CN111280341A - 一种防治家禽坏死性肠炎的复合酶制剂及复合饲料 - Google Patents
一种防治家禽坏死性肠炎的复合酶制剂及复合饲料 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111280341A CN111280341A CN202010217164.5A CN202010217164A CN111280341A CN 111280341 A CN111280341 A CN 111280341A CN 202010217164 A CN202010217164 A CN 202010217164A CN 111280341 A CN111280341 A CN 111280341A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- poultry
- enzyme
- enzyme preparation
- compound
- glucose
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims abstract description 102
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims abstract description 102
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 58
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 44
- 244000144977 poultry Species 0.000 title claims abstract description 43
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 title claims abstract description 33
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 title claims abstract description 33
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims abstract description 101
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 23
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 23
- 102100032487 Beta-mannosidase Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 108010055059 beta-Mannosidase Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 claims abstract description 18
- 230000003281 allosteric effect Effects 0.000 claims abstract description 18
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 claims abstract description 18
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 claims abstract description 18
- 229940105657 catalase Drugs 0.000 claims abstract description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 21
- 108010001682 Dextranase Proteins 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 14
- 241000193468 Clostridium perfringens Species 0.000 abstract description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 12
- 210000004913 chyme Anatomy 0.000 abstract description 11
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 abstract description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 7
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 abstract description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 abstract description 4
- 239000008107 starch Substances 0.000 abstract description 4
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 abstract description 4
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 abstract description 3
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 abstract description 3
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 abstract description 3
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 abstract description 2
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 abstract description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 abstract description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 abstract description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 abstract description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 37
