序列129：（505-507） ATT 优选序列130：（511-513） TCT 优选序列131：（517-519） TCT 优选序列132：（520-522） GAT 优选序列133：（523-525） GTT 优选序列134：（526-528） TTT 优选序列135：（529-531） TCT 优选序列136：（532-534） AAG 优选序列137：（538-540） CAA 优选序列138：（541-543） TTG 优选序列139：（544-546） GAT 优选序列140：（547-549） AAG 优选序列141：（553-555） GGT 优选序列142：（559-561） GTT 优选序列143：（562-564） TTG 优选序列144：（583-585） GGT 优选序列145：（586-588） AGA 优选序列146：（601-603） GGT 优选序列147：（604-606） GAA 优选序列148：（607-609） GTT 优选序列149：（610-612） ACT 优选序列150：（616-618） GAA 优选序列151：（622-624） TTG 优选序列152：（625-627） TTG 优选序列153：（628-630） GAT 优选序列154：（634-636） ATT 优选序列155：（637-639） AAG 优选序列156：（640-642） CAT 优选序列157：（646-648） CAA 优选序列158：（649-651） TTG 优选序列159：（652-654） CCA 优选序列160：（655-657） TTG 优选序列161：（658-660） GTT 优选序列162：（661-663） ATT 优选序列163：（664-666） GAA 优选序列164：（667-669） TTT 优选序列165：（670-672） ACT 优选序列166：（673-675） GAA 优选序列167：（676-678） CAA 优选序列168：（679-681） ACT 优选序列169：（682-684） GCT 优选序列170：（685-687） CCA 优选序列171：（697-699） GGT 优选序列172：（706-708） ATT 优选序列173：（715-717） CAT 优选序列174：（718-720） ATT 优选序列175：（721-723） TTG 优选序列176：（724-726） TTG 优选序列177：（727-729） TTT 优选序列178：（733-735） CCA 优选序列179：（739-741） TCT 优选序列180：（742-744） GTT 优选序列181：（748-750） GAT 优选序列182：（751-753） TAC 优选序列183：（754-756） GAT 优选序列184：（757-759） GGT 优选序列185：（760-762） AAG 优选序列186：（763-765） TTG 优选序列187：（766-768） TCT 优选序列188：（772-774） TTT 优选序列189：（775-777） AAG 优选序列190：（778-780） ACT 优选序列191：（781-783） GCT 优选序列192：（784-786） GCT 优选序列193：（787-789） GAA 优选序列194：（790-792） TCT 优选序列195：（793-795） TTT 优选序列196：（799-801） GGT 优选序列197：（805-807） ATT 优选序列198：（808-810） TTG 优选序列199：（811-813） TTT 优选序列200：（814-816） ATT 优选序列201：（817-819） TTT 优选序列202：（820-822） ATT 优选序列203：（823-825） GAT 优选序列204：（826-828） TCT 优选序列205：（829-831） GAT 优选序列206：（832-834） CAT 优选序列207：（835-837） ACT 优选序列208：（838-840） GAT 优选序列209：（844-846） CAA 优选序列210：（847-849） AGA 优选序列211：（850-852） ATT 优选序列212：（853-855） TTG 优选序列213：（856-858） GAA 优选序列214：（859-861） TTT 优选序列215：（865-867） GGT 优选序列216：（868-870） TTG 优选序列217：（880-882） GAA 优选序列218：（883-885） TGT 优选序列219：（886-888） CCA 优选序列220：（889-891） GCT 优选序列221：（892-894） GTT 优选序列222：（895-897） AGA 优选序列223：（898-900） TTG 优选序列224：（901-903） ATT 优选序列225：（904-906） ACT 优选序列226：（907-909） TTG 优选序列227：（910-912） GAA 优选序列228：（913-915） GAA 优选序列229：（916-918） GAA 优选序列230：（922-924） ACT 优选序列231：（934-936） CCA 优选序列232：（940-942） TCT 优选序列233：（943-945） GAA 优选序列234：（946-948） GAA 优选序列235：（949-951） TTG 优选序列236：（952-954） ACT 优选序列237：（955-957） GCT 优选序列238：（958-960） GAA 优选序列239：（961-963） AGA 优选序列240：（964-966） ATT 优选序列241：（967-969） ACT 优选序列242：（970-972） GAA 优选序列243：（973-975） TTT 优选序列244：（976-978） TGT 优选序列245：（979-981） CAT 优选序列246：（982-984） AGA 优选序列247：（985-987） TTT 优选序列248：（988-990） TTG 优选序列249：（991-993） GAA 优选序列250：（994-996） GGT 优选序列251：（997-999） AAG 优选序列252：（1000-1002） ATT 优选序列253：（1006-1008） CCA 优选序列254：（1009-1011） CAT 优选序列255：（1012-1014） TTG 优选序列256：（1018-1020） TCT 优选序列257：（2021-1023） CAA 优选序列258：（1024-1026） GAA 优选序列259：（1027-1029） TTG 优选序列260：（1030-1032） CCA 优选序列261：（1033-1035） GAA 优选序列262：（1036-1038） GAT 优选序列263：（1042-1044） GAT 优选序列264：（1048-1050） CAA 优选序列265：（1051-1053） CCA 优选序列266：（1054-1056） GTT 优选序列267：（1060-1062） GTT 优选序列268：（1063-1065） TTG 优选序列269：（1069-1071） GGT 优选序列270：（1084-1086） GAT 优选序列271：（1087-1089） GTT 优选序列272：（1099-1101） GAA 优选序列273：（1102-1104） AAG 优选序列274：（1105-1107） AAG 优选序列275：（1111-1113） GTT 优选序列276：（1117-1119） GTT 优选序列277：（1120-1122） GAA 优选序列278：（1123-1125） TTT 优选序列279：（1126-1128） TAC 优选序列280：（1129-1131） GCT 优选序列281：（1144-1146） CAT 优选序列282：（1147-1149） TGT 优选序列283：（1150-1152） AAG 优选序列284：（1153-1155） CAA 优选序列285：（1162-1164） CCA 优选序列286：（1174-1176） AAG 优选序列287：（1177-1179） TTG 优选序列288：（1180-1182） GGT 优选序列289：（1183-1185） GAA 优选序列290：（1186-1188） ACT 优选序列291：（1195-1197） GAT 优选序列292：（1201-1203） GAA 优选序列293：（1207-1209） ATT 优选序列294：（1210-1212） GTT 优选序列295：（1213-1215） ATT 优选序列296：（1216-1218） GCT 优选序列297：（1225-1227） GAT 优选序列298：（1228-1230） TCT 优选序列299：（1234-1236） GCT 优选序列300：（1240-1242） GAA 优选序列301：（1243-1245） GTT 优选序列302：（1246-1248） GAA 优选序列303：（1249-1251） GCT 优选序列304：（1252-1254） GTT 优选序列305：（1255-1257） AAG 优选序列306：（1258-1260） GTT 优选序列307：（1261-1263） CAT 优选序列308：（1264-1266） TCT 优选序列309：（1267-1269） TTT 优选序列310：（1270-1272） CCA 优选序列311：（1273-1275） ACT 优选序列312：（1276-1278） TTG 优选序列313：（1282-1284） TTT 优选序列314：（1288-1290） CCA 优选序列315：（1291-1293） GCT 优选序列316：（1294-1296） TCT 优选序列317：（1297-1299） GCT 优选序列318：（1300-1302） GAT 优选序列319：（1303-1305） AGA 优选序列320：（1306-1308） ACT 优选序列321：（1309-1311） GTT 优选序列322：（1324-1326） GGT 优选序列323：（1330-1332） AGA 优选序列324：（1333-1335） ACT 优选序列325：（1336-1338） TTG 优选序列326：（1351-1353） AAG 优选序列327：（1354-1356） TTT 优选序列328：（1357-1359） TTG 优选序列329：（1360-1362） GAA 优选序列330：（1363-1365） TCT 优选序列331：（1369-1371） GGT 优选序列332：（1372-1374） CAA 优选序列333：（1378-1380） GGT 优选序列334：（1381-1383） GCT 优选序列335：（1384-1386） GGT 优选序列336：（1393-1395） GAT 优选序列337：（1399-1401） TTG 优选序列338：（1402-1404） GAA 优选序列339：（1405-1407） GAT 优选序列340：（1408-1410） TTG 优选序列341：（1417-1419） GCT 优选序列342：（1420-1422） GAA 优选序列343：（1423-1425） GAA 优选序列344：（1429-1431） GAT 优选序列345：（1435-1437） GAA 优选序列346：（1441-1443） GAT 优选序列347：（1450-1452） CAA 优选序列348：（1453-1455） AAG 优选序列349：（1459-1461） GTT 优选序列350：（1462-1464） AAG 优选序列351：（1471-1473） TTG

