CN111060374A - Gn无醛快速固定液及配置方法 - Google Patents
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Abstract
一种GN无醛快速固定液，该GN无醛快速固定液由体积份数为60%～80%的无水乙醇、10%～20%的冰乙酸、5%～10%丙三醇、5%～10%月桂氮酮以及0.3g～1g/100ml的山梨酸钾组成，本发明的有益效果在于：与传统的福尔马林固定液相比，该GN无醛快速固定液各个成分均为无毒或低毒物质，常用于日常生活，气味温和，对粘膜刺激性小，固定速度快，可更完整的保存组织形态，对组织抗原的保存更加完整，固定效果优良，组织切片更易着色，组织切片的细胞轮廓更为清晰，原材料易于获取，配置方法简单，无需加热等特殊条件，成本低，本发明还提供了一种GN无醛快速固定液的配置方法。
Description
技术领域
本发明涉及动物病理检验及组织形态学研究用固定液，特别涉及一种GN无醛快速固定液及配置方法。
背景技术
现阶段，动物组织常用的固定液有福尔马林固定液、Bouin氏固定液、醛糖钙固定液、AF固定液等。多数固定液中含有甲醛。现有的所有固定液中，以福尔马林固定液最为常用。它对组织的渗透能力强、固定均匀、组织收缩较小。尽管它具有高毒性，但由于其价廉、能较好地保存组织结构，所以至今仍广泛被人们所接受，一直作为病理科的常用组织固定液。但甲醛存在以下缺点：其一，甲醛易挥发，具有较强烈的刺激性和腐蚀性，严重造成空气和环境污染，而对其防护又极为困难。国内外医学研究证实，人体皮肤直接接触甲醛时会引发过敏反应、皮炎或湿疹；长期接触甲醛可能会引发慢性呼吸道疾病和癌症；2004年WHO宣布甲醛为致癌物质，同时提醒人们要重视甲醛的致癌性，并采取预防措施。其二，甲醛存放过久易产生白色沉淀，即三聚甲醛，进而影响组织标本固定效果。其三，甲醛容易氧化形成甲酸，使溶液变为酸性，导致标本酸化，严重时影响细胞核的染色效果。其四，组织长时间固定影响染色效果：甲醛固定的陈旧组织，如脾和肝等，组织内易形成甲醛色素，易与含铁血黄素相混淆，使病理诊断受到严重影响。其五，甲醛废液不能直接排入下水管道，需经过特殊处理，且处理费用较高。
发明内容
有鉴于此，针对上述不足，有必要提出一种无毒的GN无醛快速固定液。
还有必要提出一种无毒的GN无醛快速固定液配置方法。
一种GN无醛快速固定液，该GN无醛快速固定液由体积份数为60%～80%的无水乙醇、10%～20%的冰乙酸、5%～10%丙三醇、5%～10%月桂氮酮以及0.3g～1g/100ml的山梨酸钾组成。
优选的，该GN无醛快速固定液由体积份数为70%的无水乙醇、10%的冰乙酸、10%的丙三醇、10%的月桂氮酮以及0.5g/100ml的山梨酸钾组成。
一种GN无醛快速固定液的配置方法，该方法包括如下步骤：
将体积份数为60%～80%的无水乙醇、10%～20%的冰乙酸、5%～10%丙三醇、5%～10%月桂氮酮均匀混合后形成第一混合液；
向每100ml的第一混合液中加入0.3g～1g的山梨酸钾，然后搅拌，使山梨酸钾溶解于第一混合液中。
优选的，所述无水乙醇的体积份数为70%，冰乙酸的体积份数为10%，丙三醇的体积份数为10%，月桂氮酮的体积份数为10%，每100ml的第一混合液中加入0.5g山梨酸钾。
本发明中，无水乙醇、冰乙酸为蛋白凝固剂，对动物组织起到主要的固定作用；丙三醇为固定液稳定剂，用于减少乙酸与乙醇的挥发，且丙三醇可作为折光剂，可加强动物组织切片的清晰度；月桂氮酮为渗透剂，可加快固定液对组织的固定速度，山梨酸钾为蛋白防腐剂，可对动物组织起到长时间的保存效果，以防乙醇与乙酸挥发，造成固定效果下降；采用无毒或低毒的组分代替了有毒的组分，乙醇与乙酸常做食用材料，丙三醇可做食用和化妆品材料，并且其本身为人体脂肪的分解产物，月桂氮酮常做化妆品添加剂，山梨酸钾常作为食品防腐添加剂。
本发明的有益效果在于：与传统的福尔马林固定液相比，该GN无醛快速固定液各个成分均为无毒或低毒物质，常用于日常生活，气味温和，对粘膜刺激性小，固定速度快，可更完整的保存组织形态，对组织抗原的保存更加完整，固定效果优良，组织切片更易着色，组织切片的细胞轮廓更为清晰，原材料易于获取，配置方法简单，无需加热等特殊条件，成本低。
附图说明
