CN111068121A - 一种木质基仿生骨支架材料的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种木质基仿生骨支架材料的制备方法，属于仿生骨支架领域。本方法包括：取木纤维，浸泡到碱溶液中，机械研磨，得纤维浆；将纤维浆与多糖类高分子溶液混合，搅拌均匀，得混合溶液；将羟基磷灰石加入到混合溶液中，水浴磁力搅拌，得支架材料前驱体混合液；将支架材料前驱体混合液冷冻，再冷冻干燥，得气凝胶支架；将气凝胶支架用戊二醛溶液交联处理，再用乙醇和去离子水漂洗；将漂洗后支架材料冷冻，再冷冻干燥，得木质基仿生骨支架材料。本发明通过循环冷冻干燥技术制备具有三维多孔结构的木质基仿生骨支架材料，该支架材料不仅无细胞毒性，同时具有较高的抗压强度，且小鼠成骨细胞可在此支架材料上黏附增长，满足骨支架材料的要求。

Description

一种木质基仿生骨支架材料的制备方法
技术领域
本发明涉及一种木质基仿生骨支架材料的制备方法，属于仿生骨支架技术领域。
背景技术
骨组织由有序排列的胶原，以及取向的羟基磷灰石和水组成的。骨组织将有机的骨基质结构和无机的骨盐框架结构紧密的结合在一起，形成一种无机/有机复合材料，从而满足生物和力学的功能要求。当骨组织因为先天性、创伤性以及肿瘤畸形等原因剔除病变组织后，造成大面积骨缺损。通过其自身修复能力无法愈合，因此必须通过骨移植将合适的骨修复材料填充缺损部位，便于骨组织愈合生长。
羟基磷灰石是无机骨盐的主要成分，具有良好的生物相容性、生物活性和骨传导性。纳米级羟基磷灰石与成骨细胞分泌的大量胞外基质矿化后的无机成分极其相似，目前被广泛应用在临床。但是，纳米羟基磷灰石本身也存在一些缺点，如脆性大、易团聚、骨诱导活性低、生物力学性能差等问题。
天然骨中的有机质大部分为胶原，具备良好的生物相容性、生物降解性、刚性和抗张能力。羟基磷灰石和胶原结合可以改善骨支架材料整体的生物学和力学性能。而最近的研究发现许多材料可以部分或完全的替代胶原，如壳聚糖、明胶、蚕丝蛋白、透明质酸、透明质酸钠等，通过构建三维多孔结构作为骨支架支撑材料。这些多糖类或蛋白类物质被用来与羟基磷灰石复合制备骨支架材料，但是其力学强度不足。
发明内容
针对现有骨支架材料的缺陷，本发明提供一种木质基仿生骨支架材料的制备方法，利用木质纤维素的力学性能和生物相容性以及羟基磷灰石的骨传导性，从而得到木质基仿生骨支架材料。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种木质基仿生骨支架材料的制备方法，包括：
1)取木纤维，将其浸泡到碱溶液中，并机械研磨处理，得纤维浆；
2)配制多糖类高分子溶液或含蛋白类高分子溶液，将1)所得纤维浆与多糖类高分子溶液混合，搅拌均匀，得混合溶液；
3)将羟基磷灰石加入到2)所得的混合溶液中，水浴磁力搅拌，得支架材料前驱体混合液；
4)将3)所得的支架材料前驱体混合液冷冻，再冷冻干燥处理，得气凝胶支架；
5)将4)所得的气凝胶支架用戊二醛溶液交联处理，再用乙醇和去离子水漂洗交联后的支架材料，去除多余的戊二醛；
6)将5)漂洗后的支架材料冷冻，再冷冻干燥，得木质基仿生骨支架材料。
本发明一种木质基仿生骨支架材料的制备方法的有益效果是：
作为多糖物质，纤维素本身具有良好的生物相容性、保水性和力学强度。由于纤维素本身没有折叠链且只有少量缺陷，因此具有较高的强度10GPa和模量150GPa。木纤维是由纤维素、木质素、半纤维素组成的多层次复合结构，从微米级的胞管到纳米级的纤丝。本发明对木纤维进行碱处理后，部分半纤维素和木质素脱除，纤维素本身的骨架结构被保留下来，同时也增加了纤维素骨架的孔隙率。纤维素骨架的孔隙有利于多糖类或蛋白类分子进入，并进行结合构建类似于骨组织的三维网络多孔结构。通过自组装技术将天然三维多孔结构的纤维素骨架与多糖蛋白类分子和无机物结合，形成具备三维多孔结构的骨支架材料。将木质纤维素引入骨支架材料作为增强基体，相比于其他有机增强材料，木质纤维素主要来源广、无毒、亲水、价格便宜，且细胞相容性好。同时，纤维素表面的羟基活性高，易于改性处理，更容易与无机物形成氢键结合。