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 33
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 19
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 210000003405 ileum Anatomy 0.000 description 10
- 235000019621 digestibility Nutrition 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 8
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 8
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 8
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 5
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 5
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 235000021050 feed intake Nutrition 0.000 description 5
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 3
- 208000035240 Disease Resistance Diseases 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 3
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 210000003746 feather Anatomy 0.000 description 3
- 210000001630 jejunum Anatomy 0.000 description 3
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 241000252983 Caecum Species 0.000 description 2
- 102000002029 Claudin Human genes 0.000 description 2
- 108050009302 Claudin Proteins 0.000 description 2
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 2
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 102000003940 Occludin Human genes 0.000 description 2
- 108090000304 Occludin Proteins 0.000 description 2
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 235000014590 basal diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 210000004534 cecum Anatomy 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 2
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 2
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 108010001478 Bacitracin Proteins 0.000 description 1
- 241000186016 Bifidobacterium bifidum Species 0.000 description 1
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 1
- 235000019750 Crude protein Nutrition 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N D-gluconic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N Gluconic acid Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 1
- 238000007696 Kjeldahl method Methods 0.000 description 1
- MVTQIFVKRXBCHS-SMMNFGSLSA-N N-[(3S,6S,12R,15S,16R,19S,22S)-3-benzyl-12-ethyl-4,16-dimethyl-2,5,11,14,18,21,24-heptaoxo-19-phenyl-17-oxa-1,4,10,13,20-pentazatricyclo[20.4.0.06,10]hexacosan-15-yl]-3-hydroxypyridine-2-carboxamide (10R,11R,12E,17E,19E,21S)-21-hydroxy-11,19-dimethyl-10-propan-2-yl-9,26-dioxa-3,15,28-triazatricyclo[23.2.1.03,7]octacosa-1(27),6,12,17,19,25(28)-hexaene-2,8,14,23-tetrone Chemical compound CC(C)[C@H]1OC(=O)C2=CCCN2C(=O)c2coc(CC(=O)C[C@H](O)\C=C(/C)\C=C\CNC(=O)\C=C\[C@H]1C)n2.CC[C@H]1NC(=O)[C@@H](NC(=O)c2ncccc2O)[C@@H](C)OC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H]2CC(=O)CCN2C(=O)[C@H](Cc2ccccc2)N(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C1=O)c1ccccc1 MVTQIFVKRXBCHS-SMMNFGSLSA-N 0.000 description 1