图1为相同试验条件下，采用本发明GN无醛快速固定液与福尔马林固定液所固定组织HE.染色结果对比。
图2为相同着色程度下，采用本发明GN无醛快速固定液与福尔马林固定液肝脏细胞形态对比。
图3为相同试验条件下，采用本发明GN无醛快速固定液与福尔马林固定液免疫组织化学结果对比。
图4为相同试验条件下，采用本发明GN无醛快速固定液与福尔马林固定液固定速度与对小鼠刺激性对比。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的保护范围。
实施例1：将体积份数为70%的无水乙醇、10%的冰乙酸、10%丙三醇、10%月桂氮酮均匀混合后形成第一混合液，向每100ml的第一混合液中加入0.5g的山梨酸钾，然后搅拌，使山梨酸钾溶解于第一混合液中，制得GN无醛快速固定液。
选用年龄及体重相近的成年健康家兔，雌雄各一只，作为固定用试验动物。耳缘静脉注射空气致死后解剖，取出心、肝、脾、肺、肾、十二指肠、卵巢、睾丸并分别浸泡入福尔马林固定液（10%甲醛溶液）和本发明实施例1所制得的GN无醛快速固定液。第15天时，分别切开不同的组织，观察剖面。第30天时，将所固定的组织进行石蜡包埋并切片。将所得组织切片进行HE.染色和SP法免疫组织化学染色（一抗选用山羊抗兔HSPG，按照1：400稀释，阴性对照用PBS缓冲液代替一抗），切片在NIKON ECLPISE 80i系统进行照片采集。
应用实施例1：将本发明实施例1制得的GN无醛快速固定液与福尔马林固定液分别用于十二指肠切片、睾丸切片、脾脏切片所固定组织HE.染色结果对比，在相同的试样条件下，对比两种固定液对于组织HE.着色效果及组织形态完整度的差异。
参见图1，图中，1～4分别放大：×100，×100，×200，×200，每组对比上下放大倍数相同。
A1～A4，GN无醛快速固定液组，十二指肠切片，HE.染色；a1～a4，福尔马林组，十二指肠切片，HE.染色。
B1～B4，GN无醛快速固定液组，睾丸切片，HE.染色；b1～b4，福尔马林组，睾丸切片，HE.染色。
C1～C4，GN无醛快速固定液组，脾脏切片，HE.染色；c1～c4，福尔马林组，脾脏切片，HE.染色。
对比GN无醛快速固定液组与福尔马林组所固定组织的HE.染色结果，GN无醛快速固定液组固定的组织：
组织结构更加完整：十二指肠HE.染色可见，福尔马林组所固定的组织，肌层与黏膜下层分离，部分肠绒毛断裂，GN无醛快速固定液组所固定的组织，形态结构良好；睾丸HE.染色可见，福尔马林组所固定的组织，白膜层与睾丸实质分离，睾丸小叶分离，睾丸实质内出现裂痕，GN无醛快速固定液组所固定的组织，形态结构良好。
组织着色效果更佳：脾脏切片HE.染色可见，福尔马林组所固定的组织，红髓区与白髓区对比不鲜明，着色效果欠佳，GN无醛快速固定液组所固定的组织，红髓区与白髓区对比鲜明，着色良好。
应用实施例2：将本发明实施例1制得的GN无醛快速固定液与福尔马林固定液分别用于肝脏细胞形态对比，相同着色程度下，对比两种固定液对于组织HE.染色，细胞形态及轮廓的差异。
参见图2，图中，Ⅰ：福尔马林组，肝脏切片，HE.染色，×400；Ⅱ：GN无醛快速固定液组，肝脏切片，HE.染色，×400。
通过调整染色时间，使两组着色效果相近，排除着色差异对试验结果的误差，观察两组肝脏切片，可见福尔马林组所固定的肝脏，细胞膜较为模糊，形态不清晰；GN无醛快速固定液组所固定的肝脏，细胞膜更为清晰，组织结构更加规整。
应用实施例3：将本发明实施例1制得的GN无醛快速固定液与福尔马林固定液所固定的动物组织，分别用于免疫组织化学染色，在相同试验条件下，对比两种固定液对于组织表面抗原的保存效果差异。
参见图3，图中，1～5分别放大：×200，×200，×400，×400，×200，每组对比上下放大倍数相同。
D1～D4，GN无醛快速固定液组，十二指肠切片，SP法免疫组织化学染色，HSPG，稀释1：400。
d1～d4，福尔马林组，十二指肠切片，SP法免疫组织化学染色，HSPG，稀释1：400。
E1～E4，GN无醛快速固定液组，肝脏切片，SP法免疫组织化学染色，HSPG，稀释1：400。
e1～e4，福尔马林组，肝脏切片，SP法免疫组织化学染色，HSPG，稀释1：400。
F1～F4，GN无醛快速固定液组，脾脏切片，SP法免疫组织化学染色，HSPG，稀释1：400。