与现有技术相比，本发明通过循环冷冻干燥技术制备木质基仿生骨支架材料，通过模拟天然骨中的有机无机成分，得到了具备一定力学强度和良好的骨细胞相容性的木质基仿生骨支架材料。该骨支架材料通过冷冻干燥技术形成了与天然骨相似的三维多孔结构(如图1所示)，同时与羟基磷灰石的骨诱导性为细胞迁移和生长提供了条件。
在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
进一步，在1)中，所述碱溶液指浓度为0.01mol/L～5mol/L的氢氧化钠溶液和浓度为0.01mol/L～5mol/L的亚硫酸钠溶液组成的溶液，其中所述氢氧化钠溶液和亚硫酸钠溶液的质量比为1：2～2：1。
采用上述进一步方案的有益效果是有效的脱除木纤维中的木质素和半纤维素，完整的保留纤维素骨架，便于构建骨支架材料，充分利用纤维素骨架的增强性能。
进一步，在1)中，所述机械研磨的时间为1～6h。
采用上述进一步方案的有益效果是有效的促使木纤维纳米化，木纤维表面纳米纤丝增多，便于与多糖类或蛋白类交联成网络结构，进而增强骨支架材料。
进一步，在1)中，所述纤维浆的质量分数为10～20％。
采用上述进一步方案的有益效果是纤维浆中存在的纳米化的木纤维可以有效增强骨支架材料的力学性能。
进一步，在2)中，所述多糖类高分子包括壳聚糖、透明质酸和透明质酸钠中的任意一种或几种，所述蛋白类高分子包括明胶、胶原和蚕丝蛋白中的任意一种或几种。
采用上述进一步方案的有益效果是富含羧酸根负离子的蛋白类高分子或多糖类高分子在适当条件下能与羟基磷灰石的钙离子形成化学键，诱导羟基磷灰石的成核和生长，有利于骨支架材料的自组装和生长。
进一步，在2)中，所述多糖类高分子溶液或含蛋白类高分子溶液的质量分数为10～20％。
进一步，在2)中，配制多糖类高分子溶液或含蛋白类高分子溶液的水浴温度为40～80℃。
采用上述进一步方案的有益效果是在水浴温度40～80℃之间，多糖类高分子或蛋白类高分子可以充分溶解在水中。
进一步，在2)中，所述纤维浆与多糖类高分子溶液的质量比为1：1～1：4。
进一步，在3)中，所述羟基磷灰石的加入量与多糖类高分子和木纤维总质量的质量比为1：20～1：1。
进一步，在3)中，所述水浴温度为40～80℃，磁力搅拌时间为0.5～2h。
进一步，在4)中，所述冷冻的温度为－40～－20℃，冷冻的时间为6～12h。
进一步，在4)中，所述冷冻干燥的温度为－60℃，冷冻干燥的时间为6h～24h。
进一步，在5)中，所述戊二醛溶液的质量分数为0.1％～2％。
采用上述进一步方案的有益效果是戊二醛作为交联剂，促使纤维素与多糖类高分子或蛋白类高分子发生交联。
进一步，在5)中，所述交联处理的温度为0～15℃，交联处理的时间为6～12h。
采用上述进一步方案的有益效果是采用低温可以缓和交联速度，确保交联完全。
进一步，在5)中，所述乙醇和去离子水漂洗3～6次。
采用上述进一步方案的有益效果是反复漂洗除去残余的戊二醛。
进一步，在6)中，所述冷冻的温度为－40～－20℃，冷冻的时间为6～12h。
进一步，在6)中，所述冷冻干燥的温度为－60℃，冷冻干燥的时间为12h～48h。
本发明还提供一种如上所述的方法制备的木质基仿生骨支架材料。
本发明制备的木质基仿生骨支架材料，具有与天然骨相似的三维多孔结构和较高的抗压强度，无细胞毒性，且小鼠成骨细胞可在此支架材料上黏附增长，满足骨支架材料的要求。
本发明还提供一种如上所述的木质基仿生骨支架材料在骨组织工程、制备医疗器械和/或制备骨修复制品中的应用。
本发明还提供一种骨修复制品，包括上述的木质基仿生骨支架材料。
附图说明
