CN110613721B - 柯里拉京在制备抗睡眠剥夺损伤药物中的新用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及柯里拉京(Corilagin)在制备睡眠剥夺药物中的新用途。通过用小平台水环境法建立小鼠睡眠模型，进行Morris迷宫/跳台实验考察学习记忆能力、进一步检测海马组织氧化还原酶及胆碱能指标。结果发现，给予柯里拉京对睡眠剥夺小鼠行为学失调有明显改善、同时缓解海马组织的氧化应激损伤、强化胆碱能体系。提示柯里拉京对睡眠剥夺小鼠行为学有明显的改善作用，在应对高强度连续作业中有一定的应用前景。

Description

柯里拉京在制备抗睡眠剥夺损伤药物中的新用途

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及柯里拉京（Corilagin）在抗睡眠剥夺损伤中的新用途。

背景技术

睡眠是个体生存发育所必需的一项重要生理活动，其对机体的体温调节、能量平衡、免疫机能等起到关键作用。目前WHO估计全球已有超过3亿的患者存在睡眠障碍，与社会应激和神经精神疾病直接相关的睡眠障碍危害的人群可能高达30％以上。据报道，几乎一半的失眠症患者伴有各种精神疾病，且因睡眠障碍引起的疾病达到各类疾病总数的80％以上。睡眠障碍成为日益突出的医疗及公共卫生问题，此外，突发的自然灾害及战争条件下引起的被动睡眠剥夺，也成为造成非战斗减员的重要因素之一。

睡眠剥夺则是指由于各种原因，包括工作需求、周围的环境及其他原因无法满足正常睡眠的情况，常指在1天内睡眠时间＜4h，并且引起情绪、学习记忆以及免疫功能等一系列的改变，伴随疲劳的增加，可引起生理、心理甚至行为的变化以及空间学习能力下降。睡眠剥夺致相关功能障碍已经成为睡眠研究领域的热点。国内外已经明确了睡眠剥夺后导致脑组织的自由基产生增多、细胞抗氧化能力下降以及内质网应激等途径损伤是诱发神经损伤的机制之一。亦有研究表明，睡眠剥夺会引起脑内神经递质发生一系列紊乱，影响认知功能。海马是与学习记忆有关的重要脑区，多年来已经成为研究神经行为机制的重要脑组织部位。研究证实，脑内投射至海马结构的胆碱能系统与学习记忆有关，海马内丰富的ACh递质是促进学习记忆的重要递质AChE是ACh的水解酶，其活性直接影响海马ACh水平。既往对睡眠剥夺的药物应用的研究主要针对镇静催眠药、中枢兴奋药等西药。中草药一直以来对复杂性慢性病有多成分多靶点的治疗优势，目前在睡眠剥夺治疗研究方面对中药、民族药物的探讨较少。

诃子，号称“藏药之王”，为常用的传统补益中草药，具有多种药理活性。柯里拉京是从诃子中分离、纯化的一种多酚化合物，分子式为C₂₇H₂₂O₁₈，多酚类化学结构特点有利于清除自由基、改善神经功能。流行病学证据表明，多酚类化合物在心血管疾病的预防和治疗中发挥重要作用。柯里拉京作为诃子提取物的主要成分，是一种具有抗氧化、抗炎、抗高血压、神经保护等多种药用潜力的酚类化合物。

发明内容

基于以上临床与实验基础，我们首次提出假说，柯里拉京可能对睡眠剥夺有改善作用。可作为治疗睡眠剥夺的候选药物。基于以上假说，我们在小鼠睡眠剥夺模型基础上开展了动物实验，结果提示柯里拉京对睡眠剥夺后小鼠的学习记忆障碍有明确的改善作用。但是，目前还没有柯里拉京对睡眠剥夺的影响的报道。

