CN111166766A - 一种抗肿瘤药物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种抗肿瘤药物及其制备方法。所述抗肿瘤药物包含阻断了KLRG1信号传导通路的淋巴细胞。本发明提供的抗肿瘤药物能显著抑制肿瘤生长，提高肿瘤患者生存时间。

Description

一种抗肿瘤药物及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种药物及其制备方法，尤其涉及一种抗肿瘤药物及其制备方法。
背景技术
杀伤细胞凝集素样受体G1(KLRG1)属于自然杀伤细胞(NK细胞)抑制性受体，因其胞内区含有ITIM基序，普遍被认为发挥抑制免疫应答的功能，抑制NK细胞对自身组织的攻击。
肿瘤免疫治疗是通过重新启动并维持肿瘤-免疫循环，恢复机体正常的抗肿瘤免疫反应，从而控制与清除肿瘤的一种治疗方法。包括单克隆抗体类免疫检查点抑制剂、治疗性抗体、癌症疫苗、细胞治疗和小分子抑制剂等。近几年，肿瘤免疫治疗的好消息不断，目前已在多种肿瘤如黑色素瘤，非小细胞肺癌、肾癌和前列腺癌等实体瘤的治疗中展示出了强大的抗肿瘤活性，多个肿瘤免疫治疗药物已经获得美国FDA批准临床应用。
然而目前尚未有以KLRG1分子为肿瘤免疫治疗靶点以及与其相关的抗肿瘤药物的报道。
发明内容
本发明提供一种抗肿瘤药物，包含阻断了KLRG1信号传导通路的淋巴细胞，该抗肿瘤药物能显著抑制肿瘤生长，提高肿瘤患者生存时间。
本发明还提供了一种制备抗肿瘤药物的方法，该方法实现了将阻断了KLRG1信号传导通路的淋巴细胞作为有效成分来制备抗肿瘤药物。
本发明还提供了KLRG1作为靶点在制备抗肿瘤药物中的应用；以及抗-KLRG1抗体在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明还提供了一种抗肿瘤药物组合物，包括抗-KLRG1抗体和抗-PD1抗体，具有显著提高的抗肿瘤效果。
本发明提供的一种抗肿瘤药物，包含阻断了KLRG1信号传导通路的淋巴细胞。该抗肿瘤药物可以是抗肿瘤细胞药物。
在本发明的方案中，所述淋巴细胞源自肿瘤患者的外周血或肿瘤组织。
进一步的，在本发明的方案中，阻断所述淋巴细胞的KLRG1信号传导通路的方式包括：a)基因工程手段敲除所述淋巴细胞表面的KLRG1分子基因或下调KLRG1分子基因的表达，b)使用能与KLRG1分子结合的抗体或小分子抑制剂进行阻断；c)基因工程手段使得KLRG1胞外区不表达或无法结合配体，基因工程手段使得KLRG1胞内区(特别是ITIM基序)不表达或无法传导负向调节免疫应答的抑制性信号。以上a)-c)中基因工程手段均为本领域常规技术手段，本领域技术人员可以根据需要采用合适的手段来实现对淋巴细胞的KLRG1信号传导通路的阻断。
更进一步的，所述阻断了KLRG1信号传导通路的淋巴细胞(表示为KLRG1-/-淋巴细胞)可以为以下的淋巴细胞：1)所述淋巴细胞表面上表达CD8分子和CD27分子，但不表达KLRG1分子；或者虽然淋巴细胞表面上表达少量的KLRG1分子，但不足以满足KLRG1信号传导通路传导需要；2)所述淋巴细胞表面上的KLRG1分子被抗体封闭或被小分子抑制剂阻断；3)所述淋巴细胞表面上的KLRG1分子胞外区不表达或无法结合配体；或者所述KLRG1胞内区(特别是ITIM基序)不表达或无法传导负向调节免疫应答的抑制性信号。以上1)-3)中各种分子的表达情况，以及信号传导情况均可以采用本领域常规技术手段进行检测，这对于本领域技术人员来说是可以实现的。
更进一步的，所述抗肿瘤药物中阻断了KLRG1信号传导通路的淋巴细胞占总淋巴细胞的比例为30％以上，优选40％以上，更优选50％以上，最优选60％以上。
在发明另一个具体实施方式中，所述抗肿瘤药物中阻断了KLRG1信号传导通路的淋巴细胞占总淋巴细胞的比例为100％。
进一步的，所述肿瘤包括黑色素瘤、淋巴瘤、结肠癌、肺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌和肾癌中的一种或多种。
