CN110934891A - 一种毛囊干细胞冻干粉剂及制备方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种毛囊干细胞冻干粉剂及制备方法及应用，毛囊干细胞冻干粉剂包括毛囊干细胞冻干粉和溶媒，溶媒为具有黑发功效的能溶解所述毛囊干细胞冻干粉的植物提取物，毛囊干细胞冻干粉和溶媒的比例为2‑5mg/2‑4ml。制备方法包括：S1、毛囊干细胞冻干粉制备；S2、溶媒配置：将所述植物提取物按一定比例配置成溶解液；S3、将S1制备的毛囊干细胞冻干粉溶解于S2制备的溶媒，即得毛囊干细胞冻干粉剂。应用方式为将毛囊干细胞冻干粉剂用电动按摩仪导入到头皮中。本发明细胞和营养免疫水平调理滋养受损毛囊，同时搭配按摩仪使用，疏通头皮血液循环；多种方式结合，实现1+1＞2的水平，白发转黑效果明显，见效快。

Description

一种毛囊干细胞冻干粉剂及制备方法及应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，特别涉及一种毛囊干细胞冻干粉剂及制备方法及应用。
背景技术
现代生活节奏快、压力大以及人们经常熬夜、抽烟等原因，使得越来越多的人受到病理性脱发困扰。病理性脱发会导致头发异常或过度的脱落，典型的症状是头发稀疏甚至秃顶，严重影响人的心理状态及生活质量，尤其对于女性群体而言，脱发所带来的不美观更容易给女性患者带来较大的心理伤害。毛囊是包围在毛发根部的囊状组织，它能通过分裂、增殖，使毛发不断更换和增长。研究表明，患者毛囊在遗传(雄激素性脱发)、精神压力、放化疗等因素影响下受损或产生缺陷，是引发病理性脱发的直接原因。
目前，治疗病理性脱发效果最显著的就是毛发移植术。1959年，美国NormanOrentreich发现人脑后枕部的毛发不受雄性激素及其代谢产物影响，长期生长不脱落；从此处切取的毛囊移植到其它部位，成活后仍保留后枕部毛囊的这一特质，提出了著名的供区优势(donor dominant)的理论，为现代毛发移植术奠定了基础。
毛囊干细胞(hair follicle stem cells，HFSC)是存在于毛囊外根鞘隆突部中的一群能自我更新和增殖的多潜能干细胞，能分化成毛囊、皮脂腺、表皮，对毛发的再生起着重要的作用。研究表明，人毛囊干细胞表达多种细胞表面分子标记物如CD200、角蛋白15(keratin 15，K15)、角蛋白19(keratin 19，K19)、整合素α6、整合素β1、Nestin等，而不表达内皮细胞标志分子CD31；此外，也不表达小鼠毛囊干细胞的标记分子CD34。利用这些阳性和阴性标记分子，研究者们可以更好的分离纯化毛囊干细胞，目前市场上主要是研究制备培养毛囊干细胞，将其制备成冻干粉，或者直接提取患者毛囊干细胞培养后植入到患者脱发部位。中国专利申请公布号CN108888634公开了一种毛囊干细胞提取物冻干粉的制备方法及应用，制备方法包括以下步骤：(1)采集人的毛发，进行提取和分离后得到毛囊干细胞；(2)对所述毛囊干细胞进行传代培养，分离得到毛囊干细胞提取物；(3)将所述毛囊干细胞提取物与冻干保护剂混合后，冷冻干燥得到毛囊干细胞提取物冻干粉。所述冻干粉用于创伤修复、皮肤再生和头发再生。但是现有的毛囊干细胞移植技术并不成熟，对于白发转黑的治疗效果也较差，存活率较低。
现有技术中还用何首乌、熟地、女贞子等中草药药物按配方配成药物内服或者外用，中国专利申请公布号CN103239559公开了一种白发转黑乌发液，其组分按质量份数为：松针20-50份；何首乌20-50份；墨旱莲20-50份；核桃皮20-50份，桑叶10-30份，枸杞10-30份，桑椹10-30份，甘油50-100份。该发明是药物在载体的作用下通过透皮吸收达到中医内病外治的作用，技术解决方案是：先洗头疏通毛囊，再用热水洗清头发，吹干；在有白发的部位拔几条白发，轻敲梅花针，使白发转黑乌发液更容易进入毛囊，最后涂抹白发转黑乌发液，隔天重复一次，连续使用2个月可以看到白发的根部颜色逐渐转灰，灰黑，黑。该方法见效慢，长期服用会对身体产生危害。
发明内容
针对上述技术缺点，本发明的目的在于提供一种毛囊干细胞冻干粉剂及制备方法及应用，应用本发明毛囊干细胞冻干粉剂治疗白发转黑效果好、见效快。
为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种毛囊干细胞冻干粉剂，其特征在于：包括毛囊干细胞冻干粉和溶媒，所述溶媒为具有黑发功效的能溶解所述毛囊干细胞冻干粉的植物提取物。
如上所述一种毛囊干细胞冻干粉剂，其特征在于：所述毛囊干细胞冻干粉和溶媒的比例为2-5mg/2-4ml。
如上所述一种毛囊干细胞冻干粉剂，其特征在于：所述溶媒为何首乌提取物、黑豆提取物、牡蛎肽提取物、生姜提取物、侧柏叶提取物、黑芝麻提取物、当归提取物、桑叶提取物、红参提取物、芦荟叶提取物、淡竹叶提取物、五倍子提取物、香蜂花提取物，啤酒花提取物中的一种或多种。
如上所述一种毛囊干细胞冻干粉剂，其特征在于：所述溶媒为何首乌提取物、黑豆提取物、牡蛎肽提取物、生姜提取物。
如上所述一种毛囊干细胞冻干粉剂，其特征在于：所述溶媒为何首乌提取物、黑豆提取物、牡蛎肽提取物、生姜提取物按体积比5：3：2：1的比例配置而成。
一种毛囊干细胞冻干粉剂的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1、毛囊干细胞冻干粉制备；
S2、溶媒配置：将所述植物提取物按一定比例配置成溶解液；
S3、将S1制备的毛囊干细胞冻干粉溶解于S2制备的溶媒，即得毛囊干细胞冻干粉剂。
如上所述一种毛囊干细胞冻干粉剂的制备方法，其特征在于：S2中，将何首乌提取物、黑豆提取物、牡蛎肽提取物、生姜提取物按体积比5：3：2：1的比例配置成溶解液。
一种毛囊干细胞冻干粉剂的应用，其特征在于：将毛囊干细胞冻干粉剂用电动按摩仪导入到头皮中。
本发明的有益效果在于：
本发明提取健康患者毛囊干细胞，分离培养并提取分泌因子制备冻干粉，从细胞水平滋养头皮受损毛囊；同时搭配植物提取营养物，给受损毛囊提供植物营养素。本发明从细胞和营养免疫水平调理滋养受损毛囊，同时搭配按摩仪使用，疏通头皮血液循环；多种方式结合，实现1+1＞2的水平，白发转黑效果明显，见效快。
具体实施方式
为了更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明做进一步描述。本发明可以以许多不同的形式实施，而不应该被理解为限于在此阐述的实施例。相反，提供这些实施例，使得本公开将是彻底和完整的，并且将把本发明的构思充分传达给本领域技术人员，本发明将仅由权利要求来限定。
一种毛囊干细胞冻干粉剂，包括毛囊干细胞冻干粉和溶媒，溶媒为具有黑发功效的能溶解毛囊干细胞冻干粉的植物提取物。
本申请中，毛囊干细胞冻干粉和溶媒的比例为2-5mg/2-4ml。
本申请中，溶媒为何首乌提取物、黑豆提取物、牡蛎肽提取物、生姜提取物、侧柏叶提取物、黑芝麻提取物、当归提取物、桑叶提取物、红参提取物、芦荟叶提取物、淡竹叶提取物、五倍子提取物、香蜂花提取物，啤酒花提取物中的一种或多种。
优选地，溶媒为何首乌提取物、黑豆提取物、牡蛎肽提取物、生姜提取物。
