CN111278437A

CN111278437A - Rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶的抑制剂

Info

Publication number: CN111278437A
Application number: CN201880056445.8A
Authority: CN
Inventors: E.斯库卡斯; K.G.刘; J-I.金; M.V.波于洛夫斯基; 莫日根; 张静雅
Original assignee: Kadmon Corp LLC
Current assignee: Kadmon Corp LLC
Priority date: 2017-07-21
Filing date: 2018-07-23
Publication date: 2020-06-12
Also published as: EP3654972A4; US20210163421A1; EA202090304A1; JP2020528415A; US11926596B2; WO2019018853A1; EP3654972A1; JP2023033316A; CA3070112A1

Abstract

本发明涉及ROCK1和/或ROCK2的抑制剂。还提供了抑制ROCK1和/或ROCK2的方法，所述方法可用于治疗疾病。

Description

RHO相关含卷曲螺旋蛋白激酶的抑制剂

技术领域

背景技术

Rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)为丝氨酸/苏氨酸激酶家族的成员。已经鉴别出了两种同工型ROCK1和ROCK2。这两种同工型均由Rho GTPase的GTP结合形式激活，并且在被激活时磷酸化多种下游底物。ROCK在许多细胞过程中都起着重要作用，所述细胞过程包括平滑肌细胞收缩、细胞增殖、粘附和迁移。正因如此，ROCK抑制剂在多种病理病况中具有潜在的治疗适用性，所述病理病况包括例如哮喘、癌症、勃起功能障碍、青光眼、胰岛素抵抗、肾衰竭、肺动脉高压、神经元变性和骨质疏松症。

ROCK为细胞骨架动力学和细胞运动的关键的细胞内调控因子。ROCK通过磷酸化调控RhoA的许多下游靶标，包括例如肌球蛋白轻链、肌球蛋白轻链磷酸酶结合亚基和LIM激酶2。这些底物调控肌动蛋白丝组织和收缩性。在平滑肌细胞中，ROCK介导钙敏化和平滑肌收缩。Rho激酶的抑制阻断5-HT和去氧肾上腺素激动剂诱导的肌肉收缩。当引入非平滑肌细胞中时，ROCK诱导应力纤维形成并且为RhoA所介导的细胞转化所需的。ROCK参与多种细胞过程，包括但不限于细胞粘附、细胞运动和迁移、生长控制、细胞收缩和胞质分裂。ROCK还参与Na/H交换转运系统激活、应力纤维形成、内收蛋白激活以及生理过程例如血管收缩、支气管平滑肌收缩、血管平滑肌和内皮细胞增殖、血小板聚集等。

动物模型中ROCK活性的抑制已经证明了ROCK抑制对于人疾病的治疗的许多益处。这些包括心血管疾病例如高血压、动脉粥样硬化、再狭窄、心脏肥大、高眼压、脑缺血、脑血管痉挛、阴茎勃起功能障碍、中枢神经系统病症例如神经元变性和脊髓损伤以及瘤形成的模型。已显示ROCK活性的抑制抑制了肿瘤细胞生长和转移、血管生成、动脉血栓形成病症例如血小板聚集和白细胞聚集、哮喘、眼内压的调控和骨吸收。患者中ROCK活性的抑制对于控制蛛网膜下腔出血后的脑血管痉挛和局部缺血、降低眼内压、通过小梁网组织的松弛增加眼房水流出、改善流向视神经的血流以及保护健康的神经节细胞具有益处。

已经产生了聚焦于CNS中ROCK的活性的大量体内数据。已在许多中枢神经系统病症中记录了ROCK途径的异常激活。例如，轴突生长和突触可塑性取决于肌动蛋白细胞骨架的结构调控。Rho-ROCK级联在突触可塑性方面、在树突形态发生和稳定性方面以及在生长锥运动和塌陷方面起着关键作用。此外，多种轴突生长抑制分子会聚于神经元中的RhoA/ROCK上，使其成为CNS病症干预的吸引人的途径。

Nogo受体(NgR)(连同其他复合成员，包括LINGO-1)和它们的配体可能是神经突起生长的被最充分表征并且有效的抑制剂。在通过髓磷脂相关抑制剂的受体激活下游的一些最早事件为RhoA和ROCK的上调。这些事件导致收缩性增加，并对成熟神经元中的轴突生长具有强烈的抑制作用。因此，抑制这种信号级联的可能性提供了脊髓和视神经损伤的非常有前景的治疗策略。神经退行性病况如亨廷顿氏病和阿尔茨海默氏病(AD)也因为对NgR信号传导的抑制有应答而正被研究。不仅NgR家族成员与APP加工相关，而且在AD脑中NgR和Nogo的亚细胞定位也发生了变化。

阿尔茨海默氏病(AD)是老年人痴呆的最常见原因，是一种进行性神经退行性病症，其涉及许多认知功能的逐渐下降包括记忆障碍(Selkoe,2001)。突触丧失通常在AD病理中被观察到并且为AD的突触功能障碍的标志(Tanzi和Bertram,2005)。低聚的β-淀粉样蛋白肽与突触可塑性的丧失和神经网络功能障碍有关。突触可塑性取决于树突棘中肌动蛋白细胞骨架的结构调控。Rho-ROCK级联在突触可塑性方面、在树突形态发生和稳定性方面以及在生长锥运动和塌陷方面起着关键作用(Govek等人,2005；Linseman和Loucks,2008)。多项研究表明，ROCK激酶可诱导毒性β-淀粉样蛋白肽的生成，并且此外，ROCK的抑制可抑制毒性肽加工。在前馈机制中，β-淀粉样蛋白增加了Rho GTPase活性，从而通过ROCK激活抑制了神经突起生长和突触形成(Petratos等人,2008)。因此，ROCK抑制剂可具有预防突触和神经元变性以及促进AD中再生过程的潜力。Herskowitz等人的最新研究表明，ROCK敲减降低aβ水平。这些作用表明，需要高ROCK选择性抑制剂来提供阿尔茨海默氏病(AD)的有效治疗。在AD的啮齿动物模型中测试了模型化合物SR3677，设法通过改变BACE-1分布和淀粉样蛋白前体蛋白(APP)向溶酶体的运输来展示ROCK抑制对于AD的使用。直接腹膜内注射到海马中之后，由于其口服PK特性差(5％F，并且半衰期小于1小时)并且缺乏脑渗透性，因此SR3677具有降低sAPPβ的有前景的作用。

亨廷顿氏病(HD)是一种破坏性的、不可治疗的、显性遗传性神经退行性疾病，其特征在于精神障碍、运动障碍和痴呆。亨廷顿基因产物Htt蛋白的错误折叠和聚集导致HD病理(Shao和Diamond,2007)。已开发出非常少的针对HD治疗的基于机制的治疗引导。尽管科学研究仍在进行中，但多条证据表明，ROCK抑制可构成针对HD的有效治疗。在HD的小鼠模型中，ROCK抑制显著降低可溶性Htt水平，逆转聚集体形成，神经突收缩并且防止神经元细胞死亡(Deyts等人,2009；Li等人,2009)。在果蝇(Drosophila)研究中获得了相似的结果，其中ROCK的抑制控制了Htt聚集(Shao等人,2008a；Shao等人,2008b)。ROCK信号传导途径是HD的有前景的治疗靶标。

ROCK信号传导还与帕金森氏病和肌萎缩侧索硬化(ALD)有关。参见例如，

L.等人(2012).“Inhibition of rho kinase enhances survival of dopaminergicneurons and attenuates axonal loss in a mouse model ofParkinson's disease.”Brain.135(11):3355-70。

ROCK磷酸化多种下游底物，包括肌球蛋白轻链(MLC，在苏氨酸18和丝氨酸19处)和肌球蛋白轻链磷酸酶(MYPT1，在苏氨酸853处)，以驱动球状G肌动蛋白聚合成丝状F肌动蛋白并且装配肌动球蛋白收缩机构。已经认识到，这种途径可能是导致若干CNS病症例如脊髓损伤、中风和AD的发病机理。在成人CNS中，由于存在髓磷脂相关轴突生长抑制剂，所以损伤的轴突再生不良。髓磷脂相关抑制剂例如髓磷脂相关糖蛋白(MAG)、Nogo、少突胶质细胞-髓磷脂糖蛋白(OMgp)和排斥导向分子(RGM)限制了受损脑和脊髓中的轴突再生。各种髓磷脂相关抑制剂的共同机制为它们全部都激活Rho及其下游效应激酶ROCK以抑制神经突起生长。

在中枢神经系统(CNS)病症中，通过小分子阻断Rho/ROCK途径为理想策略。然而，血脑屏障(BBB)虽然在脑稳态中起着关键作用，但也显著阻碍了大多数小分子抑制剂的渗透。随着对开发用于治疗CNS疾病的选择性并且有效的抑制剂的兴趣日益浓厚，迫切需要ROCK 1和/或ROCK2的抑制剂，特别是那些穿越血脑屏障的抑制剂。

发明内容

在一方面，本发明提供式I化合物：

其中：

R¹选自由以下组成的组：低级烷基、取代的低级烷基、C₃-C₆环烷基、取代的C₃-C₆环烷基、R¹⁰R¹¹N(CR¹²R¹³)_c-、R¹⁰O(CR¹²R¹³)_c-、W(CR¹²R¹³)_d-和R¹⁰R¹¹N-C(＝O)-(CR¹²R¹³)_c-；

每个R¹⁰独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹¹独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹²独立地选自H和低级烷基；

每个R¹³独立地选自H和低级烷基；

另外或替代地，连接至同一碳原子的R¹²和R¹³可一起形成C₃-C₆环烷基；

W为具有1至3个环杂原子的3至7元杂环；

c为2至4；

d为1至4；

R²选自由以下组成的组：芳基、杂芳基、芳烷基和杂环基，它们中的每一个可为未取代的或任选地被1至3个独立地选自由以下组成的组的取代基取代：卤代基、羟基、低级烷基、低级烷氧基、硝基、氰基、C₁-C₃全氟烷基、C₁-C₃全氟烷氧基、羧基、RR'N-、RR'NCO-、RCONH-、RCONR'-、RO₂C-、芳基-O-和杂芳基-O-；

替代地，R¹和R²一起形成单环基团或双环基团，其中所述单环基团具有4至7个环原子，包括至多2个环杂原子，并且双环基团具有8至10个环原子，包括至多3个环杂原子，并且其中单环基团和双环基团为未取代的或任选地被1至3个独立地选自由以下组成的组的取代基取代：卤代基、羟基、低级烷基、低级烷氧基、氨基、硝基、氰基、C₁-C₃全氟烷基、C₁-C₃全氟烷氧基、羧基、芳基和杂芳基；

R³选自H、低级烷基、取代的低级烷基和RR'N-(C_2-4烷基)-；

R⁴选自由以下组成的组：H、卤代基、羟基、低级烷基、低级烷氧基、硝基、氰基、C₁-C₃全氟烷基、C₁-C₃全氟烷氧基、羧基、RR'N-、RR'NCO-、RCONH-、RCONR'-、RR'N-(C_2-4烷基)-和RR'N-(C_2-4烷基)-O-；

R⁵选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

a为0或1；

b为0至2；

以及

每个R和R'独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基，或者替代地，R和R'一起形成5至6元杂环。

本发明包括药物组合物，其包含本发明的化合物和药学上可接受的载体。

本发明包括组合物，其包含本发明的大体上纯的化合物及其药学上可接受的盐、立体异构体或水合物以及药学上可接受的载体。

在一方面，本发明提供一种在哺乳动物中抑制ROCK的方法，所述方法包括施用有效量的一种或多种式I化合物。本发明提供一种治疗患有疾病的患者的方法，所述方法包括向需要此类治疗的患者施用治疗有效量的式I化合物。在某些此类实施方案中，式I化合物抑制ROCK1和/或ROCK2。在某些此类实施方案中，式I化合物选择性地抑制ROCK1和/或ROCK2。根据本发明治疗的非限制性疾病和病况包括中枢神经系统病症例如神经元变性和脊髓损伤、心血管疾病例如高血压、动脉粥样硬化、再狭窄、心脏肥大、高眼压、脑缺血、脑血管痉挛、阴茎勃起功能障碍、动脉血栓性病症例如血小板聚集和白细胞聚集、哮喘、眼内压的调控和骨吸收。在瘤形成中，Rho激酶的抑制抑制了肿瘤细胞生长和转移以及血管生成。

本发明提供一种在受试者中治疗中枢神经系统病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的式I化合物。中枢神经系统病症包括但不限于神经元变性或脊髓损伤以及亨廷顿氏病、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、肌萎缩侧索硬化(ALS)或多发性硬化症。

本发明提供一种在受试者中治疗自身免疫病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的式I化合物。自身免疫病症包括但不限于类风湿性关节炎(多发性硬化症)、系统性红斑狼疮(SLE；狼疮)、牛皮癣、克罗恩氏病、特应性皮炎、湿疹或移植物抗宿主病(GVHD)。

本发明提供一种在受试者中治疗心血管病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的式I化合物。心血管病症包括但不限于高血压、动脉粥样硬化、心绞痛、动脉阻塞、外周动脉疾病、外周循环病症、脑海绵状畸形、再狭窄、心脏肥大、高眼压、脑缺血、脑血管痉挛、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)或勃起功能障碍。

本发明提供一种在受试者中治疗炎症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的式I化合物。炎症包括但不限于哮喘、心血管炎症、肾炎症或动脉硬化。

本发明提供一种在受试者中治疗动脉血栓形成病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的式I化合物。动脉血栓形成病症的非限制性实例为血小板聚集或白细胞聚集。

本发明提供一种在受试者中治疗纤维化病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的式I化合物。纤维化病症的非限制性实例为：肺纤维化，包括囊性和特发性肺纤维化；放射诱发的肺损伤；肝纤维化，包括肝硬化；心脏纤维化，包括动脉纤维化；心内膜心肌纤维化；陈旧性心肌梗死；动脉僵硬；动脉粥样硬化；再狭窄；关节纤维化；克罗恩氏病；骨髓纤维化；佩罗尼氏病；肾源性系统性纤维化；进行性块状纤维化；腹膜后腔纤维化；硬皮病/系统性硬化症；纵隔纤维化；瘢痕疙瘩和增生性瘢痕；神经胶质瘢痕形成；或肾纤维化。

本发明提供一种维持上皮稳定性的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的式I化合物。

本发明提供一种在受试者中治疗青光眼或调控眼内压的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的式I化合物。青光眼的非限制性实例包括原发性开角型青光眼、急性闭角型青光眼、色素性青光眼、新生血管性青光眼、先天性青光眼、正常眼压性青光眼或继发性青光眼。

本发明提供一种在受试者中治疗肿瘤性疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的式I化合物。肿瘤性疾病包括但不限于淋巴瘤、癌、白血病、肉瘤或母细胞瘤，如鳞状细胞癌、小细胞肺癌、垂体癌、食道癌、星形细胞瘤、软组织肉瘤、非小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠道癌、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、肝癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、脑癌、子宫内膜癌、睾丸癌、胆管癌、胆囊癌、胃癌、黑色素瘤或头颈部癌。

本发明还提供一种在受试者中治疗代谢综合征、胰岛素抵抗、高胰岛素血症、2型糖尿病或葡萄糖耐受不良的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的式I化合物。

此外，本发明提供一种在受试者中治疗骨质疏松症或促进骨形成的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的式I化合物。

本发明提供一种治疗具有血管生成成分的眼部病症的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的式I化合物和血管生成抑制剂。此类眼部病症的非限制性实例包括年龄相关性黄斑变性(AMD)、脉络膜新生血管(CNV)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、虹膜新生血管、葡萄膜炎、新生血管性青光眼或早产儿视网膜病变(ROP)。

