CN111138358A - Usp8抑制剂及其制备方法与应用 - Google Patents

Usp8抑制剂及其制备方法与应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111138358A
CN111138358A CN201911297842.7A CN201911297842A CN111138358A CN 111138358 A CN111138358 A CN 111138358A CN 201911297842 A CN201911297842 A CN 201911297842A CN 111138358 A CN111138358 A CN 111138358A
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
acid
ring
pharmaceutically acceptable
preparation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201911297842.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111138358B (zh
Inventor
李志裕
罗成
卞金磊
赵曜
丁宏
田于成
韩杰
陈凯先
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
China Pharmaceutical University
Shanghai Institute of Materia Medica of CAS
Original Assignee
China Pharmaceutical University
Shanghai Institute of Materia Medica of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by China Pharmaceutical University, Shanghai Institute of Materia Medica of CAS filed Critical China Pharmaceutical University
Priority to CN201911297842.7A priority Critical patent/CN111138358B/zh
Publication of CN111138358A publication Critical patent/CN111138358A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111138358B publication Critical patent/CN111138358B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/38—Nitrogen atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C335/00—Thioureas, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C335/04—Derivatives of thiourea
    • C07C335/16—Derivatives of thiourea having nitrogen atoms of thiourea groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C335/00—Thioureas, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C335/04—Derivatives of thiourea
    • C07C335/16—Derivatives of thiourea having nitrogen atoms of thiourea groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton
    • C07C335/18—Derivatives of thiourea having nitrogen atoms of thiourea groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton being further substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/08—Indoles; Hydrogenated indoles with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/72—Nitrogen atoms
    • C07D213/75—Amino or imino radicals, acylated by carboxylic or carbonic acids, or by sulfur or nitrogen analogues thereof, e.g. carbamates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/32—One oxygen, sulfur or nitrogen atom
    • C07D239/42—One nitrogen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/16—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms acylated on ring nitrogen atoms
    • C07D295/20—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms acylated on ring nitrogen atoms by radicals derived from carbonic acid, or sulfur or nitrogen analogues thereof
    • C07D295/215—Radicals derived from nitrogen analogues of carbonic acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/22—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with hetero atoms directly attached to ring nitrogen atoms
    • C07D295/26—Sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D307/56—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D307/68—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/10—Spiro-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/08—Bridged systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/10—Spiro-condensed systems
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

本发明公开了一种USP8抑制剂及其制备方法与应用，属于药物化学领域，具体涉及一类含有取代硫脲或取代胍类衍生物的USP8抑制剂(Ⅰ)及其制备方法，生物学实验证明，本发明的化合物具有良好USP8抑制活性及细胞活性，可用于治疗恶性肿瘤等疾病。

Description

USP8抑制剂及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及医药领域，具体涉及一类具有取代硫脲和取代胍类的衍生物、其药学上可接受的盐、其合成方法及其在医药领域的应用。
技术背景
泛素化是蛋白翻译后修饰和蛋白降解的一种重要形式，可以决定蛋白质的命运，该过程受到蛋白底物与泛素分子的共价结合(D’Arcy,P.et.al.Int.J.Biochem.CellBiol.2012,44:1729-1738)。其中最为著名的则是26S蛋白媒体降解途径，该过程包含着多种不同的泛素-底物系统。在该过程中，一个泛素分子的C末端甘氨酸与另一分子泛素上的赖氨酸残基相互结合，并逐级延申，或者与分子N端结合，形成长链。E1、E2、E3是共同促进泛素-底物结合过程中的代表性关键酶，而去泛素化酶则是起到执行破坏连接的作用，机体内蛋白功能的正常发挥，离不开二者之间的相互作用(Chudi Ndubaku and Vickie TsuiJ.Med.Chem.2015,58:1581-1595)。USP8属于特异性去泛素化酶(USPs)家族中的一员，在人体内广泛分布，已被证实其基因突变或蛋白的过表达与多种腺癌、肺癌的发生有着直接关系。例如，吉非替尼或厄洛替尼利用表面因子受体-酪氨酸激酶途径，治疗非小细胞肺癌过程中，常常因基因突变而产生耐药现象，利用USP8抑制剂可以有效杀伤吉非替尼耐药癌细胞，并对正常细胞无毒副作用(Sanguine Byun et.al.Clin Cancer Res.2013,19:3894-3904)。另一方面，有研究表明，USP8对于T细胞的发育和稳态具有至关重要的作用，其表达失衡将会直接导致机体免疫系统紊乱，并进一步诱发各种免疫系统疾病(Almut Dufneret.al.Nat.Immunol.2015,16:950-960)。此外，利用定点突变实验，也证明了USP8基因突变，尤其是缺失14-3-3蛋白结合位点后，将会诱发库欣病的产生(Martin Reinckeet.al.Nat.Genet.2015,47:31-38)|。
高通量筛选是在分子水平与细胞水平上，广泛获取分子靶点相互作用信息的一门新型技术。目前，许多具有全新母核的优势先导分子，均通过该技术得以发现。在本专利的研发过程中，利用高通量筛选技术，首次发现了以硫脲结构为母核的USP8靶向小分子调控剂，并以此为基础，通过结构改造，得到一系列具有硫脲哌嗪、硫脲氮杂螺环、硫脲氮杂桥环、哌啶胺硫脲以及取代胍类的高活性化合物，是目前为数不多的几个USP8抑制剂之一，弥补了相关领域的研究空白。
发明内容
技术方案：本发明要解决的技术问题是提供一类具有USP8高一直活性的先导分子，并进一步结构优化，获得一系列活性更有、理化性质更佳的USP8抑制剂优势化合物。
本发明还要解决的技术问题是提供这些USP8抑制剂优势化合物的制备方法。
本发明最后要解决的技术问题是提供上述USP8抑制剂优势化合物在制备治疗USP8介导的免疫抑制的相关疾病药物中的应用。
技术方案：为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
本发明公开了通式(Ⅰ)的化合物或其药学上可接受的盐形：
Figure BDA0002321036750000021
R1片段选自于硝基、氨基、烷基、烷氧基、卤素、氰基、羧基、含氮杂环、三氟甲基、磺酰基中的一个或多个；X为C或N；