综上所述，本发明要解决的技术问题是：克服现有技术的不足，探究柯里拉京在抗睡眠剥夺导致的神经行为功能障碍中的应用。

为实现上述目的，本发明通过研究柯里拉京对睡眠剥夺小鼠模型的行为学、氧化应激水平、神经生长因子的作用，进而确定柯里拉京在在抗睡眠剥夺药物中的用途。

所述柯里拉京（Corilagin），结构式如式（Ⅰ）所示：

本发明的有益效果是：研究显示，给予柯里拉京对睡眠剥夺小鼠在行为学方面均有明显改善、同时提高海马组织氧化还原酶及胆碱能水平。提示柯里拉京对睡眠剥夺小鼠行为学有明显的改善作用，其在应对高强度连续作业中有一定的应用前景。柯里拉京能有效减小睡眠剥夺对身体机能损伤的作用，并有利于改善持续作业过程中的人员的机体情况。

附图说明

图1为柯里拉京化学结构式；

图2为各组小鼠水迷宫活动轨迹图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步说明。

动物实验：

1材料与方法

1.1实验动物及分组

动物及分组

SPF级昆明种小鼠(由空军军医大学实验动物中心提供)，体重(18-20)g，随机分为对照组、模型组、柯里拉京组，每组12只。实验前，让小鼠熟悉适应环境1周。

1.2.睡眠剥夺模型制作及给药方法

1.2.1睡眠剥夺模型的建立

采用小平台水环境法建立小鼠模型。根据文献自制鼠箱，其中有一直径为6.0cm，高8.0cm的平台。在平周边注满水，水面距平台面约1.0cm，水温保持在20℃左右。鼠在平台上可自行饮食饮水。若其睡眠，则由于肌肉张力松弛而落入水中，小鼠只能重振精神爬上平台，这样反复多次达到睡眠剥夺的效果。在小鼠活动空间内给予12小时明暗交替，室内温度控制在18-22℃。

1.2.2药物来源与给药方法：柯里拉京，由成都昂赛思生物科技有限公司提供，从诃子的乙醇提取物中分离纯化而成，纯度达到98％以上。柯里拉京以20mg/kg灌胃给药，每日一次，连续7d，正常组和睡眠剥夺组以同样方式给予等量生理盐水，然后进入行为训练。

1.3学习记忆行为检测方法：

1.3.1利用小鼠的主动回避性，以Morris水迷宫作为小鼠空间学习记忆的检测模型。实验过程中水池及周围环境保持不变，以供小鼠空间定位之用。训练历时6d，每天同一时间开始，每只小鼠训练4次，每次60S，每次训练间隔30S。记录小鼠找到平台的时间即潜伏期，若小鼠在60s内未找到，以60s计，潜伏期越短，说明小鼠的空间学习记忆能力越强。观察并对数据进行记录。

1.3.2小鼠跳台规格为30cm×30cm×30cm，周壁为绝缘塑料板，底面铺设可以通电的铜栅，箱内有一高和直径均为10cm的跳台(绝缘)。训练时，以铃声作为刺激非条件刺激为足底电击。电流强度为0.7mA，工作电压为36伏。观察指标：以将小鼠放在跳台上到第一次跳下的时间为第一次触电潜伏期，5min内的触电次数及触电时间。跳台训练开始时，将小鼠放入箱内适应环境3min，铃响5s后，电击10s，间歇20s。小鼠受到电击后跳上绝缘跳台为被动回避反应：听到铃声而未受到电击即跳上跳台者为主动回避反应。如此训练。直到小鼠在绝缘跳台上停留时间超过5min。作为小鼠跳台回避反应达到巩固水平(学会标准)。以10次训练为一训练单元，中间休息15min，每日每鼠训练至学会(在绝缘跳台上停留时间超过5min)，共训练3d。测试时，将小鼠放在跳台上，立即通电，观察小鼠的行为反应并记录数据。

