CN110799517A - 用于预防及治疗疼痛的具有止痛效果的化合物 - Google Patents

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李政翰
张仁垚
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Abstract

本发明关于用于预防及/或治疗疼痛的化合物。该等化合物藉由N6‑(4‑羟基苯甲基)腺苷及类似化合物与胺基酸或肽的共轭衍生。在本发明的一个实施例中，该化合物为5'‑甘胺酰基羰基‑N6‑(4‑羟基苯甲基)腺苷(I‑a1)。在本发明的另一实施例中，该化合物为5'‑去氧‑5'‑(N′‑甘胺酰基脲基)‑N6‑(4‑羟基苯甲基)腺苷(I‑d1)。本发明亦关于其制造方法及使用方法。

Description

用于预防及治疗疼痛的具有止痛效果的化合物
技术领域
本发明涉及一种用于预防及/或治疗疼痛的化合物。特定言之，本发明涉及腺苷衍生物及其在预防及/或治疗疼痛方面的应用。
背景技术
疼痛为一种通常由强烈刺激或组织/神经损坏引起的不舒服感。疼痛可根据影响时间分成急性疼痛/慢性疼痛两种。急性疼痛视情况而定，仅持续片刻或几周。急性疼痛通常在受损组织恢复之后消失。慢性疼痛被定义为持续超过3-6个月的疼痛，3-6个月为正常的损伤愈合时间。具有慢性疼痛的群体很庞大，且报告称有慢性疼痛的患者中约五分之一主要具有神经痛。神经痛为由受病变或疾病影响的神经系统引起的疼痛。不同于能够藉由类鸦片(opioids)或非类固醇消炎药(non-steroidal anti-inflammatory drug，NSAID)减轻的伤害感受性疼痛(nociceptive pain)，神经痛缺乏有效治疗。
肌肉纤维疼痛(Fibromyalgia，FM)症候群的特征在于慢性广泛疼痛及触痛。亦可能出现疲劳、睡眠障碍及认识功能障碍的症状。FM的主要病因仍然不详，但其特征在于伤害感受性疼痛临限值减小。肌肉纤维疼痛与神经痛在周边及中枢神经系统的病理学上具有一些不同点。
推荐用普瑞巴林(Pregabalin)及加巴喷丁(gabapentin)
Figure BDA0002145814250000012
来治疗神经痛。普瑞巴林及加巴喷丁具有类似于γ-胺基丁酸(GABA)的结构，但其不与GABA受体相互作用。这两种药物藉由与钙离子通道α2-δ次单元相互作用，引起自突触释放的各种神经传递质的还原来起作用[Taylor,C.；Angelotti,T.；Fauman,E.Pharmacology andmechanism of action of pregabalin:the calcium channel alpha2-delta(α2-δ)subunit as a target for antiepileptic drug discovery.Epilepsy Res.2006,73,137-150]。普瑞巴林(25毫克/天)及加巴喷丁(300毫克/天)的按说明书使用(labeled use)亦包括抗痉挛剂；然而已报导有副作用，包括镇静、眩晕及水肿。
亦使用米那普仑(Milnacipran)及度洛西汀(duloxetine)来治疗神经痛以及FM[Derry,S.；Gill,D.；Phillips,T.；Moore,R.Milnacipran for neuropathic pain and fibromyalgia in adults.CochraneDatabase Syst.Rev.2012,doi:10.1002/14651858.CD008244.pub2；Lunn,M.；Hughes,R.及Wiffen,P.Duloxetine for treating painful neuropathy,chronic pain orfibromyalgia.The Cochrane Library,2014,doi:10.1002/14651858.CD007115.pub3]。米那普仑及度洛西汀为血清素-去甲肾上腺素再吸收抑制剂(serotonin-norepinephrinereuptake inhibitor，SNRI)，其可延长血清素及去甲肾上腺素在突触间隙中的作用的持续时间，从而加强由血清素及去甲肾上腺素诱导的信号。血清素的目标为5-羟色胺(5-HT)受体，其含有超过15种与促伤害感受性作用及抗伤害感受性作用均相关的亚型，此视由血清素活化的亚型而定。去甲肾上腺素的抗伤害感受性作用为由α2肾上腺素受体介导。
Figure BDA0002145814250000023
及
Figure BDA0002145814250000024
为FDA批准用于治疗FM的仅有的药物。然而，根据美国国家疼痛基金会(National Pain Foundation)对超过1300名FM患者进行的线上调查，服用此等药物的患者中有三分之二不认为此等药物为有效药物[美国国家疼痛基金会,Fibromyalgia drugs:successes or failures？National Pain Report 2014年4月23日]。这个令人失望的结果可以反映出吾等对FM的理解不足。
先前藉由证实P物质(Substance P，SP)靶向ASIC3阳性肌肉伤害感受器可抑制慢性广泛疼痛，鉴别到了P物质的新颖的抗伤害感受性信号传导机制[Lin,C.-C.J.；Chen,W.-N.；Chen,C.-J.；Lin,Y.-W.；Zimmer,A.；Chen,C.-C.An antinociceptive role forsubstance P in acid-induced chronic muscle pain.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.2012,109,E76；Sun,W.H.；Chen,C.C.Roles of proton-sensing receptors in thetransition from acute to chronic pain.J.Dent.Res.2016,95,135-142]。首先自兔肠分离出P物质(SP)，且随后确定其氨基酸序列为Arg-Pro-Lys-Pro-Glu-Glu-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-CONH2。SP属于速激肽神经肽一类，其具有类似的C端序列Phe-X-Gly-Leu-Met-NH2(X为芳族或脂族氨基酸)及相差很大的N端。SP的目标为神经激肽1受体(neurokinin 1receptor，NK1R)，一种在中枢及周边神经系统中表达的G蛋白偶合受体(G protein-coupling receptor，GPCR)。SP可认为是疼痛传递的主要组分，且其作用为浓度相关的。虽然NK1R(GPCR的成员)基因剔除小鼠相比于野生型小鼠展现出痛觉减退(hypoalgesic)作用，但是在临床试验中使用NK1R拮抗剂未能产生类似结果。临床试验失败可能为因为NK1R在用于感受疼痛的棘上位点中的分布的物种差异[Hill,R.NK1(substance P)receptorantagonists-why are they not analgesic in humans？Trends Pharmacol.Sci.2000,21,244-246]。
基于此作用机制，以往发现，特指为T1-11(化合物2)的N6-(4-羟基苯甲基)腺苷为ASIC3介导的疼痛模型中的抗伤害感受剂[Chen,C.-C.；Lin,Y.-L.；Fang,J.-M.；Chern,Y.；Lin,C.-C.J.；Chen,W.-N.Methods and compositions for treating pain.]。T1-11介导SP敏感的表达ASIC3的肌肉伤害感受器中的外向电流(outward current)且因此可抑制酸诱导的ASIC3活化[Deval,E.；
Figure BDA0002145814250000031
J.；Gasull,X.；Delaunay1,A.；Alloui,A.；Friend,V.；Eschalier,A.；Lazdunski,M.,Lingueglia,E.Acid-sensing ion channels inpostoperative pain.J.Neurosci.2011,31,6059-6066]。肌肉内SP介导非习知NK1受体信号传导路径来抑制肌肉伤害感受器中的酸活化，对由重复的肌肉内酸注射诱导的慢性机械性痛觉过敏产生了出人意料的抗伤害感受作用[Lin,C.-C.J.；Chen,W.-N.；Chen,C.-J.；Lin,Y.-W.；Zimmer,A.；Chen,C.-C.An antinociceptive role for substance P inacid-induced chronic muscle pain.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.2012,109,E76-E83]。
发明内容
在本发明中，合成衍生自T1-11及P物质的共轭化合物Ic-2。化合物Ic-2在小鼠肌肉纤维疼痛模型中，自14μg/kg(160皮莫耳(pico mole))开始就显示出止痛效果，在所述模型中，慢性广泛疼痛由间歇性冷应激(intermittent cold stress，ICS)诱导。此外，藉由与氨基酸(例如I-a1)或肽(例如I-c1)共轭制备一系列化合物以测试其止痛活性。
在一个态样中，本发明涉及一种式(I)化合物：
Figure BDA0002145814250000041
其中
n为0、1、2或3；
X及Y各自独立地为NH、O或S；
R1为OH、NH2、NO2、卤素、烷基、卤烷基、羟烷基、未经取代或经取代的烷氧基、烷氧基烷基、烯基或炔基；
R2及R3各自独立地为OH、NH2、NO2、卤烷基、羟烷基或烷胺基；且
R4为衍生自氨基酸或肽的部分，且R4经由其N端基团或侧链胺基与结构中的C(＝O)连接，其中所述氨基酸或所述肽的C端视情况经修饰；
其互变异构体或立体异构体；或前述者的医药学上可接受的盐。
在另一态样中，本发明涉及一种式(II)化合物：
Figure BDA0002145814250000051
其中
k为1、2或3；
X及Y各自独立地为NH、O或S；
R1为OH、NH2、NO2、卤素、烷基、卤烷基、羟烷基、未经取代或经取代的烷氧基、烷氧基烷基、烯基或炔基；
R2及R3各自独立地为OH、NH2、NO2、卤烷基、羟烷基或烷胺基；且
R4为氨基酸或肽；
环A为经取代或未经取代的芳族杂环，包含5员或6员杂环及稠合杂环；环中的杂原子为一或多个氮、氧及/或硫杂原子；且取代基选自由氟、氯、溴、碘、羟基、硝基、烷基、三氟甲基及其组合组成的群；
其互变异构体或立体异构体；及前述者的医药学上可接受的盐。
在另一态样中，本发明涉及一种组合物，其包含：
(a)治疗有效量的前述化合物或其医药学上可接受的盐；及
(b)医药学上可接受的载剂、赋形剂或媒剂。
在另一态样中，本发明涉及前述化合物用于制造用于治疗有需要的个体的疼痛的药剂的用途。或者，本发明涉及用前述化合物来治疗有需要的个体的疼痛。
在本发明的一个实施例中，疼痛可为酸诱导的疼痛。酸诱导的疼痛可为酸诱导的肌肉疼痛。酸诱导的肌肉疼痛可为酸诱导的慢性肌肉疼痛。
在本发明的一个实施例中，疼痛选自由以下组成的群：发炎性疼痛、癌症相关的疼痛、胸痛、背痛、颈痛、肩痛、偏头痛、头痛、肌筋膜疼痛、关节痛、肌肉疼痛症候群、神经痛、周边神经痛、交感神经痛、手术后疼痛、创伤后疼痛及多发性硬化症疼痛。
在本发明的另一实施例中，疼痛可为功能不良性疼痛(dysfunctional pain)。功能不良性疼痛可选自由以下组成的群：肌肉纤维疼痛、肌筋膜疼痛、膀胱疼痛症候群、由大肠急躁症引起的疼痛及与颞下颌病症有关的疼痛。
根据以下优选实施例的描述，结合以下附图，此等态样及其他态样将变得显而易见，但可在不脱离本发明的新颖概念的精神及范畴的情况下对其作出变更及修改。
在本发明中，可使用式(I)及(II)的化合物来治疗手术后疼痛、肌筋膜疼痛症候群及其他慢性广泛疼痛，这些疼痛为源于肌肉且与ASIC3及P物质有关的疼痛。
不希望受理论限制，可以认为式(I)及(II)的化合物的止痛效果为因为式(I)及(II)化合物能够在肌肉伤害感受器中诱导缓慢的不活化外向电流，使得神经元变得超极化且激发临限值(firing threshold)增大。
附图说明本发明的一或多个实施例，且与书面说明一起用以解释本发明的原理。在任何可能的情况下，将贯穿各图使用相同的参考编号来指实施例的相同或相似元件。
【图式简单说明】
图1显示一些代表性式(I)化合物。其中，化合物I-a1(JMF3737)为T1-11与甘胺酸的共轭物。化合物I-c2为T1-11与P物质(十一肽RPKPQQFFGLM-CONH2)的共轭物。
图2显示化合物I-a1的经由PMB保护的中间化合物4a实现的合成方法。
图3显示化合物I-a1的经由苯甲酸酯保护的中间化合物4b实现的合成方法。
图4显示化合物II-a1的合成。
图5显示化合物II-b1的合成。
图6显示化合物I-d1的合成。
图7显示化合物I-e1的合成。
图8显示化合物I-f1及I-f2的合成。
图9说明小鼠肌肉纤维疼痛模型中的止痛效果，在所述模型中，慢性广泛疼痛由间歇性冷应激(ICS)诱导。T1-11显示剂量依赖性止痛效果，其中腹膜内注射(i.p.)的有效剂量自0.03mg/kg开始且经口管饲(p.o.)的有效剂量自8mg/kg开始。相比之下，衍生自T1-11及甘胺酸的共轭化合物I-a1(JMF3737)在自1mg/kg(i.p.)及1mg/kg(p.o.)开始的有效剂量下显示出优异的剂量依赖性止痛效果。藉由口服T1-11及甘胺酸进行组合治疗不展现协同效应。
图10显示化合物I-a1(JMF3737)的止痛作用机制；RP67580及JMF3737的浓度各为10μM。
图11显示对化合物I-a1(JMF3737)的重复治疗无耐受性，但有治疗效果。
图12说明JMF4413及JMF3795在小鼠肌肉纤维疼痛模型中的止痛效果，在所述模型中，慢性广泛疼痛由间歇性冷应激(ICS)诱导。
【实施方式】
定义
除非另外规定，否则本文中所用的所有技术及科技术语具有与本发明所属领域的一般熟习此项技术者通常所理解相同的含义。在发生冲突的情况下，以本文献(包括定义)为准。如本说明书及随附申请专利范围中所用，除非上下文另外清楚地指示，否则单数形式「一(a/an)」及「所述」包括多数个指示物。
在本说明书通篇中，除非上下文另有要求，否则词语「包含(comprise)」或诸如「包含(comprises)」或「包含(comprising)」的变化形式应理解为暗示包括所陈述的一个要素或整体或一组要素或整体，但不排除任何其他要素或整体或要素或整体的组。
如本文所用，术语「卤基」意谓-F、-Cl、-Br或-I。
如本文所用，术语「经取代」意谓指定原子上的一或多个氢经所选择的指定基团置换，其限制条件为不超过指定原子在现有情况下的正常原子价，且所述取代能产生稳定化合物。
如本文所用，单独或与其他术语组合使用的术语「烷基」指直链或分支链饱和烃基。在一些实施例中，烷基含有1至6个、1至4个或1至3个碳原子。烷基部分的实例包括(但不限于)化学基团，诸如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、第二丁基、第三丁基、正戊基、2-甲基-1-丁基、3-戊基、正己基、1,2,2-三甲基丙基及类似基团。在一些实施例中，烷基为甲基、乙基或丙基。
如本文所用，单独或与其他术语组合使用的术语「烯基」代表衍生自烷基的基团，其中至少一个碳-碳单键经碳-碳双键置换。在一些实施例中，烯基部分含有2至6个或2至4个碳原子。例示性烯基包括(但不限于)乙烯基、正丙烯基、异丙烯基、正丁烯基、第二丁烯基、戊烯基、己烯基及类似基团。
如本文所用，单独或与其他术语组合使用的术语「炔基」代表衍生自烷基的基团，其中至少一个碳-碳单键经碳-碳参键置换。在一些实施例中，炔基部分含有2至6个或2至4个碳原子。例示性炔基包括(但不限于)乙炔基、丙炔-1-基、丙炔-2-基、丁炔基、戊炔基、己炔基及类似基团。
如本文所用，术语「卤烷基」意谓具有一或多个卤基取代基的经取代的烷基。举例而言，「卤烷基」代表具有至少一个卤素作为取代基的烷基且各取代基可相同或不同；诸如单、二及三氟甲基。
如本文所用，术语「烷胺基」代表基团--NRR'，其中R为烷基且R'为氢或烷基。
如本文所用，术语「烷氧基烷基」代表如本文所定义的烷氧基经由如本文所定义的烷基附接至母分子部分。烷氧基烷基的代表性实例包括(但不限于)甲氧基甲基、甲氧基乙基及甲氧基丙基。
如本文所用，术语「肽」代表藉由肽键连接的氨基酸单体短链，优选50个或更少的氨基酸单体，更佳2至30个氨基酸，更佳2至20个氨基酸，诸如9、10、11或12个氨基酸。肽包括寡肽及多肽；寡肽通常具有2至20个氨基酸，而多肽通常具有50个或更少的氨基酸。
如本文所用，术语「氨基酸或肽的衍生物」包括氨基酸或肽的盐、酯或两者。盐可以衍生自C端、N端及/或侧链基团，且酯可以衍生自C端及/或侧链基团。
如本文所用，「氨基酸或肽的C端修饰」这一描述或类似描述代表末端-COOH经生物类性体(bioisostere)的类似物修饰或末端-COOH经所述类似物置换。修饰的实例包括(但不限于)酯化，诸如甲基化等。类似物的实例包括(但不限于)酰胺部分、膦酸酯部分、磺酸酯部分、异羟肟酸酯部分、酰基酰肼、膦酰胺、磺酰胺等。
如本文所使用，「医药学上可接受的盐」代表所揭示的化合物的衍生物，其中母体化合物藉由制得其酸盐或碱盐而改质。医药学上可接受的盐的实例包括(但不限于)诸如胺、吡啶、嘧啶及喹唑啉的碱性残基的无机盐或有机酸盐；诸如羧酸的酸性残基的碱金属盐或有机盐；及其类似物。
如本文所用，术语「立体异构体」为个别分子的所有仅在原子空间取向上不同的异构体的通用术语。其包括对映异构体及具有超过一个对掌性中心的化合物的不互呈镜像的异构体(非对映异构体)。术语「对映异构体」及「对映异构」代表不能迭加于其镜像上且因此具有光学活性的分子，其中对映异构体沿一个方向旋转偏光平面，其镜像化合物则沿相反方向旋转偏光平面。
如本文所用，术语「互变异构体」代表有机化合物的容易相互转变，尤其是涉及质子的再定位的构造异构体(constitutional isomer)。互变异构体的实例包括(但不限于)氨基酸及羧酸铵、酮及烯醇等。