当R2为H时，R3选自于未取代、单取代或多取代芳香环、芳香稠环、
Figure BDA0002321036750000022
上述取代基选自硝基、氨基、烷基、烷氧基、卤素、氰基、羧基、含氮杂环、三氟甲基、磺酰基中的一个或多个；
当R2、R3均不为H时，所述结构是由R2、R3共同构成的取代氮杂脂肪环；上述脂肪环选自哌嗪环、哌啶胺环、氮杂螺环、氮杂桥环；上述取代基选自磺酰基团、芳香环、芳香稠环或
Figure BDA0002321036750000031
具体结构示例包含但不局限于
Figure BDA0002321036750000032
Figure BDA0002321036750000033
其中n1、n2、m1、m2各自独立选自1、2或3；i、h各自独立选自0、1或2，g选自1、2、3；其中R基团选自于硝基、氨基、烷基、烷氧基、卤素、氰基、羧基、含氮杂环、三氟甲基、磺酰基中的一个或多个。
本发明所述的通式(Ⅰ)的化合物的药学上可接受的盐，是指通式(Ⅰ)的化合物与药学上可接受的酸形成的酸加成盐或与药学上可接受的碱形成碱加成盐，所述酸包括：氯化氢、溴化氢、硫酸、碳酸、草酸、柠檬酸、琥珀酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、马来酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸或阿魏酸；所述碱加成盐包括：钠盐、钾盐、铵盐、钙盐、铝盐、镁盐或其他金属盐，乙二胺、乙醇胺或其他常见碱加成盐。
本发明优选的部分化合物如下：
Figure BDA0002321036750000034
Figure BDA0002321036750000041
Figure BDA0002321036750000051
Figure BDA0002321036750000061
Figure BDA0002321036750000071
Figure BDA0002321036750000081
Figure BDA0002321036750000091
Figure BDA0002321036750000101
USP8酶活测试采用基于Ubiquitin-rhodamine110荧光实验的靶向USP8的酶活评估体系。整个体系为10μL体积。将2.5μL稀释至给定浓度的化合物和2.5μL10nM纯化的USP8催化结构域蛋白室温孵育15分钟，之后加入5μL Ubiquitin-rhodamine110底物至终浓度为200nM，室温孵育60分钟。利用ENVISION酶标仪，设置480nm波长激发光并检测产物在540nm波长的发射光强度。整个体系在优化的实验缓冲液中进行，成分包括50mM Tris-HCl,pH7.5,1mM EDTA,5mM dithioerythritol,100mM NaCl,0.05％(w/v CHAPS)。
本发明另一目的在于保护该系列化合物的合成路线，该路线可以高收率、快速制备系列化合物，具体合成方法如下：
Figure BDA0002321036750000111
由化合物Ⅰ-1制备化合物Ⅰ-2的过程，利用硫光气与取代芳香胺反应，溶剂优先采用四氢呋喃，所用缚酸剂为三乙胺；由化合物Ⅰ-2制备化合物Ⅰ的过程，利用异硫氰酸酯与含氨基化合物反应，优选溶剂丙酮，多数产物以固体形式析出。
由化合物Ⅱ-1制备化合物Ⅱ-2a的过程，为碱性条件的亲核取代反应，选用碱为三乙胺，溶剂选择为四氢呋喃，反应温度回流；由化合物Ⅱ-2a制备化合物Ⅱ-a的反应，利用化合物Ⅱ-2a与异硫氰酸酯的加成反应制备，优选溶剂为丙酮。
由化合物Ⅱ-1制备化合物Ⅱ-2b的过程，采用4-Boc-氨基哌啶与芳香卤化物的亲核取代反应制备，采用三乙胺的碱性条件，溶剂选择为四氢呋喃，反应温度回流；由化合物Ⅱ-2b制备化合物Ⅱ-3b的过程，目的在于脱出Boc保护基，采用4N mol/L盐酸水溶液与1，4-二氧六环的混合体系脱除；由化合物Ⅱ-3b制备化合物Ⅱ-b的过程，利用异硫氰酸酯与含氨基化合物的加成反应制得，优选溶剂丙酮。
化合物Ⅱ-c、Ⅱ-d、Ⅱ-e的制备过程与化合物Ⅱ-b的过程类似，差别在于将4-Boc-氨基哌啶依次替换为N-Boc-4-氨基哌啶、Boc氮杂螺环、Boc氮杂桥环。
由化合物Ⅲ-1制备化合物Ⅲ-2的过程，采用哌嗪与化合物Ⅲ-1的亲核取代反应制得，选用碱为三乙胺，溶剂为四氢呋喃，反应温度回流；由化合物Ⅲ-2制备化合物Ⅲ-3的过程，是硝基还原反应，采用条件为氢气、钯碳还原，溶剂四氢呋喃；由化合物Ⅲ-3制备化合物Ⅲ，是化合物Ⅲ-3与异硫氰酸酯的加成反应，反应溶剂优选丙酮。
由化合物Ⅳ-1制备化合物Ⅳ-2的过程，利用硫光气与取代芳香胺反应，溶剂优先采用四氢呋喃，所用缚酸剂为三乙胺；由化合物Ⅳ-2制备化合物Ⅳ-3的过程，利用异硫氰酸酯与含氨基化合物反应，优选溶剂丙酮，多数产物以固体形式析出；由化合物Ⅳ-3制备化合物Ⅳ是用氨气与硫脲结构反应，优选溶剂四氢呋喃。
所述通式(Ⅰ)化合物的药学上可接受的盐可通过与等化学当量或过量酸、碱，在合适的溶剂或溶剂组合物中反应制得。所述酸包括但不限于氯化氢、溴化氢、硫酸、碳酸、草酸、柠檬酸、琥珀酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、马来酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸或阿魏酸。所述碱式盐包括但不限于可形成钠盐、钾盐、铵盐、钙盐、铝盐、镁盐或其他金属盐，乙二胺、乙醇胺或其他常见碱加成盐。所述溶剂包括但不限于甲醇、乙醇、二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯、甲苯或四氢呋喃，或任意几种混合溶剂。
本发明提供了一种药物组合物，其包括药物有效量的活性组分和药学上可接受的辅料；所述活性组分包括通式(Ⅰ)化合物和药学上可接受的盐中的一种或多种。所述药物组合物中，所述辅料包括药学上可接受的载体、稀释剂和/或赋形剂。
根据治疗目的可将药物组合物制成各种类型的给药单位剂型，如片剂、丸剂、粉剂、液体、悬浮液、乳液、颗粒剂、颗粒剂、胶囊和针剂(溶液或悬浮液)等，优选片剂、胶囊、液体、悬浮液和针剂(溶液或悬浮液)。
本发明所述化合物在临床上的给药方式可采用口服、注射等方式。
一般地，本发明的化合物用于治疗时，人用剂量范围为1-1000mg/天。也可根据剂型的不同和疾病严重程度，使用剂量超出该范围。
本发明还提供了所示通式(Ⅰ)在制备USP8抑制剂中的应用。
本发明还提供通式(Ⅰ)所示化合物在用于治疗USP8介导的免疫抑制相关疾病中的应用。
本发明所述的USP8介导的免疫抑制相关疾病包括癌症、神经系统变性疾病、血液系统疾病、内分泌系统疾病、骨髓增生性疾病、传染病。其中癌症优选但不局限于非小细胞肺癌、细支气管肺泡癌等多种肺癌，乳腺癌、胰腺癌等多种腺癌、多发性骨髓瘤、白血病、黑色素瘤、胶质母细胞瘤；神经系统变性疾病优选但不局限于帕金森症、阿尔兹海默症；血液系统疾病优选但不局限于范可尼贫血；内分泌系统疾病优选但不局限于库欣病；传染病优选但不局限于疱疹、流感。
除非另外说明，在说明书和权利要求中使用的以下术语具有下面讨论的含义：
术语“芳香环”指含有1-6个原子的单环体系，体系含有零个、一个、两个、三个或四个选自N、O或S的环杂原子，其余环原子是C，并具有完全的共轭π电子系统。未取代的芳香环非限制性实例包括苯基、吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、嘧啶、四唑和三嗪。芳香环可以是取代的或未取代的。
属于“芳香稠环”指含有4-14个原子的多环体系，体系含有零个、一个、两个、三个或四个选自N、O或S的环杂原子，其余环原子是C，并具有完全的共轭π电子系统。未取代芳香稠环的非限制性实例包括萘环、蒽环、喹啉、异喹啉、嘌呤和咔唑。
术语“硝基”表示-NO2基团。
术语“氨基”表示-NH2基团。
术语“烷基”表示1-20个碳原子的饱和的脂烃基，包括直链和支链基团。烷基可以是取代的或未取代的。当是取代的烷基时，该取代基优选是一或多个。
术语“烷氧基”表示-O-(未取代的烷基)和-O-(未取代的环烷基)。代表性实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。
术语“卤素”表示氟、氯、溴或碘。
术语“氰基”表示-CN基团。
术语“羧基”表示-COOH基团。
术语“含氮杂环”表示含有3-12个原子的单环或多环体系，体系包含一个、两个、三个或四个N原子，其余原子选自C、O、S原子，其中一个或多个环不具有完全连接的π电子系统。含氮杂环具体非限制性实施例包括哌嗪、甲基哌嗪、高哌嗪、2,6-二甲基哌嗪、吡咯烷、吗啉、哌啶吗啉。
术语“三氟甲基”表示-CF3基团。
术语“磺酰基”表示-SO2-连接基团，代表性实施例包括但不限于磺酸基、甲磺酰基、环丙磺酰基、苯磺酰基、磺酰氨基、磺酰酯基。
术语“芳香甲酰基”表示含有甲酰基的芳香环，芳香环可以是取代或未取代的。具体实施例包括但不限于苯甲酰基、呋喃甲酰基、吲哚甲酰基。
有益效果：
本专利利用高通量筛选及合理药物设计的策略，获取了一类全新的USP8小分子抑制剂，是目前为数不多的几个抑制剂之一，并在生物活性方法也达到了较好的效果，补充了相关领域的研究空白，对于治疗腺癌、肺癌等多种恶性肿瘤有着较好的应用前景和研究价值。
附图说明
图1利用表面等离子共振(SPR)技术证明化合物U31,U10,U51与USP8蛋白的结合。
图2利用Western Blot技术，验证化合物U10和U51抑制USP8对di-ubiquitin的剪切。
图3利用分子对接分析化合物U10的结合模式。
图4利用平板克隆实验验证化合物U10抑制H1975细胞的克隆形成。
具体实施方式
为了进一步阐释本发明，下面给出一系列实施例，这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
实施例1
Figure BDA0002321036750000141
4-氯-2-异硫氰基-1-甲氧基苯(Ⅰ-5)的制备
将化合物Ⅰ-4(2g,12.7mmol)溶于20mL四氢呋喃中，加入3.2mL三乙胺，充分搅拌后，缓慢滴加1.8mL硫光气，逐渐有大量沉淀析出，20min后抽滤，以四氢呋喃洗涤滤饼，该步目的在于除去生成的大量三乙胺盐酸盐，否则将阻碍反应的进一步发生。抽滤后的滤液不加1.6mL三乙胺，并再次缓慢滴加0.9mL硫光气，室温搅拌30min。TLC检测反应，至化合物Ⅰ-4基本耗尽，抽滤后，滤液减压蒸出溶剂。利用硅胶柱层析，纯化的淡黄色固体1.9g，收率75％。
N-(5-氯-2-甲氧基苯基)-N’-(喹啉-6-基)硫脲(U1)的制备
将6-氨基喹啉(0.15g,1mmol)溶于1mL丙酮中，加入化合物Ⅰ-5(0.2g,1mmol)，室温充分搅拌，析出大量白色固体，抽滤，固体以丙酮洗涤，得纯品0.27g，收率76％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.41(s,1H),9.45(s,1H),8.84(s,1H),8.84-8.82(t,J＝4.0Hz,1H),8.33-8.30(d,J＝12.0Hz,1H),8.19-8.14(dd,J1＝3.16Hz,J2＝2.5Hz,2H),8.00-7.97(d,J＝11.9Hz,1H),7.89-7.85(dd,J1＝2.76Hz,J2＝2.76Hz,1H),7.52-7.48(m,1H),7.23-7.09(m,2H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C17H15ClN3OS:344.0619,found:344.0636。
