CN111228337A - 矮紫堇生物碱成分制备治疗缺血性心脏病的药物的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了矮紫堇生物碱成分用于制备治疗缺血性心脏病的药物的用途。

Description

矮紫堇生物碱成分制备治疗缺血性心脏病的药物的用途
技术领域
本发明涉及矮紫堇生物碱成分的用途，尤其是矮紫堇生物碱成分用于制备治疗缺血性心脏病的药物的用途。
背景技术
矮紫堇为紫堇属植物尼泊尔黄堇(Corydalis hendersonii Hemsl.)的干燥全草，是我国藏族地区的特有品种之一，藏药名“日衮孜玛”，具有清热解毒、干淤血、降血压功效，传统用于高山多血症、脉管炎等。目前对矮紫堇的有关化学成分的研究较少。
CN106236853A公开了矮紫堇有效部位及其制备方法和应用，将矮紫堇全草粉碎，加入体积百分比浓度65％～95％乙醇溶液回流提取，将所得提取液浓缩、干燥，得浸膏；将浸膏加蒸馏水分散，得浸膏分散液，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇作为溶剂萃取浸膏分散液，挥去溶剂后得矮紫堇石油醚部位、矮紫堇乙酸乙酯部位；将萃取后的浸膏分散液浓缩、干燥，得矮紫堇水相萃取部位；该矮紫堇有效部位可用于制备抑制HDAC1酶药物方面，能够用于制备抗肿瘤药物。
CN108464999A公开了一种矮紫堇中生物碱类成分的制备方法，步骤如下：将矮紫堇干燥全草粉碎，用体积分数为70-80％的甲醇回流提取2-4次，每次1-2h，合并提取液，提取液减压浓缩得到浸膏；浸膏溶于1.5％盐酸中，过滤，滤液用氨水碱化，调节pH值为9.8-10.2，然后用氯仿萃取3-5次，合并萃取液，减压浓缩，经碱性硅胶柱色谱分离，依次用体积比95:1、45:1、35:1、25:1、15:1、5:1的氯仿-甲醇洗脱，收集15:1洗脱部分，浓缩即得。该矮紫堇中生物碱成分具有抗炎、抗菌等作用。
到目前为止，尚未见有人报道矮紫堇生物碱成分在制备治疗缺血性心脏病的药物方面的应用。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供矮紫堇生物碱成分的新的医药用途。
本发明采用如下技术方案实现上述目的。
本发明提供矮紫堇生物碱成分用于制备治疗缺血性心脏病的药物的用途。
根据本发明的用途，优选地，所述药物以所述矮紫堇生物碱成分作为唯一活性成分。
根据本发明的用途，优选地，所述药物形成治疗缺血性心脏病的药物制剂；所述药物制剂包含所述矮紫堇生物碱成分，还包含药学上可接受的辅料。
根据本发明的用途，优选地，所述药物形成用于提高左室射血分数与短轴缩短率、降低血清中肌酸激酶同工酶、降低血清中乳酸脱氢酶的药物制剂。
根据本发明的用途，优选地，所述药物形成用于减轻心肌组织的炎症程度及纤维化程度的药物制剂。
根据本发明的用途，优选地，所述药物形成治疗缺血性心脏病的药物制剂；单位药物制剂中矮紫堇生物碱成分的含量为50～800mg。
根据本发明的用途，优选地，单位药物制剂中矮紫堇生物碱成分的含量为150～600mg。
根据本发明的用途，优选地，单位药物制剂中矮紫堇生物碱成分的含量为200～400mg。
根据本发明的用途，优选地，所述矮紫堇生物碱成分采用如下方法制备：
(1)将矮紫堇药材用第一溶剂加热回流提取1～2次，每次第一溶剂的用量为所述矮紫堇药材质量的0.5～2倍，每次提取时间为1～2小时，固液分离，得到第一提取液和第一药渣；所述第一溶剂为盐酸调节pH为2.5～3.5的90～99vol％的乙醇水溶液；