f1～f4，福尔马林组，脾脏切片，SP法免疫组织化学染色，HSPG，稀释1：400。
D5、d5、E5、e5、F5、f5为各组PBS阴性对照片。
通过对比GN无醛快速固定液组与福尔马林组所固定组织的免疫组织化学染色结果，GN无醛快速固定液组阳性表达强度更高，表达部位鲜明清晰，特异性强；福尔马林组表达强度低，表达特异性差；阴性对照组均无表达。表明GN无醛快速固定液组对组织抗原的固定效果更佳。
选用5周龄体重相近的SPF级ICR小鼠8只（雄性小鼠4只，雌性小鼠4只）。分为：福尔马林组，GN无醛快速固定液组，每组4只小鼠，雌雄各半。将浸有两种固定液的纸片分别放入鼠笼的一角，观察小鼠表现，每天测试一次，每组重复5次。每次观察结束后，取出纸片并更换鼠笼垫料。
选用5周龄体重相近的SPF级ICR小鼠24只（雄性小鼠12只，雌性小鼠12只）。分为：福尔马林经口组，福尔马林染鼻组，GN无醛快速固定液经口组，GN无醛快速固定液染鼻组，生理盐水经口组，生理盐水染鼻组（生理盐水组为阴性对照）。每组4只小鼠，雌雄各半。分别进行经口亚急性毒试验和吸入亚急性毒试验。经口毒试验，用小鼠灌胃针进行灌胃0.5ml/g，每日灌服两次；吸入毒试验，用棉签蘸取两种不同固定液对小鼠染鼻，每日染鼻三次。观察小鼠染毒后的行为表现；记录亚急性毒试验中小鼠死亡时间与数量。试验周期为14天，第15天时，对所有试验用小鼠，采用颈椎脱臼法处死，尸体进行无害化处理。
应用实施例4：将本发明实施例1制得的GN无醛快速固定液与福尔马林固定液分别用于与对小鼠亚急性毒性试验，相同试验条件下，对比两种固定液对于小鼠的毒性差异。
表1 小鼠亚急性毒试验结果
表1中：d代表小鼠死亡的时间/天数，括号（）中，代表小鼠死亡数量。
亚急性毒试验中，福尔马林经口组，在第2天死亡两只雌鼠，分别在第6天，第8天各死亡一只雄鼠；福尔马林经鼻组，分别在第7天，第8天各死亡一只雌鼠，第13天死亡两只雄鼠。GN无醛快速固定液经口组，在第4天，死亡一只雄鼠，其余小鼠截至试验结束前，未发生死亡；GN无醛快速固定液经鼻组，截至试验结束前，未发生死亡。
亚急性毒试验结果表明：经口给药和经鼻给药，GN无醛快速固定液毒性均明显低于福尔马林固定液。
应用实施例5：将本发明实施例1制得的GN无醛快速固定液与福尔马林固定液分别用于固定速度与对小鼠刺激性对比，相同试验条件下，对比两种固定液对于组织固定速度的差异：Ⅲ-Ⅳ，相同试验条件下，对比两种固定液对于小鼠刺激性差异：Ⅴ-Ⅵ。
参见图4，图中，Ⅲ：福尔马林组与GN无醛快速固定液组固定的肝脏大体标本结果；Ⅳ：福尔马林组与GN无醛快速固定液组固定肾脏大体标本结果结果；Ⅴ：福尔马林组对小鼠刺激性验证结果；Ⅵ：GN无醛快速固定液组对小鼠刺激性验证结果。
在两组固定液浸泡组织15天时，分别切开肝脏与肾脏，对剖面观察得：福尔马林组浸泡的肝脏（图Ⅲ下）与肾脏（图Ⅳ左），组织未被完全浸泡透，组织中间部分仍比较新鲜，组织未完全固定；GN无醛快速固定液组浸泡的肝脏（图Ⅲ上）与肾脏（图Ⅳ右），组织被完全浸泡透彻，组织中间部分已被固定，组织固定完好。表明与福尔马林固定液相比，GN无醛快速固定液对组织的固定速度更快。
分别将浸有两组固定液的纸片放入鼠笼一角，观察小鼠反应：福尔马林组（图Ⅴ）小鼠表现惊恐，出现明显的躲闪行为；GN无醛快速固定液组（图Ⅵ）小鼠表现正常，未出现躲闪行为。表明与福尔马林固定液相比，GN无醛快速固定液对小鼠更为温和刺激性更小。
经上述应用试验证明，相比于福尔马林固定液，GN无醛快速固定液更加温和，对小鼠刺激性更小（见图4），毒性更低（见表1），组织的固定速度更快（见图4），对组织形态保存更完整，更容易着色（见图1），组织细胞轮廓更为清晰（见图2），组织抗原保存更完整，免疫组织化学阳性表达强度高，特异性强（见图3）。
综上所述，相比于传统的福尔马林固定液，GN无醛快速固定液是一种毒性低，刺激性小，作用速度快，组织固定效果更佳，抗原保存更完整的新型动物组织固定液。
本发明实施例方法中的步骤可以根据实际需要进行顺序调整、合并和删减。
以上所揭露的仅为本发明较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。
Claims (4)
