CN111066790A - 胺鲜酯和高地芽孢杆菌含菌代谢产物组合的植物生长调节剂 - Google Patents

胺鲜酯和高地芽孢杆菌含菌代谢产物组合的植物生长调节剂 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种胺鲜酯和高地芽孢杆菌含菌代谢产物组合的植物生长调节剂及其制备方法，属于农业植物生长调节剂技术领域；包括以下组分：胺鲜酯或其盐1％～30％，高地芽孢杆菌含菌代谢产物5％～40％，乳化剂5％～20％，稳定剂3％～20％，余量为溶剂。本发明的有益效果在于高地芽孢杆菌含菌的代谢产物含有很多营养物质和对生长具有促进作用的激素，结合一定配比的胺鲜酯之后，能够更好的促进植物根系生长，增强光合作用，提高产量，使作物提早成熟并改善其品质的作用；使用效果好，低毒无害。

Description

胺鲜酯和高地芽孢杆菌含菌代谢产物组合的植物生长调节剂
技术领域
本发明涉及一种植物生长调节剂组合物，特别涉及一种胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合的植物生长调节剂，属于农业植物生长调节剂技术领域。
背景技术
胺鲜酯(化学名称：己酸二乙氨基乙醇酯)可以增加叶绿素、蛋白质、核酸的含量，提高过氧化物酶及硝酸还原酶的活性，提高光合速率，增加植物对CO2的吸收，调节植物的C/N比，增强植株对水肥的吸收，调节植株体内水分的平衡，增强植株抗病能力，使植株整体长势好叶色绿、产量高。胺鲜酯本身不是植物激素，但是植物吸收后，可以调节植物体内的生长素、细胞分裂素、赤霉、脱落酸、乙烯等的活性和合理地配比平衡，使植物向我们所希望的方向发展。
芽孢杆菌(Bacillus spp.)是一种常见的根际促生细菌(plant growth-promoting rhizobacteria，简称PGPR)，在生物农药领域研究和应用非常广泛。目前，芽孢杆菌分泌一些代谢产物可以起到促生作用：1、产生1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)的脱氨酶降低植物的根中的乙烯，从而增加根的长度和生长；2、其分泌的植酸(肌醇六磷酸)酶，可依法去除肌醇中的1,2,3,4,5,6-hexakisphosphate的磷酸基团，来达到对磷酸盐的溶解作用提高植物根际对难溶性磷、铁和微量元素等养分的可利用性； 3、产生植物激素类物质，如吲哚-3-乙酸(IAA)、细胞分裂素(cytokinin)和赤霉素(Gibberellins，GAs)等，可影响植物细胞增大、分裂以及在共生根与非共生根上的扩大。芽孢杆菌本身可以通过抑制病原物和诱导抗性，增强宿主植物对病害的生物防控作用来间接地促进植物生长；可以通过结合重要的矿物营养(Zn2+、Fe2+和Ca2+)来消除螯合形成的植酸盐，影响植酸酶的活性促进植物生长。高地芽孢杆菌是芽孢杆菌的一种，可以耐受80℃以上的高温，存殖力旺盛，可以在较恶劣的环境中定殖。在生殖过程中，其菌及代谢产物共同的作用于植物，具有促进植物生根和生长的作用。
植物生长调节剂是调节植物生长发育的一类农药，包括人工合成的和从生物界提取的具有与天然植物激素有相似生理和生物学效应的物质，植物生长调节剂是外源的非营养性化学物质，通常可在植物体内传导至作用部位，以很低的浓度就能促进或抑制其生命过程的某些环节，使之向符合人类的需要发展。
2017年8月25日公开的，专利申请号为CN201710299717.4、发明创造名称为“回收利用废白土的生物有机肥及其应用”的中国发明专利申请公开了一种回收利用废白土的生物有机肥，其原料配方包含废白土50-70份，腐殖酸10-15份，复合菌液0.5-2份，复合酶0.5-1份，硅酸镁铝5-10份以及植物生长调节剂0.01-0.1份，复合菌液为假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白腐真菌、蜡样芽胞杆菌、苏云金芽孢杆菌按培养液体积比为1：1.3-1.6：0.5-1.1：0.3-0.6：0.2-0.4混合组成；复合酶为淀粉酶、脂肪酶、木质素酶按照质量比1：1.4-1.6：0.3-0.8混合组成；植物生长调节剂为芸苔素内酯与选自苄氨基嘌呤、糠氨基嘌呤、胺鲜酯中的一种或多种的组合。该专利的主题是一种生物有机肥，其中的主要成分中含有少量的菌的混合物和植物生长调节剂，但是该专利主要的功能是防治土壤中害虫，控制土壤土传病原菌的种群数量，降低土壤中农药和化学残留，提高作物的抗逆性，固化稳定土壤重金属离子。该专利中用到的是几种菌的混合物，含量很低，在此产品中作为一种发酵剂，不起促长调节作用。该专利为固体粉剂形态，其加入的植物生长剂芸苔素内酯、苄氨基嘌呤、糠氨基嘌呤以及胺鲜酯，均不溶于水，不通过剂型加工，直接加入生物有机肥中，植物生长调节效果很差，如不均匀，还易产生药害。
