CN110693913A - 用于诱导髓核细胞纤维化的物质在制备药物中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及医药领域，特别是涉及用于诱导髓核细胞纤维化的物质在制备药物中的用途。本发明提供用于诱导髓核细胞纤维化的物质在制备药物中的用途，所述药物用于治疗脊柱退行性疾病。本发明发明人利用髓核细胞系与L929细胞系共培养来揭示成纤维细胞对髓核细胞的作用，并利用GFP的绿色荧光大鼠使用WT自体成纤维治疗后观察髓核细胞在体内的变化，验证了成纤维细胞治疗可以诱导髓核细胞采用纤维化表型可能参与修复性纤维化和组织愈合过程，并进一步发现Smad信号通路在TGF‑β信号传导从细胞表面受体向细胞核的传导中起关键作用，从而提供了用于诱导髓核细胞纤维化的物质在制备药物中的新用途，具有良好的产业化前景。

Description

用于诱导髓核细胞纤维化的物质在制备药物中的用途
技术领域
本发明涉及医药领域，特别是涉及用于诱导髓核细胞纤维化的物质在制备药物中的用途。
背景技术
随着人类预期寿命的延长，生活节奏的加快，低头弯腰工作方式的增多，造成腰椎退行性疾病的发病率日益增多。而腰椎椎间盘的退变是引起腰背疼、下肢放射痛的主要原因。而椎间盘是人体体内最大的主要的无血管、无神经、无淋巴的结构。而椎间盘对于脊柱的正常功能至关重要，因为其在轴向压缩、弯曲和伸展中提供韧性和机械稳定性。椎间盘由数种特定的结缔组织组成：1.软骨终板的透明软骨，所述软骨终板覆盖位于椎间盘上方和下方的脊椎骨的表面，封装髓核和纤维环；2.中央胶状的髓核，尽管其含有软骨样细胞，但其不是透明软骨。已经鉴定出移行区，正如其名称所指，其位于纤维环和髓核之间。纤维环由同心胶原层组成，所述同心胶原层与椎体的骨边缘连接。在衰老和退变过程中，椎间盘发生显著的基质改变。
椎间盘退变是引起盘源性腰痛和腰椎椎管狭窄的重要因素之一。椎间盘的重要组成部分之一是髓核，而髓核的退变同样在椎间盘退变中起到至关重要的作用，其退变的机制是一个极为复杂的病理生理过程。目前研究认为，髓核的退变的主要特征之一就是髓核细胞外基质的合成分解代谢的失平衡而导致细胞外基质的减少。在退变的过程中，髓核细胞内诸多调控增殖以及凋亡的蛋白发生剧烈变化，从而导致髓核细胞的增殖活力受到抑制，并出现细胞的凋亡，同时髓核的II型胶原(Col-II)逐渐减少，胶原的交联同样发生减少；于此同时，蛋白聚糖(Aggrecan)分解也增加，由蛋白聚糖维持的椎间盘内渗透压降低，导致椎间盘基质脱水，进一步影响髓核组织的完整性，而I型胶原(Col-I)逐渐增多，成为髓核组织纤维化的重要因素之一。
发明内容
鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供用于诱导髓核细胞纤维化的物质在制备药物中的用途，用于解决现有技术中的问题。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明一方面提供用于诱导髓核细胞纤维化的物质在制备药物中的用途，所述药物用于治疗脊柱退行性疾病。
在本发明一些实施方式中，所述诱导髓核细胞纤维化的物质选自成纤维细胞。
在本发明一些实施方式中，所述成纤维细胞选自真皮成纤维细胞。
在本发明一些实施方式中，所述成纤维细胞选自自体成纤维细胞。
在本发明一些实施方式中，所述诱导髓核细胞纤维化的物质能够持续释放TGF-β。
在本发明一些实施方式中，所述诱导髓核细胞纤维化的物质能够上调髓核细胞中p-Smad2和/或p-Samd3的表达。
在本发明一些实施方式中，所述诱导髓核细胞纤维化的物质能够上调髓核细胞中I型胶原蛋白的表达。
在本发明一些实施方式中，所述脊柱退行性疾病选自椎间盘退变。
在本发明一些实施方式中，所述用于诱导髓核细胞纤维化的物质是唯一药效成分。
本发明另一方面提供一种纤维化椎间盘髓核细胞，通过自体真皮成纤维细胞诱导退变髓核细胞纤维化形成。
附图说明
图1为本发明自体真皮成纤维细胞诱导退变髓核细胞的示意图；
图2a为具有L929或293T细胞的髓核细胞的共培养系统中KRT19(红色)和FSP1(绿色)表达的免疫荧光分析示意图；
图2b为免疫荧光成像在每个实验条件下GFP(绿色)转基因大鼠的髓核组织中FSP1(红色)的表达示意图；
图2c为量化和绘制GFP-ve/FSP1+ve，GFP+ve/FSP1+ve和GFP+ve/FSP1-ve的比例示意图；
图2d为来自正常和后PELD椎间盘的髓核组织中KRT19(红色)和FSP1(绿色)表达的免疫荧光分析示意图。
图3a为与L929或293T细胞共培养的髓核细胞中I型胶原，聚集蛋白聚糖，TGF-β和p-Smad2表达的免疫荧光分析示意图；
