CN110944657A

CN110944657A - 靶向隐性tert表位的疫苗用于治疗hla-a*0201-阳性的从不吸烟者或轻度的曾经的吸烟者患者的肺癌的用途

Info

Publication number: CN110944657A
Application number: CN201880030509.7A
Authority: CN
Inventors: 科斯坦提努斯（科斯塔斯）·科斯马托普洛斯; J·梅内兹-贾梅
Original assignee: Vaxon Biotech SA
Current assignee: Jinwei Biopharmaceutical Technology Co ltd
Priority date: 2017-05-09
Filing date: 2018-05-04
Publication date: 2020-03-31
Also published as: HUE063049T2; CA3061559A1; JP7406792B2; PL3634461T3; EP3634461B8; EP3400954A1; EP3634461A1; ES2958748T3; EP3634461B1; US20200079819A1; WO2018206462A1; EP3634461C0; JP2020520349A

Abstract

本发明涉及由两种九个氨基酸的肽‑由肿瘤细胞表达的WT隐性TERT572(RLFFYRKSV，SEQ ID No:1)及其优化变体TERT572Y(YLFFYRKSV，SEQ ID No:2)组成的肿瘤疫苗用于治疗患有表达端粒末端转移酶逆转录酶(TERT)的非小细胞肺癌(NSCLC)的HLA‑A*0201阳性患者的癌症的用途，其中所述患者是从不吸烟者或轻度的曾经的吸烟者。

Description

靶向隐性TERT表位的疫苗用于治疗HLA-A*0201-阳性的从不吸烟者或轻度的曾经的吸烟者患者的肺癌的用途

发明领域

本发明涉及癌症免疫疗法领域，更具体地涉及抗肿瘤疫苗接种领域。

背景技术

癌症免疫疗法旨在刺激识别肽的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)，所述肽源自肿瘤抗原并由HLA I类分子呈递在肿瘤细胞表面。取决于其对MHC分子的亲和力，CTL靶向的肽可以是显性的或隐性的。

与肿瘤特异性且最经常是患者特异性的新抗原相反，肿瘤相关抗原(TAA)经常在肿瘤细胞和正常组织二者中表达。为了克服对TAA耐受性的问题且同时仍然靶向肿瘤广泛表达的抗原，本发明人提出了一种疫苗(Vx-001)，该疫苗靶向来自端粒末端转移酶(Telomerase)逆转录酶(TERT)的一种隐性肽，即对HLA-A*0201分子显示低亲和力并形成不稳定的肽/HLA-I复合物(Menez-Jamet J.等人,2016)的肽。考虑到HLA-I亲和力和免疫原性之间的强相关性，这种隐性肽天然不是免疫原性的。因此，为了将其用作癌症疫苗，对该隐性肽进行了优化以增强其免疫原性。

因此，Vx-001由两种九个氨基酸的肽组成：肿瘤细胞表达的WT隐性TERT572(RLFFYRKSV，SEQ ID No:1)和其优化的变体TERT572Y(YLFFYRKSV，SEQ ID No:2)。这两种肽单独地与佐剂Montanide

VG(一种高度纯化的矿物油(Drakeol 6VR)和表面活性剂(二缩甘露醇一油酸)的混合物)共同给药。在最初的两次疫苗接种中给予优化的具有免疫原性的TERT572Y，以触发大的免疫应答。在后续疫苗接种中给予WT TERT572，以便从所有TERT572Y刺激的T细胞中选择具有对与HLA-A*0201相关的肿瘤细胞表面呈递的WT TERT572具有最高特异性的细胞。

非小细胞肺癌(NSCLC)，包括腺癌、鳞状细胞癌和大细胞癌，是最常见的肺癌类型，约占肺癌病例的80％；全世界每年约有120万新病例。

绝大多数(85％)肺癌病例归因于长期吸烟。自1950年代以来，已证实了吸烟作为肺癌风险因素的关联性。

但是，测量一个人的烟草暴露并不明显，因为所有吸烟者都不会吸食相同量的香烟，而且吸烟者随着时间会经常改变其吸烟习惯。此外，对烟草诱变剂的敏感性存在一定程度的个体差异。因此，提出了几种方法来量化吸烟相关的风险因素，以根据客观参数对癌症患者进行分层。

第一种方法是使用“包-年(pack-year)”单位来测量一个人长时间吸烟的数量。包-年定义为一年中每天吸食二十支香烟。一个人的包-年数是通过每天吸的烟包数乘以该人每天以该量吸烟的年数来计算的。例如，一包-年等于一年内每天吸烟20支香烟(一包)，或者半年内每天吸烟40支，或者两年内每天吸烟10支等。因此，该参数不仅考虑吸烟时间，而且考虑吸烟强度。

其他方法基于吸烟分子标识的识别，这些标识反映了每个人吸烟的后果。在最近的研究中，Rizvi等人基于肿瘤细胞中颠换突变的数量证明了分子吸烟标识的存在(RizviNA.等人2015)。该参数关注的是吸烟的影响，而不是个人吸食的烟草量，并且将高颠换(TH，吸烟标识)肿瘤与低颠换(TL，从不吸烟标识)肿瘤区分开来。