2019年1月15日公开的，专利申请号为CN201710538111.1、发明创造名称为“一种抗盐碱、抗重茬、抗病害的大量元素水溶肥料(中量元素型)及制备方法”的中国发明专利申请公开了一种抗盐碱、抗重茬、抗病害的大量元素水溶肥料(中量元素型)及制备方法，其采用以下原料和配方制成：尿素10-20％、晶体磷酸一铵5-10％、磷酸二氢钾20-30％、硫酸钾30-40％、黄腐酸钾5-10％、腐植酸钠5-10％、硝酸铵钙2-5％、硫酸镁2-5％、氨基酸粉2-3％、甲壳素1-1.5％、复硝酚钠0.3-0.5％、胺鲜酯0.2-0.3％、农用链霉素0.2～0.3％、枯草芽孢杆菌0.1～0.2％。该技术方案的主题是一种全水溶肥料，主要起的作用是抗盐碱、抗重茬、抗病害，其施用方法主要有滴灌、喷灌、无土栽培和叶面施肥，其施用过程要求比较高，要少量多次，并且要现用现配，避免在阳光强射下施肥，避免雨天施肥；滴灌施用水溶肥时，先滴清水，等管道充满水后开始施肥，结束后要用清水冲洗管。该技术方案中，胺鲜酯不溶于水，不通过剂型加工，直接加入大量元素水溶肥料中，剂型不稳定，调节生长效果很差。该技术方案中枯草芽胞杆菌在如此高含大量元素肥料产品中，因盐分含量太高，菌的存活率会较低。
2014年9月10日公开的，专利申请号为CN201410312902.9、发明创造名称为“植物生长调节剂组合物及其应用、制剂”的中国发明专利申请，公开了一种植物生长调节剂组合物及其应用、制剂，该植物生长调节剂组合物由胺鲜酯或其盐和三十烷醇组成。但该技术方案中用到的两个植物生长调节剂都是单一的化学成分，两种物质组合后对植物的促进作用也是单方向的，不能多方面地为作物生长提供生长所必需的元素和生长激素，不具备生物学特性。
2017年5月31日公开的，专利申请号为CN201611101754.1、发明创造名称为“生物有机肥发酵剂及其制备方法”的中国发明专利申请公开了一种生物有机肥发酵剂及其制备方法，该发酵剂是取枯草芽孢杆菌粉、枯草芽孢杆菌枯草亚种菌粉、巨大芽孢杆菌粉及胶质芽孢杆菌菌粉，混合均匀；再将用乙醇溶解后的植物生长调节剂(植物生长调节剂为6-苄氨基嘌呤)和填充剂混合均匀后加入前述混合的菌粉中，搅拌均匀，即得，制得的发酵剂中总菌数≥1010CFU/g。该技术方案主体是一种生物有机肥发酵剂，用到的是几种菌粉的混合物，将用乙醇溶解后的植物生长调节剂和填充剂混合均匀后加入菌粉混合物中，起作用的是混合菌本身，并且需要经过好氧堆肥发酵，其中用到的植物生长调节剂为6-苄氨基嘌呤，是一种人工合成的细胞分裂素，其抑制植物叶内叶绿素、核酸、蛋白质的分解，对应用技术要求较高，如使用不当，易出药害。
因此，提供一种能够更好的促进植物根系生长，增强光合作用，提高产量，使作物提早成熟并改善其品质，使用效果好，低毒无害，具有良好的应用开发前景的新型植物生长调节剂就成为该技术领域急需解决的技术难题。
发明内容
本发明的目的之一是将胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合，提供一种具有超加合作用的植物生长调节剂，能够更好的促进植物根系生长，增强光合作用，提高产量，使作物提早成熟并改善其品质，使用效果好，低毒无害，具有良好的应用开发前景。
为解决上述技术问题，本发明提供了一株高地芽孢杆菌。
本发明所提供的高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)，其菌株号为SEM-1，保藏号是GDMCC No.60038，于广东省微生物菌种保藏中心保藏，地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；生物保藏日期为2016年5月16日。
本发明的上述目的是通过以下技术达到的：
一种胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合的植物生长调节剂，其特征在于：包括以下组分(重量百分比)：胺鲜酯或其盐1％～30％，SEM-1含菌代谢产物5％～40％，乳化剂5％～20％，稳定剂3％～20％，余量为溶剂；
所述高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物的制备步骤如下：
(1)菌种的活化培养：
将斜面保存的高地芽孢杆菌(SEM-1)菌种转接于LB培养基平板，32～37℃培养60～72h，观察菌落为微黄色的，成圆形、中间有一个圆形圈的形态，用于下一级发酵；
(2)一级种子液的制备：
挑选以上平板具有固定形态的单菌落于含有50～100mL的LB液体培养基中(250mL三角瓶)，在32～37℃、150～200rpm/min条件下恒温培养36～48h，摇到菌种全是芽孢，得到一级种子液；
(3)高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌发酵代谢产物制备：
1)采用发酵配方如下：玉米淀粉0.5～3g/L、豆粕粉20～40g/L、葡萄糖为4～10g/L、 (NH4)2SO4为2～5g/L、K2HPO4为1～3g/L、MgSO4·7H2O为0.15～0.25g/L、NaCl为2～5g/L、pH＝6.5～7.5、聚硅氧烷消泡剂SXP-101适量，余量为水；
2)将步骤(2)制备的一级种子液，按体积3％～5％的接种量接入发酵罐，罐压0.06～0.07Mpa，通气量按与发酵体积1:1的比值通气，300-500rpm/min，32～37℃恒温发酵18～22h，得到高地芽孢杆菌(SEM-1)发酵菌液，即为高地芽孢杆菌(SEM-1) 含菌代谢产物。
优选地，所述胺鲜酯盐为胺鲜酯草酸盐、胺鲜酯苯甲酸盐、胺鲜酯硫酸盐、胺鲜酯柠檬酸盐或胺鲜酯磷酸盐。
优选地，所述乳化剂为烷基苯磺酸盐、脂肪醇聚氧乙烯醚、蓖麻油聚氧乙烯醚、聚乙二醇、烷基酚聚氧乙烯聚氧丙烯醚、烷基酚聚氧乙烯醚、聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯或EO-PO嵌段化合物等中的一种或两种以上任意比例的混合。