图3b为在用或不用选择性TGFβ受体I激酶抑制剂LY364947处理L929条件培养基处理髓核细胞后，Smad2和Smad3的蛋白质表达和磷酸化状态示意图；
图3c为通过ELISA测量髓核细胞与L929或293T细胞共培养的条件培养基中TGF-β的浓度示意图；
图3d为在每种实验条件下椎间盘中TGF-β表达的免疫荧光分析示意图；
图3e为图3d中髓核中TGF-β的定量结果示意图。
图4为免疫荧光和定量分析TGF-β(a和b)、p-Smad2(c和d)、p-Smad3(e和f)、I型胶原(g和h)、II型胶原(i和j)的表达；k为通过ELISA测量来自正常患者和PELD后患者椎间盘的髓核组织中TGF-β的浓度示意图。
图5为本发明mRNA水平髓核表型示意图。
具体实施方式
为了使本发明的发明目的、技术方案和有益技术效果更加清晰，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容容易地了解本申请发明的其他优点及功效。
本发明第一方面提供用于诱导髓核细胞纤维化的物质在制备药物中的用途，所述药物用于治疗脊柱退行性疾病。本发明发明人发现，用于诱导髓核细胞纤维化的物质可以直接被用于治疗脊柱退行性疾病，所述用于诱导髓核细胞纤维化的物质可以使髓核细胞纤维化，从而防止髓核细胞的退变，从而可以有效控制脊柱退行性疾病。所述脊柱退行性疾病通常包括脊柱退行性疾病包括椎间盘突出症、椎管狭窄症、椎滑脱症等。
本发明中，所述诱导髓核细胞纤维化的物质通常可以被施用于椎间盘之间，例如，可以为注射剂，从而可以诱导纤维化椎间盘髓核细胞，可以在椎间盘之间形成纤维组织，以提供有效的支撑以维持椎间隙高度，并且保留一定的椎体的活动度，维持椎间稳定，防止椎间盘的进一步退行性病变。
本发明中，所述诱导髓核细胞纤维化的物质可以选自成纤维细胞。成纤维细胞也称为纤维母细胞，通常是疏松结缔组织的主要细胞成分，属于终末分化细胞，可以分泌大量Ⅰ型，III型胶原纤维。在本发明一具体实施例中，将成纤维细胞与髓核细胞共培养时，可以有效表达TGF-β，从而可以促进通过TGF-β的表达，有效诱导髓核细胞纤维化。
本发明中，所述诱导髓核细胞纤维化的物质通常能够持续释放TGF-β，从而可以避免反复给药。在本发明一具体实施例中，在髓核细胞和上述物质的共培养体系中，TGF-β具有明显的高表达。在本发明另一具体实施例中，通过上述的成纤维细胞，可以在目标位置持续表达TGF-β。可见，通过持续诱导髓核细胞纤维化，可以合理控制退变，达到退而有序的效果，从而可以达到阶梯治疗的效果。
本发明中，所述诱导髓核细胞纤维化的物质能够上调髓核细胞中p-Smad2和/或p-Samd3的表达。在本发明一具体实施例中，在髓核细胞和上述物质的共培养体系中，在TGF-β高表达的同时，其下游因子p-Smad2和/或p-Samd3同样出现高表达。可见，通过TGF-β的高表达，从而可以有效诱导髓核细胞中Smad2和/或Samd3的磷酸化，上调髓核细胞中p-Smad2和/或p-Samd3的表达，以诱导髓核细胞纤维化。
本发明中，所述诱导髓核细胞纤维化的物质能够上调髓核细胞中I型胶原蛋白的表达。在本发明一具体实施例中，在髓核细胞和上述物质的共培养体系中，发现聚集蛋白聚糖的表达降低，而I型胶原蛋白增加。在本发明另一具体实施例中，I型胶原蛋白在正常健康髓核中表达远低于II型胶原蛋白，来自接受PELD的样本中，I型胶原蛋白表达的患者的髓核显着升高。可见，通过TGF-β的高表达，可以诱导髓核细胞采用成纤维细胞表型。
本发明中，所述成纤维细胞可以选自真皮成纤维细胞，所述真皮成纤维细胞主要源自于皮肤的真皮层。具体来说，皮肤覆盖于体表，从外至内依次为表皮、真皮、皮下层，真皮主要由成纤维细胞及其产生的纤维、基质构成。所述成纤维细胞优选选自自体成纤维细胞，从而可以有效避免机体的排斥反应，以提供更佳的安全性。
本发明中，所述脊柱退行性疾病选自椎间盘退变，具体可以是急性或亚急性椎间盘退变等疾病。具体来说，这些疾病所对应的患者可以是临床上出现椎间盘高度降低，但是椎间隙未弯曲塌陷，无明显椎管狭窄，手术或非手术治疗后无神经症状的患者。
本发明中，所述用于诱导髓核细胞纤维化的物质可以是唯一药效成分。
本发明第二方面提供一种纤维化椎间盘髓核细胞，通过自体真皮成纤维细胞诱导退变髓核细胞纤维化形成。
所述诱导为自体真皮成纤维细胞自行释放TGF-β进行诱导。