如本文所用，术语「治疗(treating)」或「治疗(treatment)」代表向有需要的个体投与有效量的治疗剂，所述个体具有神经退化性疾病及/或疼痛，或具有此类疾病及/或疼痛的症状或具有患此类疾病及/或疼痛的倾向，其目的为治愈、缓解、减轻、补救、改善或预防所述疾病及/或疼痛、其症状或患所述疾病及/或疼痛的倾向。此类个体可由健康照护专业人士根据来自任何适合诊断方法的结果来鉴别。
如本文所用，术语「有效量」代表赋予所治疗个体治疗效果所需的活性化合物的量。如熟习此项技术者所认识到的，有效剂量将视投药途径、赋形剂使用情况及与其他治疗性治疗共同使用的可能性而不同。
如本文所用，由美国卫生与人群服务部食品及药物管理局(U.S.Department ofHealth and Human Services Food and Drug Administration)公布的术语「行业指南及审查：在健康的成年志愿者的临床试验中评估治疗剂的安全起始剂量(Guidance forIndustry and Reviewers Estimating the Safe Starting Dose in Clinical Trialsfor Therapeutics in Adult Healthy Volunteers)」揭示「治疗有效量」可由下式计算得到：
HED＝动物剂量(mg/kg)×(动物重量(kg)/人的重量(kg))。
本发明化合物
本发明提供一种式(I)化合物：
其中
n为0、1、2或3；
X及Y各自独立地为NH、O或S；
R1为OH、NH2、NO2、卤素、烷基、卤烷基、羟烷基、未经取代或经取代的烷氧基、烷氧基烷基、烯基或炔基；
R2及R3各自独立地为OH、NH2、NO2、卤烷基、羟烷基或烷胺基；且
R4为衍生自氨基酸或肽的部分，且R4经由其N端基团或侧链胺基与结构中的C(＝O)连接，其中所述氨基酸或所述肽的C端视情况经修饰；
其互变异构体或立体异构体；及前述者的医药学上可接受的盐。
在一些实施例中，R1、R2及R3各自独立地为OH。
在一个实施例中，n为1。
在一些实施例中，X及Y各自独立地为NH、O或S。
在另一实施例中，X为NH且Y为O。
在另一实施例中，X为NH且Y为NH。
在另一实施例中，X为NH且Y为S。
如技术方案1的化合物，其中X为S且Y为NH。
在一些实施例中，R4为衍生自具有酸性侧链的氨基酸、具有碱性侧链的氨基酸、具有极性侧链的氨基酸、具有非极性侧链的氨基酸的部分；或衍生自肽的部分。在一些实施例中，R4为衍生自甘胺酸、丙胺酸、半胱胺酸、缬胺酸、白胺酸、异白胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、麸酰胺酸、天冬酰胺、苏胺酸、精胺酸、离胺酸、脯胺酸或视情况经取代的具有小于20个氨基酸的肽。在一些实施例中，氨基酸为甘胺酸、缬胺酸、半胱胺酸、苯丙胺酸或麸酰胺酸。在一个实施例中，肽为RPKPQQFFGLM-CONH2且肽经由K的侧链胺基与结构中的C(＝O)连接。
本发明提供一种式(II)化合物：
Figure BDA0002145814250000121
其中
k为1、2或3；
X及Y各自独立地为NH、O或S；
R1为OH、NH2、NO2、卤素、烷基、卤烷基、羟烷基、未经取代或经取代的烷氧基、烷氧基烷基、烯基或炔基；
R2及R3各自独立地为OH、NH2、NO2、卤烷基、羟烷基或烷胺基；且
R4为氨基酸或肽；
环A为经取代或未经取代的芳族杂环，包含5员或6员杂环及稠合杂环；环中的杂原子为一或多个氮、氧及/或硫杂原子；且取代基选自由氟、氯、溴、碘、羟基、硝基、烷基、三氟甲基及其组合组成的群；
其互变异构体或立体异构体；及前述者的医药学上可接受的盐。
化学合成
在另一态样中，本发明涉及一种用于制备前述式(I)化合物的方法，所述方法包含以下步骤：
(a)使N6-(4-羟基苯甲基)腺苷(2)与2,2-二甲氧基丙烷在丙酮中在酸存在下反应，得到式(3)的(2',3'-O-亚异丙基)腺苷化合物；
Figure BDA0002145814250000131
(b)使(2',3'-O-亚异丙基)腺苷化合物(3)在碱存在下与羟基保护剂反应，得到式(4)的具有苯酚保护基(PG)的(2',3'-O-亚异丙基)腺苷化合物；
(c)使(2',3'-O-亚异丙基)腺苷衍生物(4)与1,1'-羰基二咪唑(CDI)在碱存在下反应，得到式(5)的具有羟基活化基团的(2',3'-O-亚异丙基)腺苷化合物；
Figure BDA0002145814250000133
(d)藉由使(2',3'-O-亚异丙基)腺苷化合物(5)与氨基酸或肽的衍生物(诸如α-胺基酯)反应来进行偶合反应，得到式(6)的(2',3'-O-亚异丙基)腺苷化合物；
Figure BDA0002145814250000141
其中[A']-NH-为衍生自氨基酸或肽的衍生物；
以及
(e)自化合物(6)移除所有保护基，得到式(IB)化合物；
Figure BDA0002145814250000142
其中[A]-NH-为氨基酸或肽的衍生物中的氨基酸或肽。
在本发明的一个实施例中，步骤(a)中的酸可为对甲苯磺酸或樟脑磺酸(camphorsulfonic acid)。
在本发明的另一实施例中，步骤(b)中的羟基保护剂(PG-Cl)可为氯化4-甲氧基苯甲基或苯甲酰氯。
在本发明的另一实施例中，步骤(d)中的氨基酸或肽的衍生物可为甘胺酸甲酯、甘胺酸乙酯、L-苯丙胺酸乙酯、L-缬胺酸乙酯、γ-胺基丁酸甲酯、或十一肽Arg-Pro-Lys-Pro-Glu-Glu-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-CONH2(P物质)。
在本发明的另一实施例中，步骤(e)中的脱除保护基方法可以包含使用碱来分解苯甲酰基且使用酸来移除对甲氧基苯甲基；其中碱可为氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸铯或氢氧化铵，且酸可为三氟乙酸(trifluoroacetic acid，TFA)或盐酸。
在本发明的另一实施例中，步骤(f)中的水解可以包含使用碱来移除烷基；其中碱可为氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸铯或氢氧化铵。
另外在本发明的另一实施例中，步骤(f)中制备的式(IA)的盐，其中Z+为Li+、Na+、K+、Rb+、Cs+或NH4 +，使用无机酸转化为羧酸，其中无机酸可为盐酸。R为常见α-氨基酸中所存在的取代基。
Figure BDA0002145814250000151
另外在本发明的另一实施例中，用胺RARBRCN处理式(IA，Z+＝H+)的羧酸，形成式(IA)的胺鎓盐，其中胺可为三甲胺、三乙胺、三正丁胺、苯甲基二甲胺、吡咯啶、哌啶、吗啉或N-甲基吗啉。
在一种方法中，如图2中所示，经由PMB保护的中间化合物4a合成化合物I-a1：
(a)根据先前报导的程序[Chen,J.-B.；Liu,E.M.；Chern,T.-R.；Yang,C.-W.；Lin,C.-I.；Huang,N.-K.；Lin,Y.-L.；Chern,Y.；Lin,J.-H.Fang,J.-M.Design and synthesisof novel dual-action compounds targeting the adenosine A2A receptor andadenosine transporter for neuroprotection.ChemMedChem 2011,6,1390-1400]，自6-氯嘌呤核糖苷与4-羟基苯甲胺的取代反应获得T1-11，且用2,2-二甲氧基丙烷在丙酮中处理，藉由对甲苯磺酸催化，得到缩丙酮化物化合物3：
Figure BDA0002145814250000152
(b)3的苯酚基藉由用氯化4-甲氧基苯甲基在碱K2CO3存在下烷基化而被保护为对甲氧基苯甲基(PMB)醚，得到化合物4a：
Figure BDA0002145814250000161
(c)藉由用CDI处理来活化4a的羟基，得到5a，其进一步与甘胺酸乙酯反应，产生胺基甲酸酯化合物6a-1：
以及
(d)藉由用三氟乙酸(TFA)处理移除6a-1的缩丙酮化物及PMB醚保护基，得到化合物7a-1，其在碱性条件下水解，藉由层析纯化后得到化合物I-a1：
Figure BDA0002145814250000164
在另一方法中，如图3中所示，经由苯甲酸酯保护的中间化合物4b合成化合物I-a1。
(a)3的苯酚基藉由在碱Et3N存在下用苯甲酰氯酰化而被保护为苯甲酸酯，得到化合物4b：
Figure BDA0002145814250000172
(b)藉由用CDI处理活化4b的羟基，且随后与甘胺酸甲酯反应，得到胺基甲酸酯化合物6b-1：
Figure BDA0002145814250000173
以及
(c)脱除6b-1的缩丙酮化物及酯基的保护基，藉由层析纯化后产生化合物I-a1。
在另一实施例中，将化合物4a活化为咪唑化物(imidazolide)5a，其与L-苯丙胺酸乙酯反应得到化合物6a-2：
Figure BDA0002145814250000181
在另一实施例中，藉由CDI活化化合物4b，且随后用L-缬胺酸甲酯处理，得到化合物6b-2：
Figure BDA0002145814250000182
在另一实施例中，相继用TFA、NaOH处理化合物6a-2，移除保护基，产生化合物I-a2：
Figure BDA0002145814250000183
在另一实施例中，相继用TFA、NaOH处理化合物6b-2，移除保护基，产生化合物I-a3：
Figure BDA0002145814250000184
在一个态样中，合成类似化合物8。藉由CDI活化化合物4b且用正丁胺处理。相继用TFA、NaOH处理产物，移除缩丙酮化物及苯甲酸酯保护基，产生化合物8：
在另一实施例中，经由中间化合物9合成含有末端羧酸的类似化合物Ib-1。使咪唑化物化合物5a与γ-胺基丁酸甲酯反应，得到化合物9，相继用TFA、NaOH处理所得化合物，移除缩丙酮化物、PMB及酯保护基，产生化合物I-b1：
在另一实施例中，经由中间化合物10合成化合物I-c1。使化合物6a-1水解，得到相应羧酸，所述羧酸与L-白胺酰基-L-甲硫胺酸酰胺发生偶合反应，形成化合物10。藉由用TFA处理移除10中的缩丙酮化物及PMB保护基，得到化合物I-c1：
Figure BDA0002145814250000201
在另一实施例中，藉由咪唑化物化合物5a与SP发生偶合反应，SP即十一肽Arg-Pro-Lys-Pro-Glu-Glu-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-CONH2，随后用TFA处理来移除缩丙酮化物及PMB保护基，从而合成化合物I-c2：
Figure BDA0002145814250000202
在另一实施例中，式II-a1(14)化合物为藉由用N6-(吲哚-3-基)乙基替换N6-(4-羟基苯甲基)基团得到的I-a1的类似化合物。如图4中所示，经由中间化合物12及13，由N6-(吲哚-3-基)乙基腺苷(化合物11)合成化合物14(II-a1)。
Figure BDA0002145814250000211
(a)使6-氯嘌呤核糖苷(1)与(吲哚-3-基)乙胺在乙醇中在二异丙基乙胺存在下反应，得到N6-(吲哚-3-基)乙基-腺苷(11)；
(b)使化合物11与2,2-二甲氧基丙烷在丙酮中在对甲苯磺酸存在下反应，得到式(12)的缩丙酮化物化合物：
(c)用CDI活化化合物12中的羟基，随后与甘胺酸甲酯反应，得到式(13)的胺基甲酸酯化合物；以及
(d)用TFA移除缩丙酮化物保护基，随后在碱性条件下水解，得到化合物14(II-a1)。
在另一实施例中，式II-b1化合物为藉由用N6-(5-溴噻吩-2-基)甲基替换N6-(4-羟基苯甲基)基团得到的I-a1的类似化合物。如图5中所示，经由中间化合物16及17，由N6-(5-溴噻吩-2-基)甲基腺苷(化合物15)合成化合物II-b1。
在另一实施例中，如图6中所示，经由中间化合物18、19及20，合成化合物I-d1：
(a)使化合物4a与二苯基磷酰基迭氮化物(diphenyl phosphoryl azide，DPPA)及迭氮化钠在碱存在下反应，得到式18的迭氮基化合物，其中碱可为三乙胺、4-二甲胺基吡啶(DMAP)、1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(DABCO)、1,5-二氮杂双环[4.3.0]壬-5-烯(DBN)及1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(DBU)；
(b)藉由在催化剂存在下氢解使迭氮基化合物18还原，随后与甘胺酸甲酯盐酸盐在促进剂存在下发生偶合反应，得到式19化合物，其中催化剂为林德拉催化剂(Lindlarcatalyst)且促进剂为1,1′-羰基二咪唑；
(c)藉由氢解移除PMB保护基，得到式20化合物；
(d)分别藉由TFA及NaOH移除2',3'-二醇及酯的保护基，得到式I-d1化合物。
在另一实施例中，如图7中所示，经由中间化合物21及22，合成化合物I-e1：
Figure BDA0002145814250000241
(a)使化合物4a与甲磺酰氯(MsCl)在碱存在下反应，随后与硫乙酸钾反应，得到式21化合物，其中碱可为三乙胺及4-二甲胺基吡啶；
(b)用碱自化合物21移除乙酰基，随后在促进剂存在下与2,2,2-三氯乙基甘胺酸偶合，得到式22化合物，其中碱可为氢氧化钠及氢氧化钾，且促进剂为1,1′-羰基二咪唑；
(c)移除所有保护基，得到式I-e1化合物。
在另一实施例中，如图8中所示，经由中间化合物23、24a及25a，合成化合物I-f1。
医药组合物
在另一态样中，本发明提供一种医药组合物，其包含本发明化合物及医药学上可接受的载剂。
可将化合物调配成可经口、非经肠、藉由吸入喷雾、局部、经直肠、经鼻、颊内、经阴道或经由植入式贮器(implanted reservoir)投与的医药组合物。如本文所用的术语「非经肠」包括皮下、静脉内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内及颅内注射或输液技术。熟习此项技术者熟悉医药学上可接受的载剂及稀释剂。关于调配为液体溶液的组合物，可接受的载剂及/或稀释剂包括生理盐水及无菌水，且可视情况包括抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂及其他常见添加剂。亦可将组合物调配为丸剂、胶囊、颗粒剂或锭剂，其除了本发明化合物以外，亦含有稀释剂、分散剂及界面活性剂、黏合剂及润滑剂。
在一优选实施例中，化合物以可有效达成其预期疗法目的的量存在于组合物中。尽管个体需求可能不同，但各化合物的有效量的最佳范围的确定在本领域的技术范围内。
本发明化合物可结合一或多种第二治疗剂使用，尤其是适用于治疗及/或预防本文中所呈现的病况及疾病的治疗剂。
止痛效果
在另一态样中，本发明提供一种用于治疗及/或预防疼痛的方法，所述方法包含向个体投与有效量的本发明化合物。在一个实施例中，所述疼痛为慢性疼痛。在一些实施例中，疼痛与组织酸中毒及/或神经损伤相关，包括(但不限于)发炎性疼痛、癌症相关的疼痛、胸痛、背痛、颈痛、肩痛、偏头痛、头痛、肌筋膜疼痛、关节痛、肌肉疼痛症候群、神经痛、周边神经痛、交感神经痛、手术后疼痛、创伤后疼痛及多发性硬化症疼痛。在一个实施例中，疼痛为功能不良性疼痛。在其他实施例中，功能不良性疼痛包括(但不限于)肌肉纤维疼痛、膀胱疼痛症候群、由大肠急躁症引起的疼痛及与颞下颌病症有关的疼痛。
在一个实施例中，化合物2(T1-11)在二甲亚砜(DMSO)中具有良好的溶解度且在小鼠肌肉纤维疼痛模型中具有极佳的止痛效果，在所述模型中，慢性广泛疼痛由间歇性冷应激(ICS)诱导。在此ICS小鼠模型中，T1-11经由i.p.途径在自0.03mg/kg开始的有效剂量下显示剂量依赖性止痛效果(图9(a))，且经由p.o.途径在自8mg/kg开始的有效剂量下显示剂量依赖性止痛效果(图9(b))。但是T1-11的生物可用率低(F≈5％)，这会限制其在疼痛治疗方面的使用。
在另一实施例中，衍生自T1-11及甘胺酸的共轭化合物I-a1(JMF3737)相比于T1-11显示出优异的止痛效果。在相同的ICS小鼠模型中，化合物I-a1在自1mg/kg(i.p.)(图9(c))及1mg/kg(p.o.)(图9(d))开始的有效剂量下显示出剂量依赖性止痛效果。化合物I-a1的剂量可增加至至少64mg/kg(i.p.及p.o.)而不产生明显的有害作用。
在另一实施例中，相较于经由经口途径服用的共轭化合物I-a1在2mg(4μmol)/kg下明显的止痛效果，藉由口服T1-11(4μmol/kg)及甘胺酸(4μmol/kg)实现的组合治疗不显示协同效应(图9(e))。
在另一实施例中，化合物I-a1(JMF3737)的止痛作用机制与T1-11相同，均为藉由作用于肌肉伤害感受器中的NK1R受体以诱导可藉由NK1R拮抗剂抑制的外向电流(图10)。
在另一实施例中，每天用低剂量(1mg/kg，p.o.)的化合物I-a1(JMF3737)治疗，持续4天，不显示耐受性，而是显示出对肌肉纤维疼痛的治疗效果(图11(a)及11(b))。
另外在另一实施例中，化合物I-d1(JMF4313)在相同的ICS模型中显示极佳的止痛效果(图12(a))。化合物I-d1的剂量可增加至64mg/kg(i.p.)而不产生明显的有害作用。
另外在另一实施例中，衍生自T1-11及P物质的共轭化合物Ic-2在ICS小鼠模型中自14μg/kg(160pmol，i.p.)开始显示出止痛效果(图12(b))。
实例
除非另外说明，否则所有试剂及溶剂皆属于试剂级且不经进一步纯化即使用。四氢呋喃及乙醚自Na/二苯甲酮蒸馏且CH2Cl2自CaH2蒸馏。所有对空气或湿气敏感的实验皆在氩气下进行。所有玻璃皆在烘箱中干燥超过2小时且在干燥器中冷却至室温之后使用。