1.一种GN无醛快速固定液，其特征在于：该GN无醛快速固定液由体积份数为60%～80%的无水乙醇、10%～20%的冰乙酸、5%～10%丙三醇、5%～10%月桂氮酮以及0.3g～1g/100ml的山梨酸钾组成。
2.如权利要求1所述的GN无醛快速固定液，其特征在于：该GN无醛快速固定液由体积份数为70%的无水乙醇、10%的冰乙酸、10%的丙三醇、10%的月桂氮酮以及0.5g/100ml的山梨酸钾组成。
3.一种GN无醛快速固定液的配置方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
将体积份数为60%～80%的无水乙醇、10%～20%的冰乙酸、5%～10%丙三醇、5%～10%月桂氮酮均匀混合后形成第一混合液；
向每100ml的第一混合液中加入0.3g～1g的山梨酸钾，然后搅拌，使山梨酸钾溶解于第一混合液中。
4.如权利要求3所述的GN无醛快速固定液的配置方法，其特征在于：所述无水乙醇的体积份数为70%，冰乙酸的体积份数为10%，丙三醇的体积份数为10%，月桂氮酮的体积份数为10%，每100ml的第一混合液中加入0.5g山梨酸钾。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114279801A (zh) * | 2021-12-24 | 2022-04-05 | 哈尔滨东尧科技有限公司 | 一种可用于多种新鲜组织固定的无甲醛固定液及固定方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101984803A (zh) * | 2010-09-26 | 2011-03-16 | 无锡市江原实业技贸总公司 | 标本防腐固定促进剂 |
| CN106323704A (zh) * | 2015-07-01 | 2017-01-11 | 深圳市廖氏原生物医学科技有限公司 | 环保组织固定液及其生产方法 |
| CN106415234A (zh) * | 2014-05-28 | 2017-02-15 | 凯杰有限公司 | 用于含细胞液体样品的固定剂组合物 |
| CN106818713A (zh) * | 2017-03-29 | 2017-06-13 | 桂林医学院 | 一种病理组织标本的保色防腐液 |
| CN108432740A (zh) * | 2018-04-08 | 2018-08-24 | 黄名义 | 一种标本的保存液 |
-
2019
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Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101984803A (zh) * | 2010-09-26 | 2011-03-16 | 无锡市江原实业技贸总公司 | 标本防腐固定促进剂 |
| CN106415234A (zh) * | 2014-05-28 | 2017-02-15 | 凯杰有限公司 | 用于含细胞液体样品的固定剂组合物 |
| CN106323704A (zh) * | 2015-07-01 | 2017-01-11 | 深圳市廖氏原生物医学科技有限公司 | 环保组织固定液及其生产方法 |
| CN106818713A (zh) * | 2017-03-29 | 2017-06-13 | 桂林医学院 | 一种病理组织标本的保色防腐液 |
| CN108432740A (zh) * | 2018-04-08 | 2018-08-24 | 黄名义 | 一种标本的保存液 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114279801A (zh) * | 2021-12-24 | 2022-04-05 | 哈尔滨东尧科技有限公司 | 一种可用于多种新鲜组织固定的无甲醛固定液及固定方法 |
| CN114279801B (zh) * | 2021-12-24 | 2024-03-29 | 哈尔滨东尧科技有限公司 | 一种可用于多种新鲜组织固定的无甲醛固定液及固定方法 |
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