优选地，所述稳定剂为柠檬酸盐、柠檬酸、硫酸、磷酸、盐酸、三聚磷酸钠或磷酸二氢钾、甘油、黄原胶、乙二胺四乙酸二钠中的一种或两种以上任意比例的混合。
优选地，所述溶剂为水、苯、二甲苯、甲苯、甲醇、正丁醇、乙酸、乙酸乙酯、乙醇、己烷、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺中的一种或两种以上任意比例的混合。
本发明的另一目的是提供一种上述胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合的植物生长调节剂的制备方法。
本发明的上述目的是通过以下技术达到的：
一种胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合的植物生长调节剂的制备方法，其步骤如下：
(一)高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌发酵代谢产物制备，其步骤如下：
(1)菌种的活化培养：
将斜面保存的高地芽孢杆菌SEM-1菌种转接于LB培养基平板，32～37℃培养 60～72h，观察菌落为微黄色的，成圆形、中间有一个圆形圈的形态，用于下一级发酵；
(2)一级种子液的制备：
挑选以上平板具有固定形态的单菌落于含有50～100mL的LB液体培养基中(250mL三角瓶)，在32～37℃、150～200rpm/min条件下恒温培养36～48h，摇到菌种全是芽孢，得到一级种子液；
(3)高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌发酵代谢产物制备：
1)采用发酵配方如下：玉米淀粉0.5～3g/L、豆粕粉20～40g/L、葡萄糖为4～10g/L、 (NH4)2SO4为2～5g/L、K2HPO4为1～3g/L、MgSO4·7H2O为0.15～0.25g/L、NaCl为2～5g/L、pH＝6.5～7.5、聚硅氧烷消泡剂SXP-101适量，余量为水；
2)将步骤(2)制备的一级种子液，按体积3％～5％的接种量接入发酵罐，罐压0.06～0.07Mpa，通气量按与发酵体积1:1的比值通气，300-500rpm/min，32～37℃恒温发酵18～22h，得到高地芽孢杆菌(SEM-1)发酵菌液，即为高地芽孢杆菌(SEM-1) 含菌代谢产物。
(二)胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合的植物生长调节剂的制备
胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合的植物生长调节剂的配比 (重量百分比)为：胺鲜酯或其盐1％～30％，高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物5％～40％，乳化剂5％～20％，稳定剂3％～20％，余量为溶剂；
将胺鲜酯或其盐、高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物、溶剂、稳定剂和乳化剂，充分溶解，搅拌，混合而成。
优选地，所述胺鲜酯盐为胺鲜酯草酸盐、胺鲜酯苯甲酸盐、胺鲜酯硫酸盐、胺鲜酯柠檬酸盐或胺鲜酯磷酸盐。
优选地，所述乳化剂为烷基苯磺酸盐、脂肪醇聚氧乙烯醚、蓖麻油聚氧乙烯醚、聚乙二醇、烷基酚聚氧乙烯聚氧丙烯醚、烷基酚聚氧乙烯醚、聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯或EO-PO嵌段化合物等中的一种或两种以上任意比例的混合。
优选地，所述稳定剂为柠檬酸盐、柠檬酸、硫酸、磷酸、盐酸、三聚磷酸钠或磷酸二氢钾、甘油、黄原胶、乙二胺四乙酸二钠中的一种或两种以上任意比例的混合，一部分稳定剂用来保护胺鲜酯成分稳定不失效，另外一部分稳定剂用来保护菌种稳定，使菌在恶劣的环境里还可以保持芽孢状态不萌发，保障含菌代谢产物的一个稳定状态。
优选地，所述溶剂为水、苯、二甲苯、甲苯、甲醇、正丁醇、乙酸、乙酸乙酯、乙醇、己烷、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺中的一种或两种以上任意比例的混合。
本发明的再一目的是提供上述胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合的植物生长调节剂在植物生长中的应用。
本发明的上述目的是通过以下技术达到的：
胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合的植物生长调节剂在植物生长中的应用，具体用于黄瓜、小白菜和辣椒。
有益效果：
本发明组合物中主要的成分之一是高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌的代谢产物，无毒无害，是一种纯生态的混合物，含有很多营养物质和对生长具有促进作用的激素，结合胺鲜酯之后，本发明人意外地发现，两者相加，具有超加和作用，能够更好的促进植物根系生长，增强光合作用，提高产量，使作物提早成熟并改善其品质的作用，使用效果好，低毒无害，具有良好的应用开发前景。
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步描述，但本发明的实施方式不限于此。应当理解的是，本说明书中描述的实施例仅仅是为了解释本发明，并非为了限定本发明。