熔点在Yanaco微型设备上记录。旋光度在Japan JASCO Co.DIP-1000的数位偏光计上量测。[α]D值以10-1deg cm2g-1为单位给出。红外(Infrared，IR)光谱在Nicolet Magna550-II上记录。NMR光谱在Varian Unity Plus-400(400MHz)上获得且记录相对于以下、以百万分率(parts per million，ppm)为单位的化学位移(δ)：CHCl3/CDCl3，δH 7.24/δC 77.0(三重峰的中心线)；(CH3)2CO/(CD3)2CO，δH 2.05/δC 29.92；CH3OH/CD3OD，δH 3.31/δC 49.0；以及(CH3)2SO/(CD3)2SO，δH 2.49(m)/δC 39.5(m)。分裂型式(splitting pattern)报导为s(单峰)、d(双重峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、m(多重峰)及br(宽峰)。偶合常数(J)以Hz为单位给出。ESI-MS实验在Bruker Daltonics BioTOF III高解析度质谱仪上进行。分析型薄层层析(thin-layer chromatography，TLC)在E.Merck硅胶60F254板(0.25mm)上进行。化合物藉由UV、大茴香醛或宁海准(ninhydrin)喷雾可视化。管柱层析在填充有70-230目硅胶的管柱上进行。
N6-(4-羟基苯甲基)-2',3'-O-亚异丙基-腺苷(3)
Figure BDA0002145814250000281
根据先前报导的程序[Chen等人，2011]，由6-氯嘌呤核糖苷与4-羟基苯甲胺的取代反应制备N6-(4-羟基苯甲基)腺苷(化合物2，T1-11)。简言之，将4-羟基苯甲胺(呈盐酸盐形式，2.5当量)、6-氯嘌呤核糖苷(1当量)及二异丙基乙胺(DIEA，24当量)于1-丙醇中的混合物加热至70℃，持续6小时。在减压下浓缩混合物，且用水湿磨，得到白色沈淀，过滤白色沈淀，产生化合物2(81％产率)。
将化合物2(374mg，1mmol)、对甲苯磺酸单水合物(280mg，1.5mmol)及2,2-二甲氧基丙烷(3mL，2.5mmol)于丙酮(5mL)中的混合物在室温下搅拌4小时。藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物。将残余物用CH2Cl2稀释，用水萃取。用CH2Cl2洗涤水相，且依次用饱和NaHCO3(aq.)及盐水洗涤经合并的有机层。有机相经MgSO4干燥，过滤，藉由在减压下旋转蒸发浓缩，且藉由管柱层析(硅胶，己烷/EtOAc，梯度1:1至0:1)纯化，得到缩丙酮化物化合物3(358mg，86％产率)。C20H23N5O5；TLC(EtOAc)Rf＝0.56；[α]D 25＝-113.1(CHCl3,c＝2)；IRνmax(纯)3367,2991,2933,1622,1516,1454,1381,1340,1217,1082cm-1；1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.35(1H,br s),7.81(1H,s),7.04(2H,d,J＝8.0Hz),6.64(2H,d,J＝8.0Hz),6.39(1H,brs),5.82(1H,d,J＝5.2Hz),5.19(1H,dd,J＝5.6,5.2Hz),5.10(1H,d,J＝5.6Hz),4.67(2H,br s),4.53(1H,s),3.93-4.02(1H,m),3.71-3.82(1H,m),1.62(3H,s),1.36(3H,s)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ155.8,154.5,153.9,147.1,139.4,129.1,129.0,120.4,115.5,114.0,94.1,86.0,83.0,81.6,63.2,44.0,27.5,25.1；ESI-HRMS：C20H24N5O5计算值：414.1777，实验值：m/z 414.1763[M+H]+。
2′,3′-O-亚异丙基-N6-(4-(4-甲氧基苯甲氧基)苯甲基)腺苷(4a)
将化合物3(1.13g，2.74mmol)、氯化对甲氧基苯甲基(800μL，6mmol)及K2CO3(930mg，6.85mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(DMF，25mL)中的混合物在45℃下搅拌3小时。藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物。将残余物用EtOAc稀释，且依次用1M HCl、水及盐水洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，藉由旋转蒸发浓缩，且藉由管柱层析(硅胶，EtOAc/己烷，梯度1:3至4:1)纯化，得到PMB衍生物4a(1.12g，76％产率)。C28H31N5O6；白色固体；mp 68.3-71.4℃；TLC(EtOAc/己烷(1:1))Rf＝0.17；[α]D 25＝-66.0(CH2Cl2,c＝2)；IRνmax(纯)3281,2988,2936,2870,2834,1622,1586,1514,1478,1468,1380,1339,1303,1242,1216,1170,1154,1113,1077cm-1；1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.34(1H,br s),7.66(1H,br s),7.32(2H,d,J＝8.4Hz),7.25(2H,d,J＝8.4Hz),6.89(4H,dd,J＝8.4,5.8Hz),6.77(1H,br s),6.42(1H,brs),5.79(1H,d,J＝4.8Hz),5.18(1H,t,J＝5.2Hz),5.09(1H,d,J＝5.6Hz),4.95(2H,s),4.73(2H,br s),4.51(1H,s),3.95(1H,d,J＝12.46Hz),3.71-3.83(4H,m),1.62(3H,s),1.35(3H,s)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ159.3,158.3,154.9,152.7,147.3,139.5,130.2,129.1,129.0,128.8,121.2,115.0,114.0,113.9,94.3,85.9,82.9,81.7,69.7,63.4,55.2,43.9,27.6,25.2；ESI-HRMS：C28H32N5O6计算值：534.2353，实验值：m/z 534.2368[M+H]+。
N6-(4-(苯甲酰氧基)苯甲基)-2',3'-O-亚异丙基-腺苷(4b)
Figure BDA0002145814250000301
在0℃下搅拌化合物2(265mg，0.64mmol)及NEt3(267μL，1.9mmol)于CH2Cl2(15mL)中的混合物，同时经由注射泵(4mL/h)添加苯甲酰氯(74μL，0.64mmol)于CH2Cl2(9mL)中的溶液。在添加完成之后，藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物。将残余物用EtOAc稀释，且依次用1M HCl、饱和NaHCO3、水及盐水洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，藉由旋转蒸发浓缩，且藉由管柱层析(硅胶，EtOAc/己烷，梯度1:1至0:1)纯化，得到化合物4b(258g，78％产率)。C27H27N5O6；白色泡沫；TLC(EtOAc/己烷(1:1))Rf＝0.13；[α]D 25＝-74.4(CHCl3,c＝2)；IRνmax(纯)3279,2989,2934,2860,1735,1622,1508,1481,1357,1340,1265,1202,1081,1065cm-1；1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.33(1H,br s),8.15(2H,d,J＝7.6Hz),7.57(1H,t,J＝7.6Hz),7.45(3H,t,J＝7.6Hz),7.35(3H,d,J＝8.0Hz),7.12(2H,d,J＝8.0Hz),6.63(1H,br s),5.82(1H,d,J＝4.8Hz),5.17(1H,dd,J＝5.2,4.8Hz),5.06(1H,d,J＝5.2Hz),4.81(2H,d,J＝18.8Hz),4.46(1H,s),3.91(1H,d,J＝12.0Hz),3.73(1H,d,J＝12.0Hz),1.57(3H,s),1.31(3H,s)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ165.,154.9,152.6,150.0,147.3,139.6,136.0,133.5,130.0,129.2,128.6,128.4,121.8,120.9,113.7,93.9,85.9,82.9,81.5,63.2,43.4,27.4,25.1；ESI-HRMS：C27H28N5O6计算值：518.2040，实验值：m/z 518.2050[M+H]+。
5′-咪唑基羰基-2′,3′-O-亚异丙基-N6-(4-(4-甲氧基苯甲氧基)苯甲基)腺苷(5a)
将化合物4a(207mg，0.38mmol)、4-二甲胺基吡啶(DMAP，催化量)及1,1′-羰基二咪唑(500mg，3.1mmol)于无水CH2Cl2(3mL)中的混合物在室温下在氩气下搅拌3小时。在反应完成(藉由TLC监测)之后，依次用1M HCl、水及盐水洗涤混合物。有机相经MgSO4干燥，过滤，且藉由旋转蒸发浓缩，得到化合物5a(241mg，98％产率)。
C32H33N7O7；白色粉末；mp 68.3-71.5℃；TLC(EtOAc/己烷(1:1))Rf＝0.34；[α]D 25＝2.36(CH2Cl2,c＝2)；IRνmax(纯)3281,3134,3035,2995,2929,2835,1769,1617,1585,1151,1482,1409,1389,1295,1242,1176,1102,1004cm-1；1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.32(1H,brs),8.11(1H,s),7.71(1H,s),7.37(1H,s),7.32(2H,d,J＝8.8Hz),7.27(2H,d,J＝8.4Hz),7.02(1H,s),6.89(4H,t,J＝8.0Hz),6.26(1H,br s),6.02(1H,d,J＝1.6Hz),5.53(1H,dd,J＝6.4,1.6Hz),5.22(1H,dd,J＝6.4,4.0Hz),4.95(2H,s),4.74(1H,br s),4.68(1H,dd,J＝11.2,4.0Hz),4.54-4.62(1H,m),4.46-4.54(1H,m),3.78(3H,s),1.60(3H,s),1.38(3H,s)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ159.2,158.1,154.5,148.1,140.9,139.4,139.3,137.0,134.0,13.5,13.3,129.0,128.9,128.7,117.0,115.0,114.7,113.9,90.8,84.6,83.8,81.4,69.8,67.2,55.3,39.0,27.3；ESI-HRMS：C32H34N7O7计算值：628.2520，实验值：m/z 628.2514[M+H]+。
5′-(O-乙基甘胺酰基)羰基-2′,3′-O-亚异丙基-N6-(4-(4-甲氧基苯甲氧基)苯甲基)腺苷(6a-1)
将化合物5a(104mg，0.16mmol)、DMAP(催化量)、DIEA(110μL，0.64mmol)及甘胺酸乙酯盐酸盐(93mg，0.66mmol)于DMF(4mL)中的混合物在室温下在氩气下搅拌12小时。在反应完成(藉由TLC)之后，藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物。将残余物用EtOAc稀释，且依次用1M HCl、饱和NaHCO3、水及盐水洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，藉由旋转蒸发浓缩，且藉由管柱层析(硅胶，EtOAc/己烷，梯度1:3至9:1)纯化，得到化合物6a-1(104mg，94％产率)。C33H38N6O9；白色固体；mp 69.6-71.2℃；[α]D 25＝-25.5(CH2Cl2,c＝2)；IRνmax(纯)3367,2987,5938,2835,1724,1618,1581,1511,1483,1466,1381,1303,1246,1217,1172,1078,1029cm-1；1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.36(1H,br s),7.78(1H,s),7.31(2H,d,J＝8.4Hz),7.25(2H,J＝8.4Hz),6.88(2H,d,J＝8.4Hz),6.87(2H,d,J＝8.4Hz),6.57(1H,t,J＝5.3Hz),6.05(1H,s),5.81(1H,br s),5.35(1H,d,J＝4.8Hz),4.97(1H,dd,J＝6.0,3.2Hz),4.93(2H,s),4.74(2H,br s),4.38-4.44(1H,m),4.32(1H,dd,J＝11.6,4.0Hz),4.08-4.20(3H,m),3.79-3.96(2H,m),3.77(3H,s),1.57(3H,s),1.34(3H,s),1.22(4H,t,J＝7.2Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ169.9,159.3,158.1,155.7,154.6,153.3,148.3,139.1,130.7,129.1,129.0,128.8,120.1,114.9,114.3,113.9,90.7,85.0,84.0,81.5,69.7,64.7,61.4,55.2,43.8,42.7,27.0,25.2,14.0；ESI-HRMS：C33H39N6O9计算值：663.2779，实验值：m/z 663.2772[M+H]+。
5′-(O-乙基-L-苯丙胺酰基)羰基-2′,3′-O-亚异丙基-N6-(4-(4-甲氧基苯甲氧基)苯甲基)腺苷(6a-2)
Figure BDA0002145814250000331
将化合物5a(110mg，0.17mmol)、DMAP(催化量)、DIEA(125μL，0.68mmol)及L-苯丙胺酸乙酯盐酸盐(160mg，0.68mmol)于无水DMF(13mL)中的混合物在室温下在氩气下搅拌12小时。在反应完成(藉由TLC)之后，藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物。将残余物用EtOAc稀释，且依次用1M HCl、饱和NaHCO3、水及盐水洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，藉由在减压下旋转蒸发浓缩，且藉由管柱层析(硅胶，EtOAc/己烷，梯度1:3至9:1)纯化，得到化合物6a-2(44mg，34％产率)。C40H44N6O9；白色固体；mp 80.1-83.6℃；TLC(EtOAc)Rf＝0.75；[α]D 25＝-9.55(CH2Cl2,c＝1)；IRνmax(纯)3371,3028,2991,2942,2876,2844,1728,1621,1585,1512,1489,1463,1377,1344,1299,1250,1209,1176,1082,1033cm-1；1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.36(1H,br s),7.76(1H,s),7.32(2H,d,J＝8.4Hz),7.26(2H,d,J＝8.4Hz),7.15-7.22(3H,m),7.04(2H,d,J＝6.6Hz),6.89(2H,d,J＝8.4Hz),6.88(2H,d,J＝8.4Hz),6.39(1H,t,J＝5.2Hz),6.05(1H,d,J＝1.2Hz),5.50(1H,d,J＝8.0Hz),5.42(1H,dd,J＝6.4,1.2Hz),4.99(1H,dd,J＝6.4,3.2Hz),4.94(2H,s),4.74(2H,br s),4.55(1H,td,J＝8.0,6.4Hz),4.39-4.47(1H,m),4.26-4.34(1H,m),4.17-4.24(1H,m),4.10(2H,qd,J＝7.2,1.5Hz),3.78(3H,s),3.02(2H,qd,J＝9.6,6.0Hz),1.59(3H,s),1.37(3H,s),1.17(3H,t,J＝7.2Hz)；13CNMR(CDCl3,100MHz)δ171.1,159.1,158.,154.8,154.4,153.1,139.1,139.0,135.5,13.4,129.1,129.0,128.9,128.7,128.3,126.8,120.1,114.9,114.3,113.8,90.8,8.2,84.0,81.6,69.8,64.7,61.5,55.2,54.9,43.4,38.3,27.2,25.5,14.2；ESI-HRMS：C40H45N6O9计算值：753.3248，实验值：m/z753.3228[M+H]+。
N6-(4-(苯甲酰氧基)苯甲基)-2',3'-O-亚异丙基-5′-(O-甲基甘胺酰基)羰基-腺苷(6b-1)
Figure BDA0002145814250000341