图1为本发明实施例1得到的木质基仿生骨支架材料的表面电镜图；
图2为本发明实施例1得到的木质基仿生骨支架材料的横切面电镜图。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1
(1)将木纤维浸泡到按照质量比1：1配比的0.01mol/L氢氧化钠溶液和0.01mol/L亚硫酸钠溶液配置的碱溶液中，然后对其进行转速为2800r/min的机械研磨处理2h，制备质量分数10％的纤维浆；
(2)在40℃水浴锅中，将壳聚糖溶解在纯水中，配制质量分数10％的壳聚糖高分子溶液，将步骤1所获得质量分数10％的纤维浆与质量分数10％的壳聚糖高分子溶液按1：1的质量比混合，搅拌均匀，保持40℃水浴磁力搅拌0.5h，得混合溶液；
(3)将羟基磷灰石加入到步骤2获得的混合溶液中，进行水浴40℃磁力搅拌0.5h，得到支架材料前驱体混合液，其中，羟基磷灰石的加入量与壳聚糖和木纤维总质量的质量比为1：20；
(4)将步骤3获得的支架材料前驱体溶液放入－40℃冷冻冰箱中冷冻6h，然后进行－60℃冷冻干燥12h，得气凝胶支架；
(5)步骤4冷冻干燥后获得的气凝胶支架用20ml质量分数0.1％的戊二醛溶液在低温4℃下交联处理12h，然后用乙醇和去离子水交替冲洗三次交联后的支架材料，去除多余的戊二醛和乙醇；
(6)将步骤5冲洗后的支架材料再次放入－40℃冷冻冰箱中冷冻12h，再次进行－60℃冷冻干燥24h，即得到木质基仿生骨支架材料。
实施例2
(1)将木纤维浸泡到按照质量比1：2配比的0.01mol/L氢氧化钠溶液和0.01mol/L亚硫酸钠溶液配置的碱溶液中，然后对其进行转速为2800r/min的机械研磨处理2h，制备质量分数10％的纤维浆；
(2)在50℃水浴锅中，将壳聚糖溶解在纯水中配制质量分数10％的壳聚糖高分子溶液，将步骤1所获得质量分数10％的纤维浆与质量分数10％的壳聚糖高分子溶液按1：2的质量比混合搅拌均匀，保持50℃水浴磁力搅拌0.5h，得混合溶液；
(3)将羟基磷灰石加入到步骤2获得的混合溶液中，进行水浴40℃磁力搅拌0.5h，得到支架材料前驱体混合液，其中，羟基磷灰石的加入量与壳聚糖和木纤维总质量的质量比为1：10；
(4)将步骤3获得的支架材料前驱体放入－40℃冷冻冰箱中冷冻6h，然后进行－60℃冷冻干燥12h，得气凝胶支架；
(5)步骤4冷冻干燥后获得的气凝胶支架用20ml质量分数0.5％的戊二醛溶液在低温4℃下交联处理12h，然后用乙醇和去离子水交替冲洗三次交联后的支架材料，去除多余的戊二醛和乙醇；
(6)将步骤5冲洗后的支架材料再次放入－40℃冷冻冰箱中冷冻12h，再次进行－60℃冷冻干燥24h，即得到木质基仿生骨支架材料。
实施例3
(1)将木纤维浸泡到按照质量比2：1配比的0.01mol/L氢氧化钠溶液和0.01mol/L亚硫酸钠溶液配置的碱溶液中，然后对其进行转速为2800r/min的机械研磨处理2h，制备质量分数20％的纤维浆；
(2)在60℃水浴锅中，将壳聚糖溶解在纯水中配制质量分数20％的壳聚糖高分子溶液，将步骤1所获得质量分数20％的纤维浆与质量分数20％的壳聚糖高分子溶液按1：1的质量比混合搅拌均匀，保持60℃水浴磁力搅拌0.5h，得混合溶液；
(3)将羟基磷灰石加入到步骤2获得的混合溶液中，水浴60℃磁力搅拌0.5h，得到支架材料前驱体混合液，其中，羟基磷灰石的加入量与壳聚糖和木纤维总质量的质量比为1：20；
(4)将步骤3获得的支架材料前驱体放入－40℃冷冻冰箱中冷冻6h，然后进行－60℃冷冻干燥12h，得气凝胶支架；
(5)步骤4冷冻干燥后获得的气凝胶支架用20ml质量分数1％的戊二醛溶液在低温4℃下交联处理6h，然后用乙醇和去离子水交替冲洗三次交联后的支架材料，去除多余的戊二醛和乙醇；
(6)将步骤5冲洗后的支架材料再次放入－40℃冷冻冰箱中冷冻12h，再次进行－60℃冷冻干燥24h，即得到木质基仿生骨支架材料。