附图说明
图1为本发明的胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物不同浓度配比组合的植物生长调节剂对黄瓜种子发芽的影响效果图。
图2为本发明的胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合的植物生长调节剂与胺鲜酯和其他常见芽孢杆菌含菌代谢产物组合的植物生长调节剂对黄瓜种子发芽的影响效果图。
图3为本发明的胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物不同浓度配比组合的植物生长调节剂对辣椒植株外观长势的影响效果图。
图4为本发明的胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物不同浓度配比组合的植物生长调节剂对辣椒植株果实总量的影响效果图。
图5为本发明的胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物不同浓度配比组合的植物生长调节剂对辣椒植株生物总量的影响效果图。
图6为本发明的胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合的植物生长调节剂与胺鲜酯和其他常见芽孢杆菌含菌代谢产物组合的植物生长调节剂对室内菜心试验之前的盆栽植株图。
图7为本发明的胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合的植物生长调节剂与胺鲜酯和其他常见芽孢杆菌含菌代谢产物组合的植物生长调节剂对室内菜心试验一个月后的盆栽植株图。
具体实施方式
下述具体实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。除非特别说明，本发明所用试剂和原材料均可通过市售获得。
实施例1
除非特别说明，以下的百分比均为重量百分比。
1、高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物的制备
(1)菌种的活化培养：
将斜面保存的高地芽孢杆菌SEM-1菌种转接于LB培养基平板，32～37℃培养 60～72h，观察菌落为微黄色的，成圆形、中间有一个圆形圈的形态，用于下一级发酵；
(2)一级种子液的制备：
挑选以上平板具有固定形态的单菌落于含有50～100mL的LB液体培养基中(250mL三角瓶)，在32～37℃、150～200rpm/min条件下恒温培养36～48h，摇到菌种全是芽孢，得到一级种子液；
(3)高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌发酵代谢产物制备：
1)采用发酵配方如下：玉米淀粉0.5～3g/L、豆粕粉20～40g/L、葡萄糖为4～10g/L、 (NH4)2SO4为2～5g/L、K2HPO4为1～3g/L、MgSO4·7H2O为0.15～0.25g/L、NaCl为2～5g/L、pH＝6.5～7.5、聚硅氧烷消泡剂SXP-101适量，余量为水；
2)将步骤(2)制备的一级种子液，按体积3％～5％的接种量接入发酵罐，罐压0.06～0.07Mpa，通气量按与发酵体积1:1的比值通气，300-500rpm/min，32～37℃恒温发酵18～22h，得到高地芽孢杆菌(SEM-1)发酵菌液，即为高地芽孢杆菌(SEM-1) 含菌代谢产物。
2、胺鲜酯和SEM-1含菌代谢产物组合的植物生长调节剂的制备(原料按重量配比)
胺鲜酯2.1％，高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物18.2％，聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯10％，柠檬酸1％，盐酸2.0％，磷酸二氢钾6.3％，乙二胺四乙酸二钠 0.5％，甘油2％，黄原胶0.2％，水57.7％；
其工艺步骤为：先提前将黄原胶溶解至一定浓度的，之后将高地芽孢杆菌 (SEM-1)含菌的代谢产物与聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯混合搅拌溶解后，再依次加入胺鲜酯、柠檬酸、甘油、盐酸、磷酸二氢钾，待磷酸二氢钾完全溶解，加溶解好的黄原胶，加水定容，即为成品1。
实施例2
其它与实施例1相同，不同之处在于：
胺鲜酯2.1％，高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物33.3％，聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯10％，柠檬酸1％，盐酸2.0％，磷酸二氢钾6.3％，乙二胺四乙酸二钠 0.5％，甘油2％，黄原胶0.2％，水42.6％；配制方法同实施例1，得成品2。
实施例3
其它与实施例1相同，不同之处在于：
胺鲜酯5.1％，高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物33.3％，聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯10％，柠檬酸1％，盐酸2.0％，磷酸二氢钾6.3％，乙二胺四乙酸二钠 0.5％，甘油2％，黄原胶0.2％，水39.6％；配制方法同实施例1，得成品3。