本发明发明人利用髓核细胞系与L929细胞系共培养来揭示成纤维细胞对髓核细胞的作用，并利用GFP的绿色荧光大鼠使用WT自体成纤维治疗后观察髓核细胞在体内的变化，验证了成纤维细胞治疗可以诱导髓核细胞采用纤维化表型可能参与修复性纤维化和组织愈合过程，并进一步发现Smad信号通路在TGF-β信号传导从细胞表面受体向细胞核的传导中起关键作用，从而提供了用于诱导髓核细胞纤维化的物质在制备药物中的新用途，具有良好的产业化前景。
下面通过实施例对本申请的发明予以进一步说明，但并不因此而限制本申请的范围。
除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook等MOLECULAR CLONING：A LABORATORY MANUAL，Second edition，Cold Spring HarborLaboratory Press，1989and Third edition，2001；Ausubel等，CURRENT PROTOCOLS INMOLECULAR BIOLOGY，John Wiley&Sons，New York，1987and periodic updates；theseries METHODS IN ENZYMOLOGY，Academic Press，San Diego；Wolffe，CHROMATINSTRUCTURE AND FUNCTION，Third edition，Academic Press，San Diego，1998；METHODS INENZYMOLOGY，Vol.304，Chromatin(P.M.Wassarman and A.P.Wolffe，eds.)，AcademicPress，San Diego，1999；和METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY，Vol.119，ChromatinProtocols(P.B.Becker，ed.)Humana Press，Totowa，1999等。
实施例1
成纤维细胞诱导退变髓核细胞纤维化：
髓核细胞免疫荧光的方法：
髓核细胞(中科院细胞库提供的细胞)于共聚焦皿中培养，培养条件为：高糖DMEM培养基+10％胎牛血清，37℃5％CO2培养箱，贴壁后加入293T、L929细胞系(200,000髓核细胞培养贴壁后加入50,000L929细胞或293T细胞)，24小时，PBS清洗3遍，使用4％多聚甲醛固定20分钟后，加入0.1％Triton X-100室温孵育10分钟。PBS洗三遍后使用5％BSA室温封闭1小时，PBS洗三遍。加入一抗(Anti-KRT19，Anti-FSP1，购自CST，1:100)4℃孵育过夜。随后使用荧光二抗(荧光二抗(兔)，购自CST 1:500)室温孵育1小时。PBS洗三遍后，使用DAPI(Sigma-Aldrich，1:10000)复染切片以确定细胞核。使用激光共聚焦显微镜(ZEISS LSM700)观察记录切片图像，使用IPP6.0分析切片，具体结果如图2a所示。由图2a可知，与293T共培养的髓核细胞仅表达KRT19而不表达FSP1(图2a上)，当髓核细胞与L929成纤维细胞共培养时，发现KRT19和FSP1均在同一细胞中表达(图2a下)。
实施例2
1.动物实验
6周雄性GFP转基因大鼠(GFP+大鼠)(Shanghai Lab,Animal Research CenterCo.Ltd,Shanghai,China)在无菌条件，26-28℃以及50-65％湿度下养殖。腹腔注射戊巴比妥纳溶液(每100g体重使用5.0mg)进行麻醉后，尾部皮肤用碘化聚乙烯吡咯烷酮消毒，并从背部皮肤切口显示椎间盘。Co6/7的尾椎是对照组，Co7/8，Co8/9和Co9/10用尾部的背侧到腹侧刺穿20号无菌针。针垂直于皮肤以确保进入通过AF中心将髓核插入椎间盘水平。在Co8/9，Co9/10注射100,000和10,000野生型大鼠皮肤成纤维细胞，使用微注射器针头限制5mm的深度，以确保注射位置是椎间盘的中心。
2.组织切片免疫荧光
使用4％多聚甲醛固定髓核，大鼠尾椎组织48小时。髓核组织被切成5μm厚度的切片并附着于玻璃片上，使用中性树脂封片备用。