(2)将所述第一药渣用第二溶剂加热回流提取1～2次，每次第二溶剂的用量为所述矮紫堇药材质量的0.5～2倍，每次提取时间为1～2小时，固液分离，得到第二提取液和第二药渣；所述第二溶剂为盐酸调节pH为2.5～3.5的70～80vol％的乙醇水溶液；
(3)将第一提取液和第二提取液合并，浓缩和干燥，得到所述矮紫堇乙醇提取物；
(4)将所述矮紫堇乙醇提取物用第三溶剂溶解，经阳离子交换树脂分离，以纯水洗脱得到非生物碱类成分，再以第四溶剂进行洗脱，并将第四溶剂洗脱液浓缩干燥，得到所述矮紫堇生物碱成分；其中，所述第三溶剂为以盐酸调节至pH为1.5～2.5的15～30vol％的乙醇水溶液；第四溶剂为氨水调节至pH为10.5～11.5的90～99％vol乙醇水溶液。
根据本发明的用途，优选地，步骤(1)中，所述第一溶剂为盐酸调节pH为3.0的95vol％的乙醇水溶液；步骤(2)中，所述第二溶剂为盐酸调节pH为3.0的75vol％的乙醇水溶液；步骤(4)中，所述第三溶剂为以盐酸调节至pH为2.0的20vol％的乙醇水溶液；第四溶剂为氨水调节至pH为11.0的95％vol乙醇水溶液。
本发明的矮紫堇生物碱成分可以用于制备具有治疗缺血性心脏病作用的药物。本发明的矮紫堇生物碱成分可以提高左室射血分数与短轴缩短率、降低血清中CK-MB、降低血清中LDH。本发明的矮紫堇生物碱成分可以减轻心肌组织的炎症程度及纤维化程度。
附图说明
图1为实施例1中假手术组小鼠的心肌组织切片HE染色结果图。
图2为实施例1中模型组小鼠的心肌组织切片HE染色结果图。
图3为实施例1中阳性药福辛普利组小鼠的心肌组织切片HE染色结果图。
图4为实施例1中矮紫堇生物碱成分高剂量组小鼠的心肌组织切片HE染色结果图。
图5为实施例1中矮紫堇生物碱成分中剂量组小鼠的心肌组织切片HE染色结果图。
图6为实施例1中矮紫堇生物碱成分低剂量组小鼠的心肌组织切片HE染色结果图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于此。
本发明中，矮紫堇为罂粟科紫堇属植物尼泊尔黄堇(Corydalis hendersoniiHemsl.)的干燥全草。
本发明发现，矮紫堇生物碱成分具有抗心肌缺血作用。矮紫堇生物碱成分可以用于制备治疗缺血性心脏病的药物。根据本发明的一些实施方式，所述药物可以形成用于提高左室射血分数与短轴缩短率、降低血清中肌酸激酶同工酶、降低血清中乳酸脱氢酶的药物制剂。根据本发明的另一些实施方式，所述药物可以形成用于减轻心肌组织的炎症程度及纤维化程度的药物制剂。
本发明中，所述治疗缺血性心脏病的药物可以所述矮紫堇生物碱成分作为唯一活性成分；也可以包含其他具有治疗缺血性心脏病作用的活性成分，或者包含本身不具有治疗缺血性心脏病作用、但能够辅助矮紫堇生物碱成分发挥治疗缺血性心脏病作用的活性成分。优选地，所述治疗缺血性心脏病的药物以所述矮紫堇生物碱成分作为唯一活性成分。
本发明中，所述治疗缺血性心脏病的药物可以为原料药，也可以为药物制剂。
本发明中，所述药物形成具有治疗缺血性心脏病作用的药物制剂。单位药物制剂中，所述矮紫堇生物碱成分的含量可以为50～800mg，优选为150～600mg，更优选为200～400mg。单位药物制剂是指一个制备和应用单位的制剂，例如一片片剂、一袋颗粒剂、一个胶囊、一瓶口服液等。单位药物制剂中矮紫堇生物碱成分的含量在上述范围时，便于服用，也便于发挥治疗缺血性心脏病功效。