- 206010051606 Necrotising colitis Diseases 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 102000000591 Tight Junction Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010002321 Tight Junction Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010080702 Virginiamycin Proteins 0.000 description 1
- 239000004188 Virginiamycin Substances 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 150000001323 aldoses Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000000507 anthelmentic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004596 appetite loss Effects 0.000 description 1
- 229960003071 bacitracin Drugs 0.000 description 1
- 229930184125 bacitracin Natural products 0.000 description 1
- CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N bacitracin A Chemical compound C1SC([C@@H](N)[C@@H](C)CC)=N[C@@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N[C@H](CCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2N=CNC=2)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCCCC1 CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002247 constant time method Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000994 depressogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000249 desinfective effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 208000029182 enterotoxemia Diseases 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000000174 gluconic acid Substances 0.000 description 1
- 235000012208 gluconic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000007366 host health Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 235000021266 loss of appetite Nutrition 0.000 description 1
- 208000019017 loss of appetite Diseases 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 208000004995 necrotizing enterocolitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 235000021049 nutrient content Nutrition 0.000 description 1
- 201000006195 perinatal necrotizing enterocolitis Diseases 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000012286 potassium permanganate Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- 229960003842 virginiamycin Drugs 0.000 description 1
- 235000019373 virginiamycin Nutrition 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/70—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds
- A23K50/75—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds for poultry
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/189—Enzymes
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Birds (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Feed For Specific Animals (AREA)
- Fodder In General (AREA)
Abstract
本发明提供了一种防治家禽坏死性肠炎的复合酶制剂及复合饲料，该复合酶制剂包括如下单酶组分：葡聚糖酶、甘露聚糖酶、葡萄糖变构酶、葡萄糖氧化酶、过氧化氢酶。该发明通过葡聚糖酶酶和甘露聚糖酶降解非淀粉多糖，减轻食糜粘度，缓解了高粘度食糜对肠道造成的损伤，释放蛋白、淀粉等营养物质，提高饲料利用率，截断了未被有效消化利用的食糜给产气荚膜梭菌提供更多的营养，而且其酶解产生的寡糖可改善菌群组成；同时通过葡萄糖变构酶、葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶营造厌氧环境、降低消化道pH、清除过量自由基，保护肠道上皮细胞完整和健康，从而达到防治产气荚膜梭菌诱导家禽产生的坏死性肠炎的目的。