实施例4
(1)将木纤维浸泡到按照1：1配比的0.1mol/L氢氧化钠溶液和0.1mol/L亚硫酸钠溶液配置的碱溶液中，然后对其进行转速为2800r/min的机械研磨处理2h，制备质量分数20％的纤维浆；
(2)在50℃水浴锅中，将壳聚糖溶解在纯水中配制质量分数20％的壳聚糖高分子溶液，将步骤1所获得质量分数20％的纤维浆与质量分数20％的壳聚糖高分子溶液按1：1的质量比混合搅拌均匀，保持50℃水浴磁力搅拌0.5h，得混合溶液；
(3)将羟基磷灰石加入到步骤2获得的混合溶液中，水浴50℃磁力搅拌0.5h，得到支架材料前驱体混合液，其中，羟基磷灰石的加入量与壳聚糖和木纤维总质量的质量比为1：10；
(4)将步骤3获得的支架材料前驱体放入－40℃冷冻冰箱中冷冻6h，然后进行－60℃冷冻干燥12h，得气凝胶支架；
(5)步骤4冷冻干燥后获得的气凝胶支架用20ml质量分数1％的戊二醛溶液在低温4℃下交联处理6h，然后用乙醇和去离子水交替冲洗三次交联后的支架材料，去除多余的戊二醛和乙醇；
(6)将步骤5冲洗后的支架材料再次放入－40℃冷冻冰箱中冷冻12h，再次进行－60℃冷冻干燥24h，即得到木质基仿生骨支架材料。
实施例5
(1)将木纤维浸泡到按照质量比1：2配比的0.1mol/L氢氧化钠溶液和0.1mol/L亚硫酸钠溶液配置的碱溶液中，然后对其进行转速为2800r/min的机械研磨处理4h，制备质量分数20％的纤维浆；
(2)在60℃水浴锅中，将壳聚糖溶解在纯水中配制质量分数10％的壳聚糖高分子溶液，将步骤1所获得质量分数20％的纤维浆与质量分数10％的壳聚糖高分子溶液按1：1的质量比混合搅拌均匀，保持60℃水浴磁力搅拌0.5h，得混合溶液；
(3)将羟基磷灰石加入到步骤2获得的混合溶液中进行水浴40℃磁力搅拌0.5h，得到支架材料前驱体混合液，其中，羟基磷灰石的加入量与壳聚糖和木纤维总质量的质量比为1：20；
(4)将步骤3获得的支架材料前驱体放入－40℃冷冻冰箱中冷冻6h，然后进行－60℃冷冻干燥12h，得气凝胶支架；
(5)步骤4冷冻干燥后获得的气凝胶支架用20ml质量分数1％的戊二醛溶液在低温4℃下交联处理6h，然后用乙醇和去离子水交替冲洗三次交联后的支架材料，去除多余的戊二醛和乙醇；
(6)将步骤5冲洗后的支架材料再次放入－40℃冷冻冰箱中冷冻12h，再次进行－60℃冷冻干燥24h，即得到木质基仿生骨支架材料。
实施例6
(1)将木纤维浸泡到按照质量比2：1配比的0.1mol/L氢氧化钠溶液和0.1mol/L亚硫酸钠溶液配置的碱溶液中，然后对其进行转速为2800r/min的机械研磨处理4h，制备质量分数20％的纤维浆；
(2)在50℃水浴锅中，将壳聚糖溶解在纯水中配制质量分数20％的壳聚糖高分子溶液，将步骤1所获得质量分数20％的纤维浆与质量分数20％的壳聚糖高分子溶液按1：2的质量比混合搅拌均匀，保持60℃水浴磁力搅拌0.5h，得混合溶液；
(3)将羟基磷灰石加入到步骤2获得的混合溶液中进行水浴40℃磁力搅拌0.5h，得到支架材料前驱体混合液，其中，羟基磷灰石的加入量与壳聚糖和木纤维总质量的质量比为1：10；
(4)将步骤3获得的支架材料前驱体放入－40℃冷冻冰箱中冷冻6h，然后进行－60℃冷冻干燥12h，得气凝胶支架；
(5)步骤4冷冻干燥后获得的气凝胶支架用20ml质量分数0.5％的戊二醛溶液在低温4℃下交联处理6h，然后用乙醇和去离子水交替冲洗三次交联后的支架材料，去除多余的戊二醛和乙醇；
(6)将步骤5冲洗后的支架材料再次放入－40℃冷冻冰箱中冷冻12h，再次进行－60℃冷冻干燥24h，即得到木质基仿生骨支架材料。
实施例7
(1)将木纤维浸泡到按照质量比1：2配比的0.01mol/L氢氧化钠溶液和0.01mol/L亚硫酸钠溶液配置的碱溶液中，然后对其进行转速为2800r/min的机械研磨处理4h，制备质量分数20％的纤维浆；
