CN111000755A - 一种增强透明质酸保湿功效的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种增强透明质酸保湿功效的方法，包括，将透明质酸按如下组成配制成组合物A：丁二醇3‑8份、甘油2‑6份、透明质酸小分子0.1‑0.5份、透明质酸中分子0.1‑0.5份、透明质酸大分子0.1‑0.5份、戊二醇1‑5份、甜菜碱0.5‑3份，余量为水，所述组合物A合计为100份。优选地，将所述组合合物A与衍生液混合。本发明将透明质酸及脂肪间充质干细胞条件培养上清液进行混合，并通过组合物的原料、配比的特定搭配关系，使原料间能够达到相互增效的协同作用，在方便涂抹的同时，更加有利于皮肤的吸收、保湿效果持久，更加有利于保护皮肤健康，具有强大的美容作用。

Description

一种增强透明质酸保湿功效的方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其公开了一种增强透明质酸保湿功效的方法。

背景技术

透明质酸(HA)简称玻尿酸，是由N-乙酰氨基葡糖和葡糖醛酸的双糖单元反复交替连接而成，能以自由链形式在体内游离存在。透明质酸以其独特的分子结构和理化性质，广泛分布于人体各部位，在机体内具有调节血管壁通透性，调节蛋白质、水电解质的扩散及转运，促进创伤愈合等多种重要的生理功能，同时，因透明质酸具有特殊的保水作用，是目前发现的自然界中保湿性最好的物质，被广泛应用于化妆品中。

HA 具有良好的保湿作用，并且保湿性比较稳定，适用于不同的季节。HA 可清除表皮受紫外线照射产生的活性氧自由基，还可渗透到皮肤的真皮层，保持皮肤内的水分，促进真皮胶原蛋白和弹性纤维的合成，从而防止皮肤老化，起到美容和养颜作用，在护肤品中具有独一无二的作用。但是在护肤品中无论添加什么物质，如果皮肤不能吸收，都是无济于事。皮肤表面化妆品营养成分过剩，是导致皮肤氧化的重要原因之一，还容易引起皮肤细菌感染。以上说明我们应该重视HA的透皮吸收研究，而不是盲目地添加。

CN106176286A公开了一种透明质酸皮肤护理膜及制备方法，涉及透明质酸技术领域，特别涉及一种透明质酸皮肤护理膜：透明质酸或其盐10%-36%，乙酰化透明质酸或其盐12%-30%，水解透明质酸或其盐12%-36%，保湿剂1%-30%，润肤剂0-20%，其实活性成分0-20%，水5%-15%，以透明质酸及其衍生物为速溶膜中的主要成分，显著改善膜的机械性能，增强柔韧性，兼具成膜剂、增稠剂、皮肤营养保湿剂等功能，且透明质酸对于加入的其它活性成分具有促进吸收、协同增效的作用。然而，该方案中的主要保湿功能仍然由保湿剂来实现，而外加保湿剂并未使得透明质酸本身的保湿性能被激活，无法最大限度的发挥透明质酸的有效活性。

鉴于目前现有的化妆品体系透皮吸收率低，造成透明质酸保湿效果不能发挥至最好的效果的技术问题，提供一种能够促进和增强透明质酸自身保湿功能和吸收效果的方法，成为亟待解决的技术问题。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供增强透明质酸保湿功效的方法，使得经本发明处理后的含有透明质酸的组合物，能够调节皮肤的信号通路，打开水通道蛋白，帮助提高营养物质的透皮吸收率、增强透明质酸的保湿效果。

为实现前述目的，本发明提供一种增强透明质酸保湿功效的方法，包括：

将透明质酸按如下组成配制成组合物A：丁二醇 3-8份、甘油2-6份、透明质酸小分子0.1-0.5份、透明质酸中分子 0.1-0.5份、透明质酸大分子0.1-0.5份、戊二醇 1-5份、甜菜碱 0.5-3份，余量为水，所述组合物A合计为100份。

进一步地，所述组合物A按如下组成配制：丁二醇 5份、甘油 4份、透明质酸小分子0.2份、透明质酸中分子 0.1份、透明质酸大分子 0.2份、戊二醇 2份、甜菜碱 1.5份，余量为水，所述组合物A合计为100份。