将化合物4b(93mg，0.18mmol)及1,1′-羰基二咪唑(117mg，0.72mmol)于无水四氢呋喃(THF，2mL)中的混合物在室温下在氩气下搅拌1小时。在反应完成(藉由TLC监测)之后，添加水(9.72μL，0.54mmol)、甘胺酸甲酯(呈盐酸盐形式，90mg，0.72mmol)及DIEA(129μL，0.72mmol)。将混合物再搅拌12小时，且随后藉由在减压下旋转蒸发浓缩。将残余物用EtOAc稀释，依次用1M HCl、饱和NaHCO3、水及盐水洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，藉由旋转蒸发浓缩，且藉由管柱层析(硅胶，己烷/EtOAc，梯度1:1至0:1)纯化，得到胺基甲酸酯化合物6b-1(69mg，60％产率)。C31H32N6O9；无色油状物；TLC(EtOAc/己烷(1:1))Rf＝0.12；[α]D 25＝-32.5(CH2Cl2,c＝2)；IRνmax(纯)3366,2988,2952,1731,1620,1583,1508,1481,1452,1438,1419,1376,1331,1267,1209,1081,1064cm-1；1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.36(1H,br s),8.15(2H,d,J＝7.6Hz),7.75(1H,br s),7.59(1H,t,J＝7.2Hz),7.46(2H,dd,J＝7.6,7.2Hz),7.40(2H,d,J＝8.4Hz),7.13(2H,d,J＝8.4Hz),6.89(1H,br s),6.07(1H,s),5.99(1H,brs),5.30(1H,d,J＝5.2Hz),4.94(1H,dd,J＝5.6,3.2Hz),4.85(2H,br s),4.38-4.44(1H,m),4.29-4.37(1H,m),4.15(1H,dd,J＝11.2,5.6Hz),3.80-3.98(2H,m),3.66(3H,s),1.56(3H,s),1.32(3H,s)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ170.5,165.1,155.8,154.6,153.3,150.1,148.4,139.3,136.3,133.5,130.1,129.4,128.7,128.5,121.8,120.1,114.3,90.6,84.9,84.0,81.4,64.8,52.3,42.5,29.6,27.1,25.2；ESI-HRMS：C31H33N6O9计算值：633.2309，实验值：m/z 633.1201[M+H]+。
N6-(4-(苯甲酰氧基)苯甲基)-2′,3'-O-亚异丙基-5′-(O-甲基-L-缬胺酰基)羰基-腺苷(6b-2)
Figure BDA0002145814250000351
将化合物4a(70mg，0.13mmol)及1,1′-羰基二咪唑(90mg，0.55mmol)于无水THF(4mL)中的混合物在室温下在氩气下搅拌1小时。在反应完成(藉由TLC监测)之后，添加水(4.8μL，0.26mmol)、L-缬胺酸甲酯盐酸盐(90mg，0.55mmol)及DIEA(96μL，0.55mmol)。将混合物再搅拌12小时，且随后藉由在减压下旋转蒸发浓缩。将残余物用EtOAc稀释，依次用1MHCl、饱和NaHCO3、水及盐水洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，藉由旋转蒸发浓缩，且藉由管柱层析(硅胶，己烷/EtOAc，梯度2:1至0:1)纯化，得到化合物6b-2(35mg，40％产率)。C34H38N6O9；白色固体；mp 83.9-84.6℃；TLC(EtOAc/己烷(1:1))Rf＝0.21；[α]D 25＝-17.6(CH2Cl2,c＝2)；IRνmax(纯)3363,2964,2936,1731,1620,1508,1481,1452,1375,1332,1266,1208,1166,1082,1064,1025cm-1；1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.38(1H,br s),8.17(2H,d,J＝7.2Hz),7.76(1H,s),7.60(1H,t,J＝7.6Hz),7.48(2H,dd,J＝7.2,7.6Hz),7.41(2H,d,J＝8.4Hz),7.15(2H,d,J＝8.4Hz),6.60(1H,t,J＝5.6Hz),6.07(1H,s),5.41-5.51(2H,m),5.05(1H,dd,J＝6.0,3.2Hz),4.86(2H,br s),4.40-4.47(1H,m),4.28-4.37(1H,m),4.16-4.26(2H,m),3.68(3H,s)2.00-2.16(1H,m),1.58(3H,s),1.37(3H,s),0.84(6H,dd,J＝24.0,6.8Hz)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ172.4,165.1,155.6,154.7,153.3,150.2,146.7,139.4,136.2,133.6,130.1,129.4,128.8,128.5,121.9,120.4,114.5,90.9,85.3,84.0,81.7,64.8,59.0,52.1,31.2,29.6,27.1,25.3,18.8,17.5；ESI-HRMS：C34H39N6O9计算值：675.2779，实验值：m/z 675.2755[M+H]+。
5′-(O-乙基甘胺酰基)羰基-N6-(4-羟基苯甲基)腺苷(7a-1)
Figure BDA0002145814250000371
在0℃下搅拌化合物6a-1(92mg，0.14mmol)于MeOH(0.8mL)及水(0.2mL)中的溶液，同时缓慢添加TFA(2mL)。在添加完成之后，将混合物温至室温且再搅拌2小时。藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物，用EtOAc中的10％MeOH稀释，且依次用饱和NaHCO3、水及盐水洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，藉由在减压下旋转蒸发浓缩，且藉由管柱层析(硅胶，MeOH/EtOAc，梯度0:1至1:9)纯化，得到化合物7a-1(32mg，37％产率)。C22H26N6O8；白色固体；mp197.9-199.2℃；[α]D 25＝-36.3(DMSO,c＝2)；IRνmax(膜)3328,2933,1708,1637,1517,1499,1334,1303,1265,1240,1219,1174,1136,1080cm-1；1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ9.23(1H,s),8.35(1H,s),8.27(1H,br s),8.22(1H,br s),7.75(1H,t,J＝6.0Hz),7.14(2H,d,J＝8.0Hz),6.67(2H,d,J＝8.0Hz),5.93(1H,d,J＝6.0Hz),5.53(1H,d,J＝6.0Hz),5.39(1H,d,J＝4.8Hz),4.67(1H,d,J＝6.0Hz),4.59(2H,br s),4.26(1H,dd,J＝11.6,2.8Hz),4.13-4.18(2H,m),4.07-4.13(3H,m),3.74(2H,d,J＝6.0Hz),1.18(3H,t,J＝7.2Hz)；13C NMR(DMSO-d6,100MHz)δ170.1,156.4,156.1,154.4,152.7,149.0,139.4,130.2,128.5,115.0,87.0,82.3,73.0,70.6,64.6,62.8,60.4,42.4,42.2,14.1；ESI-HRMS：C22H27N6O8计算值：503.1890，实验值：m/z 503.1908[M+H]+。
5′-甘胺酰基羰基-N6-(4-羟基苯甲基)腺苷(I-a1)
Figure BDA0002145814250000381
方法A.向化合物7a-1(25mg，0.05mmol)于MeOH(4mL)中的溶液中添加1M NaOH(4mL)。将混合物搅拌30分钟，藉由在减压下旋转蒸发浓缩，且藉由逆相管柱层析(RP-18硅胶，MeOH/H2O，梯度0:1至1:1)纯化，得到化合物I-a1(18mg，76％产率)。
方法B.在0℃下搅拌酯6b-1(125mg，0.19mmol)于MeOH(0.9mL)及水(0.1mL)中的溶液，同时缓慢添加TFA(2mL)。在添加完成之后，将混合物温至室温且再搅拌2小时。藉由在减压下旋转蒸发浓缩反应物，用EtOAc中的10％MeOH稀释，且依次用饱和NaHCO3、水及盐水洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤且藉由在减压下旋转蒸发浓缩。用MeOH(3mL)稀释残余物，添加1M NaOH(3mL)，且在室温下搅拌30分钟。藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物，且相继藉由正相管柱层析(硅胶，AcOH/MeOH/EtOAc，梯度0:1:9至1:1:8)、逆相管柱层析(RP-18硅胶，MeOH/H2O，梯度0:1至1:1)纯化，得到化合物I-a1(67mg，74％产率)。产物I-a1的纯度为98.1％，如藉由在Chromolith RP-18高解析度管柱(Merck，100mm×4.6mm)，tR＝11.05min(CH3CN/0.5％TFA水溶液，梯度0％至20％，15分钟)上的HPLC所示。C20H22N6O8；白色固体；mp172.4-174.6℃；[α]D 25＝-19.5(H2O,c＝1)；IRνmax(膜)3192,2951,1708,1686,1641,1595,1521,1491,1447,1410,1356,1310,1262,1230,1196,1169,1159,1142,1068,1032cm-1；1HNMR(CD3OD,400MHz)δ8.29(1H,br s),8.27(1H,br s),7.21(2H,d,J＝8.4Hz),6.74(2H,d,J＝8.4Hz),6.05(1H,d,J＝5.4Hz),4.66-4.73(3H,m),4.34-4.40(2H,m),4.28-4.33(1H,m),4.22-4.27(1H,m),3.61-3.72(2H,m)；13C NMR(CD3OD,100MHz)δ177.3,158.6,158.0,156.1,154.2,150.2,140.6,131.0,130.2,120.8,116.5,89.6,84.6,75.7,72.1,65.3,45.9,45.0；ESI-HRMS(负模式)：C20H21N6O8计算值：473.1421，实验值：m/z 473.1416[M-H]-。
5′-L-苯丙胺酰基羰基-N6-(4-羟基苯甲基)腺苷(I-a2)
Figure BDA0002145814250000391
在0℃下搅拌化合物6a-2(72mg，0.1mmol)于MeOH(0.8mL)及水(0.2mL)中的溶液，同时缓慢添加TFA(2mL)。在添加完成之后，将反应物温至室温且再搅拌2小时。藉由在减压下旋转蒸发浓缩反应物。用MeOH(4mL)稀释残余物且在室温下搅拌，同时添加1M NaOH(4mL)。将混合物搅拌30分钟，藉由在减压下旋转蒸发浓缩，且藉由逆相管柱层析(RP-18硅胶，水/MeOH，梯度1:0至1:1)纯化，得到化合物I-a2(43mg，76％产率)。产物I-a2的纯度为95.1％，如藉由在Chromolith RP-18高解析度管柱(Merck，100mm×4.6mm)，tR＝11.0min(CH3CN/0.5％TFA水溶液，梯度5％至40％CH3CN水溶液，15分钟)上的HPLC所示。C27H28N6O8；白色固体；mp 180.2-182.3℃；[α]D 25＝-7.40(DMSO,c＝1)；IRνmax(膜)3409,2940,1702,1642,1517,1498,1453,1401,1340,1248,1178,1082,1056cm-1；1H NMR(CD3OD,400MHz)δ8.25(1H,s),8.22(1H,s),7.19(2H,d,J＝8.4Hz),7.15-7.17(2H,m),7.10-7.14(2H,m),7.04-7.08(1H,m),6.73(2H,d,J＝8.4Hz),6.02(1H,d,J＝4.4Hz),4.67(2H,br s),4.63(1H,dd,J＝4.4,4.4Hz),4.30-4.34(1H,m),4.23-4.29(2H,m),4.17-4.21(2H,m),3.17(1H,dd,J＝14.0,4.8Hz),2.83-2.92(1H,m)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ177.4,157.8,157.7,155.9,154.0,149.9,140.5,139.2,130.8,130.4,130.0,129.2,127.4,120.7,116.3,89.4,84.4,75.5,71.8,65.1,58.1,44.8,39.2；ESI-HRMS(负模式)：C27H27N6O8计算值：563.1890，实验值：m/z 563.1871[M-H]-。
5′-L-缬胺酰基羰基-N6-(4-羟基苯甲基)腺苷(I-a3)
Figure BDA0002145814250000401
在0℃下搅拌化合物6b-2(35mg，0.05mmol)于MeOH(0.4mL)及水(0.1mL)中的溶液，同时缓慢添加TFA(1mL)。在添加完成之后，将反应物温至室温且再搅拌2小时。藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物。用MeOH(4mL)稀释残余物且在室温下搅拌，同时添加1M NaOH(4mL)且反应30分钟。藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物，藉由正相管柱层析(硅胶，AcOH/MeOH/EtOAc，梯度0:1:9至1:1:8)及逆相管柱层析(RP-18硅胶，水/MeOH，梯度1:0至1:1)纯化，得到化合物I-a3(21mg，80％产率)。产物I-a3的纯度为98.9％，如藉由在Chromolith RP-18高解析度管柱(Merck，100mm×4.6mm)，tR＝3.78min(CH3CN/0.5％TFA水溶液，梯度15％至40％，15分钟)上的HPLC所示。C23H28N6O8；白色固体；mp 166.6-168.8℃；TLC(MeOH/AcOH/EtOAc(1:1:8))Rf＝0.5；[α]D 25＝-2.2(DMSO,c＝1)；IR νmax(膜)3332,2965,1702,1625,1517,1466,1406,1340,1240,1173,1107,1087,1050cm-1；1H NMR(CD3OD,400MHz)δ8.27(2H,s),7.24(2H,d,J＝8.8Hz),6.75(2H,d,J＝8.8Hz),6.05(1H,d,J＝5.6Hz),4.72-4.74(1H,m),4.70(2H,br s),4.38-4.43(1H,m),4.29-4.36(2H,m),4.24-4.27(1H,m),4.02(1H,d,J＝5.2Hz),2.09-2.20(1H,m),0.93(7H,dd,J＝16.4,6.8Hz)；13C NMR(CD3OD,100MHz)δ176.5,158.5,157.8,155.9,154.0,150.0,14.6,130.8,130.0,120.7,116.3,89.5,84.3,75.3,72.0,65.5,61.7,44.8,31.9,19.8,18.2；ESI-HRMS：C23H29N6O8计算值：517.2047，实验值：m/z 517.2040[M+H]+。
5′-正丁胺基羰基-N6-(4-羟基苯甲基)腺苷(8)
Figure BDA0002145814250000411
将化合物4b(70mg，0.14mmol)及1,1′-羰基二咪唑(90mg，0.56mmol)于无水THF(4mL)中的混合物在室温下在氩气下搅拌2小时。在反应完成(藉由TLC监测)之后，依次添加水(4.8μL，0.28mmol)及丁胺(110μL，1.1mmol)。将混合物再搅拌12小时，且随后藉由在减压下旋转蒸发浓缩。将残余物用EtOAc稀释，依次用1M HCl、水及盐水洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，且藉由旋转蒸发浓缩，得到粗产物。
在0℃下搅拌粗产物于MeOH(0.8mL)及水(0.2mL)中的溶液，同时缓慢添加TFA(2mL)。在添加完成之后，将混合物温至室温且再搅拌2小时。藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物，用EtOAc中的10％MeOH稀释，且成功地用饱和NaHCO3、水及盐水萃取。有机相经MgSO4干燥，过滤且藉由旋转蒸发浓缩。用MeOH(2mL)稀释残余物且在室温下搅拌，同时添加1M NaOH(2mL)。将混合物在室温下搅拌30分钟，且藉由在减压下旋转蒸发浓缩。将残余物用EtOAc中的10％MeOH稀释，依次用水及盐水洗涤。经MgSO4干燥有机相，过滤，藉由旋转蒸发浓缩，且藉由管柱层析(硅胶，MeOH/CH2Cl2，梯度0:1至1:9)纯化，得到化合物8(34mg，51％产率)。产物8的纯度为98.2％，如藉由在
Figure BDA0002145814250000412
RP-18高解析度管柱(Merck，100mm×4.6mm)，tR＝6.6min(CH3CN/0.5％TFA水溶液，梯度15％至40％，15分钟)上的HPLC所示。C22H28N6O6；白色固体；mp 187.4-189.0℃；TLC(MeOH/CH2Cl2(1:19))Rf＝0.08；[α]D 25＝-31.3(DMSO,c＝2)；IRνmax(膜)3339,3149,2958,2933,2872,1696,1620,1519,1465,1372,1337,1293,1248,1168,1115,1079,1049cm-1；1H NMR(CD3OD,400MHz)δ8.26(1H,s),8.20(1H,s),7.21(2H,d,J＝8.4Hz),6.74(2H,d,J＝8.4Hz),6.03(1H,d,J＝4.8Hz),4.61-4.75(3H,m),4.37-4.43(1H,m),4.33(1H,t,J＝4.4Hz),4.20-4.29(2H,m),3.08(2H,t,J＝6.8Hz),1.38-1.51(2H,m),1.25-1.37(2H,m),0.90(3H,t,J＝7.3Hz)；13C NMR(CD3OD,100MHz)δ158.7,158.0,156.2,154.2,140.5,131.1,130.1,121.0,116.5,90.2,84.4,75.7,72.2,65.3,41.8,33.1,21.0,14.1；ESI-HRMS：C22H29N6O6计算值：473.2149，实验值：m/z 473.2145[M+H]+。