Dogan等人(Dogan S.等人2012)描述了另一种基于EGFR和/或KRAS基因突变的数量和/或性质的分子吸烟标识。在该出版物中，作者报告说，在肺癌中，从未吸烟者的肿瘤中EGFR突变的发生率远高于吸烟者，这与KRAS中的突变相反，后者更多见于吸烟者中。他们观察到与包-年无关，增加不吸烟年数会增加EGFR突变的可能性。他们还表明，吸烟者中最常见的G>T颠换突变(KRAS G12C)在女性中更为常见，并且这些女性比具有相同突变的男性更年轻，这表明对于烟草致癌物，女性比男性更敏感。

大约10-15％的肺癌病例发生在从未吸烟或轻度吸烟的人中。与吸烟无关的肺癌可能归因于其他风险因素，包括环境、激素、月经周期和病毒感染。

重要的是，与吸烟无关的肺癌比与吸烟有关的肺癌的预后更差。

吸烟与高的肿瘤突变负担高度相关，而与吸烟无关的肺癌的特征在于低水平的肿瘤突变(Rizvi NA.,等人2015)。这就是为什么与吸烟诱发的肺癌相比，从不吸烟者或轻度吸烟者的肺癌对免疫检查点抑制剂不敏感。

在随机的IIb期临床试验中，对转移性或复发性I-III期NSCLC患者进行了Vx-001测试，这些患者在进行了四个周期的基于铂的化疗后均经历了疾病控制。

患者需要是HLA-A*0201阳性并具有表达TERT的肿瘤。该研究的主要目的是总体生存期。这项研究的结果在全球范围内不是统计学上显著的，但是结果的详细分析，同时考虑患者的吸烟史分析以及患者的其他特征，例如他们对疫苗的特异性免疫应答(免疫监测数据)，年龄等，导致患者分层，从而确定了经证明受益于Vx-001疫苗接种的患者类别。

发明内容

本发明涉及更可能对Vx-001疫苗接种有应答的患者的选择，Vx-001是由两种分别施用的肽(SEQ ID No:1和SEQ ID No:2)组成。

本发明涉及该疫苗及其每种组分在治疗患有表达端粒末端转移酶逆转录酶(TERT)的非小细胞肺癌(NSCLC)的HLA-A*0201阳性患者的癌症中的用途，其中所述患者为从不吸烟者或轻度吸烟者，即在不到25年或不到30年的时间里曾经吸烟。如果患者是轻度吸烟者，则该患者优选是轻度的曾经的吸烟者，即在NSCLC诊断之前停止吸烟的轻度吸烟者。

本发明还涉及一种用于确定患有表达TERT的NSCLC的HLA-A*0201阳性的从不吸烟者或轻度吸烟者是否更有可能对Vx-001作出应答的治疗诊断方法，其中如果肿瘤是非免疫原性的，则该患者更有可能成为良好的应答者。

本发明的另一方面是用于进行该治疗诊断方法的试剂盒。

附图说明

图1：疫苗接种方案

图2：具有(左)或没有(右)天然免疫的患者对不同肿瘤抗原的应答

图3：所有评估患者的临床结果(OS和TTF)

图4：从不吸烟者和轻度的曾经的吸烟者(烟龄少于25年)的临床结果(安慰剂为29例，接种疫苗为26例)；11.2vs 16.2mo；p＝0.07；HR＝0.59(0.32-1.06)

图5：没有天然免疫的从不吸烟者和轻度的曾经的吸烟者(烟龄少于25年)的临床结果(安慰剂为16例，接种疫苗为17例)；7.9vs 20.7mo；p＝0.0007；HR＝0.29(0.13-0.67)

图6：在一线化疗后进入稳定疾病(SD)研究的从不吸烟者和轻度的曾经的吸烟者(烟龄少于25年)的临床结果(安慰剂为14例，接种疫苗为15例)；12.4vs 24.7mo；p＝0.004；HR＝0.33(0.14-0.78)

图7：男性从不吸烟者和轻度的曾经的吸烟者(烟龄少于25年)的临床结果(安慰剂为18例，接种疫苗为14例)；11.1vs 24.7mo；p＝0.01；HR＝0.37(0.16-0.81)

具体实施方式

根据第一个实施方案，本发明涉及优化的肽TERT572Y(SEQ ID No:2的肽)用于在患有表达TERT的NSCLC的HLA-A*0201-阳性患者中诱导抗肿瘤CTL应答的用途，其中所述患者是从不吸烟者或轻度吸烟者。

当进行该抗癌免疫疗法时，用TERT572Y进行的疫苗接种诱导针对隐性肽TERT572(SEQ ID No:1)的CTL应答。

然后优选通过用SEQ ID No:1的肽进行疫苗接种来维持(或放大)通过用SEQ IDNo:2的肽进行初始疫苗接种诱导的CTL应答。

如本文所用，术语“治疗(treat、treatment和treating)”是指因施用一种或多种疗法而导致的进展的延缓，严重程度的降低，例如其生活质量的改善和/或存活率的增加。