本发明中，所述药物制剂的剂型不限，可以为片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、口服液、注射剂等。所述药物制剂还可以包含药学上可接受的辅料。所述药学上可接受的辅料的种类不做限制。辅料可以为填充剂、矫味剂、润滑剂等。填充剂又称稀释剂，例如小麦淀粉、木薯淀粉、玉米淀粉、马铃薯淀粉、糊精、乳糖等。矫味剂的实例包括但不限于蔗糖素、异麦芽酮糖、阿斯巴甜、安赛蜜等。润滑剂实例包括但不限于硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、月桂醇硫酸镁等。
本发明的矮紫堇生物碱成分优选采用如下方法制备：
本发明的矮紫堇生物碱成分是采用乙醇水溶液梯度提取矮紫堇药材得到的。优选地，本发明采用两个浓度梯度的乙醇水溶液对矮紫堇药材进行提取，得到矮紫堇生物碱成分，且第一浓度梯度为盐酸调节pH为2.5～3.5的90～99vol％的乙醇水溶液，第二浓度梯度为盐酸调节pH为2.5～3.5的70～80vol％的乙醇水溶液。采用这样的浓度梯度能够将矮紫堇药材中的生物碱成分更充分地提取出来，避免浪费；且该提取方法得到的矮紫堇生物碱成分具有更加显著的治疗缺血性心脏病的效果。
优选地，本发明的矮紫堇生物碱成分采用如下方法制备：(1)第一浓度梯度提取步骤；(2)第二浓度梯度提取步骤；(3)提取液的浓缩、干燥步骤；和(4)矮紫堇乙醇提取物的分离、洗脱、浓缩干燥步骤。
在步骤(1)中，将矮紫堇药材用第一溶剂加热回流提取1～2次，每次第一溶剂的用量为所述矮紫堇药材质量的0.5～2倍，每次提取时间为1～2小时，固液分离，得到第一提取液和第一药渣；所述第一溶剂为盐酸调节pH为2.5～3.5的90～99vol％的乙醇水溶液。提取次数优选为2次。所述第一溶剂优选为盐酸调节pH为2.8～3.2的93～96vol％的乙醇水溶液。每次第一溶剂的用量优选为所述矮紫堇药材质量的0.6～1.5倍，更优选为0.8～1.2倍。每次提取时间优选为1.2～1.8小时，更优先为1.4～1.6小时。
在步骤(2)中，将所述第一药渣用第二溶剂加热回流提取1～2次，每次第二溶剂的用量为所述矮紫堇药材质量的0.5～2倍，每次提取时间为1～2小时，固液分离，得到第二提取液和第二药渣；所述第二溶剂为盐酸调节pH为2.5～3.5的70～80vol％的乙醇水溶液。提取次数优选为2次。所述第二溶剂优选为盐酸调节pH为2.8～3.2的73～78vol％的乙醇水溶液。每次第二溶剂的用量优选为所述矮紫堇药材质量的0.6～1.5倍，更优选为0.8～1.2倍。每次提取时间优选为1.2～1.8小时，更优先为1.4～1.6小时。
在步骤(3)中，将第一提取液和第二提取液合并，浓缩和干燥，得到所述矮紫堇乙醇提取物。干燥处理可以采用常规干燥方法。
在步骤(4)中，将所述矮紫堇乙醇提取物用第三溶剂溶解，经阳离子交换树脂分离，以纯水洗脱得到非生物碱类成分，再以第四溶剂进行洗脱，并将第四溶剂洗脱液浓缩干燥，得到所述矮紫堇生物碱成分；其中，所述第三溶剂为以盐酸调节至pH为1.5～2.5的15～30vol％的乙醇水溶液；第四溶剂为氨水调节至pH为10.5～11.5的90～99％vol乙醇水溶液。所述第三溶剂优选为以盐酸调节至pH为1.8～2.2的18～25vol％的乙醇水溶液。第四溶剂优选为氨水调节至pH为10.8～11.2的93～96％vol乙醇水溶液。