Description
技术领域
本发明属于酶制剂技术领域，具体涉及一种防治家禽坏死性肠炎的复合酶制剂及复合饲料。
背景技术
坏死性肠炎(Necrotic enteritis)又名肠毒血症，是一种由产气荚膜梭菌引起的鸡常见肠道病，坏死性肠炎严重的影响养鸡行业的经济收入，可造成每年超过20亿美元的经济损失。患有坏死性肠炎的鸡具有高死亡率和低生长性能的特点，坏死性肠炎一般发病于2-6周龄的鸡，患坏死性肠炎的鸡群将连续死亡数天，总体死亡率可达10-40％。常见临床症状包括精神沉郁，食欲减退，不愿走动，羽毛蓬乱，病程较短，常呈急性死亡和生长性能下降等。鸡坏死性肠炎通过多种途径引起宿主肠道紊乱，从而影响宿主生理健康，同时，肠道菌群的紊乱又加重了宿主抵抗疾病的能力，因此，寻找到一种安全可靠的防治鸡坏死性肠炎的方法至关重要。
目前，通过在饲料中添加抗生素是预防并治疗家禽感染坏死性肠炎的主要手段，如维吉尼亚霉素、杆菌肽等都具有一定抗产气荚膜梭菌的效果，但产生了抗药性后则效果不佳；而且抗生素存在很多安全隐患，长期使用抗生素能能通过食物链等途径传播给人类，引起人类感染。因此，开发安全有效的抗生素替代物具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是克服现有抗生素在防治家禽感染坏死性肠炎上效果差，且长期使用存在安全隐患的问题。
为此，本发明提供了一种防治家禽坏死性肠炎的复合酶制剂，包括如下单酶组分：葡聚糖酶、甘露聚糖酶、葡萄糖变构酶、葡萄糖氧化酶、过氧化氢酶。
进一步的，上述各单酶组分的质量按质量百分比计如下：葡聚糖酶5％～20％、甘露聚糖酶5％～35％、葡萄糖变构酶15％～30％、葡萄糖氧化酶15％～30％、过氧化氢酶15％～30％。
进一步的，每克所述复合酶制剂中各单酶的酶活如下：葡聚糖酶500～20000U，甘露聚糖酶1000～10000U，葡萄糖变构酶500～10000U，葡萄糖氧化酶500～30000U，过氧化氢酶2000～400000U。
进一步的，每克所述复合酶制剂中各单酶的酶活如下：葡聚糖酶10000U，甘露聚糖酶8000U，葡萄糖变构酶7000U，葡萄糖氧化酶20000U，过氧化氢酶200000U。
另外，本发明还提供了一种复合饲料，包括家禽日粮以及上述的防治家禽坏死性肠炎的复合酶制剂，每吨家禽日粮中添加所述复合酶制剂100g～1000g。
本发明中复合酶制剂的设计原则如下：
家禽饲料中的非淀粉多糖(NSP)不能被无法分泌NSP酶的家禽有效的消化利用，未被有效消化利用的食糜提供了更多的营养给产气荚膜梭菌；同时增加了食糜粘度，从而增加了厌氧菌增值和产生肠毒素，引起肠黏膜的损伤，肠黏膜的损伤有利于产气荚膜梭菌的生长和毒素的扩散。对此，研究表明，低pH可抑制产气荚膜梭菌的生长。其中，葡聚糖酶、甘露聚糖酶能降解NSP，减低肠道粘度，减轻NSP对肠道的损伤，同时葡聚糖酶、甘露聚糖酶酶解产生的寡糖，又可被动物肠道中的有益菌吸收，改善菌群组成，减少大肠杆菌、沙门氏菌等有害微生物的感染，缓解肠道损伤的压力。葡萄糖变构酶是催化α和β醛糖构型之间互相可逆地转换的酶，启动底物变旋反应的基础。葡萄糖氧化酶可催化葡萄糖产生葡萄糖酸和过氧化氢，与过氧化氢酶共同作用催化葡萄糖产生葡萄糖酸，消耗氧，降低消化道pH，从而改善畜禽消化道环境，提高生长性能和成活率；同时又可清除过量自由基，保护肠道上皮细胞完整和健康，提高畜禽消化吸收及抗病力。
与现有技术相比，本发明的有益效果：
(1)本发明提供的这种防治家禽坏死性肠炎的复合酶制剂通过葡聚糖酶酶和甘露聚糖酶降解非淀粉多糖，减轻食糜粘度，缓解了高粘度食糜对肠道造成的损伤，释放蛋白、淀粉等营养物质，提高饲料利用率，截断了未被有效消化利用的食糜给产气荚膜梭菌提供更多的营养，而且其酶解产生的寡糖可改善菌群组成；同时通过葡萄糖变构酶、葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶营造厌氧环境、降低消化道pH、清除过量自由基，保护肠道上皮细胞完整和健康，从而达到防治产气荚膜梭菌诱导家禽产生的坏死性肠炎的目的。
(2)本发明提供的这种防治家禽坏死性肠炎的复合酶制剂可提高家禽对饲料的消化吸收及抗病力，促进家禽生长，且对患有坏死性肠炎的家禽有很好的治愈作用，提高了家禽的成活率。
(3)本发明提供的这种防治家禽坏死性肠炎的复合酶制剂具有无毒、不易产生耐药性等优点，使用安全，可减少或替代抗生素使用，提高生产性能。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
本实施例提供了一种防治家禽坏死性肠炎的复合酶制剂，包括按质量百分比计的如下单酶组分：葡聚糖酶15％、甘露聚糖酶15％、葡萄糖变构酶25％、葡萄糖氧化酶25％、过氧化氢酶20％。
其中，每克所述复合酶制剂中各单酶的酶活如下：葡聚糖酶10000U，甘露聚糖酶8000U，葡萄糖变构酶7000U，葡萄糖氧化酶20000U，过氧化氢酶200000U。
采用本实施例的复合酶制剂与家禽日粮进行混合作为家禽的复合饲料时，每吨家禽日粮中添加本实施例复合酶制剂500g。
实施例2：
本实施例提供了一种防治家禽坏死性肠炎的复合酶制剂，包括按质量百分比计的如下单酶组分：葡聚糖酶5％、甘露聚糖酶35％、葡萄糖变构酶15％、葡萄糖氧化酶15％、过氧化氢酶30％。
其中，每克所述复合酶制剂中各单酶的酶活如下：葡聚糖酶20000U，甘露聚糖酶1000U，葡萄糖变构酶10000U，葡萄糖氧化酶30000U，过氧化氢酶2000U。
采用本实施例的复合酶制剂与家禽日粮进行混合作为家禽的复合饲料时，每吨家禽日粮中添加本实施例复合酶制剂100g。
实施例3：
本实施例提供了一种防治家禽坏死性肠炎的复合酶制剂，包括按质量百分比计的如下单酶组分：葡聚糖酶20％、甘露聚糖酶5％、葡萄糖变构酶30％、葡萄糖氧化酶30％、过氧化氢酶15％。
其中，每克所述复合酶制剂中各单酶的酶活如下：葡聚糖酶500U，甘露聚糖酶10000U，葡萄糖变构酶500U，葡萄糖氧化酶500U，过氧化氢酶400000U。
采用本实施例的复合酶制剂与家禽日粮进行混合作为家禽的复合饲料时，每吨家禽日粮中添加本实施例复合酶制剂1000g。
实施例4：
本实施例进一步验证了本发明复合酶制剂对鸡坏死性肠炎的防治效果，具体试验过程如下：
1、材料和方法
1.1、试验菌株
产气荚膜梭菌购自中国兽医药品监察所，在新鲜的肉汤培养基中，37℃厌氧培养，在使用前，细菌的浓度调整为108CFU/mL。
1.2、坏死性肠炎模型的建立
1日龄AA肉鸡，口腔灌服产气荚膜梭菌(0.5mL/只，108CFU/mL)，在14～21日龄连续灌服产气荚膜梭菌(1mL/只，108CFU/mL)诱导坏死性肠炎的发生。