本发明还涉及天然肽TERT572(SEQ ID No:1的肽)用于治疗患有表达TERT的NSCLC的HLA-A*0201-阳性患者的肺癌的用途，其中所述患者是从不吸烟者或轻度吸烟者，其已经用SEQ ID No:2的肽进行了至少一次(并且优选两次)疫苗接种。在这种免疫疗法的治疗框架中，SEQ ID No:1的肽维持了通过用SEQ ID No:2的肽对患者进行疫苗接种而引发的CTL免疫应答。

本发明还涉及Vx-001，即SEQ ID No:1和SEQ ID No:2的肽的组合在治疗患有表达TERT的NSCLC的HLA-A*0201-阳性患者的肺癌中的用途，其中所述患者是从不吸烟者或轻度吸烟者。如已经描述的，Vx-001的两种肽被分开施用。首先通过给患者疫苗接种SEQ ID No:2的肽来诱导针对肿瘤抗原TERT，更确切地说是针对SEQ ID No:1的隐性TERT572肽的CTL应答，然后通过给患者疫苗接种SEQ ID No:1的肽来维持这种CTL应答。

如本文所用，“吸烟者”是指无论每天/每周/每月吸烟的数量，该个体吸烟(现吸烟者)，或者不再吸烟但一生中曾经吸烟(曾经的吸烟者)；吸烟的持续时间可以相当于一个人一生中的一个时期，或者如果该个体中断了他/她的吸烟习惯，则可以相当于几个时期的加和。

“从不吸烟者”(也称为“非吸烟者”)是指他/她的一生中吸烟少于20支的人。

在本文中，“轻度吸烟者”是指在最多30年，优选最多25年内是吸烟者的人。此参数在本文中如此定义的原因有二：(i)在IIb期研究队列中有关患者吸烟史的唯一可用信息是他们定期吸烟的年数；(ii)该参数导致将对Vx-001疫苗接种应答显著不同的患者分层为以下两种人群(一方面是从不吸烟者+曾经的轻度吸烟者，另一方面是重度吸烟者和当前的吸烟者)。如果仅考虑吸烟时间而不考虑患者是否仍在吸烟，则可以获得甚至更重要的结果。这导致区分了一方面对治疗具有更好应答的从不吸烟者和轻度吸烟者，另一方面是对治疗不怎么有效的重度吸烟者。

当然，可以改变“轻度吸烟者”的定义以使用测量烟草暴露的任何其他参数。通过使用另一队列的结果，本领域技术人员可以使“轻度轻烟者”的定义适应于测量烟草暴露的这种替代方式。测量烟草暴露的非限制性示例包括：

-吸烟包-年：如上所述，该参数不仅考虑吸烟时间，还考虑吸烟强度。当然，本领域技术人员可以在NSCLC患者队列中确定合适的包-年阈值，以在本发明的框架中区分轻度吸烟者与重度吸烟者。

-基于肿瘤细胞颠换突变量的分子吸烟标识：如上所述，Rizvi等人(2015)区分了高颠换(TH，吸烟标识)和低颠换(TL，从不吸烟标识)肿瘤。当然，区分人群的阈值(在肿瘤中观察到的颠换量)可以调整为将一些吸烟者(具有中等数量的颠换突变)归为轻度吸烟者类别和从不吸烟者，并确定重度吸烟者标识为表现出更多颠换的患者。这种区分轻度吸烟者与重度吸烟者的方式是有利的，因为它独立于患者的声明(可能有偏差)，而且不依赖于个体对烟草诱发的突变的敏感性。

-基于EGFR和/或KRAS基因中突变的数量和/或性质的分子吸烟标识：如上所述，Dogan等人(2012)描述了一种基于对某些基因(例如EGFR和KRAS)的分析的分子吸烟标识，可以将那些具有经常由烟草引起的突变的NSCLC患者与那些具有与烟草无关的突变的患者区分开(从不吸烟+轻度吸烟)。根据本发明，这样的分子标识当然可以由本领域技术人员完善并且改造以区分NSCLC患者，以确定最可能对Vx-001疫苗接种具有应答的患者。

根据本发明的具体实施方案，将Vx-001施用于从不吸烟者或曾经在少于25年(或至多25年)的时间里吸烟的曾经的吸烟者。

根据另一个具体的实施方案，该患者是从不吸烟者或曾经的吸烟者，该曾经的吸烟者在NSCLC诊断之前已停止吸烟至少5，至少7，至少10或至少15年。

根据以下实验部分所述的优选实施方案，患者首先接受SEQ ID No:2肽的2次疫苗接种，然后接受SEQ ID No:1肽的4次疫苗接种，所述疫苗接种之间间隔三周(“诱导期”)。当然，技术人员(医师或临床研究者)可以选择不同的疫苗接种方案。可能的变化包括用于诱导CTL应答的用SEQ ID No:2进行的初始疫苗接种次数(一次、两次或更多次)，疫苗接种之间的间隔(例如1至4周或更长时间)，该诱导期中用SEQ ID No:1进行的疫苗接种数(1至10或更多)，以及疫苗的制剂。特别是，可以测试不同于Montanide的佐剂，并且可能需要对方案进行调整。