对比例1
胺鲜酯2.1％，聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯10％，柠檬酸1％，盐酸2.0％，磷酸二氢钾6.3％，乙二胺四乙酸二钠0.5％，甘油2％，黄原胶0.2％，水75.9％；工艺步骤为：先提前将黄原胶溶解至一定浓度的，在一定的水溶剂里依次加入胺鲜酯、柠檬酸、甘油、盐酸、聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯和磷酸二氢钾完全溶解后，加溶解好的黄原胶，用水定容，即为对比成品1。
对比例2
高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物18.2％，聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯10％，柠檬酸1％，盐酸2.0％，磷酸二氢钾6.3％，乙二胺四乙酸二钠0.5％，甘油2％，黄原胶0.2％，水59.8％；其工艺步骤为：先提前将黄原胶溶解至一定浓度的，在高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢里依次加入柠檬酸、甘油、盐酸、聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯和磷酸二氢钾完全溶解后，加溶解好的黄原胶，用水定容，即为对比成品 2。
对比例3
胺鲜酯5.1％，解淀粉芽孢杆菌含菌代谢产物33.3％，聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯10％，柠檬酸1％，盐酸2.0％，磷酸二氢钾6.3％，乙二胺四乙酸二钠0.5％，甘油2％，黄原胶0.2％，水39.6％；配制方法同实施例1，得对比成品3。其中解淀粉芽孢杆菌是广东植物龙生物技术股份有限公司研究中心自己分离所得，菌保藏编码为ZBap-FH-3。
其工艺步骤为：先提前将黄原胶溶解至一定浓度，之后将解淀粉芽孢杆菌含菌的代谢产物与聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯混合搅拌溶解后，再依次加入胺鲜酯、柠檬酸、甘油、盐酸、磷酸二氢钾，待磷酸二氢钾完全溶解，加溶解好的黄原胶，加水定容，即为对比成品3。
对比例4
胺鲜酯5.1％，枯草芽孢杆菌含菌代谢产物33.3％，聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯10％，柠檬酸1％，盐酸2.0％，磷酸二氢钾6.3％，乙二胺四乙酸二钠0.5％，甘油 2％，黄原胶0.2％，水39.6％；配制方法同实施例1，得对比成品4。其中枯草芽孢杆菌购自潍坊益昊生物技术有限公司。
其工艺步骤为：先提前将黄原胶溶解至一定浓度的，之后将枯草芽孢杆菌含菌的代谢产物与聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯混合搅拌溶解后，再依次加入胺鲜酯、柠檬酸、甘油、盐酸、磷酸二氢钾，待磷酸二氢钾完全溶解，加溶解好的黄原胶，加水定容，即为对比成品4。
应用实施例1黄瓜种子发芽试验
种子预处理：取成熟饱满的黄瓜种子，用75％的酒精表面消毒30s～1min，之后用无菌水冲洗6～7次；
选取颗粒饱满，大小一致的种子，用上述实施例1、实施例2、实施例3制备的胺鲜酯和SEM-1含菌代谢产物组合的植物生长调节剂分别和对比例1、对比例2、对比例3和对比例4制备的产品进行分组试验(试验共分两大组)，药剂都兑水稀释100倍，浸泡种子，28℃培养24h，收集种子，无菌水冲洗干净种子后，将其放在铺有两层无菌水浸湿滤纸的培养皿中，28℃保湿培养5d，统计发芽率，计量胚根长度，每个处理设三个重复20粒种子；对照组指的是不加任何植物生长调节剂的情况。
结果如图1和图2所示，图1为本发明的胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物不同浓度配比组合的植物生长调节剂对黄瓜种子发芽的影响效果图，图 2为本发明的胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合的植物生长调节剂和胺鲜酯和其他常见菌的含菌代谢产物组合的植物生长调节剂对黄瓜种子发芽的影响效果图。
表1供试产品对黄瓜种子发芽的影响
药剂处理组 发芽率(％) 胚根长度(mm) 胚根长度增幅(％)
对照组 75％ 13 —
实施例1 90％ 32 246
实施例2 95％ 34 262
实施例3 95％ 39 300
对比例1 80％ 16 123
对比例2 80％ 15 115
从表1看出，实施例1的配比发芽率为90％，胚根增幅达246％，实施例2的配比发芽率为95％，胚根增幅达262％；实施例3的配比发芽率为95％，胚根增幅达300％；说明本发明专利申请的技术方案，可以显著提高种子的发芽率，并且显著的提高种子的胚根长度；对比例1的配比发芽率为80％，胚根增幅123％，对比例2的配比发芽率为80％，胚根增幅为115％，说明本发明的胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合的植物生长调节剂，可以明显提高黄瓜种子的发芽率和显著促进黄瓜胚根的伸长。
其中，超增效因子的计算公式如下：