进一步地，所述透明质酸小分子的分子量为5600道尔顿。

进一步地，所述透明质酸中分子的分子量为26万道尔顿。

进一步地，所述透明质酸大分子的分子量为130万道尔顿。

进一步地，所述方法还包括，将所述组合物A与衍生液按照体积比为1：（0.5-3）配制成混合物B。

进一步地，所述衍生液为脂肪间充质干细胞培养上清液。

进一步地，所述衍生液的制备方法，包括以下步骤：

1） 在无菌条件下采集脂肪组织，置于培养瓶中；

2） 用与所述脂肪组织等体积的磷酸盐缓冲溶液冲洗三次以除去红细胞；

3） 将I型胶原蛋白酶加入到培养瓶中，使所述I型胶原蛋白酶作用于已经冲洗干净的所述脂肪组织，在37℃的条件下进行消化30-60min；

4） 将步骤3）消化后的产物经过离心，使脂肪和溶液体系发生分层，吸弃上层脂肪，再加入磷酸盐缓冲溶液重悬细胞；

5） 在1200rpm/min的条件下离心，使细胞沉淀，吸走上清液，再用间充质干细胞完全培养基重悬；

6） 将步骤5）重悬后得到的细胞于37℃、二氧化碳浓度为5%的二氧化碳培养箱中培养，每2-3天换液，吸走之前的培养基，换上新鲜的培养基，待细胞融合度达到80%-90%，得到P0代细胞；

当P0代细胞达到90%以上融合时，用质量体积比浓度为0.25%的胰酶消化所述P0代细胞，按1：（3-5）的比例进行传代，获得P1代细胞，依次进行传代获得P2-P6脂肪间充质干细胞；

将获取的P2-P6脂肪间充质干细胞在10cm培养皿中培养，培养条件为：培养箱的温度设置为37℃、二氧化碳浓度为5%，当生长到80%-90%的汇合度时，收集培养上清液，在低温离心机设置为4℃的条件下，设置为2000g、离心10分钟，取上清液，过0.22um滤膜，获得的细胞培养上清液为条件培养基，将所述条件培养基放于冰箱中，在4℃条件下储存备用，即得所述衍生液。

本发明的有益效果：

本发明将透明质酸及脂肪间充质干细胞条件培养上清液进行混合，并通过组合物的原料、配比的特定搭配关系，使原料间能够达到相互增效的协同作用，在方便涂抹的同时，更加有利于皮肤的吸收、保湿效果持久，更加有利于保护皮肤健康，具有强大的美容作用。

附图说明

图1 将组合物A与水按体积比1:2混合，然后涂抹于受试者面部后，进行的水分测试示意图；

图2 将组合物A与衍生液按体积比1:2混合，然后涂抹于受试者面部后，进行的水分测试示意图。

具体实施方式

实施例1

一种增强透明质酸保湿功效的方法，将透明质酸按如下组成配制成组合物A：丁二醇 3份、甘油2份、透明质酸小分子 0.5份、透明质酸中分子 0.3份、透明质酸大分子0.3份、戊二醇 2份、甜菜碱 3份，余量为水，所述组合物A合计为100份；

所述衍生液的制备方法，包括以下步骤：

1） 在无菌条件下采集脂肪组织，置于培养瓶中；

2） 用与所述脂肪组织等体积的磷酸盐缓冲溶液冲洗三次以除去红细胞；

3） 将I型胶原蛋白酶加入到培养瓶中，使所述I型胶原蛋白酶作用于已经冲洗干净的所述脂肪组织，在37℃的条件下进行消化35min；

4） 将步骤3）消化后的产物经过离心，使脂肪和溶液体系发生分层，吸弃上层脂肪，再加入磷酸盐缓冲溶液重悬细胞；

5） 在1200rpm/min的条件下离心，使细胞沉淀，吸走上清液，再用间充质干细胞完全培养基重悬；

6） 将步骤5）重悬后得到的细胞于37℃、二氧化碳浓度为5%的二氧化碳培养箱中培养，每2-3天换液，吸走之前的培养基，换上新鲜的培养基，待细胞融合度达到80%，得到P0代细胞；

当P0代细胞达到90%以上融合时，用质量体积比浓度为0.25%的胰酶消化所述P0代细胞，按1：3的比例进行传代，获得P1代细胞，依次进行传代获得P2-P6脂肪间充质干细胞；