实施例2
N-(5-氯-2-甲氧基苯基)-N’-(1H-吲哚-5-基)硫脲(U2)的制备用1H-吲哚-5-胺(0.13g,1mmol)代替6-氨基喹啉之外，以与化合物U1相同的方法合成得到淡黄色固体0.25g，收率75％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝11.16(s,1H),10.09(s,1H),8.94(s,1H),8.41(s,1H),7.58(s,1H),7.41-7.38(d,J＝12.0Hz,1H),7.15-7.12(d,J＝12.0Hz,2H),7.08-7.02(t,J＝15.5Hz,3H),6.45(s,1H),3.79(s,3H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcdfor C16H15ClN3OS:332.0619,found:332.0623。
实施例3
Figure BDA0002321036750000151
5-氯-2-异硫氰基(Ⅰ-7)的制备
将化合物Ⅰ-6(2g,15.6mmol)溶于20mL四氢呋喃，加入3.1mL三乙胺，充分搅拌后，滴加1.6mL硫光气，室温搅拌。TLC检测反应，至原料不再减少，终止反应。抽滤，滤液减压蒸除溶剂，得红褐色油状物。不需纯化，直接用于下一步反应。
N-(4-氯吡啶-2-甲氧基)-N’-(喹啉-6-基)硫脲(U3)的制备
将6-氨基喹啉(0.2g,1.3mmol)溶于4mL丙酮中，加入化合物Ⅰ-7(0.23g,1.4mmol)，室温搅拌。TLC监控反应进程，至化合物Ⅰ-6耗尽。减压蒸馏整除溶剂，利用硅胶柱层析获得白色固体150mg，收率30％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝13.80(s,1H),11.14(s,1H),8.89-8.88(d,J＝4.0Hz,1H),8.40-8.34(m,3H),8.03(s,2H),7.56-7.52(m,1H),7.40(s,1H),7.28-7.26(d,J＝8Hz,1H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C15H12ClN4S:315.0466,found:315.0468。
实施例4
N-(4-氯吡啶-2-基)-N’-(4-甲氧基苯基)硫脲(U4)的制备
用对甲氧基苯胺(0.2g,1.6mmol)代替6-氨基喹啉之外，以与化合物U3相同的方法合成得到淡黄色固体160mg，收率36％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝13.27(s,1H),10.91(s,1H),8.31-8.29(d,J＝7.4Hz,1H),7.53-7.50(d,J＝11.5Hz,2H),7.36(s,1H),7.23-7.21(d,J＝6.8Hz,1H),6.97-6.94(d,J＝12.0Hz,2H),3.77(s,3H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C13H13ClN3OS:294.0462,found:294.0475。
实施例5
N-(4-氯吡啶-2-基)-N’-(4-硝基苯基)硫脲(U5)的制备
用对硝基苯胺(0.2g,1.5mmol)代替6-氨基喹啉之外，以与化合物U3相同的方法合成得到黄色固体93mg，收率21％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝14.08(s,1H),11.26(s,1H),8.29-8.38(t,J＝8.0Hz,1H),8.28-8.26(d,J＝8.0Hz,2H),8.17-8.14(m,2H),7.39-7.28(t,2H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C12H10ClN4O2S:309.0208,found:309.0200。
实施例6
N-(5-氯-2-甲氧基苯基)-N’-(3-氟苯基)硫脲(U6)的制备
用间氟苯胺(0.1g,0.9mmol)代替6-氨基喹啉之外，以与化合物U1相同的方法合成得到淡黄色固体0.17g，收率61％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝10.29(s,1H),9.40(s,1H),8.11-8.10(d,J＝3.0Hz,1H),7.68-7.64(t,J＝1.1Hz,1H),7.40-7.35(t,J＝9.0Hz,1H),7.29-7.26(d,J＝9.0Hz,1H),7.24-7.20(m,1H),7.11-7.09(d,J＝6.0Hz,1H),7.01-6.95(m,1H),3.86(s,3H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C14H13ClFN2OS:311.0416,found:311.0428。
实施例7
N-(5-氯-2-甲氧基苯基)-N’-(3-甲氧基苯基)硫脲(U7)的制备
用间甲氧基苯胺(0.1g,0.8mmol)代替6-氨基喹啉之外，以与化合物U1相同的方法合成得到淡黄色固体0.16g，收率82％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝10.18(s,1H),9.25(s,1H),8.19-8.18(d,J＝3.0Hz,1H),7.29-7.24(t,J＝6.0Hz,2H),7.21-7.17(m,1H),7.10-7.05(t,J＝9.0Hz,2H),6.76-6.73(m,1H),3.85(s,3H),3.75(s,3H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C15H16ClN2O2S:323.0616,found:323.0621。
实施例8
N-(5-氯-2-甲氧基苯基)-N’-(3-氯-4-氟苯基)硫脲(U8)的制备
用4-氟-3-氯苯胺(0.1g,0.9mmol)代替6-氨基喹啉之外，以与化合物U1相同的方法合成得到淡黄色固体0.12g，收率45％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝10.15(s,1H),9.42(s,1H),8.05-8.04(d,J＝3.0Hz,1H),7.86-7.84(d,J＝6.0Hz,1H),7.42-7.40(d,J＝6.0Hz,2H),7.24-7.21(m,1H),7.09-7.12(d,J＝9.0Hz,1H),3.85(s,3H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C14H12Cl2FN2OS:345.0026,found:345.0058。
实施例9
N-(5-氯-2-甲氧基苯基)-N’-(2-甲氧基苯基)硫脲(U9)的制备
用邻甲氧基苯胺(0.1g,0.8mmol)代替6-氨基喹啉之外，以与化合物U1相同的方法合成得到淡黄色固体0.18g，收率90％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝9.70(s,1H),9.45(s,1H),8.30(s,1H),7.82-7.85(d,J＝9.0Hz,1H),7.22-7.07(m,4H),6.97-6.95(t,J＝1.2Hz,1H),3.85(s,6H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C15H16ClN2O2S:323.0616,found:323.0621。
实施例10
Figure BDA0002321036750000181
N-(4-甲氧基-2-硝基苯基)哌嗪(Ⅱ-2)的制备
将化合物Ⅱ-1(1g,4.31mmol)溶于四氢呋喃中，依次加入哌嗪(0.45g,5.17mmol)、醋酸钯(50mg,0.22mmol)、2-二环己膦基-2'-(N,N-二甲胺)-联苯(0.13g,0.33mmmol)、碳酸钾(0.83g,6.0mmol)，充分搅拌，并利用氮气置换三次，升温回流反应两天。经TLC检测产物存在，且产物不再增多时终止反应。过滤除掉无机盐，滤液减压蒸除溶剂。利用硅胶柱层析纯化，得黄色固体Ⅱ-2(0.1g,0.43mmol)，收率9.8％。
N-(4-甲氧基-2-氨基苯基)哌嗪(Ⅱ-3)的制备
化合物Ⅱ-2(0.1g,0.43mmol)溶于甲醇中，加入10％钯碳15mg，氢气置换三次，室温反应24h，反应液由橙红色逐渐变为紫色，经TLC检测，无原料剩余时终止反应。抽滤，去除钯碳，滤液减压蒸除溶剂，得紫色固体Ⅱ-3(80mg,0.39mmol)，收率90％。
4-(2-氨基-4-甲氧基苯基)-N-(4-硝基苯基)哌嗪-1-硫代甲酰胺(U10)的制备
化合物Ⅱ-3(80mg,0.39mmol)溶于2mL丙酮中，加入1-异硫氰基-4-硝基苯(70mg,0.39mmol)，-20℃反应30min，经TLC检测无原料剩余时，终止反应，减压蒸除溶剂，利用硅胶柱层析获得橙色化合物U10(100mg,0.21mmol)，收率54％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝9.92(s,1H),8.19-8.16(d,J＝9.0Hz,2H),7.63-7.60(d,J＝9.0Hz,2H),6.85-6.82(d,J＝9.0Hz,1H),6.28(s,1H),6.12-6.09(d,J＝9.0Hz,1H),6.28(s,2H),4.09(s,4H),3.63(s,3H),2.81(s,4H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C18H22N5O3S:388.1438,found:388.1439。
实施例11
N-(5-氯-2-甲氧基苯基)-N’-苯基硫脲(U11)的制备
用苯胺(0.1g,1mmol)代替6-氨基喹啉之外，以与化合物U1相同的方法合成得到淡黄色固体0.20g，收率89％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝10.17(s,1H),9.26(s,1H),8.22-8.21(d,J＝3.0Hz,1H),7.55-7.52(d,J＝9.0Hz,2H),7.39-7.34(t,J＝6.0Hz,2H),7.21-7.14(m,2H),7.10-7.07(d,J＝9.0Hz,1H),3.86(s,3H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcdfor C14H14ClN2OS:293.0510,found:293.0514。
实施例12
N-(5-氯-2-甲氧基苯基)-N’-(3-甲氧基苯乙基)硫脲(U12)的制备
用2-(3-甲氧基苯基)乙-1-胺(0.1g,0.7mmol)代替6-氨基喹啉之外，以与化合物U1相同的方法合成得到淡黄色固体0.11g，收率45％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝9.06(s,1H),8.23-8.19(t,J＝6.0Hz,2H),7.26-7.21(t,J＝9.0Hz,1H),7.15-7.12(m,1H),7.06-7.03(d,J＝9.0Hz,1H),6.85-6.79(t,J＝9.0Hz,3H),3.81(s,3H),3.75-3.73(d,J＝6.0Hz,3H),3.70-3.63(m,2H),2.86-2.81(t,J＝6.0Hz,2H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd forC17H20ClN2O2S:351.0929,found:351.0935。