Figure RE-GDA0002413275050000101
与对比例1和对比例2相比，实施例1、实施例2和实施3的胚根长度增幅都很大，根据上述超增效因子计算公式，最终得到：
Figure RE-GDA0002413275050000111
Figure RE-GDA0002413275050000112
Figure RE-GDA0002413275050000113
从上述数据可以看出，实施例将胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合后的植物生长调节剂对黄瓜种子生根具有超加和作用，实施例3的作用是最大的，说明以实施例3的配比最好。
表2供试产品对黄瓜种子发芽的影响
药剂处理组 发芽率(％) 胚根长度(mm) 胚根长度增幅(％)
对照组 75％ 14 —
实施例3 95％ 41 293
对比例3 85％ 22 157
对比例4 85％ 25 179
从表2看出，实施例3处理组发芽率为95％，胚根增幅达293％，远远高于对比例3的157％和对比例4的179％，可以明显提高黄瓜种子的发芽率和黄瓜胚根的长度，由此可见，本发明的胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合的植物生长调节剂优于其他常见菌的含菌代谢产物组合的植物生长调节剂。
应用实施例2对辣椒的盆栽试验(将实施例中的产品全部稀释1000倍用)
施药方式及时间：试验采用长江-0.8型手压式喷壶喷施辣椒植株，每盆辣椒喷施4秒。试验共喷施2次，每隔7天喷施一次。
调查方法：
(1)高度调查：在第一次喷施药后6天和第二次喷施药后6天，调查每盆辣椒植株的高度，计算平均高度和增长率。高度为土层至辣椒植株嫩梢顶端的距离，测量工具为企鹅牌3m卷尺。
(2)花果量调查：在第1批辣椒可以采摘前和辣椒采摘前，调查每盆辣椒植株的花果树和花序数，并计算出促花效果。
药效计算方法：
促长效果(％)＝(处理区植株高度—对照区植株高度)/对照区植株高度×100％
促花效果(％)＝(处理区花果量—对照区花果量)/对照区花果量×100％
与CK对比(％)＝(药剂处理值—CK处理值)/CK处理值×100％
结果与分析：
表3供试产品对辣椒长势的影响
Figure RE-GDA0002413275050000121
如图3所示，为本发明的胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合的实施例和对比例处理辣椒植株后的外观长势图；
从表3和图3中可以看出，在所有处理中，以实施例3配制产品处理组的植株长势最好，在第二次喷施产品之后，植株高度的增长率也最高，达到21.89％，而实施例1和实施例2的增长率也分别达到17.75％和17.39％，增长率显著高于对比例1 和对比例2。最终的高度对比率，根据之前提到的超增效因子计算公式，得到：
Figure RE-GDA0002413275050000122
Figure RE-GDA0002413275050000123
Figure RE-GDA0002413275050000124
从以上结果可以看出，本发明的胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合后的植物生长调节剂对辣椒长势的对比率具有超加和作用，可以明显促进辣椒的高度生长，而实施例3的作用是最大的，说明以实施例3的配比最好。
表4供试产品对辣椒花量的影响
Figure RE-GDA0002413275050000131
从上表4中可以看出，施药第4天的处理中，以实施例3处理的辣椒花量最多，其次是实施例1和实施例2，但是与对比例1和对比例2比较，并没有多出很多。等到施药第10天后，辣椒的花量尤其以实施例3的结果最多，花数达到241，实施例1和实施例2也增长很多，与对比例1和对比例2相比，增长明显。最终花数对比率根据之前提到的超增效因子计算公式，最终得到：
Figure RE-GDA0002413275050000132
Figure RE-GDA0002413275050000133
Figure RE-GDA0002413275050000134
从表4的结果可以看出，本发明将胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合后的植物生长调节剂对辣椒花数的对比率具有超加和作用，可以明显的促进植株开花，增加花量。而实施例3的作用是最大的，说明以实施例3的配比最好。
表5供试产品对辣椒果实的影响
Figure RE-GDA0002413275050000135
Figure RE-GDA0002413275050000141
如图4所示，为本发明的胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合的实施例和对比例处理辣椒植株后的果实总量图；
从表5和图4可以看出，辣椒果实重量，本发明实施例3的处理组总量最高，其次是实施例1和实施例2，这个三个组别都明显高于对比例1和对比例2的果实总量。
平均果重的对比率，根据之前提到的超增效因子计算公式，最终得到：
Figure RE-GDA0002413275050000142
Figure RE-GDA0002413275050000143
Figure RE-GDA0002413275050000144