1.4柯里拉京对睡眠剥夺72h小鼠海马组织中SOD、GSH、MDA、Ach、Ach-E水平的影响

水迷宫测试结束后，将睡眠剥夺72h小鼠迅速断头取脑，于冰面上分离两侧海马，称重，按重量/体积比1∶9加入试剂盒指定的溶液液，制成约10%匀浆，3000g/min4℃离心10min，留上清液。酶标比色法检测海马超氧化物歧化酶（SOD）活力和还原型谷胱甘肽（GSH）的含量；采用比色法测定ACh含量和AChE活力。严格按照试剂盒说明书进行操作；按照试剂盒说明进行实验，计算并记录数据。

1.5统计学方法实验数据均以平均数（mean）±标志差（SD）表示，应用spss18.0统计软件进行统计分析，数据比较采用单因素方差分析。以p<0.05为差异有统计学意义。

实验结果与讨论

1.柯里拉京对睡眠剥夺小鼠迷宫活动轨迹及逃避潜伏期的影响

从小鼠水迷宫活动轨迹图（图2）可见，睡眠剥夺组，柯里拉京组的多数大鼠相对于正常对照组大鼠的游泳距离增加，范围扩大，但柯里拉京组的游泳距离和搜索范围要小于睡眠剥夺对照组。

与正常睡眠组比较，模型组小鼠睡眠剥夺逃避潜伏期均延长；与模型组比较，柯里拉京组小鼠睡眠剥夺后逃避潜伏期均缩短。如表1所示。

2.柯里拉京可改善睡眠剥夺小鼠空间探索能力

与正睡眠组比较，睡眠剥夺模型组小鼠穿越平台次数明显减少、游泳路程缩短(p<0.05)；与睡眠剥夺模型组比较，柯里拉京组小鼠穿越平台次数明显增多、游泳路程延长(p<0.05)。可见柯里拉京可改善睡眠剥夺小鼠空间探索能力。见表2。

3.柯里拉京可改善睡眠剥夺小鼠记忆能力

本研究结果表明,小鼠经过睡眠剥夺后,其记忆保持能力受影响,表现为跳台实验触电次数和触电时间增加。柯里拉京可有效的改善睡眠剥夺造成的记忆保持能力下降, 说明柯里拉京对其记忆保持能力损害有明显保护作用,使其触电次数和触电时间减少(p<0.05)。见表3。

4.柯里拉京可改善睡眠剥夺72h后小鼠海马氧化应激水平异常

睡眠剥夺对照组大鼠与正常对照组相比，海马组织中SOD和GSH-ST活力明显下降，MDA含量显著上升（p<0.05），提示睡眠剥夺导致海马组织代谢异常，产生大量自由基，脂质氧化反应增强。与睡眠剥夺对照组相比较，柯里拉京灌胃组大鼠SOD和GSH-ST活力均有所提高，MDA含量明显降低,具有统计学意义(p<0.05)。因此，柯里拉京对睡眠剥夺后小鼠的海马组织有抗氧化损伤的作用。具体数据见表4。

5.柯里拉京可改善睡眠剥夺72h后小鼠海马 ACh 含量及AChE 活力的异常

AChE是脑内与学习记忆相关的重要酶类之一，可分解突触间隙的神经递质乙酰胆碱ACh，使乙酰胆碱含量降低；AChE活性增加会导致脑内学习记忆活动障碍。本试验结果表明与正常睡眠组比较，模型组小鼠睡眠剥夺72h后海马组织ACh含量降低、AChE活力增高(p<0.05)。与模型组比较，柯里拉京组小鼠海马组织ACh含量增加、AChE活力降低(p<0.05)。可见，柯里拉京改善胆碱功能、促进学习记忆能力的作用。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书的保护范围为准。

Claims (3)

1.柯里拉京在制备抗睡眠剥夺损伤药物中的用途。

2.根据权利要求1所述的柯里拉京在制备抗睡眠剥夺损伤药物中的用途，其特征在于，所述药物作用机理表现为海马组织中SOD、GSH-ST活力的提高，及MDA含量的降低。

3.根据权利要求1所述的柯里拉京在制备抗睡眠剥夺损伤药物中的用途，其特征在于，所述药物作用机理表现为海马组织中ACh含量的增加和AChE活力的降低。

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