根据本发明的一个具体实施方式，所述矮紫堇生物碱成分采用如下方法制备：(1)将矮紫堇药材用第一溶剂加热回流提取1～2次，每次第一溶剂的用量为所述矮紫堇药材质量的0.8～1.2倍，每次提取时间为1.4～1.6小时，固液分离，得到第一提取液和第一药渣；所述第一溶剂为盐酸调节pH为2.8～3.2的93～96vol％的乙醇水溶液；(2)将所述第一药渣用第二溶剂加热回流提取1～2次，每次第二溶剂的用量为所述矮紫堇药材质量的0.8～1.2倍，每次提取时间为1.4～1.6小时，固液分离，得到第二提取液和第二药渣；所述第二溶剂为盐酸调节pH为2.8～3.2的73～78vol％的乙醇水溶液；(3)将第一提取液和第二提取液合并，浓缩和干燥，得到所述矮紫堇乙醇提取物；(4)将所述矮紫堇乙醇提取物用第三溶剂溶解，经阳离子交换树脂分离，以纯水洗脱得到非生物碱类成分，再以第四溶剂进行洗脱，并将第四溶剂洗脱液浓缩干燥，得到所述矮紫堇生物碱成分；其中，所述第三溶剂为以盐酸调节至pH为1.8～2.2的18～25vol％的乙醇水溶液；第四溶剂为氨水调节至pH为10.8～11.2的93～96％vol乙醇水溶液。
上述步骤(4)的除杂操作，操作方法简单，能够将矮紫堇乙醇提取物中混杂的非生物碱成分洗脱除去，同时生物碱成分损耗低，得到的矮紫堇生物碱成分纯度高。
以下通过具体实施例对本发明进行进一步说明。
制备例1-矮紫堇生物碱成分的制备
(1)将矮紫堇药材用第一溶剂加热回流提取2次，每次第一溶剂的用量为所述矮紫堇药材质量的1倍，每次提取时间为1.5小时，固液分离，得到第一提取液和第一药渣；所述第一溶剂为盐酸调节pH为3.0的95vol％的乙醇水溶液；
(2)将所述第一药渣用第二溶剂加热回流提取2次，每次第二溶剂的用量为所述矮紫堇药材质量的1倍，每次提取时间为1.5小时，固液分离，得到第二提取液和第二药渣；所述第二溶剂为盐酸调节pH为3.0的75vol％的乙醇水溶液；
(3)将第一提取液和第二提取液合并，浓缩和干燥，得到所述矮紫堇乙醇提取物；
(4)将所述的矮紫堇乙醇提取物用第三溶剂溶解，经阳离子交换树脂分离，以纯水洗脱得到非生物碱类成分，再以第四溶剂进行洗脱得到生物碱类成分，将第四溶剂洗脱液浓缩干燥，得到所述矮紫堇生物碱成分。所述第三溶剂为以盐酸调节至pH为2.0的20vol％的乙醇水溶液；第四溶剂为氨水调节至pH为11.0的95vol％乙醇水溶液。
以下实施例采用的实验试剂、仪器、生物材料以及检测指标如下：
制备例1的矮紫堇生物碱成分。
福辛普利购自中美上海施贵宝制药有限公司；戊巴比妥钠购自Sigma公司；4％多聚甲醛购自北京索莱宝科技有限公司；氯化钠注射液购自山东齐都药业有限公司；低糖/高糖DMEM、胎牛血清(FBS)、0.25％胰酶、PBS均购自美国Corning公司；CCK8试剂盒购自北京拜尔迪生物技术有限公司。
HITACH17080全自动生化仪购自日本日立株式会社；ALC-V8动物呼吸机购自上海奥尔科特生物科技有限公司；Vevo TM 2100小动物超声影像系统购自加拿大VisualSonics公司；MCO-18AIC二氧化碳培养箱购自日本SANYO公司；三气培养箱购自德国ThermoScientific公司；多功能酶标仪购自美国PerkinElmer公司。
雄性ICR小鼠，27～28g，购于北京斯贝福实验动物技术有限公司，饲养于清洁级屏障空间。
H9c2大鼠心肌细胞，购自中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院细胞资源中心。
OD(optical density)是指光密度，又叫通光率，表示被检测物吸收掉的光密度，OD＝lg(1/trans)，其中trans为检测物的透光值。
实施例1-矮紫堇生物碱成分治疗缺血性心脏病的药效评价
1.造模、分组及给药
1.1造模
取健康发育的雄性ICR小鼠80只，随机分为M组和N组，M组为67只小鼠，N组为13只小鼠。
M组小鼠均腹腔注射50mg/kg的戊巴比妥钠进行麻醉，将M组小鼠固定后，剔除前胸鼠毛，连接动物呼吸机(呼吸频率100次/min，吸呼比1:1，潮气量2mL/kg)，于小鼠左侧胸腔第3、4肋间逐层开胸并暴露心脏，左心耳下1～2mm处观察到小鼠左冠状动脉血管，并用规格为7-0的无菌带线缝合针在左冠状动脉血管处行结扎后，用规格为5-0的无菌带线缝合针逐层缝合关胸。