从表5的结果可以看出，本发明胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合后的植物生长调节剂对辣椒平均果实的对比率具有超加和作用，而实施例3 的作用是最大的，说明以实施例3的配比最好。从成熟果对比率来看，对照组的最高，经过胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合物处理的辣椒植株，有足够的营养，使辣椒植株同时进行营养生长和生殖生长，延缓辣椒果实的成熟，所以成熟果会较对照组少。
表6供试产品对辣椒植株生物量的影响
Figure RE-GDA0002413275050000145
Figure RE-GDA0002413275050000151
如图5所示，为本发明的胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合的实施例和对比例处理辣椒植株后生物总量图。
从表6和图5可以看出，辣椒植株总重量，无论是地上部分还是地下部分，实施例3中的重量都是最高的，总重量达1010.91，而实施例1和实施例2仅次于实施例3，相比于对比例1和对比例2高很多。
总重量的对比率，根据之前提到的超增效因子计算公式，最终得到：
Figure RE-GDA0002413275050000152
Figure RE-GDA0002413275050000153
Figure RE-GDA0002413275050000154
从表6的结果可以看出，本发明的胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合后的植物生长调节剂对辣椒植株总重量的对比率具有超加和作用，可明显促进作物的总的生物量；而实施例3的作用是最大的，说明以实施例3的配比最好。
综合以上试验可以看出，对比所有药剂处理，用胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物以高配比组合处理的辣椒最好，无论是从植株长势还是辣椒花果，都优于其他处理；用胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合后的处理，辣椒植株开花的时间会比单用一种物质处理的提前一段时间，并且花的数量也高很多，持续的时间久。由此可见，将胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合后使用，无论是对辣椒的长势还是花果，都具有超加和作用，而高浓度的组合物混用优于低浓度的组合物混用的效果。
应用实例3对盆栽作物长势的影响
用实施例3和对比例3和对比例4做一组试验，看试验组对盆栽长势的影响。试验共分四个处理，每处理设24盆穴，每穴种植2～3棵菜心。采用清水稀释后浇灌方式。每穴浇水约25毫升/次，药剂平均施用，空白对照区(CK)则采用清水浇灌。当长出两片叶子时开始间苗，把长势弱、叶黄的苗除去，每穴留有2、3株高度基本一致，长势良好的苗做实验，每个处理共24盆穴。接着也在长出两片叶同时开始用药剂，按要求施用两次。
调查方法：
鲜重调查：取出栽种盘里的所有菜心称重，记下重量与CK对比算出增长率干重调查：取出所有菜心放进烘箱烘干称重，记下重量与CK对比算出增长率
药效计算方法：
鲜重增长率计算方法：
鲜重增长率(％)＝(处理区鲜重－空白对照区鲜重)/空白对照区鲜重×100％
干重增长率(％)＝(处理区干重－空白对照区干重)/空白对照区干重×100％
表7供试产品对菜心鲜重的影响
试验药剂 菜心鲜重(g) 与CK相比增长率(％)
CK 4.98 —
对比例3 28.12 464.66
对比例4 28.62 474.70
实施例3 30.06 503.61
表8供试产品对菜心干重的影响
试验药剂 菜心干重(g) 与CK相比增长率(％)
CK 0.82 —
对比例3 2.48 202.44
对比例4 2.57 213.41
实施例3 3.08 275.61
从表7和表8可以看出，供试产品作用于菜心后，不论从鲜重还是干重增长率结果来看，实施例3的效果都是最好；药后10天发现，实施例3长出的真叶比其他两个对比例处理的更大且转色快，药后一个月观察实施例3整体长得比其它处理更加整齐且粗壮，叶子厚大且浓绿，效果如图7。
从以上试验可以看出，高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物与胺鲜酯复配后可以很好的促进作物的生长，与其他常见的芽孢杆菌含菌代谢产物和胺鲜酯复配后的产品相比具有明显优势，可以让作物的叶片变得又浓又绿又大，茎秆更粗壮。
本发明是胺鲜酯和高地芽孢杆菌(SEM-1)含菌代谢产物组合的植物生长调节剂，结合胺鲜酯的作用优势和菌代谢产物的生态优势，可以提供植物所需要的营养物质和激素，可以抑制植物病原菌生长，释放环境胁迫，改善微量元素的存在形式，提高光合作用速率，促进肥料的吸收，最终促进植物生长、提高农作物产量，是一种安全环保高效的植物生长调节剂。可在黄瓜、辣椒、小白菜等多种蔬菜作物上的广泛应用。

Claims (10)

1.一种胺鲜酯和高地芽孢杆菌含菌代谢产物组合的植物生长调节剂，其特征在于：包括以下重量组分：胺鲜酯或其盐1％～30％，高地芽孢杆菌含菌代谢产物5％～40％，乳化剂5％～20％，稳定剂3％～20％，余量为溶剂；
高地芽孢杆菌含菌代谢产物的制备如下：
(1)菌种的活化培养：