实施例13
Figure BDA0002321036750000191
4-硝基苯基异硫氰酸酯(Ⅰ-9)的制备
将化合物Ⅰ-8(5g,36.2mmol)溶于50mL四氢呋喃中，加入9mL三乙胺，充分搅拌后，缓慢滴加2.1mL硫光气，逐渐有大量沉淀析出，10min后抽滤，以四氢呋喃洗涤滤饼，该步目的在于除去生成的大量三乙胺盐酸盐，否则将阻碍反应的进一步发生。抽滤后的滤液补加9mL三乙胺，并再次缓慢滴加1.5mL硫光气，室温搅拌10min。TLC检测反应，至化合物Ⅰ-8基本耗尽，抽滤后，滤液减压蒸出溶剂。利用硅胶柱层析，纯化的黄色固体5.1g，收率78.2％。
N-(2-甲氧基苯基)-N’-(4-硝基苯基)硫脲(U13)的制备
将邻甲氧基苯胺(0.15g,1.2mmol)溶于2mL丙酮中，加入化合物Ⅰ-9(0.22g,1.2mmol)，室温充分搅拌，析出大量黄色固体，抽滤，固体以丙酮洗涤，得纯品0.34g，收率91％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝10.50(s,1H),9.64(s,1H),8.23-8.20(d,J＝9.0Hz,2H),7.96-7.93(d,J＝9.0Hz,2H),7.79-7.76(t,J＝9.0Hz,1H),7.25-7.20(t,J＝9.0Hz,1H),7.12-7.09(d,J＝9.0Hz,1H),6.99-6.94(t,J＝9.0Hz,1H),3.85(s,3H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C14H14N3O3S:304.0750,found:304.0742。
实施例14
N-(3-甲氧基苯基)-N’-(4-硝基苯基)硫脲(U14)的制备
用间甲氧基苯胺(0.1g,0.80mmol)代替邻甲氧基苯胺之外，以与化合物U13相同的方法合成得到(3-甲氧基苯基)-3-(4-硝基苯基)硫脲(U14)，黄色固体0.22g，收率89％。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝10.39(s,1H),10.29(s,1H),8.23-8.20(d,J＝9.0Hz,2H),7.85-7.82(d,J＝9.0Hz,2H),7.30-7.25(t,J＝6.0Hz,1H),7.18(s,1H),7.06-7.04(d,J＝6.0Hz,1H),6.78-6.75(m,1H),3.75(s,1H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C14H14N3O3S:304.0750,found:304.0750。
实施例15
N-(3-甲氧基苯乙基)-N’-(4-硝基苯基)硫脲(U15)的制备
用2-(3-甲氧基苯基)乙-1-胺(0.1g,0.66mmol)代替邻甲氧基苯胺之外，以与化合物U13相同的方法合成得到1-(3-甲氧基苯乙基)-3-(4-硝基苯基)硫脲(U15)，黄色固体0.15g，收率68％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝10.19(s,1H),8.30(s,1H),8.14-8.18(d,J＝12.0Hz,2H),7.77-7.74(d,J＝9.0Hz,2H),7.28-7.23(t,J＝6.0Hz,1H),6.87-6.80(m,3H),3.76(s,5H),2.91-2.86(t,J＝9.0Hz,2H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd forC16H18N3O3S:332.1063,found:332.1063。
实施例16
N-(4-氯-3-氟苯基)-N’-(4-硝基苯基)硫脲(U16)的制备
用3-氟-4-氯苯胺(0.1g,0.69mmol)代替邻甲氧基苯胺之外，以与化合物U13相同的方法合成得到黄色固体0.14g，收率62％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝10.53(s,1H),10.33(s,1H),8.24-8.21(d,J＝9.0Hz,2H),7.84-7.78(m,3H),7.45-7.43(d,J＝6.0Hz,2H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C13H10ClFN3O2S:326.0161,found:326.0157。
实施例17
N-(3-氟苯基)-N’-(4-硝基苯基)硫脲(U17)的制备
用3-氟苯胺(0.1g,0.91mmol)代替实施例13中的邻甲氧基苯胺之外，以与化合物U13相同的方法合成得到黄色固体0.17g，收率65％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝10.52(s,1H),10.42(s,1H),8.24-8.21(d,J＝9.0Hz,2H),7.85-7.82(d,J＝9.0Hz,2H),7.55-7.51(d,J＝12.0Hz,1H),7.44-7.37(dd,J1＝6.0Hz,J2＝6Hz,1H),7.30-7.27(d,J＝9.0Hz,1H),7.04-6.97(m,1H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M-H]-.Calcd for C13H9FN3O2S:290.0405,found:290.0431。
实施例18
N-(4-氯-2-吡啶基)-4-(4-硝基苯基)哌嗪-1-硫代甲酰胺(U20)的制备
用1-(4-硝基苯基)哌嗪(0.2g,0.97mmol)代替6-氨基喹啉之外，以与化合物U3相同的方法合成得到淡黄色固体120mg，收率33％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝10.11-10.14(t,J＝3.0Hz,1H),8.30-8.28(d,J＝6.0Hz,1H),8.11-8.08(t,J＝3.0Hz,2H),7.80(s,1H),7.120-7.18(d,J＝6.0Hz,1H),7.01-6.97(d,J＝12.0Hz,2H),4.08-4.07(d,J＝3.0Hz,4H),3.68-3.65(t,J＝3Hz,4H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M-H]-.Calcd for C16H15ClN5O2S:376.0640,found:376.0638。
实施例19
N-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(4-硝基苯基)哌嗪-1-硫代甲酰胺(U21)的制备
用1-(4-硝基苯基)哌嗪(0.2g,0.97mmol)代替6-氨基喹啉之外，以与化合物U1相同的方法合成得到黄色固体0.17g，收率87％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝8.92(s,1H),8.10-8.07(d,J＝11.1Hz,2H),7.36(s,1H),7.25-7.22(d,J＝11.4Hz,1H),7.07-6.97(m,3H),4.08(s,4H),3.77(s,3H),3.66(s,4H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd forC18H20ClN4O3S:407.0939,found:407.0950。
实施例20
N,1,4-双(4-硝基苯基)哌嗪-1-硫代甲酰胺(U22)的制备
用1-(4-硝基苯基)哌嗪(0.1g,0.48mmol)代替邻甲氧基苯胺之外，以与化合物U13相同的方法合成得到黄色固体0.12g，收率64％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝9.91(s,1H),8.21-8.18(d,J＝9.0Hz,2H),8.12-8.09(d,J＝9.0Hz,2H),7.68-7.65(d,J＝9.0Hz,2H),7.02-6.99(d,J＝9.0Hz,2H),4.12-4.10(d,J＝6.0Hz,4H),3.71-3.68(t,J＝3.0Hz,4H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C17H18N5O4S:388.1074,found:388.1065。
实施例21
4-环己基-N-(4-硝基苯基)哌嗪-1-硫代甲酰胺(U23)的制备
用1-环己基哌嗪(0.1g,0.60mmol)代替邻甲氧基苯胺之外，以与化合物U13相同的方法合成得到黄色固体0.14g，收率68％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝9.84(s,1H),8.18-8.15(d,J＝9.0Hz,2H),7.60-7.58(d,J＝9.0Hz,2H),3.88(s,4H),2.57(s,4H),2.30-2.28(d,J＝6.0Hz,1H),1.75(s,4H),1.18-1.24(t,J＝9.0Hz,6H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C17H25N4O2S:349.1693,found:349.1699。
实施例22
N-(4-硝基苯基)-4-苯基哌嗪-1-硫代甲酰胺(U24)的制备
用1-苯基哌嗪(0.1g,0.62mmol)代替邻甲氧基苯胺之外，以与化合物U13相同的方法合成得到黄色固体0.14g，收率66％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝9.95(s,1H),8.20-8.17(d,J＝9.0Hz,2H),7.65-7.62(d,J＝9.0Hz,2H),7.28-7.25(d,J＝9.0Hz,2H),7.00-6.97(d,J＝9.0Hz,2H),6.85-6.80(m,1H),4.08(s,4H),3.28(s,4H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C17H19N4O2S:343.1223,found:343.1219。
实施例23
N-(4-硝基苯基)-4-(吡啶-2-基)哌嗪-1-硫代甲酰胺(U25)的制备
用1-(吡啶-2-基)哌嗪(0.1g,0.61mmol)代替邻甲氧基苯胺之外，以与化合物U13相同的方法合成得到黄色固体0.15g，收率66％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝9.91(s,1H),8.20-8.14(m,1H),7.96(s,1H),7.66(s,1H),7.63-7.60(t,J＝6.0Hz,1H),7.58-7.55(d,J＝9.0Hz,1H),6.88-6.85(d,J＝9.0Hz,1H),6.71-6.68(t,J＝9.0Hz,1H),4.07-4.04(t,J＝3.0Hz,4H),3.68-3.64(d,J＝6.0Hz,4H),2.90(s,2H),2.74(s,2H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C16H18N5O2S:344.1176,found:344.1173。