1.3、试验饲粮与饲养管理
试验基础饲粮的组成及营养含量见表1。饲养试验在新华扬生物股份有限公司黄湖养殖基地进行，室内保持通风良好，室温维持在22-25℃。养鸡前做好设备和鸡舍的清洗和消毒工作，鸡舍彻底清洁，待干燥后，用高锰酸钾和甲醛熏蒸。肉仔鸡地面平养，自由采食饮水。免疫程序和驱虫程序按照鸡场常规同步进行。保持固定的饲喂时间，每天3次，保证水源的充足、干净。随时观察、记载鸡只的采食和健康状况。
表1：基础饲粮组成与营养水平
1.4、动物试验及设计
240只1日龄AA肉鸡随机分成3组，分别为对照组、造模组和复合酶制剂组，每组120只鸡，分为6个重复，每个重复20只，饲养为期28天。其中，造模组和复合酶制剂组的鸡根据模型要求进行产气荚膜梭菌攻毒，对照组的鸡灌喂等体积生理盐水。试验期间，对照组和造模组肉鸡饲喂基础饲粮，复合酶制剂组在基础饲粮中拌入上述实施例1的复合酶制剂500g/t。
1.5、样品采集
在28日龄，每个处理组存活的鸡被屠宰，断颈处死，剖开腹腔，取空肠中段，纵向剪开，用无菌玻片刮取黏膜，装入经DEPC处理过的EP管中，经液氮预冻后，保存于-80℃冰箱内，待检测目标基因mRNA的表达量。
1.6、检测指标及方法
1.6.1、生长性能指标
记录每日的投料量及剩余料量、鸡死亡淘汰情况，并计算平均初只重、采食量、平均日增重、料肉比。
日采食量/(g/d·羽)＝Σ[(每天投料量一每天余料量)/当天饲养量]/饲养天数；
平均日增重/(g/d·羽)＝(平均末重一平均初重)/饲养天数；
料肉比＝试验期总耗料/试验期总增重。
1.6.2、回肠表观消化率
在第25日龄时在各饲粮中加入0.4％TiO2连续饲喂3天后进行屠宰，收集回肠食糜用于养分消化率的测定；在收集食糜的前一天晚上禁食2个小时，取样前3个小时开始饲喂，以确保回肠中有足够的食糜。
按100g食糜加入10％盐酸10mL充分混匀后置于洁净的带盖培养皿中，在65℃烘箱中烘至风干，空气中回潮24h后粉碎，过40目筛。
饲料原料及食糜中干物质含量测定采用100-105℃干燥法；粗蛋白质含量测定，采用凯氏定氮法。
根据以下公式计算出养分回肠表观消化率：
1.6.3、RNA提取与Real-time PCR分析
1)样品总RNA的提取
取50-100mg组织样品液氮充分研磨后，加入放置有1mL预冷的TRIzol试剂(Invitrogen Life Technologies)的离心管中，匀浆，室温静置5min，以便核酸蛋白复合体解离完全。后续步骤按照试剂盒说明书进行。
2)RNA浓度、纯度和完整性的鉴定
用Nanodrop 2000超微量分光光度计测定RNA浓度，纯度以吸光值OD260/280表示，保证其比值在1.8-2.0之间。OD260/280的比值<1.8，则说明可能有蛋白质污染；OD260/280的比值>2.0，说明RNA可能发生降解。RNA完整性通过琼脂凝胶电泳来检测，电泳条件为：200V，5min左右，当蓝色条带向前移动2-3cm时，立即停止，之后在凝胶成像系统下进行观察，照相，如果18S和28S条带明亮清晰，条带锐利(条带的边缘清晰)，28S的亮度是18S的2倍以上，则说明RNA的质量较好。
3)反转录
提取总RNA后，采用PrimeScriptTMRT Master Mix试剂盒(宝生物工程(大连)有限公司)，按试剂盒说明书操作，反应体系和反转录程序如表2所示。
表2反转录反应体系和反转录程序
42℃2min
37℃15min，85℃5s，4℃∞
反转录产物直接进行RT-PCR或-20℃保存备用。
4)Real-time PCR
采用qPCR方法测定目标基因的表达，其中PCR引物序列见表3，由宝生物工程(大连)有限公司合成。
表3目的基因和内参基因引物序列
qPCR的操作参照SYBR Premix Ex Taq II(Tli RNaseH Plus)(宝生物工程(大连)有限公司)的说明。qPCR在7500荧光定量仪(Applied Biosystems)上操作，反应体系见表4，PCR条件设置为95℃变性30s，接着进行40个循环，每个循环由95℃变性5s与60℃退火和延伸34s构成，以β-actin为内参基因，用2-△△CT方法计算相对基因表达量。
表4 Real-time PCR反应体系组成成分
1.6.4、肠道菌群数量检测
无菌采取回肠、盲肠内容物进行肠道菌群(大肠杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌)测定。
取盲肠内容物于装有100mL灭菌生理盐水挡板瓶中，则其稀释度为10-2。摇床处理后，取0.5mL加入到4.5mL灭菌生理盐水试管中，微型振荡器振荡。依次顺延，进行递增稀释至第5个试管稀释度为10-7。根据预试验的结果，选择适当的稀释度(以每个平板长30-300个菌落为标准)三个，在超净工作台上，用100μL移液枪按稀释度从高到低的顺序将样品分别加到选择性培养基EMB、BS和MRS上，每个稀释度做三个重复。大肠杆菌采用涂布平板法37℃培养24h，乳酸菌和双歧杆菌采用稀释摇管法37℃培养72h。
2、结果
2.1、复合酶制剂对肉鸡生长性能的影响
试验期间，复合酶制剂对肉鸡生长性能的影响如表5所示。其中，对照组和复合酶制剂组没有鸡只死亡，造模组共死亡12只鸡，死亡率为10.00％。
表5复合酶制剂对肉鸡生长性能的影响
由表5可知，各组肉鸡采食量无显著性差异，与对照组相比，造模组日增重降低了5.03％，复合酶制剂组日增重降低了2.60％；与对照组相比，造模组料比增加了5.26％，复合酶制剂组降低了1.32％。
2.2复合酶制剂对肉鸡回肠表观消化率的影响
试验期间，复合酶制剂对肉鸡回肠表观消化率的影响如表6所示。
表6复合酶制剂对肉鸡回肠表观消化率的影响，％
由表6可知，与对照组相比，造模组和复合酶制剂组干物质表观回肠消化率和蛋白质表观回肠消化率分别降低了4.19％和8.25％，复合酶制剂组蛋白质表观回肠消化率分别增加了5.85％和1.40％。
2.3、复合酶制剂对肉鸡紧密连接蛋白mRNA表达的影响
试验期间，复合酶制剂对肉鸡紧密连接蛋白mRNA表达的影响结果如表7所示。
表7复合酶制剂对肉鸡紧密连接蛋白mRNA表达的影响
由表7可知，与对照组相比，造模组Claudin和occludin的表达趋势相似，均成倍的减少，复合酶制剂组Claudin和occludin的表达则与对照组没有差异。
2.4、复合酶制剂对肉鸡肠道菌群数量的影响
试验期间，复合酶制剂对肉鸡肠道菌群数量的影响结果如表8所示。
表8复合酶制剂对肉鸡肠道菌群数量的影响，(log10n/克内容物)
由表8所示，与对照组相比，造模组大肠杆菌增加了24.17％、乳酸菌和双歧杆菌分别减低了25.87％和10.85％，复合酶制剂组大肠杆菌无差异，乳酸菌和双歧杆菌分别增加了18.63％和13.84％。