5′-(O-甲基丁酰基胺基)羰基-2′,3′-O-亚异丙基-N6-(4-(4-甲氧基苯甲氧基)苯甲基)腺苷(9)
Figure BDA0002145814250000421
将化合物5a(90mg，0.14mmol)、DMAP(催化量)、DIEA(110μL，0.6mmol)及γ-胺基丁酸甲酯(呈盐酸盐形式，180mg，1.2mmol)于DMF(3mL)中的混合物在室温下在氩气下搅拌12小时。在反应完成(藉由TLC监测)之后，藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物。将残余物用EtOAc稀释，且依次用1M HCl、饱和NaHCO3、水及盐水洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，藉由在减压下旋转蒸发浓缩，且藉由管柱层析(硅胶，EtOAc/己烷，梯度1:3至9:1)纯化，得到化合物9(97mg，99％)。C34H40N6O9；油状物；[α]D 25＝-32.6(CH2Cl2,c＝2)；IRνmax(纯)3359,2989,2938,1727,1614,1584,1514,1479,1467,1377,1330,1297,1243,1174,1089,1033cm-1；1HNMR(CDCl3,400MHz)δ8.37(1H,br s),7.73(1H,s),7.31(2H,d,J＝8.4Hz),7.25(2H,d,J＝8.4Hz),6.89(2H,d,J＝8.4Hz),6.88(2H,d,J＝8.4Hz),6.47(1H,br s),6.05(1H,s),5.42-5.47(1H,m),5.01(1H,dd,J＝5.6,2.8Hz),4.94(2H,s),4.74(2H,br s),4.42(1H,d,J＝2.9Hz),4.25-4.32(1H,m),4.13-4.21(1H,m),3.77(3H,s),3.61(3H,s),3.12(2H,q,J＝6.3Hz),2.28(2H,t,J＝7.2Hz),1.74(2H,quin,J＝6.9Hz),1.58(3H,s),1.36(3H,s)；13CNMR(CDCl3,100MHz)δ173.5,159.3,158.1,155.7,154.6,153.3,139.0,130.6,129.1,129.0,128.8,120.2,114.9,114.4,113.9,91.0,85.2,84.0,81.6,69.7,64.4,55.2,51.6,43.8,40.3,31.0,27.1,25.3,24.9；ESI-HRMS：C34H41N6O9计算值：677.2935，实验值：m/z677.2933[M+H]+。
5′-丁酰基胺基羰基-N6-(4-羟基苯甲基)腺苷(I-b1)
在0℃下搅拌化合物9(92mg，0.14mmol)于MeOH(0.8mL)及水(0.2mL)中的溶液，同时缓慢添加TFA(2mL)。在添加完成之后，将混合物温至室温且再搅拌2小时。藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物，用EtOAc中的10％MeOH稀释，且成功地用饱和NaHCO3、水及盐水洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，藉由在减压下旋转蒸发浓缩。用MeOH(4mL)稀释残余物，添加1MNaOH(4mL)，且搅拌30分钟。藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物，用H2O稀释，且用EtOAc洗涤。藉由在减压下旋转蒸发浓缩水相，且藉由逆相管柱层析(RP-18硅胶，水/MeOH，梯度1:0至1:1)纯化，得到化合物I-b1(32.1mg，47％)。产物I-b1的纯度为98.0％，如藉由在Chromolith RP-18高解析度管柱(Merck，100mm×4.6mm)，tR＝10.2min(CH3CN/0.5％TFA水溶液，梯度0％至30％，15分钟)上的HPLC所示。C22H26N6O8；白色固体；mp 226.1-229.0℃；[α]D 25＝-29.7(H2O,c＝1)；IRνmax(膜)3482,3414,2929,1701,1619,1560,1546,1517,1459,1438,1340,1259,1129,1087,1053cm-1；1H NMR(CD3OD,400MHz)δ8.26(1H,s),8.23(1H,s),7.21(2H,d,J＝8.4Hz),6.74(2H,d,J＝8.4Hz),6.05(1H,d,J＝5.4Hz),4.82-4.84(2H,m),4.68(1H,t,J＝5.2Hz),4.33-4.41(2H,m),4.20-4.31(2H,m),3.05-3.17(2H,m),2.18(2H,t,J＝7.2Hz),1.76(2H,quin,J＝7.2Hz)；13C NMR(CD3OD,100MHz)δ183.2,158.7,158.0,156.1,154.2,150.1,140.5,131.0,130.2,120.9,116.5,89.7,84.5,75.6,72.2,65.2,45.0,52.0,36.0,27.6；ESI-HRMS：C22H27N6O8计算值：503.1890，实验值：m/z 503.1894[M+H]+。
5′-酰胺基-L-甲硫胺酰基-L-白胺酰基甘胺酰基羰基-2′,3′-O-亚异丙基-N6-(4-(4-甲氧基苯甲氧基)苯甲基)腺苷(10)
Figure BDA0002145814250000441
将化合物6a-1(130mg，0.17mmol)于1M NaOH(2mL)及MeOH(2mL)中的溶液在室温下搅拌30分钟。藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物。将残余物用EtOAc稀释，依次用1M HCl、水及盐水洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，藉由在减压下旋转蒸发浓缩。向DMF(3mL)中的残余物中添加1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亚胺(EDCI，57mg，0.29mmol)及羟基苯并三唑(HOBt，40mg，0.30mmol)。在0℃下搅拌混合物30分钟。在活化程序完成(藉由TLC监测)之后，添加L-白胺酰基-L-甲硫胺酸酰胺盐酸盐(223mg，0.75mmol)及DIEA(100μL，0.56mmol)于DMF(3mL)中的溶液。将混合物在室温下搅拌16小时，且随后藉由在减压下旋转蒸发浓缩。用EtOAc中的10％MeOH稀释残余物，依次用1M HCl(两次)、饱和NaHCO3、水及盐水洗涤。经MgSO4干燥有机相，过滤，藉由旋转蒸发浓缩，且藉由管柱层析(硅胶，AcOH/MeOH/EtOAc，梯度0:0:1至1:1:8)纯化，得到偶合化合物10(115mg，77％产率)。C42H55N9O10S；无色油状物；TLC(AcOH/EtOAc(1:9))Rf＝0.26；[α]D 25＝-38.1(丙酮,c＝1)；IRνmax(纯)3309,2954,2925,2872,2361,2337,1716,1663,1618,1585,1516,1467,1381,1242,1172,1086,1033cm-1；1HNMR(CDCl3,400MHz)δ8.35(1H,br s),8.08(1H,br s),7.93(1H,s),7.71(1H,br s),7.29(2H,d,J＝8.4Hz),7.23(2H,d,J＝8.0Hz),7.07(1H,br s),6.98(1H,br s),6.85(2H,d,J＝8.4Hz),6.84(2H,d,J＝8.0Hz),6.57(1H,br s),6.47(1H,br s),6.09(1H,br s),5.33(1H,d,J＝4.4Hz),4.95(1H,br s),4.89(2H,s),4.74(2H,br s),4.57(1H,d,J＝5.6Hz),4.50(1H,br s),4.28(1H,d,J＝8.8Hz),4.06-4.16(1H,m),3.82(1H,br s),3.75(3H,s),2.43(2H,br s),1.97-2.09(1H,m),1.95(3H,s),1.91(1H,br s),1.55(5H,s),1.48(1H,br s),1.32(3H,s),0.74-0.86(6H,m)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ174.0,172.5,169.8,159.4,158.1,156.4,154.6,138.9,134.2,130.9,129.4,129.2,129.0,128.9,119.9,114.8,114.5,113.9,90.5,84.8,84.3,8.2,697,64.8,55.2,52.5,52.1,44.3,41.0,1.0,30.5,30.2,28.9,27.1,25.3,24.7,22.7,22.0,15.2,14.0,11.0；ESI-HRMS：C42H56N9O10S计算值：878.3874，实验值：m/z 878.3866[M+H]+。
5′-酰胺基-L-甲硫胺酰基-L-白胺酰基甘胺酰基羰基-N6-(4-羟基苯甲基)腺苷(I-c1)
Figure BDA0002145814250000451
在0℃下搅拌化合物10(115mg，0.13mmol)于MeOH(2mL)及水(0.5mL)中的溶液，同时缓慢添加TFA(5mL)。在添加完成之后，将混合物温至室温且再搅拌2小时。藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物，用饱和NaHCO3稀释，且依次用EtOAc及n-BuOH萃取。收集有机相，且藉由在减压下旋转蒸发浓缩。藉由RP-18凝胶(水/MeOH，等度(isocratic)1:3)上的逆相管柱层析纯化残余物，且在另一RP-18凝胶管柱(水/丙酮，梯度1:0至1:1)上重复纯化残余物，得到三肽共轭化合物I-c1(46.7mg，50％产率)。产物I-c1的纯度为96.9％，如藉由在Chromolith RP-18高解析度管柱(Merck，100mm×4.6mm)，tR＝6.3min(CH3CN/0.5％TFA水溶液，梯度15％至40％，15分钟)上的HPLC所示。C31H43N9O9S；白色粉末；mp 181.2-184.3℃；[α]D 25＝-34.0(DMSO,c＝2)；IRνmax(膜)3297,2958,2917,1703,1679,1626,1544,1516,1446,1417,1250,1172,1127,1082,1046cm-1；1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ9.23(1H,s),8.36(1H,s),8.27(1H,br s),8.22(1H,br s),8.05(1H,d,J＝7.8Hz),7.92(1H,d,J＝8.0Hz),7.57(1H,t,J＝5.2Hz),7.17(1H,br s),7.14(2H,d,J＝8.4Hz),7.07(1H,br s),6.67(2H,d,J＝8.4Hz),5.92(1H,d,J＝6.0Hz),5.52(1H,d,J＝6.0Hz),5.39(1H,d,J＝4.8Hz),4.67(1H,dd,J＝6.0,6.0Hz),4.59(2H,br s),4.19-4.32(3H,m),4.10-4.19(2H,m),4.03-4.09(1H,m),3.63(2H,d,J＝3.2Hz),2.29-2.47(2H,m),2.02(3H,s),1.87-1.98(1H,m),1.72-1.85(1H,m),1.59(1H,d七重峰,J＝6.4,6.4Hz),1.45(2H,dd,J＝6.4,3.2Hz),0.87(7H,d,J＝6.4Hz),0.83(7H,d,J＝6.4Hz)；13C NMR(DMSO-d6,100MHz)δ172.3,171.9,169.2,156.4,156.1,154.3,152.6,137.3,13.2,129.,128.5,114.9,86.9,82.3,73.0,70.6,64.5,51.7,51.2,43.4,40.6,31.5,29.7,24.1,23.0,21.5,14.6；ESI-HRMS：C31H44N9O9S计算值：718.2983，实验值：m/z 718.2972[M+H]+。
P物质共轭化合物(I-c2)
Figure BDA0002145814250000471
将化合物5a(130mg，200μmol)及十一肽Arg-Pro-Lys-Pro-Glu-Glu-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-CONH2(P物质，10mg，7μmol)于CH2Cl2(5mL)与PBS溶液(5mL)的两相系统中的混合物在室温下在氩气下剧烈搅拌4小时。使用分液漏斗分离两相。使水层离心(8000rpm，20分钟，4℃)，且倾析掉上清液。用水洗涤残余物，再次离心(8000rpm，20分钟，4℃)，移除上清液后得到粗产物。
在0℃下搅拌粗产物(10mg，5.2μmol)于MeOH(0.4mL)及水(0.1mL)中的溶液，同时缓慢添加TFA(1mL)。在添加完成之后，将混合物温至室温且再搅拌2小时。藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物，且藉由逆相管柱层析(RP-18凝胶，水/MeOH，梯度1:0至1:1)纯化，得到化合物I-c2(1.6mg，12％产率)。产物I-c2的纯度为96.2％，如藉由在Chromolith RP-18高解析度管柱(Merck，100mm×4.6mm)，tR＝1.8min(CH3CN/0.5％TFA水溶液，梯度10％至20％，15分钟)上的HPLC所示。C81H115N23O19S；白色粉末；RP-18TLC(AcOH/MeOH/H2O(2:9:9))Rf＝0.45；MALDI-TOF：C81H116N23O19S计算值：1746.8，实验值m/z 1746.7[M+H]+。
N6-(吲哚-3-基)乙基-2',3'-O-亚异丙基-腺苷(12)
Figure BDA0002145814250000481
根据先前报导的程序[Chen,J.-B.；Liu,E.M.；Chern,T.-R.；Yang,C.-W.；Lin,C.-I.；Huang,N.-K.；Lin,Y.-L.；Chern,Y.；Lin,J.-H.Fang,J.-M.Design and synthesis ofnovel dual-action compounds targeting the adenosine A2A receptor and adenosinetransporter for neuroprotection.ChemMedChem 2011,6,1390-1400]，由6-氯嘌呤核糖苷与(吲哚-3-基)乙胺的取代反应制备N6-(吲哚-3-基)乙基腺苷(化合物11)。简言之，将色胺(2.5当量)、6-氯嘌呤核糖苷(1当量)及二异丙基乙胺(DIEA，4.5当量)于乙醇中的混合物在聚焦单模微波反应器中在150W下照射10分钟。在减压下浓缩混合物，且藉由急骤层析(硅胶；MeOH/EtOAc(1:9)纯化)，以83％产率得到化合物11。
将化合物11(147mg，0.36mmol)、对甲苯磺酸单水合物(75mg，0.48mmol)及2,2-二甲氧基丙烷(1mL，0.83mmol)于丙酮(2mL)中的混合物在室温下搅拌4小时。藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物。用CH2Cl2稀释残余物，依次用水及饱和NaHCO3萃取。有机相经MgSO4干燥，过滤，藉由在减压下旋转蒸发浓缩，且藉由管柱层析(硅胶，己烷/EtOAc(1:1))纯化，得到缩丙酮化物化合物12(131mg，81％产率)。C23H26N6O4；[α]D 25＝-103.4(CHCl3,c＝1)；IRνmax(纯)3421,1624,1458,1340,1215,1155,1080cm-1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.59(1H,br s),8.33(1H,br s),7.57(1H,d,J＝8.4Hz),7.50(1H,d,J＝2.0Hz),7.15-7.11(1H,m),7.09-7.05(1H,m),6.88(1H,d,J＝2.0Hz),6.82(1H,br s),6.49(1H,br s),5.74(1H,br s),5.18(1H,t,J＝5.2Hz),5.08(1H,dd,J＝6.0,0.8Hz),4.51(1H,s),3.95(2H,m),3.88-3.76(2H,m),3.06(2H,t,J＝6.8Hz),1.62(3H,s),1.35(3H,s)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ155.2,139.4,136.5,127.3,122.2,119.5,118.8,113.9,112.8,111.2,94.4,86.1,82.9,81.8,63.5,50.4,27.7,25.2；ESI-HRMS：C23H27N6O4计算值：451.2094，实验值：m/z 451.2099[M+H]+。
N6-(吲哚-3-基)乙基-2',3'-O-亚异丙基-5′-(O-甲基甘胺酰基)羰基-腺苷(13)
Figure BDA0002145814250000491
将化合物12(78mg，0.17mmol)及CDI(113mg，0.77mmol)于无水THF(4mL)中的混合物在室温下在氮气下搅拌2小时。添加另一批CDI(113mg，0.77mmol)，且将混合物搅拌2小时。在反应完成(藉由TLC监测)之后，添加少量水以淬灭过量CDI，随后添加甘胺酸甲酯盐酸盐(347mg，2.8mmol)及DIEA(0.5mL，2.8mmol)。将混合物再搅拌24小时，且随后藉由在减压下旋转蒸发浓缩。将残余物用CH2Cl2稀释，依次用1M HCl、水及盐水洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，藉由旋转蒸发浓缩，且藉由管柱层析(硅胶，己烷/EtOAc(2:3))纯化，得到化合物13(48mg，50％产率)。C27H31N7O7；油状物；[α]D 25＝-34.2(CHCl3,c＝1)；IRνmax(纯)3406,1724,1620,1536,1460,1379,1211,1076cm-1；1H NMR(CD3OD)δ8.28(1H,br s),8.16(1H,brs),7.59(1H,d,J＝8.0Hz),7.31(1H,d,J＝7.6Hz),7.10-7.04(2H,m),6.99-6.95(1H,m),6.18(1H,d,J＝2.8Hz),5.43-5.41(1H,m),5.08-5.06(1H,m),4.59(2H,br s),4.55(1H,dd,J＝8.0,4.8Hz),4.30(1H,dd,J＝11.6,4.8Hz),4.19(1H,dd,J＝11.6,4.8Hz),3.89(1H,brs),3.86(1H,s),3.69(3H,s),3.12(2H,t,J＝7.2Hz),1.61(3H,s),1.33(3H,s)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ172.4,158.7,154.3,140.8,138.4,129.0,125.2,123.8,122.5,119.7,119.5,115.7,113.3,112.3,91.8,86.0,85.6,83.2,66.0,52.8,49.6,49.4,43.3,42.6,27.6,26.6,25.7；ESI-HRMS：C27H32N7O7计算值：566.2363，实验值：m/z 566.2336[M+H]+。
N6-(吲哚-3-基)乙基-5′-甘胺酰基羰基-腺苷(14，II-a1)
Figure BDA0002145814250000501
在0℃下搅拌化合物13(21mg，0.04mmol)于MeOH(1mL)及水(0.05mL)中的溶液，同时缓慢添加TFA(1.3mL)。在添加完成之后，将混合物温至室温且再搅拌2小时。藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物。用MeOH(0.5mL)稀释残余物，添加1M NaOH(2.5mL)，且在室温下搅拌15分钟。藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物，且藉由逆相管柱层析(RP-18硅胶，MeOH/H2O，梯度1:9至1:1)纯化，得到化合物14(II-a1)(14mg，74％产率)。产物II-a1的纯度为91.6％，如藉由在Chromolith RP-18高解析度管柱(Merck，100mm×4.6mm)，tR＝15.4min(CH3CN/0.1％TFA水溶液，梯度5％至20％，22分钟)上的HPLC所示。C23H25N7O7；[α]D 25＝-44.0(DMSO,c＝1)；IRνmax(纯)3447,1793,1624,1559,1456,1299,1245,1096cm-1；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.27(2H,br s),7.59(1H,d,J＝7.6Hz),7.32(1H,d,J＝8.0Hz),7.10-7.04(2H,m),6.99-6.95(2H,m),6.04(1H,d,J＝5.2Hz),4.68(2H,t,J＝5.2Hz),4.38-4.34(2H,m),4.31(1H,d,J＝3.6Hz),4.25(1H,t,J＝4.0Hz),3.90(2H,br s),3.15-3.11(2H,m)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ177.3,158.6,156.3,154.2,140.5,138.3,128.9,123.8,122.4,120.9,120.3,119.7,119.5,113.2,112.4,89.6,84.6,75.6,72.1,65.3,45.9,42.7,26.5；ESI-HRMS：C23H24N7O7计算值：510.1737，实验值：m/z 510.1753[M-H]-。
N6-((5-溴噻吩-2-基)甲基)腺嘌呤核糖苷(15)
Figure BDA0002145814250000511
将6-氯嘌呤核糖苷(287mg，1mmol)、2-胺甲基-5-溴噻吩(呈盐酸盐形式，384mg，2mmol)及DIEA(3mL，17mmol)于i-PrOH(8mL)中的混合物在50℃下加热48小时。藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物，添加适量MeOH，且离心(8000rpm，4℃，20分钟)。收集沈淀且自MeOH再结晶，得到化合物15(375mg，85％产率)。C15H16N5O4SBr；白色固体；mp 153.1-154.7℃；TLC(异丙醇/己烷(2:3))Rf＝0.36；[α]D 25＝-152.8(丙酮,c＝1)；IRνmax(纯)3309,2929,2869,1709,1626,1584,1483,1441,1347,1298,1230,1125,1084,1053cm-1；1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.54(1H,br s),8.40(1H,s),8.29(1H,br s),7.02(1H,d,J＝3.6Hz),6.87(1H,d,J＝3.6Hz),5.90(1H,d,J＝6.0Hz),5.46(1H,d,J＝6.0Hz),5.36(1H,dd,J＝6.8,4.8Hz),5.20(1H,d,J＝4.8Hz),4.77(2H,br s),4.61(1H,ddd,J＝6.8,6.0,6.0Hz),4.15(1H,d,J＝2.8Hz),3.97(1H,d,J＝2.8Hz),3.62-3.73(1H,m),3.52-3.60(1H,m)；13C NMR(DMSO-d6,100MHz)δ154.0,152.3,145.0,140.2,129.6,126.4,122.9,109.8,88.0,85.9,73.6,70.6,61.6；ESI-HRMS：C15H17N5O4S79Br及C15H17N5O4S81Br的计算值：442.0185及444.0164，实验值：m/z 442.0190及444.0167[M+H]+。
N6-(5-溴噻吩-2-基)甲基-2',3'-O-亚异丙基-腺苷(16)
Figure BDA0002145814250000521
将化合物15(150mg，0.34mmol)、对甲苯磺酸单水合物(70mg，0.48mmol)及2,2-二甲氧基丙烷(1mL，0.83mmol)于丙酮(2mL)中的混合物在室温下搅拌4小时。藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物。用CH2Cl2稀释残余物，依次用水及饱和NaHCO3萃取。有机相经MgSO4干燥，过滤，藉由在减压下旋转蒸发浓缩，且藉由管柱层析(硅胶，己烷/EtOAc(2:3))纯化，得到缩丙酮化物化合物16(131mg，80％产率)。C18H20BrN5O4S；无色油状物；[α]D 25＝-126.3(CHCl3,c＝1)；IRνmax(纯)3422,1618,1478,1382,1341,1297,1264,1215,1110,1081cm-1；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.33(1H,br s),7.67(1H,br s),6.82(1H,d,J＝3.6Hz),6.71(1H,d,J＝4.0Hz),5.80(1H,d,J＝4.8Hz),5.16(1H,t,J＝5.2Hz),5.07(1H,dd,J＝6.0,0.8Hz),4.85(2H,s),4.49(1H,s),3.92(1H,d,J＝12.0Hz),3.76(1H,d,J＝12.0Hz),1.60(3H,s),1.33(3H,s)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ171.1,154.4,152.6,142.9,139.7,129.3,126.2,121.1,113.9,111.6,109.2,94.2,86.0,82.9,81.6,63.3,27.6,25.2；ESI-HRMS：C18H21 79BrN5O4S计算值：482.0485，实验值：m/z 482.0498[M+H]+
N6-(5-溴噻吩-2-基)甲基-2',3'-O-亚异丙基-5′-(O-甲基甘胺酰基)羰基-腺苷(17)
Figure BDA0002145814250000531
将化合物16(208mg，0.44mmol)及CDI(81mg，0.55mmol)于无水THF(17mL)中的混合物在室温下在氮气下搅拌2小时。添加另一批CDI(81mg，0.55mmol)，且将混合物搅拌2小时。在反应完成(藉由TLC监测)之后，添加少量水以淬灭过量CDI，随后添加甘胺酸甲酯盐酸盐(864mg，7mmol 347mg，2.8mmol)及DIEA(1.25mL，7mmol)。将混合物再搅拌24小时，且随后藉由在减压下旋转蒸发浓缩。将残余物用CH2Cl2稀释，依次用1M HCl、水及盐水洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，藉由旋转蒸发浓缩，且藉由管柱层析(硅胶，己烷/EtOAc(1:1))纯化，得到化合物17(118mg，45％产率)。C22H25BrN6O7S；无色油状物；[α]D 25＝-29.7(MeOH,c＝1)；IRνmax(纯)3422,1735,1719,1618,1214,1076cm-1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.38(1H,br s),7.84(1H,br s),6.82(1H,d,J＝3.6Hz),6.74(1H,d,J＝4.0Hz),6.06(1H,d,J＝2.0Hz),5.94(1H,s),5.07(1H,dd,J＝6.0,2.0Hz),4.94(1H,dd,J＝6.4,3.2Hz),4.88(2H,s),4.43-4.39(1H,m),4.33(1H,dd,J＝11.6,4.0Hz),4.19-4.15(1H,m),3.97-3.83(2H,m),3.69(3H,s),1.57(3H,s),1.33(3H,s)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ170.4,155.7,154.1,153.2,148.4,143.2,139.4,129.4,126.2,120.2,114.5,111.5,109.4,90.9,85.1,84.1,81.5,64.8,52.4,42.6,27.1,25.3；ESI-HRMS：C22H26 79BrN6O7S计算值：597.0767，实验值：m/z 597.0739[M+H]+。
N6-(5-溴噻吩-2-基)甲基-5′-(O-甲基甘胺酰基)羰基-腺苷(II-b1)
Figure BDA0002145814250000541
在0℃下搅拌化合物17(19mg，31μmol)于MeOH(0.5mL)及水(0.05mL)中的溶液，同时缓慢添加TFA(1mL)。在添加完成之后，将混合物温至室温且再搅拌1小时。藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物。用MeOH(1mL)稀释残余物，添加1M NaOH(5mL)，且在室温下搅拌10分钟。藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物，且藉由逆相管柱层析(RP-18硅胶，MeOH/H2O，梯度1:9至6:4)纯化，得到化合物II-b1(16mg，95％产率)。产物II-b1的纯度为95.5％，如藉由在Chromolith RP-18高解析度管柱(Merck，100mm×4.6mm)，tR＝4.1min(CH3CN/0.1％TFA水溶液，梯度5％至20％，22分钟)上的HPLC所示。C18H19BrN6O7S；白色固体,mp＝171.6-174.0℃；[α]D 25＝-16.1(DMSO,c＝1)；IRνmax(纯)3448,1623,1278,1119,1084,1060cm-1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.31(2H,d,J＝4.0Hz),6.90(1H,d,J＝4.0Hz),6.85(1H,d,J＝3.6Hz),6.06(1H,d,J＝5.2Hz),4.90(2H,s),4.69(1H,t,J＝5.2Hz),4.36-4.40(2H,m),4.24-4.30(2H,m),3.66(2H,s)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ177.6,158.7,155.7,154.1,145.7,141.0,130.8,127.6,121.0,112.1,107.6,89.6,84.6,75.7,72.2,65.4,45.8,30.9。ESI-HRMS：C18H18 79BrN6O7S计算值：541.0141，实验值：m/z 541.0140[M-H]-。
5′-迭氮基-5′-去氧-2′,3′-O-亚异丙基-N6-(4-(4-甲氧基苯甲氧基)苯甲基)腺苷(18)
Figure BDA0002145814250000551
在0℃下搅拌化合物4a(500mg，0.94mmol)及1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(DBU，420μL，2.81mmol)于1,4-二恶烷(3mL)中的混合物，同时一次性添加二苯基磷酰基迭氮化物(DPPA，404μL，1.88mmol)。10分钟后，将混合物温至室温，且再搅拌2.5小时。添加迭氮化钠(304mg，4.67mmol)及15-冠-5醚(18.5μL，0.09mmol)。随后将混合物在80℃下搅拌16小时。将混合物冷却，且藉由在减压下旋转蒸发浓缩。将残余物用EtOAc稀释，且依次用1MHCl、NaHCO3(饱和)、水及盐水洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，在减压下浓缩，且藉由管柱层析(硅胶，EtOAc/CH2Cl2，梯度1:19至2:3)纯化，得到化合物18(368mg，70％产率)。C28H30N8O5；白色泡沫状固体；mp 49.2-50.8℃；TLC(EtOAc/CH2Cl2(1:3))Rf＝0.42；[α]D 25＝+7.21(CHCl3,c＝2)；IRνmax(纯)2929,2101,1615,1583,1513,1479,1464,1375,1330,1295,1240,1215,1173,1155,1093,1034cm-1；1H NMR(CDCl3,600MHz)δ8.42(1H,br s)7.72(1H,br s)7.36(2H,d,J＝8.2Hz)7.29(2H,d,J＝8.2Hz)6.93(4H,t,J＝7.4Hz)6.54(1H,t,J＝5.6Hz)6.09(1H,s)5.47(1H,d,J＝6.7Hz)5.08(1H,dd,J＝5.9,3.3Hz)4.99(2H,s)4.79(2H,br.s.)4.43-4.35(1H,m)3.82(3H,s)3.64-3.51(2H,m)1.63(3H,s)1.41(3H,s)；13C NMR(CDCl3,150MHz)δ159.4,158.2,154.7,153.3,139.2,130.5,129.1,129.0,128.9,120.3,115.0,114.6,113.9,90.6,85.7,84.0,82.1,69.8,55.2,52.3,43.9,27.0,25.3；ESI-HRMS：C28H31N8O5计算值：559.2417，实验值：m/z 559.2443[M+H]+。
5′-去氧-2',3'-O-亚异丙基-5′-(N′-甲基甘胺酰基脲基)-N6-(4-(4-甲氧基苯甲氧基)苯甲基)腺苷(19)
Figure BDA0002145814250000561
将化合物18(368mg，0.66mmol)及林德拉催化剂(280mg，0.13mmol)于MeOH(3mL)及EtOAc(3mL)中的混合物在室温下在氢气氛围下(在气球中)搅拌24小时，使迭氮基完全氢解，如TLC所示。将混合物用MeOH稀释，经由硅藻土垫过滤，且用MeOH及CH2Cl2冲洗。在减压下浓缩滤液，得到粗制胺产物。在氮气氛围下，将粗制胺产物溶解于无水THF(10mL)中，冷却至0℃，且在搅拌下逐滴添加1,1′-羰基二咪唑(330mg，2.04mmol)于无水THF(10mL)中的溶液。将混合物搅拌1小时，温至室温，且再搅拌2小时。添加甘胺酸甲酯盐酸盐(512mg，4.08mmol)、Et3N(568μL，4.08mmol)及DMAP(25mg，0.20mmol)。将混合物在室温下搅拌16小时，且随后藉由在减压下旋转蒸发浓缩。将残余物用EtOAc稀释，依次用1M HCl、水及盐水洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，藉由在减压下旋转蒸发浓缩，且藉由管柱层析(硅胶，MeOH/EtOAc，梯度0:1至3:97)纯化，得到脲衍生物19(379mg，86％产率)。C32H37N7O8；白色泡沫状固体；mp 84.6-85.8℃；TLC(MeOH/DCM(1:9))Rf＝0.68；[α]D 25＝-118.2(CHCl3,c＝2)；IRνmax(纯)1750,1616,1578,1559,1513,1375,1297,1240,1214,1175,1097,1082,1034cm-1；1HNMR(CDCl3,600MHz)δ8.49(1H,br s),7.67(1H,br s),7.45(1H,d,J＝8.2Hz),7.34(2H,d,J＝8.7Hz),7.27(2H,d,J＝8.7Hz),6.91(10H,dd,J＝8.7,3.6Hz),6.70(1H,t,J＝5.6Hz),5.77(1H,d,J＝5.1Hz),5.42-5.34(2H,m),4.96(2H,s),4.88(1H,dd,J＝6.0,1.8Hz),4.76(2H,br s),4.46(1H,dd,J＝4.6,2.0Hz),4.13(1H,dd,J＝18.2,6.4Hz),3.98(1H,ddd,J＝14.1,9.5,2.0Hz),3.90(1H,dd,J＝18.2,4.9Hz),3.80(3H,s),3.72(3H,s),3.30-3.24(1H,m),1.62(3H,s),1.37(3H,s)；13C NMR(CDCl3,150MHz)δ171.7,159.4,158.7,158.2,155.0,152.9,140.1,130.4,129.1,129.0,128.8,121.2,115.0,114.4,113.9,92.9,84.0,81.9,81.7,69.7,55.2,52.1,42.1,42.0,27.5,25.1；ESI-HRMS：C32H38N7O8计算值：648.2782，实验值：m/z 648.2780[M+H]+。
5′-去氧-2',3'-O-亚异丙基-5′-(N′-甲基甘胺酰基脲基)-N6-(4-羟基苯甲基)腺苷(20)
Figure BDA0002145814250000571
将化合物19(100mg，0.15mmol)及10％Pd/C(82mg，0.07mmol)于MeOH(2.7mL)及乙酸(0.3mL)中的混合物在室温下在H2氛围下搅拌3天。将混合物用EtOAc稀释，且经由硅藻土垫过滤。滤液藉由在减压下旋转蒸发浓缩，用EtOAc稀释，且依次用饱和NaHCO3、水及盐水洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，藉由在减压下旋转蒸发浓缩，且藉由管柱层析(硅胶，MeOH/CH2Cl2，梯度1:99至7:93)纯化，得到产物20(72mg，89％产率)。C24H29N7O7；TLC(MeOH/DCM(1:19))Rf＝0.35；1H NMR(CDCl3,600MHz)δ8.91(1H,br s),8.42(1H,br s),7.72(1H,br s),7.27(1H,br s),6.98(2H,d,J＝8.2Hz),6.74(1H,br s),6.61(2H,d,J＝8.2Hz),5.77(1H,d,J＝4.6Hz),5.44(1H,t,J＝5.4Hz),5.32-5.26(1H,m),4.82(1H,dd,J＝6.1,1.5Hz),4.52-4.71(2H,m),4.38(1H,d,J＝2.0Hz),4.05(1H,dd,J＝18.0,6.4Hz),3.85(2H,dd,J＝18.0,5.1Hz),3.64(3H,s),3.24(1H,d,J＝14.3Hz),1.56(3H,s),1.30(3H,s)；13C NMR(CDCl3,150MHz)δ171.7,158.9,156.0,154.6,153.1,147.7,139.8,129.0,120.5,115.5,114.5,92.5,84.1,82.1,81.6,52.2,43.9,42.1,41.9,27.4,25.1；ESI-HRMS：C24H30N7O7计算值：528.2207，实验值：m/z 528.2207[M+H]+。
5′-去氧-5′-(N′-甘胺酰基脲基)-N6-(4-羟基苯甲基)腺苷(I-d1)
Figure BDA0002145814250000581
在0℃下搅拌化合物20(70mg，0.13mmol)于MeOH(0.8mL)及水(0.2mL)中的溶液，同时缓慢添加TFA(2mL)。将混合物温至室温且搅拌2小时。藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物。用MeOH(5mL)稀释残余物，添加1M NaOH(5mL)，且在室温下搅拌30分钟。藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物，藉由逆相管柱层析(RP-18硅胶，MeOH/水，梯度0:1至3:7)纯化，得到化合物I-d1(61.8mg，98％产率)。产物I-d1的纯度为99.2％，如藉由在Chromolith RP-18管柱(Merck，100mm×4.6mm)，tR＝6.82min(CH3CN/0.1％TFA水溶液，梯度0％至30％，10分钟)上的HPLC所示。C20H23N7O7；白色固体,mp>200℃(分解)；[α]D 25＝-19.5(H2O,c＝1)；IRνmax(膜)2924,1623,1598,1577,1398,1337,1250,1171,1133,1080cm-1；1H NMR(D2O,600MHz)δ8.05(1H,s),8.00(1H,s),7.00(2H,d,J＝8.2Hz),6.54(2H,d,J＝8.7Hz),5.87(1H,d,J＝5.1Hz),4.62(1H,t,J＝5.1Hz),4.39(2H,br.s.),4.25(1H,t,J＝5.1Hz),4.12(1H,q,J＝4.6Hz),3.58-3.50(2H,m),3.45-3.37(2H,m)；13C NMR(D2O,150MHz)δ178.1,165.4,160.3,160.1,153.9,152.6,139.2,128.8,126.2,118.9,117.0,112.5,87.6,83.6,73.3,70.9,43.8,41.1；ESI-HRMS(负模式)：C20H24N7O7计算值：474.1731，实验值：m/z 474.1737[M+H]+。
5′-乙酰硫基-5′-去氧-N6-(4-(4-甲氧基苯甲氧基)苯甲基)-2′,3′-(O-亚异丙基)腺苷(21)
Figure BDA0002145814250000591
在0℃下搅拌N6-(4-羟基苯甲基)-2',3'-O-亚异丙基-腺苷(3)(291mg，0.55mmol)、Et3N(442μL，3.2mmol)及DMAP(2.75mg，0.03mmol)于CH2Cl2(4mL)中的混合物，同时逐滴添加甲磺酰氯(MsCl，125μL，1.62mmol)于CH2Cl2(1.5mL)中的溶液。将混合物在0℃下搅拌10分钟，温至室温，且再搅拌2小时。藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物，用EtOAc稀释，且依次用饱和NH4Cl、饱和NaHCO3、水及盐水洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，藉由在减压下旋转蒸发浓缩，得到粗制甲磺酰化产物。向甲磺酰化产物于DMF(5mL)中的溶液中添加KSAc(358mg，3.19mmol)及KI(4.4mg，0.03mmol)。将混合物在室温下搅拌20小时，且随后藉由在减压下旋转蒸发浓缩。将残余物用EtOAc稀释，且依次用饱和NaHCO3、水及盐水洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，藉由在减压下旋转蒸发浓缩，且藉由管柱层析(硅胶，EtOAc/CH2Cl2，梯度0:1至3:7)纯化，得到化合物21(242mg，74％产率)。C30H33N5O6S；白色泡沫状固体；mp85.2-86.7℃；TLC(EtOAc/DCM(1:3))Rf＝0.53；[α]D 25＝-20.39(CHCl3,c＝2)；IRνmax(纯)1695,1616,1583,1513,1465,1422,1375,1330,1297,1241,1216,1174,1155,1091,1035cm-1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.38(1H,s),7.75(1H,s),7.32(2H,d,J＝8.6Hz),7.27(2H,d,J＝8.6Hz),6.90(4H,dd,J＝8.6,7.2Hz),6.16(1H,br.s.),6.02(1H,d,J＝2.0Hz),5.49(1H,dd,J＝6.4,2.0Hz),4.97(1H,d,J＝3.2Hz),4.95(2H,s),4.31(1H,td,J＝6.4,3.2Hz),3.79(3H,s),3.31-3.22(1H,m),3.21-3.11(1H,m),2.32(3H,s),1.57(3H,s),1.36(3H,s)；13CNMR(CDCl3,100MHz)δ194.5,159.4,158.3,154.7,153.3,139.3,130.5,129.2,128.9,115.1,114.4,114.0,90.9,86.1,84.2,83.7,69.8,55.3,31.3,30.5,27.1,25.3；ESI-HRMS：C30H34N5O6S计算值：592.2230，实验值：m/z 592.2243[M+H]+。
5′-去氧-5′-(2′,2′,2′-三氯乙基甘胺酰基(胺(硫甲酰)基))-N6-(4-(4-甲氧基苯甲氧基)苯甲基)-2′,3′-(O-亚异丙基)腺苷(22)
Figure BDA0002145814250000601
在氩气氛围下，在1M KOH(aq)(5mL)、THF(5mL)及MeOH(5mL)的去氧溶液中处理化合物21(120mg，0.20mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。添加柠檬酸(1.05g)于水(10mL)中的去氧溶液以中和过量的碱。将混合物在减压下浓缩至小于10mL，用EtOAc稀释，且依次用饱和NH4Cl、水及盐水洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，藉由在减压下旋转蒸发浓缩，且藉由管柱层析(硅胶，EtOAc/CH2Cl2，梯度0:1至1:4)纯化，得到去乙酰化产物(66mg，60％产率)。
在氮气氛围下，将2,2,2-三氯乙基甘胺酸(呈盐酸盐形式，140mg，0.58mmol)及1,1′-羰基二咪唑(140mg，0.86mmol)于CH2Cl2(0.8mL)及THF(0.2mL)中的溶液在室温下搅拌4小时。将混合物在减压下浓缩，用CH2Cl2稀释，且用盐水洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，且藉由在减压下旋转蒸发浓缩，得到粗制咪唑化物产物。
在氩气氛围下，将含有以上所制备的去乙酰化硫醇产物(66mg，0.12mmol)及咪唑化物的THF溶液(4mL)在室温下搅拌20小时。混合物藉由在减压下旋转蒸发浓缩，用EtOAc稀释，且依次用饱和NH4Cl、水及盐水洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，藉由在减压下旋转蒸发浓缩，且藉由管柱层析(硅胶，EtOAc/CH2Cl2，梯度1:9至1:4)纯化，得到化合物22(57mg，60％产率)。C33H35Cl3N6O8S；TLC(EtOAc/DCM(1:3))Rf＝0.35；[α]D 25＝-51.1(CHCl3,c＝2)；IRνmax(纯)1768,1723,1669,1612,1514,1457,1382,1302,1241,1216,1174,1157,1082,1034,1008cm-1；1H NMR(CDCl3,600MHz)δ8.38(1H,br.s.),7.80(1H,s),7.34-7.31(2H,m),7.29-7.26(2H,m),6.94-6.86(4H,m),6.20(1H,br s),6.09(1H,t,J＝5.4Hz),6.04(1H,d,J＝2.6Hz),5.46(1H,dd,J＝6.4,3.0Hz),5.00(1H,dd,J＝6.1,3.0Hz),4.95(2H,s),4.82-4.71(4H,m),4.43-4.36(1H,m),4.18(2H,d,J＝5.1Hz),3.79(3H,s),3.34-3.20(2H,m),1.58(3H,s),1.36(3H,s)；13C NMR(CDCl3,150MHz)δ168.0,159.4,158.3,154.7,153.4,139.2,129.2,128.9,115.1,114.5,114.0,94.2,90.8,86.4,84.2,83.5,74.7,74.4,69.8,55.3,46.5,42.5,39.1,32.2,27.1,25.4；ESI-HRMS：C33H36 35Cl3N6O8S计算值：783.1353，实验值：m/z 783.1363[M+H]+。
5′-去氧-5′-甘胺酰基(胺(硫甲酰)基)-N6-(4-(4-甲氧基苯甲氧基)苯甲基)腺苷(I-e1)
Figure BDA0002145814250000611
在0℃下搅拌化合物22(55mg，0.07mmol)于MeOH(0.8mL)及水(0.2mL)中的溶液，同时缓慢添加TFA(2mL)。将混合物温至室温，再搅拌2小时，且随后藉由在减压下旋转蒸发浓缩。将残余物用MeOH(3mL)稀释且在室温下搅拌，同时添加NaOAc·3H2O(816mg，6mmol)、乙酸(343μL，6mmol)及锌粉(46mg，0.7mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，藉由在减压下旋转蒸发浓缩，且藉由逆相管柱层析(RP-18硅胶，MeOH/水，梯度0:1至1:1)纯化，得到化合物I-e1(6.0mg，17％产率)。C20H22N6O7S；1H NMR(DMSO-d6,600MHz)δ9.22(1H,br s),8.38(1H,brs),8.35(1H,s),8.25(1H,br s),8.22(1H,br s),7.14(2H,d,J＝8.2Hz),6.67(2H,d,J＝8.2Hz),5.88(1H,d,J＝6.1Hz),5.47(1H,d,J＝5.1Hz),5.38-5.30(1H,m),4.78(1H,d,J＝4.6Hz),4.58(2H,br s),4.09(1H,br s),3.94(1H,d,J＝2.0Hz),3.72(2H,d,J＝4.6Hz),3.10(1H,dd,J＝13.8,7.2Hz)；ESI-HRMS：C20H23N6O7S计算值：491.1343，实验值：m/z491.1350[M+H]+。
6-氯嘌呤-2',3'-O-亚异丙基-核糖苷(23)
将6-氯嘌呤核糖苷(1)(1.0g，3.5mmol)、对甲苯磺酸单水合物(1.0g，5.3mmol)及2,2-二甲氧基丙烷(10mL)于丙酮(20mL)中的混合物在室温下在N2下搅拌3小时。添加另一份2,2-二甲氧基丙烷(10mL)，且将混合物再搅拌1小时。藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物。将残余物用CH2Cl2稀释，且用水萃取。用CH2Cl2洗涤水相，且用饱和NaHCO3及盐水洗涤经合并的有机层。有机相经MgSO4干燥，过滤，藉由在减压下旋转蒸发浓缩，且藉由管柱层析(硅胶，EtOAc/己烷，梯度3:7至1:0)纯化，得到化合物23(870mg，76％产率)。C13H15ClN4O4；[α]D 25＝-112.6(CHCl3,c＝2)；IRνmax(纯)1592,1563,1490,1438,1419,1400,1384,1337,1259,1202,1154,1136,1108,1080cm-1；1H NMR(CDCl3,600MHz)δ8.79(1H,s),8.25(1H,s),6.00(1H,d,J＝4.6Hz),5.24-5.21(1H,m),5.14(1H,dd,J＝5.6,1.5Hz),4.93(1H,dd,J＝10.6,2.0Hz),4.57(1H,d,J＝1.5Hz),4.00(1H,dt,J＝12.7,2.0Hz),3.84(1H,ddd,J＝12.7,10.6,2.3Hz),1.68(3H,s),1.41(3H,s)；13C NMR(CDCl3,150MHz)δ152.4,151.7,150.4,144.7,133.4,114.5,94.1,86.3,83.2,81.5,63.2,27.6,25.2；ESI-HRMS：C13H16 35ClN4O4计算值：327.0855，实验值：m/z 327.0868[M+H]+。
6-(4-甲氧基苯甲硫基)嘌呤-2′,3′-O-亚异丙基-核糖苷(24a)
Figure BDA0002145814250000631
在0℃下搅拌化合物23(163mg，0.5mmol)及硫乙酸S-(4-甲氧基苯甲酯)(106mg，0.55mmol)于MeOH(8mL)及THF(2mL)中的溶液，同时一次性添加K2CO3(76mg，0.55mmol)。将混合物在0℃下搅拌2小时，用EtOAc稀释，且用水及盐水洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，藉由在减压下旋转蒸发浓缩，且藉由管柱层析(硅胶，EtOAc/CH2Cl2，梯度0:1至1:2)纯化，得到化合物24a(168mg，76％产率)。C21H24N4O5S；白色泡沫；TLC(EtOAc/DCM(1:3))Rf＝0.33；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.71(1H,s),8.13(1H,s),7.36(2H,d,J＝8.4Hz),6.82(2H,d,J＝8.4Hz),5.96(1H,d,J＝5.4Hz),5.19(1H,t,J＝5.4Hz),5.10(1H,d,J＝5.4Hz),4.56-4.64(2H,m),4.53(1H,s),3.97(1H,d,J＝12.0Hz),3.81(1H,dd,J＝12.0,2.0Hz),3.77(3H,s),1.64(3H,s),1.37(3H,s)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ162.2,158.8,151.3,146.9,142.2,132.0,130.2,128.8,114.1,113.9,93.9,86.3,83.3,81.5,63.1,55.2,32.5,27.5,25.1；ESI-HRMS：C21H25N4O5S计算值：445.1540，实验值：m/z 445.1543[M+H]+。
6-(4-((4-甲氧基苯甲氧基)苯甲硫基)嘌呤-2′,3′-O-亚异丙基-核糖苷(24b)
Figure BDA0002145814250000641