实施例24
N-(4-硝基苯基)-4-(嘧啶-2-基)哌嗪-1-硫代甲酰胺(U26)的制备
用2-(哌嗪-1-基)嘧啶(0.1g,0.61mmol)代替邻甲氧基苯胺之外，以与化合物U13相同的方法合成得到黄色固体0.15g，收率66％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝9.92(s,1H),8.42-8.41(d,J＝3.0Hz,2H),8.20-8.17(d,J＝9.0Hz,2H),7.66-7.63(d,J＝9.0Hz,2H),6.71-6.70(d,J＝3.0Hz,1H),4.05-3.87(d,8H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd forC15H17N6O2S:345.1128,found:345.1123。
实施例25
4-苯甲酰基-N-(4-硝基苯基)哌嗪-1-硫代甲酰胺(U27)的制备
用苯基(哌嗪-1-基)甲酮(0.1g,0.53mmol)代替邻甲氧基苯胺之外，以与化合物U13相同的方法合成得到黄色固体0.11g，收率56％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝9.93(s,1H),8.20-8.17(d,J＝9.0Hz,2H),7.64-7.61(d,J＝9.0Hz,2H),7.48(s,5H),3.33(s,8H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C18H19N4O3S:371.1172,found:371.1169。
实施例26
4-(2-氰基苯基)-N-(4-硝基苯基)哌嗪-1-硫代甲酰胺(U28)的制备
用2-(哌嗪-1-基)苄腈(0.1g,0.53mmol)代替邻甲氧基苯胺之外，以与化合物U13相同的方法合成得到黄色固体0.13g，收率66％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝9.96-9.95(d,J＝3.0Hz,1H),8.20-8.17(d,J＝9.0Hz,2H),7.77-7.74(m,1H),7.66-7.61(m,3H),7.24-7.21(d,J＝9.0Hz,1H),7.17-7.14(d,J＝9.0Hz,2H),4.13-4.12(m,4H),3.33-3.30(t,J＝6.0Hz,4H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C18H18N5O2S:368.1176,found:368.1179。
实施例27
4-(4-氟苯基)-N-(4-硝基苯基)哌嗪-1-硫代甲酰胺(U29)的制备
用1-(4-氟苯基)哌嗪(0.1g,0.56mmol)代替邻甲氧基苯胺之外，以与化合物U13相同的方法合成得到黄色固体0.11g，收率55％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝9.93(s,1H),8.19-8.16(d,J＝9.0Hz,2H),7.64-7.61(d,J＝9.0Hz,2H),7.12-7.06(t,J＝9.0Hz,2H),7.03-7.00(d,J＝6.0Hz,2H),4.08(s,4H),3.23-3.22(d,J＝3.0Hz,4H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M-H]-.Calcd for C17H16FN4O2S:359.0983,found:359.1014。
实施例28
4-(双(4-氟苯基)甲基)-N-(4-硝基苯基)哌嗪-1-硫代甲酰胺(U30)的制备
用1-(二(4-氟苯基)甲基)哌嗪(0.1g,0.35mmol)代替邻甲氧基苯胺之外，以与化合物U13相同的方法合成得到黄色固体0.16g，收率92％。1H NMR(400MHz,Acetone):δ＝9.12(s,1H),8.18-8.15(m,2H),7.67-7.63(m,2H),7.13-7.07(m,4H),4.50(s,1H),4.07-4.04(t,J＝6.9Hz,4H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]-.Calcd for C24H23F2N4O2S:469.1504,found:469.1501。
实施例29
5-(甲磺酰基)-N-(4-硝基苯基)哌嗪-1-硫代甲酰胺(U31)的制备
用甲基磺酰哌嗪(0.1g,0.61mmol)代替邻甲氧基苯胺之外，以与化合物U13相同的方法合成得到淡黄色固体0.14g，收率67％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝9.99(s,1H),8.20-8.17(t,J＝1.9Hz,2H),7.64-7.61(d,J＝9.0Hz,2H),4.05(s,4H),3.24(s,4H),2.95(s,3H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C12H17N4O4S2:345.0686,found:345.0669。
实施例30
4-(呋喃-2-羰基)-N-(4-硝基苯基)哌嗪-1-硫代甲酰胺(U32)的制备
用呋喃-2-基(哌嗪-1-基)甲酮(0.1g,0.56mmol)代替邻甲氧基苯胺之外，以与化合物U13相同的方法合成得到淡黄色固体0.11g，收率57％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝9.91(s,1H),8.20-8.17(d,J＝9.0Hz,2H),7.88(s,1H),7.66-7.63(d,J＝9.0Hz,2H),7.09-7.08(d,J＝3.0Hz,1H),6.66(s,1H),4.04(s,4H),3.84(s,4H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C16H17N4O4S:361.0965,found:361.0959。
实施例31
4-(4-甲氧基-2-硝基苯基)-N-(4-硝基苯基)哌嗪-1-硫代甲酰胺(U33)
用1-(4-甲氧基-2-硝基苯基)哌嗪(0.1g,0.42mmol)代替邻甲氧基苯胺之外，以与化合物U13相同的方法合成得到淡黄色固体0.14g，收率80％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝9.92(d,J＝2.3Hz,1H),8.20-8.17(d,J＝9.0Hz,2H),7.64-7.61(d,J＝9.0Hz,2H),7.49-7.43(m,2H),7.26-7.23(t,J＝9.0Hz,1H),4.02(d,J＝2.1Hz,4H),3.81(s,3H),3.03(s,4H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C18H20N5O5S:418.1180,found:418.1175。
实施例32
N-(4-硝基苯基)-4-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)哌嗪-1-硫代甲酰胺(U34)的制备
用1-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)哌嗪(0.1g,0.43mmol)代替邻甲氧基苯胺之外，以与化合物U13相同的方法合成得到淡黄色固体0.08g，收率42％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝9.88(s,1H),8.20-8.17(d,J＝9.0Hz,2H),7.83-7.78(t,J＝9.0Hz,1H),7.67-7.64(d,J＝9.0Hz,2H),7.16-7.08(dd,J1＝9.0Hz,J2＝9.0Hz,2H),4.10-4.04(m,4H),3.76-3.73(m,4H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C17H17F3N5O2S:412.1050,found:412.1062。
实施例33
1-(4-((4-硝基苯基)氨基甲酰基)哌嗪-1-基)苯甲酸(U35)的制备
用2-(哌嗪-1-基)苯甲酸钠(0.1g,0.44mmol)代替邻甲氧基苯胺之外，以与化合物U13相同的方法合成得到淡黄色固体0.05g，收率27％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝10.03(s,1H),8.24-8.21(d,J＝9.0Hz,2H),7.98-7.95(d,J＝9.0Hz,1H),7.69-7.58(m,4H),7.38-7.33(d,J＝9.0Hz,1H),4.17(s,4H),3.21(s,4H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcdfor C18H19N4O4S:387.1122,found:387.1147。
实施例34
4-(双(4-氟苯基)甲基)-N-(5-氯-2-甲氧基苯基)哌嗪-1-硫代甲酰胺(U36)的制备
用1-(二(4-氟苯基)甲基)哌嗪(0.1g,0.35mmol)代替6-氨基喹啉之外，以与化合物U1相同的方法合成得到淡黄色固体0.15g，收率91％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝8.80(s,1H),7.49-7.45(m,4H),7.30-7.29(d,J＝3.0Hz,1H),7.24-7.13(m,5H),7.05-7.02(d,J＝9.0Hz,1H),3.90(s,4H),2.36-2.33(t,J＝3.0Hz,4H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcdfor C25H25ClF2N3OS:488.1369,found:488.1334。
实施例35
N-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(呋喃-2-羰基)哌嗪-1-硫代甲酰胺(U37)的制备
用呋喃-2-基(哌嗪-1-基)甲酮(0.1g,0.56mmol)代替6-氨基喹啉之外，以与化合物U1相同的方法合成得到淡黄色固体0.09g，收率47％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝8.92(s,1H),7.88(t,J＝2.1Hz,1H),7.36-7.35(d,J＝3.0Hz,1H),7.27-7.23(m,1H),7.08-7.05(m,2H),6.67-6.65(m,1H),4.03-4.00(m,4H),3.78(s,4H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C17H19ClN3O3S:380.0830,found:380.0805。
实施例36
N-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(吡啶-2-基)哌嗪-1-硫代甲酰胺(U38)的制备