根据另一个实施方案，在上述诱导期之后，患者接受用SEQ ID No:1的肽进行的额外疫苗接种，以维持针对TERT的CTL应答(“稳定期”)。这些额外的疫苗接种可以例如每3个月进行一次。可以施用直至复发。当然，技术人员(医师或临床研究者)可以为稳定期选择不同的方案。可能的变化包括与疫苗接种间隔有关的变化(例如，可以每月，每2个月或更不频繁地(例如每6个月一次，尤其是长期缓解后)进行疫苗接种)，以及使用的肽。实际上，临床医生可以选择定期监控CTL应答，并且如果观察到应答降低，则可以再次用SEQ ID No:2的肽为患者接种疫苗。换句话说，临床医生可以根据患者的应答和状态来调整稳定期。

根据本发明的另一个具体实施方案，在用SEQ ID No:2的肽进行第一次疫苗接种之前，患者已经接受了一线化疗，例如基于铂(例如基于顺铂)的化疗。在这种情况下，患者优选在用SEQ ID No:2的肽进行疫苗接种之前/时，患有非进行性疾病，更优选患有稳定疾病。

在本发明的框架中考虑了其他治疗方案。例如，Vx-001可以在化疗之前或期间施用给患有表达TERT的NSCLC的HLA-A*0201阳性的从不吸烟者或轻度吸烟者。对于患有表达TERT的非免疫原性肿瘤的HLA-A*0201阳性的从不吸烟者或轻度吸烟者而言，也可以有利地考虑一线Vx-001治疗。在这种情况下，将在诊断时，例如通过使用酶联免疫斑点(ELISpot)IFNg测定或通过任何其他方法(例如TIL检测或基因表达分型)检测肿瘤抗原特异性CTL，从而确定肿瘤的免疫原性状态。

如以下实验部分所示，发明人在接种Vx-001之前测量了针对多种肿瘤抗原的CTL应答。通过这样做，他们表明在开始用Vx-001进行免疫疗法之前，对TERT572有CTL应答的患者也对其他肿瘤表位具有CTL应答。因此，他们假设一些患者患有免疫原性肿瘤，而其他患者(对肿瘤抗原没有明显CTL应答)则具有非免疫原性肿瘤。他们还表明，患有非免疫原性肿瘤的从不吸烟者和轻度的曾经的吸烟者比患有免疫原性肿瘤的从不吸烟者和轻度的曾经的吸烟者对Vx-001的应答明显更好。因此，本发明的一个优选实施方案是Vx-001或其组分在治疗患有非免疫原性的表达TERT的NSCLC的HLA-A*0201阳性的从不吸烟者或轻度的曾经的吸烟者患者中的用途。

在本文中，“免疫原性肿瘤”表示引发针对肿瘤抗原的显著CTL应答的肿瘤。在实施本发明时，可以通过测量来自患者的血液样本中对TERT572(SEQ ID No:1)特异的CTL的数量和/或对TERT540(SEQ ID No:3)特异的CTL的数量，和/或对另一种肿瘤抗原特异的CTL的数量来评估肿瘤的免疫原性。例如，可以通过测量针对存活素的CTL应答来评估肿瘤的免疫原性，所述存活素是大多数肿瘤表达的通用肿瘤抗原(Andersen和Thor，2002)。在本文考虑的HLA-A*0201阳性患者中，可以通过测量来自患者的血液样本中对表位存活素96(SEQ IDNo:5)具有特异性的CTL的数量来检测该应答。

相反地，如果在来自患者的血液样本中未检测到对TERT572(SEQ ID No:1)、TERT540(SEQ ID No:3)和/或存活素96(SEQ ID No:5)具有特异性的CTL应答，则该肿瘤将被视为“非免疫原性的”。以下实验部分所述的IFNg ELISpot测定可用于检测对TERT572肽或任何其他肿瘤表位具有特异性的T细胞。当然，如以下实验部分所述，在对肿瘤抗原测试肽的应答与对非相关肽的应答之间没有显著差异的情况下，可以认为对所测试的肿瘤肽没有特异性应答，即，该肿瘤是非免疫原性的。

或者，可通过例如使用免疫评分(Pagès F.等人,2009)来测量肿瘤活检组织中肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的水平，或使用基因分型方法(Galon J.等人,2013,Rizvi NA.等人,2015,Wang,E.等人2013)确定肿瘤的基因表达谱，评估肿瘤的免疫原性。

发明人发现，在一些患者中，在化疗后检测到针对肿瘤的CTL应答，这可能是因为化疗后的肿瘤细胞裂解导致释放了能够诱导这些患者中抗肿瘤免疫应答的大量肿瘤表位。这些肿瘤特异性CTL在化疗结束后即可被高度检测到，然后在接下来的几周内CTL的数量减少。发明人的假设是，这种CTL应答出现在患有免疫原性肿瘤的患者中，所述患者是对其他免疫疗法例如抗PD(L)1治疗完全应答的患者。因此，对于接受化疗例如基于铂的一线化疗的患者，优选在所述化疗结束后少于2周，例如在化疗结束后少于7天时评估肿瘤的免疫原性状态。

根据本发明的一个具体实施方案，如果在基于铂的一线化疗结束后少于2周，优选少于7天的时间内收集的患者血液样本中没有检测到对TERT572(SEQ ID No:1)具有特异性的CTL应答，则认为该肿瘤是非免疫原性的。