(2)在50℃水浴锅中，将壳聚糖溶解在纯水中配制质量分数20％的壳聚糖高分子溶液，将步骤1所获得质量分数20％的纤维浆与质量分数20％的壳聚糖高分子溶液按2：1的质量比混合搅拌均匀，保持60℃水浴磁力搅拌0.5h，得混合溶液；
(3)将羟基磷灰石加入到步骤2获得的混合溶液中进行水浴40℃磁力搅拌0.5h，得到支架材料前驱体混合液，其中，羟基磷灰石的加入量与壳聚糖和木纤维总质量的质量比为1：10；
(4)将步骤3获得的支架材料前驱体放入－40℃冷冻冰箱中冷冻6h，然后进行－60℃冷冻干燥12h，得气凝胶支架；
(5)步骤4冷冻干燥后获得的气凝胶支架用20ml质量分数0.1％的戊二醛溶液在低温4℃下交联处理12h，然后用乙醇和去离子水交替冲洗三次交联后的支架材料，去除多余的戊二醛和乙醇；
(6)将步骤5冲洗后的支架材料再次放入－40℃冷冻冰箱中冷冻12h，再次进行－60℃冷冻干燥24h，即得到木质基仿生骨支架材料。
测定效果实验
1、比表面积及抗压强度测试
采用全自动比表面积及孔隙度分析仪(ASAP2020M)测试液氮温度(77K)下样品氮气吸附－脱附等温线，并根据BET和BJH方法计算出样品的孔径分布；在万能力学试验机上测试，压缩速度为5mm/min，压缩强度计算公式为
Figure BDA0002344611560000111
式中：δ为抗压强度；F为压力；A为接触面积。
表1实施例1木质基仿生骨支架与人体松质骨的抗压强度和孔隙率的比较；
Figure BDA0002344611560000112
通过对木质基仿生骨支架的比表面积数据分析，木质基仿生骨支架的孔隙率接近于人松质骨的孔隙率，骨支架中具有较大的孔隙率有利于小分子物质进行运输。由于多糖类物质与纤维素在交联剂作用下相互交联形成网状结构，木质基骨支架的孔径远小于人松质骨的孔径。而木质基骨支架的抗压强度大于人松质骨的强度，这取决于纤维素之间结合的氢键以及无机物的增强。
2、细胞毒性检测
木质基骨支架钴－60灭菌处理后，加入对应材料浸提稀释DMEM培养液(按照国标0.2mg/ml的原液稀释4倍后使用)，每孔接种细胞悬浮液100ml，待作用1天、2天、3天后，每孔加入200μL终浓度为0.5mg/mL的MTT溶液，并轻轻晃动培养板数次，37℃、5％CO2恒温继续培养4h，每孔加入150μL DMSO，避光振荡10min，用酶标仪测定其在570nm处的吸光度值，计算相对增值率(RGR)＝实验组吸光度值/对照组吸光度值＊100％，按毒性分级法确定毒性。
表2实施例1和2得到的木质基骨支架材料的细胞毒性
Figure BDA0002344611560000121
通过酶标法实验，实施例1和2的木质基骨支架浸提液组相对增值率随时间延长而降低；实施例2的相对增值率略高于实施例1，主要是实施例2中壳聚糖与羟基磷灰石的含量增加，对细胞增殖有一定辅助作用。根据两种材料的相对吸光对值，木质基骨支架的细胞毒性评级为I－II级，为轻度毒性。
3、细胞增殖检测
木质基骨支架钴－60灭菌处理后，加入对应材料浸提稀释DMEM培养液(按照国标0.2mg/ml的原液稀释4倍后使用)，每孔接种细胞悬浮液100ml，待作用1天、2天、3天后，每孔加入200μL终浓度为0.5mg/mL的MTT溶液，并轻轻晃动培养板数次，37℃、5％CO2恒温继续培养4h，每孔加入150μLDMSO，避光振荡10min，用酶标仪测定其在570nm处的吸光度值。
表3实施例1和实施例2所得木质基仿生骨支架材料的细胞增殖情况
Figure BDA0002344611560000122
通过MTT法检测细胞在木质基骨支架材料上增殖情况，实施例1和实施例2的吸光度随着时间的延长而逐渐增加，而实施例2的相对误差低于0.05，说明实施例2的效果比实施例1的好。从数据分析，细胞在骨支架材料上出现增加，说明木质基骨支架材料具有细胞生长的条件。