用1-(吡啶-2-基)哌嗪(0.1g,0.61mmol)代替6-氨基喹啉之外，以与化合物U1相同的方法合成得到淡黄色固体0.12g，收率54％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝8.95(s,1H),8.15-8.14(m,2H),7.60-7.55(m,1H),7.35-7.34(d,J＝4.0Hz,1H),7.27-7.24(m,1H),7.08-7.05(d,J＝12.0Hz,1H),6.86-6.84(d,J＝8.0Hz,1H),6.70-6.67(m,1H),4.05-4.02(t,J＝8.0Hz,4H),3.78(s,3H),3.64-3.62(t,J＝4.0Hz,4H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C17H20ClN4OS:363.1041,found:363.1015。
实施例37
N-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(嘧啶-2-基)哌嗪-1-硫代甲酰胺(U39)的制备
用2-(哌嗪-1-基)嘧啶(0.1g,0.61mmol)代替6-氨基喹啉之外，以与化合物U1相同的方法合成得到淡黄色固体0.12g，收率51％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝8.96(s,1H),8.42-8.41(d,J＝4.0Hz,2H),7.34(s,1H),7.27-7.24(m,1H),7.08-7.05(d,J＝12.0Hz,1H),6.71-6.68(t,J＝8.0Hz,1H),4.02-4.01(m,4H),3.86-3.78(m,4H),3.36(s,3H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C16H19ClN5OS:364.0993,found:364.0970。
实施例38
N-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(4-氟苯基)哌嗪-1-硫代甲酰胺(U40)的制备
用1-(4-氟苯基)哌嗪(0.1g,0.56mmol)代替6-氨基喹啉之外，以与化合物U1相同的方法合成得到淡黄色固体0.12g，收率59％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝8.99(s,1H),7.32-7.31(d,J＝4.0Hz,1H),7.26-7.24(m,1H),7.11-7.05(m,3H),7.03-6.99(m,2H),4.06-4.04(t,J＝4Hz,4H),3.77(s,3H),3.19-3.17(t,J＝4.0Hz,4H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C18H20ClFN3OS:380.0994,found:380.0970。
实施例39
4-苯甲酰基-N-(4-氯吡啶-2-基)哌嗪-1-硫代甲酰胺(U41)的制备
用苯基(哌嗪-1-基)甲酮(0.1g,0.53mmol)代替6-氨基喹啉之外，以与化合物U3相同的方法合成得到淡黄色固体0.12g，收率58％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.18(s,1H),8.28-8.27(d,J＝4.0Hz,1H),7.74(s,1H),8.03(s,2H),7.47(s,5H),7.19-7.18(d,J＝4Hz,1H),4.01-3.99(d,J＝8.0Hz,4H),3.92(s,2H),3.72(s,2H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C17H18ClN4OS:361.0884,found:361.0877。
实施例40
N-(4-氯吡啶-2-基)-4-(呋喃-2-羰基)哌嗪-1-硫代甲酰胺(U42)的制备
用呋喃-2-基(哌嗪-1-基)甲酮(0.1g,0.56mmol)代替6-氨基喹啉之外，以与化合物U3相同的方法合成得到淡黄色固体0.13g，收率62％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.16(s,1H),8.29-8.28(d,J＝4.0Hz,1H),7.89-7.88(d,J＝4.0Hz,1H),7.77-7.76(d,J＝4.0Hz,1H),7.20-7.18(dd,J1＝4.0Hz,J2＝3.6Hz 1H),7.08-7.07(t,J＝4Hz,1H),6.67-6.65(m,1H),4.00(s,4H),3.82-3.80(d,J＝4.0Hz,4H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcdfor C15H16ClN4O2S:351.0677,found:351.0669。
实施例41
N-(4-氯吡啶-2-基)-4-(4-氟苯基)哌嗪-1-硫代甲酰胺(U43)的制备
用1-(4-氟苯基)哌嗪(0.1g,0.56mmol)代替6-氨基喹啉之外，以与化合物U3相同的方法合成得到淡黄色固体0.14g，收率66％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝10.20(s,1H),8.32-8.30(d,J＝6.0Hz,1H),7.77(s,1H),7.22-7.03(m,5H),4.06(s,4H),3.88-3.22(d,4H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M-H]-.Calcd for C16H15ClFN4S:349.0695,found:349.0712。
实施例42
N-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-(4-硝基苯基)哌嗪-1-硫代甲酰胺(U44)的制备
用1-(4-硝基苯基)哌嗪(0.1g,0.48mmol)代替6-氨基喹啉之外，以与化合物U3相同的方法合成得到淡黄色固体0.13g，收率69％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝8.98(s,1H),8.14-8.11(d,J＝9.0Hz,2H),7.37-7.36(d,J＝3.0Hz,1H),7.28-7.25(m,1H),7.10-7.01(dd,J1＝9.0Hz,J2＝9.0Hz 3H),4.11(s,4H),3.79-3.69(d,3H),3.39(s,4H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd forC18H19ClN4O3S:407.0939,found:407.0928。
实施例43
Figure BDA0002321036750000281
2-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(Ⅱ-5)的制备
将化合物Ⅱ-4(0.2g,0.88mmol)溶于3mL四氢呋喃中，加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(0.16g,0.88mol)，充分搅拌，缓慢加入三乙胺(0.27g,2.65mmol)。氮气置换三次，升温至四氢呋喃回流反应三小时。TLC监测反应进程，终止反应后，抽滤，将滤液减压蒸除溶剂。所得固体，加入5mL石油醚室温搅拌30min，抽滤，得黄白色中间体Ⅱ-2(0.25g,0.67mmol)，收率76％。
2-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷(Ⅱ-6)的制备
将中间体Ⅱ-5(0.25g,0.67mmol)溶于2mL 1,4-二氧六环，加入2mL 4mol/L的盐酸水溶液，室温搅拌6小时。TLC监控至中间体Ⅱ-5全部耗竭，即可终止反应。后处理时，利用冰盐浴为反应液降温，使其温度降至0℃以下，滴加饱和碳酸钠水溶液调节PH＝8，DCM萃取三次，合并有机层，以无水硫酸钠干燥，抽滤，将滤液减压蒸除溶剂，得黄白色固体Ⅱ-3(0.11g,0.41mmol)，收率60％。
(4-硝基苯基)(2-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)甲硫酮(U45)的制备
将中间体Ⅱ-6(0.11g,0.41mmol)溶于2mL丙酮中，加入1-异硫氰基-4-硝基苯(73mg,0.41mmol)，室温搅拌30min。TLC监控反应，至中间体Ⅱ-6全部耗尽，终止反应，减压蒸除溶剂。利用硅胶柱层析分离，得黄色固体U59(26mg,0.06mol)，收率14％。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ＝8.25-8.23(d,J＝6.0Hz,2H),7.62-7.57(t,J＝9.0Hz,1H),7.36(s,1H),7.26(s,2H),7.01-6.99(d,J＝6.0Hz,1H),6.49-6.46(d,J＝9.0Hz,1H),3.91(s,8H),2.03-2.02(d,J＝3.0Hz,4H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C20H21F3N5O2S:452.1363,found:452.1376。
实施例44
N-(4-硝基苯基)-7-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-硫代甲酰胺(U46)的制备
用2,7-二氮杂螺[叔丁基][4.4]壬烷-2-羧酸叔丁酯(0.16g,0.88mmol)代替2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯之外，以与化合物U43相同的方法合成得到淡黄色固体45mg，收率17％。1H NMR(300MHz,Acetone):δ＝8.79(s,1H),8.21-8.17(m,2H),7.95-7.91(m,2H),7.74-7.69(t,J＝9.0Hz,1H),6.99-6.96(d,J＝9.0Hz,1H),6.76-6.73(d,J＝9.0Hz,1H),4.10-3.83(m,4H),3.68-3.53(m,4H),2.22-2.16(m,4H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C20H21F3N5O2S:452.1363,found:452.1367。
实施例45
N-(5-氯-2-甲氧基苯基)-2-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-硫代甲酰胺(U47)的制备
用4-氯-2-异硫氰基-1-甲氧基苯(70mg,0.35mmol)代替1-异硫氰基-4-硝基苯之外，以与化合物U43相同的方法合成得到白色固体38mg，收率15％。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ＝7.87(s,1H),7.61-7.58(d,J＝9.0Hz,1H),7.50(s,1H),7.08-7.00(m,2H),6.87-6.84(d,J＝9.0Hz,1H),6.50-6.47(d,J＝9.0Hz,1H),3.92(s,12H),2.02-2.01(d,J＝3.0Hz,4H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C21H23ClF3N4OS:471.1228,found:471.1229。