何首乌：《本草纲目》中记载：能养血益肝，固精益肾，强筋健骨，乌须黑发为滋补良药。不寒不躁，功在地黄、天门冬诸药之上。这说明古代何首乌就被当做白发变黑，治疗脱发重要的药材。现代医学证明，何首乌有补益精血、补肝肾、解毒、润肠通便等特殊功用。很多白发患者白发的原因都是内分泌失调，肝脏功能薄弱，因此何首乌对于某些白发患者提供了很好的调节和改善作用，也有一些白发患者是因为营养问题导致了白发，何首乌中含有的各种营养成分也是很好的补充。
黑豆：《本草纲目》记载：黑豆“服之能益精补髓，壮力润肌，发白后黑，久则转老为少，终其身无病”，黑豆素有“豆中之王”的美称，具有健脾利水，消肿下气；滋肾阴，润肺燥，制风热而活血解毒；止盗汗，乌发黑发的功效。黑豆含较丰富的蛋白质、脂肪和碳水化合物，以及胡萝卜素、维生素B1、B2、B12、叶酸、亚叶酸、烟酸、泛酸、生物素等；还含有异黄酮类：有大豆黄酮甙和染料木甙等。还含有19种油脂，不饱和酸含量达80％。黑豆能为黑色素的合成提供原料，起到促进黑发生长的作用，有效改善白发问题，具有养发护发的作用。
牡蛎肽：牡蛎肽是将肽分子生物技术运用于牡蛎加工过程，经酶解制成牡蛎肽。牡蛎肽中包括含较高浓度的L-酪氨酸、L-蛋氨酸、含硒半胱氨酸和Se2+蛋白复合物，其中：L-酪氨酸是生成黑色素必须氨基酸；L-蛋氨酸作为巯基供体可以生成金属结合蛋白，结合重金属离子，形成金属蛋白，消除重金属离子毒性对CAT、MITF、KROX20基因活性抑制，进而消除重金属离子影响过氧化氢在氧化过程中对甲醛，甲酸，苯酚，乙醛和醇的代谢，影响毛囊黑色素细胞干细胞因子(SCF)的生成；含硒半胱氨酸或Se2+蛋白复合物的Se2+置换汞、镍、铅、铍等重金属离子或参与阻抗汞、镍、铅、铍等重金属离子毒性。
生姜：生姜性温,具有解表，发散的功效，生姜能够增加局部的血液循环，刺激毛囊打开，促使毛发再生。生姜可以对附着在头皮和头发上的细菌、油污等之类的物质起到杀菌消毒的作用，并且有效的清除堆积在头皮上的油脂，让头发恢复清爽。
进一步地，溶媒为何首乌提取物、黑豆提取物、牡蛎肽提取物、生姜提取物按体积比5：3：2：1的比例配置而成。
一种毛囊干细胞冻干粉剂的制备方法，包括如下步骤：
S1、毛囊干细胞冻干粉制备；
S2、溶媒配置：将植物提取物按一定比例配置成溶解液；
S3、将S1制备的毛囊干细胞冻干粉溶解于S2制备的溶媒，即得毛囊干细胞冻干粉剂。
S1中，毛囊干细胞冻干粉的制备方法为：
第一步，毛囊干细胞分离培养；
(1)在无菌室中，从人体后脑部表皮中提取毛囊干细胞；
(2)配置干细胞无血清培养基，将毛囊干细胞置入后37度培养箱培养3-5天；
(3)根据培养状态适时适量换液，待细胞长满后传代培养。
第二步，毛囊干细胞传代；
(1)细胞长满后(约1×107)进行传代。按1:3～5传代。
(2)吸取皿中部分培养基至50ml离心管(3ml/皿)，剩余转至废液缸；
(3)每皿加8ml生理盐水和2ml 0.25％的胰酶(胰酶终浓度0.05％)；
(4)混匀消化适量时间(一般1min左右)，看到细胞飘起来或于镜下观察确认细胞消化好后加入培养基终止消化，每皿加3ml；
(5)用移液管吹打皿底把细胞洗下来(一般5～6次)，然后收集到50ml离心管中，1800rpm离心5min；
(6)弃上清，加入培养基混悬，按所需细胞密度稀释后转入皿中，每皿约18ml(16～20ml)；
(7)放入培养箱中培养。
第一步和第二步中所用培养基配方为：碱性成纤维细胞生长因子12ng/ml、凝血酶0.02ng/ml、重组人胰岛素2mg/ml、人转铁蛋白0.1mg/ml、人血白蛋白0.14mg/ml、亚硒酸钠0.2ug/ml、左旋卡尼丁1mM和丹参素8um。
第三步，毛囊干细胞流式检测鉴定；
(1)用0.1％胰蛋白酶/柠檬酸消化液将生长状态良好的HSFC细胞消化下来；
(2)用50ul PBS混悬，然后分别加入CD34、角蛋白15(keratin15)、整合素α6避光孵育15min；
(3)用PBS清洗一遍，后1000rpm/min，离心5min；
(4)沉淀用500ul PBS重悬后，上流式细胞仪检测分析。
第四步，毛囊干细胞因子冻干粉制备；
(1)先将细胞培养上清液分装再3-5毫升无菌西林瓶中，低温冰箱冻至固态；
(2)宁波新芝30ND冷冻干燥机冻干48H-72H，即得毛囊干细胞因子冻干粉。
S2中，将何首乌提取物、黑豆提取物、牡蛎肽提取物、生姜提取物按体积比5：3：2：1的比例配置成溶解液。
一种毛囊干细胞冻干粉剂的应用，将上述制备的毛囊干细胞冻干粉剂用电动按摩仪导入到头皮中。
实施例1-6
表1实施例1-6的组分和配比(单位：份)
Figure BDA0002325256790000061
其中，实施例1-6均是按照上表中的组分和比例以及上述方法制备而成。
对比例1
毛囊干细胞冻干粉 20份
对比例2
何首乌提取物5份、黑豆提取物3份、牡蛎肽提取物2份、生姜提取物1份
对比例3
何首乌提取物3份、黑豆提取物3份、牡蛎肽提取物3份、生姜提取物3份
对比例4
水 20份
临床实验
分别取实施例1-6和对比例1-4的粉剂/粉/溶液，用电动按摩仪导入到10名志愿者的头发中，其使用情况和结果见下面表2。
表2实施例1-6和对比例1-4使用情况记录表
Figure BDA0002325256790000071
Figure BDA0002325256790000081
由上可知，将毛囊干细胞上清液分泌的营养因子做成冻干粉，并配合营养素使用电动按摩导入梳都导入到头皮中，滋养毛囊，实现了白发转黑的效果，且效果显著，见效快。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (8)

1.一种毛囊干细胞冻干粉剂，其特征在于：包括毛囊干细胞冻干粉和溶媒，所述溶媒为具有黑发功效的能溶解所述毛囊干细胞冻干粉的植物提取物。
2.根据权利要求1所述一种毛囊干细胞冻干粉剂，其特征在于：所述毛囊干细胞冻干粉和溶媒的比例为2-5mg/2-4ml。
3.根据权利要求1所述一种毛囊干细胞冻干粉剂，其特征在于：所述溶媒为何首乌提取物、黑豆提取物、牡蛎肽提取物、生姜提取物、侧柏叶提取物、黑芝麻提取物、当归提取物、桑叶提取物、红参提取物、芦荟叶提取物、淡竹叶提取物、五倍子提取物、香蜂花提取物，啤酒花提取物中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述一种毛囊干细胞冻干粉剂，其特征在于：所述溶媒为何首乌提取物、黑豆提取物、牡蛎肽提取物、生姜提取物。
5.根据权利要求1所述一种毛囊干细胞冻干粉剂，其特征在于：所述溶媒为何首乌提取物、黑豆提取物、牡蛎肽提取物、生姜提取物按体积比5：3：2：1的比例配置而成。
6.权利要求1-4任一项所述毛囊干细胞冻干粉剂的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1、毛囊干细胞冻干粉制备；
S2、溶媒配置：将所述植物提取物按一定比例配置成溶解液；
S3、将S1制备的毛囊干细胞冻干粉溶解于S2制备的溶媒，即得毛囊干细胞冻干粉剂。
7.根据权利要求6所述毛囊干细胞冻干粉剂的制备方法，其特征在于：S2中，将何首乌提取物、黑豆提取物、牡蛎肽提取物、生姜提取物按体积比5：3：2：1的比例配置成溶解液。
8.权利要求1-5任一项所述毛囊干细胞冻干粉剂的应用，其特征在于：将毛囊干细胞冻干粉剂用电动按摩仪导入到头皮中。
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