根据本发明的另一个具体实施方案，如果在基于铂的一线化疗结束后少于2周，优选少于7天的时间内收集的患者血液样本中没有检测到对TERT540(SEQ ID No:3)具有特异性的CTL应答，则认为该肿瘤是非免疫原性的。

根据本发明的另一个具体实施方案，如果在基于铂的一线化疗结束后少于2周，优选少于7天的时间内收集的患者血液样本中没有检测到对存活素96(SEQ ID No:5)具有特异性的CTL应答，则认为该肿瘤是非免疫原性的。

根据本发明的另一个具体实施方案，所述患者患有转移性癌症。临床试验的结果确实表明，在从不吸烟者和轻度吸烟者中，患有转移性NSCLC(IV期)的患者对治疗的应答优于患有复发的I-III期NSCLC的患者。

根据本发明的另一个具体实施方案，患者是男性。该临床试验的结果确实表明，在从不吸烟者和轻度的曾经的吸烟者中，男性患者对治疗的应答更好。当考虑从不吸烟者和所有轻度吸烟者(包括目前的吸烟者和吸烟时间不到25年的患者)时，这些结果甚至更为显著(表7)。

根据本发明的另一具体实施方案，患者患有非鳞状(NSQ)NSCLC。确实，临床试验的结果表明，在从不吸烟者和轻度的曾经的吸烟者中，非鳞状(NSQ)NSCLC患者对治疗的应答更好。

根据本发明的另一具体实施方案，患者的ECOG＞0，优选ECOG＝1。临床试验的结果确实显示，在从不吸烟者和轻度的曾经的吸烟者中，ECOG＝1的患者比ECOG＝0的患者对治疗的应答更好。

根据另一方面，本发明涉及一种体外测定患有TERT阳性NSCLC的HLA-A*0201-阳性的从不吸烟者或轻度吸烟者患者是否更可能是用SEQ ID NO:1和2的肽接种的免疫疗法治疗的良好应答者的方法，该方法包括评估肿瘤的免疫原性，其中如果肿瘤是非免疫原性的，则患者更可能是所述免疫疗法治疗的良好应答者。

当执行该方法时，可以通过测量来自所述个体的血液样本中对SEQ ID No:1的肽特异的CTL应答，和/或通过测量对SEQ ID No:3的肽特异的CTL应答，和/或通过测量对SEQID No:5的肽特异的CTL应答来评估肿瘤的免疫原性，其中如果没有检测到这种CTL应答，则该肿瘤是非免疫原性的。

根据上述方法的具体实施方案，通过酶联免疫斑点(ELISpot)IFNg测定法检测对SEQ ID No:1的肽，或对SEQ ID No:3的肽，或对SEQ ID No:5的肽，或对任何其他相关肿瘤特异性肽特异的CTL应答。

根据该方法的另一个具体实施方案，在一线化疗结束后少于两周，优选在一线化疗结束后少于七天，评估肿瘤的免疫原性。

当然，当执行根据本发明的治疗方法时，可以使用任何其他方法来评估肿瘤的免疫原性。特别地，这可以通过测量来自肿瘤的活检中的TIL的量或通过基因分型来完成。

本发明还涉及用于进行上述治疗诊断方法的要素的试剂盒，其包括(i)用于进行ELISpot测定的试剂和板，(ii)选自SEQ ID No:1、SEQ ID No:3和SEQ ID No:5的肽，和(iii)作为阴性对照的非相关肽。

根据本发明的另一种试剂盒包括用于检测肿瘤细胞中的分子吸烟标识的材料。例如，这样的试剂盒可以包括用于检测某些基因例如EGFR和KRAS中的特定突变的DNA探针。

根据本发明的另一种要素的试剂盒包括用于评估肿瘤的免疫原性的试剂，以及用于检测肿瘤细胞中分子吸烟标识的材料。

通过本说明书，以及随后的临床研究和生物学测定，本发明的其他特征也将变得显而易见，所述临床研究和生物学测定在本发明的框架内进行，并且在不限制其范围的情况下提供了所需的实验支持。

实验结果

材料与方法

研究设计和参与者

Vx-001-201研究是在法国、德国、西班牙、意大利、希腊、波兰、罗马尼亚和捷克共和国的70个中心进行的随机、双盲多中心研究。关键入组标准为：a)非小细胞肺癌(NSCLC)；b)IV期或复发期I-III；c)根据RECIST 1.1标准进行基于铂的一线化疗后的疾病控制；d)HLA-A*0201阳性；e)表达端粒末端转移酶逆转录酶(TERT)的肿瘤；f)ECOG 0或1；g)没有脑转移。

该研究是根据《赫尔辛基宣言》以及所有适用的法规和道德要求进行的。这项研究已根据当地法律由负责每个研究地点的独立伦理委员会批准。所有患者均提供了书面知情同意书。

终点

a)主要终点：由随机化测得的总生存期(OS)

b)次要终点：

-由随机化测得的治疗失败时间(TTF)