附图说明

图1。代表性Z'-Lyte测定结果。本发明的ROCK抑制剂对ROCK的两种同工型均显示低至一位数的纳摩尔效力。

图2。本发明的化合物在细胞中抑制两种ROCK同工型。将具有ROCK1或ROCK2敲除(分别是ROCK1KO和ROCK2KO)的HCT116细胞用抑制剂处理90分钟，并且通过蛋白质印迹可视化pMypt(T853)水平。ROCK抑制剂在110nM下有效阻断ROCK靶标MYPT1磷酸化。

图3。在有或没有ROCK抑制剂(实施例2化合物)的情况下，体外培养人少突胶质细胞/神经元祖细胞2天和14天。通过用市售的抗体进行染色来可视化巢蛋白和MAP2蛋白以鉴别出神经元细胞分化的不同阶段。ROCK抑制剂显著促进成熟神经元细胞标记物MAP2的表达，同时改善了神经突起生长，如通过在ROCK抑制剂存在下分化的细胞中MAP2信号的强增加所证明。

图4。在大鼠少突胶质细胞与大鼠背根神经节(DRG)外植体的共培养条件下，用ROCK抑制剂(实施例2化合物)处理改变了细胞骨架组织，产生许多较短的有序髓鞘节段，它们是通过神经丝染色来鉴别的。同时，ROCK抑制剂还促进了少突胶质细胞的轴突支持，其是通过少突胶质细胞(针对MBP染色)的排列以及轴突(针对神经丝染色)延伸的方向来说明的。

具体实施方式

ROCK抑制剂

根据本发明的化合物包括具有式I的那些：

其中：

每个R¹⁰独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹¹独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹²独立地选自H和低级烷基；

每个R¹³独立地选自H和低级烷基；

W为具有1至3个环杂原子的3至7元杂环；

c为2至4；

d为1至4；

R³选自H、低级烷基、取代的低级烷基和RR'N-(C_2-4烷基)-；

R⁵选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

a为0或1；

b为0至2；

以及

根据本发明的化合物包括具有式II的那些：

其中：

每个R¹⁰独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹¹独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹²独立地选自H和低级烷基；

每个R¹³独立地选自H和低级烷基；

W为具有1至3个环杂原子的3至7元杂环；

c为2至4；

d为1至4；

R³选自H、低级烷基、取代的低级烷基和RR'N-(C_2-4烷基)-；

b为0至2；以及

在本发明的某些实施方案中，提供了式III化合物：

其中：

每个R¹⁰独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹¹独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹²独立地选自H和低级烷基；

每个R¹³独立地选自H和低级烷基；

W为具有1至3个环杂原子的3至7元杂环；

c为2至4；

d为1至4；

R³选自H、低级烷基、取代的低级烷基和RR'N-(C_2-4烷基)-；以及

在本发明的某些实施方案中，提供了式IV化合物：

其中：

环A为5或6元芳族环，其任选地含有至多3个环杂原子；

R³选自H、低级烷基、取代的低级烷基和RR'N-(C_2-4烷基)-；

b为0至2；

R⁶选自由以下组成的组：H、卤代基、低级烷基、取代的低级烷基、低级烷氧基、氨基、羟基和羧基；

R⁷选自由以下组成的组：H、卤代基、羟基、低级烷基、低级烷氧基、硝基、氰基、C₁-C₃全氟烷基、C₁-C₃全氟烷氧基、羧基、RR'N-、RR'NCO-、RCONH-和RCONR'-；

每个R和R'独立地选自H、低级烷基和C3-C6环烷基，或者替代地，R和R'一起形成5至6元杂环；以及

m为1至3。

在本发明的某些实施方案中，提供了式V化合物：

其中：

环B为5或6元芳族环，其任选地含有至多3个环杂原子；

R³选自H、低级烷基、取代的低级烷基和RR'N-(C_2-4烷基)-；

b为0至2；

R⁸选自由以下组成的组：H、卤代基、低级烷基、取代的低级烷基、低级烷氧基、氨基、羟基和羧基；

R⁹选自由以下组成的组：H、卤代基、羟基、低级烷基、低级烷氧基、硝基、氰基、C₁-C₃全氟烷基、C₁-C₃全氟烷氧基和羧基、RR'N-、RR'NCO-、RCONH-和RCONR'-；

m为1至3。

在本发明的某些实施方案中，提供了式VI化合物：

其中：

每个R¹⁰独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹¹独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹²独立地选自H和低级烷基；

每个R¹³独立地选自H和低级烷基；

W为具有1至3个环杂原子的3至7元杂环；

c为2至4；

d为1至4；

R³选自H、低级烷基、取代的低级烷基和RR'N-(C_2-4烷基)-；

b为0至2；

每个R²¹独立地选自由以下组成的组：H、卤代基、羟基、低级烷基、低级烷氧基、硝基、氰基、C₁-C₃全氟烷基、C₁-C₃全氟烷氧基、羧基、RR'N-、RR'NCO-、RCONH-、RCONR'-、RO₂C-、芳基-O-和杂芳基-O-；以及

n为0至3。

在本发明的某些实施方案中，提供了式VII化合物：

其中：

每个R¹⁰独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹¹独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹²独立地选自H和低级烷基；

每个R¹³独立地选自H和低级烷基；

W为具有1至3个环杂原子的3至7元杂环；

c为2至4；

d为1至4；

b为0至2；

n为0至3。

在本发明的某些实施方案中，提供了式VIII化合物：

其中：

每个R¹⁰独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹¹独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹²独立地选自H和低级烷基；

每个R¹³独立地选自H和低级烷基；

W为具有1至3个环杂原子的3至7元杂环；

c为2至4；

d为1至4；

n为0至3。

在本发明的某些实施方案中，提供了式IX化合物：

其中：

每个R¹⁰独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹¹独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹²独立地选自H和低级烷基；

每个R¹³独立地选自H和低级烷基；

W为具有1至3个环杂原子的3至7元杂环；

c为2至4；

d为1至4；

每个R²²独立地选自由以下组成的组：H、卤代基、羟基、低级烷基、低级烷氧基、氨基、C₁-C₃全氟烷基和C₁-C₃全氟烷氧基；以及

n为0至3。

在式I至IX的优选实施方案中，R¹被选择为低级烷基。更优选地，R¹为C₁至C₃烷基，并且还更优选地，R¹为甲基或乙基。

术语“烷基”是指饱和脂族基团，包括直链烷基、支链烷基、环烷基(脂环族)基团、烷基取代的环烷基和环烷基取代的烷基。在优选的实施方案中，直链或支链烷基在其主链中具有8个或更少的碳原子(例如，对于直链为C1-C8，对于支链为C3-C8)，并且更优选为6个或更少。同样，优选的环烷基在其环结构中具有3-8个碳原子，并且更优选在环结构中具有3至6个碳。

除非另外指定碳的数目，否则如本文所用的“低级烷基”是指如上所定义但是具有1至4个碳并且更优选地1至3个碳原子的烷基。在优选的实施方案中，本文称为烷基的取代基为低级烷基。低级烷基包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基和叔丁基。

术语“环烷基”是指在环中具有3至6个碳的饱和碳环基团。环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。

术语“取代的烷基”是指如上所定义并且具有1至3个取代基的烷基。取代基选自由以下组成的组：卤代基、羟基、低级烷氧基、氨基、低级烷基氨基、硝基、氰基、全氟低级烷基、全氟低级烷氧基和羧基。

“取代的低级烷基”是指如上所定义并且具有1至3个取代基的低级烷基。取代基选自由以下组成的组：卤代基、羟基、低级烷氧基、氨基、硝基、氰基、全氟低级烷基、全氟低级烷氧基和羧基。

“取代的环烷基”例如“取代的C₃-C₆环烷基”是指如上所定义并且具有1至3个取代基的环烷基。取代基选自由以下组成的组：卤代基、羟基、低级烷基、低级烷氧基、氨基、硝基、氰基、全氟低级烷基、全氟低级烷氧基和羧基。

如本文所用，术语“卤素”或“卤代基”是指-F、-Cl、-Br或-I，并且优选地为F、Cl或Br。

如本文所用，术语“烷氧基(alkoxyl)”或“烷氧基(alkoxy)”是指通过氧原子连接的如上所定义的烷基。代表性烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、叔丁氧基等。术语“低级烷氧基”是指其中低级烷基通过氧原子键合的烷氧基取代基，其中“低级烷基”部分如上所定义。

术语“胺”和“氨基”是指未取代的和取代的胺，例如可以由以下通式表示的部分：

其中R和R'各自独立地选自H和低级烷基。

如本文所用的术语“芳基”包括可包含零至四个杂原子的5和6元单环芳族基团，例如苯、芘、吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、

唑、噻唑、三唑、吡唑、吡啶、吡嗪、哒嗪和嘧啶等。在环结构中具有杂原子的那些芳基还可被称为“芳基杂环”或“杂芳基”基团。芳族环可以在一个或多个环位置处被如上所述的此类取代基取代。术语“芳基”还包括具有两个或更多个环的多环系统，其中两个或更多个碳是两个相邻的环所共有的(环为“稠合环”)，其中至少一个环是芳族的。

如本文所用的术语“芳烷基”是指被芳基取代的烷基。优选地，烷基为如上所述的低级烷基。

术语“杂环”或“杂环基”是指具有4至7个环原子并且包括1至3个环杂原子的非芳族杂环。

如本文所用，术语“杂原子”意指除碳或氢以外的任何元素的原子。优选的杂原子为氮、氧和硫。最优选的为氮和氧。

如本文所用，每个表达的定义例如烷基、m、n、R¹、R²等，当在任何结构中出现多于一次时，旨在独立于其在同一结构中其他位置的定义。

应当理解，“取代”或“被…取代”包括隐含前提条件，即这种取代是根据被取代的原子和取代基的允许的化合价，并且所述取代能产生稳定的化合物，例如不会自发地进行转变，诸如通过重排、环化、消除等进行转变的化合物。

如本文所用，术语“取代的”预期包括有机化合物的所有可允许的取代基。在广义方面，可允许的取代基包括有机化合物的非环状的和环状的、支链的和非支链的、碳环的和杂环的、芳族的和非芳族的取代基。说明性取代基包括例如上文所述的那些。可允许的取代基可以是一个或多个取代基并且对于适当的有机化合物而言是相同或不同的。出于本发明的目的，杂原子诸如氮可以具有氢取代基和/或本文所述的有机化合物的满足杂原子的化合价的任何可允许的取代基。本发明并不旨在以任何方式受到有机化合物的可允许的取代基的限制。

如本文所用的短语“保护基”意指临时取代基，其保护潜在的反应性官能团免于不希望的化学转化。这样的保护基的实例分别包括羧酸的酯、醇的甲硅烷基醚以及醛和酮的缩醛和缩酮。已经综述了保护基化学领域(Greene,T.W.；Wuts,P.G.M.Protective Groupsin Organic Synthesis,第二版；Wiley:New York,1991)。

本发明的某些化合物可以特定的几何或立体异构形式存在。本发明设想所有此类化合物包括顺式和反式异构体、R和S对映异构体、非对映异构体、(D)异构体、(L)异构体、其外消旋混合物以及它们的其他混合物均落在本发明的范围内。另外的非对称碳原子可以存在于取代基例如烷基中。所有此类异构体以及其混合物都包括在本发明中。本发明还设想用原子的同位素对化合物进行取代，例如用氘取代氢等。

在一方面，本发明提供了作为ROCK抑制剂的式I-IX化合物。ROCK以两种形式存在：ROCK 1(ROCKβ；p160-ROCK)和ROCK 2(ROCKα)。在一些实施方案中，式I-IX化合物选择性地抑制ROCK1。在一些实施方案中，式I-IX化合物选择性地抑制ROCK2。在一些实施方案中，式I-IX化合物对于ROCK1和ROCK2的抑制是非选择性的。在本发明的上下文中，选择性意指抑制剂对一种激酶表现出的IC₅₀与对另一激酶的IC₅₀相比降低了至少2倍、至少5倍、至少10倍或至少25倍。

确定激酶抑制的方法是本领域已知的。例如，可以通过测量底物的酶特异性磷酸化来确定酶的激酶活性和测试化合物的抑制能力。商业测定和试剂盒是可获得的并且可以使用。例如，可以使用

测定(Molecular Devices)来确定激酶抑制。这种测定方法涉及使用荧光标记的肽底物。感兴趣的激酶对标记肽的磷酸化通过磷酸基和三价金属之间的特异性、高亲和力相互作用促进了肽与基于三价金属的纳米粒子的结合。接近纳米粒子导致荧光偏振增加。激酶抑制剂对激酶的抑制防止了底物的磷酸化，从而限制了荧光标记底物与纳米粒子的结合。这样的测定可以与微孔测定形式兼容，从而允许同时确定多种化合物的IC₅₀。

治疗疾病的方法

在本发明的一个方面，提供了一种治疗患有疾病的患者的方法，所述方法包括向需要这种治疗的患者施用治疗有效量的本发明的化合物。如本文所用的短语“治疗有效量”意指在适用于任何医学治疗的合理的利益/风险比(例如适用于任何医学治疗的合理副作用)下在动物中的至少一种细胞亚群中有效产生某一所需治疗作用的化合物、材料或包含本发明化合物的组合物的量。

CNS病症

式I-IX化合物表现出有效的血脑屏障(BBB)渗透和向中枢神经系统组织的分布。因此，本发明的化合物可用于治疗中枢神经系统病症以及得益于穿过BBB的能力的病症例如某些眼部病症。此类病症可涉及神经元变性或神经组织的物理损伤，包括但不限于亨廷顿氏病、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、肌萎缩侧索硬化(ALS)、巴滕病、痴呆、脊髓性肌萎缩症、运动神经元病、脊髓小脑性共济失调、急性或慢性疼痛、痴呆、神经元变性、脊髓损伤、脑血管痉挛或多发性硬化症。

心血管疾病和其他疾病

抑制ROCK和/或ROCK介导的磷酸化的本发明化合物可用于治疗患有涉及Rho激酶功能的心血管和非心血管疾病的患者，所述疾病例如高血压、肺动脉高压、动脉粥样硬化、再狭窄、冠心病、心脏肥大、高眼压、视网膜病变、缺血性疾病、脑缺血、脑血管痉挛、阴茎勃起功能障碍、外周循环病症、外周动脉闭塞性疾病、青光眼(例如，调控眼内压)、纤维化肺、纤维化肝、纤维化肾、慢性阻塞性肺部疾病(COPD)、成人呼吸窘迫综合征、中枢神经系统病症例如神经元变性和脊髓损伤。此外，本发明的ROCK抑制剂可用于治疗动脉血栓形成病症例如血小板聚集和白细胞聚集以及骨吸收。

在本发明的一个实施方案中，化合物用于治疗脑海绵状畸形(CCM)。CCM为由渗漏的扩张毛细血管簇组成的血管病变，并与包括癫痫发作和中风的中枢神经系统(CNS)病症相关。血管完整性的丧失被认为涉及RhoA的激活和ROCK的激活，导致细胞骨架稳定性改变和血管通透性增加。本发明的化合物抑制ROCK激活并恢复血管内皮功能。

青光眼

在本发明的一个实施方案中，式I-IX化合物用于治疗青光眼。两种最常见的原发性开角型青光眼和急性闭角型青光眼的特征在于高眼压。色素性青光眼和先天性青光眼的特征还在于流体流出减少和眼内压(IOP)高。正常眼压性青光眼被认为是由于另一种机制，特别是向视神经的血液流动不良。继发性青光眼可能是由损伤、感染、炎症、肿瘤或白内障引起的，并且还与长期使用类固醇、系统性高血压、糖尿病性视网膜病和视网膜中央静脉阻塞有关。除ROCK抑制剂外，具有新生血管成分的青光眼还可受益于血管生成抑制剂的施用。