切片常规用二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水洗。组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液(PH9.0)的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。低火10min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈(防止抗体流走)，在圈内加入自发荧光淬灭剂5min，流水冲洗10min。在圈内滴加BSA孵育30min。轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加Anti-KRT19，Anti-FSP1(购自CST，1:100)，切片平放于湿盒内4℃孵育过夜。玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加cy3-山羊抗小鼠(GB21301，1：300)，488-山羊抗兔(GB25303，1：400)覆盖组织，避光室温孵育50min。玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。切片于荧光显微镜下观察并采集图像。(DAPI紫外激发波长330-380nm，发射波长420nm，发蓝光；FITC激发波长465-495nm，发射波长515-555nm，发绿光；CY3激发波长510-560，发射波长590nm，发红光)。
免疫荧光成像在每个实验条件下GFP(绿色)转基因大鼠的NP组织中FSP1(红色)的表达结果如图2b所示，量化和绘制GFPve/FSP1+ve，GFP+ve/FSP1+ve和GFP+ve/FSP1-ve的比例如图2c所示。其中，细胞核用DAPI(蓝色)复染，白色箭头显示GFP+ve天然和健康的NP细胞，红色箭头表示GFP+ve/FSP1+ve NP细胞表现出纤维化表型，黄色箭头表示GFP-ve/FSP1+ve同种异体DFb，sham为Co6/7组大鼠，puncture为Co7/8组大鼠，puncture+10^5DFB和分别为puncture+10^4DFBCo8/9大鼠和Co9/10组大鼠。由图2b和图2c可知，在对照椎间盘中仅观察到GFP+ve/DAPI的自体细胞，在仅穿刺的椎间盘中发现了少量GFP+ve/FSP1+ve/DAPI细胞，可以认为这是由于纤维化髓核细胞的退化，在同种异体(GFP-ve)成纤维细胞注射的椎间盘中，发现自体髓核细胞是GFP+ve/DAPI以及大量GFP+ve/FSP1+ve/DAPI细胞，被认为是髓核细胞分化为纤维化表型，还观察到大量GFP-ve/FSP1+ve/DAPI同种异体成纤维细胞。
实施例3
从20位因腰椎间盘突出接受PELD术的患者(男性：10位，女性：10位；年龄：49.4±5.28岁；年龄范围：38-63岁)。对20位患者手术前及手术3月后磁共振T2 STIR像的椎间隙信号分析及椎间隙高度测量。从5名患者(4名男性和1名女性)获得正常椎间盘组织；平均年龄：49.7±6.23岁；范围：37-59岁，因外伤致腰椎骨折并一侧终板骨折破坏至椎间盘需行椎间融合术的患者。纤维化椎间盘从10名患者(5名男性和5名女性)；平均年龄63.4±3.74岁；范围：52-74岁，经历椎间孔镜下髓核摘除术后1年以上，因症状不缓解或症状复发该节段行椎间融合的患者。对椎间盘进行采样，组织切片免疫荧光，具体方法参照实施例2，具体结果如图2d所示。由图2d可见，在正常NP组织中观察到KRT19表达，而发现来自PELD患者的NP组织表达KRT19和FSP1，进一步指示NP中的纤维化变化。该数据表明NP内的纤维化是常见的，并且可归因于PELD后的自然愈合过程。
实施例4
分别使用L929、293T与NP细胞系共培养的培养基上清(培养方法参照实施例1)，于-80℃冰箱保存备用。使用TGF-βELISA试剂盒(R&D)检测。(1)从平衡室温的袋中取出所要使用板条；(2)设置标准品孔和样品孔，标准品孔加入不同浓度的标准品50μL；(3)样本孔加待测样本10μL，再加稀释液40μL；(4)标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃恒温箱温育60分钟；(5)弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1分钟，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次；(6)每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15分钟；(7)每孔加入终止液50μL，15分钟内，在450nm波长处测定各孔的OD值；(8)根据标准曲线计算样本TGF-β含量。通过ELISA测量NP细胞与L929或293T细胞共培养的条件培养基中TGF-β的浓度如图3c所示。
实施例5
NP细胞贴壁后，分别加入成纤维细胞培养基和成纤维细胞培养基+LY364947(1μmol/ml)，培养30分钟后提取细胞蛋白。