-12个月的OS

c)主要探索目标

-疫苗诱导的特异性免疫应答的评估

-疫苗特异性免疫应答与临床应答之间的相关性

程序和疫苗接种方案

一线化疗结束后4周内，将符合所有入选标准的患者随机分组。

疫苗接种方案包括以三周间隔进行的六次疫苗接种。优化的Vx-001/TERT572Y用于前两次疫苗接种，而天然Vx-001/TERT572用于随后的四次疫苗接种。在第六次接种后继续控制疾病的患者每三个月接受用Vx-001/TERT572进行的加强疫苗接种。在疾病进展时停止接种疫苗(图1)。

在第一次疫苗接种之前(基线)、第三次疫苗接种之前(W6)和第六次疫苗接种之后(W18)评估免疫应答。每六个月监测接受加强疫苗接种的患者的免疫应答。

统计分析

为了计算样本量，我们估计安慰剂组的中值OS为9.8个月，而Vx-001组的中值OS为15.2个月。因此，我们需要将220名患者(包括在最终分析中退出的10％)随机分组，以达到83％的检验效能和0.05的单边α值。

安慰剂：Vx-001的比例为1：1。

在全面分析集中对主要和次要终点进行分析，全面分析集由所有符合以下三个五个主要标准的患者组成：a)NSCLC；b)IV期或复发期I-III；c)一线化疗后的疾病控制；d)HLA-A*0201阳性；和e)表达TERT的肿瘤。

我们使用Kaplan-Meier方法估算每组的OS和TTF，并使用Cox比例风险回归模型估算将OS和TTF与治疗效果相关的危险比(HR)。

免疫监测

使用IFNg ELISpot测定测量免疫应答，以检测对TERT572肽特异的T细胞。对于接受加强疫苗接种的患者，从在疫苗接种前、在第6周(第三次疫苗接种前)、第18周(第6次疫苗接种后三周)和此后每六个月收集的血液样本分离外周血单核细胞(PBMC)。PBMC储存在-160℃并在非盲研究时进行测试。在涂覆有在不含AIMV血清的培养基中的抗IFNg抗体(Diaclone)的板中，用TERT572或作为阴性对照的非相关肽或作为阳性对照的CEF肽库或作为非特异性阳性对照的植物血凝素(PHA)过夜刺激2x 10⁵PBMC/孔(一式六份)。通过测量在PHA存在下的斑点数来评估PBMC的存在。然后，通过测量对CEF肽库(来自常见病毒流感、HPV和CMV的多等位基因表位肽的混合物)的应答来评估PBMC的质量。当样本对CEF有应答或来自同一患者的所有样本对CEF均无应答(表示归因于患者病史而没有CEF反应性)时，将其视为样本。使用计数器对斑点数量进行定量，并针对每种条件计算6个值的平均值。当a)阴性对照平均值与TERT572或CEF组的平均值之间的差异大于10个斑点，和b)阴性对照平均值与TERT572或CEF组的平均值之间存在统计学上显著的差异(p<0.05)时，认为该血液样本对于TERT572或CEF具有应答。当在研究方案过程中检测到针对TERT572的应答时，无疫苗接种前的TERT572应答的患者被视为免疫应答者。只有在(i)疫苗接种后扩大(至少两倍)这种TERT572反应性，或者(ii)患者首先失去了疫苗接种前的TERT572反应性和随后在疫苗接种方案中检测到新的TERT572反应性时，才将具有疫苗接种前的TERT572反应性的患者视为免疫应答者。

还使用IFNg ELISpot测定测量了对其他TERT肽和其他抗原的免疫应答。下表1中描述了用于检测T细胞的肽。

表1：用于检测特定CTL的肽

结果

患者

对1407例患者进行了筛查，并对221例患者进行了随机分组。筛查失败的主要原因是：a)患者为HLA-A*0201阴性；b)没有适合TERT表达评估的活检材料；以及c)一线化疗后进展的疾病。

因为不符合主要入组标准，31例患者被排除在全面分析集(Full Analysis Set，FAS)分析之外(25例进入研究的患者患有进行性疾病，2例患者患有非NSCLC肿瘤和4例患者患有非转移或复发性疾病)。表2显示了FAS的190例患者的人口统计学信息。

表2：所评估患者的人口统计学信息。NSQ：非鳞状；SQ：鳞状；OR：客观应答；SD：稳定疾病；ECOG：东部肿瘤协作组的表现状况量表。

患者在化疗结束后4周内随机分组。

FAS患者的免疫应答

在166例可评估患者中，有45例(27.1％)在接种疫苗之前检测到TERT572特异性免疫应答(天然免疫)。在接受安慰剂治疗的患者和接受Vx-001治疗的患者中，具有天然免疫的患者的百分比分别为24.1％和30.4％。

天然免疫不限于TERT572，并且还可以扩展到其他肿瘤抗原。测试了六例具有天然免疫的患者和三例没有天然免疫的患者的基线血样针对在NSCLC中过表达的六种额外抗原。具有针对TERT572的天然免疫的所有患者的T细胞均对其他肿瘤抗原(例如TERT988、TERT540、MAGE248、HER402、存活素96、NY-ESO96)有反应性，而对TERT572无天然免疫的患者则对其他肿瘤抗原无应答，而且在检测到应答的罕见情况下，应答非常弱(图2)。

这些结果强烈表明，具有天然免疫的患者患有免疫原性肿瘤，而没有天然免疫的患者患有非免疫原性或免疫原性差的肿瘤。

在接受Vx-001治疗的患者中，对于以下患者评估了TERT572特异性免疫应答：在基线时的79例患者；第6周的73例患者；第18周的42例患者和接受加强免疫的16例患者。总体而言，至少在第6周、第18周或之后，对75例患者测量了免疫应答。22例患者发生了TERT572特异性免疫应答(29.3％)。令人惊讶的是，非鳞状(NSQ)NSCLC的这种应答比鳞状(SQ)NSCLC的发生率明显更高(36％vs 13.3％，p＝0.037)。

与具有天然免疫的患者相比，对于没有天然免疫的患者，疫苗诱导的免疫应答更为常见，即使发生率无统计学差异(15％vs 36.2％，p＝0.14)。

临床应答

对FAS患者的分析表明，接受安慰剂治疗和接受Vx-001治疗的患者之间的OS差异无统计学意义(11.3vs 14.3个月；p＝0.86；HR＝0.97；95％CI为0.70-1.34)。TTF(3.5vs3.6个月；p＝0.36；HR＝0.88；95％CI为0.66-1.16)和12个月生存期(49.5％vs 58％；p＝0.24)均无显著差异(图3)。

亚组分析显示，接受测试的任一亚组的OS和12个月生存期均无显著差异(表3)，但接受Vx-001治疗的男性的12个月生存期显著更高(43％vs 61％，p＝0.05)，而在接受Vx-001治疗的女性中则没有显著差异。此外，对于从不吸烟者或轻度的曾经的吸烟者(≤25年)的患者，存在具有显著性的强趋势(OS 11.2vs 16.2，p＝0.07)(图4)。

表3：OS和12个月生存期的亚组分析

然后，我们将重点放在分析从未吸烟者或曾经的轻度吸烟者(≤25年)的患者人群中。该患者人群不可能从免疫检查点抑制剂的治疗中受益(Reck M.等人,2016,Zhang T.等人,2016)。表4显示了该人群的人口统计学数据。安慰剂和接受Vx-001治疗的患者之间没有较大失衡。

表4：从不吸烟者和曾经的轻度吸烟者(烟龄≤25年)的人口统计学信息

表5显示了不同亚组的临床结果。Vx-001显著延长无天然免疫的患者的生存期(7.9vs 20.7个月；p＝0.0007；HR＝0.29；95％CI为0.13-0.67)(图5)。在该后一人群中，12个月生存期显著增加(18.7％vs 82.3％；p＝0.0004)。Vx-001还显著延长了进入该研究且患有稳定疾病的患者的生存期(12.4vs 24.7个月；p＝0.004；HR＝0.33；95％CI为0.14-0.78)(图6)以及男性的生存期(11.1vs 24.7个月；p＝0.01；HR＝0.37；95％CI为0.16-0.81)(图7)。

表5.从不吸烟者或曾经的轻度吸烟者(烟龄≤25年的曾经的吸烟者)亚组的临床结果(OS)

关于TTF，在无天然免疫的患者中观察到对Vx-001的显著差异(3.1vs 5.6个月；p＝0.006；HR＝0.43；95％CI为0.20-0.92)。

表6：从不吸烟者患者或曾经的轻度吸烟者(烟龄≤25年的曾经的吸烟者)的亚组的临床结果(TTF)

表7列出了从不吸烟者患者或轻度吸烟者(烟龄≤25年并且已或没有戒烟)的不同亚组的临床结果。与表4-6中研究的人群相比(从不吸烟者+曾经的轻度吸烟者)，表7中研究的人群包括5例是轻度吸烟者(烟龄<25年)但仍在吸烟的患者。

这些结果表明，对于从不吸烟者/轻度吸烟者，Vx-001显著延长了OS。在有NSQ组织学、患有转移性疾病、具有ECOG 1、没有天然免疫、男性患者以及进入该研究且患有稳定疾病的患者的从不吸烟者/轻度吸烟者中，这种临床效果甚至更强。

表7.从不吸烟者患者和轻度吸烟者(烟龄≤25年)的亚组的临床结果(OS)

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Reck M,Rodríguez-Abreu D,Robinson AG,Hui R,

