CN110872299A - 一种对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物及其制备方法和应用,属于有机化学领域。本发明提供的对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物具有很好的抑制核转录因子STAT3作用,具有抑制自噬关键蛋白ATG4B和抑制肿瘤干细胞生长并诱导肿瘤干细胞凋亡的作用,可有效治疗受STAT3信号通路转导异常的疾病,包括结肠癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌、胶质瘤、卵巢癌、肺癌、膀胱癌、宫颈癌、皮肤癌、骨髓瘤;本发明提供的对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物可制备成肿瘤干细胞抑制剂、STAT3信号抑制剂和自噬关键蛋白ATG4B酶抑制剂。
Description
技术领域
本发明涉及一种对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物及其制备方法和应用,属于有机化学领域。
背景技术
肿瘤干细胞(CSCs)是当前癌症治疗最棘手的对象,能逃避放射及化学药物攻击,并迅速演变进化为肿瘤细胞,被认为是肿瘤起始发展、化疗耐药和复发转移的“罪魁祸首”。靶向CSCs治疗是当今抗癌药开发一个新领域和新热点,开发靶向CSCs药物将对癌症治疗提供新策略和新手段,特别是对晚期癌症治疗具有里程碑意义。研究证实STAT3信号在肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)中超高表达并持续性激活,是调控并维持肿瘤干性(cancer stemness)的关键转录因子,STAT3信号持续激活与肿瘤癌形成发展(carcinogenesis)、复发转移(relapse and metastasis)及化疗抗药性(drugresistance)密切相关。STAT3信号持续激活对肿瘤干细胞(CSCs)的维持存活和自我更新是必须的,抑制STAT3信号通路阻止CSCs活性,导致CSCs的凋亡。因此,STAT3是抑制肿瘤干细胞自我更新,诱导分化与凋亡,逆转抗药性的靶向抗癌药物的新靶点。选择性靶向肿瘤干细胞STAT3信号小分子药物将为今后肿瘤靶向精准治疗提供新手段。
STAT3信号是驱动肿瘤发生发展起关键作用的转录因子。STAT3(signaltransducer and activitor of transcription3)即信号转导和转录激活因子3,STAT3蛋白约由770个氨基酸组成,分子量约为92000,按其功能和结构可分为SH2结构域、DNA结合结构域、超螺旋结构域、linker结构域和氨基末端结构域。STAT3作为一种胞浆蛋白,被IL-6、JAKs和EGFR等细胞因子激活并磷酸化,以p-STAT3形式转移入细胞核,作用于核内特异的DNA片段,调控靶基因转录。在正常细胞中,STAT3是瞬间激活,并受严密调控,调节细胞的生长、分化、生存和凋亡过程,但在肿瘤干细胞和肿瘤细胞中,STAT3是一个癌基因,高表达并持续性激活,促进下游靶基因和蛋白过表达或下调,从而导致肿瘤细胞和肿瘤干细胞不可控增殖,转移和抗药性。STAT3信号是调控并维持肿瘤干细胞干性特征的关键转录因子。肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)是肿瘤形成的起始细胞,兼有干细胞和肿瘤细胞特征,具超强致瘤性,CSCs是肿瘤形成的起始细胞,是肿瘤复发,转移和抗药性的“根源”。到目前为止,大部分实体瘤如肝癌,大脑肿瘤,结肠癌和乳腺癌等癌组织中分离和鉴定出肿瘤干细胞(CSCs)。最近研究证实,STAT3信号对于肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)、结肠癌干细胞(colon cancer stem cells,CCSCs)和乳腺癌干细胞(breastcancer stem cells)等CSCs的自我更新和存活是必须的,抑制STAT3信号导致CSCs凋亡。
最近研究发现,当肿瘤形成后特别是晚期肿瘤阶段,细胞自噬(autophagy)持续激活,以构建肿瘤微环境,维持肿瘤干细胞存活,促进肿瘤干细胞自我更新和增殖,特别是自噬过程中的一些自噬相关关键蛋白如ATG4A和ATG4B等对肿瘤干细胞的存活增殖、分化潜能和构建维护肿瘤微环境也发挥了重要作用。自噬关键蛋白ATG4B有可能是调控肿瘤干细胞细胞自噬(autophagy)过程的新靶标。因此,具有调控ATG4B的小分子化合物有可能用于调控肿瘤干细胞的自噬过程,影响或阻滞肿瘤干细胞活性,有可能为肿瘤干细胞靶向治疗提供新策略和新手段。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物及其制备方法和应用。
申请人利用稳定转染STAT3依赖的荧光素酶报告基因HepG2/STAT3细胞模型高通量筛选中草药提取物库,发现虎杖Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.的干燥根茎提取物具有显著抑制IL-6诱导的STAT3信号通路激活的作用,基于STAT3报告基因活性测试为导向,从虎杖提取物中分离鉴定出一种萘醌类衍生物,化学名称为2-乙氧-6-乙酰基-7-甲基-胡桃醌(2-Ethoxy-6-acetyl-7-methyl-juglone),是一种STAT3信号抑制剂(IC50=7.75μM),如专利申请号为201210299248.3所记载。2-乙氧-6-乙酰基-7-甲基-胡桃醌化合物对STAT3信号通路及其抗肿瘤具有中等药理活性,溶解度较小,成药性明显不足。为了改善提高2-乙氧-6-乙酰基-7-甲基-胡桃醌化合物的成药性,克服其在制备药物中存在不足,申请人根据2-乙氧-6-乙酰基-7-甲基-胡桃醌与STAT3蛋白质分子模拟结果,设计以对苯醌并双三氮唑为核心骨架,合成制备了系列衍生物化合物。申请人通过查阅国内外的研究论文和专利文献,尚未检索到对苯醌并双三氮唑为核心骨架衍生物化合物抑制STAT3通路,抑制肿瘤干细胞自我更新及其抗肿瘤活性相关报道。
为实现上述目的,本发明采取的技术方案为:一种对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物,所述对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物的结构如通式(Ia)或(Ib)所示:
其中,RA、RB各自独立选自烃基、环烷基、杂环烷基、芳基、取代芳基、芳杂环基或取代芳杂环基。
作为本发明所述对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物的优选实施方式,所述取代芳基、取代芳杂环基中的取代基选自卤素、羟基、氰基、巯基、氨基、硝基、亚硝基、烷基、烷氧基、酯基、羧基、磺酰基、酰基、硼酸基或硼酯基。
作为本发明所述对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物的优选实施方式,所述杂环烷基选自:
作为本发明所述对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物的优选实施方式,所述取代芳基选自:
作为本发明所述对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物的优选实施方式,所述取代芳杂环基选自:
作为本发明所述对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物的优选实施方式,所述对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物的结构如下所示:
作为本发明所述对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物的优选实施方式,所述对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物的结构如下所示:
第二方面,本发明提供了上述对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物的制备方法,包括以下步骤:
(1)称取式(II)所示化合物溶于溶剂,加入NaN3,惰性气体保护下回流搅拌反应,得式(III)所示化合物;
(2)将式(III)所示化合物和对苯醌溶于溶剂中,惰性气体保护下回流搅拌反应,即得如通式(Ia)或(Ib)所示的对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物。
作为本发明所述对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物的制备方法的优选实施方式,所述步骤(1)中,反应温度为25~100℃,反应时间为4~12h,溶剂为二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺中的至少一种,惰性气体为氩气;所述步骤(2)中,溶剂为乙酸乙酯、二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺中的至少一种,式(III)所示化合物与对苯醌的摩尔比为(1~3):1,反应温度为25~100℃,反应时间为4~12h。
优选地,所述步骤(1)中,检测反应物完全后,加入纯水终止反应,再用有机溶剂萃取,水洗有机相,干燥有机相,浓缩干燥产物,得式(III)所示化合物;所述检测为TLC检测,所述有机溶剂为乙酸乙酯,用无水Mg2SO4干燥有机相。
第三方面,本发明提供了上述对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物或其药学上可接受的盐或水合物在制备自噬关键蛋白ATG4B酶抑制剂药物或治疗STAT3信号通路转导异常的疾病的药物中的应用。
优选地,所述STAT3信号通路转导异常的疾病为STAT3持续激活的肿瘤,包括结肠癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌、胶质瘤、卵巢癌、肺癌、膀胱癌、宫颈癌、皮肤癌、骨髓瘤中的至少一种。
第四方面,本发明提供了上述对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物或其药学上可接受的盐或水合物在制备肿瘤干细胞抑制剂药物中的应用。
优选地,所述药学上可接受的盐为盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、甲酸盐、乙酸盐、乙二酸盐、丙二酸盐、丁二酸盐中的至少一种。