(1)细胞消化：在10cm培养皿细胞长满时提取蛋白。PBS清洗细胞3次，充分弃去PBS后加入含有蛋白酶抑制剂的细胞裂解液(ProteoJET Mammalian Cell Lysis Reagent)300ul(10cm培养皿加入的量)提取总蛋白，充分吹吸重悬，随后置于振荡器内，4℃750rpm振荡30min，结束后4℃离心12000g 15min，收集上清至新的1.5ml离心管中，并做好标记。
在用或不用选择性TGF-β受体I激酶抑制剂LY364947处理L929条件培养基处理NP细胞后，Smad2和Smad3的蛋白质表达和磷酸化状态结果如图3b所示。
实施例6
髓核细胞与L929或293T的共培养方法和免疫荧光方法参照实施例1，所使用的一抗为(一抗为anti-TGF-β，购自CST，anti-phospho-Smad2，购自CST，anti-aggrecan，购自CST，anti-collagen I，购自CST)，与L929或293T细胞共培养的NP细胞中I型胶原，聚集蛋白聚糖，TGF-β和p-Smad2表达的免疫荧光分析结果如图3a所示。细胞核用DAPI(蓝色)复染。
实施例7
动物组织的免疫荧光分析方法参照实施例2，其中所使用的一抗为anti-TGF-β，购自CST，每种实验条件下IVD中TGF-β表达的免疫荧光分析如图3d所示。细胞核用DAPI(蓝色)复染。图3e所示为图3d中NP中TGF-β的定量。比例尺，50μm。误差条代表s.d.用Student's t检验评估统计学差异；*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。
实施例8
将来自正常IVD组织的NP与来自接受PELD的患者的IVD组织的NP进行比较(组织来源同实施例3)，对NP的组织切片染色TGFβ，磷酸化Smad-2，磷酸化Smad-3，I型胶原和II型胶原，然后通过免疫荧光评估，具体方法参照实施例2组织组织切片免疫荧光方法(一抗为anti-TGF-β，购自CST，anti-phospho-Smad2/anti-phospho-Smad3，购自CST，anti-collagen I/anti-collagen II，购自CST)，具体结果如图4所示。如图4a(左为NormalDisc，正常椎间盘组织；右为Post-PELD Disc，接受PELD的患者椎间盘组织)和图4b所示，PELD后NP中的TGFβ表达显着高于正常健康NP。与TGFβ表达升高一致，PELD后NP组织中p-Smad2(图4c和图4d，图4c中，左为Normal Disc，正常椎间盘组织；右为Post-PELD Disc，接受PELD的患者椎间盘组织)和p-Smad3(图4e和图4f，图4e中，左为Normal Disc，正常椎间盘组织；右为Post-PELD Disc，接受PELD的患者椎间盘组织)的水平也显着高于正常健康NP。已证实TGFβ/Smad信号通路在维持椎间隙稳定性中的作用。
就胶原蛋白表达而言，发现I型胶原蛋白(图4g，左为Normal Disc，正常椎间盘组织；右为Post-PELD Disc，接受PELD的患者椎间盘组织)在正常健康NP中表达远低于II型胶原蛋白(图4i，左为Normal Disc，正常椎间盘组织；右为Post-PELD Disc，接受PELD的患者椎间盘组织)，这与作为NP结构成分的II型胶原蛋白一致(图4j)。另一方面，来自接受PELD，I型胶原蛋白表达的患者的NP显着升高(图4g和图4h)，表明纤维化表型。最后，来自患者的血清样品进一步显示接受PELD的患者中TGFβ的浓度高于未接受PELD的患者(图4k)。
实施例9
在体外共培养鼠L929成纤维细胞和大鼠NP细胞并检查所得效果，人胚肾293T细胞用作阴性对照。共培养具体条件为：高糖DMEM培养基+10％胎牛血清37℃5％CO2培养箱200,000髓核细胞培养贴壁后加入50,000L929细胞或293T细胞。共培养时，两种细胞群的细胞活力均未受影响。为了诱导成纤维细胞进入炎症状态，用1μg/ml LPS刺激共培养物24小时。在实验结束时，从细胞中提取RNA，并使用针对大鼠FSP1、KRT19、聚集蛋白聚糖和I型和II型胶原的特异性引物进行qPCR基因分析，所使用的试剂盒为TAKARA，大连，中国，具体引物信息如表1所示：
表1
Figure BDA0002275534090000091
Figure BDA0002275534090000101