。

15.一种提高重组人白蛋白表达质量减少降解的物质，其特征在于，其为序列或者序列物质或者是序列所表达的物质，序列为如下任意一种或者多种序列：

SEQ ID NO.1 人白蛋白信号肽编码序列；

SEQ ID NO.2 人白蛋白信号肽优选序列；

SEQ ID NO.3 人白蛋白成熟肽编码序列；

SEQ ID NO.4 人白蛋白成熟肽优选序列；

SEQ ID NO.5 人白蛋白成熟肽优选序列；

SEQ ID NO.6 酵母蛋白二硫键异构酶信号肽编码序列；

SEQ ID NO.7 酵母蛋白二硫键异构酶成熟肽编码序列；

SEQ ID NO.8 酿酒酵母交配因子信号肽编码序列；

SEQ ID NO.9人蛋白二硫键异构酶信号肽编码序列；

SEQ ID NO.10人蛋白二硫键异构酶信号肽优选序列；

SEQ ID NO.11 人蛋白二硫键异构酶成熟肽编码序列；

SEQ ID NO.12 人蛋白二硫键异构酶成熟肽优选序列；

SEQ ID NO.13 人蛋白二硫键异构酶成熟肽优选序列；

SEQ ID NO.14 HSA-F引物序列；

SEQ ID NO.15 HSA-R引物序列；

SEQ ID NO.16 酵母PDI-F引物序列；

SEQ ID NO.17 酵母PDI-R引物序列；

SEQ ID NO.18 人PDI-F引物序列；

SEQ ID NO.19 人PDI-R引物序列。

16.一种用途，其特征在于，用途为如下任意一种用途：SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.19 任意一种或者多种在提高重组人白蛋白表达质量减少降解中的用途；提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法制备中或者制备后的序列、质粒、细胞、产物在治疗疾病的用途；提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法制备中或者制备后的序列、质粒、细胞、产物作为药物在治疗疾病中的用途；提高重组人白蛋白表达质量减少降解的方法制备中或者制备后的序列、质粒、细胞、产物在发酵产业中的用途。

17.利用SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.19任意一种或者多种序列基因操作后的宿主细胞或者质粒。

18.利用SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.19任意一种或者多种序列基因操作后的宿主细胞表达的人白蛋白。