与现有技术相比,本发明的有益效果为:本发明提供的对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物具有很好的抑制核转录因子STAT3作用,具有抑制自噬关键蛋白ATG4B和抑制肿瘤干细胞生长并诱导肿瘤干细胞凋亡的作用,可有效治疗受STAT3信号通路转导异常的疾病,包括结肠癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌、胶质瘤、卵巢癌、肺癌、膀胱癌、宫颈癌、皮肤癌、骨髓瘤;本发明提供的对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物可制备成肿瘤干细胞抑制剂、STAT3信号抑制剂和自噬关键蛋白ATG4B酶抑制剂。
附图说明
图1为对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物代表性化合物剂量依赖抑制肿瘤细胞STAT3活性示意图。
图2为对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物代表性化合物抑制自噬关键蛋白ATG4B活性示意图。
图3为对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物XL023809剂量依赖性抑制人肝癌细胞株Huh-7细胞增殖示意图。
图4为对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物XL023809剂量依赖性抑制人肝癌细胞株Hep 3B细胞增殖示意图。
图5为对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物XL023809剂量依赖性抑制人结肠癌细胞株HCT 116细胞增殖示意图。
图6为对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物HY052301剂量依赖性抑制人肝癌细胞株HepG2细胞增殖示意图。
图7为对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物HY052301剂量依赖性抑制人肝癌细胞株Hep3B细胞增殖示意图。
图8为对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物ZY013602剂量依赖性抑制人肝癌细胞株Huh-7细胞增殖示意图。
图9为对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物XL023809剂量依赖性抑制人结肠癌干细胞增殖、自我更新和肿瘤球形成示意图。
图10为对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物XL023809剂量依赖性抑制人肝癌干细胞增殖、自我更新和肿瘤球形成示意图。
具体实施方式
为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点,下面将结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
本实施例是本发明不同结构的对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物及其制备方法,其中不同结构对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物以化合物代码表示。
(1)化合物代码为HY031607的对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物,其结构式如下所示:
上述化合物HY031607的制备方法:称取171mg(1.0mmol)溴化苄溶于DMF中,搅拌5min,滴加71mg(1.09mmol)叠氮化钠溶液(DMF溶),氩气保护,100℃回流,搅拌反应12h,TLC检测反应完全,加入10ml纯水,EtOAc萃取,水洗有机相,MgSO4干燥,抽滤,浓缩干燥,然后将其用EtOAc溶解,加入反应瓶中搅拌10min,滴加109mg,1.01mmol的对苯醌(EtOAc溶),氩气保护,70℃回流,搅拌反应24h,TLC检测反应完全,终止反应,浓缩干燥得到棕褐色粗产物。粗产物经过Combiflash分离,洗脱梯度为EtOAc:PE=30:70,经TLC分析各流分,合并浓缩干燥得45.2mg化合物HY031607;化合物HY031607为浅棕色固体粉末,366nm紫外光下呈棕色吸收,ESI-HRMS可见准分子离子峰m/z 393.2078[M+Na]+,分子式为C20H14N6O2。
上述制备方法的化学反应式如下所示:
本实施例进一步采用核磁共振波谱对本实施例的HY031607对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物进行表征,实验结果如下:
1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ7.45(d,J=5.9Hz,4H,H-17,18,24,28),7.37(d,J=5.9Hz,6H,H-19,21,20,25,26,27),6.04(s,4H,H-15,22).
13C NMR(101MHz,Acetone)δ170.6,166.4,150.25(C-1,5),146.7,134.6,128.8,128.6,128.3,53.4.
(2)化合物代码为HY023701的对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物,其结构式如下所示:
上述化合物HY023701的制备方法:称取196mg(1.06mmol)4-甲基苄溴溶于DMF中,反应瓶中搅拌5min,继续滴加82mg(1.26mmol)叠氮化钠溶液(DMF溶),氩气保护,100℃回流,搅拌反应12h,TLC检测反应完全,加入纯水,EtOA多次萃取,水洗有机相,MgSO4干燥,抽滤并浓缩干燥产物,然后将其用EtOAc溶解,滴加至反应瓶中,搅拌5min,滴加113.5mg(1.05mmol)对苯醌(EtOAc溶),氩气保护,70℃回流,搅拌反应24h,TLC检测反应完全,终止反应,浓缩干燥得到棕褐色粗产物。粗产物经过Combiflash分离(RediSep Column:Silica20g,柱保留体积为78ml),洗脱梯度为EtOAc:PE=20:80,经TLC分析各流分,合并浓缩干燥得50mg化合物HY023701。化合物HY023701为浅黄色固体粉末,366nm紫外光下呈棕色吸收,ESI-HRMS可见准分子离子峰,分子式为C22H18N6O2。
上述制备方法的化学反应式如下所示:
本实施例进一步采用核磁共振波谱对本实施例的HY023701对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物进行表征,实验结果如下:
1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ7.35(d,J=8.1Hz,4H,H-4,6,25,29),7.19(d,J=7.9Hz,4H,H-1,3,26,28),5.99(s,4H,H-7,23),2.30(s,6H,H-8,30).
13C NMR(101MHz,Acetone)δ170.6,166.4,146.66(C-10,13),138.4,134.5,131.6,129.4,128.3,53.2,20.2.
(3)化合物代码为HY052301的对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物,其结构式如下所示:
上述化合物HY052301的制备方法:称取210mg(1.06mmol)3,5-二甲基苄基溴溶于DMF中,反应瓶中搅拌5min,滴加75mg(1.15mmol)叠氮化钠溶液(DMF溶),氩气保护,100℃回流,搅拌反应12h,TLC检测反应完全,加入纯水,EtOAc萃取,水洗有机相,MgSO4干燥,抽滤并浓缩干燥,然后将其EtOAc溶解,滴加至反应瓶中,搅拌5min,滴加172.3mg(1.60mmol)对苯醌(EtOAc溶),氩气保护,70℃回流搅拌反应24h,TLC检测反应完全,终止反应,浓缩干燥得到棕褐色粗产物。粗产粗产物经过Combiflash分离(RediSep Column:Silica20g,柱保留体积为78ml),洗脱梯度为EtOAc:PE=25:75,经TLC分析各流分,合并浓缩干燥得113mg化合物HY052301。化合物HY052301为浅黄色固体粉末,366nm紫外光下呈棕色吸收,APCI-HRMS可见准分子离子峰m/z 427.18795[M+H]+,分子式为C24H22N6O2。
上述制备方法的化学反应式如下所示:
本实施例进一步采用核磁共振波谱对本实施例的HY052301对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物进行表征,实验结果如下:
11H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.05(s,4H,H-12,18,24,29),6.96(s,2H,H-16,27),5.85(s,4H,H-14,32),2.28(s,12H,H-19,20,30,31).
13C NMR(101MHz,CDCl3)δ169.9,165.6,146.6,138.8,133.4,133.1,130.8,126.3,54.3,21.2.
(4)化合物代码为HY051405的对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物,其结构式如下所示:
上述化合物HY051405的制备方法:称取135.9mg(0.60mmol)4-叔丁基苄溴溶于DMF中,滴加到反应瓶中搅拌5min,滴加43mg(0.66mmol)叠氮化钠溶液(DMF溶),氩气保护,100℃回流搅拌反应12h,TLC检测反应完全,加入纯水,EtOAc萃取,水洗有机相,MgSO4干燥,抽滤并浓缩干燥产物,然后将其EtOAc溶解,滴加至反应瓶中,搅拌5min,滴加118.5mg(1.10mmol)对苯醌(EtOAc溶),氩气保护,70℃回流搅拌反应24h,TLC检测反应完全,终止反应,浓缩干燥得到棕褐色粗产物。粗产物经过Combiflash分离(RediSep Column:Silica20g,柱保留体积为78ml),洗脱梯度为EtOAc:PE=15:85,经TLC分析各流分,合并浓缩干燥得到150mg化合物HY051405。化合物HY051405为浅黄色固体粉末,366nm紫外光下呈棕色吸收,ESI-HRMS可见准分子离子峰,分子式为C28H30N6O2。
上述制备方法的化学反应式如下所示:
本实施例进一步采用核磁共振波谱对本实施例的HY051405对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物进行表征,实验结果如下:
1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ7.48–7.37(m,8H,H-5,7,29,31,4,8,28,32),6.02(s,4H,H-9,26),1.29(s,18H,H-10,12,13,33,35,36)..
13C NMR(101MHz,Acetone)δ170.6,166.4,151.5,146.6,134.4,131.6,128.1,125.7,53.1,34.3,30.62.
(5)化合物代码为HY043801的对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物,其结构式如下所示:
上述化合物HY043801的制备方法:称取194mg(0.80mmol)2-(4-溴甲基苯基)丙酸溶于DMF中,滴加到反应瓶中搅拌5min,滴加77mg(1.18mmol)叠氮化钠溶液(DMF溶),氩气保护,100℃回流搅拌反应12h,TLC检测反应完全,加入纯水,EtOAc萃取,水洗有机相,MgSO4干燥,抽滤并浓缩干燥产物,然后将其EtOAc溶解,加至反应瓶中,搅拌5min,滴加97mg(0.90mmol)对苯醌(EtOAc溶),氩气保护,80℃回流搅拌反应24h,TLC检测反应完全,终止反应,浓缩干燥得到棕褐色粗产物。粗产物经过Combiflash分离(RediSep Column:Silica20g,柱保留体积为45ml),洗脱梯度为EtOAc:PE=30:70,经TLC分析各流分,合并浓缩干燥得到77mg化合物HY043801。化合物HY043801为红棕色固体粉末,366nm紫外光下呈棕色吸收,ESI-HRMS可见准分子离子峰,分子式为C26H22N6O6。
上述制备方法的化学反应式如下所示:
本实施例进一步采用核磁共振波谱对本实施例的HY043801对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物进行表征,实验结果如下:
1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ7.44(d,J=8.2Hz,4H,H-17,18,29,30),7.35(d,J=8.3Hz,4H,H-19,21,31,33),6.02(s,4H,H-15,27),3.75(p,J=7.2Hz,2H,H-24,36),1.42(d,J=7.1Hz,6H,H-26,38)..
13C NMR(101MHz,Acetone)δ174.6,170.6,166.4,146.6,141.9,134.5,133.2,128.5,128.1,53.1,44.5,18.1.
(6)化合物代码为HY043109的对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物,其结构式如下所示:
上述化合物HY043109的制备方法:称取192mg(0.83mmol)3,5-二甲氧基溴苄溶于DMF中,滴加到反应瓶中搅拌5min,滴加76mg,1.17mmol叠氮化钠溶液(DMF溶),氩气保护,100℃回流搅拌反应12h,TLC检测反应完全,加纯水,EtOA萃取,水洗有机相,MgSO4干燥,抽滤并浓缩干燥产物,EtOAc溶解,滴加至反应瓶中,搅拌5min,滴加90.6mg(0.84mmol)对苯醌(EtOAc溶),氩气保护,70℃回流搅拌反应24h,TLC检测反应完全,终止反应,浓缩干燥得到棕褐色粗产物。粗产物经过Combiflash分离(RediSep Column:Silica 20g,柱保留体积为78ml),洗脱梯度为EtOAc:PE=45:55,经TLC分析各流分,合并浓缩干燥得66.4mg化合物HY043109,化合物HY043109为浅黄色固体粉末,366nm紫外光下呈棕色吸收,ESI-HRMS可见准分子离子峰,分子式为C24H22N6O6。
上述制备方法的化学反应式如下所示:
本实施例进一步采用核磁共振波谱对本实施例的HY043109对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物进行表征,实验结果如下:
1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ6.58(s,4H,H-12,18,26,32),6.46(s,2H,H-30,16),5.97(s,4H,H-14,28),3.75(s,12H,H-19,21,35,36).
13C NMR(101MHz,Acetone)δ170.6,166.39(C-6),161.2,146.6,136.6,134.6,106.1,99.9,54.8,53.3.
(7)化合物代码为HY031209的对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物,其结构式如下所示:
上述化合物HY031209的制备方法:称取165mg(0.80mmol)3-氯溴苄溶于DMF中,滴加到反应瓶中搅拌5min,滴加52mg(0.8mmol)叠氮化钠溶液(DMF溶),氩气保护,100℃回流搅拌反应12h,TLC检测反应完全,加入纯水,EtOA萃取,水洗有机相,MgSO4干燥,抽滤并浓缩干燥产物,然后将其EtOAc溶解,滴加至反应瓶中,搅拌5min,滴加90.1mg(0.83mmol)对苯醌(EtOAc溶),氩气保护,70℃回流搅拌反应24h,TLC检测反应完全,终止反应,浓缩干燥得到棕褐色粗产物。粗产物经过Combiflash分离(RediSep Column:Silica 20g,柱保留体积为45ml),洗脱梯度为EtOAc:PE=30:70,经TLC分析各流分,合并浓缩干燥得到56mg化合物HY031209,化合物HY031209为浅黄色固体粉末,366nm紫外光下呈棕色吸收,ESI-HRMS可见准分子离子峰,分子式为C20H12Cl2N6O2。
上述制备方法的化学反应式如下所示:
本实施例进一步采用核磁共振波谱对本实施例的HY031209对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物进行表征,实验结果如下:
1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ7.49(s,2H,H-15,24),7.44–7.37(m,6H,H-19,20,22,23,27),6.08(s,4H,H-17,30)..
13C NMR(101MHz,Acetone)δ170.5,166.4,146.6,136.7,134.7,134.1,130.5,128.7,128.2,126.8,52.6.
(8)化合物代码为HY030810的对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物,其结构式如下所示:
上述化合物HY030810的制备方法:称取158.6mg(0.77mmol)2-氯溴苄溶于DMF中,滴加到反应瓶中搅拌5min,滴加48mg(0.74mmol)叠氮化钠溶液(DMF溶),氩气保护,100℃回流搅拌反应12h,TLC检测反应完全,加入纯水,EtOA萃取,水洗有机相,MgSO4干燥,抽滤并浓缩干燥产物,然后将其EtOAc溶解,滴加至反应瓶中,搅拌5min,滴加111.5mg(1.03mmol)对苯醌(EtOAc溶),氩气保护,70℃回流搅拌反应24h,TLC检测反应完全,终止反应,浓缩干燥得到棕色粗产物。粗产物经过Combiflash分离(RediSep Column:Silica 20g,柱保留体积为78ml),洗脱梯度为EtOAc:PE=20:80,经TLC分析各流分,合并浓缩干燥得21.6mg化合物HY030810。化合物HY030810为浅紫色固体粉末,366nm紫外光下呈棕色吸收,ESI-HRMS可见准分子离子峰m/z 439.0443[M+H]+,分子为C20H12Cl2N6O2。
上述制备方法的化学反应式如下所示:
本实施例进一步采用核磁共振波谱对本实施例的HY030810对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物进行表征,实验结果如下:
1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ7.52(d,J=7.9Hz,2H,H-11,29),7.41(t,J=7.6Hz,2H,H-14,26),7.32(t,J=7.4Hz,2H,H-9,27),7.21(d,J=7.6Hz,2H,H-10,28),6.17(s,4H,H-15,25).
13C NMR(101MHz,Acetone)δ170.6,166.2,146.5,136.4,135.0,133.1,132.1,130.3,129.7,127.5,51.1.
(9)化合物代码为HY032011的对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物,其结构式如下所示:
上述化合物HY032011的制备方法:称取200mg(0.83mmol)3,4二氯溴苄溶于DMF中,滴加到反应瓶中搅拌5min,滴加58mg,0.89mmol叠氮化钠溶液(DMF溶),氩气保护,100℃回流搅拌反应12h,TLC检测反应完全,加入纯水,EtOAc萃取,水洗有机相,MgSO4干燥,抽滤并浓缩干燥产物,然后将其EtOAc溶解,滴加至反应瓶中,搅拌5min,滴加98.3mg(0.91mmol)对苯醌(EtOAc溶),氩气保护,70℃回流搅拌反应24h,TLC检测反应完全,终止反应,浓缩干燥得到棕褐色粗产物。粗产物经过Combiflash分离(RediSep Column:Silica 20g,柱保留体积为78ml),洗脱梯度为EtOAc:PE=25:75,经TLC分析各流分,合并浓缩干燥得到92.5mg化合物HY032011。化合物HY032011为浅棕色固体粉末,366nm紫外光下呈棕色吸收,ESI-HRMS可见准分子离子峰m/z 508.9627[M+H]+,分子式C20H10Cl4N6O2。
上述制备方法的化学反应式如下所示:
本实施例进一步采用核磁共振波谱对本实施例的HY032011对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物进行表征,实验结果如下:
1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ7.66(d,J=2.1Hz,2H,H-15,25),7.59(d,J=8.3Hz,2H,H-20,24),7.44(dd,J=8.3,2.1Hz,2H,H-23,28),6.08(s,4H,H-17,18).
13C NMR(101MHz,Acetone)δ170.4,166.3,146.6,135.1,134.7,132.2,132.1,130.9,130.4,128.5,52.2.
(10)化合物代码为ZY013301对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物,其结构式如下所示:
上述化合物ZY013301的制备方法:称取178.8mg(0.8mmol)3-氯-5-氟溴苄溶于DMF中,滴加到反应瓶中搅拌5min,滴加55mg(0.85mmol)叠氮化钠溶液(DMF溶),氩气保护,100℃回流搅拌反应12h,TLC检测反应完全,加纯水,EtOA萃取,水洗有机相,MgSO4干燥,抽滤并浓缩干燥产物,然后将其EtOAc溶解,滴加至反应瓶中,搅拌5min,滴加108mg(1.0mmol)对苯醌(EtOAc溶)氩气保护,70℃回流搅拌反应24h,TLC检测反应完全,终止反应,得到淡黄色粗产物。粗产物经过Combiflash分离(RediSep Column:Silica 20g,柱保留体积为78ml),洗脱梯度为EtOAc:PE=25:75,经TLC分析各流分,合并浓缩干燥得到125mg化合物ZY013301。化合物ZY013301为浅紫色固体粉末,366nm紫外光下呈棕色吸收,ESI-HRMS可见准分子离子峰,分子式为C20H10Cl2F2N6O2。
上述制备方法的化学反应式如下所示:
本实施例进一步采用核磁共振波谱对本实施例的ZY013301对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物进行表征,实验结果如下:
1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ7.34(s,2H,H-14,24),7.28(dt,J=8.6,2.1Hz,2H,H-12,29),7.23–7.14(m,2H,H-10.27),6.12(s,4H,H-15,32).
13C NMR(101MHz,Acetone)δ170.4,166.4,163.9,161.4,148.1,146.6,138.5,138.4,135.1,134.8,124.4,116.3,116.1,114.1,113.9,52.2.
(11)化合物代码为XL023809对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物,其结构式如下所示:
上述化合物XL023809的制备方法:称取185mg(0.83mmol)2-氯-4-氟-苄溴溶于DMF中,滴加到反应瓶中搅拌5min,滴加53mg(0.82mmol)叠氮化钠溶液(DMF溶),氩气保护,100℃回流搅拌反应12h,TLC检测反应完全,加纯水,EtOA萃取,水洗有机相,MgSO4干燥,抽滤并浓缩干燥产物,然后将其EtOAc溶解,滴加至反应瓶中,搅拌5min,滴加114mg,1.06mmol对苯醌(EtOAc溶),氩气保护,80℃回流搅拌反应12h,TLC检测反应完全,终止反应,浓缩干燥得到棕褐色粗产物。粗产物经过Combiflash分离(RediSep Column:Silica 20g,柱保留体积为78ml),洗脱梯度为EtOAc:PE=25:75,经TLC分析各流分,合并浓缩干燥得到19.8mg化合物,XL023809。化合物XL023809为浅黄色固体粉末,366nm紫外光下呈棕色吸收,ESI-HRMS可见准分子离子峰m/z 497.2347[M+Na]+,分子式C20H10Cl2F2N6O2。
上述制备方法的化学反应式如下所示:
本实施例进一步采用核磁共振波谱对本实施例的XL023809对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物进行表征,实验结果如下:
1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ7.41(d,J=7.5Hz,4H,H-2,5,26,29),7.16(t,J=8.3Hz,2H,H-6,30),6.17(s,4H,H-7,24).
13C NMR(101MHz,Acetone)δ170.5,166.2,163.8,161.3,146.4,134.9,134.4,134.3 132.1,132.0,128.4,128.3,117.1,116.9,114.72,114.5,50.6.
(12)化合物代码为ZY013601、ZY013602的对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物,其结构式为:
上述化合物ZY013601、ZY013602的制备方法:称取165.6mg(0.8mmol)3,5-二氟溴苄溶于DMF中,滴加到反应瓶中搅拌5min,滴加54mg(0.83mmol)叠氮化钠溶液(DMF溶),氩气保护,100℃回流搅拌反应12h,TLC检测反应完全,加入纯水,EtOA萃取,水洗有机相,MgSO4干燥,抽滤并浓缩干燥产物,然后将其EtOAc溶解,滴加至反应瓶中,搅拌5min,滴加110mg(1.02mmol)对苯醌(EtOAc溶),氩气保护,70℃回流搅拌反应24h,TLC检测反应完全,终止反应,浓缩干燥得到棕褐色粗产物。粗产物经过Combiflash分离(RediSep Column:Silica20g,柱保留体积为78ml),洗脱梯度为EtOAc:PE=30:70,经TLC分析各流分,合并浓缩干燥得到55.6mg化合物ZY013601和55.6mg化合物ZY013602。化合物ZY013602和化合物ZY013601为浅紫色固体粉末,366nm紫外光下呈棕色吸收,ESI-HRMS可见准分子离子峰,分子式C20H10F4N6O2。
上述制备方法的化学反应式如下所示:
本实施例进一步采用核磁共振波谱对本实施例的ZY013601对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物进行表征,实验结果如下:1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ7.10–7.04(m,4H,H-3,5,24,29),7.02(dt,J=9.2,2.3Hz,2H,H-1,27),6.13(s,4H,H-7,32)
13C NMR(101MHz,Acetone)δ170.5,166.2,164.3,164.2,161.9,161.7,150.2,146.1,138.7,138.6,138.5,135.4,111.4,111.3,111.2,111.1,104.1,103.8,103.6,52.2.
本实施例进一步采用核磁共振波谱对本实施例的ZY013602对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物进行表征,实验结果如下:
1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ7.10–7.04(m,4H,H-3,5,24,29),7.02(dt,J=9.2,2.3Hz,2H,H-1,27),6.13(s,4H,H-7,32)
13C NMR(101MHz,Acetone)δ168.4,164.3,164.2,161.9,161.7,150.2,146.1,138.7,138.6,138.5,135.4,111.4,111.3,111.2,111.1,104.1,103.8,103.6,52.2.
(13)化合物代码为ZY011901、ZY011903对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物,其结构式如下所示:
上述化合物ZY011901、ZY011903的制备方法:称取165.7mg(1.02mmol)溴甲基环戊烷溶于DMF中,滴加到反应瓶中搅拌5min,滴加73mg(1.12mmol)叠氮化钠溶液(DMF溶),氩气保护,100℃回流搅拌反应12h,TLC检测反应完全,加入纯水,EtOA萃取,水洗,MgSO4干燥,抽滤并浓缩干燥产物,然后将其EtOAc溶解,滴加至反应瓶中,搅拌5min,滴加110mg(1.02mmol)的对苯醌(EtOAc溶),氩气保护,70℃回流搅拌反应24h,TLC检测反应完全,终止反应,浓缩干燥得到棕褐色粗产物。粗产物经过Combiflash分离(RediSep Column:Silica20g,柱保留体积为78ml),洗脱梯度为EtOAc:PE=20:80,经TLC分析各流分,合并浓缩干燥得到22.5mg化合物ZY011901和22.5mg化合物ZY011903。化合物ZY011901和化合物ZY011903为浅黄色油状液体,366nm紫外光下呈棕色吸收,ESI-HRMS可见准分子离子峰,分子式为C18H22N6O2。
上述制备方法的化学反应式如下所示:
本实施例进一步采用核磁共振波谱对本实施例的ZY011901对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物进行表征,实验结果如下:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.79-4.77(d,4H,J=7.7),2.66-2.54(m,2H),1.84-1.58(m,8H),1.41-1.33(m,8H).
13C NMR(101MHz,CDCl3)δ170.5,166.4,145.7,134.4,55.1,40.4,30.1,24.8.
本实施例进一步采用核磁共振波谱对本实施例的ZY011903对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物进行表征,实验结果如下:
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.79-4.77(d,4H,J=7.7),2.66-2.54(m,2H),1.84-1.58(m,8H),1.41-1.33(m,8H).
13C NMR(101MHz,CDCl3)δ168.0,145.7,134.4,55.1,40.4,30.1,24.8.
(14)化合物代码为CH012404对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物,其结构式如下所示:
上述化合物CH012404的制备方法:称取177mg(1.00mmol)溴甲基环己烷溶于DMF中,滴加到反应瓶中搅拌5min,滴加71mg(1.09mmol)叠氮化钠溶液(DMF溶),氩气保护,70℃回流搅拌反应12h,TLC检测反应完全,加入纯水,EtOA萃取,水洗,MgSO4干燥,抽滤并浓缩干燥产物,然后将其EtOAc溶解,滴加至反应瓶中,搅拌5min,滴加112mg(1.04mmol)的对苯醌(EtOAc溶),氩气保护,70℃回流搅拌反应24h,TLC检测反应完全,终止反应,浓缩干燥得到棕黄色粗产物。粗产物经过Combiflash分离(RediSep Column:Silica 20g,柱保留体积为78ml),洗脱梯度为EtOAc:PE=30:70,经TLC分析各流分,合并浓缩干燥得到5.2mg化合物CH012404。化合物CH012404为浅黄色固体粉末,366nm紫外光下呈棕色吸收,ESI-HRMS可见准分子离子峰m/z 405.2005[M+Na]+,分子式C20H26N6O2。
上述制备方法的化学反应式如下所示:
本实施例进一步采用核磁共振波谱对本实施例的CH012404对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物进行表征,实验结果如下:
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.64(d,J=7.3,4H),2.01(dtp,J=14.4,7.1,3.4,2H),1.82-1.60(m,10H),1.32-1.04(m,10H).
13C NMR(101MHz,CDCl3)δ170.0,166.1,146.3,134.0,56.4,38.7,30.3,25.9,25.4.
(15)化合物代码为ZY013801、ZY013802的对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物,其结构式如下所示:
上述化合物ZY013801、ZY013802的制备方法:称取166.8mg(1.01mmol)2-溴甲基四氢呋喃溶于DMF中,滴加到反应瓶中搅拌5min,滴加102mg(1.57mmol)叠氮化钠溶液(DMF溶),氩气保护,70℃回流搅拌反应12h,TLC检测反应完全,加纯水,EtOA萃取,水洗有机相,MgSO4干燥,抽滤,浓缩干燥产物,然后将其EtOAc溶解,滴加至反应瓶中,搅拌5min,滴加61mg(0.56mmol)的对苯醌(EtOAc溶),氩气保护,70℃回流搅拌反应12h,TLC检测反应完全,终止反应,浓缩干燥得到白色固体粗产物。粗产物经过Combiflash分离(RediSep Column:Silica 12g,柱保留体积为45ml),洗脱梯度为EtOAc:PE=40:60,经TLC分析各流分,合并浓缩干燥得到28.8mg化合物ZY013801和28.8mg化合物ZY013802。化合物ZY013802为橘红色固体粉末,366nm紫外光下呈棕色吸收,ESI-HRMS可见准分子离子峰,分子式C16H18N6O4。
上述制备方法的化学反应式如下所示:
本实施例进一步采用核磁共振波谱对本实施例的ZY013801对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物进行表征,实验结果如下:11H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.92(dd,J=13.3,8.8,2H),4.77(dd,J=13.3,3.7,2H),4.44(m,2H),3.84(dt,J=8.5,6.7,2H),3.72(m,2H),2.23-2.08(m,2H,),2.09-1.86(m,4H),1.79(ddt,J=12.1,8.2,6.0Hz,2H).
1313C NMR(101MHz,CDCl3)δ170.5,166.2,145.6,135.2,76.9,68.4 53.8,29.1,25.4.
本实施例进一步采用核磁共振波谱对本实施例的ZY013802对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物进行表征,实验结果如下:
11H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.92(dd,J=13.3,8.8,2H),4.77(dd,J=13.3,3.7,2H),4.44(m,2H),3.84(dt,J=8.5,6.7,2H),3.72(m,2H),2.23-2.08(m,2H,),2.09-1.86(m,4H),1.79(ddt,J=12.1,8.2,6.0Hz,2H).
1313C NMR(101MHz,CDCl3)δ167.9,145.6,135.2,76.9,68.4 53.8,29.1,25.4.
(16)化合物代码为ZY014703对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物,其结构式如下所示:
上述化合物ZY014703的制备方法:称取125mg(0.71mmol)3-溴甲基噻吩溶于DMF中,滴加到反应瓶中搅拌5min,滴加76mg(1.17mmol)叠氮化钠溶液(DMF溶),氩气保护,70℃回流搅拌反应12h,TLC检测反应完全,加纯水,EtOA萃取,水洗有机相,MgSO4干燥,抽滤并浓缩干燥产物,然后将其EtOAc溶解,滴加至反应瓶中,搅拌5min,滴加83mg(0.77mmol的对苯醌(EtOAc溶),氩气保护,70℃回流搅拌反应24h,TLC检测反应完全,终止反应,得到棕黄色粗产物。粗产物经过Combiflash分离(RediSepColumn:Silica20g,柱保留体积为78ml),洗脱梯度为EtOAc:PE=30:70,合并浓缩干燥得到16.3mg化合物ZY014703。化合物ZY014703为浅黄色固体粉末,366nm紫外光下呈棕色吸收。ESI-HRMS可见准分子离子峰,分子式C16H10N6O2S2。
上述制备方法的化学反应式如下所示:
本实施例进一步采用核磁共振波谱对本实施例的ZY014703对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物进行表征,实验结果如下:
11H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ7.62-7.57(m,2H),7.50(dd,J=5.1,3.0Hz,2H),7.20(dd,J=5.1,1.3Hz,2H),6.08(s,4H)..
13C NMR(101MHz,Acetone)δ166.4,146.6,134.9,134.4,127.4,126.9,125.1,48.6.
(17)化合物代码为ZY012502、ZY012504对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物,其结构式如下所示:
上述化合物ZY012502、ZY012504的制备方法:称取176.7mg(0.99mmol)4-溴甲基四氢吡喃溶于DMF中,滴加到反应瓶中搅拌5min,滴加99mg(1.52mmol)叠氮化钠溶液(DMF溶),氩气保护,100℃回流搅拌反应12h,TLC检测反应完全,加纯水,EtOA萃取,水洗有机相,MgSO4干燥,抽滤并浓缩干燥产物,然后将其EtOAc溶解,滴加至反应瓶中,搅拌5min,滴加100mg(0.92mmol)的对苯醌(EtOAc溶),氩气保护,70℃回流搅拌反应24h,TLC检测反应完全,终止反应,得到棕褐色粗产物。粗产物经过Combiflash分离(RediSep Column:Silica20g,柱保留体积为78ml),洗脱梯度为EtOAc:PE=70:30,合并浓缩干燥得52.8mg化合物ZY012502和52.8mg化合物ZY012504。化合物ZY012504和ZY012502为浅红色固体粉末,366nm紫外光下呈棕色吸收。ESI-HRMS可见准分子离子峰m/z388.2536[M+H]+,分子式C18H22N6O4。
上述制备方法的化学反应式如下所示:
本实施例进一步采用核磁共振波谱对本实施例的ZY012502对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物进行表征,实验结果如下:
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.72(dd,J=19.4,7.2Hz,4H),4.03-3.92(m,4H),3.35(m,4H,),2.28(m,2H,),1.57-1.45(m,8H,).
13C NMR(101MHz,CDCl3)δ169.8,166.12,146.3,133.9,67.1,55.8,36.1,30.1.
本实施例进一步采用核磁共振波谱对本实施例的ZY012504对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物进行表征,实验结果如下:
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.72(dd,J=19.4,7.2Hz,4H),4.03-3.92(m,4H),3.35(m,4H,),2.28(m,2H,),1.57-1.45(m,8H,).
13C NMR(101MHz,CDCl3)δ167.9,146.3,133.9,67.1,55.8,36.1,30.1.
(18)化合物代码为ZY030302对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物,其结构式如下所示:
上述化合物ZY030302的制备方法:称取320mg(1.56mmol)4-氯溴化苄溶于DMF中,滴加到反应瓶中搅拌5min,滴加149mg(2.29mmol)叠氮化钠溶液(DMF溶),氩气保护,70℃回流搅拌反应12h,TLC检测反应完全,加纯水,EtOA萃取,水洗有机相,MgSO4干燥,抽滤并浓缩干燥产物,然后将其EtOAc溶解,滴加至反应瓶中,搅拌5min,滴加131mg(1.21mmol)的对苯醌(EtOAc溶),氩气保护,70℃回流搅拌反应48h,TLC检测反应完全,终止反应,得到棕褐色粗产物。粗产物经过Combiflash分离(RediSep Column:Silica 20g,柱保留体积为78ml),洗脱梯度为EtOAc:PE=30:70,合并浓缩干燥得48.8mg化合物ZY030302。化合物ZY030302为浅黄色油状液体,366nm紫外光下呈棕色吸收。ESI-HRMS可见准分子离子峰。
上述制备方法的化学反应式如下所示:
本实施例进一步采用核磁共振波谱对本实施例的ZY030302对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物进行表征,实验结果如下:
1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ7.48(d,J=8.5Hz,4H),7.40(d,J=8.5Hz,4H),6.05(s,4H).
13C NMR(101MHz,Acetone)δ170.5,166.2,146.6,134.6,134.1,133.3,130.2,128.8,52.7.
(19)化合物代码为ZY031502对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物,其结构式如下所示:
上述化合物ZY031502的制备方法:量取190μL(1.55mmol)3-氟溴化苄溶于DMF中,滴加到反应瓶中搅拌5min,滴加147mg(2.26mmol)叠氮化钠溶液(DMF溶),氩气保护,100℃回流搅拌反应12h,TLC检测反应完全,加纯水,EtOA萃取,水洗有机相,MgSO4干燥,抽滤并浓缩干燥产物,然后将其EtOAc溶解,滴加至反应瓶中,搅拌5min,滴加132mg(1.22mmol)的对苯醌(EtOAc溶),氩气保护,70℃回流搅拌反应48h,TLC检测反应完全,终止反应,得到棕褐色粗产物。粗产物经过Combiflash分离(RediSep Column:Silica 20g,柱保留体积为78ml),洗脱梯度为EtOAc:PE=25:75,合并浓缩干燥得50.8mg化合物ZY031502。化合物ZY031502为浅黄色油状液体,366nm紫外光下呈棕色吸收。ESI-HRMS可见准分子离子峰。
上述制备方法的化学反应式如下所示:
本实施例进一步采用核磁共振波谱对本实施例的ZY031502对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物进行表征,实验结果如下:
1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ7.48–7.41(m,2H),7.33–7.25(m,2H),7.23–7.19(m,2H),7.19–7.09(m,2H),6.10(s,4H).
13C NMR(101MHz,Acetone)δ170.5,166.4,163.9,161.5,146.6,137.1,134.7,130.8,124.1,115.5,114.9,52.7.
(20)化合物代码为ZY032001对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物,其结构式如下所示:
上述化合物ZY032001的制备方法:量取185μL(1.48mmol)4-氟溴化苄溶于DMF中,滴加到反应瓶中搅拌5min,滴加138mg(2.12mmol)叠氮化钠溶液(DMF溶),氩气保护,100℃回流搅拌反应12h,TLC检测反应完全,加纯水,EtOA萃取,水洗有机相,MgSO4干燥,抽滤并浓缩干燥产物,然后将其EtOAc溶解,滴加至反应瓶中,搅拌5min,滴加132mg(1.22mmol)的对苯醌(EtOAc溶),氩气保护,70℃回流搅拌反应84h,TLC检测反应完全,终止反应,得到棕褐色粗产物。粗产物经过Combiflash分离(RediSep Column:Silica 20g,柱保留体积为78ml),洗脱梯度为EtOAc:PE=30:70,合并浓缩干燥得36.8mg化合物ZY032001。化合物ZY032001为浅黄色油状液体,366nm紫外光下呈棕色吸收。ESI-HRMS可见准分子离子峰。
上述制备方法的化学反应式如下所示:
本实施例进一步采用核磁共振波谱对本实施例的ZY032001对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物进行表征,实验结果如下:
1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ7.58–7.51(m,4H),7.20–7.12(m,4H),6.05(s,4H).
13C NMR(101MHz,Acetone)δ170.5,166.4,164.0,161.5,146.6,134.5,130.7,130.6,115.6,115.4,52.6.
(21)化合物代码为ZY031702对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物,其结构式如下所示:
上述化合物ZY031702的制备方法:称取250mg(1.00mmol)4-磺酰胺溴化苄溶于DMF中,滴加到反应瓶中搅拌5min,滴加115mg(1.77mmol)叠氮化钠溶液(DMF溶),氩气保护,35℃回流搅拌反应12h,TLC检测反应完全,加纯水,EtOA萃取,水洗有机相,MgSO4干燥,抽滤并浓缩干燥产物,然后将其EtOAc溶解,滴加至反应瓶中,搅拌5min,滴加65mg(0.60mmol)的对苯醌(EtOAc溶),氩气保护,70℃回流搅拌反应90h,TLC检测反应完全,终止反应,得到棕褐色粗产物。粗产物经过Combiflash分离(RediSep Column:Silica 20g,柱保留体积为78ml),洗脱梯度为EtOAc:PE=80:20,合并浓缩干燥得10.5mg化合物ZY031702。化合物ZY031702为浅红色固体粉末,366nm紫外光下呈棕色吸收。ESI-HRMS可见准分子离子峰。
上述制备方法的化学反应式如下所示:
本实施例进一步采用核磁共振波谱对本实施例的ZY031702对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物进行表征,实验结果如下:
1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ7.89(d,J=8.5Hz,4H),7.61(d,J=8.4Hz,4H),6.15(s,4H).
13C NMR(101MHz,Acetone)δ170.5,166.3,146.7,144.4,138.3,134.8,128.7,126.5,52.8.
(22)化合物代码为ZY031903对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物,其结构式如下所示:
上述化合物ZY031903的制备方法:称取254mg(1.57mmol)2-氯甲基-5氯吡啶溶于DMF中,滴加到反应瓶中搅拌5min,滴加121mg(1.86mmol)叠氮化钠溶液(DMF溶),氩气保护,35℃回流搅拌反应12h,TLC检测反应完全,加纯水,EtOA萃取,水洗有机相,MgSO4干燥,抽滤并浓缩干燥产物,然后将其EtOAc溶解,滴加至反应瓶中,搅拌5min,滴加100mg(0.92mmol)的对苯醌(EtOAc溶),氩气保护,70℃回流搅拌反应60h,TLC检测反应完全,终止反应,得到棕褐色粗产物。粗产物经过Combiflash分离(RediSep Column:Silica20g,柱保留体积为78ml),洗脱梯度为EtOAc:PE=60:40,合并浓缩干燥得30.1mg化合物ZY031903。化合物ZY031903为浅红色油状液体,366nm紫外光下呈棕色吸收。ESI-HRMS可见准分子离子峰。
上述制备方法的化学反应式如下所示:
本实施例进一步采用核磁共振波谱对本实施例的ZY031903对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物进行表征,实验结果如下:
1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ8.55–8.53(m,2H),7.92(dd,J=8.3,2.6Hz,2H),7.48(dd,J=8.3,0.7Hz,2H),6.15(s,4H).
13C NMR(101MHz,Acetone)δ170.4,166.3,151.3,149.9,146.6,139.6,134.7,129.6,124.4,50.3.
实施例2
本实施例通过药理药效学实验进一步说明本发明所述的对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物具有抑制核转录因子STAT3作用、抑制自噬关键蛋白ATG4B和抑制肿瘤(干)细胞生长并诱导肿瘤(干)细胞凋亡的作用。
(1)对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物对IL-6诱导的肿瘤细胞STAT3基因表达的影响。
实验方法:本实验采用Luciferase报告基因法检测对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物对STAT3信号转导通路的影响,激动剂IL-6能诱导人肝癌细胞HepG2的STAT3信号通路的激活,通过检测STAT3信号通路激活的抑制率来显示结果。
HepG2/STAT3细胞生长至对数生长期后,收集细胞,1000rpm离心5min,弃上清,适量培养基悬浮,调整细胞浓度至2×105/mL。将细胞悬液接种到96孔细胞培养板中,每孔100μL,放置细胞培养箱(37℃,5%CO2)中培养48h后,吸去培养基,每孔加入100μL稀释好的表1中序号为1-7的不同结构的对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物,每药设2复孔,以虎杖中分离鉴定的天然产物2-乙氧-6-乙酰基-7-甲基-胡桃醌为阳性对照处理,设4个阳性对照孔,2个阴性对照孔。培养1h后每孔加入11μL激动剂IL-6,培养5.5h弃去培养基,每孔加入裂解液30μL,震荡使细胞充分裂解。取20μL到酶标板中,加入30μL荧光素酶底物,用酶标仪检测,实验结果如表1和图1所示。
表1对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物对STAT3信号通路的活性测试结果
由表1和图1可知,表1中结构如序号1~8所示的对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物能剂量依赖性抑制IL-6诱导的STAT3信号激活,其抑制制IL-6诱导的STAT3信号活性的IC50在0.1538~1.449μM范围,对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物剂量依赖性抑制IL-6诱导人肝癌细胞HepG2的STAT3信号,其中活性最强的化合物HY052301,其IC50=0.1538μM,与2-乙氧-6-乙酰基-7-甲基-胡桃醌(IC50=7.75)相比,HY052301对STAT3信号通路的抑制活性显著提约高50倍。
(2)对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物对自噬关键蛋白ATG4B的影响。
实验方法:本实验采用FRET方法检测对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物对自噬关键蛋白ATG4B的影响。
在384孔板中加入待测活化合物(最高浓度为10μM),与重组蛋白ATG4B(终浓度为0.625μg/ml)在PBS缓冲液中37℃共同孵育30min,且每个化合物设置三个复孔。加入重组蛋白FRET-GATE-16(终浓度为50μg/ml),使反应总体系为50ul,在37℃条件下反应30min。在反应30min时,使用多功能酶标仪工作站测定波长527/477nm的相对荧光强度比值(RFUs),ATG4B相对酶切活性计算公式为:抑制率(%)=(RFUX-RFUmin)/(RFUmax-RFUmin)×100%,其中,RFUmax指没有发生酶切反应时的527/477nm的比值,即反应时间T=0min时的RFUS的值;RFUmin指酶切反应进行到最彻底时的527/477nm的比值,即反应时间T=30min时的RFUS的值;RFUX指化合物处理条件下的527/477的比值。实验结果如表2和图2所示。
表2对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物对自噬关键蛋白ATG4B活性测试结果
由表2和图2可知,表2中结构如序号1~12所示的对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物能剂量依赖性抑制自噬关键蛋白ATG4B活性,其抑制制活性的IC50在4.23~17.33μM范围,对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物剂量依赖性抑制自噬关键蛋白ATG4B活性,其中活性最强的化合物XL023809,其IC50=4.23μM。
(3)对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物(XL023809)对STAT3持续激活高干性人肝癌Huh-7细胞株细胞增殖的影响。
实验方法:取出保存于液氮中的Huh-7细胞,在40℃水浴中迅速融化后,转移至离心管中,加入4ml含10%胎牛血清的DMEM完全培养液,1500rpm离心5min后弃上清,加入2mL10%胎牛血清的DMEM完全培养液,使细胞重新悬浮,接种于25cm2培养瓶,37℃5%CO2条件下培养,次日换液。显微镜下观察细胞生长达到80%融合时,用0.25%胰酶消化传代。收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至10000每孔(留8孔为调零孔,100ul 10%胎牛血清的DMEM完全培养液填充),用含10%胎牛血清的DMEM完全培养液培养,5%CO2、37℃条件下孵育24h,观察细胞是否单层铺满孔底并拍照;若铺满则设立对照孔、实验孔,小心吸出培养液,在调零孔和对照孔加入100ul含1%胎牛血清的DMEM完全培养液,在实验孔加入100ul含1%胎牛血清的DMEM完全培养液配制的梯度药物(0.001μM;0.02μM;0.04μM;0.08μM;0.16μM;0.31μM;0.63μM;1.25μM;2.5μM),每组8个复孔;5%CO2,37℃孵育24h,倒置显微镜下观察并拍照。小心吸出培养液,PBS小心洗两遍,加入100ulPBS/孔,然后加入10ulMTT溶液(5mg/ml,即0.5%MTT),继续培养4h。终止培养,小心吸去孔内培养液。每孔加入150ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10min,在酶联免疫检测仪OD 490nm处测量各孔的吸光值。IC50(%)=((实验组OD值-空白OD值)/(对照OD值-空白OD值))G100%,实验平行重复3次,实验结果如图3所示。
由图3可知,化合物XL023809能显著地抑制高干性人肝癌细胞株Huh-7细胞增殖并诱导其凋亡,其IC50为0.2082μM。
(4)对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物(XL023809)对人肝癌细胞Hep 3B细胞株细胞增殖的影响。
实验方法:取出保存于液氮中的Hep 3B细胞,在40℃水浴中迅速融化后,转移至离心管中,加入4ml含10%胎牛血清的DMEM完全培养液,1500rpm离心5min后弃上清,加入2mL10%胎牛血清的DMEM完全培养液,使细胞重新悬浮,接种于25cm2培养瓶,在37℃5%CO2条件下培养,次日换液。显微镜下观察细胞生长达到80%融合时,用0.25%胰酶消化传代。收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至10000每孔(留8孔为调零孔,100ul 10%胎牛血清的DMEM完全培养液填充),用含10%胎牛血清的DMEM完全培养液培养,在37℃5%CO2条件下孵育24h,观察细胞是否单层铺满孔底并拍照;若铺满则设立对照孔、实验孔,小心吸出培养液,在调零孔和对照孔加入100ul含1%胎牛血清的DMEM完全培养液,在实验孔加入100ul含1%胎牛血清的DMEM完全培养液配制的梯度药物(0.001μM;0.02μM;0.04μM;0.08μM;0.16μM;0.31μM;0.63μM;1.25μM;2.5μM),每组8个复孔;5%CO2,37℃孵育24h,倒置显微镜下观察并拍照。小心吸出培养液,PBS小心洗两遍,加入100ulPBS/孔,然后加入10ulMTT溶液(5mg/ml,即0.5%MTT),继续培养4h。终止培养,小心吸去孔内培养液。每孔加入150ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10min,在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。IC50(%)=((实验组OD值-空白OD值)/(对照OD值-空白OD值))G100%,实验平行重复3次,实验结果如图4所示。
由图4可知,化合物XL023809能显著地抑制高干性人肝癌细胞株SK-HEP-1细胞增殖并诱导其凋亡,IC50为0.2377μM。
(5)对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物(XL023809)对人结肠癌细胞株HCT 116细胞增殖的影响。
实验方法:体外培养人来源的结肠癌HCT 116细胞株。收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至10000每孔(留8孔为调零孔,100ul10%胎牛血清的DMEM完全培养液填充),用含10%胎牛血清的DMEM完全培养液培养,5%CO2、37℃条件下孵育24h,观察细胞是否单层铺满孔底并拍照;若铺满则设立对照孔、实验孔,小心吸出培养液,在调零孔和对照孔加入100ul含1%胎牛血清的DMEM完全培养液,在实验孔加入100ul含1%胎牛血清的DMEM完全培养液配制的梯度药物XL023809(0.001μM;0.02μM;0.04μM;0.08μM;0.16μM;0.31μM;0.63μM;1.25μM;2.5μM),每组8个复孔;5%CO2,37℃孵育24h,倒置显微镜下观察并拍照。小心吸出培养液,PBS小心洗两遍,加入100ulPBS/孔,然后加入10ulMTT溶液(5mg/ml,即0.5%MTT),继续培养4h。终止培养,小心吸去孔内培养液,每孔加入150ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10min,在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。IC50(%)=((实验组OD值-空白OD值)/(对照OD值-空白OD值))G100%,实验平行重复3次,实验结果如图5所示。
由图5可知,体外结肠癌HCT 116细胞增殖活性测试结果表明,化合物XL023809能非常显著地剂量依赖性抑制人结肠癌HCT 116的增殖;由此说明,化合物XL023809能显著地抑制人结肠癌HCT 116细胞增殖并诱导其凋亡,IC50为0.1137μM。