分析结果如图5a～图5e所示，共培养物没有LPS刺激的NP和L929细胞表现出FSP1和I型胶原基因表达的显着增加，而NP标记物KRT19，聚集蛋白聚糖和II型胶原的表达减少。在LPS刺激下，所有表达均下降，这与先前的发现一致。
综上所述，本发明有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
序列表
<110> 上海交通大学医学院附属第九人民医院
<120> 用于诱导髓核细胞纤维化的物质在制备药物中的用途
<150> 2019109938034
<151> 2019-10-18
<160> 12
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
agcacttcct ctctcttggt 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
gtccctgttg ctgtccaagt 20
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ccatgtcttc ctatgggggc 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
gaggcgatcg ttcaggttct 20
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
caagtccctg acagacaccc 20
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
gtccacccct cctcacattg 20
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
ggatcgaccc taaccaaggc 20
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
gatcggaacc ttcgcttcca 20
<210> 9
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
ggccaggatg cccgaaaatt a 21
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
ggctgcaaag tttcctccac 20
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
agtgccagcc tcgtctcata 20
<210> 12
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
gggtttcccg ttgatgacca 20

Claims (10)

1.用于诱导髓核细胞纤维化的物质在制备药物中的用途，所述药物用于治疗脊柱退行性疾病。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述诱导髓核细胞纤维化的物质选自成纤维细胞。
3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述成纤维细胞选自真皮成纤维细胞。
4.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述成纤维细胞选自自体成纤维细胞。
5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述诱导髓核细胞纤维化的物质能够持续释放TGF-β。
6.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述诱导髓核细胞纤维化的物质能够上调髓核细胞中p-Smad2和/或p-Samd3的表达。
7.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述诱导髓核细胞纤维化的物质能够上调髓核细胞中I型胶原蛋白的表达。
8.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述脊柱退行性疾病选自椎间盘退变。
9.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述用于诱导髓核细胞纤维化的物质是唯一药效成分。
10.一种纤维化椎间盘髓核细胞，通过自体真皮成纤维细胞诱导退变髓核细胞纤维化形成。
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