综上所述，本发明提供的这种防治家禽坏死性肠炎的复合酶制剂通过多种酶组分的酶解及相互作用，有效改善了家禽消化道环境及菌群组成，维持了其肠道菌群平衡，提高了家禽生长性能和成活率，可有效防止产气荚膜梭菌诱导家禽产生的坏死性肠炎，减少或替代抗生素使用，提高生产性能。
以上例举仅仅是对本发明的举例说明，并不构成对本发明的保护范围的限制，凡是与本发明相同或相似的设计均属于本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种防治家禽坏死性肠炎的复合酶制剂，其特征在于，包括如下单酶组分：葡聚糖酶、甘露聚糖酶、葡萄糖变构酶、葡萄糖氧化酶、过氧化氢酶。
2.如权利要求1所述的一种防治家禽坏死性肠炎的复合酶制剂，其特征在于，各单酶组分按质量百分比计如下：葡聚糖酶5％～20％、甘露聚糖酶5％～35％、葡萄糖变构酶15％～30％、葡萄糖氧化酶15％～30％、过氧化氢酶15％～30％。
3.如权利要求1所述的一种防治家禽坏死性肠炎的复合酶制剂，其特征在于，每克所述复合酶制剂中各单酶的酶活如下：葡聚糖酶500～20000U，甘露聚糖酶1000～10000U，葡萄糖变构酶500～10000U，葡萄糖氧化酶500～30000U，过氧化氢酶2000～400000U。
4.如权利要求3所述的一种防治家禽坏死性肠炎的复合酶制剂，其特征在于，每克所述复合酶制剂中各单酶的酶活如下：葡聚糖酶10000U，甘露聚糖酶8000U，葡萄糖变构酶7000U，葡萄糖氧化酶20000U，过氧化氢酶200000U。
5.一种复合饲料，其特征在于，包括家禽日粮以及如权利要求1～4任一项所述的防治家禽坏死性肠炎的复合酶制剂，每吨家禽日粮中添加所述复合酶制剂100g～1000g。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010217164.5A CN111280341A (zh) | 2020-03-25 | 2020-03-25 | 一种防治家禽坏死性肠炎的复合酶制剂及复合饲料 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010217164.5A CN111280341A (zh) | 2020-03-25 | 2020-03-25 | 一种防治家禽坏死性肠炎的复合酶制剂及复合饲料 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111280341A true CN111280341A (zh) | 2020-06-16 |
Family
ID=71018457
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010217164.5A Pending CN111280341A (zh) | 2020-03-25 | 2020-03-25 | 一种防治家禽坏死性肠炎的复合酶制剂及复合饲料 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111280341A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115989848A (zh) * | 2022-12-13 | 2023-04-21 | 广东智威农业科技股份有限公司 | 一种酶组合物应用于制备防止肉鸡霉菌毒素中毒的饲料 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102640858A (zh) * | 2012-04-13 | 2012-08-22 | 湖南农业大学 | 一种多功效饲用复合酶制剂 |
| CN107927382A (zh) * | 2017-10-30 | 2018-04-20 | 山东弘德农牧科技有限公司 | 一种饲用复合酶制剂及其制备方法与应用 |
| CN109221761A (zh) * | 2018-09-25 | 2019-01-18 | 芜湖绿而优农业科技有限公司 | 蛋鸭饲料及其制备方法 |
-
2020
- 2020-03-25 CN CN202010217164.5A patent/CN111280341A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102640858A (zh) * | 2012-04-13 | 2012-08-22 | 湖南农业大学 | 一种多功效饲用复合酶制剂 |
| CN107927382A (zh) * | 2017-10-30 | 2018-04-20 | 山东弘德农牧科技有限公司 | 一种饲用复合酶制剂及其制备方法与应用 |
| CN109221761A (zh) * | 2018-09-25 | 2019-01-18 | 芜湖绿而优农业科技有限公司 | 蛋鸭饲料及其制备方法 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115989848A (zh) * | 2022-12-13 | 2023-04-21 | 广东智威农业科技股份有限公司 | 一种酶组合物应用于制备防止肉鸡霉菌毒素中毒的饲料 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Mohammadian et al. | Synbiotic effects of β-glucan, mannan oligosaccharide and Lactobacillus casei on growth performance, intestine enzymes activities, immune-hematological parameters and immune-related gene expression in common carp, Cyprinus carpio: An experimental infection with Aeromonas hydrophila | |
| Geraylou et al. | Effects of arabinoxylan-oligosaccharides (AXOS) on juvenile Siberian sturgeon (Acipenser baerii) performance, immune responses and gastrointestinal microbial community | |
| McDonald et al. | Increasing viscosity of the intestinal contents alters small intestinal structure and intestinal growth, and stimulates proliferation of enterotoxigenic Escherichia coli in newly-weaned pigs | |
