CN110742878A - 一种亚腈胺在制备治疗脂肪肝药物中的应用 - Google Patents

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傅正伟
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Abstract

本发明公开了一种亚腈胺在制备治疗脂肪肝药物中的应用，与高脂饮食诱导的NAFLD小鼠相比，亚精胺干预后，小鼠的肝脏组织切片显示，肝脏脂肪性变明显减轻；肝脏及血清中甘油三酯、胆固醇、游离脂肪酸水平显著降低。

Description

一种亚腈胺在制备治疗脂肪肝药物中的应用
(一)技术领域
本发明涉及一种多胺的应用，主要涉及亚精胺在制备和开发治疗脂肪肝相关疾病药物中的应用。
(二)背景技术
非酒精性脂肪肝(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是全球性常见的慢性肝病，近些年来，随着人们的生活水平的不断提高，油炸、高热、高脂等不健康的饮食和不良的生活方式导致脂肪肝的患病率急剧上升，严重威胁到人类的健康。脂肪肝已成为全球普遍关注的医学问题和社会问题。关于NAFLD发病机制，第一为各种原因引起的脂肪在肝脏中的积累和变性，第二是氧化应激和炎性细胞因子的释放等炎症反应的参与，导致肝脏坏死、纤维化甚至肝硬化。研究显示，脂肪肝患者常常伴随着肥胖、脂代谢紊乱和胰岛素抵抗等代谢紊乱特征。
非酒精性脂肪肝是一种与肥胖、糖尿病、动脉粥样硬化和代谢综合症相关的代谢应激性的肝脏损伤，特征表现为弥漫性肝细胞大泡性脂肪变性，包括肝炎、肝纤维化、肝硬化甚至肝癌，严重危害人类健康。脂肪肝的主要病理特征为甘油三酯的积累导致的脂肪变性。研究表明，脂肪肝发病过程中约有1/3的TG含量来源于脂质的从头合成。肝脏可通过调节脂肪酸的摄取、合成，β氧化及脂蛋白的合成调节脂质代谢。近年来，随着人们生活水平的提高和生活方式的改变，胰岛素抵抗和糖尿病发病率逐年提高，环境因素例如高脂饮食对人们肠道和肝脏脂代谢相关疾病引起了全球范围内的广泛关注。因此，寻取有效的治疗方法，对延缓非酒精性脂肪肝及其相关疾病有着重要的意义。膳食干预调节是预防和控制脂肪肝进展的重要措施之一。
近年来，亚精胺的研究备受关注，亚精胺是一类广泛存在与自然界的多胺类物质，在动物体内具有多种重要的生物学活性，天然存在于小麦胚芽、纳豆、黄豆、蘑菇、豌豆、腰果以及花椰菜等中。2018年1月《科学》杂志发表重磅论文，详细阐述了亚精胺与健康和疾病的关系，亚精胺具有延缓衰老、延长寿命、心血管保护、防癌与抗癌、神经调节与神经保护、改善代谢性疾病等多种作用。
因此，本发明以C57BL6J雄性小鼠为实验对象，通过60&高脂饮食诱导形成NAFLD模型，期间饮水方式给予亚精胺干预，探讨亚精胺干预能否改善小鼠脂肪肝，为亚精胺治疗NAFLD提供新的理论依据。
(三)发明内容
本发明目的是提供一种亚腈胺在制备治疗脂肪肝药物中的应用，本发明采用C57BL6J小鼠建立高脂饮食诱导的NAFLD动物模型，探讨亚精胺干预能否改善小鼠脂肪肝，为亚精胺治疗NAFLD提供新的理论依据。
本发明采用的技术方案是：
本发明提供一种亚腈胺在制备治疗脂肪肝药物中的应用，所述脂肪肝为非酒精性脂肪肝。
进一步，所述药物为降低甘油三酯(TC)、胆固醇(TG)或游离脂肪酸(NEFA)水平的药物。
与现有技术相比，本发明有益效果主要体现在：
1)与高脂饮食诱导的NAFLD小鼠相比，亚精胺干预后，小鼠的肝脏组织切片显示，肝脏脂肪性变明显减轻；
2)与高脂饮食诱导的NAFLD小鼠相比，亚精胺干预后，肝脏及血清中甘油三酯(TC)水平显著降低；