炎症

本发明提供一种在受试者中治疗炎症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的式I-IX化合物。炎症包括但不限于哮喘、心血管炎症、肾炎症、动脉粥样硬化和动脉硬化以及败血症。可以通过本发明的方法治疗的其他炎性病况包括纤维化病况(包括例如特发性肺纤维化、NASH、硬皮病、全身性硬化和肝硬化)。

自身免疫病症

本发明提供一种在受试者中治疗自身免疫病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的式I-IX化合物。自身免疫病症包括但不限于类风湿性关节炎、多发性硬化症、系统性红斑狼疮(SLE；狼疮)、牛皮癣、克罗恩氏病、特应性皮炎、湿疹或移植物抗宿主病(GVHD)、急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、急性坏死性出血性白质脑炎、艾迪生氏病、无丙种球蛋白血症、斑秃、淀粉样变性病、强直性脊柱炎、抗GBM/抗TBM肾炎、抗磷脂综合征(APS)、自身免疫性血管性水肿、自身免疫性再生障碍性贫血、自身免疫性自主神经异常、自身免疫性肝炎、自身免疫性高脂血症、自身免疫性免疫缺陷、自身免疫性内耳病(AIED)、自身免疫性心肌炎、自身免疫性卵巢炎、自身免疫性胰腺炎、自身免疫性视网膜病、自身免疫性血小板减少性紫癜(ATP)、自身免疫性甲状腺疾病、自身免疫性荨麻疹、轴突和神经元神经病、巴娄病、白塞病、大疱性类天疱疮、心肌病、卡斯特曼病(C astleman disease)、乳糜泻(Celiac disease)、恰加斯病(Chagas disease)、慢性疲劳综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病(CIDP)、慢性复发性多灶性骨髓炎(CRMO)、查格-施特劳斯综合征(Churg-Strauss syndr ome)、瘢痕性天疱疮/良性粘膜天疱疮、克罗恩氏病、科干综合征(Co ganssyndrome)、冷凝集素病、先天性心传导阻滞(Congenital heart b lock)、柯萨奇病毒性心肌炎(Coxsackie myocarditis)、CREST病、特发性混合型冷球蛋白血症、脱髓鞘性神经病、疱疹样皮炎、皮肌炎、德维克氏病(Devic's disease)(视神经脊髓炎)、盘状狼疮、德雷斯勒氏综合征(Dressler’s syndrome)、子宫内膜异位症、嗜酸性食管炎、嗜酸性筋膜炎、结节性红斑、实验性变态反应性脑脊髓炎、伊文氏综合征(Evans syndrome)、纤维肌痛、纤维化肺泡炎、巨细胞动脉炎(颞动脉炎)、巨细胞心肌炎、肾小球肾炎、古德帕斯彻氏综合征(Goodpasture's syndrome)、肉芽肿伴多血管炎(GPA)(以前称为韦格纳氏肉芽肿(Wegener's Granulomatosis))、葛瑞夫兹氏病(Graves'disease)、格林-巴利综合征(Guillain-Barre syndrome)、桥本氏脑炎(Hashimoto's encephali tis)、桥本氏甲状腺炎、溶血性贫血、亨-舍二氏紫癜(Henoch-Schonlei n purpura)、妊娠疱疹、低丙种球蛋白血症(Hypogammaglobulinemia)、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、IgA肾病、IgG4相关硬化性疾病、免疫调节脂蛋白、包涵体肌炎、间质性膀胱炎、幼年型关节炎、幼年型糖尿病(1型糖尿病)、幼年型肌炎、川崎综合征(Kawasaki syndrom e)、蓝伯－伊顿综合征(Lambert-Eaton syndrome)、白细胞碎裂性血管炎、扁平苔藓、硬化性苔藓、木样结膜炎、线状IgA病(LAD)、狼疮(SLE)、莱姆病(Lyme disease)、慢性梅尼埃病(chronic Meniere's disease)、显微镜下多血管炎、混合性结缔组织病(MCTD)、莫伦氏溃疡(M ooren's ulcer)、穆-哈二氏病(Mucha-Habermann disease)、多发性硬化症、重症肌无力、肌炎、发作性睡病、视神经脊髓炎(戴维斯氏)、中性粒细胞减少症、眼瘢痕性天疱疮、视神经炎、复发性风湿症(Palind romic rheumatism)、PANDAS(伴有链球菌感染的小儿自身免疫性神经精神障碍(Pediatric Autoimmune Neuropsychiatric Disorders Associ ated withStreptococcus))、副肿瘤性小脑变性、阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)、帕罗综合征(Parry Romberg syndrome)、帕森-特纳综合征(Parsonnage-Turner syndrome)、睫状体平坦部炎(Pars planitis)(外周葡萄膜炎)、天疱疮、外周神经病变、周围性脑脊髓炎、恶性贫血、POEMS综合征、结节性多动脉炎、I型、II型和III型自身免疫性多腺综合征、风湿性多肌痛、多发性肌炎、心肌梗塞后综合征、心包切开术后综合征、孕酮性皮炎、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、牛皮癣、牛皮癣性关节炎、特发性肺纤维化、坏疽性脓皮病、纯红细胞再生障碍、雷诺现象(Raynaud's phenomenon)、反应性关节炎、反射性交感神经营养障碍、赖特氏综合征(Reiter's syndrome)、复发性多软骨炎、不安腿综合征、腹膜后纤维化、风湿热、类风湿性关节炎、结节病(Sarcoidosis)、施密特综合征(Schmidt syndrome)、巩膜炎、硬皮病、干燥综合征(Sjogren's syndrome)、精子和睾丸自身免疫、僵人综合征、亚急性细菌性心内膜炎(SBE)、苏萨克氏综合征(Susac's syndrome)、交感性眼炎、大动脉炎(Takayasu's arteritis)、颞动脉炎/巨细胞动脉炎、血小板减少性紫癜(TTP)、托洛萨-亨特综合征(Tolosa-Hunt syndrome)、横贯性脊髓炎、1型糖尿病、溃疡性结肠炎、未分化结缔组织病(UCTD)、葡萄膜炎、血管炎、皮肤病水疱和白癜风。

根据本发明，通过ROCK抑制靶向Th17(IL-17分泌)细胞提供了一种用于治疗Th17细胞介导的疾病的方法，所述疾病包括但不限于自身免疫病症例如RA、MS、SLE、牛皮癣和克罗恩氏病以及在人体内的GVHD。在本发明的一个实施方案中，ROCK抑制剂为式I化合物。

Treg的发展和功能取决于特定信号转导途径的激活。TGF-β和IL-2激活在控制Treg抑制功能方面起重要作用的Foxp3和STAT5转录因子的表达。另一方面，促炎细胞因子通过上调STAT3磷酸化来抑制Foxp3的表达。根据本发明，ROCK2的药理学抑制可以调控Treg功能。

肿瘤性疾病

本发明的ROCK抑制剂抑制肿瘤细胞生长和转移以及血管生成，并且可用于治疗肿瘤性疾病。肿瘤性疾病包括由异常或不受控制的细胞分裂引起的任何恶性生长或肿瘤，并可能通过淋巴系统或血流蔓延到身体的其他部位。肿瘤性疾病包括但不限于淋巴瘤(通常为恶性的淋巴组织肿瘤)、癌(任何源自上皮组织的恶性肿瘤)、白血病(血液形成组织的恶性肿瘤；特征在于白细胞异常增殖)、肉瘤(通常由结缔组织(骨骼或肌肉等)引起的恶性肿瘤)和母细胞瘤(前体细胞的恶性肿瘤)。非限制性实例包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、垂体癌、食道癌、星形细胞瘤、软组织肉瘤、非小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞状癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠道癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌、大肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、肝癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、脑癌、子宫内膜癌、睾丸癌、胆管癌、胆囊癌、胃癌、黑素色瘤和各种类型的头颈部癌。

体重减轻/增加

根据本发明，ROCK抑制剂用于实现体重减轻和/或限制体重增加。ROCK抑制剂促进正常受试者的体重减轻，并且在容易肥胖的受试者中限制体重增加。

胰岛素抵抗

在本发明的一个实施方案中，ROCK抑制剂用于减少或预防胰岛素抵抗或恢复胰岛素敏感性。因此，在一个实施方案中，本发明的化合物用于促进或恢复胰岛素依赖性葡萄糖摄取。在本发明的另一个实施方案中，本发明的ROCK抑制剂用于促进或恢复葡萄糖耐量。在本发明的另一个实施方案中，本发明的ROCK抑制剂用于治疗代谢综合征。在另一个实施方案中，本发明的ROCK抑制剂用于减少或预防高胰岛素血症。在本发明的一个实施方案中，ROCK抑制剂用于治疗糖尿病(特别是2型糖尿病)。本发明的ROCK抑制剂还可以用于促进或恢复胰岛素介导的血管平滑肌细胞(VSMC)松弛。

血管生成

本发明提供了用于治疗具有血管生成成分的疾病和病症的方法和化合物。根据本发明，在某些实施方案中，通过向受试者施用有效量的ROCK抑制剂来治疗此类疾病和病症。根据本发明，还可以通过施用有效量的rho激酶抑制剂和有效量的血管生成抑制剂来治疗此类疾病和病症。根据本发明，以这种方式治疗具有血管生成成分的眼部疾病和病症。在一个实施方案中，本发明提供一种治疗年龄相关性黄斑变性(AMD)的方法，AMD以“干”和“湿”形式出现。AMD的“湿”形式由于异常的血管生长(新生血管)而导致视力下降。这些视网膜血管的出血、渗漏和瘢痕形成最终导致对光感受器的不可逆损伤。干形式是视网膜色素上皮层萎缩造成的，视网膜色素上皮层萎缩通过眼睛中部的光感受器(视杆和视锥)损失而导致视力下降。在另一个实施方案中，本发明提供了一种治疗脉络膜新生血管(CNV)的方法。脉络膜新生血管是这样的过程，在所述过程中，新血管在脉络膜中通过布鲁赫膜(Bruchmembrane)生长并侵入视网膜下空间，并且除其他原因之外是年龄相关性黄斑变性、近视和眼外伤的症状。在另一个实施方案中，本发明提供了一种治疗糖尿病性黄斑水肿(DME)的方法。在另一个实施方案中，本发明提供了一种治疗继发于视网膜分支静脉阻塞(BRVO)或视网膜中央静脉阻塞(CRVO)的黄斑水肿的方法。在其他实施方案中，待治疗的疾病包括但不限于感染性和非感染性视网膜新生血管、感染性和非感染性角膜新生血管、虹膜新生血管、葡萄膜炎、新血管性青光眼和早产儿视网膜病变(ROP)。治疗方法可以是预防性的，例如避免角膜移植后角膜新生血管，或调节小梁切除术中的伤口愈合过程。这些疾病和病症可以特征在于具有血管生成成分。根据本发明，通过施用ROCK抑制剂和血管生成抑制剂来治疗此类疾病。

因此，在一个这样的实施方案中，所述疾病或病症为AMD，并且需要AMD治疗的受试者被施用一定量的有效治疗AMD的ROCK抑制剂。在另一个实施方案中，受试者被使用以有效治疗AMD的量的ROCK抑制剂和血管生成抑制剂。在一些实施方案中，血管生成抑制剂为VEGFR2拮抗剂。在某些此类实施方案中，VEGFR2拮抗剂结合VEGF。在其他此类实施方案中，VEGFR2拮抗剂与VEGFR2结合。此类VEGFR2结合抑制剂包括与VEGFR2的胞外域结合的剂，包括但不限于抗体及其VEGFR2结合片段，以及与VEGFR2的胞内域相互作用并阻断VEGFR2依赖性信号转导的激活的剂。VEGFR2拮抗剂还包括与其他细胞成分相互作用以阻断VEGFR2依赖性信号转导的剂。在本发明的其他实施方案中，对如上所述的具有血管生成成分的其他眼部疾病和病症进行类似治疗。

根据本发明，将ROCK抑制剂和血管生成抑制剂以有效治疗或预防以过度血管生成为特征的病理病况的量施用于受试者。涉及例如血管形成和/或炎症的此类病况包括动脉粥样硬化、类风湿性关节炎(RA)、血管瘤、血管纤维瘤和牛皮癣。血管生成性疾病的其他非限制性实例为早产儿视网膜病变(晶状体后纤维增生(retrolental fibroplastic))、角膜移植排斥、与屈光手术并发症有关的角膜新生血管、与隐形眼镜并发症有关的角膜新生血管、与翼状胬肉和复发性翼状胬肉有关的角膜新生血管、角膜溃疡病以及非特异性眼表疾病、胰岛素依赖型糖尿病、多发性硬化症、重症肌无力、克罗恩氏病、自身免疫性肾炎、原发性胆汁性肝硬化、急性胰腺炎、异位排异反应、过敏性炎症、接触性皮炎和迟发型超敏反应、炎性肠病、败血性休克、骨质疏松症、骨关节炎、神经元炎症引起的认知缺陷、奥韦综合征(Osler-Weber syndrome)、再狭窄以及包括巨细胞病毒感染的真菌、寄生虫和病毒感染。

本发明提供了泛ROCK抑制剂(即，抑制ROCK1和ROCK2的化合物)。一项研究发现，与非肿瘤样肝相比，ROCK2在肝细胞癌中经常过表达，而ROCK1表达没有改变。可以从用ROCK2选择性抑制剂进行的治疗受益的其他癌症包括但不限于结肠癌和膀胱癌。相比之下，已经观察到ROCK1表达水平在乳腺肿瘤中更高。可以测试任何癌症以确定ROCK1和/或ROCK2是否过表达，并据此进行治疗。在某些情况下，ROCK1和ROCK2同工型在调控某些下游靶标时显示相似性，而且两种同工型似乎都不占优势。在此类情况下，泛ROCK抑制剂可能是优选的。

与其他剂的组合

本发明的化合物可以有利地与第二剂一起施用于有需要的患者。当ROCK抑制剂与第二剂一起施用时，ROCK抑制剂和第二剂可以顺序或伴随施用。顺序意指施用一种剂一段时间后，再施用另一药剂，然后再施用第一剂。当顺序施用剂时，一种剂的水平在施用第二剂时可能不维持在治疗有效水平，反之亦然。伴随意指即使各剂不是同时施用的，第一剂和第二剂也是根据使两种剂维持在大致上治疗有效水平的计划表来施用的。每种剂可以单剂量或多剂量施用，并且剂量可按任何计划表施用，包括但不限于每天两次、每天一次、每周一次、每两周一次和每月一次。

本发明还包括辅助施用。辅助施用意指除了已经施用以治疗疾病或疾病症状的第一剂之外，还向患者施用第二剂。在一些实施方案中，辅助施用涉及向第一剂的施用不足以治疗疾病或疾病症状的患者施用第二剂。在其他实施方案中，辅助施用涉及向疾病已经通过施用第一剂而被有效治疗的患者施用第二剂，期望辅助治疗改善治疗结果。在一些实施方案中，施用第一剂和第二剂的作用是协同的。在一些实施方案中，与单独施用任一剂相比，施用第一剂和第二剂预防复发或延长直到复发为止的时间。在一些实施方案中，施用第一剂和第二剂允许第一剂和第二剂的施用剂量和/或频率减少。