将斜面保存的高地芽孢杆菌SEM-1菌种转接于LB培养基平板，32～37℃培养60～72h，观察菌落为微黄色的，成圆形、中间有一个圆形圈的形态，用于下一级发酵；
(2)一级种子液的制备：
挑选以上平板具有固定形态的单菌落于含有50～100mL的LB液体培养基中，在32～37℃、150～200rpm/min条件下恒温培养36～48h，摇到菌种全是芽孢，得到一级种子液；
(3)高地芽孢杆菌含菌发酵代谢产物制备：
1)采用发酵配方如下：玉米淀粉0.5～3g/L、豆粕粉20～40g/L、葡萄糖为4～10g/L、(NH4)2SO4为2～5g/L、K2HPO4为1～3g/L、MgSO4·7H2O为0.15～0.25g/L、NaCl为2～5g/L、pH＝6.5～7.5、聚硅氧烷消泡剂SXP-101适量，余量为水；
2)将步骤(2)制备的一级种子液，按体积3％～5％的接种量接入发酵罐，罐压0.06～0.07Mpa，通气量按与发酵体积1:1的比值通气，300-500rpm/min，32～37℃，恒温发酵18～22h，得到高地芽孢杆菌发酵菌液，即为高地芽孢杆菌含菌代谢产物。
2.根据权利要求1所述的胺鲜酯和高地芽孢杆菌含菌代谢产物组合的植物生长调节剂，其特征在于：所述胺鲜酯盐为胺鲜酯草酸盐、胺鲜酯苯甲酸盐、胺鲜酯硫酸盐、胺鲜酯柠檬酸盐或胺鲜酯磷酸盐。
3.根据权利要求2所述的胺鲜酯和高地芽孢杆菌含菌代谢产物组合的植物生长调节剂，其特征在于：所述乳化剂为烷基苯磺酸盐、脂肪醇聚氧乙烯醚、蓖麻油聚氧乙烯醚、聚乙二醇、烷基酚聚氧乙烯聚氧丙烯醚、烷基酚聚氧乙烯醚、聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯或EO-PO嵌段化合物中的一种或两种以上任意比例的混合。
4.根据权利要求3所述的胺鲜酯和高地芽孢杆菌含菌代谢产物组合的植物生长调节剂，其特征在于：所述稳定剂为柠檬酸盐、柠檬酸、硫酸、磷酸、盐酸、三聚磷酸钠、磷酸二氢钾、甘油、黄原胶或乙二胺四乙酸二钠中的一种或两种以上任意比例的混合。
5.根据权利要求1所述的胺鲜酯和高地芽孢杆菌含菌代谢产物组合的植物生长调节剂，其特征在于：所述溶剂为水、苯、二甲苯、甲苯、甲醇、正丁醇、乙酸、乙酸乙酯、乙醇、己烷、二甲基亚砜或二甲基甲酰胺中的一种或两种以上任意比例的混合。
6.权利要求1-5中任一项所述胺鲜酯和高地芽孢杆菌含菌代谢产物组合的植物生长调节剂的制备方法，其步骤如下：
(一)高地芽孢杆菌含菌代谢产物的制备如下：
(1)菌种的活化培养：
将斜面保存的高地芽孢杆菌SEM-1菌种转接于LB培养基平板，32～37℃培养60～72h，观察菌落为微黄色的，成圆形、中间有一个圆形圈的形态，用于下一级发酵；
(2)一级种子液的制备：
挑选以上平板具有固定形态的单菌落于含有50～100mL的LB液体培养基中，在32～37℃、150～200rpm/min条件下恒温培养36～48h，摇到菌种全是芽孢，得到一级种子液；
(3)高地芽孢杆菌含菌发酵代谢产物制备：
1)采用发酵配方如下：玉米淀粉0.5～3g/L、豆粕粉20～40g/L、葡萄糖为4～10g/L、(NH4)2SO4为2～5g/L、K2HPO4为1～3g/L、MgSO4·7H2O为0.15～0.25g/L、NaCl为2～5g/L、pH＝6.5～7.5、聚硅氧烷消泡剂SXP-101适量，余量为水；
2)将步骤(2)制备的一级种子液，按体积3％～5％的接种量接入发酵罐，罐压0.06～0.07Mpa，通气量按与发酵体积1:1的比值通气，300-500rpm/min，32～37℃恒温发酵18～22h，得到高地芽孢杆菌发酵菌液，即为高地芽孢杆菌含菌代谢产物；
(二)胺鲜酯和高地芽孢杆菌含菌代谢产物组合的植物生长调节剂的制备
胺鲜酯和高地芽孢杆菌含菌代谢产物组合的植物生长调节剂的配比为：胺鲜酯或其盐1％～30％，高地芽孢杆菌含菌代谢产物5％～40％，乳化剂5％～20％，稳定剂3％～20％，余量为溶剂；
将胺鲜酯或其盐、高地芽孢杆菌含菌代谢产物、溶剂、稳定剂和乳化剂，充分溶解，搅拌，混合而成，得胺鲜酯和高地芽孢杆菌含菌代谢产物组合的植物生长调节剂。
7.根据权利要求6所述的胺鲜酯和高地芽孢杆菌含菌代谢产物组合的植物生长调节剂的制备方法，其特征在于：所述胺鲜酯盐为胺鲜酯草酸盐、胺鲜酯苯甲酸盐、胺鲜酯硫酸盐、胺鲜酯柠檬酸盐或胺鲜酯磷酸盐。
8.根据权利要求7所述的胺鲜酯和高地芽孢杆菌含菌代谢产物组合的植物生长调节剂的制备方法，其特征在于：所述乳化剂为烷基苯磺酸盐、脂肪醇聚氧乙烯醚、蓖麻油聚氧乙烯醚、聚乙二醇、烷基酚聚氧乙烯聚氧丙烯醚、烷基酚聚氧乙烯醚、聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯或EO-PO嵌段化合物中的一种或两种以上任意比例的混合。
9.根据权利要求8所述的胺鲜酯和高地芽孢杆菌含菌代谢产物组合的植物生长调节剂的制备方法，其特征在于：所述稳定剂为柠檬酸盐、柠檬酸、硫酸、磷酸、盐酸、三聚磷酸钠、磷酸二氢钾、甘油、黄原胶或乙二胺四乙酸二钠中的一种或两种以上任意比例的混合；所述溶剂为水、苯、二甲苯、甲苯、甲醇、正丁醇、乙酸、乙酸乙酯、乙醇、己烷、二甲基亚砜或二甲基甲酰胺中的一种或两种以上任意比例的混合。
10.权利要求1-5中任一项所述胺鲜酯和高地芽孢杆菌含菌代谢产物组合的植物生长调节剂在黄瓜、小白菜和辣椒生长中的应用。
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