T,

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序列表

<110> 瓦克松生物技术公司（VAXON BIOTECH）

<120> 靶向隐性TERT表位的疫苗用于治疗HLA-A* 0201-阳性的

从不吸烟者或轻度的曾经的吸烟者患者的肺癌的用途

<130> B170118EPA-VP9

<150> EP17305527.8

<151> 2017-05-09

<160> 9

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 来自人蛋白的肽

<400> 1

Arg Leu Phe Phe Tyr Arg Lys Ser Val

1 5

<210> 2

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 优化的肽

<400> 2

Tyr Leu Phe Phe Tyr Arg Lys Ser Val

1 5

<210> 3

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 来自人蛋白的肽

<400> 3

Ile Leu Ala Lys Phe Leu His Trp Leu

1 5

<210> 4

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 来自人蛋白的肽

<400> 4

Asp Leu Gln Val Asn Ser Leu Gln Thr Val

1 5 10

<210> 5

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 来自人蛋白的肽

<400> 5

Leu Thr Leu Gly Glu Phe Leu Lys Leu

1 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 来自人蛋白的肽

<400> 6

Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Val

1 5

<210> 7

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 来自人蛋白的肽

<400> 7

Thr Leu Glu Glu Ile Thr Gly Tyr Leu

1 5

<210> 8

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 来自人蛋白的肽

<400> 8

Tyr Leu Glu Tyr Arg Gln Val Pro Asp

1 5

<210> 9

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 来自人蛋白的肽

<400> 9

Tyr Leu Glu Tyr Arg Gln Val Pro Gly

1 5

Claims

1.一种SEQ ID No:2的肽，其用于治疗患有表达端粒末端转移酶逆转录酶(TERT)的非小细胞肺癌(NSCLC)的HLA-A*0201阳性患者的癌症，其中所述患者从未吸烟(从不吸烟者)或在不到25年的时间里曾经吸烟(轻度吸烟者)，其中所述SEQ ID No:2的肽诱导针对SEQID No:1的隐性TERT572肽的CTL应答。

2.一种SEQ ID No:1的肽，其用于治疗患有表达TERT的肿瘤的HLA-A*0201阳性患者的癌症，其中所述患者是从不吸烟者或轻度吸烟者，所述从不吸烟者或轻度吸烟者已经用SEQID No:2的肽进行疫苗接种。

3.一种SEQ ID No:1和SEQ ID No:2的肽的组合，其用于治疗患有表达TERT的肿瘤的HLA-A*0201阳性患者的癌症，其中所述患者是从不吸烟者或轻度吸烟者。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的肽或肽的组合，其用于权利要求1至3中任一项所述的用途，其中所述患者是从不吸烟者或是曾经的吸烟者，所述曾经的吸烟者在不到25年的时间里曾经吸烟(曾经的轻度吸烟者)。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的肽或肽的组合，其用于权利要求1至4中任一项所述的用途，其中所述患者是从不吸烟者或是曾经的吸烟者，所述曾经的吸烟者在NSCLC诊断之前已停止吸烟至少5年。

6.根据权利要求1至3中任一项所述的肽或肽的组合，其用于权利要求1至5中任一项所述的用途，其中所述患者已经接受一线化疗并且在用SEQ ID No:2的肽进行疫苗接种之前患有稳定的疾病。

7.根据权利要求1至3中任一项所述的肽或肽的组合，其用于权利要求1至6中任一项所述的用途，其中所述患者患有非免疫原性肿瘤。

8.根据权利要求1至3中任一项所述的肽或肽的组合，其用于权利要求7所述的用途，其中如果在来自接种疫苗之前的患者的血液样本中未检测到对SEQ ID No:1的肽特异的CTL应答，和/或对SEQ ID No:3的肽特异的CTL应答，和/或对SEQ ID No:5的肽特异的CTL应答，则认为所述肿瘤是非免疫原性的。

9.根据权利要求1至3中任一项所述的肽或肽的组合，其用于权利要求8所述的用途，其中在基于铂的一线化疗结束后少于2周的时间里收集来自患者的血液样本。

10.根据权利要求1至3中任一项所述的肽或肽的组合，其用于权利要求1至9中任一项所述的用途，其中所述患者患有转移性癌症。

11.根据权利要求1至3中任一项所述的肽或肽的组合，其用于权利要求1至10中任一项所述的用途，其中所述患者是男性。

12.根据权利要求1至3中任一项所述的肽或肽的组合，其用于权利要求1至11中任一项所述的用途，其中所述患者患有非鳞状(NSQ)NSCLC。

13.根据权利要求1至3中任一项所述的肽或肽的组合，其用于权利要求1至12中任一项所述的用途，其中所述患者的ECOG＞0，优选ECOG＝1。

14.一种体外测定患有TERT阳性NSCLC的HLA-A*0201-阳性的从不吸烟者或轻度吸烟者患者是否可能是用SEQ ID NO:1和2的肽疫苗接种的免疫疗法治疗的良好应答者的方法，该方法包括评估肿瘤的免疫原性，其中如果肿瘤是非免疫原性的，则患者可能是所述免疫疗法治疗的良好应答者。

15.根据权利要求14所述的方法，其中通过测量来自疫苗接种前的个体的血液样本中对SEQ ID No:1的肽特异的CTL应答，和/或测量对SEQ ID No:3的肽特异的CTL应答，和/或测量对SEQ ID No:5的肽特异的CTL应答来评估肿瘤的免疫原性，其中如果没有检测到这样的CTL应答，则所述肿瘤是非免疫原性的。

16.根据权利要求15所述的方法，其中通过酶联免疫斑点(ELISpot)IFNg测定来测量对SEQ ID No:1的肽特异的CTL应答，和/或对SEQ ID No:3的肽特异的CTL应答，和/或对SEQID No:5的肽特异的CTL应答。

17.用于执行权利要求14至16所述的方法的要素的试剂盒，其包括：(i)用于进行ELISpot测定的试剂和板，(ii)选自由SEQ ID No:1、SEQ ID No:3和SEQ ID No:5组成的组的肽，和(iii)作为阴性对照的非相关肽。