本发明提供的制备所述抗肿瘤药物的方法，包括以下步骤：
1)由肿瘤患者外周血或肿瘤组织获得淋巴细胞；
2)阻断所述淋巴细胞的KLRG1信号传导通路；
3)收集阻断了KLRG1信号传导通路的淋巴细胞。
本发明提供了KLRG1作为靶点在制备抗肿瘤药物中的应用。
进一步的，本发明还提供了抗-KLRG1抗体在制备抗肿瘤药物中的应用。更进一步的，本发明还提供了靶向KLRG1的siRNA，携带可敲除KLRG1基因的病毒、质粒或其它载体在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明还提供了一种抗肿瘤药物组合物，包括抗-KLRG1抗体和抗-PD1抗体。
申请人在研究肿瘤浸润淋巴细胞研究亚群中发现，PD1、KLRG1均是肿瘤微环境中的CD8T细胞高表达的分子，阻断KLRG1信号传导通路能够部分解除肿瘤免疫微环境对淋巴细胞的抑制，并且进一步的，出乎意料的发现将抗-KLRG1抗体和抗-PD1抗体联合应用具有二者单独使用时无法实现的优异的抗肿瘤效果，可作为对抗-PD1抗体治疗不敏感的肿瘤患者的新的治疗选择。
具体的，在本发明方案中，所述抗肿瘤药物组合物中所述抗-KLRG1抗体与抗-PD1抗体的重量比为0.1-10：1，优选为1:1，能获得效果显著提高的抗肿瘤效果。当然，本领域技术人员也可以根据需要，调整抗-KLRG1抗体与抗-PD1抗体的比例，例如使二者摩尔比为0.1-10：1，优选为1:1。
在本发明的方案中，所述抗-KLRG1抗体与抗-PD1抗体均可以商购获得。抗-KLRG1抗体购自美国Bioxcell公司，产品目录号为BE0201的单克隆抗体或体外培养抗-KLRG1抗体的杂交瘤细胞得到的单克隆抗体。抗-PD1抗体购自美国Bioxcell公司，产品目录号为BE0146的单克隆抗体或体外培养抗-PD1抗体的杂交瘤细胞得到的单克隆抗体。
本发明的所述抗肿瘤药物或所述抗肿瘤药物组合物还可以包含药学上可接受或生理学可接受的药用辅料、载体、稳定剂、稀释剂、赋形剂、缓冲液、等渗剂和/或添加剂等；以及常规用于淋巴细胞低温保存的抗冻液(例如，ZENOAQ公司CELLBANKER系列细胞冻存液)，从而可以进行深低温(-80℃以下，例如，在液氮中)保存。
本发明的所述抗肿瘤药物或所述抗肿瘤药物组合物可以是任何适于临床应用的剂型和用药规格，例如，可以是注射剂。所述抗肿瘤药物的制备方法还包括按照常规的药品制备方法制成所需要的剂型，例如制成注射剂，可以是通过加入生理盐水制成注射针剂，也可以制成粉针剂等。
本发明提供的非细胞制剂类抗肿瘤药物可以通过皮下、肌肉注射或静脉注射给药；细胞制剂类抗肿瘤药物可通过静脉回输或腹腔注射给药。
在本发明提供的阻断了KLRG1信号传导通路的淋巴细胞回输的治疗过程中，采集哺乳动物血液(例如外周血)，以及分离单个核细胞的方法不受特别的限制，可以采用本领域中公知的方法，例如，可以采用体外循环的方法或设备(例如，可以使用人单个核细胞分离机，循环3000～6000mL外周血)。
在本发明方案中，获得所述淋巴细胞的技术是本领域已知的，可以采用本领域中常用的方法或设备来完成，在本发明中不受任何限制。只要是能够体外培养淋巴细胞的技术均可以在本发明中使用。例如，扩增CIK细胞的技术、扩增NK细胞的技术、分离和扩增TIL细胞的技术等。上述方法在许多科学文献中均能找到，或按照相关试剂生产厂商的说明书或者推荐实验流程实施。本领域技术人员完全有能力获得这些具体实施方式或实验流程。
本发明的一个具体实施方式中，以KLRG1为靶点进行肿瘤免疫治疗的方法包括：
(1)免疫组化手段检测肿瘤患者肿瘤组织中KLRG1表达，确定阳性后可进行治疗；
(2)静脉注射抗-KLRG1抗体(或抗-KLRG1抗体+抗-PD1抗体)，两周一个疗程；
(3)定期随访，观察肿瘤进展。
在上述针对人的治疗方法中，或针对人的抗肿瘤药物以及抗肿瘤药物组合物中，所述抗-KLRG1抗体与抗-PD1抗体均可以商购获得。抗-KLRG1抗体购自美国Bioxcell公司，产品目录号为BE0201的单克隆抗体或体外培养抗-KLRG1抗体的杂交瘤细胞得到的单克隆抗体。抗-PD1抗体购自美国Bioxcell公司，产品目录号为BE0193的单克隆抗体或体外培养抗-PD1抗体的杂交瘤细胞得到的单克隆抗体。
在本发明的一个具体实施方式中，以阻断了KLRG1信号传导通路的淋巴细胞作为抗肿瘤药物(即抗肿瘤细胞药物)进行肿瘤免疫治疗的方法包括：
(1)将受试者的外周血采集到抗凝试管中，通过密度梯度离心的方法去除红细胞；
(2)从已去除红细胞的外周血中分离单个核细胞，在Lonza公司X-VIVOTM15培养基中，置于37℃、5％CO2环境下体外培养，添加抗-CD3，IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12、IL-15、IFN-γ、TNF-α等的一种或多种细胞因子，并添加抗-KLRG1阻断KLRG1信号(或添加抗-KLRG1抗体+抗-PD1抗体，阻断KLRG1信号以及PD1信号)；培养时间为3～21天，优选4～14天，更优选7～10天；
(3)收集淋巴细胞，静脉回输肿瘤患者。
本发明提供的方案具有以下优点：
(1)本发明人首次发现可以将KLRG1作为靶点应用肿瘤免疫治疗中，并发现通过阻断KLRG1信号传导通路，能抑制肿瘤生长，从而提高肿瘤患者生存时间。
(2)本发明提供的包含阻断了KLRG1信号传导通路的淋巴细胞的抗肿瘤药物，具有抗瘤谱广泛、抑制效率高的优点。
(3)本发明提供的抗肿瘤药物组合物，将抗-KLRG1抗体和抗-PD1抗体联合应用，具有二者单独使用时无法实现的优异的抗肿瘤效果，可作为对抗PD1抗体治疗不敏感的肿瘤患者的新的治疗选择。
附图说明
图1显示了抗-KLRG1抗体治疗小鼠黑色素瘤的效果。
图2显示了抗-KLRG1抗体与抗-PD1抗体联合治疗小鼠黑色素瘤的效果。
图3显示了抗体阻断KLRG1分子的淋巴细胞治疗小鼠黑色素瘤的效果。
图4显示了抗-KLRG1抗体治疗小鼠淋巴瘤的效果。
图5显示了抗-KLRG1抗体与抗-PD1抗体联合治疗小鼠淋巴瘤的效果。
图6显示了抗体阻断KLRG1分子的淋巴细胞治疗小鼠淋巴瘤的效果。
具体实施方式
除非另外定义，本文中使用的全部技术和科学术语具有与本发明所属领域中的一般技术人员通常理解的相同的含义。尽管与本文中所述的那些相似或等同的任何方法和材料可以用于实施或测试本发明，但是现在描述优选的方法和材料。本文中引用应用的全部出版公开物和专利申请通过引用整体结合于本文中。本文中没有任何内容可以被解释为承认本发明无权通过在先发明而使早于本公开内容的日期获得授权。
必须注意，用于本文中和所附权利要求中时，单数形式“一个”、“某个”和“该”包括复数指代物，除非上下文另外清楚地规定。
“KLRG1”：杀伤细胞凝集素样受体G1，功能上属于NK细胞抑制性受体，因其胞内区含有ITIM基序，普遍被认为发挥抑制免疫应答的功能，抑制NK细胞对自身组织的攻击。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的实验材料，如无特殊说明，均为自常规试剂公司购买得到。
下述实施例中使用的各种肿瘤细胞、药物及实验动物：
小鼠淋巴瘤细胞系EL4，小鼠黑色素瘤细胞系B16-F10均可从美国ATCC公司购买。
C57BL/6小鼠(B6小鼠)购自北京维通利华实验动物技术有限公司，年龄6-8周，体重18克左右。
抗小鼠KLRG1抗体购自美国Bioxcell公司，货号为BE0201；抗小鼠KLRG1抗体的Isotype购自美国Bioxcell公司，货号为BP0087。
抗小鼠PD1抗体购自美国Bioxcell公司，货号为BE0146；抗小鼠PD1抗体的Isotype购自美国Bioxcell公司，货号为BE0089。
实施例1抗-KLRG1抗体在制备抗肿瘤药物中的应用
1、实验材料和试剂
实验用C57BL/6小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司，年龄6-8周，体重18g左右。
小鼠黑色素瘤细胞系B16-F10购自美国ATCC公司。
抗小鼠KLRG1抗体(简称抗-KLRG1)购自美国Bioxcell公司，货号为BE0201；抗小鼠KLRG1抗体的Isotype(即同型对照)购自美国Bioxcell公司，货号为BP0087。
2、实验步骤
(1)C57BL/6小鼠皮下荷瘤B16-F10细胞2×105/只；
(2)24小时后，荷瘤小鼠均分三组，一组腹腔注射抗-KLRG1 200μg/只(将抗-KLRG1抗体溶解在生理盐水中制成注射液)，一组腹腔注射等量Isotype，一组作为空白对照，注射等量生理盐水。
(3)对各组荷瘤小鼠每三天以相同剂量注射一次，共注射3次；
(4)荷瘤后21天测量各组小鼠的肿瘤大小(长×宽，mm2)，统计作图。
3、实验结果
图1显示了抗-KLRG1抗体治疗小鼠黑色素瘤的效果，可以看出，与Isotype对照组(即同型对照)和空白对照组相比，注射抗-KLRG1能够有效抑制B16-F10黑色素瘤细胞的生长，体现为抗-KLRG1注射组肿瘤大小显著低于Isotype对照组和空白对照组，表明KLRG1作为肿瘤免疫治疗靶点的有效性。
实施例2抗肿瘤药物组合物
1、实验材料和试剂
实验用C57BL/6小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司，年龄6-8周，体重18g左右。
小鼠黑色素瘤细胞系B16-F10购自美国ATCC公司。
抗小鼠KLRG1抗体(简称抗-KLRG1)购自美国Bioxcell公司，货号为BE0201；抗小鼠KLRG1抗体的Isotype购自美国Bioxcell公司，货号为BP0087。
抗小鼠PD1抗体(简称抗-PD1)购自美国Bioxcell公司，货号为BE0146；抗小鼠PD1抗体的Isotype购自美国Bioxcell公司，货号为BE0089。
2、实验步骤
(1)C57BL/6小鼠皮下荷瘤B16-F10细胞2×105/只；
(2)24小时后，荷瘤小鼠均分五组，一组腹腔注射抗-KLRG1 200μg/只，一组腹腔注射抗-PD1 200μg/只，一组腹腔注射抗-KLRG1 100μg/只+抗-PD1 100μg/只，一组腹腔注射等量Isotype，一组作为空白对照，注射等量生理盐水。
(3)对各组荷瘤小鼠每三天以相同剂量注射一次，共注射3次；
(4)荷瘤后21天测量各组小鼠的肿瘤大小(长×宽，mm2)，统计作图。
3、实验结果
图2显示了抗-KLRG1抗体与抗-PD1抗体联合治疗小鼠黑色素瘤的效果，结果表明，与Isotype对照组和空白对照组相比，注射抗-KLRG1和抗-PD1均能够有效抑制B16-F10黑色素瘤细胞的生长，但抗-KLRG1和抗-PD1联合治疗组对肿瘤生长的抑制显著强于单独抗体治疗组，表明抗-KLRG1与抗
-PD1在抗肿瘤治疗中具有协同效应，二者联合使用能获得单独使用时无法实现的优异的抗肿瘤效果，可作为对抗-PD1抗体治疗不敏感的肿瘤患者的新的治疗选择。
实施例3含有阻断了KLRG1信号传导通路的淋巴细胞的抗肿瘤药物
1、实验材料和试剂
实验用C57BL/6小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司，年龄6-8周，体重18g左右。
小鼠黑色素瘤细胞系B16-F10购自美国ATCC公司。
抗小鼠KLRG1抗体(简称抗-KLRG1)购自美国Bioxcell公司，货号为BE0201；抗小鼠KLRG1抗体的Isotype购自美国Bioxcell公司，货号为BP0087。
Lonza X-VIVOTM15培养基购自德国Lonza公司。
2、实验步骤
(1)取小鼠脾脏细胞，以2×106/mL的密度培养于Lonza X-VIVOTM15培养基中，培养10天，培养第7天时将淋巴细胞均分两组，一组添加抗-KLRG11μg/mL，一组添加等量Isotype。培养10天后，淋巴细胞可冻存备用，使用时复苏、离心收集即可。
(2)将C57BL/6小鼠皮下荷瘤B16-F10细胞2×105/只；
(3)24小时后，将荷瘤小鼠分为三组，一组腹腔注射孵育了抗-KLRG1的淋巴细胞2×106/只，一组腹腔注射孵育了Isotype的淋巴细胞2×106/只，一组作为空白对照，注射等量生理盐水。
(3)对各组荷瘤小鼠每三天以相同剂量注射一次，共注射3次；
(4)荷瘤后21天测量各组小鼠肿瘤大小(长×宽，mm2)，统计作图。
3、实验结果
图3显示了抗体阻断KLRG1分子的淋巴细胞治疗小鼠黑色素瘤的效果，可以看出，与空白对照组和注射孵育了Isotype的淋巴细胞的荷瘤小鼠组相比，注射孵育了抗-KLRG1的淋巴细胞的荷瘤小鼠组，B16-F10黑色素瘤细胞的生长能够被有效抑制，体现为注射孵育了抗-KLRG1的淋巴细胞的荷瘤小鼠组的肿瘤大小显著低于注射孵育了Isotype的淋巴细胞的荷瘤小鼠组和空白对照荷瘤小鼠组。
实施例4抗-KLRG1抗体在制备抗肿瘤药物中的应用
1、实验材料和试剂
实验用C57BL/6小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司，年龄6-8周，体重18g左右。
小鼠淋巴瘤细胞系EL4购自美国ATCC公司。
抗小鼠KLRG1抗体(简称抗-KLRG1)购自美国Bioxcell公司，货号为BE0201；抗小鼠KLRG1抗体的Isotype购自美国Bioxcell公司，货号为BP0087。
2、实验步骤
(1)C57BL/6小鼠皮下荷瘤EL4细胞1×106/只；
(2)24小时后，荷瘤小鼠均分三组，一组腹腔注射抗-KLRG1 200μg/只，一组腹腔注射等量Isotype，一组作为空白对照，注射等量生理盐水。
(3)对各组荷瘤小鼠每三天以相同剂量注射一次，共注射3次；
(4)荷瘤后21天测量各组小鼠肿瘤大小(长×宽，mm2)，统计作图。
3、实验结果
图4显示了抗-KLRG1抗体治疗小鼠淋巴瘤的效果，可以看出，结果表明，与Isotype对照组和空白对照组相比，注射抗-KLRG1能够有效抑制EL4淋巴瘤细胞的生长，体现为抗-KLRG1注射组肿瘤大小显著低于Isotype对照组和空白对照组。
实施例5抗肿瘤药物组合物
1、实验材料和试剂
实验用C57BL/6小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司，年龄6-8周，体重18g左右。
小鼠淋巴瘤细胞系EL4购自美国ATCC公司。
抗小鼠KLRG1抗体(简称抗-KLRG1)购自美国Bioxcell公司，货号为BE0201；抗小鼠KLRG1抗体的Isotype购自美国Bioxcell公司，货号为BP0087。
抗小鼠PD1抗体(简称抗-PD1)购自美国Bioxcell公司，货号为BE0146；抗小鼠PD1抗体的Isotype购自美国Bioxcell公司，货号为BE0089。
2、实验步骤
(1)C57BL/6小鼠皮下荷瘤EL4细胞1×106/只；
(2)24小时后，荷瘤小鼠均分五组，一组腹腔注射抗-KLRG1 200μg/只，一组腹腔注射抗-PD1 200μg/只，一组腹腔注射抗-KLRG1 100μg/只+抗-PD1 100μg/只，一组腹腔注射等量Isotype，一组作为空白对照，注射等量生理盐水。
(3)对各组荷瘤小鼠每三天以相同剂量注射一次，共注射3次；
(4)荷瘤后21天测量各组小鼠肿瘤大小(长×宽，mm2)，统计作图。
3、实验结果
图5显示了抗-KLRG1抗体与抗-PD1抗体联合治疗小鼠淋巴瘤的效果，结果表明，与Isotype对照组和空白对照组相比，注射抗-KLRG1和抗-PD1均能够有效抑制EL4淋巴瘤细胞的生长，但抗-KLRG1和抗-PD1联合治疗组对肿瘤生长的抑制显著强于单独抗体治疗组，表明抗-KLRG1与抗-PD1在抗肿瘤治疗中具有协同效应，二者联合使用能获得单独使用时无法实现的优异的抗肿瘤效果，可作为对抗-PD1抗体治疗不敏感的肿瘤患者的新的治疗选择。
实施例6含有阻断了KLRG1信号传导通路的淋巴细胞的抗肿瘤药物
1、实验材料和试剂
实验用C57BL/6小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司，年龄6-8周，体重18g左右。
小鼠淋巴瘤细胞系EL4购自美国ATCC公司。
抗小鼠KLRG1抗体(简称抗-KLRG1)购自美国Bioxcell公司，货号为BE0201；抗小鼠KLRG1抗体的Isotype购自美国Bioxcell公司，货号为BP0087。
Lonza X-VIVOTM15培养基购自德国Lonza公司。
2、实验步骤
(1)取小鼠脾脏细胞，以2×106/mL的密度培养于Lonza X-VIVOTM15培养基中，培养10天，培养第7天时将淋巴细胞均分两组，一组添加抗-KLRG11μg/mL，一组添加等量Isotype。培养10天后，淋巴细胞可冻存备用，使用时复苏、离心收集即可。
(2)将C57BL/6小鼠皮下荷瘤EL4细胞1×106/只；
(3)24小时后，将荷瘤小鼠分为三组，一组腹腔注射孵育了抗-KLRG1的淋巴细胞2×106/只，一组腹腔注射孵育了Isotype的淋巴细胞2×106/只，一组作为空白对照，注射等量生理盐水。
(3)对各组荷瘤小鼠每三天以相同剂量注射一次，共注射3次；
(4)荷瘤后21天测量各组小鼠肿瘤大小(长×宽，mm2)，统计作图。
3、实验结果
图6显示了抗体阻断KLRG1分子的淋巴细胞治疗小鼠淋巴瘤的效果，结果表明，与空白对照组和注射孵育了Isotype的淋巴细胞的荷瘤小鼠组相比，注射孵育了抗-KLRG1的淋巴细胞的荷瘤小鼠组，EL4淋巴瘤细胞的生长能够被有效抑制，体现为注射孵育了抗-KLRG1的淋巴细胞的荷瘤小鼠组的肿瘤大小显著低于注射孵育了Isotype的淋巴细胞的荷瘤小鼠组和空白对照荷瘤小鼠组。
虽然已经举例说明和描述了本发明的具体实施方案，但是对于本领域技术人员来说显而易见的是，在不脱离本发明实质和范围的情况下可以做出多种其他改变和变型。因此，在随附的权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些改变和变型。

Claims (10)

1.一种抗肿瘤药物，其特征在于，包含阻断了KLRG1信号传导通路的淋巴细胞。
2.根据权利要求1所述的抗肿瘤药物，其特征在于，所述淋巴细胞源自肿瘤患者的外周血或肿瘤组织。
3.根据权利要求1所述的抗肿瘤药物，其特征在于，所述抗肿瘤药物中阻断了KLRG1信号传导通路的淋巴细胞占总淋巴细胞的比例为30％以上，优选40％以上，更优选50％以上，最优选60％以上。
4.根据权利要求3所述的抗肿瘤药物，其特征在于，所述抗肿瘤药物中阻断了KLRG1信号传导通路的淋巴细胞占总淋巴细胞的比例为100％。
5.根据权利要求1所述的抗肿瘤药物，其特征在于，所述肿瘤包括黑色素瘤、淋巴瘤、结肠癌、肺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌和肾癌中的一种或多种。
6.一种制备权利要求1-5中任一项所述抗肿瘤药物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)由肿瘤患者外周血或肿瘤组织获得淋巴细胞；
2)阻断所述淋巴细胞的KLRG1信号传导通路；
3)收集阻断了KLRG1信号传导通路的淋巴细胞。
7.KLRG1作为靶点在制备抗肿瘤药物中的应用。
8.抗-KLRG1抗体在制备抗肿瘤药物中的应用。
9.一种抗肿瘤药物组合物，其特征在于，包括抗-KLRG1抗体和抗-PD1抗体。
10.根据权利要求9所述的抗肿瘤药物组合物，其特征在于，所述抗肿瘤药物组合物中所述抗-KLRG1抗体与抗-PD1抗体的重量比为0.1-10：1。
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