N组小鼠均腹腔注射50mg/kg的戊巴比妥钠进行麻醉，将N组小鼠固定后，剔除前胸鼠毛，连接动物呼吸机(呼吸频率100次/min，吸呼比1:1，潮气量2mL/kg)，于小鼠左侧胸腔第3、4肋间逐层开胸并暴露心脏，左心耳下1～2mm处观察到小鼠左冠状动脉血管，并用规格为7-0的无菌带线缝合针在左冠状动脉血管处只穿线不结扎，用规格为5-0的无菌带线缝合针逐层缝合关胸。
上述各组小鼠在术后均给自由饮食饮水，常规饲养。
1.2分组及给药
造模24h后，选取N组中10只小鼠作为假手术组；选取M组60只小鼠并随机平均分成5组，分别为：模型组、阳性药福辛普利组、矮紫堇生物碱成分低剂量组、矮紫堇生物碱成分中剂量组和矮紫堇生物碱成分高剂量组；上述各组均连续灌胃给药7天。
上述各组给药如下：
假手术组：0.5％CMC-Na；
模型组：0.5％CMC-Na；
阳性药福辛普利组：阳性药福辛普利的剂量为10mg/kg；
矮紫堇生物碱成分低剂量组：制备例1的矮紫堇生物碱成分的剂量为25mg/kg；
矮紫堇生物碱成分中剂量组：制备例1的矮紫堇生物碱成分的剂量为50mg/kg；
矮紫堇生物碱成分高剂量组：制备例1的矮紫堇生物碱成分的剂量为100mg/kg。
阳性药福辛普利和制备例1的矮紫堇生物碱成分均以0.5％CMC-Na溶解，灌胃体积以0.1mL/10g小鼠体重换算。
2.检测项目及结果
2.1心脏超声检测
给药7天后，各组小鼠均用异氟烷麻醉，卧位固定，采用M型超声检测各组小鼠心脏的左室舒张末内径(LVEDd)，左室收缩末内径(LVEDs)，计算左室射血分数(EF)和短轴缩短率(FS)。根据ICR小鼠心脏的左室舒张末内径(LVEDd)和左室收缩末内径(LVEDs)，计算短轴缩短率(FS)。短轴缩短率(FS)的计算公式为：FS％＝[(LVEDd-LVEDs)/LVEDd]×100％。各组小鼠心脏超声检测结果参见表1。
表1各组小鼠心脏超声检测结果
Figure BDA0002408529350000111
注释：与模型组比较，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
2.2血生化指标检测
心脏超声检测结束后，各组小鼠均以剂量为50mg/kg的戊巴比妥钠麻醉后仰卧位固定，腹主动脉取血，4℃下，3000rpm离心20min，分离得到血清，–20℃保存。全自动生化分析仪检测血清中的肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)。各组小鼠血生化检测结果参见表2。
表2各组小鼠血生化检测结果
分组 CK-MB LDH
假手术组 99.43±8.94*** 264.14±24.86***
模型组 185.57±22.71 1002.14±221.08
阳性药福辛普利组 116.00±7.03*** 354.14±27.10***
矮紫堇生物碱成分低剂量组 159.71±16.98* 535.00±31.00***
矮紫堇生物碱成分中剂量组 153.29±16.46** 468.71±44.57***
矮紫堇生物碱成分高剂量组 117.86±10.83*** 316.43±30.12***
注释：与模型组(Model)比较，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