可以与本发明的化合物组合施用的抗炎药和免疫抑制剂包括类固醇药物(例如糖皮质激素(例如，地塞米松))、FK506(他克莫司)、环孢素、芬戈莫德(fingolimod)、干扰素(例如IFNβ或IFNγ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)结合蛋白(例如英夫利昔单抗(Remicade)、依那西普(Enbrel)或阿达木单抗(Humira))、麦考酚酸、MMF、甲氨蝶呤、NSAID、他汀类药物、西罗莫司/替西罗莫司/依维莫司、阿巴西普(Orencia)、阿那白滞素(Kineret)、赛妥珠单抗(Cimzia)、戈利木单抗(Simponi)、依奇珠单抗(Taltz)、那他珠单抗(Tysabri)、利妥昔单抗(Rituxan)、苏金单抗(Cosentyx)、托珠单抗(Actemra)、优特克单抗(Stelara)、维多珠单抗(Entyvio)、巴利昔单抗(Simulect)、达克珠单抗(Zinbryta)、莫罗单抗(OrthocloneOKT3)、Jakafi(鲁索替尼)、Xeljanz(托法替尼)和Otezla(阿普斯特)。

在本发明的一个实施方案中，将本发明的rho激酶抑制剂和抗肿瘤剂施用于有需要的受试者。在另一个实施方案中，将本发明的rho激酶抑制剂和血管生成抑制剂施用于有需要的受试者。在另一个实施方案中，将本发明的rho激酶抑制剂和抗炎剂施用于有需要的受试者。在又另一个实施方案中，施用本发明的ROCK抑制剂和免疫抑制剂。第二剂可以是但不限于小分子、抗体或其抗原结合片段或放射。

抗肿瘤剂包括但不限于细胞毒性化学治疗剂、靶向的小分子和生物分子以及放射。除了本发明的rho激酶抑制剂以外，可以施用以用于肿瘤治疗的化合物和剂包括以下：伊立替康、依托泊苷、喜树碱、5-氟尿嘧啶、羟基脲、他莫昔芬、紫杉醇、卡培他滨、卡铂、顺铂、博来霉素、达霉素、吉西他滨、阿霉素、达柔比星、环磷酰胺和放射疗法，放射疗法可以是外部的(例如，外束放射疗法(EBRT))或内部的(例如，近距离治疗(BT))。

靶向小分子和生物分子包括但不限于信号转导途径的成分的抑制剂，例如酪氨酸激酶调节剂和受体酪氨酸激酶抑制剂，以及与肿瘤特异性抗原结合的剂。实例包括：表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂，包括吉非替尼、厄洛替尼和西妥昔单抗；HER2抑制剂(例如，曲妥珠单抗、曲妥珠单抗美坦新(曲妥珠单抗-DM1；T-DM1)和帕妥珠单抗)；抗VEGF抗体和片段(例如，贝伐单抗)；抑制CD20的抗体(例如，利妥昔单抗、替伊莫单抗)；抗VEGFR抗体(例如，雷莫芦单抗(IMC-1121B)、IMC-1C11和CDP791)；抗PDGFR抗体；和伊马替尼。小分子激酶抑制剂可以对特定的酪氨酸激酶具有特异性，或者可以是两种或更多种激酶的抑制剂。例如，化合物N-(3,4-二氯-2-氟苯基)-7-({[(3aR,6aS)-2-甲基八氢环戊[c]吡咯-5-基]甲基}氧基)-6-(甲氧基)喹唑啉-4-胺(也称为XL647、EXEL-7647和KD-019)为几种受体酪氨酸激酶(RTK)包括EGFR、EphB4、KDR(VEGFR)、Flt4(VEGFR3)和ErbB2的体外抑制剂，还为SRC激酶抑制剂，其参与导致肿瘤对某些TKI无应答的途径。在本发明的实施方案中，有需要的受试者的治疗包括施用式I-IX的ROCK抑制剂和施用KD-019。

达沙替尼(BMS-354825；Bristol-Myers Squibb,New York)为另一种口服可生物利用的ATP位点竞争性Src抑制剂。达沙替尼还靶向Bcr-Abl(经FDA批准用于患有慢性粒细胞性白血病(CML)或费城染色体阳性(Ph+)急性淋巴细胞白血病(ALL)的患者)以及c-Kit、PDGFR、c-FMS、EphA2和Src家族激酶。Src和Bcr-Abl的另外两种口服酪氨酸激酶抑制剂为博舒替尼(SKI-606)和塞卡替尼(AZD0530)。

根据本发明，可以将血管生成抑制剂与本发明的化合物联合施用于受试者。血管生成抑制剂包括任何抑制新血管生长的物质。例如，血管生成抑制剂包括VEGF、PlGF和VEGF受体的拮抗剂，包括本文所公开的抗体。VEGF拮抗剂减少或阻断细胞中与VEGF相关的功能。VEGF拮抗剂可通过与VEGF结合并阻断与其受体的结合而作用于VEGF，和/或可作用于参与VEGF介导的信号转导的另一种细胞组分。类似地，VEGFR2拮抗剂为通过与VEGFR2结合并阻断配体与VEGFR2底物结合或相互作用来减少或阻断VEGFR2介导的信号转导的剂，或为作用于另一种细胞组分以减少或阻断VEGFR2介导的信号转导的剂。因此，血管生成抑制剂包括抗VEGFR2抗体以及但不限于VEGF、VEGFR1、VEGFR2、PDGF、PDGFR-β、神经纤毛蛋白-1(NRP1)和补体的拮抗剂。

血管生成抑制剂包括阻断由例如VEGF、PDGF、VEGF或PDG F受体的配体或补体介导的信号转导的细胞内剂。抑制血管生成抑制剂的细胞内剂包括但不限于以下。舒尼替尼(Sutent；SU11248)为VE GFR1-VEGFR3、PDGFRα和PDGFRβ、干细胞因子受体(cKIT)、Flt-3和集落刺激因子-1受体(CSF-1R)的泛特异性小分子抑制剂。阿西替尼(AG013736；Inlyta)为抑制VEGFR-1-VEGFR-3、PDGFR和cKIT的另一种小分子酪氨酸激酶抑制剂。西地尼布(AZD2171)为VEGFR-1-VEGFR-3、PDGFRβ和cKIT的抑制剂。索拉非尼(Nexavar)为几种酪氨酸蛋白激酶包括VEGFR、PDGFR和Raf激酶的另一种小分子抑制剂。帕唑帕尼(Votrient；GW786034)抑制VEGFR-1、VEGFR-2和VEGFR-3、cKIT以及PDGFR。福瑞替尼(GSK1363089；XL880)抑制VEGFR2和MET。CP-547632为VEGFR-2和碱性成纤维细胞生长因子(FGF)激酶的有效抑制剂。E-3810(6-(7-((1-氨基环丙基)甲氧基)-6-甲氧基喹啉-4-基氧基)-N-甲基-1-萘酰胺)在纳摩尔范围内抑制VEGF R-1、VEGFR-2和VEGFR-3以及FGFR-1和FGFR-2激酶。布立尼布(BMS-582664)为还抑制FGF受体信号传导的VEGFR-2抑制剂。CT-322(Adnectin)为基于人纤连蛋白结构域并且结合VEGFR2并抑制VEGFR2激活的小蛋白。凡德他尼(Caprelas；Zactima；ZD6474)为VE GFR2、EGFR和RET酪氨酸激酶的抑制剂。X-82(Xcovery)为通过生长因子受体VEGFR和PDGFR进行信号传导的小分子吲哚酮抑制剂。

药物组合物

在一方面，本发明提供了药学上可接受的组合物，其包含与一种或多种药学上赋形剂一起配制的治疗有效量的一种或多种式I-IX化合物。如下所述，本发明的药物组合物可以被特别配制来以固体或液体形式施用，包括适合于以下的那些：(1)口服施用，例如，灌服剂(水性或非水性溶液或混悬液)、片剂(例如以颊、舌下和全身吸收为目标的片剂)、大丸剂、粉剂、颗粒剂、用于向舌施用的糊剂；(2)肠胃外施用，例如作为例如无菌溶液或混悬液或缓释制剂通过皮下、肌肉内、静脉内或硬膜外注射；(3)局部应用，例如作为霜剂、软膏或控释贴剂或应用于皮肤的喷雾剂；(4)阴道内或直肠内，例如作为子宫帽、霜剂或泡沫；(5)舌下；(6)经眼；(7)透皮；或(8)经鼻。

本文使用短语“药学上可接受的”指代在合理的医学判断范围内适于与人和动物的组织接触的具有毒性、刺激性、过敏反应或其他问题或并发症、与合理的利益/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。

如本文所用的短语“药学上可接受的载体”意指药学上可接受的材料、组合物或媒介物，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、制造助剂(例如，润滑剂、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或硬脂酸锌或硬脂酸)或溶剂包封材料，其涉及将主题化合物从一个器官或身体的一部分携带或运输到另一器官或身体的另一部分。每种载体在与制剂的其他成分相容且对患者无害的意义上必须是“可接受的”。可以用作药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：(1)糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；(4)黄蓍胶粉；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；(9)油，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；(12)酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)pH缓冲溶液；(21)聚酯、聚碳酸酯和/或聚酐；和(22)药物制剂中使用的其他无毒相容性物质。

如上所述，本发明化合物的某些实施方案可含有碱性官能团，例如氨基或烷基氨基，并且因此能够与药学上可接受的酸形成药学上可接受的盐。在这方面，术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的相对无毒的无机和有机酸加成盐。这些盐可以在施用媒介物或剂型制造过程中原位制备，或者通过使本发明的游离碱形式的纯化的化合物与合适的有机或无机酸分别反应，并在随后的纯化过程中分离由此形成的盐来制备。代表性盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、乙酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘酸盐、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖酸盐和月桂基磺酸盐等(参见，例如，Berge等人(1977)“Pharmaceutical Salts”,J.Pharm.Sci.66:1-19)。

主题化合物的药学上可接受的盐包括化合物的常规无毒盐或季铵盐，例如来自无毒有机或无机酸的盐。例如，此类常规无毒盐包括：来源于无机酸的那些盐，所述无机酸诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等；以及由有机酸制备的盐，所述有机酸诸如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、棕榈酸、马来酸、羟基马来酸、苯基乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、磺胺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙磺酸等。

在其他情况下，本发明的化合物可含有一个或多个酸性官能团，并且因此能够与药学上可接受的碱形成药学上可接受的盐。在这些情况下，术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的相对无毒的无机和有机碱加成盐。这些盐同样可以在施用媒介物或剂型制造过程中原位制备，或通过将游离酸形式的纯化化合物与合适的碱(例如药学上可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)，与氨，或与药学上可接受的有机伯、仲或叔胺单独反应来制备。代表性碱金属或碱土金属盐包括锂、钠、钾、钙、镁和铝盐等。可用于形成碱加成盐的代表性有机胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等(参见，例如，Berge等人，同上)。

润湿剂、乳化剂和润滑剂例如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁以及着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、矫味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可存在于所述组合物中。

药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：(1)水溶性抗氧化剂，如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、偏亚硫酸氢钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧化剂，如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基茴香醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；和(3)金属螯合剂，如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。

本发明制剂包括适于口服、经鼻、局部(包括经颊和舌下)、直肠、阴道和/或肠胃外施用的那些制剂。制剂可方便地以单位剂型存在并且可通过药学领域中熟知的任何方法来制备。可与载体材料组合以制备单剂量形式的活性成分的量会随被治疗的受试者特别是施用方式而变化。可与载体材料组合以制备单剂量形式的活性成分的量通常是产生疗效的所述化合物的量。通常，在100％中，这个量将在约0.1％至约99％、优选地约5％至约70％、最优选地约10％至约30％的活性成分的范围内。

在某些实施方案中，本发明的制剂包含选自由以下组成的组的赋形剂：环糊精、纤维素、脂质体、胶束形成剂(例如胆汁酸)和聚合物载体(例如聚酯和聚酸酐)；和本发明化合物。在某些实施方案中，前述制剂使本发明的化合物具有口服生物利用度。

制备这些制剂或组合物的方法包括以下步骤：使本发明的化合物与载体以及任选地一种或多种辅助成分结合的步骤。一般来说，通过将本发明的化合物与液体载体、或细分的固体载体、或两者均匀地并且密切地结合，然后必要时使产物成形来制备制剂。

适合用于口服施用的本发明制剂可为如下形式：胶囊、扁囊剂、丸剂、片剂、锭剂、粉剂、颗粒剂或为水性液体或非水性液体中的溶液剂或混悬剂、或为水包油或油包水乳剂、或为酏剂或糖浆剂、或为软锭剂(pastille)(使用惰性基质，例如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶)和/或为漱口剂等，均包含预定量的作为活性成份的本发明化合物。还可将本发明化合物以大丸剂、糖饵剂(electuary)或糊剂施用。

在用于口服施用的本发明的固体剂型(胶囊、片剂、丸剂、糖衣丸、粉剂、颗粒剂、小丸剂等)中，将活性成分与一种或多种药学上可接受的赋形剂混合，所述药学上可接受的赋形剂包括药学上可接受的载体，例如柠檬酸钠或磷酸二钙，和/或以下任一种：(1)填充剂或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和/或硅酸；(2)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；(3)保湿剂，如甘油；(4)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；(5)缓溶剂，如石蜡；(6)吸收促进剂，例如季铵化合物和表面活性剂，例如泊洛沙姆和月桂基硫酸钠；(7)润湿剂，例如鲸蜡醇、单硬脂酸甘油酯和非离子表面活性剂；(8)吸收剂，例如高岭土和膨润土；(9)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠、硬脂酸锌、硬脂酸钠、硬脂酸及其混合物；(10)着色剂；和(11)控释剂，如交聚维酮或乙基纤维素。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，药物组合物还可以包含缓冲剂。在使用此类赋形剂如乳糖(lactose)或乳糖(milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等的软和硬壳的明胶胶囊中还可采用类似类型的固体组合物作为填充剂。

片剂可通过压制或模制来制备，任选地含有一种或多种辅助成分。可使用粘合剂(例如明胶或羟丙基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如羧甲基淀粉钠或交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂制备压制片剂。模制片剂可以通过在合适的机器中模制用惰性液体稀释剂湿润的粉末状化合物的混合物来制备。

可任选使本发明医药组合物的片剂和其他固体剂型例如糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂具有刻痕或用包衣材料和胶囊壳(例如制药领域熟知的肠溶衣和其他包衣)来制备。还可使用例如用于提供所需释放特征的不同浓度的羟丙基纤维素、其他聚合物基质、脂质体和/或微球将它们配制成用于提供其中所含活性成分的缓释或控释。它们可以被配制成用于快速释放，例如冷冻干燥。可通过例如过滤通过截留细菌的滤膜或通过在使用前即刻掺入为可溶解于无菌水或一些其他无菌注射介质的无菌固体组合物形式的灭菌剂将它们灭菌。这些组合物还可任选包含遮光剂并且还可为仅在或优先在胃肠道的某一部分任选以延迟方式释放所述活性成分的组合物。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。所述活性成分还可为微包封形式并且适当地包含一种或多种上述赋形剂。

用于口服施用本发明化合物的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。除活性成分以外，液体剂型可含有通常在本领域中使用的惰性稀释剂，例如像水或其他溶剂、溶解剂和乳化剂诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油以及芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和山梨醇酐的脂肪酸酯及其混合物。

除了稀释剂，所述口服组合物还可包含其他赋形剂例如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。

除活性化合物之外，悬浮液还可包含悬浮剂，例如像乙氧基化异十八醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂以及黄蓍胶及其混合物。

用于直肠或阴道施用的本发明药物组合物的制剂可作为栓剂呈现，所述栓剂可通过将一种或多种本发明化合物与一种或多种适合的无刺激性赋形剂或载体(包括，例如，可可脂、聚乙二醇、栓剂蜡或水杨酸酯)混合来制备，所述栓剂在室温下为固体，但在体温下为液体并且因此在直肠或阴道腔中将会熔化并且释放活性化合物。

适合用于阴道施用的本发明制剂还包括包含本领域已知的适合的此类载体的阴道栓剂、止血栓、霜剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾制剂。