4、碱性磷酸酶测定
木质基骨支架钴－60灭菌处理后，加入对应材料浸提稀释DMEM培养液(按照国标0.2mg/ml的原液稀释4倍后使用)，每孔接种细胞悬浮液100ml，待作用1天、2天、3天后，吸去孔内培养液，以磷酸盐缓冲液漂洗数次，将细胞液移入1.5mL管中，1000rpm离心5min，吸除上清液，PBS洗涤2次，收集细胞沉淀，吸弃上清，用于ELISA检测碱性磷酸酶活性。
表4实施例1和2所得木质基仿生骨支架材料的碱性磷酸酶活性测定(金氏单位/gprot)
Figure BDA0002344611560000131
通过碱性磷酸酶测试，结果显示随着时间延长，木质基骨支架材料碱性磷酸酶活性增高，说明细胞可以在木质基骨支架材料上分化。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种木质基仿生骨支架材料的制备方法，其特征在于，包括：
1)取木纤维，将其浸泡到碱溶液中，并机械研磨处理，得纤维浆；
2)配制多糖类高分子溶液或含蛋白类高分子溶液，将1)所得纤维浆与多糖类高分子溶液混合，搅拌均匀，得混合溶液；
3)将羟基磷灰石加入到2)所得的混合溶液中，水浴磁力搅拌，得支架材料前驱体混合液；
4)将3)所得的支架材料前驱体混合液冷冻，再冷冻干燥处理，得气凝胶支架；
5)将4)所得的气凝胶支架用戊二醛溶液交联处理，再用乙醇和去离子水漂洗交联后的支架材料，去除多余的戊二醛；
6)将5)漂洗后的支架材料冷冻，再冷冻干燥，得木质基仿生骨支架材料。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在1)中，所述碱溶液指浓度为0.01mol/L～5mol/L的氢氧化钠溶液和浓度为0.01mol/L～5mol/L的亚硫酸钠溶液组成的溶液，其中所述氢氧化钠溶液和亚硫酸钠溶液的质量比为1：2～2：1；
所述机械研磨的时间为1～6h；
所述纤维浆的质量分数为10～20％。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在2)中，所述多糖类高分子包括壳聚糖、透明质酸和透明质酸钠中的任意一种或几种，所述蛋白类高分子包括明胶、胶原和蚕丝蛋白中的任意一种或几种；
所述多糖类高分子溶液或含蛋白类高分子溶液的质量分数为10～20％，配制上述溶液的水浴温度为40～80℃；
所述纤维浆与多糖类高分子高分子溶液的质量比为1：1～1：4。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在3)中，所述羟基磷灰石的加入量与多糖类高分子和木纤维总质量的质量比为1：20～1：1；
所述水浴温度为40～80℃，磁力搅拌时间为0.5～2h。
5.根据权利要求1－4任一项所述的制备方法，其特征在于，在4)中，所述冷冻的温度为－40～－20℃，冷冻的时间为6～12h；
所述冷冻干燥的温度为－60℃，冷冻干燥的时间为6h～24h。
6.根据权利要求1－4任一项所述的制备方法，其特征在于，在5)中，所述戊二醛溶液的质量分数为0.1％～2％；
所述交联处理的温度为0～15℃，交联处理的时间为6～12h；
所述乙醇和去离子水漂洗3～6次。
7.根据权利要求1－4任一项所述的制备方法，其特征在于，在6)中，所述冷冻的温度为－40～－20℃，冷冻的时间为6～12h；
所述冷冻干燥的温度为－60℃，冷冻干燥的时间为12h～48h。
8.一种如权利要求1－7任一项所述的方法制备的木质基仿生骨支架材料。
9.一种如权利要求8所述的木质基仿生骨支架材料在骨组织工程、制备医疗器械和/或制备骨修复制品中的应用。
10.一种骨修复制品，其特征在于，包括权利要求8所述的木质基仿生骨支架材料。
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