模型组小鼠的血清中CK-MB明显升高，这说明模型组小鼠的心肌细胞受损严重；与模型组相比较，矮紫堇生物碱成分低剂量组小鼠的血清中CK-MB显著降低(P<0.05)，矮紫堇生物碱成分中剂量组小鼠的血清中CK-MB显著降低(P<0.01)，矮紫堇生物碱成分高剂量组小鼠的血清中CK-MB显著降低(P<0.001)，且矮紫堇生物碱成分高剂量组与阳性药福辛普利组作用相当。
与模型组相比较，矮紫堇生物碱成分低剂量组、矮紫堇生物碱成分中剂量组与矮紫堇生物碱成分高剂量组小鼠的血清中LDH均显著降低(P<0.001)，尤其以矮紫堇生物碱成分高剂量组降低最为显著，且矮紫堇生物碱成分高剂量组小鼠的血清中LDH降低效果比阳性药福辛普利组小鼠的血清中LDH降低效果更好。
2.3心脏病理组织检测
2.3.1组织石蜡包埋
(1)取材固定：取小鼠心脏，浸泡在4％多聚甲醛中72h以上；
(2)水洗：将心脏从4％多聚甲醛中取出，沿结扎线横切，将心脏分为两部分，流水冲洗，双蒸水浸洗；
(3)脱水、透明与浸蜡：将上述步骤(2)处理好的组织依次放入75％酒精4h-85％酒精2h-90％酒精2h-95％酒精1h-无水乙醇I 30min-无水乙醇II 30min-二甲苯I 5～10min-二甲苯II 5～10min-蜡I1h-蜡II 1h-蜡III加热至60℃1h；其中，Ⅰ、Ⅱ、III仅代表第几次处理，如蜡Ⅰ1h是指蜡第一次处理1h，蜡II 1h是指蜡第二次处理1h，蜡III加热至60℃1h是指蜡第三次加热至60℃处理1h。
(4)包埋：将浸好蜡的组织于包埋机内包埋，室温冷却；
(5)切片、贴片与拷片：将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片，片厚4μm。切片漂浮于摊片机40℃温水上使组织展平，将其贴附到载玻片上，并放进60℃烘箱内烤片。待水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。
2.3.2HE染色
(1)脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯I 20min-二甲苯II 20min-无水乙醇I10min-无水乙醇II 10min-95％乙醇5min-90％乙醇5min-80％乙醇5min-70％乙醇5min；其中，Ⅰ、Ⅱ仅代表第几次处理，如无水乙醇Ⅰ10min是指无水乙醇第一次处理10min，无水乙醇Ⅱ10min是指无水乙醇第二次处理10min。
(2)染色：苏木精染液(染细胞核)8min，自来水洗，1％的盐酸酒精分化数秒，自来水冲洗，0.6％氨水返蓝，流水冲洗。伊红染液(染细胞质)中染色1～3min；
(3)脱水封片：将切片依次放入95％酒精I 5min-95％酒精II 5min-无水乙醇I5min-无水乙醇II 5min-二甲苯I 5min-二甲苯II 5min中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，中性树胶封片，显微镜观察。其中，Ⅰ、Ⅱ仅代表第几次处理，如无水乙醇Ⅰ5min是指无水乙醇第一次处理5min，无水乙醇Ⅱ5min是指无水乙醇第二次处理5min。各组小鼠心肌组织切片HE染色结果参见图1～6。
3.实验结论
各组小鼠心脏超声检测结果表明，与模型组相比，阳性药福辛普利组的左室射血分数(EF)与短轴缩短率(FS)均显著提高，具有极显著性差异(P＜0.001)；矮紫堇生物碱成分高剂量组的左室射血分数(EF)与短轴缩短率(FS)均显著提高，具有极显著性差异(P＜0.001)；矮紫堇生物碱成分中剂量组的左室射血分数(EF)与短轴缩短率(FS)均显著提高，具有显著性差异(P＜0.01)；矮紫堇生物碱成分低剂量组的左室射血分数(EF)显著提高，具有显著性差异(P＜0.05)。
各组小鼠血生化检测结果表明，模型组小鼠的血清中CK-MB明显升高，这说明模型组小鼠的心肌细胞受损严重；与模型组相比较，矮紫堇生物碱成分低剂量组小鼠的血清中CK-MB显著降低(P<0.05)，矮紫堇生物碱成分中剂量组小鼠的血清中CK-MB显著降低(P<0.01)，矮紫堇生物碱成分高剂量组小鼠的血清中CK-MB显著降低(P<0.001)，且矮紫堇生物碱成分高剂量组与阳性药福辛普利组作用相当。
各组小鼠血生化检测结果表明，与模型组相比较，矮紫堇生物碱成分低剂量组、矮紫堇生物碱成分中剂量组与矮紫堇生物碱成分高剂量组小鼠的血清中LDH均显著降低(P<0.001)，尤其以矮紫堇生物碱成分高剂量组降低最为显著，且矮紫堇生物碱成分高剂量组小鼠的血清中LDH降低效果比阳性药福辛普利组小鼠的血清中LDH降低效果更好。
各组小鼠心肌组织切片HE染色结果表明，与模型组相比，阳性药福辛普利组的心肌组织的炎症程度及纤维化程度显著减轻；矮紫堇生物碱成分高剂量组、矮紫堇生物碱成分中剂量组、矮紫堇生物碱成分低剂量组的心肌组织的炎症程度及纤维化程度均显著减轻，且矮紫堇生物碱成分高剂量组的心肌组织的炎症程度及纤维化程度的减轻最为显著。
由上述实验可知，矮紫堇生物碱成分具有治疗缺血性心脏病的作用，可用于制备治疗缺血性心脏病的药物。
实施例2-CCK8细胞活力检测
1.实验方法与结果
采用CCK8试剂(细胞计数试剂盒，Cell Counting Kit8)，测定不同浓度的矮紫堇生物碱成分对于H9c2大鼠心肌细胞活力的影响。
取对数期的H9c2大鼠心肌细胞，制备细胞悬液，调整细胞浓度为5×105/ml，加入96孔板，每孔100μl。将上述细胞培养24h，使其完全贴壁，将矮紫堇生物碱成分母液用完全培养基稀释成10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL、320μg/mL，每个浓度设置6个副孔；设置空白对照组；于加药24h后，每孔加入含有10％CCK8的完全培养基100μl，恒温培养箱中孵育2h后于450nm处测定OD值。矮紫堇生物碱成分对H9c2大鼠心肌细胞活力的影响参见表3。
表3矮紫堇生物碱成分对H9c2大鼠心肌细胞活力的影响
分组 细胞活力(％)
空白对照组 56.64±1.86
矮紫堇生物碱成分(10μg/mL) 60.78±4.14
矮紫堇生物碱成分(20μg/mL) 56.43±3.05
矮紫堇生物碱成分(40μg/mL) 53.63±2.11<sup>**</sup>
矮紫堇生物碱成分(80μg/mL) 47.85±0.22<sup>***</sup>
矮紫堇生物碱成分(160μg/mL) 37.87±0.97<sup>***</sup>
矮紫堇生物碱成分(320μg/mL) 37.52±2.11<sup>***</sup>
注释：与模型组(Model)比较，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
2.实验结论
表3表明，与空白对照组相比，矮紫堇生物碱成分在20μg/mL以下对H9c2大鼠心肌细胞活力几乎无影响；但随着矮紫堇生物碱成分浓度的增加，矮紫堇生物碱成分对H9c2大鼠心肌细胞活力的抑制作用越来越显著；当矮紫堇生物碱成分浓度达到40μg/mL时，矮紫堇生物碱成分对H9c2大鼠心肌细胞活力的抑制作用非常显著(P<0.01)；当矮紫堇生物碱成分浓度达到80～320μg/mL时，矮紫堇生物碱成分对H9c2大鼠心肌细胞活力的抑制作用极显著(P<0.001)。这表明，矮紫堇生物碱成分在20μg/mL以下，矮紫堇生物碱成分对H9c2大鼠心肌细胞活力无影响，矮紫堇生物碱成分用药相对安全。
本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明的实质内容的情况下，本领域技术人员可以想到的任何变形、改进、替换均落入本发明的范围。

Claims (10)

1.矮紫堇生物碱成分用于制备治疗缺血性心脏病的药物的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物以所述矮紫堇生物碱成分作为唯一活性成分。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物形成治疗缺血性心脏病的药物制剂；所述药物制剂包含所述矮紫堇生物碱成分，还包含药学上可接受的辅料。
4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物形成用于提高左室射血分数与短轴缩短率、降低血清中肌酸激酶同工酶、降低血清中乳酸脱氢酶的药物制剂。
5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物形成用于减轻心肌组织的炎症程度及纤维化程度的药物制剂。
6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物形成治疗缺血性心脏病的药物制剂；单位药物制剂中矮紫堇生物碱成分的含量为50～800mg。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，单位药物制剂中矮紫堇生物碱成分的含量为150～600mg。
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，单位药物制剂中矮紫堇生物碱成分的含量为200～400mg。
9.根据权利要求1～8任一项所述的用途，其特征在于，所述矮紫堇生物碱成分采用如下方法制备：
(1)将矮紫堇药材用第一溶剂加热回流提取1～2次，每次第一溶剂的用量为所述矮紫堇药材质量的0.5～2倍，每次提取时间为1～2小时，固液分离，得到第一提取液和第一药渣；所述第一溶剂为盐酸调节pH为2.5～3.5的90～99vol％的乙醇水溶液；
(2)将所述第一药渣用第二溶剂加热回流提取1～2次，每次第二溶剂的用量为所述矮紫堇药材质量的0.5～2倍，每次提取时间为1～2小时，固液分离，得到第二提取液和第二药渣；所述第二溶剂为盐酸调节pH为2.5～3.5的70～80vol％的乙醇水溶液；
(3)将第一提取液和第二提取液合并，浓缩和干燥，得到所述矮紫堇乙醇提取物；
(4)将所述矮紫堇乙醇提取物用第三溶剂溶解，经阳离子交换树脂分离，以纯水洗脱得到非生物碱类成分，再以第四溶剂进行洗脱，并将第四溶剂洗脱液浓缩干燥，得到所述矮紫堇生物碱成分；其中，所述第三溶剂为以盐酸调节至pH为1.5～2.5的15～30vol％的乙醇水溶液；第四溶剂为氨水调节至pH为10.5～11.5的90～99％vol乙醇水溶液。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，步骤(1)中，所述第一溶剂为盐酸调节pH为3.0的95vol％的乙醇水溶液；步骤(2)中，所述第二溶剂为盐酸调节pH为3.0的75vol％的乙醇水溶液；步骤(4)中，所述第三溶剂为以盐酸调节至pH为2.0的20vol％的乙醇水溶液；第四溶剂为氨水调节至pH为11.0的95％vol乙醇水溶液。
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