CN111286529A - 一种利用外周血胎儿游离dna产前筛查假阳性的试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物医学技术领域,尤其涉及一种利用外周血胎儿游离DNA产前筛查假阳性的试剂盒,包括外周血DNA提取试剂、DNA沉淀纯化试剂、DNA末端修复及接头试剂、DNA聚合酶和DNA聚合酶缓冲液,该试剂盒通过拷贝数变异分析试剂盒构建测序文库,当N的计算结果大于2时此时孕妇不需要进行羊膜穿刺术等高危的检测方法,保障了孕妇和胎儿的安全;而N的计算结果小于等于2时,需要对胎儿性染色体进一步诊断,以确保外周血胎儿游离DNA产前筛查的准确性,此试剂盒以及该试剂盒的使用方法,方便简单,一定程度上减轻了孕妇的痛苦。
Description
技术领域
本发明涉及生物医学技术领域,尤其涉及一种利用外周血胎儿游离DNA产前筛查假阳性的试剂盒。
背景技术
染色体异常是造成大量先天缺陷(包括精神发育迟缓)的主要原因。异常一般表现为染色体DNA重复和缺失,以及染色体非整倍性,后者指的是完整的染色体的异常存在或缺失。当生物体具有少于或多于正常二倍体的染色体数量时,就会产生大量异常特征并引起多种综合征。唐氏综合征,亦称21三体综合征,是染色体非整倍性最常见的例子,包括一条额外的21号染色体。其它常见的染色体非整倍性有13三体综合征、18三体综合征、特纳综合征和克氏特综合征(Klinefelter’s Syndrome)。
对于染色体异常产前检测的选择主要限于有创性方法,这些方法存在1‰的流产风险。目前,羊膜穿刺术是检测胎儿非整倍体异常的金标准。然而,由于羊膜穿刺术是有创性方法,且实验操作复杂,检测周期长。2013年“全国产前筛查和产前诊断现状调查”的数据表明,只有不到50%的筛查高风险孕妇进行了羊水染色体核型分析,还有超过一半的筛查高风险孕妇得不到后续的诊断。尽管也有孕妇个人及家庭原因不愿意接受有创的产前诊断,但是染色体核型分析技术独力难支的困境可见一斑。因此,建立用于胎儿染色体异常诊断的无创性方法非常有益,这些方法可以使众多的准妈妈受益。
母体本身存在性染色体异常会很大程度干扰孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查(Non-invasive prenatal screening,NIPS)的检测结果,这目前被公认为是胎儿性染色体异常(sex chromosome aneuploidies,SCAs)假阳性的重要原因。当NIPS提示SCAs异常时,有必要进行母体性染色体的检查。因此我们提出了一种利用外周血胎儿游离DNA产前筛查假阳性的试剂盒。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点,而提出的一种利用外周血胎儿游离DNA产前筛查假阳性的试剂盒。
为了实现上述目的,本发明采用了如下技术方案:
一种利用外周血胎儿游离DNA产前筛查假阳性的试剂盒,包括外周血DNA提取试剂、DNA沉淀纯化试剂、DNA末端修复及接头试剂、DNA聚合酶和DNA聚合酶缓冲液,该试剂盒通过拷贝数变异分析试剂盒构建测序文库。
优选的,所述外周血游离DNA,包括利用Chelex100法、磁珠提取法或有机抽提法中任意一种方法提取的母体游离DNA。
优选的,所述DNA聚合酶为KOD DNA聚合酶,所述DNA聚合酶缓冲液为KOD DNA聚合酶缓冲液。
优选的,所述试剂盒使用经甲基化酶消化的从孕妇血浆中提取的游离DNA作为模板。
优选的,所述试剂盒还包括至少一对扩增引物和检测引物的内部对照。
优选的,一种利用外周血胎儿游离DNA产前筛查假阳性的试剂盒的使用方法,包括以下步骤:
S1、将外周血游离DNA记作cfDNA,将外周血游离DNA中的性染色体记作cfDNA(ChrX),通过试剂盒对cfDNA(ChrX)进行检测,并计算cfDNA(ChrX)在cfDNA中的比例,记作A,将胎儿游离DNA的记作cffDNA,并计算cffDNA与cfDNA的比值,记作B,并将A与B进行对比;
S2、对比公式为:
得到N的计算结果;
S3、将N的计算结果与2进行比较,当N的计算结果大于2时,胎儿游离DNA产前筛查假阳性异常信号来源于母体本身,当N的计算结果小于等于2时,胎儿游离DNA产前筛查假阳性异常信号来源于母体本身或胎儿。
优选的,当N的计算结果大于2时,胎儿核型均为正常。
优选的,当N的计算结果小于等于2时,需要对胎儿性染色体进一步诊断。
本发明的有益效果是:
当N的计算结果大于2时此时孕妇不需要进行羊膜穿刺术等高危的检测方法,保障了孕妇和胎儿的安全;而N的计算结果小于等于2时,需要对胎儿性染色体进一步筛查,以确保外周血胎儿游离DNA产前筛查的准确性,此试剂盒以及该试剂盒的使用方法,方便简单,一定程度上减轻了孕妇的痛苦,以及不必要的临床检测。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。
一种利用外周血胎儿游离DNA产前筛查假阳性的试剂盒,包括外周血DNA提取试剂、DNA沉淀纯化试剂、DNA末端修复及接头试剂、DNA聚合酶和DNA聚合酶缓冲液,该试剂盒通过拷贝数变异分析试剂盒(Berry Genomics)构建测序文库。
进一步的,所述外周血游离DNA,包括利用Chelex100法、磁珠提取法或有机抽提法中任意一种方法提取的母体游离DNA。
进一步的,所述DNA聚合酶为KOD DNA聚合酶,所述DNA聚合酶缓冲液为KOD DNA聚合酶缓冲液。
进一步的,所述试剂盒使用经甲基化酶消化的从孕妇血浆中提取的游离DNA作为模板。
进一步的,所述试剂盒还包括至少一对扩增引物和检测引物的内部对照。
进一步的,一种利用外周血胎儿游离DNA产前筛查假阳性的试剂盒的使用方法,包括以下步骤:
S1、将外周血游离DNA记作cfDNA,将外周血游离DNA中的性染色体记作cfDNA(ChrX),通过试剂盒对cfDNA(ChrX)进行检测,并计算cfDNA(ChrX)在cfDNA中的比例,记作A,将胎儿游离DNA的记作cffDNA,并计算cffDNA与cfDNA的比值,记作B,并将A与B进行对比;
S2、对比公式为:
得到N的计算结果;
S3、将N的计算结果与2进行比较,当N的计算结果大于2时,胎儿游离DNA产前筛查假阳性异常信号来源于母体本身,当N的计算结果小于等于2时,胎儿游离DNA产前筛查假阳性异常信号来源于母体本身或胎儿。
进一步的,当N的计算结果大于2时,胎儿核型均为正常。
进一步的,当N的计算结果小于等于2时,需要对胎儿性染色体进一步筛查;
本实施例中,当N的计算结果>2时,6/8的孕妇存在母源性性染色体异常,胎儿核型均为正常,此时孕妇不需要进行羊膜穿刺术等高危的检测方法,保障了孕妇和胎儿的安全;而N的计算结果≤2时,38例孕妇中仅2例孕妇存在性染色体异常,10例胎儿证实为NIPS真阳性,因此,当N的计算结果小于等于2时,需要对胎儿性染色体进一步筛查,以确保外周血胎儿游离DNA产前筛查的准确性。以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种利用外周血胎儿游离DNA产前筛查假阳性的试剂盒,其特征在于,包括外周血DNA提取试剂、DNA沉淀纯化试剂、DNA末端修复及接头试剂、DNA聚合酶和DNA聚合酶缓冲液,该试剂盒通过拷贝数变异分析试剂盒构建测序文库。
2.根据权利要求1所述的一种利用外周血胎儿游离DNA产前筛查假阳性的试剂盒,其特征在于,所述外周血游离DNA,包括利用Chelex100法、磁珠提取法或有机抽提法中任意一种方法提取的母体游离DNA。
3.根据权利要求1所述的一种利用外周血胎儿游离DNA产前筛查假阳性的试剂盒,其特征在于,所述DNA聚合酶为KOD DNA聚合酶,所述DNA聚合酶缓冲液为KOD DNA聚合酶缓冲液。
4.根据权利要求1所述的一种利用外周血胎儿游离DNA产前筛查假阳性的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒使用经甲基化酶消化的从孕妇血浆中提取的游离DNA作为模板。
5.根据权利要求1所述的一种利用外周血胎儿游离DNA产前筛查假阳性的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括至少一对扩增引物和检测引物的内部对照。
6.一种根据权利要求1所述的利用外周血胎儿游离DNA产前筛查假阳性的试剂盒的使用方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1、将外周血游离DNA记作cfDNA,将外周血游离DNA中的性染色体记作cfDNA(ChrX),通过试剂盒对cfDNA(ChrX)进行检测,并计算cfDNA(ChrX)在cfDNA中的比例,记作A,将胎儿游离DNA的记作cffDNA,并计算cffDNA与cfDNA的比值,记作B,并将A与B进行对比;
S2、对比公式为:
得到N的计算结果;
S3、将N的计算结果与2进行比较,当N的计算结果大于2时,胎儿游离DNA产前筛查假阳性异常信号来源于母体本身,当N的计算结果小于等于2时,胎儿游离DNA产前筛查假阳性异常信号来源于母体本身或胎儿。
7.根据权利要求6所述的一种利用外周血胎儿游离DNA产前筛查假阳性的试剂盒的使用方法,其特征在于,当N的计算结果大于2时,胎儿核型均为正常。
8.根据权利要求6所述的一种利用外周血胎儿游离DNA产前筛查假阳性的试剂盒的使用方法,其特征在于,当N的计算结果小于等于2时,需要对胎儿性染色体进一步筛查。
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