实施例46
N-(5-氯-2-甲氧基苯基)-7-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-硫代甲酰胺(U48)
分别用2,7-二氮杂螺[叔丁基][4.4]壬烷-2-羧酸叔丁酯(0.16g,0.88mmol)代替2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯，4-氯-2-异硫氰基-1-甲氧基苯(70mg,0.35mmol)代替1-异硫氰基-4-硝基苯之外，以与化合物U43相同的方法合成得到白色固体40mg，收率16％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝8.49(s,1H),7.77-7.71(d,J＝9.0Hz,1H),7.61(s,1H),7.26-7.23(d,J＝9.0Hz,1H),7.09-7.06(d,J＝9.0Hz,1H),7.02-6.99(d,J＝9.0Hz,1H),6.81-6.78(d,J＝9.0Hz,1H),3.81(s,7H),3.56(s,2H),3.47(s,2H),2.12-2.02(m,4H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C21H23ClF3N4OS:471.1228,found:471.1221。
实施例47
N-(4-硝基苯基)-5-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-硫代甲酰胺(U49)的制备
用2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸叔丁酯(0.17g,0.88mmol)代替2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯之外，以与化合物U43相同的方法合成得到白色固体52mg，收率24％。1H NMR(300MHz,Acetone):δ＝8.18-8.15(d,J＝9.0Hz,2H),7.91-7.87(m,2H),7.77-7.72(t,J＝6.0Hz,1H),7.03-7.01(d,J＝6.0Hz,1H),6.85-6.82(d,J＝9.0Hz,1H),4.08-4.06(d,J＝6.0Hz,1H),3.98-3.95(t,J＝1.2Hz,1H),3.86-3.69(m,2H),2.84-2.81(d,J＝9.0Hz,4H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C18H17F3N5O2S:424.1050,found:424.1054。
实施例48
N-(5-氯-2-甲氧基苯基)-5-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-硫代甲酰胺(U50)的制备
分别用2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸叔丁酯(0.17g,0.88mmol)代替2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯，4-氯-2-异硫氰基-1-甲氧基苯(70mg,0.35mmol)代替1-异硫氰基-4-硝基苯之外，以与化合物U43相同的方法合成得到白色固体43mg，收率17％。1HNMR(300MHz,Acetone):δ＝8.33-8.36(m,1H),7.77-7.72(t,J＝9.0Hz,1H),7.12-7.08(m,1H),7.03-6.99(m,2H),6.85-6.82(d,J＝9.0Hz,1H),3.95-3.91(t,J＝3.0Hz,1H),3.84(s,3H),3.80(s,1H),3.76-3.68(m,2H),2.84-2.81(d,J＝9.0Hz,3H),2.21-2.19(d,J＝6.0Hz,2H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C19H19ClF3N4OS:443.0915,found:443.0926。
实施例49
1-(4-硝基苯基)-3-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)硫脲(U51)的制备
用哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(0.18g,0.88mmol)代替2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯之外，以与化合物U43相同的方法合成得到白色固体44mg，收率21％。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ＝9.30(s,1H),8.37-8.23(m,3H),8.05(s,1H),7.85-7.82(d,J＝9.0Hz,2H),7.76-7.66(t,J＝9.0Hz,1H),7.55-7.52(d,J＝9.0Hz,1H),4.80(s,1H),3.97-3.94(d,J＝9.0Hz,2H),3.78-3.74(d,J＝12.0Hz,2H),2.59-2.55(d,J＝12.0Hz,2H),2.32-2.29(d,J＝9.0Hz,2H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C18H19F3N5O2S:426.1206,found:426.1211。
实施例50
1-(5-氯-2-甲氧基苯基)-3-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)硫脲(U52)的制备
分别用哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(0.18g,0.88mmol)代替2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯，4-氯-2-异硫氰基-1-甲氧基苯(70mg,0.35mmol)代替1-异硫氰基-4-硝基苯之外，以与化合物U43相同的方法合成得到白色固体37mg，收率17％。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ＝7.63-7.57(t,J＝9.0Hz,2H),7.42(s,1H),7.24-7.21(d,J＝9.0Hz,1H),7.01-6.89(m,3H),6.05-6.03(d,J＝6.0Hz,1H),4.63(s,1H),4.37-4.33(d,J＝12.0Hz,2H),3.90(s,3H),3.20-3.12(t,J＝9.0Hz,2H),2.67(s,2H),2.30-2.26(d,J＝12.0Hz,2H)ppm；HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C19H21ClF3N4OS:445.1071,found:445.1066。
实施例51：表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)实验证实化合物U31,U10,U51与USP8蛋白结合
SPR实验在Biacore T200仪器上，于25℃进行(GE Healthcare)。USP8蛋白用醋酸钠共价偶联至CM5芯片上。化合物用HBS-EP+缓冲液稀释一系列浓度，进行动力学实验。化合物与USP8蛋白的平衡解离常数KD值经Biacore T200数据分析软件计算求得。如图1，显示了化合物U31,U10,U51与USP8蛋白能直接结合，其平衡解离常数KD为31.5μM,7.4μM和8.6μM。
实施例52：Di-Ub二聚泛素剪切实验证明化合物U10,U51可以抑制USP8对二聚泛素的剪切活性。
利用获得的野生型USP8蛋白，将不同化合物与蛋白混合，常温孵育15分钟，加入Di-Ub底物。37℃反应1小时。利用Western blot检测Di-Ub降解情况。Di-Ub的降解程度反应了蛋白的酶活强弱。如图2，显示了化合物U10,U51可以浓度依赖的抑制USP8蛋白对二聚泛素的剪切。
实施例53：化合物与USP8蛋白的结合模式分析
为了更好理解化合物与USP8蛋白口袋相互作用的细节信息，本发明者使用GLIDE软件，选择其中代表性化合物U10，对其与USP8蛋白进行分子对接，分析其结合模式。分析结果如图3显示，化合物U10占据USP8与ubiquitin结合口袋。其中，化合物U10可能与USP8蛋白S953,A948,Q927与K1012形成氢键相互作用，与H914和H881形成静电相互作用，与M950,L874,Y951,F949,P955,F971,I998 F930,形成疏水相互作用。
实施例54：细胞存活实验测定化合物对H1975细胞系和GH3细胞系增殖抑制作用。
我们选择H1975细胞株和GH3细胞株，选择多个重点化合物处理细胞，进行细胞增殖抑制的检测。细胞均以3×104mL-1的密度培养于96孔透明板中，用化合物或相同体积的DMSO处理细胞，处理3天后，利用CellTiter-Glo试剂，用Envision多孔微型板检测仪测定各个孔的荧光强度，指示细胞活力。半增殖抑制浓度GI50值经GraphPad Prism 5.0软件拟合求得。多个化合物在H1975细胞上表现出了较好的增殖抑制效果，见表。
实施例55：细胞克隆形成实验测定化合物对H1975细胞系克隆形成的抑制作用
我们选择H1975细胞株进行克隆形成实验检测。细胞以300个/孔密度培养在六孔板中。化合物U10按照图4浓度稀释，DMSO作为对照。12天以后加入4％多聚甲醛进行固定，加入0.1％结晶紫进行染色。利用ImageJ软件计数克隆个数。结果显示U10可以浓度依赖的抑制H1975细胞的克隆形成。
表1 H1975的增殖
Compound GI<sub>50</sub>(μM)
U51 6.01
U10 82.04
U53 >100
U52 24.93
U50 21.35
表2 GH3的增殖
Compound GI<sub>50</sub>(μM)
U51 37.03
U10 >100
U53 >100
U52 >100
U50 >100

Claims (9)

1.通式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0002321036740000011
其中，R1片段选自于硝基、氨基、烷基、烷氧基、卤素、氰基、羧基、含氮杂环、三氟甲基、磺酰基中的一个或多个；X为C或N；
当R2为H时，R3选自于未取代、单取代或多取代芳香环、芳香稠环、
Figure FDA0002321036740000012
所述单取代或多取代的取代基为硝基、氨基、烷基、烷氧基、卤素、氰基、羧基、含氮杂环、三氟甲基、磺酰基中的一个或多个；
当R2、R3均不为H时，由R2、R3共同构成的取代氮杂脂肪环，上述脂肪环选自哌嗪环、哌啶胺环、氮杂螺环、氮杂桥环，所述取代氮杂脂肪环的取代基选自磺酰基团、芳香环、芳香稠环或
Figure FDA0002321036740000013
以上结构中，R基团选自于硝基、氨基、烷基、烷氧基、卤素、氰基、羧基、含氮杂环、三氟甲基、磺酰基中的一个或多个。
2.根据权利要求1所述的通式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，取代氮杂脂肪环包括如下结构：
Figure FDA0002321036740000014