将获取的P2-P6脂肪间充质干细胞在10cm培养皿中培养，培养条件为：培养箱的温度设置为37℃、二氧化碳浓度为5%，当生长到80%的汇合度时，收集培养上清液，在低温离心机设置为4℃的条件下，设置为2000g、离心10分钟，取上清液，过0.22um滤膜，获得的细胞培养上清液为条件培养基，将所述条件培养基放于冰箱中，在4℃条件下储存备用，即得所述衍生液；

将所述组合物A与所述衍生液按体积比1：2进行混合，得到样品一。

实施例2

一种增强透明质酸保湿功效的方法，将透明质酸按如下组成配制成组合物A：丁二醇 5份、甘油4份、透明质酸小分子 0.2份、透明质酸中分子 0.1份、透明质酸大分子0.2份、戊二醇 2份、甜菜碱 1.5份，余量为水，所述组合物A合计为100份；

所述衍生液的制备方法，包括以下步骤：

1） 在无菌条件下采集脂肪组织，置于培养瓶中；

2） 用与所述脂肪组织等体积的磷酸盐缓冲溶液冲洗三次以除去红细胞；

3） 将I型胶原蛋白酶加入到培养瓶中，使所述I型胶原蛋白酶作用于已经冲洗干净的所述脂肪组织，在37℃的条件下进行消化40min；

4） 将步骤3）消化后的产物经过离心，使脂肪和溶液体系发生分层，吸弃上层脂肪，再加入磷酸盐缓冲溶液重悬细胞；

5） 在1200rpm/min的条件下离心，使细胞沉淀，吸走上清液，再用间充质干细胞完全培养基重悬；

6） 将步骤5）重悬后得到的细胞于37℃、二氧化碳浓度为5%的二氧化碳培养箱中培养，每2-3天换液，吸走之前的培养基，换上新鲜的培养基，待细胞融合度达到85%，得到P0代细胞；

当P0代细胞达到90%以上融合时，用质量体积比浓度为0.25%的胰酶消化所述P0代细胞，按1：5的比例进行传代，获得P1代细胞，依次进行传代获得P2-P6脂肪间充质干细胞；

将获取的P2-P6脂肪间充质干细胞在10cm培养皿中培养，培养条件为：培养箱的温度设置为37℃、二氧化碳浓度为5%，当生长到80%的汇合度时，收集培养上清液，在低温离心机设置为4℃的条件下，设置为2000g、离心10分钟，取上清液，过0.22um滤膜，获得的细胞培养上清液为条件培养基，将所述条件培养基放于冰箱中，在4℃条件下储存备用，即得所述衍生液；

将所述组合物A与所述衍生液按体积比1：2进行混合，得到样品二。

实施例3

一种增强透明质酸保湿功效的方法，将透明质酸按如下组成配制成组合物A：丁二醇 3份、甘油2份、透明质酸小分子 0.5份、透明质酸中分子 0.3份、透明质酸大分子0.3份、戊二醇 2份、甜菜碱 3份，余量为水，所述组合物A合计为100份；

所述衍生液的制备方法，包括以下步骤：

1） 在无菌条件下采集脂肪组织，置于培养瓶中；

2） 用与所述脂肪组织等体积的磷酸盐缓冲溶液冲洗三次以除去红细胞；

3） 将I型胶原蛋白酶加入到培养瓶中，使所述I型胶原蛋白酶作用于已经冲洗干净的所述脂肪组织，在37℃的条件下进行消化45min；

4） 将步骤3）消化后的产物经过离心，使脂肪和溶液体系发生分层，吸弃上层脂肪，再加入磷酸盐缓冲溶液重悬细胞；

5） 在1200rpm/min的条件下离心，使细胞沉淀，吸走上清液，再用间充质干细胞完全培养基重悬；

6） 将步骤5）重悬后得到的细胞于37℃、二氧化碳浓度为5%的二氧化碳培养箱中培养，每2-3天换液，吸走之前的培养基，换上新鲜的培养基，待细胞融合度达到80%，得到P0代细胞；

当P0代细胞达到90%以上融合时，用质量体积比浓度为0.25%的胰酶消化所述P0代细胞，按1：4的比例进行传代，获得P1代细胞，依次进行传代获得P2-P6脂肪间充质干细胞；