用于局部或透皮施用本发明化合物的剂型包括粉剂、喷雾剂、软膏、糊剂、霜剂、洗液、凝胶剂、溶液、贴剂以及吸入剂。可在无菌条件下将所述活性化合物与药学上可接受的载体以及与可能需要的任何防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。

除本发明活性化合物之外，所述软膏、糊剂、霜剂和凝胶剂可包含赋形剂，如动物和蔬菜脂肪、油、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、硅酸、滑石和氧化锌或其混合物。

除本发明化合物之外，粉剂和喷雾剂可包含赋形剂如乳糖、滑石、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末或这些物质的混合物。喷雾剂可额外地包含常规推进剂，如氯氟烃和挥发性未取代的烃(如丁烷和丙烷)。

透皮贴剂具有提供向身体受控递送本发明化合物的附加优点。此类剂型可通过将化合物溶解或分散于适当的介质中来制备。吸收促进剂也可用于增加化合物穿过皮肤的通量。这种通量的速率可通过提供速率控制膜或通过将化合物分散于聚合物基质或凝胶中来控制。

眼用制剂、眼用软膏、粉剂、溶液等也认为在本发明范围内。

适合用于肠胃外施用的本发明的药物组合物包含一种或多种本发明化合物以及一种或多种药学上可接受的无菌等渗水溶液或非水溶液、分散液、悬浮液或乳液或在使用之前可被重构成无菌注射溶液或分散液的，所述无菌注射溶液或分散液可包含糖、醇、抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、使所述制剂与预期接受者的血液等渗的溶质或者悬浮剂或增稠剂。

可用于本发明的医药组合物中的适合水性和非水性载剂的实例包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)和其适合混合物、植物油(如橄榄油)和可注射有机酯(如油酸乙酯)。适当流动性可例如通过使用包衣材料(如卵磷脂)，在分散液的情况下通过维持所需粒径和通过使用表面活性剂来维持。

这些组合物还可含有其他赋形剂如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。微生物对本发明化合物的作用的预防可通过包含各种抗细菌剂和抗真菌剂例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等来确保。还可合乎需要的是在组合物中包括等渗剂，如糖、氯化钠等。另外，可通过包含延迟吸收的试剂例如单硬脂酸铝和明胶来实现可注射药物形式的延迟吸收。

在一些情况下，为了延长药物的作用，需要减缓皮下注射或肌肉内注射的药物的吸收。这可通过使用具有低水溶性的结晶或无定形材料的液态悬浮剂来实现。药物的吸收速率则取决于其溶解速率，溶解速率进而可取决于晶体大小和晶形。可替代地，通过将药物溶解或悬浮于油媒介物中来完成肠胃外施用的药物形式的延迟吸收。

可注射储库式形式通过在可生物降解聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯中形成主题化合物的微胶囊化基质来形成。取决于药物与聚合物的比率和所采用的具体聚合物的性质，可控制药物释放的速率。其他可生物降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。还通过将药物包埋在与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备药性持久的可注射制剂。

当将本发明的化合物作为药物施用于人和动物时，它们可以本身或作为药物组合物来给予，所述药物组合物包含例如0.1至99％(更优选地，10至30％)的活性成分以及药学上可接受的载体。

施用途径和剂量

本发明制剂可以口服、肠胃外、局部或直肠给予。当然，它们以适合每种施用途径的形式给予。例如，它们以片剂或胶囊形式，通过注射、吸入、洗眼剂、软膏、栓剂等施用，通过注射、输注或吸入施用；通过洗剂或软膏局部施用；和通过栓剂经直肠施用。口服施用是优选的。

如本文所用的短语“肠胃外施用”和“肠胃外地施用”意指除了肠内施用和局部施用以外的、通常通过注射进行的施用模式，并且包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眼眶内、心内、真皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内以及胸骨内注射和输注。

如本文所用的短语“全身施用”、“全身性地施用”、“外周施用”和“外周地施用”意指化合物、药物或其他材料除直接施用到中枢神经系统中之外的施用，使得其进入到患者的系统，并且因此经受代谢以及其他类似过程，例如皮下施用。

这些化合物可以通过任何合适的施用途径施用于人类和其他动物以进行治疗，包括口服、经鼻(例如通过喷雾剂)、经直肠、阴道内、肠胃外、脑池内和局部(例如通过粉剂、软膏剂或滴剂)包括颊和舌下。

不论选择何种施用途径，都可以通过本领域技术人员已知的常规方法将可以合适的水合形式使用的本发明的化合物和/或本发明的药物组合物配制成药学上可接受的剂型。

本发明药物组合物中活性成分的实际剂量水平可能有所变化，以便获得对于特定患者、组合物和施用模式有效达到期望治疗反应而对患者不具毒性的活性成分的量。

选择的剂量水平取决于多种因素，包括使用的本发明的特定化合物或其酯、盐或酰胺的活性、施用途径、施用时间、使用的特定化合物的排泄或代谢速率、吸收的速率和程度、治疗的持续时间、与使用的特定化合物组合使用的其他药物、化合物和/或材料、所治疗患者的年龄、性别、体重、病状、综合的健康状态和先前的病史和在医学领域众所周知的类似因素。

具有本领域中的普通技艺的医师或兽医能够容易地判定和开具有效量的所需医药组合物。例如，医生或兽医可在水平低于达到期望治疗效果所需的水平下开始在药物组合物中采用的本发明化合物的剂量，并逐渐增加剂量直到达到所需效果。

一般来说，本发明化合物的适合日剂量将为化合物有效产生治疗效果的最低剂量的量。所述有效剂量将通常取决于上述因素。通常，当用于指示的止痛作用时，用于患者的本发明化合物的口服、静脉内、脑室内和皮下剂量的范围为每天每千克体重约0.0001至约100mg。

在某些实施方案中，每天、每隔一天、每隔两天、每三天、一周一次、一周两次、一周三次或每两周一次向受试者施用一定剂量的化合物或组合物。必要时，活性化合物的有效日剂量可任选以单位剂型以在全天内以适当间隔分开施用的两个、三个、四个、五个、六个或更多个亚剂量施用。在一些实施方案中，化合物或组合物的一次或多次剂量施用2天、3天、5天、7天、14天或21天。在某些实施方案中，化合物或组合物的剂量施用1个月、1.5个月、2个月、2.5个月、3个月、4个月、5个月、6个月或更长时间。

上述施用计划表仅出于说明目的提供，且不应视为限制性的。本领域普通技术人员将容易理解，所有剂量都在本发明的范围内。

接受这种治疗的患者为任何有需要的动物，包括灵长类动物，特别是人，以及其他哺乳动物，例如马、牛、猪和绵羊；以及一般的家禽和宠物。

用于本发明方法的化合物可以原样或与药学上可接受的载体混合施用，并且还可以与抗微生物剂如青霉素、头孢菌素、氨基糖苷和糖肽联合施用。因此，联合治疗包括以使首先施用化合物的治疗效果在随后化合物施用时不完全消失的方式依次、同时和分别施用活性化合物。

本发明的活性化合物向动物饲料中的添加优选地通过制备包含有效量的活性化合物的合适的饲料预混合物并将预混合物掺入到完整给粮中来完成。

替代地，可以将含有活性成分的中间浓缩物或饲料补充剂共混到饲料中。这些饲料预混合物和完整给粮的制备和施用方式在参考书中有描述(例如“Applied AnimalNutrition”,W.H.Freedman和CO.,San Francisco,U.S.A.,1969或“Livestock Feeds andFeeding”O and B books,Corvallis,Ore.,U.S.A.,1977)。

可使用微乳化技术来改善亲脂性(水不溶性)药剂的生物利用度。实例包括Trimetrine(Dordunoo,S.K.,等人,Drug Development and Industrial Pharmacy,17(12),1685-1713,1991)和REV 5901(Sheen,P.C.,等人,J Pharm Sci 80(7),712-714,1991)。尤其，微乳化通过优先将吸收引导至淋巴系统而不是循环系统，从而绕过肝脏来提供增强的生物利用度，并且防止化合物在肝胆循环中被破坏。

受控释放

本发明制剂的释放特性取决于包封材料、包封药物的浓度和释放调节剂的存在。可使用例如仅在低pH(如在胃中)或较高pH(如在肠中)释放的pH敏感包衣将释放操作为pH依赖性。肠溶衣可用于防止释放在通过胃之前发生。可使用包封在不同材料中的氰胺的多重包衣或混合物以获得在胃中初步释放，然后在肠道中稍后释放。释放也可以通过包括盐或成孔剂来操作，这些盐或成孔剂可以增加水吸收或药物通过从胶囊中扩散而释放。改变药物溶解度的赋形剂也可用于控制释放速率。还可以掺入增强基质降解或从基质释放的剂。它们可被添加到药物中，作为单独相(即作为颗粒)添加，或可以根据化合物而共溶解于聚合物相中。降解增强剂的类型包括：无机盐，例如硫酸铵和氯化铵；有机酸，例如柠檬酸、苯甲酸和抗坏血酸；无机碱，例如碳酸钠、碳酸钾、碳酸钙、碳酸锌和氢氧化锌；和有机碱，例如硫酸鱼精蛋白、精胺、胆碱、乙醇胺、二乙醇胺和三乙醇胺；以及表面活性剂，例如

和

将为基质增加微结构的成孔剂(即水溶性化合物，如无机盐和糖)作为颗粒添加。范围应在1％与30％之间(w/w聚合物)。

还可以通过改变颗粒在肠中的停留时间来控制摄取。这可以例如通过用粘膜粘附聚合物包衣粒子或选择粘膜粘附聚合物作为包封材料来实现。实例包括具有游离羧基的大多数聚合物，例如壳聚糖、纤维素和尤其聚丙烯酸酯(如本文所用，聚丙烯酸酯是指包括丙烯酸酯基团和修饰的丙烯酸酯基团例如氰基丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的聚合物)。

应了解并且预期，本领域技术人员可对本文中所公开的本发明原理作出改变，并且此类修改意图被包括在本发明范围内。以下实施例进一步说明本发明，但不应被解释为以任何方式限制本发明的范围。本文中引用的所有参考文献以引用的方式整体并入本文。

实施例

实施例1

所有溶剂和试剂都可以商购获得并按原样使用。在Bruker仪器(300MHz或400MHz)上记录在所述氘代溶剂中的¹H NMR谱图。化学位移以ppm为单位给出，并且耦合常数以赫兹为单位给出。通过快速色谱法使用220-400目硅胶或通过反相HPLC、用CH₃CN/水作为溶剂来纯化所有最终化合物。在硅胶60F-254(0.25nm厚度)板上进行薄层色谱法。用紫外光和/或在乙醇中的10％磷钼酸完成可视化。在Waters LCT或Applied Biosystems API 3000质谱仪上获得标称(低分辨率)质谱。在Waters LCT或Agilent TOF质谱仪上获得高分辨率质谱(HRMS)。所有其他LC-MS实验均在与Agilent单四极杆质谱仪联用的Agilent 1100HPLC上进行。通过LC-MS在230nM和254nM波长下确定化合物纯度。此处报告的所有最终化合物的纯度均≥95％。

一般程序A

EDCI偶联：将具有通式结构1的化合物(1当量)、EDCI(1当量)、HOBt(0.2当量)和DIEA(2当量)溶解于DMF中，在25℃下搅拌5分钟。然后向混合物中添加胺(1当量)。将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物倒入水中并且用EtOAc萃取。将合并的有机相用盐水洗涤、经Na₂SO₄干燥、过滤并在减压下浓缩以得到残余物。通过柱色谱法纯化残余物以获得具有通式结构2的化合物。

HATU偶联：将具有通式结构1的化合物(1当量)、HATU(1.25当量)和DIPEA(1.5当量)溶解于DMF中，在23℃下搅拌15分钟。将1H-吲唑-5-胺(1当量)引入反应混合物中，并将溶液在23℃下再继续搅拌16小时。将反应混合物用水稀释并且用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤、经Na₂SO₄干燥、过滤并在减压下浓缩以得到粗物质，将其在硅胶上纯化以得到所需的具有通式结构2的化合物。

Boc脱保护：将具有通式结构2的化合物溶解于DCM中，并将在二噁烷中的4NHCl引入溶液中。将反应混合物在23℃下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩以得到粗反应混合物，将其通过反相制备型HPLC进行纯化以得到所需的具有通式结构3的化合物。

苄基去除：将具有通式结构2的化合物(1当量)和浓HCl(1.2当量)溶解于MeOH中并添加10％无水Pd/C。将反应混合物在H₂的气氛(1atm)下在50℃下搅拌5小时。将反应混合物过滤并将滤液在减压下浓缩以得到粗产物，将其通过反相制备型HPLC进行纯化以得到所需的具有通式结构3的化合物。

一般程序B

将胺的盐酸盐(2当量)溶解于甲醇中并添加三乙胺(2当量)。将反应溶液搅拌15min，之后添加具有通式结构4的酮或醛(1当量)以及HOAc(4当量)。再继续搅拌15min并且添加NaBH₃CN。将反应温度增加至60℃并继续搅拌16小时。将反应混合物用水稀释并且用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤、经Na₂SO₄干燥、过滤并在减压下浓缩以得到粗物质，将其在硅胶上纯化以得到具有通式结构5的所需化合物。

在室温下，将K₂CO₃(2当量)、LiI(0.05当量)和苄基溴添加至具有通式结构5的化合物(1当量)在MeCN中的溶液中。将反应温度升至60℃并且继续搅拌16小时。将反应混合物用水稀释并且用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤、经Na₂SO₄干燥、过滤并在减压下浓缩以得到粗物质，将其在硅胶上纯化以得到具有通式结构6的所需化合物。

在室温下，将具有通式结构6的化合物(1当量)、Pd(PPh₃)₄(0.15当量)、K₃PO₄(3当量)在THF中的溶液用氮气吹扫五分钟。将反应温度升至120℃并且继续搅拌48小时。将溶剂在减压下移除，并且通过硅胶色谱法纯化残余物，以得到具有通式结构7的所需化合物。

将具有通式结构7的化合物(1当量)溶解于甲醇水混合物中并且添加NaOH(2当量)。将反应物在30℃下继续搅拌16小时。将反应溶液酸化至pH＝5。通过反相制备型HPLC完成粗残余物的纯化，以得到具有通式结构8的所需化合物。

将具有通式结构8的化合物(1当量)、HATU(1.25当量)和DIPEA(1.5当量)溶解于DMF中，在23℃下搅拌15分钟。将1H-吲唑-5-胺(1当量)引入反应混合物中，并将溶液在23℃下再继续搅拌16小时。将反应混合物用水稀释并且用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤、经Na₂SO₄干燥、过滤并在减压下浓缩以得到粗物质，将其在硅胶上纯化以得到具有通式结构9的所需化合物。

将具有通式结构9的化合物(1当量)和浓HCl(1.2当量)溶解于MeOH中并添加10％无水Pd/C。将反应混合物在H₂气氛(1atm)下、在50℃下搅拌5小时。将反应混合物过滤并将滤液在减压下浓缩以得到粗产物，将其通过反相制备型HPLC进行纯化以得到具有通式结构10的所需化合物。

一般程序C

将具有通式结构11的化合物(1当量)溶解于乙酸中并且添加PtO₂(0.1当量)。将反应溶液在氢气气氛(1atm)下、在室温下搅拌16小时。将所得溶液过滤出并且在减压下浓缩。将残余物用2N NaOH碱化至pH＝9，并且用EtOAc萃取混合物。将合并的有机层用盐水洗涤、经Na₂SO₄干燥、过滤并在减压下浓缩以得到粗物质，将其在硅胶上纯化以得到具有通式结构12的所需化合物。

将具有通式结构12的化合物(1当量)溶解于DCM中并且添加Boc₂O(1.5当量)、DIPEA(2当量)。将反应物在室温下继续搅拌16小时。将反应混合物用水稀释并且用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤、经Na₂SO₄干燥、过滤并在减压下浓缩以得到粗物质，将其在硅胶上纯化以得到具有通式结构13的所需化合物。

将具有通式结构13的化合物(1当量)溶解于甲醇水混合物中并且添加NaOH(2当量)。将反应物在30℃下继续搅拌16小时。将反应溶液酸化至pH＝5。通过反相制备型HPLC完成粗残余物的纯化，以得到具有通式结构14的所需化合物。

将具有通式结构14的化合物(1当量)、HATU(1.25当量)和DIPEA(1.5当量)溶解于DMF中，在23℃下搅拌15分钟。将1H-吲唑-5-胺(1当量)引入反应混合物中，并将溶液在23℃下再继续搅拌16小时。将反应混合物用水稀释并且用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤、经Na₂SO₄干燥、过滤并在减压下浓缩以得到粗物质，将其在硅胶上纯化以得到具有通式结构15的所需化合物。

将具有通式结构15的化合物溶解于DCM中，并将在二噁烷中的4N HCl引入溶液中。将反应混合物在23℃下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩以得到粗反应混合物，将其通过反相制备型HPLC进行纯化以得到具有通式结构16的所需化合物。

一般程序D

将具有通式结构17的化合物(1当量)和醛或酮(1当量)在MeOH(3.00mL)中的溶液在23℃下搅拌16小时。16小时之后，添加NaBH₃CN(1.2当量)，并且将混合物再搅拌3小时。通过添加水来淬灭反应混合物，并且用EtOAc萃取所得混合物。将合并的有机层经Na₂SO₄干燥、过滤并在减压下浓缩。通过制备型HPLC纯化粗物质以得到具有通式结构18的化合物。

一般程序E

将具有通式结构19的化合物(1当量)溶解于CCl₄中，并在室温下添加AIBN(0.1当量)，然后添加NBS(1.2当量)。将反应温度升至60℃并继续搅拌16小时。过滤出反应混合物并在减压下除去溶剂。粗物质20不经过另外的纯化即用于下一步骤。

将在THF中的具有通式结构20的化合物(1当量)和烷基胺(2当量)在70℃下搅拌16小时。将反应混合物在减压下浓缩，并通过硅胶色谱法纯化物质，以得到具有通式结构21的化合物。

将NaOH(2当量)引入反应容器中，所述反应容器含有溶解于MeOH/H₂O混合物中的、具有通式结构21的化合物(1当量)。将反应物在20℃下搅拌16小时。在减压下除去溶剂。将粗残余物溶解于水(10mL)中并小心地用6N HCl中和直至pH＝8。过滤悬浮液，并且收集固体并干燥，以得到具有通式结构22的化合物。

将具有通式结构22的化合物(1当量)、HATU(1.25当量)和DIPEA(2当量)溶解于DMF中，并在20℃下搅拌15分钟。将1H-吲唑-5-胺(1当量)引入反应混合物中，并在20℃下搅拌15.8小时。将反应物用水稀释并用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤、经Na₂SO₄干燥、过滤并在减压下浓缩。通过反相制备型HPLC纯化粗反应混合物，以得到具有通式结构23的化合物。

一般程序F

将苄胺(1当量)溶解于二氯甲烷中。在氮气气氛下将对应的芳基硼酸24(1当量)添加至反应溶液中，接着添加乙醛酸(1当量)。将反应混合物升温至40℃并且将温度维持16小时。将反应混合物在减压下浓缩。通过反相制备型HPLC纯化粗反应混合物，以得到具有通式结构25的化合物。

将具有通式结构25的化合物(1当量)、HATU(1.25当量)和DIPEA(2当量)溶解于DMF中并在20℃下搅拌15分钟。将1H-吲唑-5-胺(1当量)引入反应混合物中并在20℃下搅拌16小时。将反应物用水稀释并用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤、经Na₂SO₄干燥、过滤并在减压下浓缩。通过正相硅胶色谱法纯化粗反应混合物，以得到具有通式结构26的化合物。

将具有通式结构26的化合物(1当量)和浓HCl(1.2当量)溶解于MeOH中并添加10％无水Pd/C。将反应混合物在H₂气氛(1atm)下、在60℃下搅拌3小时。将反应混合物过滤并将滤液在减压下浓缩以得到粗产物，将其通过反相制备型HPLC进行纯化以得到具有通式结构27的所需化合物。

实施例2

N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)-2-苯基乙酰胺

按照一般方案A进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈灰白色固体的N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)-2-苯基乙酰胺(80％)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.34(s,1H),8.27(s,1H),7.68-7.65(m,2H),7.60-7.53(m,5H),5.1(s,1H),2.69(s,3H)。MS(ES+)m/e 281.1(M+H)。

实施例3

N-(1H-吲唑-5-基)-1,2,3,4-四氢喹啉-3-甲酰胺

按照一般方案A进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈黄色固体的N-(1H-吲唑-5-基)-1,2,3,4-四氢喹啉-3-甲酰胺(23％)。¹H NMR(400MHz,MeOD-d₃)δ13.75(s,1H),10.84(s,1H),8.94(s,1H),8.80(s,1H),8.26(m,2H),7.71(m,2H),7.28(m,2H),6.63(s,1H),4.21(m,1H),3.97(m,1H),3.65(m,3H)。MS(ES+)m/e293.1(M+H)⁺。

实施例4

N-(1H-吲唑-5-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酰胺

按照一般方案A进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈黄色固体的N-(1H-吲唑-5-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酰胺(51％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.99(brs,1H),9.96(s,1H),8.21(s,1H),8.18(s,1H),8.03(s,1H),7.53-7.48(m,2H),7.20-7.12(m,3H),7.10-7.08(m,1H),4.10-3.93(m,3H),3.75-3.64(m,1H),3.07-3.02(m,1H),2.93-2.91(m,1H)。MS(ES+)m/e 293.0(M+H)⁺。

实施例5

N-(1H-吲唑-5-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺

按照一般方案A进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的N-(1H-吲唑-5-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺(18％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.97(s,1H),10.16(s,1H),8.21(s,1H),8.15(s,1H),8.01(s,1H),7.52-7.46(m,2H),7.37-7.35(m,1H),7.18-7.13(m,3H),4.64(d,J＝4.0Hz,1H),3.25-3.22(m,1H),2.97-2.81(m,2H),2.75-2.65(m,1H)。MS(ES+)m/e 293.1(M+H)⁺。

实施例6

N-(1H-吲唑-5-基)异吲哚啉-1-甲酰胺

按照一般方案B进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的N-(1H-吲唑-5-基)异吲哚啉-1-甲酰胺(10％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.99(brs,1H),10.09(s,1H),8.18(s,1H),8.01(s,1H),7.56-7.44(m,3H),7.34-7.20(m,3H),4.96(brs,1H),4.40-4.26(m,2H),3.79(brs,1H)。MS(ES+)m/e 279.1(M+H)⁺。

实施例7

N-(2-(二甲氨基)乙基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-甲氧基苯基)-2-(甲氨基)乙酰胺

按照一般方案A进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的N-(2-(二甲氨基)乙基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-甲氧基苯基)-2-(甲氨基)乙酰胺(50％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.28(brs,1H),8.07(brs,1H),7.78-6.91(m,5H),6.54(d,J＝7.6Hz,1H),6.48(s,1H),4.01-3.67(m,3H),3.61(s,3H),2.32-2.11(m,3H),2.11-2.10(m,9H)。MS(ES+)m/e 382.1(M+H)⁺。

实施例8

N-(1H-吲唑-5-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-4-甲酰胺

按照一般方案C进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈浅棕色固体的N-(1H-吲唑-5-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-4-甲酰胺(46％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.01(brs,1H),10.59(s,1H),8.23(s,1H),8.11(s,1H),8.01(s,1H),7.50-7.48(m,1H),7.44-7.42(m,1H),7.29-7.22(m,1H),7.20-7.13(m,3H),4.05-4.00(m,1H),3.95-3.85(m,1H),3.79-3.75(m,1H),3.37-3.33(m,1H),3.22-3.19(m,1H)。MS(ES+)m/e 293.0(M+H)⁺。

实施例9

N-(1H-吲唑-5-基)-3-甲基异吲哚啉-1-甲酰胺

按照一般方案B进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的N-(1H-吲唑-5-基)-3-甲基异吲哚啉-1-甲酰胺(29％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.99(brs,1H),10.04(s,1H),8.15(s,1H),8.02(s,1H),7.53-7.42(m,3H),7.35-7.21(m,3H),4.89(s,1H),4.58-4.57(m,1H),4.01(s,1H),1.47(d,J＝6.4Hz,3H)。MS(ES+)m/e293.0(M+H)⁺。

实施例10

N-(1H-吲唑-5-基)吡咯烷-2-甲酰胺

按照一般方案A进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的N-(1H-吲唑-5-基)吡咯烷-2-甲酰胺(33％)。MS(ES+)m/e 231.1(M+H)⁺。

实施例11

N-(1H-吲唑-5-基)吡咯烷-3-甲酰胺

按照一般方案A进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的N-(1H-吲唑-5-基)吡咯烷-3-甲酰胺(41％)。MS(ES+)m/e 231.1(M+H)⁺。

实施例12

(2S,5R)-N-(1H-吲唑-5-基)-5-苯基吡咯烷-2-甲酰胺

按照一般方案A进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的(2S,5R)-N-(1H-吲唑-5-基)-5-苯基吡咯烷-2-甲酰胺(26％)。MS(ES+)m/e 307.0(M+H)⁺。

实施例13

N-(1H-吲唑-5-基)哌啶-2-甲酰胺

按照一般方案A进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的N-(1H-吲唑-5-基)哌啶-2-甲酰胺(39％)。MS(ES+)m/e 245.0(M+H)⁺。

实施例14

N-(1H-吲唑-5-基)-2-(4-(4-甲氧基苯氧基)苯基)-2-(甲氨基)乙酰胺

按照一般方案A进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的N-(1H-吲唑-5-基)-2-(4-(4-甲氧基苯氧基)苯基)-2-(甲氨基)乙酰胺(7％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.97(s,1H),10.05(s,1H),8.13(s,1H),8.01(s,1H),7.47(s,2H),7.45(d,J＝8.8Hz,2H),7.00-6.93(m,4H),6.89(d,J＝8.4Hz,2H),4.20(d,J＝7.2Hz,1H),3.75(s,3H),2.60(m,1H),2.30(d,J＝4.8Hz,3H)。MS(ES+)m/e 403.1(M+H)⁺。

实施例15

N-(1H-吲唑-5-基)-2-(4-(3-甲氧基苯氧基)苯基)-2-(甲氨基)乙酰胺

按照一般方案A进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的N-(1H-吲唑-5-基)-2-(4-(3-甲氧基苯氧基)苯基)-2-(甲氨基)乙酰胺(8％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.98(s,1H),10.08(s,1H),8.15(s,1H),8.01(s,1H),7.51-7.48(m,4H),7.27(t,J＝8.4Hz,1H),7.00(d,J＝8.4Hz,2H),6.72(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),6.58(t,J＝2.4Hz,1H),6.53(dd,J＝8.0,2.4Hz,1H),4.23(s,1H),3.73(s,3H),2.31(s,3H)。MS(ES+)m/e 403.1(M+H)⁺。

实施例16

2-(4-氯苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)乙酰胺

按照一般方案D进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的2-(4-氯苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)乙酰胺(7％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.98(s,1H),10.10(s,1H),8.11(s,1H),8.00(s,1H),7.52-7.40(m,6H),4.24(s,1H),2.72(m,1H),2.28(s,3H)。MS(ES+)m/e 315.0(M+H)⁺。

实施例17

2-(4-氯苯基)-2-(乙氨基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺

按照一般方案D进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的2-(4-氯苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)乙酰胺(12％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.97(s,1H),10.13(s,1H),8.28(s,1H),8.11(s,1H),8.01(s,1H),7.52(d,J＝8.4Hz,2H),7.49-7.39(m,4H),4.39(s,1H),2.51-2.50(m,2H),1.08(t,J＝6.4Hz,3H)。MS(ES+)m/e329.1(M+H)⁺。

实施例18

2-(4-氯苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(异丙氨基)乙酰胺

按照一般方案D进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的2-(4-氯苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(异丙氨基)乙酰胺(49％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.99(s,1H),10.18(s,1H),8.21(s,1H),8.09(d,J＝1.2Hz,1H),8.00(d,J＝0.8Hz,1H),7.52-7.45(m,3H),7.44-7.39(m,3H),4.51(s,1H),2.70-2.66(m,1H),1.03(t,J＝6.4Hz,1H)。MS(ES+)m/e 343.1(M+H)⁺。

实施例19

2-(4-氟苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)乙酰胺

按照一般方案D进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的2-(4-氟苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)乙酰胺(11％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.08(s,1H),10.64(s,1H),9.59-9.31(m,2H),8.07(d,J＝9.2Hz,2H),7.67-7.64(m,2H),7.52(d,J＝8.8Hz,1H),7.41-7.34(m,3H),5.04(s,1H),2.52(s,3H)。MS(ES+)m/e 299.0(M+H)⁺。

实施例20

2-(4-氟苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(异丙氨基)乙酰胺

按照一般方案D进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的2-(4-氟苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(异丙氨基)乙酰胺(54％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.99(s,1H),10.17(s,1H),8.20(s,1H),8.10(d,J＝1.2Hz,1H),8.00(d,J＝0.8Hz,1H),7.52(dd,J＝8.4,5.6Hz,2H),7.49-7.39(m,2H),7.17(t,J＝8.8Hz,2H),4.51(s,1H),2.72-2.66(m,1H),1.04(t,J＝6.8Hz,6H)。MS(ES+)m/e327.1(M+H)⁺。

实施例21

2-(乙氨基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-苯基乙酰胺

按照一般方案D进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的2-(乙氨基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-苯基乙酰胺(39％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.00(s,1H),10.17(s,1H),8.23(s,1H),8.11(s,1H),8.00(s,1H),7.52-7.45(m,4H),7.35(t,J＝7.2Hz,2H),7.30-7.28(m,1H),4.43(s,1H),2.63-2.52(m,2H),1.09(t,J＝7.2Hz,3H)。MS(ES+)m/e 295.0(M+H)⁺。

实施例22

N-(1H-吲唑-5-基)-2-(异丙氨基)-2-苯基乙酰胺

按照一般方案D进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的N-(1H-吲唑-5-基)-2-(异丙氨基)-2-苯基乙酰胺(63％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.99(s,1H),10.17(s,1H),8.20(s,1H),8.11(d,J＝1.2Hz,1H),8.00(d,J＝0.8Hz,1H),7.52-7.41(m,4H),7.34(t,J＝7.2Hz,2H),7.30-7.27(m,1H),4.51(s,1H),2.72-2.69(m,1H),1.04(dd,J＝7.6,6.4Hz,6H)。MS(ES+)m/e309.1(M+H)⁺。

实施例23

2-(乙氨基)-2-(4-氟苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺

按照一般方案D进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的2-(乙氨基)-2-(4-氟苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺(8％)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.45(s,1H),8.09(d,J＝1.2Hz,1H),8.00(s,1H),7.67-7.61(m,2H),7.50(d,J＝8.8Hz,1H),7.42(dd,J＝8.8,1.6Hz,1H),7.26-7.19(m,2H),4.82(s,1H),2.96-2.88(m,2H),1.29(t,J＝7.2Hz,3H)。MS(ES+)m/e 313.1(M+H)⁺。