| Yu et al. | Improved extraction of PCR-quality community DNA from digesta and fecal samples | |
| Liu et al. | Dietary corn bran fermented by Bacillus subtilis MA139 decreased gut cellulolytic bacteria and microbiota diversity in finishing pigs | |
| Józefiak et al. | Carbohydrate fermentation in the avian ceca: a review | |
| Snel et al. | Dietary strategies to influence the gastro-intestinal microflora of young animals, and its potential to improve intestinal health | |
| Montagne et al. | Comparative effects of level of dietary fiber and sanitary conditions on the growth and health of weanling pigs | |
| Reyes-Becerril et al. | Single or combined effects of Lactobacillus sakei and inulin on growth, non-specific immunity and IgM expression in leopard grouper (Mycteroperca rosacea) | |
| TW201143631A (en) | Novel Enterococcus faecium LJS-01 and its use as probiotic | |
| KR20010015694A (ko) | 사료 생산물 | |
| Jin et al. | Consuming fermented distillers' dried grains with solubles (DDGS) feed reveals a shift in the faecal microbiota of growing and fattening pigs using 454 pyrosequencing | |
| Sun et al. | The effects of dietary sodium butyrate supplementation on the growth performance, carcass traits and intestinal microbiota of growing‐finishing pigs | |
| De Maesschalck et al. | Amorphous cellulose feed supplement alters the broiler caecal microbiome | |
| Feng et al. | The effects of dietary Lactococcus spp. on growth performance, glucose absorption and metabolism of common carp, Cyprinus carpio L. | |
| Rattigan et al. | Effects of reducing dietary crude protein concentration and supplementation with either laminarin or zinc oxide on the growth performance and intestinal health of newly weaned pigs | |
| Yi et al. | Enzyme producing activity of probiotics and preparation of compound enzyme | |
| Sztandarski et al. | Gut microbiota activity in chickens from two genetic lines and with outdoor-preferring, moderate-preferring, and indoor-preferring ranging profiles | |
| CN112592870B (zh) | 一种凝结芽孢杆菌g4、其发酵液及制备方法和应用 | |
| BR112020015899B1 (pt) | Composições, e método para preparar composição fermentada com odor melhorado usando levedura | |
| CN111280341A (zh) | 一种防治家禽坏死性肠炎的复合酶制剂及复合饲料 | |
| He et al. | Gastrointestinal development and microbiota responses of geese to honeycomb flavonoids supplementation | |
| Sun et al. | Culture-independent characterization of the autochthonous gut microbiota of grouper Epinephelus coioides following the administration of probiotic Enterococcus faecium | |
| Litonina et al. | Application of enzyme probiotic drug developed based on microorganisms of the rumen of reindeer (Rangifer tarandus) in feeding cows | |
| AU2020102172A4 (en) | A Compound Fiber Additive for Improving Pork Quality and Its Preparation and Application |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200616 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |