CN111149742A - 一种唐冠螺幼体制备及培养方法 - Google Patents

一种唐冠螺幼体制备及培养方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种唐冠螺幼体制备及培养方法。唐冠螺分布在我国热带及部分亚热带海域，是我国著名的“四大名螺”之一，也是我国的海洋濒危物种，国家II级保护动物。本发明通过亲本暂养促熟、亲本交尾产卵、幼体孵化及其幼体培养技术环节，在陆基生态苗室培养出大量唐冠螺幼体，为今后唐冠螺人工繁育奠定理论实践基础。本发明结合了唐冠螺生态、生理习性、繁育特性，构建了一套高效获得幼体及其培养幼体的技术工艺，具有操作简便、易于推广等优点。本发明解决了国际上尚未攻克唐冠螺幼体制备及培养技术的难题，为今后唐冠螺资源修复提供了可靠的技术保障。

Description

一种唐冠螺幼体制备及培养方法
技术领域
本发明属于海洋农业中贝类苗种繁育技术领域，具体涉及一种唐冠螺Cassiscornuta幼体制备及培养方法。
背景技术
唐冠螺Cassis cornuta，属腹足纲、中腹足目、冠螺科，为热带海域大型贝类，壳长可达30厘米，是我国著名的“四大名螺”之一，也是我国的海洋濒危物种，国家II级保护动物。唐冠螺主要分布在我国台湾南部沿海、西沙、中沙及南沙群岛附近海域，栖息于水深1-30米的碎珊瑚海底。它的肉作为高端食材可以食用，贝壳具有较强的观赏性，拥有潜在的市场应用价值和开发前景。
唐冠螺喜昼伏夜出，一般白天埋在沙，夜间出来爬动觅食，喜食海胆等小型海洋动物。它具有发达的吸管，能伸入海胆的口部或生殖孔摄食；其腹足部肌肉极其发达，使其能支撑厚重的外壳爬行运动。伴随着全球变暖，海洋酸化等气候异常变化，及其人为盗捕等多因素影响，导致我国唐冠螺的数量在不断锐减，资源量曾一度衰竭，大部分海域已经功能性灭绝。
发明内容
为了恢复唐冠螺资源，采取有效手段进行增殖与保护，本发明提供了一种唐冠螺幼体制备及培养方法，为其苗种规模化生产提供理论和实践经验。
本发明的唐冠螺Cassis cornuta幼体制备及培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、亲本暂养促熟：将唐冠螺亲本进行暂养，采用微流水+微充气模式进行促熟，野生亲本暂养15-20d后开始投喂饵料，以鲜活紫海胆、白棘三列海胆和/或海刺猬为饵料，暂养促熟过程中，养殖池铺珊瑚沙厚度在15-20cm，流水频率为每天3-5倍养殖水体体积，光照为正常日光照强度的30-50％；海水水温18-32℃，盐度32-33ppt，pH 8.02-8.56(图1)；
b、亲本交尾产卵：在每年4月份左右，促熟后的唐冠螺出现交尾行为，大多发生在夜间；雄性个体伸出阴茎，插入雌性个体受精囊中释放精子，雌性个体需交配后才能受精，完成受精过程；在每年5月份前后，待雌性亲本卵子成熟，产出卵囊，卵囊呈淡黄色，单个卵囊有透明胶质包被呈叶状，整个卵囊+卵囊柄形成的卵带呈簇状，以卵囊柄粘附在养殖容器壁或者底上；每个雌性亲本可以排放300-900个卵囊，每个卵囊中大约有1000-1500个受精卵(图1)；
c、幼体孵化：发现卵囊后，将其刮取下来，冲洗干净后利用甲醛消毒后，放置于孵化框中进行充气流水孵化，受精卵在27-28℃、盐度32ppt，pH 8.06-8.56条件下，经过9-15d完成孵化；在整个孵化过程中，卵囊由淡黄色逐渐转变为深黄色、黑色，卵囊皮层由韧而有弹性至变得发脆，当其转化为黑色时，意味着胚胎孵化即将结束，准备开始释放幼体；此时，停止流水，改为充气孵化，当卵囊顶端出现裂孔，早期面盘幼虫自发游动至海水中，完成孵化过程；整个受精卵的胚体发育过程都是在卵囊中完成，胚胎经历了受精卵、二细胞、四细胞、八细胞、多细胞、桑葚期、囊胚胎、担轮幼虫期等阶段发育至早期面盘幼虫(表1，图2，图3)；大多情况下，卵囊内卵子的受精率90％以上，孵化率在90％以上；
d、幼体培养：早期面盘幼虫壳长在300μm左右，利用筛绢网收集早期面盘幼虫，投放至幼体培养缸采用微充气方式，按照0.1-0.2个/ml密度进行幼体培养；以角毛藻、金藻、酵母作为幼体饵料，每天投喂总量为3-5万个细胞/ml；在温度27-29℃、盐度32-33ppt，pH8.02-8.45水条件下，经过12-15d培育，早期面幼幼虫经过了中期面盘幼虫，到达后期面面幼虫，出现了面盘萎缩、纤毛脱落等特征，进入附着变态阶段(图3)，除了投喂单胞藻外，还需要投喂虾片、卤虫幼体等，经过3-7d完成变态，形成稚螺。
所述的步骤a中促熟时的培养密度为10-15kg/m3；投喂饵料的频率为每周100g海胆/1kg唐冠螺。
所述的步骤c中的消毒是利用200ppm甲醛消毒1-2min，所述的孵化框是漂浮式网框，其网孔直径为3-5mm。漂浮式网框是指能漂浮在水面的带网的框。
所述的步骤d中的利用筛绢网收集早期面盘幼虫是利用网孔直径200μm的筛绢网收集早期面盘幼虫。
步骤c中的幼体孵化时间为9-15d，是因为从第一个卵囊释放幼虫开始，孵化需要一定时间，大约需要6d左右时间幼体释放完毕；
表1唐冠螺胚胎发育及其幼虫发育过程所需时间及其主要特征
Figure BDA0002354239860000031
Figure BDA0002354239860000041
本发明通过亲本暂养促熟、亲本交尾产卵、幼体孵化及其幼体培养技术环节，在陆基生态苗室培养出大量唐冠螺幼体，为今后唐冠螺人工繁育奠定理论实践基础。本发明结合了唐冠螺生态、生理习性、繁育特性，构建了一套高效获得幼体及其培养幼体的技术工艺，具有操作简便、易于推广等优点。本发明解决了国际上尚未攻克唐冠螺幼体制备及培养技术的难题，为今后唐冠螺资源修复提供了可靠的技术保障。
附图说明：
图1是唐冠螺亲本生态促熟、交尾及其排放卵囊。A-C，唐冠螺亲本生态促熟；D，亲本交尾；E-F，排放卵囊。
图2是唐冠螺卵囊在胚胎发育过程中颜色变化。A，刚刚排放出的卵囊，淡黄色，充满了受精卵；B，孵化8d的卵囊，棕黑色，充满了即将释放的面盘幼虫；C，孵化12d的卵囊，黑色，已经开始释放面盘幼虫；D，孵化16d的卵囊，透明色，面盘幼虫释放完毕。
图3是唐冠螺胚胎发育及其幼虫发育过程。A，受精卵；B，第一极体；C，第二极体；D，2细胞期；E，4细胞期；F，8细胞期；G，多细胞期；H，囊胚期；I，原肠期；J，担轮幼虫；K，膜内面盘幼虫；L-M，初孵面盘幼虫；N，中期面盘幼虫；O，中后期面盘幼虫；P，后期面盘幼虫。
具体实施方式：
以唐冠螺幼体制备为实施例进一步说明本发明，但不构成对本发明的限制。
实施例1：
a、亲本暂养促熟：2017年10月，从南沙黄岩岛采捕了15个唐冠螺，壳长15-30cm，鲜重1.5-5.0kg，将其利用活水船运送至中国科学院海南热带海洋生物实验站，放置于1个5m3养殖缸进行暂养，采用微流水+微充气模式进行促熟，培养密度为10kg/m3；野生亲本暂养15d后开始投喂饵料，以鲜活紫海胆、白棘三列海胆、海刺猬为饵料，投喂频率为每周100g海胆/1kg唐冠螺；暂养促熟过程中，养殖池铺珊瑚沙厚度在15cm，流水频率为3倍培养水体/d，光照为正常日光照强度的30％；海水水温18-32℃，盐度32-33ppt，pH 8.02-8.56(图1)；
b、亲本交尾产卵：2018年4月份18日，唐冠螺在养殖缸内出现交尾行为，均发生在夜间；雄性个体伸出阴茎，插入雌性个体受精囊中释放精子，完成受精过程；2018年5月1日，3个雌性亲本卵子成熟，产出卵囊，卵囊呈淡黄色，单个卵囊有透明胶质包被呈叶状，整个卵囊+卵囊柄形成的卵带呈簇状，以卵囊柄粘附在养殖容器壁或者底上；每个雌性亲本分别排放300、560、900个卵囊，共计产出1760个卵囊，每个卵囊中大约有1000-1500个受精卵(图1)；
c、幼体孵化：2018年5月2日发现卵囊后，轻轻的将其刮取下来，冲洗干净后利用200ppm甲醛消毒1-2min后，放置于3个孵化框(漂浮式网框，网孔3-5mm，筐直径40cm)中进行充气流水孵化；受精卵在27-28℃、盐度32ppt，pH 8.06-8.56海水条件下，经过9-15d完成孵化；在整个孵化过程中，卵囊由淡黄色逐渐转变为深黄色、黑色，卵囊皮层由有韧性至变得发脆，当其转化为黑色时，意味着幼体即将释放；此时，停止流水，改为充气孵化，卵囊顶端出现裂孔，早期面盘幼虫自发游动至海水中，完成孵化过程；整个受精卵的胚体发育过程都是在卵囊中完成，胚胎经历了受精卵、二细胞、四细胞、八细胞、多细胞、桑葚期、囊胚胎、担轮幼虫期等阶段发育至早期面盘幼虫(表1，图2，图3)；卵囊内卵子的受精率96.7％，孵化率在93.5％；
d、幼体培养：刚刚孵化出的早期面盘幼虫壳长在300μm左右，利用200μm网孔筛绢网收集早期面盘幼虫180万个，投放至3个6m3幼体培养缸采用微充气方式，按照0.1个/ml密度进行幼体培养；以角毛藻、金藻、酵母作为幼体饵料，每天投喂总量为3-5万个细胞/ml；在温度27-29℃、盐度32-33ppt，pH 8.02-8.45海水条件下，经过12d培育，早期面幼幼虫经过了中期面盘幼虫，到达后期面面幼虫，出现了面盘萎缩、纤毛脱落等特征，进入附着变态阶段(图3)，除了投喂单胞藻外，还需要投喂虾片、卤虫幼体等，经过3～7d完成变态，形成稚螺。
实施例2：
a、亲本暂养促熟：2018年10月，从南沙黄岩岛采捕了12个唐冠螺，壳长15-30cm，鲜重1.5-5.0kg，将其利用活水船运送至中国科学院海南热带海洋生物实验站，放置于1个3m3养殖缸进行暂养，采用微流水+微充气模式进行促熟，培养密度为15kg/m3；野生亲本暂养20d后开始投喂饵料，以鲜活紫海胆、白棘三列海胆、海刺猬为饵料，投喂频率为每周100g海胆/1kg唐冠螺；暂养促熟过程中，养殖池铺珊瑚沙厚度在20cm，流水频率为5倍培养水体/d，光照为正常日光照强度的50％；海水水温18-32℃，盐度32-33ppt，pH8.02-8.56；
b、亲本交尾产卵：2019年4月份20日，唐冠螺在养殖缸内出现交尾行为，均发生在夜间；雄性个体伸出阴茎，插入雌性个体受精囊中释放精子，完成受精过程；2019年5月5日，3个雌性亲本卵子成熟，产出卵囊，卵囊呈淡黄色，单个卵囊有透明胶质包被呈叶状，整个卵囊+卵囊柄形成的卵带呈簇状，以卵囊柄粘附在养殖容器壁或者底上；每个雌性亲本分别排放363、750、862个卵囊，共计产出1975个卵囊，每个卵囊中大约有1000-1500个受精卵；
c、幼体孵化：2019年5月6日发现卵囊后，轻轻的将其刮取下来，冲洗干净后利用200ppm甲醛消毒1-2min后，放置于3个孵化框(漂浮式网框，网孔3-5mm，筐直径40cm)中进行充气流水孵化；受精卵在27-28℃、盐度32ppt，pH 8.06-8.56海水条件下，经过9-15d完成孵化；在整个孵化过程中，卵囊由淡黄色逐渐转变为深黄色、黑色，卵囊皮层由有韧性到变得发脆，当其转化为黑色时，意味着幼体即将释放；此时，停止流水，改为充气孵化，卵囊顶端出现裂孔，早期面盘幼虫自发游动至海水中，完成孵化过程；整个受精卵的胚体发育均在卵囊中完成，胚胎经历了受精卵、二细胞、四细胞、八细胞、多细胞、桑葚期、囊胚胎、担轮幼虫期等阶段发育至早期面盘幼虫；卵囊内卵子的受精率93.2％，孵化率在90.7％；
d、幼体培养：刚刚孵化出的早期面盘幼虫壳长在300μm左右，利用200μm网孔筛绢网收集早期面盘幼虫200万个，投放至2个5m3幼体培养缸采用微充气方式，按照0.2个/ml密度进行幼体培养；以角毛藻、金藻、酵母作为幼体饵料，每天投喂总量为3-5万个细胞/ml；在温度27-29℃、盐度32-33ppt，pH 8.02-8.45海水条件下，经过15d培育，早期面幼幼虫经过了中期面盘幼虫，到达后期面面幼虫，出现了面盘萎缩、纤毛脱落等特征，进入附着变态阶段，除了投喂单胞藻外，还需要投喂虾片、卤虫幼体等，经过3～7d完成变态，形成稚螺。

Claims (4)

1.一种唐冠螺Cassis cornuta幼体制备及培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、亲本暂养促熟：将唐冠螺亲本进行暂养，采用微流水+微充气模式进行促熟，野生亲本暂养15-20d后开始投喂饵料，以鲜活紫海胆、白棘三列海胆和/或海刺猬为饵料，暂养促熟过程中，养殖池铺珊瑚沙厚度在15-20cm，流水频率为每天3-5倍养殖水体体积，光照为正常日光照强度的30-50％；海水水温18-32℃，盐度32-33ppt，pH 8.02-8.56；
b、亲本交尾产卵：促熟后的唐冠螺出现交尾行为，雄性个体伸出阴茎，插入雌性个体受精囊中释放精子，完成受精过程；待雌性亲本卵子成熟，产出卵囊并粘附在养殖容器壁或者底上；
c、幼体孵化：发现卵囊后，将其刮取下来，冲洗干净后利用甲醛消毒后，放置于孵化框中进行充气流水孵化，受精卵在27-28℃、盐度32ppt，pH 8.06-8.56条件下，经过9-15d完成孵化，准备开始释放幼体；此时，停止流水，改为充气孵化，当卵囊顶端出现裂孔，早期面盘幼虫自发游动至海水中，完成孵化过程；
d、幼体培养：利用筛绢网收集早期面盘幼虫，投放至幼体培养缸采用微充气方式，按照0.1-0.2个/ml密度进行幼体培养；以角毛藻、金藻、酵母作为幼体饵料，每天投喂总量为3-5万个细胞/ml；在温度27-29℃、盐度32-33ppt，pH 8.02-8.45水条件下进行培育，获得稚螺。
2.根据权利要求1所述的所述的唐冠螺Cassis cornuta幼体制备及培养方法，其特征在于，步骤a中促熟时的培养密度为10-15kg/m3；投喂饵料的频率为每周100g海胆/1kg唐冠螺。
3.根据权利要求1所述的所述的唐冠螺Cassis cornuta幼体制备及培养方法，其特征在于，所述的步骤c中的消毒是利用200ppm甲醛消毒1-2min，所述的孵化框是漂浮式网框，其网孔直径为3-5mm。
4.根据权利要求1所述的所述的唐冠螺Cassis cornuta幼体制备及培养方法，其特征在于，所述的步骤d中的利用筛绢网收集早期面盘幼虫是利用网孔直径200μm的筛绢网收集早期面盘幼虫。
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