实施例24

N-(1H-吲唑-5-基)-2-(4-甲氧基苯基)-2-(甲氨基)乙酰胺

按照一般方案D进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的N-(1H-吲唑-5-基)-2-(4-甲氧基苯基)-2-(甲氨基)乙酰胺(4％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.96(s,1H),10.01(s,1H),8.12(s,1H),7.99(s,1H),7.46(s,2H),7.39(d,J＝8.8Hz,2H),6.90(d,J＝8.8Hz,2H),4.15(s,1H),3.72(s,3H),2.28(s,3H)。MS(ES+)m/e311.1(M+H)⁺。

实施例25

N-(1H-吲唑-5-基)-2-(异丙氨基)-2-(4-甲氧基苯基)乙酰胺

按照一般方案D进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的N-(1H-吲唑-5-基)-2-(4-甲氧基苯基)-2-(甲氨基)乙酰胺(52％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.98(s,1H),10.11(s,1H),8.19(s,1H),8.10(s,1H),8.00(s,1H),7.48-7.39(m,4H),6.90(d,J＝8.4Hz,2H),4.45(s,1H),3.72(s,3H),2.72-2.68(m,1H),1.05(d,J＝6.4Hz,3H),1.02(d,J＝6.4Hz,3H)。MS(ES+)m/e339.1(M+H)⁺。

实施例26

2-(乙氨基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(4-甲氧基苯基)乙酰胺

按照一般方案D进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的2-(乙氨基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(4-甲氧基苯基)乙酰胺(5％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.97(s,1H),10.10(s,1H),8.20(s,1H),8.10(s,1H),8.00(s,1H),7.50-7.41(m,4H),6.91(d,J＝8.8Hz,2H),4.37(s,1H),3.73(s,1H),2.60-2.53(m,2H),2.27(s,3H),1.08(t,J＝7.2Hz,3H)。MS(ES+)m/e 325.1(M+H)⁺。

实施例27

2-(环丙氨基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(4-甲氧基苯基)乙酰胺

按照一般方案D进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的2-(环丙氨基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(4-甲氧基苯基)乙酰胺(10％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.95(s,1H),10.07(s,1H),8.26(s,1H),8.12(s,1H),7.99(d,J＝0.8Hz,1H),7.49-7.41(m,2H),7.39(d,J＝8.8Hz,2H),6.89(d,J＝8.8Hz,2H),4.39(s,1H),3.72(s,3H),2.05-2.00(m,1H),0.42-0.33(m,4H)。MS(ES+)m/e 337.0(M+H)⁺。

实施例28

N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)-2-(对甲苯基)乙酰胺

按照一般方案D进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)-2-(对甲苯基)乙酰胺(7％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.97(s,1H),10.04(s,1H),8.11(s,1H),7.99(s,1H),7.46(s,2H),7.36(d,J＝8.0Hz,2H),7.14(d,J＝8.0Hz,2H),4.19(s,1H),2.28(d,J＝7.2Hz,6H)。MS(ES+)m/e 295.1(M+H)⁺。

实施例29

N-(1H-吲唑-5-基)-2-(异丙氨基)-2-(对甲苯基)乙酰胺

按照一般方案D进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的N-(1H-吲唑-5-基)-2-(异丙氨基)-2-(对甲苯基)乙酰胺(44％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.98(s,1H),10.17(s,1H),8.17(s,1H),8.10(s,1H),8.00(s,1H),7.48-7.37(m,4H),7.16(d,J＝7.6Hz,2H),4.51(s,1H),2.76-2.70(m,1H),2.27(s,3H),1.05(dd,J＝8.4,6.4Hz,6H)。MS(ES+)m/e 323.1(M+H)⁺。

实施例30

2-(乙氨基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(对甲苯基)乙酰胺

按照一般方案D进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的2-(乙氨基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(对甲苯基)乙酰胺(13％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.97(s,1H),10.08(s,1H),8.24(s,1H),8.10(s,1H),7.99(s,1H),7.48-7.44(m,2H),7.37(d,J＝8.0Hz,2H),7.15(d,J＝8.0Hz,2H),4.34(s,1H),2.59-2.51(m,2H),2.27(s,3H),1.07(t,J＝7.2Hz,3H)。MS(ES+)m/e 309.1(M+H)⁺。

实施例31

2-(环丙氨基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(对甲苯基)乙酰胺

按照一般方案D进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的2-(环丙氨基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(对甲苯基)乙酰胺(23％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.96(s,1H),10.07(s,1H),8.22(s,1H),8.11(s,1H),7.99(s,1H),7.48-7.42(m,2H),7.35(d,J＝8.0Hz,2H),7.13(d,J＝8.0Hz,2H),4.40(s,1H),2.26(s,3H),2.07-1.99(m,1H),0.42-0.29(m,4H)。MS(ES+)m/e 321.1(M+H)⁺。

实施例32

N-(1H-吲唑-5-基)-2-(2'-甲氧基-[1,1'-联苯基]-4-基)-2-(甲氨基)乙酰胺

按照一般方案D进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈黄色固体的N-(1H-吲唑-5-基)-2-(2'-甲氧基-[1,1'-联苯基]-4-基)-2-(甲氨基)乙酰胺(16％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.00(brs,1H),10.13(s,2H),8.28(s,1H),8.16(s,1H),8.02(s,1H),7.53-7.43(m,6H),7.33-7.30(m,1H),7.27(dd,J＝7.6,2.0Hz,1H),7.09(d,J＝7.6Hz,1H),7.01(t,J＝6.4Hz,1H),4.27(s,1H),2.34(s,3H)。MS(ES+)m/e 387.1(M+H)⁺。

实施例33

2-(2'-氟-[1,1'-联苯基]-4-基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)乙酰胺

按照一般方案D进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的2-(2'-氟-[1,1'-联苯基]-4-基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)乙酰胺(10％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)12.98(s,1H),10.14(s,1H),8.31(s,2H),8.14(s,1H),8.00(s,1H),7.60(d,J＝8.4Hz,2H),7.54-7.48(m,5H),7.42-7.38(m,1H),7.33-7.26(m,2H),4.30(s,1H),2.33(s,3H)。MS(ES+)m/e 375.1(M+H)⁺。

实施例34

2-((2-(二甲氨基)乙基)氨基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-甲氧基苯基)乙酰胺

按照一般方案D进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的2-((2-(二甲氨基)乙基)氨基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-甲氧基苯基)乙酰胺(27％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.01(brs,1H),10.19(s,1H),8.26(s,1H),8.12(s,1H),8.01(s,1H),7.49-7.43(m,2H),7.27(t,J＝7.8Hz,1H),7.07-7.04(m,2H),6.86(dd,J＝8.0,2.0Hz,1H),4.36(s,1H),3.75(s,3H),2.65-2.57(m,2H),2.55-2.53(m,2H),2.25(s,6H)。MS(ES+)m/e 368.1(M+H)⁺。

实施例35

N-(1H-吲唑-5-基)-2-(2-甲氧基苯基)-2-(甲氨基)乙酰胺

按照一般方案D进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈粉色固体的N-(1H-吲唑-5-基)-2-(2-甲氧基苯基)-2-(甲氨基)乙酰胺(10％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.03(brs,1H),9.99(brs,1H),8.20(s,2H),8.13(s,1H),8.01(s,1H),7.52-7.46(m,2H),7.40(dd,J＝7.6,1.6Hz,1H),7.32-7.27(m,1H),7.03(d,J＝8.0Hz,1H),6.96(t,J＝7.2Hz,1H),4.59(s,1H),3.83(s,3H),2.34(s,3H)。MS(ES+)m/e 311.0(M+H)⁺。

实施例36

2-(叔丁氨基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(4-甲氧基苯基)乙酰胺

按照一般方案E进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈浅棕色固体的2-(叔丁氨基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(4-甲氧基苯基)乙酰胺(35％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.69(s,1H),9.14(m,2H),8.06(s,2H),7.60(d,J＝8.8Hz,2H),7.53(d,J＝8.8Hz,1H),7.34(dd,J＝8.8,2.0Hz,1H),7.07(d,J＝8.8Hz,2H),5.20-5.18(m,1H),3.78(s,3H),1.32(s,9H)。MS(ES+)m/e 353.1(M+H)⁺。

实施例37

2-(叔丁氨基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-苯基乙酰胺

按照一般方案E进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈紫色固体的2-(叔丁氨基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-苯基乙酰胺(4％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.99(s,1H),10.26(s,1H),8.35(s,1H),8.10(s,1H),8.00(s,1H),7.49-7.46(m,4H),7.32(t,J＝7.6Hz,2H),7.26-7.22(m,1H),4.50(s,1H),1.10(s,9H)。MS(ES+)m/e 323.1(M+H)⁺。

实施例38

2-(叔丁氨基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(对甲苯基)乙酰胺

按照一般方案E进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的2-(叔丁氨基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(对甲苯基)乙酰胺(12％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.98(s,1H),10.20(s,1H),8.09(s,1H),8.00(s,1H),7.49-7.43(m,2H),7.34(d,J＝8.0Hz,2H),7.12(d,J＝8.0Hz,2H),4.44(s,1H),2.26(s,3H),1.09(s,9H)。MS(ES+)m/e 337.1(M+H)⁺。

实施例39

N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)-2-(吡啶-3-基)乙酰胺

按照一般方案E进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)-2-(吡啶-3-基)乙酰胺(9％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.02(brs,1H),10.21(s,1H),8.69(d,J＝1.6Hz,1H),8.50(dd,J＝4.8,1.6Hz,1H),8.24(s,1H),8.12(s,1H),8.01(s,1H),7.90-7.88(m,1H),7.50-7.45(m,2H),7.41-7.39(m,1H),4.34(s,1H),2.32(s,3H)。MS(ES+)m/e 282.0(M+H)⁺。

实施例40

N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)-2-(吡啶-2-基)乙酰胺

按照一般方案E进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈灰白色固体的N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)-2-(吡啶-2-基)乙酰胺(15％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.98(brs,1H),10.19(s,1H),8.54(dd,J＝4.8,0.8Hz,1H),8.21(s,1H),8.14(d,J＝1.2Hz,1H),8.00(s,1H),7.84-7.79(m,1H),7.60(d,J＝8.0Hz,1H),7.48(s,2H),7.34-7.30(m,1H),4.44(s,1H),2.36(s,3H)。MS(ES+)m/e 282.0(M+H)⁺。

实施例41

N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-甲氧基苯基)-2-(甲氨基)乙酰胺

按照一般方案E进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈灰白色固体的N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-甲氧基苯基)-2-(甲氨基)乙酰胺(42％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.99(s,1H),10.11(s,1H),8.23(s,1H),8.12(s,1H),8.01(s,1H),7.48-7.44(m,2H),7.27(t,J＝8.0Hz,1H),7.11-7.04(m,2H),6.88-6.83(m,1H),4.26(s,1H),3.76(s,3H),2.31(s,3H)。MS(ES+)m/e 311.0(M+H)⁺。

实施例42

2-(3-氯苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)乙酰胺

按照一般方案E进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈灰白色固体的2-(3-氯苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)乙酰胺(63％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.00(brs,1H),10.16(brs,1H),8.19(s,1H),8.12(s,1H),8.01(s,1H),7.59(s,1H),7.51-7.43(m,3H),7.42-7.31(m,2H),4.31(s,1H),2.30(s,3H)。MS(ES+)m/e 315.0(M+H)⁺。

实施例43

2-(4-乙氧基苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)乙酰胺

按照一般方案E进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈灰白色固体的2-(4-乙氧基苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)乙酰胺(59％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.02(brs,1H),10.11(brs,1H),8.23(s,1H),8.12(s,1H),8.01(s,1H),7.49-7.43(m,2H),7.40(d,J＝8.8Hz,2H),6.90(d,J＝8.8Hz,2H),4.26(s,1H),4.00(q,J＝6.8Hz,2H),2.31(s,3H),1.31(t,J＝6.8Hz,3H)。MS(ES+)m/e 324.1(M+H)⁺。

实施例44

N-(1H-吲唑-5-基)-2-(4-异丙氧基苯基)-2-(甲氨基)乙酰胺

按照一般方案E进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈灰白色固体的N-(1H-吲唑-5-基)-2-(4-异丙氧基苯基)-2-(甲氨基)乙酰胺(67％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.99(brs,1H),10.10(s,1H),8.23(s,1H),8.14-8.13(m,1H),8.01(s,1H),7.47(s,2H),7.38(d,J＝8.8Hz,2H),6.89(d,J＝8.8Hz,2H),4.61-4.54(m,1H),4.23(s,1H),2.31(s,3H),1.24(d,J＝6.0Hz,6H)。MS(ES+)m/e 339.1(M+H)⁺。

实施例45

N-(1H-吲唑-5-基)-2-(4'-甲氧基-[1,1'-联苯基]-4-基)-2-(甲氨基)乙酰胺

按照一般方案E进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的N-(1H-吲唑-5-基)-2-(4'-甲氧基-[1,1'-联苯基]-4-基)-2-(甲氨基)乙酰胺(34％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.99(brs,1H),10.14(s,1H),8.21(s,1H),8.14(t,J＝1.6Hz,1H),8.01(s,1H),7.62-7.54(m,6H),7.48-7.46(m,2H),7.03-7.00(m,2H),4.31(s,1H),3.79(s,3H),2.34(s,3H)。MS(ES+)m/e 387.0(M+H)⁺。

实施例46

N-(1H-吲唑-5-基)-2-((2-甲氧基乙基)氨基)-2-(3-甲氧基苯基)乙酰胺

按照一般方案E进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈灰白色固体的N-(1H-吲唑-5-基)-2-((2-甲氧基乙基)氨基)-2-(3-甲氧基苯基)乙酰胺(16％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.07(s,1H),10.61(s,1H),9.55(s,2H),8.07(d,J＝7.6Hz,2H),7.52(d,J＝8.8Hz,1H),7.45-7.36(m,2H),7.25-7.21(m,2H),7.07-7.04(m,1H),5.07(s,1H),3.80(s,3H),3.78-3.59(m,2H),3.31(s,3H),3.11(m,1H),2.99(m,1H)。MS(ES+)m/e355.0(M+H)⁺。

实施例47

2-(2-氯苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)乙酰胺

按照一般方案E进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈灰白色固体的2-(2-氯苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)乙酰胺(32％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.03(brs,1H),10.14(s,1H),8.17-8.14(m,2H),8.02(s,1H),7.61-7.58(m,1H),7.50-7.46(m,3H),7.37-7.30(m,2H),4.67(s,1H),2.35(s,3H)。MS(ES+)m/e 315.0(M+H)⁺。

实施例48

2-(4-氟-3-甲氧基苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)乙酰胺

按照一般程序F进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的2-(4-氟-3-甲氧基苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)乙酰胺(49％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.00(s,1H),10.15(s,1H),8.19(s,1H),8.12(s,1H),8.01(s,1H),7.50-7.44(m,2H),7.34(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),7.21-7.16(m,1H),7.07-7.03(m,1H),4.31(s,1H),3.86(s,3H),2.32(s,3H)。MS(ES+)m/e 329.1(M+H)⁺。

实施例49

2-(乙氨基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(间甲苯基)乙酰胺

按照一般程序F进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈黄色固体的2-(乙氨基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(间甲苯基)乙酰胺(30％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.08(s,1H),10.66(s,1H),9.44-9.37(m,2H),8.10-8.06(m,2H),7.52(d,J＝8.8Hz,1H),7.47-7.36(m,4H),7.31(d,J＝7.6Hz,1H),5.04(t,J＝6.0Hz,1H),2.98-2.84(m,2H),2.36(s,3H),1.23(t,J＝7.2Hz,3H)。MS(ES+)m/e309.1(M+H)⁺。

实施例50

N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)-2-(3-(三氟甲氧基)-苯基)乙酰胺

按照一般程序F进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)-2-(3-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺(27％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.00(brs,1H),10.18(s,1H),8.18(s,1H),8.12(s,1H),8.01(s,1H),7.54-7.44(m,5H),7.30-7.28(m,1H),4.34(s,1H),2.30(s,3H)。MS(ES+)m/e 365.0(M+H)⁺。