将获取的P2-P6脂肪间充质干细胞在10cm培养皿中培养，培养条件为：培养箱的温度设置为37℃、二氧化碳浓度为5%，当生长到80%的汇合度时，收集培养上清液，在低温离心机设置为4℃的条件下，设置为2000g、离心10分钟，取上清液，过0.22um滤膜，获得的细胞培养上清液为条件培养基，将所述条件培养基放于冰箱中，在4℃条件下储存备用，即得所述衍生液；

将所述组合物A与所述衍生液按体积比1：2进行混合，得到样品三。

如图1、图2所示，其中的对照测试前的条形图，是指涂抹样品前受试者的面部通过水分测试仪所得的水含量分值；对照测试后的条形图，是指涂抹样品后2小时后，通过水分测试仪测试的受试者面部的水含量分值；而参考值的条形图，是指输入受试者年龄、性别等参数后，理论上的水含量分值。从图中可见，将组合物1与水按1:2体积比进行混合后，受试者涂抹于面部后，2小时过去，其水含量分值高于未涂抹时的水含量分值，但其与仪器给出的参考值还有很大差距。而图2中，受试者在使用组合物A与衍生液按1:2的体积比混合的样品后，其使用2小时过去，皮肤的水含量分值远高于未涂抹的状态，并且极其接近仪器给出的参考值，可见，使用本发明的配方能够有效的提高透明质酸的保湿效果。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作任何其他形式的限制，而依据本发明的技术实质所作的任何修改或等同变化，仍属于本发明所要求保护的范围。

Claims (8)

1.一种增强透明质酸保湿功效的方法，其特征在于，包括：

将透明质酸按如下组成配制成组合物A：丁二醇 3-8份、甘油2-6份、透明质酸小分子0.1-0.5份、透明质酸中分子 0.1-0.5份、透明质酸大分子0.1-0.5份、戊二醇 1-5份甜菜碱0.5-3份，余量为水，所述组合物A合计为100份。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述组合物A按如下组成配制：丁二醇 5份、甘油 4份、透明质酸小分子 0.2份、透明质酸中分子 0.1份、透明质酸大分子 0.2份、戊二醇 2份、甜菜碱 1.5份，余量为水，所述组合物A合计为100份。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述透明质酸小分子的分子量为5600。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述透明质酸中分子的分子量为26万。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述透明质酸大分子的分子量为130万。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法还包括，将所述组合物A与衍生液按照体积比为1：（0.5-3）配制成混合物B。

7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于，所述衍生液为脂肪间充质干细胞培养上清液。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述衍生液的制备方法，包括以下步骤：

1） 在无菌条件下采集脂肪组织，置于培养瓶中；

2） 用与所述脂肪组织等体积的磷酸盐缓冲溶液冲洗三次以除去红细胞；

3） 将I型胶原蛋白酶加入到培养瓶中，使所述I型胶原蛋白酶作用于已经冲洗干净的所述脂肪组织，在37℃的条件下进行消化30-60min；

4） 将步骤3）消化后的产物经过离心，使脂肪和溶液体系发生分层，吸弃上层脂肪，再加入磷酸盐缓冲溶液重悬细胞；

5） 在1200rpm/min的条件下离心，使细胞沉淀，吸走上清液，再用间充质干细胞完全培养基重悬；

6） 将步骤5）重悬后得到的细胞于37℃、二氧化碳浓度为5%的二氧化碳培养箱中培养，每2-3天换液，吸走之前的培养基，换上新鲜的培养基，待细胞融合度达到80%-90%，得到P0代细胞；

当P0代细胞达到90%以上融合时，用质量体积比浓度为0.25%的胰酶消化所述P0代细胞，按1：（3-5）的比例进行传代，获得P1代细胞，依次进行传代获得P2-P6脂肪间充质干细胞；

将获取的P2-P6脂肪间充质干细胞在10cm培养皿中培养，培养条件为：培养箱的温度设置为37℃、二氧化碳浓度为5%，当生长到80%-90%的汇合度时，收集培养上清液，在低温离心机设置为4℃的条件下，设置为2000g、离心10分钟，取上清液，过0.22um滤膜，获得的细胞培养上清液为条件培养基，将所述条件培养基放于冰箱中，在4℃条件下储存备用，即得所述衍生液。

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