Figure FDA0002321036740000021
其中，n1、n2、m1、m2各自独立选自1、2或3；i、h各自独立选自0、1或2，g选自1、2、3；其中R基团选自于硝基、氨基、烷基、烷氧基、卤素、氰基、羧基、含氮杂环、三氟甲基、磺酰基中的一个或多个。
3.根据权利要求1或2所述的通式(Ⅰ)的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述药学上可接受的盐，是指通式(Ⅰ)的化合物与药学上可接受的酸形成的酸加成盐或通式(Ⅰ)的化合物与药学上可接受的碱形成碱加成盐，所述酸包括：氯化氢、溴化氢、硫酸、碳酸、草酸、柠檬酸、琥珀酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、马来酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸或阿魏酸；所述碱加成盐包括：钠盐、钾盐、铵盐、钙盐、铝盐、镁盐，或与乙二胺、乙醇胺形成的碱加成盐。
4.根据权利要求1或2所述的通式(Ⅰ)的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，包括如下结构的化合物：
Figure FDA0002321036740000022
Figure FDA0002321036740000031
Figure FDA0002321036740000041
Figure FDA0002321036740000051
Figure FDA0002321036740000061
Figure FDA0002321036740000071
Figure FDA0002321036740000081
5.通式(I)所示化合物的制备方法：
(1)当R2为H时：由化合物Ⅰ-1制备化合物Ⅰ-2的过程，利用硫光气与取代芳香胺反应，在碱性条件下反应得到；由化合物Ⅰ-2制备化合物Ⅰ的过程，利用异硫氰酸酯与含氨基化合物反应得到；
(2)当R2和R3共同构成氮杂脂肪环时：由化合物Ⅱ-1制备化合物Ⅱ-2a、Ⅱ-2b、Ⅱ-2c、Ⅱ-2d、Ⅱ-2e的过程，有卤代芳烃与氮杂脂肪环在碱性条件制得；由化合物Ⅱ-2b、Ⅱ-2c、Ⅱ-2d、Ⅱ-2e分别制备化合物Ⅱ-3b、Ⅱ-3c、Ⅱ-3d、Ⅱ-3e的过程，是其在酸性条件脱出保护基获得；由化合物Ⅱ-2a、Ⅱ-3b、Ⅱ-3c、Ⅱ-3d、Ⅱ-3e制备化合物Ⅱ-a、Ⅱ-b、Ⅱ-c、Ⅱ-d、Ⅱ-e的过程，是其与异硫氰酸酯的加成反应获得。
6.一种药物组合物，其特征在于，包括药物有效量的活性组分和药学上可接受的辅料；所述活性组分包括权利要求1所述的通式(Ⅰ)化合物和药学上可接受的盐中的一种或多种。
7.权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐在制备USP8抑制剂中的应用。
8.权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗USP8介导的免疫抑制的相关疾病药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述USP8介导的免疫抑制的相关疾病包括癌症、病毒感染、神经变性疾病、范可尼贫血或库欣病。
CN201911297842.7A 2019-12-17 2019-12-17 Usp8抑制剂及其制备方法与应用 Active CN111138358B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911297842.7A CN111138358B (zh) 2019-12-17 2019-12-17 Usp8抑制剂及其制备方法与应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911297842.7A CN111138358B (zh) 2019-12-17 2019-12-17 Usp8抑制剂及其制备方法与应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111138358A true CN111138358A (zh) 2020-05-12
CN111138358B CN111138358B (zh) 2023-04-18

Family

ID=70518528

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201911297842.7A Active CN111138358B (zh) 2019-12-17 2019-12-17 Usp8抑制剂及其制备方法与应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111138358B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113134090A (zh) * 2021-03-26 2021-07-20 武汉大学中南医院 一种抗肿瘤药物组合物
CN114957182A (zh) * 2022-03-30 2022-08-30 中国药科大学 一类含有黄酮骨架结构的usp8抑制剂及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017157882A1 (en) * 2016-03-14 2017-09-21 Université Catholique de Louvain Serine biosynthetic pathway inhibitors
CN110352063A (zh) * 2016-11-08 2019-10-18 卡里塞拉生物科学股份公司 精氨酸酶抑制剂组合疗法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017157882A1 (en) * 2016-03-14 2017-09-21 Université Catholique de Louvain Serine biosynthetic pathway inhibitors
CN110352063A (zh) * 2016-11-08 2019-10-18 卡里塞拉生物科学股份公司 精氨酸酶抑制剂组合疗法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JASON M. ROHDE，等: "Discovery and optimization of piperazine-1-thiourea-based human phosphoglycerate dehydrogenase inhibitors", 《BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY》 *
王沙沙: "《STN检索报告》", 6 April 2018 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113134090A (zh) * 2021-03-26 2021-07-20 武汉大学中南医院 一种抗肿瘤药物组合物
CN113134090B (zh) * 2021-03-26 2022-05-17 武汉大学中南医院 一种抗肿瘤药物组合物
CN114957182A (zh) * 2022-03-30 2022-08-30 中国药科大学 一类含有黄酮骨架结构的usp8抑制剂及其应用
CN114957182B (zh) * 2022-03-30 2024-03-15 中国药科大学 一类含有黄酮骨架结构的usp8抑制剂及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN111138358B (zh) 2023-04-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2011249859B2 (en) Methods and compositions for inhibition of the transitional endoplasmic reticulum ATPase
AU2010214095B2 (en) Novel amino azaheterocyclic carboxamides
KR102603153B1 (ko) C5-아닐리노퀴나졸린 화합물 및 암의 치료에서의 이의 용도
CA2764027A1 (en) Quinoline or isoquinoline compounds useful for treating premature aging and in particular progeria
AU2011342826A1 (en) Compounds useful for treating aids
CA2896822A1 (en) Azaindole derivatives as inhibitors of protein kinases
CN111138358B (zh) Usp8抑制剂及其制备方法与应用
Zhou et al. Design, synthesis and pharmacological evaluation of 6, 7-disubstituted-4-phenoxyquinoline derivatives as potential antitumor agents
CN109810098B (zh) 含有酞嗪-1(2h)-酮结构的parp-1和pi3k双靶点抑制剂
CA2952230C (en) Pyrimidine compounds and methods using the same
JP6987125B2 (ja) 新規２，４，６−三置換ｓ−トリアジン化合物並びにその製造方法および使用
Hu et al. Design, synthesis and biological evaluation of novel 2, 4-diaminopyrimidine derivatives as potent antitumor agents
EP3760633B1 (en) Oxazino-quinazoline and oxazino-quinazoline type compound, preparation method therefor, and uses thereof
CN109666022B (zh) 三氮唑衍生物及其制备方法和用途
KR101132599B1 (ko) 아폽토시스 유도 효과를 갖는 인돌 유도체
CN113912595B (zh) 一类含有噻唑或噻二唑结构的化合物及其应用
WO2022182845A1 (en) Macrocycles and their use
CN109438347B (zh) 一种氰基喹啉类ido1抑制剂、其制备方法及应用
CN113200978A (zh) 异噻(硒)唑酮类衍生物及其在抗冠状病毒药物中的应用
WO2020248908A1 (zh) 一种双功能免疫调节剂及其在药学上可接受的盐、药物组合物
CN113493437B (zh) 含苯并咪唑结构的化合物及其制备方法和用途
CN114728963B (zh) 新型三唑吡啶衍生物和包括其的药物组合物
CN116102575A (zh) 环状2-氨基嘧啶类化合物及其用途
CN102516153B (zh) 5-氟吲哚-2-酮-3-脲类化合物及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant