CN110831621A - 稳定的液体药物组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了在基于磷酸‑氨基酸的双重缓冲剂体系中的抗体的稳定液体制剂。在基于磷酸‑氨基酸的双重缓冲剂体系中配制的抗体，在较低以及较高的浓度下，均可赋予抗体最佳的稳定性。此外，在基于磷酸‑氨基酸的缓冲剂体系中配制的抗体具有低粘度，并且适合于高浓度抗体的治疗性施用。

Description

稳定的液体药物组合物
技术领域
本发明涉及一种稳定的液体抗体制剂，其中该抗体在包含“磷酸盐-氨基酸缓冲剂”的双缓冲剂体系中配制。
发明背景
生物技术的进步为开发大量用于治疗用途的抗体铺平了道路。然而，对于任何抗体治疗剂而言，该抗体制剂的稳定性是确保其安全性及其有效施用的最重要标准之一。
通常优选液体蛋白/抗体制剂，因为它们施用方便，并且适合使用许多市售装置进行施用。然而，与传统的“小分子”药物相比，更大、更复杂的抗体在溶液中也更加不稳定。抗体对pH、温度和氧化更敏感，并且可以在溶液中经历多种共价和非共价的修饰和/或降解。特别地，抗体在液体制剂中降解更快，这导致了分子的物理和化学不稳定性。化学不稳定性的例子包括脱酰胺、水解、氧化或二硫键交换，而物理不稳定性可能是变性、聚集、吸附或沉淀的结果。
此外，具有高抗体/蛋白质浓度的液体制剂表现出高粘度，并且溶液中聚集度提高，影响分子的稳定性和功效。因此，液体/溶液中的抗体对用于治疗用途的配制提出了固有的挑战。
本发明的目的是解决在开发稳定抗体制剂中的这些挑战。
发明内容
本发明公开了一种稳定的液体抗体制剂，其中所述制剂包含包括磷酸盐和氨基酸作为缓冲剂的双缓冲剂体系。
组分。该双缓冲剂体系中的氨基酸组分是磷酸盐组分的抗衡离子。所述“磷酸盐-氨基酸”双缓冲剂体系能够使抗体在约10mg/ml至约200mg/ml的浓度范围内稳定。特别地，本发明公开了一种磷酸盐-氨基酸缓冲剂中的稳定液体制剂，所述制剂包含山梨糖醇、表面活性剂和任选地精氨酸。
具体地，上述本发明制剂没有任何已知的抗氧化剂。换句话说，即使该组合物中不使用任何已知的抗氧化剂，本发明的制剂组合物也保护抗体(例如，托珠单抗(tocilizumab))免于氧化。
另外，本发明公开了一种低粘度的稳定液体抗体制剂，其中该制剂包含“磷酸盐-氨基酸”缓冲剂体系，并且其中该制剂的粘度小于10cP，并且优选地小于5cP。
此外，“磷酸盐-氨基酸”缓冲剂体系中配制的抗体在以下存储条件下稳定，例如在2-8℃稳定至少6个月，或在25℃稳定至少6个月，或在40℃稳定至少2周，或在40℃稳定至少4周。
在上述储存条件下，在基于“磷酸盐-氨基酸”缓冲剂体系中配制的抗体组合物中的聚集体含量小于5％，并且单体含量至少为95％。
附图简述
图1示出了尺寸排阻色谱法(SEC数据)，即多种缓冲剂对根据实施例1制备的托珠单抗(230mg/ml)制剂的HMW和单体含量的影响。图1(a)表示HMW含量，图1(b)表示单体含量。
图2示出了离子交换色谱法(IEX)数据，即多种缓冲剂对根据实施例1制备的托珠单抗(230mg/ml)制剂的主峰含量的影响。
图3示出了差示扫描荧光法(DSF)数据，即冻融研究后多种糖对托珠单抗稳定性的影响。
图4示出了差示光散射(DLS)数据，即多种赋形剂对根据实施例6制备的高浓度托珠单抗制剂稳定性的影响。
发明详述
定义
术语“抗体”是指包含通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链的糖蛋白，或其抗原结合部分。本文所用的“抗体”涵盖完整抗体或其任何抗原结合片段(即，“抗原结合部分”)或融合蛋白。
术语“稳定”制剂是指制剂，其中在所述制剂中的抗体在储存时保持其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物活性。
本发明在本文中提及的术语“抗氧化剂”包括抑制氧化的试剂，并因此用于防止制剂因氧化过程而变质。此类化合物作为例子包括但不限于例如甲硫氨酸、半胱胺酸、肌肽抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、柠檬酸、丁基羟基茴香醚、丁基羟基甲苯、氢亚磷酸(hydrophosphorous acid)、单硫代甘油、没食子酸丙酯、甲硫氨酸、抗坏血酸钠、柠檬酸钠、硫化钠、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、甲醛次硫酸氢钠、巯基乙酸、焦亚硫酸钠、EDTA(乙二胺四乙酸)、三胺五乙酸(pentetate)。所公开的本发明的制剂没有抗氧化剂，特别是甲硫氨酸。
稳定性研究提供了一段时间内在多种环境因素影响下的抗体质量的证据。ICH的“Q1A：Stability Testing of New Drug Substances and Products”指出，来自加速稳定性研究的数据可用于评估高于或低于标签储存条件的短期偏移的影响，所述短期偏移可能发生在抗体运送期间。
有多种分析方法可用于测量药物制剂中抗体的物理和化学降解。如果抗体通过目视检查颜色和/或澄清度，或通过UV光散射或通过尺寸排阻色谱测得基本上没有聚集、沉淀和/或变性迹象，则抗体在药物制剂中“保持其物理稳定性”。当抗体显示没有或几乎没有形成产物变体时，可以说抗体在药物制剂中“保持其化学稳定性”，所述产物变体可包括由于感兴趣的抗体的化学修饰(如脱氨、氧化等)而导致的变体。可使用诸如离子交换色谱和疏水离子色谱的分析方法研究化学产物变体。
本文所用术语“单体”是指由两条轻链和两条重链组成的抗体。抗体组合物的单体含量通常通过尺寸排阻色谱法(SEC)进行分析。根据SEC的分离原理，大分子或具有高分子量(HMW)的分子先洗脱，然后是较小或较低分子量的分子。在抗体组合物的典型SEC概况中，可包括二聚体、多聚体等的聚集体先洗脱，然后是单体，并且最后可洗脱截短的抗体变体或降解物。在某些情况下，聚集体峰或降解物峰可能不会作为基线分离峰洗脱，反而是作为肩峰或异常宽峰洗脱。为了维持抗体，特别是治疗性抗体的适当活性，期望减少聚集体产物或降解物产物的形成，并因此将单体含量控制在目标值。在稳定性研究期间的多个时间点测量的抑制聚集体和降解物含量形成的能力可表明候选制剂对目标抗体的适用性。TOSCH的TSK-GEL G3000SWXL(7.8mm x 30cm)色谱柱可用于水性HPLC来进行SEC。
如本文所用的术语“主峰”是指在阳离子交换色谱过程中大量洗脱的峰(主要峰)。在阳离子交换色谱法期间，比主峰更早洗脱的峰，因其电荷相对于主峰更为酸性被称为酸性变体峰。在阳离子交换色谱中，比主峰更晚洗脱的峰，因其电荷相对于主峰更为碱性被称为碱性变体峰。主峰含量可通过离子交换色谱(IEC)确定。有两种可用的IEC模式，即阳离子交换色谱和阴离子交换色谱。带正电的分子与阴离子交换树脂结合，而带负电的分子与阳离子交换树脂结合。在典型的抗体组合物阳离子交换层析谱中，酸性变体先洗脱，然后是主峰并且之后最后将洗脱碱性变体。酸性变体是抗体修饰的结果，例如天冬酰胺残基脱酰胺的结果。碱性变体是C-末端赖氨酸残基未完全去除、N-末端谷氨酰胺残基未完全环化、天冬酰胺异构化以及尤其是抗体Fc区中存在的甲硫氨酸残基氧化的结果[Chromatographicanalysis of the acidic and basic species of recombinant monoclonalantibodies；；mAbs；Page number 581；Volume 4；卷；Issue 5]。通常，在抗体中，重链和轻链的C-末端都存在赖氨酸残基。在重链和轻链上均包含赖氨酸的抗体分子称为K2变体，在重链和轻链中任一个上包含赖氨酸残基的抗体分子称为K1变体，而二者均不具有的抗体分子称为K0分子。羧肽酶B(CP-B酶)酶作用于K2和K1变体上的C-末端赖氨酸残基，从而将其转化为K0分子。根据具体情况，可以对用羧肽酶B(CP-B)酶消化的样品进行IEC分析。在典型的稳定性研究中，预计在研究过程中，稳定的制剂导致电荷变体(酸性和碱性变体)的形成的减少，并从而使任何主峰含量的减少达到最小化。
动态光散射(DLS)测量由于粒子经历随机布朗运动而引起的散射强度随时间变化的波动。可以从这些波动的分析中获得扩散系数和颗粒大小信息。更具体地说，该方法提供了测量液体介质中蛋白质尺寸特征的能力。从该技术获得的扩散系数值与给定溶液中分子的溶解度成正比。
差示扫描荧光法(DSF)允许快速确定高通量下蛋白质的稳定性，并允许直接比较待研究的不同条件下的不同蛋白质或相同蛋白质。DSF在存在荧光染料的情况下监视蛋白质的热去折叠，并通常通过使用实时PCR仪器进行。与荧光淬灭的水溶液相比，可用于DSF的荧光染料在非极性环境(例如未折叠蛋白质上的疏水位点)中具有高荧光性。将荧光强度绘制为温度的函数；这将产生一个可通过双态过渡描述的S形曲线。
术语“百分比回收率”是指最终制剂缓冲剂中获得的抗体浓度与制剂步骤之前的加工缓冲剂中抗体浓度的比例。例如，加工缓冲剂可以是在制剂步骤之前的下游加工步骤的洗脱或过滤缓冲剂。
用于抗体的高浓度制剂是指制剂，其使得能够使用等于或小于用于标准治疗的制剂的低体积向对象施用更高剂量。
药学上可接受的赋形剂是指添加剂或载体，其可有助于抗体在制剂中的稳定性。赋形剂可包含稳定剂和张力调节剂。稳定剂和张力调节剂的实例包括但不限于糖、多元醇、盐、氨基酸或表面活性剂，及其衍生物和组合。
糖和多元醇可以指单糖、双糖和多糖。糖的实例包括但不限于蔗糖、海藻糖、葡萄糖、右旋糖、棉子糖等。另外，多元醇是指含有多个羟基基团的醇。多元醇的实例包括但不限于甘露糖醇、山梨糖醇等。
表面活性剂是指用于保护蛋白质制剂免受各种胁迫条件(例如搅拌、剪切、暴露于高温等)的药学上可接受的赋形剂。合适的表面活性剂包括但不限于聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯(诸如Tween 20TM或Tween 80TM)、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物(例如，泊洛沙姆、普郎尼克(Pluronic))、十二烷基硫酸钠(SDS)等或其组合。
盐用作张力调节剂，并且盐的实例包括但不限于氯化钠、氯化钾、氯化镁、精氨酸盐酸盐、硫氰酸钠、硫氰酸铵、硫酸铵、氯化铵、氯化钙、氯化锌和/或乙酸钠。
一种或多种氨基酸也可以作为稳定剂为抗体制剂的一部分，并且可以选自碱性氨基酸或疏水性氨基酸或其组合。
通过参考以下实施例更全面地描述本发明的某些特定方面和实施方式。但是，这些实例不应以任何方式解释为限制本发明的范围。
实施方式详述
本发明公开了一种稳定的液体抗体制剂，其包含双缓冲剂体系，该双缓冲剂体系包含磷酸盐和氨基酸作为缓冲剂组分。基于“磷酸盐-氨基酸”的双缓冲剂体系适用于配制低浓度以及高浓度的抗体。此外，即使在抗体的高浓度下，缓冲剂体系也可使制剂的粘度降低。另外，相对于“配制过程”，所公开的缓冲剂在抗体的“更好回收”方面是有利的。抗体纯化后，该过程首先涉及“缓冲剂交换”步骤，其中最后一个下游加工步骤的缓冲剂与待在其中配制抗体的缓冲剂交换。但是这一“交换”步骤通常伴随着抗体的大量损失。然而，当“下游缓冲剂”与本发明的“磷酸盐-氨基酸”缓冲剂交换时，该抗体损失显著降低。
本发明的一个实施方式公开了一种稳定的液体抗体制剂，其中该制剂包含磷酸盐-氨基酸双缓冲剂体系。
在本发明的以上所述实施方式中，所述缓冲剂体系中的氨基酸组分充当缓冲剂磷酸盐组分的抗衡离子。
在本发明的另一个实施方式中，氨基酸选自由碱性氨基酸和疏水性氨基酸组成的组。
在另一个实施方式中，碱性氨基酸选自组氨酸、赖氨酸和精氨酸；疏水性氨基酸可以是甘氨酸或丙氨酸。
在一个实施方式中，本发明公开了一种稳定的液体抗体制剂，其中该抗体在磷酸盐-氨基酸缓冲剂体系中配制，并且其中该抗体的浓度在约10mg/ml至约200mg/ml的范围内。
在一个实施方式中，本发明公开了一种稳定的液体高浓度抗体制剂，其中该抗体在磷酸盐-氨基酸缓冲剂体系中配制，并且其中该抗体的浓度为至少20mg/ml，或至少50mg/ml，或至少100mg/ml，或至少150mg/ml。
在一个实施方式中，本发明公开了一种稳定的低粘度液体抗体制剂，其中该制剂包含磷酸盐-氨基酸缓冲剂体系，并且其中该制剂的粘度小于10cP，优选地小于5cp。该制剂可包括药学上可接受的盐，其中盐和/或缓冲试剂的浓度小于100mM，优选地小于50mM。
在上述任何一个实施方式中，在磷酸盐-氨基酸缓冲剂中配制的抗体在以下至少一种存储条件下保持稳定，例如，在2-8℃至少6个月，或在25℃至少6个月，或在40℃至少2周，或在40℃至少4周。
在一个实施方式中，本发明公开了一种稳定的液体抗体制剂，其中该制剂包含磷酸盐-氨基酸双缓冲剂体系，其中该制剂没有抗氧化剂。
在本发明的任何一个上述实施方式中，抗体是治疗性抗体。
在上述实施方式中，该治疗性抗体是抗IL6R抗体或抗HER2抗体。在
一个实施方式中，本发明公开了一种磷酸盐-氨基酸缓冲剂中的抗IL6R抗体的稳定药物制剂，其包含山梨糖醇和表面活性剂。
在上述实施方式中，抗IL6R抗体没有任何抗氧化剂。
在一个实施方式中，本发明公开了一种磷酸盐-氨基酸缓冲剂中的抗IL6R抗体的稳定药物制剂，所述制剂包含山梨糖醇和表面活性剂，并且其中，该制剂没有任何抗氧化剂。
在又一个实施方式中，本发明公开了一种磷酸盐-氨基酸缓冲剂中的抗IL6R抗体的稳定药物制剂，所述制剂包含山梨糖醇、表面活性剂和精氨酸，并且其中，该制剂没有任何抗氧化剂。
在任何上述实施方式中，所述抗氧化剂是甲硫氨酸。
在一个实施方式中，本发明公开了一种稳定的液体托珠单抗制剂，其中该制剂包含磷酸盐-氨基酸缓冲剂体系。所述磷酸盐-氨基酸缓冲剂优选地为磷酸盐-组氨酸、磷酸盐-甘氨酸或磷酸盐-天冬氨酸盐缓冲剂。
在一个实施方式中，本发明公开了一种稳定的液体托珠单抗制剂，其中该抗体在磷酸盐-氨基酸缓冲剂体系中配制，并且其中该抗体的浓度在约20mg/ml至约180mg/ml的范围内。
在上述实施方式中，在磷酸盐-氨基酸缓冲剂中配制的托珠单抗在至少一种以下存储条件下保持稳定，例如，在2-8℃至少6个月，或在25℃至少6个月，或在40℃至少2周，或在40℃至少4周。
在另一个实施方式中，本发明公开了一种托珠单抗的稳定液体制剂，所述制剂包含磷酸盐-氨基酸缓冲剂体系，其中该制剂在至少一种以下储存条件下保持抗体组合物中单体含量至少为95％：例如在2-8℃至少6个月，或25℃至少6个月，或在40℃至少2周，或在40℃至少4周。
在又一个实施方式中，本发明公开了一种托珠单抗的稳定液体制剂，所述制剂包含磷酸盐-氨基酸缓冲剂体系，其中该制剂在至少一种以下储存条件下保持抗体组合物中聚集体含量少于5％：例如在2-8℃至少6个月，或在25℃至少6个月，或在40℃至少2周，或在40℃至少4周。
在另一个实施方式中，本发明公开了一种托珠单抗的稳定液体制剂，所述制剂包含磷酸盐-氨基酸缓冲剂体系，其中该制剂在其中一种以下储存条件下保持主峰含量中至少约50％为托珠单抗：例如在2-8℃至少3个月，或在25℃至少3个月，或在40℃至少2周，或在40℃至少4周。
在本发明的上述实施方式中，在其中一种以下存储条件下磷酸盐-氨基酸缓冲剂中的稳定托珠单抗制剂在制剂中包含抗体的碱性变体小于10％：例如在2-8℃至少3个月，或在25℃至少3个月，或在40℃至少2周，或在40℃至少4周。抗体的碱性变体是C-末端赖氨酸残基未完全去除、N-末端谷氨酰胺残基未完全环化、天冬酰胺异构化以及尤其是抗体Fc区存在的甲硫氨酸残基氧化的结果。
在一个实施方式中，本发明公开了一种托珠单抗的稳定液体制剂，所述制剂包含磷酸盐-组氨酸缓冲剂、山梨糖醇和表面活性剂。
在一个实施方式中，本发明公开了一种托珠单抗的稳定液体制剂，所述制剂包含磷酸盐-组氨酸缓冲剂、山梨糖醇、表面活性剂和精氨酸，其中该制剂没有甲硫氨酸。
在上述实施方式中，即使在多次冻融循环后，该抗体也是稳定的。该制剂中存在的山梨糖醇在多次冻融胁迫条件下保护/稳定所述抗体。
在上述实施方式中，在磷酸盐-组氨酸缓冲剂中被山梨糖醇稳定的托珠单抗的浓度在约20mg/ml至约200mg/ml的范围内。
在一个实施方式中，本发明公开了一种曲妥珠单抗(trastuzumab)的稳定液体制剂，其中该制剂包含磷酸盐-氨基酸缓冲剂体系。
此外，在任何一个上述实施方式中，该制剂可包含药学上可接受的赋形剂，例如糖、多元醇、表面活性剂、盐、氨基酸及其组合和衍生物。优选地，所述多元醇是山梨糖醇。
实施例
适合于存储在本发明药物组合物中的托珠单抗通过本领域已知的标准方法产生。例如，托珠单抗通过在诸如中国仓鼠卵巢细胞的哺乳动物宿主细胞中重组表达免疫球蛋白轻链和重链基因来制备。此外，收获表达的托珠单抗，并将粗收获物进行标准的下游加工步骤，包括纯化、过滤和任选的稀释或浓缩步骤。例如，可以使用标准色谱技术(诸如亲和色谱法、离子交换色谱法及其组合)来纯化托珠单抗的粗收获物。纯化的托珠单抗溶液可以另外进行一个或多个过滤步骤，并对获得的溶液进行进一步的制剂研究。
实施例1：单缓冲剂Vs磷酸盐-氨基酸双缓冲剂
从下游加工的最后一步获得的托珠单抗(浓度为35mg/ml)进行缓冲剂交换，并在单缓冲剂和双缓冲剂(诸如磷酸盐-氨基酸)中浓缩至230mg/ml。缓冲剂组合物的详细信息在表1中示出。在将不同缓冲剂中的托珠单抗浓缩至230mg/ml后，利用尺寸排阻色谱法检查样品中的高分子量(HMW)物质和单体含量[结果在图1(a)和(b)中示出]。并还利用离子交换色谱法检查主峰含量[结果在图2中示出]。
表1：用于实施例1的缓冲剂组合物
缓冲剂组合物 最终pH值
20mM磷酸盐缓冲剂 6.0
20mM组氨酸缓冲剂 6.0
20mM磷酸盐-组氨酸缓冲剂 6.0
实施例2：基于磷酸盐-氨基酸的双缓冲剂体系中高浓度托珠单抗(180mg/ml)的制剂
为了实现托珠单抗的稳定的液体高浓度制剂，作为实验设计的一部分，多种基于“磷酸盐-氨基酸”的双缓冲剂组合物制备为20mM的浓度。将从下游加工的最后步骤获得的托珠单抗(浓度为30.02mg/ml)在多种磷酸盐-氨基酸双缓冲剂(表2中列出)中进行缓冲剂交换，并在所述双缓冲剂中浓缩至180mg/ml。将与组氨酸缓冲剂进行缓冲剂交换的托珠单抗组合物作为参照维持，因为180mg/ml的托珠单抗的批准的和市售的制剂，
Figure GDA0002359228890000071
或
Figure GDA0002359228890000072
都在组氨酸缓冲剂中。另外，该双缓冲剂中的一个保持为基于“非磷酸盐-氨基酸”的缓冲剂，以便用作阴性对照。
计算多种缓冲剂中托珠单抗的百分比回收率(缓冲剂交换和浓缩后)，其详细情况在表2中提供。
表2：根据实施例2制备的托珠单抗180mg/ml制剂的百分比回收率
在缓冲剂组合物(20mM)中的托珠单抗(180mg/ml) 回收率(％)
组氨酸缓冲剂(对照) 89.5
磷酸盐-组氨酸 95.7
磷酸盐-天冬氨酸盐 96.0
磷酸盐-琥珀酸盐 90.0
琥珀酸盐-甘氨酸 80.2
测量所有基于“磷酸盐-氨基酸”的双缓冲剂制剂的粘度，并观察到低于5cP。
实施例3：使用动态光散射(DLS)进行的托珠单抗的溶解度测量
为了了解托珠单抗在多种缓冲剂背景下的溶解度模式，将来自下游加工步骤的托珠单抗样品(浓度为30.02mg/ml)在多种缓冲剂组合物(表3中列出)中进行缓冲剂交换，并浓缩至140-180mg/ml。然后将高浓度的托珠单抗连续稀释至较低浓度。然后将样品进行DLS以测定扩散系数，该系数表示托珠单抗的溶解度。其结果如表3所示。
表3：根据实施例3的托珠单抗(140-180mg/ml)制剂的DLS数据
Figure GDA0002359228890000081
Figure GDA0002359228890000091
实施例4：加速稳定性研究
将来自下游加工步骤的托珠单抗样品(浓度为30.02mg/ml)在多种缓冲剂组合物(表3中列出)进行缓冲剂交换，并浓缩至180mg/ml。然后对这些样品进行加速稳定性研究，其中将各缓冲剂背景中的托珠单抗制剂在40℃储存2周。储存后，使用尺寸排阻色谱法(SEC)分析样品的高分子量(HMW)物质和单体含量[结果在表4中示出]。并且，使用离子交换色谱法(IEX)分析样品的酸性物质、主峰含量[结果在表5中示出]。
表4：根据实施例4配制并在40℃下储存2周的托珠单抗(180mg/ml)制剂的SEC数据
表5：根据实施例4配制并在40℃下储存2周的托珠单抗(180mg/ml)制剂的IEX数据
Figure GDA0002359228890000093
实施例5：使用差示扫描荧光法选择合适的糖来稳定托珠单抗
为了使用DSF技术了解托珠单抗的热去折叠性质，在组氨酸-磷酸盐缓冲剂(HP)背景中配制托珠单抗(20mg/ml)，并掺入多种糖。之后，通过使用深度冷冻器将样品冷冻至-80℃并在室温下解冻，使所有样品多次(至少3次)冻融循环。使用DSF对样品进行分析。结果在图3中示出。
实施例6：在包含不同赋形剂的磷酸盐-氨基酸双缓冲剂体系中的托珠单抗(180mg/ml)制剂
作为实验设计的一部分，为了评估不同赋形剂在稳定高浓度托西珠单抗中的作用，将从下游色谱步骤获得的托珠单抗在磷酸盐-组氨酸缓冲剂背景中浓缩至180mg/ml。之后，以不同的浓度和不同的组合添加多种赋形剂，例如多元醇(山梨糖醇)、氨基酸(甲硫氨酸/精氨酸)、张力调节剂(氯化钠)和表面活性剂(聚山梨酯80)。制剂的详细信息在表6中示出。FDA批准的含有组氨酸缓冲剂、精氨酸、甲硫氨酸和聚山梨酯的托珠单抗的皮下用制剂在随后的实验中用作参考标准。之后，所有样品在25℃进行6个月的加速稳定性研究，并在40℃进行4周的加速稳定性研究。在不同时间点定期抽取样品，并利用SEC分析法分析pH值的变化[结果在表7中示出]、目视检查[结果在表8中示出]、单体、HMW含量和LMW含量[结果在表9a-c中示出]。而且，还对样品在2-8℃测试了实时稳定性研究。
此外，还使用DLS测试了所述样品的胶体稳定性[结果在图4中示出]。
表6：根据实施例6配制的托珠单抗(180mg/ml)制剂
表7：根据实施例6制备的托珠单抗制剂的pH在2-8℃、25℃和40℃的变化
Figure GDA0002359228890000102
Figure GDA0002359228890000111
T-表示时间，M-月；以及W-周
表8：根据实施例6制备的托珠单抗制剂在2-8℃、25℃和40℃的目视检查
Figure GDA0002359228890000112
T-表示时间，M-月；以及W-周
表9a：根据实施例6制备的托珠单抗制剂在2-8℃的SEC数据
Figure GDA0002359228890000113
T-表示时间，M-月；
表9b：根据实施例6制备的托珠单抗制剂在25℃的SEC数据
Figure GDA0002359228890000121
T-表示时间，M-月；
表9c：根据实施例6制备的托珠单抗制剂在40℃的SEC数据
Figure GDA0002359228890000122
T-表示时间，M-月；
实施例7：没有抗氧化剂的稳定托珠单抗制剂(180mg/ml)
通常，氧化，特别是甲硫氨酸残基的氧化产生碱性变体，并在IEX色谱法过程中洗脱为碱性峰(即晚于主峰)。根据上述实验，与不含精氨酸的制剂相比，含有山梨糖醇和精氨酸的托珠单抗制剂最稳定。此外，多种浓度的没有任何抗氧化剂(甲硫氨酸)的含山梨糖醇和精氨酸的托珠单抗制剂进行了碱性物质形成的评估。制剂的详细信息在表10中给出。所有样品均在2-8℃、25℃和40℃进行了稳定性研究。在不同的时间点定期抽取样品，并使用IEX色谱法分析酸性、碱性和主峰含量[结果在表11a-c中示出]。
表10：根据实施例7配制的托珠单抗(180mg/ml)制剂
Figure GDA0002359228890000131
表11a：根据实施例7制备的托珠单抗制剂在2-8℃的IEX数据
Figure GDA0002359228890000132
T-表示时间，M-月；
表11b：根据实施例6制备的托珠单抗制剂在25℃的IEX数据
Figure GDA0002359228890000133
Figure GDA0002359228890000141
T-表示时间，M-月；
表11c：根据实施例7制备的托珠单抗制剂在40℃的IEX数据
Figure GDA0002359228890000142
T-表示时间，W-周；
实施例8：包含不同赋形剂的基于磷酸盐-氨基酸的双缓冲剂体系中的托珠单抗(20mg/ml)制剂
作为实验设计的一部分，为了配制低浓度的托珠单抗(20mg/ml)，以浓度为20mM制备了多种的“磷酸盐-氨基酸”缓冲剂，向其中添加了不同赋形剂(诸如糖/多元醇、表面活性剂)。任选地，将盐(即，氯化钠)添加到一些“磷酸盐-氨基酸”缓冲剂组合中。从最后的下游加工步骤中获得的托珠单抗(浓度为30.02mg/ml)在包含磷酸盐-氨基酸缓冲剂的不同双缓冲剂体系和药学上可接受的赋形剂中进行缓冲剂交换[组合物如表12所示]。然后将样品在各个含有赋形剂的缓冲剂背景中稀释/调整，以达到20mg/ml的托珠单抗浓度。在包含磷酸盐缓冲剂、蔗糖和聚山梨酯80的缓冲剂组合物中配制的托珠单抗用作参考标准，因为批准的
Figure GDA0002359228890000143
或
Figure GDA0002359228890000144
的20mg/ml制剂在该缓冲剂组合物中。
表12：根据实施例8在不同双缓冲剂组合中配制的托珠单抗(20mg/ml)
Figure GDA0002359228890000151
表6中提到的托珠单抗制剂在40℃置于加速稳定性条件下4周。然后使用尺寸排阻色谱法(SEC)分析制剂中的高分子量物质和单体含量，并且结果在表13中显示。使用离子交换色谱法(IEX)分析酸性物质和主峰含量的百分比，并且其结果在表14中示出。
表13：根据实施例8配制并在40℃储存4周的托珠单抗(20mg/ml)制剂的SEC数据
表14：根据实施例8配制并在40℃储存4周的托珠单抗(20mg/ml)制剂的IEX数据
Figure GDA0002359228890000153
Figure GDA0002359228890000161
对根据表12配制的托珠单抗制剂进行加速稳定性研究，并进行目视检查[结果在表15中列出]。
表15：根据实施例8配制的托珠单抗(20mg/ml)制剂的目视检查数据
Figure GDA0002359228890000162
实施例9：在磷酸盐-氨基酸双缓冲剂背景中配制的其他抗体
在单缓冲剂和双缓冲剂中配制21mg/ml曲妥珠单抗(Tmab)。制剂的详细信息在表16中给出。
表16：单缓冲剂和双缓冲剂中的曲妥珠单抗组合物
Figure GDA0002359228890000163
通过将上述样品在37℃下保持4周，对上述样品进行加速稳定性研究。此外，测试样品pH的变化(结果在表17中示出)。
表17：根据实施例7制备的T-mab制剂在37℃的pH测量
Figure GDA0002359228890000171

Claims (15)

1.一种稳定的液体抗体制剂，其中所述制剂包含磷酸盐-氨基酸双缓冲剂体系。
2.根据权利要求1所述的制剂，其中所述磷酸盐-氨基酸缓冲剂体系中配制的所述抗体在至少一种以下存储条件下保持稳定，例如在2-8℃至少6个月，或在25℃至少6个月，或在40℃至少2周，或者在40℃至少4周。
3.根据权利要求1所述的制剂，其中在所述制剂中所述氨基酸充当所述缓冲剂的磷酸盐组分的抗衡离子。
4.根据权利要求1所述的制剂，其中所述制剂中所述抗体的浓度在约10mg/ml至约200mg/ml的范围内。
5.根据权利要求1所述的制剂，其中所述制剂的粘度小于10cp。
6.根据权利要求1所述的制剂，所述制剂还包含药学上可接受的赋形剂，例如糖、氨基酸、盐和表面活性剂。
7.根据权利要求6所述的制剂，其中所述制剂中缓冲剂和/盐的浓度小于50mM。
8.根据权利要求6所述的制剂，其中所述药学上可接受的赋形剂不含抗氧化剂。
9.根据权利要求1所述的制剂中的所述抗体，其是抗IL6R抗体或抗HER2抗体。
10.一种抗IL6R抗体的稳定液体制剂，所述稳定液体制剂包含磷酸盐-氨基酸缓冲剂体系、山梨糖醇和表面活性剂。
11.一种抗IL6R抗体的稳定液体制剂，所述稳定液体制剂包含磷酸盐-氨基酸缓冲剂体系、山梨糖醇、表面活性剂和任选地包含精氨酸。
12.根据权利要求10或11所述的制剂，其中所述制剂中的所述抗体没有抗氧化剂。
13.一种托珠单抗在磷酸盐-氨基酸缓冲剂体系中的稳定液体制剂，所述制剂包含山梨糖醇、表面活性剂和任选地包含精氨酸，其中所述制剂没有甲硫氨酸。
14.一种托珠单抗的稳定液体制剂，所述制剂包含磷酸盐-氨基酸缓冲剂体系，其中所述制剂在2-8℃储存至少6个月后，或在25℃储存至少6个月后，或在40℃储存至少2周后，或在40℃储存至少4周后保持至少95％的所述抗体的单体含量，和/或包含低于5％的所述抗体的聚集体。
15.一种托珠单抗的稳定液体制剂，所述制剂包含磷酸盐-组氨酸缓冲剂、山梨糖醇和表面活性剂。
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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114746439A (zh) * 2019-10-11 2022-07-12 雷迪博士实验室有限公司 整合蛋白抗体的稳定制剂
WO2022006051A1 (en) * 2020-06-29 2022-01-06 Anovent Pharmaceutical (U.S.), Llc Formulation of tocilizumab and method for treating covid-19 by inhalation
WO2022054076A1 (en) * 2020-09-08 2022-03-17 Dr. Reddy’S Laboratories Limited Il-6r targeting compositions and pharmacokinetic parameters thereof
WO2022130409A1 (en) * 2020-12-18 2022-06-23 Dr. Reddy's Laboratories Limited Il-6r targeting compositions with reduced heterogeneity in functional attributes
CN114200125B (zh) * 2021-12-06 2024-02-13 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种不含蛋白的碱性磷酸酶-抗体偶联物稀释液及其制备方法
WO2024098180A1 (en) * 2022-11-07 2024-05-16 Wuxi Biologics (Hong Kong) Limited Pharmaceutical compositions comprising anti-human tslp receptor antibodies and methods of using the same

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1612689A (zh) * 2001-11-08 2005-05-04 蛋白质设计实验室股份有限公司 IgG抗体稳定的液态药物制剂
WO2008066322A1 (en) * 2006-11-28 2008-06-05 Daewoong Co., Ltd. A stable hsa-free and antioxidant-free pharmaceutical composition comprising interferon-beta
CN101466404A (zh) * 2006-06-14 2009-06-24 埃姆克隆系统股份有限公司 抗-egfr抗体的冻干制剂
CN104363920A (zh) * 2012-06-12 2015-02-18 诺华股份有限公司 抗体制剂
US20150071925A1 (en) * 2013-09-11 2015-03-12 Arsia Therapeutics, Inc. Liquid protein formulations containing viscosity-lowering agents
WO2015190378A1 (ja) * 2014-06-10 2015-12-17 Ｍｅｉｊｉ Ｓｅｉｋａファルマ株式会社 安定なアダリムマブ水性製剤
CN106456538A (zh) * 2014-05-23 2017-02-22 阿雷斯贸易股份有限公司 液体药物组合物
CN106535935A (zh) * 2014-05-23 2017-03-22 阿雷斯贸易股份有限公司 液体药物组合物
WO2017057644A1 (ja) * 2015-09-30 2017-04-06 持田製薬株式会社 高濃度抗体含有液体製剤
WO2017122121A1 (en) * 2016-01-12 2017-07-20 Dr. Reddy's Laboratories Limited Stable pharmaceutical composition

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1988922A4 (en) * 2006-02-03 2010-06-02 Medimmune Llc PROTEIN FORMULATIONS
RU2013126477A (ru) * 2010-11-08 2014-12-20 Дженентек, Инк. Вводимые подкожно антитела против рецептора il-6

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1612689A (zh) * 2001-11-08 2005-05-04 蛋白质设计实验室股份有限公司 IgG抗体稳定的液态药物制剂
CN101466404A (zh) * 2006-06-14 2009-06-24 埃姆克隆系统股份有限公司 抗-egfr抗体的冻干制剂
WO2008066322A1 (en) * 2006-11-28 2008-06-05 Daewoong Co., Ltd. A stable hsa-free and antioxidant-free pharmaceutical composition comprising interferon-beta
CN104363920A (zh) * 2012-06-12 2015-02-18 诺华股份有限公司 抗体制剂
US20150071925A1 (en) * 2013-09-11 2015-03-12 Arsia Therapeutics, Inc. Liquid protein formulations containing viscosity-lowering agents
CN106456538A (zh) * 2014-05-23 2017-02-22 阿雷斯贸易股份有限公司 液体药物组合物
CN106535935A (zh) * 2014-05-23 2017-03-22 阿雷斯贸易股份有限公司 液体药物组合物
WO2015190378A1 (ja) * 2014-06-10 2015-12-17 Ｍｅｉｊｉ Ｓｅｉｋａファルマ株式会社 安定なアダリムマブ水性製剤
WO2017057644A1 (ja) * 2015-09-30 2017-04-06 持田製薬株式会社 高濃度抗体含有液体製剤
WO2017122121A1 (en) * 2016-01-12 2017-07-20 Dr. Reddy's Laboratories Limited Stable pharmaceutical composition

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