在0℃下搅拌化合物23(61.8mg，0.19mmol)及硫乙酸S-[4-(4-甲氧基苯甲氧基)苯甲酯](63mg，0.21mmol)于MeOH(4mL)及THF(1mL)中的溶液，同时一次性添加K2CO3(34.6mg，0.25mmol)。将混合物在0℃下搅拌2小时，用EtOAc稀释，且用水及盐水洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，藉由在减压下旋转蒸发浓缩，且藉由管柱层析(硅胶，EtOAc/CH2Cl2，梯度0:1至2:3)纯化，得到化合物24a(85mg，81％产率)。C28H30N4O6S；白色泡沫；TLC(EtOAc/己烷(1:1))Rf＝0.24；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.72(1H,s),8.06(1H,s),7.38(2H,d,J＝8.7Hz),7.34(2H,d,J＝8.7Hz),6.91(4H,d,J＝8.7,2.0Hz),5.94(1H,d,J＝4.6Hz),5.23-5.19(1H,m),5.13(1H,dd,J＝5.9,1.4Hz),4.97(2H,s),4.65-4.58(2H,m),4.55(1H,d,J＝1.4Hz),3.98(1H,dd,J＝12.5,1.8Hz),3.83(1H,d,J＝1.8Hz),3.81(3H,s),1.66(3H,s),1.39(3H,s)；13CNMR(CDCl3,100MHz)δ162.4,159.3,158.1,146.9,142.2,132.4,130.2,129.09,129.06,128.8,114.8,113.9,93.9,86.1,83.1,81.5,69.7,63.2,55.2,32.4,27.5,25.1；ESI-HRMS：C28H31N4O6S计算值：551.1959，实验值：m/z 551.2983[M+H]+。
2′,3′-O-亚异丙基-6-(4-甲氧基苯甲硫基)嘌呤-5′-(O-甲基甘胺酰基)羰基-核糖苷(25a)
Figure BDA0002145814250000651
将化合物24a(88mg，0.2mmol)及CDI(97mg，0.6mmol)于无水THF(3mL)中的混合物在室温下在氩气下搅拌3小时。添加另一批CDI(50mg，0.3mmol)，且将混合物搅拌1小时。在反应完成(藉由TLC监测)之后，添加甘胺酸甲酯盐酸盐(175mg，1.4mmol)、DMAP(1.2mg，0.01mmol)及TEA(194μL，1.4mmol)。将混合物再搅拌20小时，且随后藉由在减压下旋转蒸发浓缩。将残余物用EtOAc稀释，依次用饱和NH4Cl(aq)、水及盐水洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，藉由旋转蒸发浓缩，且藉由管柱层析(硅胶，EtOAc/CH2Cl2，梯度0:1至1:1)纯化，得到化合物25a(96mg，85％产率)。C25H29N5O8S；白色泡沫；TLC(EtOAc/DCM(1:9))Rf＝0.07；1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.75(1H,s),8.23(1H,s),7.36(2H,d,J＝8.7Hz),6.82(2H,d,J＝8.7Hz),6.18(1H,d,J＝2.4Hz),5.81(1H,t,J＝5.1Hz),5.43(1H,dd,J＝6.0,2.4Hz),5.05(1H,dd,J＝6.0,4.2Hz),4.59(2H,s),4.49(1H,m),4.35(1H,dd,J＝11.8,4.2Hz),4.26(1H,dd,J＝11.8,5.4Hz),3.89(2H,m),3.76(3H,s),3.69(3H,s),1.61(3H,s),1.38(3H,s)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ170.2,161.0,158.8,155.7,151.9,147.6,141.9,131.0,130.2,128.9,114.5,113.8,90.9,85.1,84.1,81.4,64.6,55.1,52.2,42.5,32.4,27.0,25.2；ESI-HRMS，C25H29N5O8S计算值：560.1810，实验值：m/z 560.1817[M+H]+。
6-(4-甲氧基苯甲硫基)嘌呤-5′-(O-甲基甘胺酰基)羰基-核糖苷(25a)
Figure BDA0002145814250000661
在室温下搅拌化合物25a(10mg，0.01mmol)于MeOH(0.8mL)、THF(0.1mL)及水(0.1mL)中的溶液，同时缓慢添加甲酸(2mL)。在添加完成之后，将反应物加热至40℃且再搅拌24小时。藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物。将残余物用MeOH(2mL)及H2O(1mL)稀释，在室温下搅拌，同时添加K2CO3(28mg，0.2mmol)。将混合物搅拌2小时，且随后用饱和NH4Cl(1mL)淬灭。藉由在减压下旋转蒸发浓缩混合物，且藉由逆相管柱层析(RP-18硅胶，MeOH/水，梯度0:1至9:1)纯化，得到化合物I-f1(3.5mg，39％)。C21H23N5O8S；TLC(MeOH/AcOH/EtOAc(1:1:8))Rf＝0.50；1H NMR(DMSO-d6,600MHz)δ8.80(1H,s),8.67(1H,s),7.44(1H,br s),7.38(2H,d,J＝8.7Hz),6.87(2H,d,J＝8.7Hz),6.02(1H,d,J＝5.6Hz),4.69(1H,t,J＝5.6Hz),4.57-4.65(2H,m),4.25(1H,dd,J＝11.8,2.6Hz),4.19(1H,d,J＝4.1Hz),4.09-4.17(2H,m),3.72(3H,s),3.59(2H,d,J＝5.1Hz)；13C NMR(DMSO-d6,150MHz)δ159.4,158.5,156.2,151.7,149.5,148.5,143.2,130.8,130.2,129.4,113.9,87.3,82.7,73.1,70.5,64.2,55.1,42.7,31.3；ESI-HRMS：C21H24N5O8S计算值：506.1340，实验值：m/z 506.1345[M+H]+。
间歇性冷应激模型
自台湾台北的实验室动物中心(National Laboratory Animal Center)(Taipei,Taiwan)购得8-12周龄的雌性C57BL/6JNarl小鼠。Ueda的团队开发了肌肉纤维疼痛模型，在所述模型中，小鼠用间歇性冷应激处理2天(Nishiyori,M.；Ueda,H.Prolonged gabapentinanalgesia in an experimental mouse model of fibromyalgia.Mol.Pain 2008,4,52)。经间歇性冷应激处理的小鼠产生持久的(>2周)机械及热痛觉过敏。在间歇性冷应激5天后，在此等小鼠中测试经由i.p.(在0.5％HPβCD中)或p.o.(在1％HPβCD中)途径投与的化合物I-a1(JMF3737)及经由i.p.(在0.5％HPβCD中)投与的化合物I-d1(JMF4413)的止痛效果。藉由测试小鼠后足对0.2-mN von Frey细丝刺激的回缩反应(withdraw response)来分析机械性痛觉过敏。实验结果显示于图9至图12中。
图9揭示，T1-11在自经由腹膜内注射(i.p.)0.03mg/kg及经由经口管饲(p.o.)8mg/kg开始的有效剂量下显示出剂量依赖性止痛效果。相比之下，衍生自T1-11及甘胺酸的共轭化合物I-a1(JMF3737)在自1mg/kg(i.p.)及1mg/kg(p.o.)开始的有效剂量下显示出优异的剂量依赖性止痛效果。藉由口服T1-11及甘胺酸进行组合治疗不展现协同效应。
图10显示代表性全细胞膜片钳记录(whole-cell patch clamp recording)，其揭示化合物I-a1(JMF3737)的止痛作用机制；所述机制与T1-11作用于NK1R信号传导相同。在肌肉伤害感受器中，JMF3737诱导外向电流(IJMF3737)，在全细胞膜片钳记录中其可由肌肉伤害感受器上的NK1R拮抗剂(RP67580)可逆地抑制(自40pA降至15pA)。由JMF3737诱导的外向电流(IJMF3737)可引起伤害感受器超极化，从而抵消肌肉伤害感受器中的酸诱导的去极化，从而抑制与组织酸中毒有关的疼痛。
图11(a)及图11(b)揭示，化合物I-a1(JMF3737)的重复治疗不会产生耐受性，而是能获得治疗效果。在肌肉纤维疼痛模型中，小鼠接受1mg/kg JMF3737的经口处理，一天一次，自藉由间歇性冷应激诱导疼痛之后第5天起连续4天。(a)自第8天起，JMF3737的重复处理引起对von Frey细丝刺激的疼痛敏感度降低(媒剂，n＝2；JMF3737，n＝4)。(b)JMF3737的重复处理不引起耐受性。自第5天至第8天，JMF3737显示急性止痛效果(n＝4)。
图12(a)揭示，I-d1的共轭化合物(JMF4413)经由i.p.途径，在64mg/kg的剂量下显示良好的止痛效果(n＝2)。图12(b)揭示，Ic-2的共轭化合物(JMF3795)经由i.p.途径，自14μg/kg(160pmol)开始显示良好的止痛效果(n＝3)。
因此，共轭化合物显示(1)优于经由经口途径的T1-11的止痛效果(例如JMF3737)；(2)优于T1-11的溶解度(高达64mg/kg)(例如JMF3737、JMF3795、JMF4413)；(3)比T1-11宽的安全性范围(高达64mg/kg)(例如JMF3737、JMF4413)。
本发明的例示性实施例的前述描述仅出于说明及描述的目的呈现，且不意欲为穷尽性的或将本发明限于所揭示的精确形式。鉴于上述教示，多个修改及变化为可能的。
选择且描述这些实施例及实例以便解释本发明的原理及其实际应用，从而使其他熟习此项技术者能够利用本发明及各种实施例以及如适合于所涵盖的特定用途的各种修改。在不偏离本发明的精神及范畴的情况下，本发明所属领域中的技术人员将清楚替代实施例。

Claims (27)

1.一种式(I)化合物，
Figure FDA0002145814240000011
其中
n为0、1、2或3；
X为NH、O或S；
Y为O、NH或S；
R1为OH、NH2、NO2、卤素、烷基、卤烷基、羟烷基、未经取代或经取代的烷氧基、烷氧基烷基、烯基或炔基；
R2及R3各自独立地为OH、NH2、NO2、卤烷基、羟烷基或烷胺基；且
R4为衍生自胺基酸或肽的部分，且R4经由其N端基团或侧链胺基与结构中的C(＝O)连接，其中所述胺基酸或所述肽的C端视情况经修饰；
其互变异构体或立体异构体；及前述者的医药学上可接受的盐。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中R1、R2及R3各自独立地为OH。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中n为1。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中X为NH且Y为O。
5.根据权利要求1所述的化合物，其中X为NH且Y为NH。
6.根据权利要求1所述的化合物，其中X为NH且Y为S。
7.根据权利要求1所述的化合物，其中X为S且Y为NH。
8.根据权利要求1所述的化合物，其中R4为衍生自具有酸性侧链的胺基酸、具有碱性侧链的胺基酸、具有极性侧链的胺基酸、具有非极性侧链的胺基酸或肽。
9.根据权利要求1所述的化合物，其中R4为衍生自甘胺酸、丙胺酸、半胱胺酸、缬胺酸、白胺酸、异白胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、麸酰胺酸、天冬酰胺、苏胺酸、精胺酸、离胺酸、脯胺酸或视情况经取代的具有少于20个胺基酸的肽。
10.根据权利要求1所述的化合物，其中所述胺基酸为甘胺酸、缬胺酸、半胱胺酸、苯丙胺酸或麸酰胺酸。
11.根据权利要求1所述的化合物，其中所述肽为RPKPQQFFGLM-CONH2且所述肽经由K的侧链胺基与结构中的C(＝O)连接。
12.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有式(IA)：
Figure FDA0002145814240000021
其中
R为常见α-胺基酸中所存在的取代基；且
Z+为H+、Li+、Na+、K+、Rb+、Cs+、NH4 +或胺鎓离子；其中
胺鎓离子为RARBRCNH+，包括非环及环胺鎓离子；且RA、RB及RC独立地为H、C1-C4烷基或苯甲基；
其互变异构体或立体异构体；及前述者的医药学上可接受的盐。
13.根据权利要求1所述的化合物，其选自由以下组成的群：
Figure FDA0002145814240000031
14.根据权利要求1所述的化合物，其选自由以下组成的群：
Figure FDA0002145814240000032
Figure FDA0002145814240000041
15.根据权利要求1所述的化合物，其选自由以下组成的群：
Figure FDA0002145814240000042
16.一种用于制备式(I)化合物的方法，其中X为NH且Y为O，所述方法包含：
(a)使N6-(4-羟基苯甲基)腺苷(2)与2,2-二甲氧基丙烷在丙酮中在酸存在下反应，得到式(3)化合物：
Figure FDA0002145814240000051
其中
所述酸为对甲苯磺酸或樟脑磺酸；
(b)使化合物(3)在碱存在下与一试剂反应，得到式(4)化合物：
Figure FDA0002145814240000052
其中
PG为4-甲氧基苯甲基或苯甲酰基；所述试剂为氯化4-甲氧基苯甲基或苯甲酰氯；且所述碱为碳酸钾或三乙胺；
(c)使化合物(4)与1,1′-羰基二咪唑(CDI)在碱存在下反应，得到式(5)化合物：
Figure FDA0002145814240000053
其中
所述碱为4-二甲胺基吡啶(DMAP)；
(d)使化合物(5)与胺基酸或肽的衍生物反应，得到式(6)化合物：
其中
[A′]-NH-为衍生自所述胺基酸或肽的衍生物；以及
(e)移除所有保护基，得到式(IB)化合物：
Figure FDA0002145814240000062
其中
[A]-NH-为所述胺基酸或肽的衍生物中的所述胺基酸或所述肽。
17.一种用于制备式(I)化合物的方法，其中X及Y独立地为NH，所述方法包含：
(a)使化合物(4a)与二苯基磷酰基迭氮化物(diphenyl phosphoryl azide，DPPA)及迭氮化钠在碱存在下反应，得到式(18)化合物：
Figure FDA0002145814240000071
其中
所述碱为1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(DBU)；
(b)藉由在催化剂存在下氢解使化合物(18)还原，随后在促进剂存在下与甘胺酸甲酯盐酸盐偶合，得到式(19)化合物：
Figure FDA0002145814240000072
其中
所述催化剂为林德拉催化剂(Lindlar catalyst)且所述促进剂为1,1′-羰基二咪唑；
(c)移除所有保护基及衍生自所述甘胺酸甲酯盐酸盐的酯基，得到式(I-d1)化合物：
Figure FDA0002145814240000073
18.一种用于制备式(I)化合物的方法，其中X为NH且Y为S，所述方法包含：
(a)使化合物(4a)与甲磺酰氯(MsCl)在碱存在下反应，随后与硫乙酸钾反应，得到式(21)化合物：
其中
所述碱为三乙胺及4-二甲胺基吡啶；
(b)用碱自化合物(21)移除乙酰基，随后在促进剂存在下与2,2,2-三氯乙基甘胺酸偶合，得到式(22)化合物：
Figure FDA0002145814240000082
其中
所述碱为氢氧化钾且所述促进剂为1,1′-羰基二咪唑；
(c)移除所有保护基及衍生自2,2,2-三氯乙基甘胺酸的酯基，得到式(I-e1)化合物：
Figure FDA0002145814240000083
19.一种式(II)化合物，
Figure FDA0002145814240000091
其中
k为1、2或3；
X及Y各自独立地为NH、O或S；
R1为OH、NH2、NO2、卤素、烷基、卤烷基、羟烷基、未经取代或经取代的烷氧基、烷氧基烷基、烯基或炔基；
R2及R3各自独立地为OH、NH2、NO2、卤烷基、羟烷基或烷胺基；且
R4为衍生自胺基酸或肽的部分，且R4经由其N端基团或侧链胺基与结构中的C(＝O)连接，其中所述胺基酸或所述肽的C端视情况经修饰；
环A为经取代或未经取代的芳族杂环，包含5员或6员杂环及稠合杂环；所述环中的杂原子为一或多个氮、氧及/或硫杂原子；且取代基为选自由氟、氯、溴、碘、羟基、硝基、烷基、三氟甲基及其组合组成的群；
其互变异构体或立体异构体；及前述者的医药学上可接受的盐。
20.根据权利要求19所述的化合物，其选自由以下组成的群：
21.一种组合物，其包含：
(a)治疗有效量的根据权利要求1至15、19及20中任一项所述的化合物、其互变异构体或立体异构体，或前述者之医药学上可接受之盐；及
(b)医药学上可接受之载剂、赋形剂或媒剂。
22.一种根据权利要求1至15、19及20中任一项所述的化合物、其互变异构体或立体异构体或前述者之医药学上可接受之盐的用途，其用于制造用于治疗有需要之个体之疼痛的药剂。
23.根据权利要求22所述的用途，其中所述疼痛为与组织酸中毒、神经损伤或这两者相关。
24.根据权利要求22所述的用途，其中所述疼痛为功能不良性疼痛。
25.根据权利要求24所述的用途，其中所述功能不良性疼痛为选自由以下组成之群：肌肉纤维疼痛、膀胱疼痛症候群、由大肠急躁症引起之疼痛及与颞下颌病症有关之疼痛。
26.根据权利要求22所述的用途，其中所述疼痛为选自由以下组成之群：发炎性疼痛、癌症相关之疼痛、胸痛、背痛、颈痛、肩痛、偏头痛、头痛、肌筋膜疼痛、关节痛、肌肉疼痛症候群、神经痛、周边神经痛、交感神经痛、手术后疼痛、创伤后疼痛及多发性硬化症疼痛。
27.根据权利要求22所述的用途，其中所述疼痛为慢性疼痛。
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