3)与高脂饮食诱导的NAFLD小鼠相比，亚精胺干预后，肝脏及血清中胆固醇(TG)水平显著降低；
4)与高脂饮食诱导的NAFLD小鼠相比，亚精胺干预后，肝脏及血清中游离脂肪酸(NEFA)水平显著降低。
(四)附图说明
图1、亚精胺干预对高脂诱导NAFLD模型小鼠组织学影响。
图2、亚精胺干预对高脂诱导NAFLD模型小鼠肝脏和血清TG含量的影响。
图3、亚精胺干预对高脂诱导NAFLD模型小鼠肝脏和血清TC含量的影响。
图4、亚精胺干预对高脂诱导NAFLD模型小鼠肝脏和血清NEFA含量的影响。
(五)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1动物处理
(1)7周龄雄性C57BL/6小鼠在标准实验条件下饲养：25±2℃，50±5％湿度，12h/12h光/暗循环。适应一周后，用于实验。
(2)选取步骤(1)体重相近的雄性成年(8周)小鼠，随机分成4组，分别标记为普通饲料组，普通饲料+亚精胺干预组，以及高脂饮食组、高脂饮食+亚精胺干预组；
(3)普通饲料组、普通饲料+亚精胺干预组饮食普通饲料，高脂饮食组、高脂饮食+亚精胺干预组饮食高脂饲料。普通饲料组、高脂饮食组分别饮用无菌蒸馏水。普通饲料+亚精胺干预组和高脂饮食+亚精胺干预组引用100mg/L的亚精胺水溶液。各组饮食饮水充足。亚精胺干预方式以饮水方式摄入，无菌蒸馏水配制质量浓度100mg/L的亚精胺水溶液。
(4)每周称取小鼠体重，16周后，眼球取血后处死，取出动物肝脏组织，并切取部分用于4％多聚甲醛浸泡于4℃保存，其余放置于-80℃中保存，用于后期研究分析。
实施例2动物肝脏组织病理学观察
将4％多聚甲醛固定好的肝脏组织样本，转移至体积浓度70％乙醇水溶液中，70％-80％乙醇脱水后石蜡包埋切片，HE染色，中性树脂封片，光学显微镜下观察肝脏脂肪变性情况并拍照记录。
如图1所示，普通饲料组小鼠，肝脏细胞形态正常，干细胞排列整齐，无明显的脂肪变性及炎症浸润，相比普通饲料组，高脂饮食组中有明显的肝细胞肿胀，内部有白色脂滴，伴有气球样变，亚精胺干预后，明显改善肝细胞损伤以及炎症反应，对肝组织具有一定的保护作用。由组织切片可得，亚精胺对普通饲料组小鼠肝脏无影响，但对非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠肝脏具有保护作用。
实施例3肝脏和血清中TC含量的检测
小鼠肝脏和血清中TC含量主要用试剂盒(Wako)进行检测，严格按照说明书操作。
(1)实施例1中小鼠处理后，眼眶取血，血清于离心机7000转离心7分钟后，取上清，即为血清样品，用于检测。分别取5μL TC检测标准品和5μL血清样品加入酶标板中，然后加入200μL TC检测液，37℃孵育10min，酶标仪OD600检测后，记录数据分析。
(2)实施例1中小鼠处理后，取60-80mg小鼠肝脏，加入3ml异丙醇，震荡后静置，上下颠倒混匀10min后，3000转离心10min，取上清，用于检测。分别取5μL试剂盒自带TC检测标准品和离心后的肝脏上清样品入酶标板中，然后加入200μL试剂盒自带TC检测液，37℃孵育10min，酶标仪OD600检测后，记录数据分析。
如图2中A和B所示，亚精胺干预组能显著抑制血清和肝脏中TC的含量水平(p＜0.01)。与普通饲料组相比，高脂饮食组中的TC水平显著升高并具有统计学意义(p＜0.01)，与高脂饮食组相比，亚精胺干预后TC水平显著降低，出现显著性差异(p＜0.01)。
实施例4肝脏和血清中TG含量的检测
小鼠肝脏和血清中TG含量主要用试剂盒(Wako)进行检测，严格按照说明书操作。
(1)实施例1中小鼠处理后，眼眶取血，血清于离心机7000转离心7分钟后，取上清，即为血清样品，用于检测。分别取5ul试剂盒自带TG检测标准品和5ul血清样品加入酶标板中，然后加入200μL试剂盒自带TG检测液，37℃孵育10min，酶标仪OD600检测后，记录数据分析。
(2)实施例1中小鼠处理后，取60-80mg小鼠肝脏，加入3ml异丙醇，震荡后静置，上下颠倒混匀10min后，3000转离心10min，取上清，用于检测。分别取5μL TG检测标准品和离心后的肝脏上清样品入酶标板中，然后加入200μL TG检测液，37℃孵育10min，酶标仪OD600检测后，记录数据分析。
如图3中A和B所示，在普通饲料组小鼠中，亚精胺干预无影响。与普通饲料组相比，高脂饮食组中肝脏和血清中的TG水平均显著升高(p＜0.01)，与高脂饮食组相比，亚精胺干预后，TG水平明显抑制，出现显著性差异(p＜0.01)。
实施例5肝脏和血清中NEFA含量的检测
小鼠肝脏和血清中NEFA含量主要用试剂盒(Wako)进行检测，严格按照说明书操作。
(1)实施例1中小鼠处理后，眼眶取血，血清于离心机7000转离心7分钟后，取上清，即为血清样品，用于检测。分别取5ml NEFA检测标准品和5μL血清样品加入酶标板中，然后加入100μL NEFA检测液A，37℃孵育10min后，100μL NEFA检测液B，37℃孵育20min后，放入酶标仪OD600检测后，记录数据分析。
(2)实施例1中小鼠处理后，取60-80mg小鼠肝脏，加入3ml异丙醇，震荡后静置，上下颠倒混匀10min后，3000转离心10min，取5μL肝脏离心后的上清，用于检测。然后加入100μL NEFA检测液A，37℃孵育10min后，100μL NEFA检测液B，37℃孵育20min后，放入酶标仪OD600检测后，记录数据分析。
如图4中A和B所示，亚精胺干预后，显著抑制血清和肝脏中NEFA的水平。与普通饲料组小鼠相比，高脂饮食组中的NEFA水平显著升高并具有统计学意义(p＜0.01)，与高脂饮食组相比，亚精胺干预后NEFA水平显著降低，出现显著性差异(p＜0.01)，且亚精胺在普通饲料小鼠处理下无明显影响。
综上所述，16周高脂饮食处理后，小鼠肝脏提示肝脏脂肪变性明显，并且伴有炎症浸润，且肝脏组织和血清中的TC、TG以及NEFA水平均明显高于普通饲料组，本发明通过亚精胺干预高脂饮食诱导的NAFLD小鼠，结果显示，与高脂饮食组相比，亚精胺干预后，肝脏脂肪性变明显减轻，且肝脏血清中TC、TG以及NEFA水平均明显抑制。证实了对于高脂饮食诱导的NAFLD小鼠，亚精胺具有保护肝功能，改善肝脏脂肪性变及肝脏脂质沉积，治疗NAFLD的作用。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明的技术内容做任何形式上的限制。凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均落入本发明的保护范围内。

Claims (5)

1.一种亚腈胺在制备治疗脂肪肝药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述药物为降低甘油三酯水平的药物。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述药物为降低胆固醇水平的药物。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述药物为降低游离脂肪酸水平的药物。
5.如权利要求1所述的应用，其特征在于脂肪肝为非酒精性脂肪肝。
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