实施例51

2-(乙氨基)-2-(3-氟苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺

按照一般程序F进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的2-(乙氨基)-2-(3-氟苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺(21％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.99(s,1H),10.16(s,1H),8.18(s,1H),8.11(d,J＝0.8Hz,1H),8.01(d,J＝0.8Hz,1H),7.50-7.33(m,5H),7.14-7.09(m,1H),4.43(s,1H),2.60-2.53(m,2H),1.09(t,J＝7.2Hz,3H).MS(ES+)m/e 313.1(M+H)⁺。

实施例52

N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)-2-(间甲苯基)乙酰胺

按照一般程序F进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)-2-(间甲苯基)乙酰胺(11％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.99(s,1H),10.11(s,1H),8.20(s,2H),8.13(s,1H),8.01(s,1H),7.49-7.45(m,2H),7.32-7.23(m,3H),7.11(d,J＝7.2Hz,1H),4.25(s,1H),2.31(s,6H)。MS(ES+)m/e 295.1(M+H)⁺。

实施例53

2-(3-氟苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)乙酰胺

按照一般程序F进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的2-(3-氟苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)乙酰胺(11％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.99(s,1H),10.14(s,1H),8.21(s,1H),8.12(s,1H),8.01(s,1H),7.50-7.32(m,5H),7.14-7.10(m,1H),4.30(s,1H),2.30(s,3H)。MS(ES+)m/e 299.1(M+H)⁺。

实施例54

(R)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-甲氧基苯基)-2-(甲氨基)乙酰胺

按照一般程序F进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的(R)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-甲氧基苯基)-2-(甲氨基)乙酰胺(17％)。通过SFC(DAICEL CHIRALPAKAD柱)分离对映异构体。流动相：在CO₂中的具有0.1％NH₄OH的55％EtOH，流速70g/min，得到具有99％对映体纯度的所需化合物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.97(s,1H),10.05(s,1H),8.12(s,1H),8.00(s,1H),7.47(s,2H),7.26(t,J＝8.0Hz,1H),7.09-7.05(m,2H),6.85(dd,J＝8.0,2.0Hz,1H),4.21(s,1H),3.76(s,3H),2.30(s,3H).MS(ES+)m/e 311.1(M+H)⁺。[α]^25℃ _D＝+98.86(c＝0.2，在MeOH中)。

实施例55

(S)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-甲氧基苯基)-2-(甲氨基)乙酰胺

按照一般程序F进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的(S)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-甲氧基苯基)-2-(甲氨基)乙酰胺(12％)。通过SFC(DAICEL CHIRALPAKAD柱)分离对映异构体。流动相：在CO₂中的具有0.1％NH₄OH的55％EtOH，流速70g/min，得到具有99％对映体纯度的所需化合物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.97(s,1H),10.05(s,1H),8.12(s,1H),8.00(s,1H),7.47(s,2H),7.26(t,J＝8.0Hz,1H),7.09-7.05(m,2H),6.85(dd,J＝8.0,2.4Hz,1H),4.20(s,1H),3.75(s,3H),2.30(s,3H)。MS(ES+)m/e 311.1(M+H)⁺。[α]^25℃ _D＝-96.44(c＝0.2，在MeOH中)。

实施例56

N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)-2-(4-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺

按照一般程序F进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈棕色固体的N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)-2-(4-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺(19％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.99(s,1H),10.15(s,1H),8.25(s,1H),8.13(s,1H),8.01(s,1H),7.62(d,J＝8.8Hz,2H),7.50-7.45(m,2H),7.36(d,J＝8.4Hz,2H),4.30(s,1H),2.30(s,3H)。MS(ES+)m/e 365.1(M+H)⁺。

实施例57

2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)乙酰胺

按照一般程序F进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈白色固体的2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(甲氨基)乙酰胺(29％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.99(s,1H),10.07(s,1H),8.18(s,1H),8.11(s,1H),8.01(s,1H),7.49-7.44(m,2H),7.35(dd,J＝12.8,1.2Hz,1H),7.25(d,J＝8.4Hz,1H),7.16-7.12(m,1H),4.21(s,1H),3.82(s,3H),2.28(s,3H)。MS(ES+)m/e 329.0(M+H)⁺。

实施例58

2-(3-氯苯基)-2-(乙氨基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺

按照一般程序F进行反应。通过反相制备型HPLC纯化最终残余物，以得到呈棕色固体的2-(3-氯苯基)-2-(乙氨基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺(19％)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.53(s,1H),8.08(d,J＝1.2Hz,1H),8.02(s,1H),7.62(s,1H),7.53-7.39(m,5H),4.55(s,1H),2.83-2.68(m,2H),1.24(t,J＝7.2Hz,3H)。MS(ES+)m/e 329.1(M+H)⁺。

比较例1

比较例2

比较例3

比较例4

比较例5

比较例6

比较例7

实施例59

化合物在体外的ROCK抑制活性的确定(Z'lyte测定)：重组R OCK1(氨基酸1-535)和ROCK2(氨基酸1-552)蛋白购自ThermoFish er Scientific。通过Z'-lyte激酶试剂盒(ThermoFisher Scientific)测量化合物活性并计算IC50。

化合物在A7R5细胞中的ROCK抑制活性的确定：维持大鼠主动脉平滑肌细胞系A7R5细胞，并在具有10％胎牛血清的DMEM培养基中进行处理。将细胞以5,000个细胞/孔的密度接种在96孔板中24小时，并且随后用测试化合物处理90分钟。然后根据细胞内ELISA比色检测试剂盒手册(Thermo Scientific)来固定和处理细胞。在使用细胞内ELISA试剂盒进行DMSO对照或测试化合物的处理之后，确定细胞磷酸-肌球蛋白轻链(ppMlc,Thr18/Ser19)水平。通过将用1μM(或10μM)化合物处理获得的数据应用于式[1-(化合物/DMSO)]×100％来计算百分比抑制率。将用9点2倍连续稀释的化合物获得的ppMlc数据应用于GraphPadPrism软件的非线性回归曲线拟合函数以计算细胞内IC50。

NIH3T3细胞Acta2-启动子驱动的荧光素酶测定：建立了稳定表达由人ACTA2基因启动子(-1000-1bp)驱动的荧光素酶报告基因的NIH3T3细胞系(NIH3T3-Acta2-荧光素酶)。将细胞铺板至汇合，并用测试化合物加TGFβ1处理24小时。然后将细胞裂解并且使用来自Active Motif的LightSwitch荧光素酶试剂盒测量荧光素酶活性。

ROCK抑制剂在体外和细胞中有效抑制了ROCK激酶活性。如图1所示，如通过Z'-Lyte试剂盒所测量，本发明的ROCK抑制剂在低于20纳摩尔浓度下、在体外有效抑制了ROCK激酶的两种同工型的活性。

如通过A7R5细胞内Elisa测定所测量，本发明的化合物在细胞中抑制了ROCK。用9点2倍连续稀释的化合物处理A7R5细胞，并确定ppMlc(T18/S19)水平以计算化合物的细胞IC50。结果在以下表1中提供。

表1

本发明的ROCK抑制剂抑制ROCK的两种同工型。将CRISPR/CAS9系统用于产生含有ROCK1或ROCK2敲除的HCT116细胞。用实施例2化合物处理ROCK1KO和ROCK2KO细胞90分钟，并且通过蛋白质印迹可视化pMypt(T853)水平。ROCK抑制剂在110nM下有效阻断了ROCK靶标MYPT1磷酸化。参见图2。

以下表2提供了通过本发明化合物的ROCK的体外和细胞抑制。通过Z'-lyte激酶试剂盒(ThermoFisher Scientific)测量化合物活性。通过将以1μM化合物处理获得的激酶活性值相对于DMSO对照值进行归一化来计算百分比抑制率。使用GraphPadPrism软件、用从9点连续稀释的化合物处理收集的激酶活性数据计算IC50。如上所述，在A7R5细胞和NIH3T3(Acta2-Luc)细胞中进行了ROCK抑制。

针对pMLC/A7R5 IC50采用两个测量步骤。以单剂量(1μM或10μM)化合物处理计算百分比抑制率以筛选活性化合物，然后仅在抑制率超过50％的化合物中测量细胞IC50。

表2

*除非另外指明，否则ROCK1/ROCK2测定中的抑制％是在3μM下测试的。

比较例在2-氨基上缺乏烷基取代基(即，在比较化合物中2-氨基为NH₂)，其存在于本发明的化合物中。添加2-烷基氨基(即，R¹为烷基等)与细胞ROCK活性增强有关，特别是对于在2-位的低级烷基胺(即，R¹为低级烷基)。例如，将比较例2(具有伯2-氨基)与实施例16、17和18(其具有仲2-烷基氨基并且特别地当烷基为小烷基时)进行比较。如通过在A7R5细胞中ROCK靶标pMLC的磷酸化所测量，所有四种化合物均显示ROCK1和ROCK2的高体外抑制，但是实施例16、17和18具有增强的细胞ROCK抑制。例如，实施例2提供了IC50低于比较例1超过17倍的细胞ROCK抑制(分别是252对4410的IC50)。类似地，实施例24、25、26、27和36的细胞IC50低于具有伯2-氨基的比较例4。

实施例59

ROCK抑制剂改善了培养的人少突胶质细胞/神经元祖细胞中的少突胶质细胞过程。在有或没有ROCK抑制剂的情况下，体外培养人少突胶质细胞/神经元祖细胞2天和14天。通过用市售的抗体进行染色来可视化巢蛋白和MAP2蛋白以鉴别出神经元细胞分化的不同阶段。本发明的ROCK抑制剂显著促进成熟神经元细胞标记物MAP2的表达，同时改善了神经突起生长，如通过在ROCK抑制剂(实施例2的化合物)存在下分化的细胞中MAP2信号的强增加所证明。参见图3。

实施例60

在少突胶质细胞与大鼠背根神经节(DRG)外植体共培养系统中，ROCK抑制剂改善了神经突延伸和轴突入鞘。在大鼠少突胶质细胞与大鼠背根神经节(DRG)外植体的共培养条件下，如图4所示，ROCK抑制剂处理改变了细胞骨架组织，产生许多较短的有序髓鞘节段，它们是通过神经丝染色来鉴别的。同时，ROCK抑制剂还通过有组织的方式促进了少突胶质细胞的轴突支持，其通过染色成熟少突胶质细胞标记物MBP来可视化。

实施例61

ROCK抑制剂穿透血脑屏障。

在小鼠药代动力学研究中，给药之后2小时，收获动物组织以确定化合物的分布。如表3所示，实施例2化合物具有优异的BBB渗透特性。

表3.

*给药之后2小时收集血浆和脑

在2.5mg/kg静脉内药物施用后15分钟和2小时，还通过HPLC/MS/MS评估小鼠中选择的ROCK抑制剂的脑和血浆浓度。结果在下表4中提供。

表4.

参考文献：

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Tanzi,R.E.,and Bertram,L.(2005).Twenty years ofthe Alzheimer'sdisease amyloid hypothesis:a genetic perspective.Cell 120,545-555.

Claims

1.一种具有式I的化合物：

其中：

每个R¹⁰独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹¹独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹²独立地选自H和低级烷基；

每个R¹³独立地选自H和低级烷基；

W为具有1至3个环杂原子的3至7元杂环；

c为2至4；

d为1至4；

R³选自H、低级烷基、取代的低级烷基和RR'N-(C_2-4烷基)-；

R⁵选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

a为0或1；

b为0至2；

以及

每个R和R'独立地选自H、低级烷基和C3-C6环烷基，或者替代地，R和R'一起形成5至6元杂环。

2.根据权利要求1所述的化合物，其具有式II：

其中：

每个R¹⁰独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹¹独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹²独立地选自H和低级烷基；

每个R¹³独立地选自H和低级烷基；

W为具有1至3个环杂原子的3至7元杂环；

c为2至4；

d为1至4；

R³选自H、低级烷基、取代的低级烷基和RR'N-(C_2-4烷基)-；

b为0至2；以及

3.根据权利要求1所述的化合物，其具有式III：

其中：

每个R¹⁰独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹¹独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹²独立地选自H和低级烷基；

每个R¹³独立地选自H和低级烷基；

W为具有1至3个环杂原子的3至7元杂环；

c为2至4；

d为1至4；

4.根据权利要求1所述的化合物，其具有式IV：

其中：

环A为5或6元芳族环，其任选地含有至多3个环杂原子；

R³选自H、低级烷基、取代的低级烷基和RR'N-(C_2-4烷基)-；

b为0至2；

每个R和R'独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基，或者替代地，R和R'一起形成5至6元杂环；以及

m为1至3。

5.根据权利要求1所述的化合物，其具有式V：

其中：

环B为5或6元芳族环，其任选地含有至多3个环杂原子；

R³选自H、低级烷基、取代的低级烷基和RR'N-(C_2-4烷基)-；

b为0至2；

m为1至3。

6.根据权利要求1所述的化合物，其具有式VI：

其中：

每个R¹⁰独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹¹独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹²独立地选自H和低级烷基；

每个R¹³独立地选自H和低级烷基；

W为具有1至3个环杂原子的3至7元杂环；

c为2至4；

d为1至4；

R³选自H、低级烷基、取代的低级烷基和RR'N-(C_2-4烷基)-；

b为0至2；

n为0至3。

7.根据权利要求1所述的化合物，其具有式VII：

其中：

每个R¹⁰独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹¹独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹²独立地选自H和低级烷基；

每个R¹³独立地选自H和低级烷基；

W为具有1至3个环杂原子的3至7元杂环；

c为2至4；

d为1至4；

b为0至2；

n为0至3。

8.根据权利要求1所述的化合物，其具有式VIII：

其中：

每个R¹⁰独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹¹独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹²独立地选自H和低级烷基；

每个R¹³独立地选自H和低级烷基；

W为具有1至3个环杂原子的3至7元杂环；

c为2至4；

d为1至4；

n为0至3。

9.根据权利要求1所述的化合物，其具有式IX：

其中：

每个R¹⁰独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹¹独立地选自H、低级烷基和C₃-C₆环烷基；

每个R¹²独立地选自H和低级烷基；

每个R¹³独立地选自H和低级烷基；

W为具有1至3个环杂原子的3至7元杂环；

c为2至4；

d为1至4；

n为0至3。

10.一种在受试者中治疗纤维化病症的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至9中任一项所述的化合物。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述纤维化病症选自由以下组成的组：肺纤维化，包括囊性和特发性肺纤维化；放射诱发的肺损伤；肝纤维化，包括肝硬化；心脏纤维化，包括动脉纤维化；心内膜心肌纤维化；陈旧性心肌梗死；动脉僵硬；动脉粥样硬化；再狭窄；关节纤维化；克罗恩氏病；骨髓纤维化；佩罗尼氏病；肾源性系统性纤维化；进行性块状纤维化；腹膜后腔纤维化；硬皮病/系统性硬化症；纵隔纤维化；瘢痕疙瘩和增生性瘢痕；神经胶质瘢痕形成；或肾纤维化。

12.一种在受试者中治疗中枢神经系统病症的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至9中任一项所述的化合物。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述中枢神经系统病症选自由以下组成的组：亨廷顿氏病、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、肌萎缩侧索硬化(ALS)、巴滕病、痴呆、脊髓性肌萎缩症、运动神经元病、脊髓小脑性共济失调、急性或慢性疼痛、痴呆、神经元变性、脊髓损伤、脑血管痉挛或多发性硬化症。

14.一种在受试者中治疗青光眼的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至9中任一项所述的化合物。

15.一种在受试者中治疗炎症的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至9中任一项所述的化合物。