(6)对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物(HY052301)对人肝癌细胞Hep G2细胞株细胞增殖的影响。
实验方法:收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至10000每孔(留8孔为调零孔,100ul 10%胎牛血清的DMEM完全培养液填充),用含10%胎牛血清的DMEM完全培养液培养,5%CO2、37℃条件下孵育24h,观察细胞是否单层铺满孔底并拍照;若铺满则设立对照孔、实验孔,小心吸出培养液,在调零孔和对照孔加入100ul含1%胎牛血清的DMEM完全培养液,在实验孔加入100ul含1%胎牛血清的DMEM完全培养液配制的梯度药物HY052301(0.004μM;0.08μM;0.16μM;0.31μM;0.625μM;1.25μM;2.5μM;5.0μM;10.0μM),每组8个复孔;5%CO2,37℃孵育24h,倒置显微镜下观察并拍照。小心吸出培养液,PBS小心洗两遍,加入100ulPBS/孔,然后加入10ulMTT溶液(5mg/ml,即0.5%MTT),继续培养4h。终止培养,小心吸去孔内培养液,每孔加入150ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10min,在酶联免疫检测仪OD 490nm处测量各孔的吸光值。IC50(%)=((实验组OD值-空白OD值)/(对照OD值-空白OD值))G100%,实验平行重复3次,实验结果如图6所示。
由图6可知,化合物HY052301能显著地抑制人肝癌细胞Hep G2细胞株细胞增殖并诱导其凋亡,IC50为0.6749μM。
(7)对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物(HY052301)对人肝癌细胞Hep 3B细胞株细胞增殖的影响。
实验方法:收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至10000每孔(留8孔为调零孔,100ul 10%胎牛血清的DMEM完全培养液填充),用含10%胎牛血清的DMEM完全培养液培养,5%CO2、37℃条件下孵育24h,观察细胞是否单层铺满孔底并拍照;若铺满则设立对照孔、实验孔,小心吸出培养液,在调零孔和对照孔加入100ul含1%胎牛血清的DMEM完全培养液,在实验孔加入100ul含1%胎牛血清的DMEM完全培养液配制的梯度药物HY052301(0.004μM;0.08μM;0.16μM;0.31μM;0.625μM;1.25μM;2.5μM;5.0μM;10.0μM),每组8个复孔;5%CO2,37℃孵育24h,倒置显微镜下观察并拍照。小心吸出培养液,PBS小心洗两遍,加入100ulPBS/孔,然后加入10ulMTT溶液(5mg/ml,即0.5%MTT),继续培养4h。终止培养,小心吸去孔内培养液,每孔加入150ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10min,在酶联免疫检测仪OD 490nm处测量各孔的吸光值。IC50(%)=((实验组OD值-空白OD值)/(对照OD值-空白OD值))G100%,实验平行重复3次,实验结果如图7所示。
由图7可知,化合物HY052301能显著地抑制人肝癌细胞Hep 3B细胞株细胞增殖并诱导其凋亡,IC50为0.6303μM。
(8)对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物(ZY013602)对STAT3持续激活高干性人肝癌Huh-7细胞株细胞增殖的影响。
实验方法:收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至10000每孔(留8孔为调零孔,100ul 10%胎牛血清的DMEM完全培养液填充),用含10%胎牛血清的DMEM完全培养液培养,5%CO2、37℃条件下孵育24h,观察细胞是否单层铺满孔底并拍照;若铺满则设立对照孔、实验孔,小心吸出培养液,在调零孔和对照孔加入100ul含1%胎牛血清的DMEM完全培养液,在实验孔加入100ul含1%胎牛血清的DMEM完全培养液配制的梯度药物HY041106(0.001μM;0.02μM;0.04μM;0.08μM;0.16μM;0.31μM;0.63μM;1.25μM;2.5μM),每组8个复孔;5%CO2,37℃孵育24h,倒置显微镜下观察并拍照。小心吸出培养液,PBS小心洗两遍,加入100ulPBS/孔,然后加入10ulMTT溶液(5mg/ml,即0.5%MTT),继续培养4h。终止培养,小心吸去孔内培养液。每孔加入150ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10min,在酶联免疫检测仪OD 490nm处测量各孔的吸光值。IC50(%)=((实验组OD值-空白OD值)/(对照OD值-空白OD值))G100%,实验平行重复3次,实验结果如图8所示。
由图8可知,化合物ZY013602能显著地抑制高干性人肝癌细胞株Huh-7细胞增殖并诱导其凋亡,IC50为0.2717μM。
(9)对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物(XL023809)对人结肠癌干细胞细胞自我更新和增值效果。
实验方法:肿瘤干细胞肿瘤球形成实验是评价肿瘤干细胞自我更新和增殖能力的可靠方法。实验设DMSO空白对照组和给药组,每组设6个复孔。将人结肠癌干细胞接种于24孔板中,每孔接种104个细胞,每孔加入1mL含药培养液,置37℃,5%CO2培养箱中培养。3天后,吸弃培养基0.5mL,加入相应含药培养基0.5mL,置培养箱中培养2天后,置显微镜下观察结肠癌干细胞肿瘤球形成的情况,包括数量、大小、形态等,并进行拍照。利用ImageJ软件计算细胞数大于10的肿瘤球数。利用GraphPad Prism 5软件对结果进行非线性回归分析,并计算出对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物XL023809对人结肠癌干细胞肿瘤球形成的半数抑制浓度(IC50值)。利用SPSS 19统计软件中的单因素方差分析对结果进行统计学分析,实验结果如图9所示。
由图9可知,与空白对照组比较,给药组干细胞肿瘤球数量随着化合物XL023809浓度的增大而明显减少,化合物XL023809可以剂量依赖性地抑制肿瘤干细胞肿瘤球的形成和增殖。其中,在浓度为1.25μM时绝大多数肿瘤干细胞已经死亡;而在浓度为2.50μM时,肿瘤干细胞则全部死亡。这说明,对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物XL023809对体外培养的人结肠癌干细胞肿瘤球的形成及增殖有显著的抑制作用。通过GraphPad Prism 5软件对实验数据进行非线性回归分析,并计算得出对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物(XL023809)对人结肠癌干细胞细胞增殖抑制作用的IC50值为0.4489μM。
(10)对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物(XL023809)对人肝癌干细胞细胞自我更新和增值效果。
实验方法:肿瘤干细胞肿瘤球形成实验是评价肿瘤干细胞自我更新和增殖能力的可靠方法。实验设DMSO空白对照组和给药组,每组设6个复孔。将人肝癌干细胞接种于24孔板中,每孔接种104个细胞,每孔加入1mL含药培养液,置37℃,5%CO2培养箱中培养。3天后,吸弃培养基0.5mL,加入相应含药培养基0.5mL,置培养箱中培养2天后,置显微镜下观察肝癌干细胞肿瘤球形成的情况,包括数量、大小、形态等,并进行拍照。利用ImageJ软件计算细胞数大于10的肿瘤球数。利用GraphPad Prism 5软件对结果进行非线性回归分析,并计算出对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物XL023809对人肝癌干细胞肿瘤球形成的半数抑制浓度(IC50值)。利用SPSS 19统计软件中的单因素方差分析对结果进行统计学分析,实验结果如图10所示。
由图10可知,与空白对照组比较,给药组干细胞肿瘤球数量随着化合物XL023809浓度的增大而明显减少,化合物XL023809可以剂量依赖性地抑制肿瘤干细胞肿瘤球的形成和增殖。其中,在浓度为0.5μM时绝大多数肿瘤干细胞已经死亡.这说明,对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物XL023809对体外培养的人肝癌干细胞肿瘤球的形成及增殖有显著的抑制作用。通过GraphPad Prism 5软件对实验数据进行非线性回归分析,并计算得出对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物化合物(XL023809)对人结肠癌干细胞细胞增殖抑制作用的IC50值为0.2546μM。
最后所应当说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制,尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (10)
2.如权利要求1所述的对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物,其特征在于,所述取代芳基、取代芳杂环基中的取代基选自卤素、羟基、氰基、巯基、氨基、硝基、亚硝基、烷基、烷氧基、酯基、羧基、磺酰基、酰基、硼酸基或硼酯基。
8.如权利要求7所述的对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中,反应温度为25~100℃,反应时间为4~12h,溶剂为二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺中的至少一种,惰性气体为氩气;所述步骤(2)中,溶剂为乙酸乙酯、二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺中的至少一种,式(III)所示化合物与对苯醌的摩尔比为(1~3):1,反应温度为25~100℃,反应时间为4~12h。
9.如权利要求1~6所述的对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物或其药学上可接受的盐或水合物在制备自噬关键蛋白ATG4B酶抑制剂药物或治疗STAT3信号通路转导异常的疾病的药物中的应用。
10.如权利要求1~6所述的对苯醌并双三氮唑核心骨架衍生物或其药学上可接受的盐或水合物在制备肿瘤干细胞抑制剂药物中的应用。
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