CN110585442A - 一种以透明质酸修饰氟化石墨烯为载体的金丝桃素纳米复合材料的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及医用材料领域，公开了一种以透明质酸修饰氟化石墨烯为载体的金丝桃素纳米复合材料的制备方法，本发明先通过氧化石墨烯分散液和氟化氢的水热反应合成氟化石墨烯，并对其进行提纯；然后通过PEI将透明质酸修饰在经过1‑乙基‑(3‑二甲氨基丙基)碳化二亚胺、氮一羟基琥珀酰亚胺活化过的氟化石墨烯上，得到透明质酸‑氟化石墨烯；最后通过透明质酸‑氟化石墨烯和金丝桃素、1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和4‑二甲氨基吡啶反应过夜得到目标产物。该方法所得纳米复合材料可实现靶向治疗，肿瘤热疗和化疗的协同效应，增加聚合物纳米材料的稳定性，可用于癌细胞治疗。

Description

一种以透明质酸修饰氟化石墨烯为载体的金丝桃素纳米复合 材料的制备方法
技术领域
本发明涉及医用材料领域，尤其涉及一种以透明质酸修饰氟化石墨烯为载体的金丝桃素纳米复合材料的制备方法。
背景技术
氟化石墨烯自从2010年由Geim课题组第一次成功制备后，就作为石墨烯的新型衍生物，被人们广泛关注，它与其类似，仍然具有良好的力学性能，同时其基础上引入了氟原子，从而获得了很多独特而优异的性能。它拥有着优秀的电子、光学和机械性能，同时还有降低界面能的作用，以及很好的热稳定性以及抗氧化性。这让氟化石墨烯主要的研究热点在光学、电子学和理论计算等领域。
氟化石墨烯不仅继承了石墨烯材料的优异性能，而且具有其他碳材料所不具备的显著优势(如：稳定的顺磁性，稳定的光致发光，氟在医学上特殊的功效)，具有作为新型肿瘤药物的载体的潜在价值。但其疏水性导致的生物相容性差，苛刻的制备条件以及繁琐的合成步骤等因素严重限制了氟化石墨烯在生物领域的应用。
一直以来，金丝桃素多被用于治疗皮肤创伤、病毒感染和抗抑郁等方面，但近几年来，金丝桃素在抗肿瘤靶向与治疗、光学诊断中的研究颇多。研究发现，金丝桃素不仅是一种天然的光敏剂，经光激活可产生单线态氧，可以用来治疗多种癌症，最新发现可用于治疗如膀胱癌、前列腺癌、垂体瘤、卵巢癌等。
透明质酸(HA)作为一种高效的肿瘤靶向递送载体引起了人们的广泛关注。HA的优越性主要体现在其具备良好的生物相容性、生物可降解性和特殊的CD44受体结合能力。
但是在现有技术中尚无将上述多种材料进行有效结合的报道，因此探究如何将氟化石墨烯和金丝桃素、透明质酸有效结合起来应用于生物领域具有重要意义。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种以透明质酸修饰氟化石墨烯为载体的金丝桃素纳米复合材料的制备方法，本发明首先通过氧化石墨烯分散液和氟化氢的水热反应合成氟化石墨烯，并对其进行提纯；然后通过PEI将透明质酸修饰在经过1-乙基-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺、氮-羟基琥珀酰亚胺活化过的氟化石墨烯上，得到透明质酸-氟化石墨烯；最后通过透明质酸-氟化石墨烯和金丝桃素、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和4-二甲氨基吡啶反应过夜得到目标产物。该方法所得纳米复合材料可实现靶向治疗，肿瘤热疗和化疗的协同效应，增加聚合物纳米材料的稳定性，可用于癌细胞治疗；同时该方法不会在后期的实验过程中对细胞产生显著影响，实验操作过程简单、无毒、无害、绿色环保。
本发明的具体技术方案为：一种以透明质酸修饰氟化石墨烯为载体的金丝桃素纳米复合材料的制备方法，包括以下步骤：
1)通过超声处理将40～60mL浓度为1-3mg/mL的氧化石墨烯分散液和0.5～0.75mL浓度为35-45wt％的氢氟酸混合1～2min，得到混合液，备用。
2)将步骤1)所得混合液转移到聚四氟乙烯内衬高压釜中，并在180～200℃下保持30～40h，而后待聚四氟乙烯内衬高压釜自然冷却至室温，备用。
在步骤2)中，采用氟化反应釜对氧化石墨烯进行改性，得到氟化石墨烯，自带荧光效果，光热效应显著增强。
3)使用微孔膜过滤步骤2)所得产物，经过反复洗涤，离心过滤使溶液最终呈中性，然后经冷冻干燥得到氟化石墨烯，备用。
4)取氟化石墨烯，加入水，在冰浴条件下超声振荡1～2h，氟化石墨片层剥落，获得棕黄色的分散液，离心去除沉淀物得到氟化石墨烯水溶液。
在步骤4)中，通过超声振荡等处理以得到均匀分散的氟化石墨烯。
5)将氟化石墨烯水溶液透析2～3d，得到纯化后的氟化石墨烯分散液，经冷冻干燥处理得到纯化的氟化石墨烯，备用。
在步骤5)中，采用透析操作来除去多余的水溶性物质。
6)称取100～150mg氟化石墨烯，并分散在80-120mL去离子水中，超声分散均匀，然后加入5～7g氢氧化钠、5～7g次氯酸钠，超声浴2～3h，使氟化石墨烯片层上的羟基转化为羧基；反应完全后，用稀盐酸中和并反复漂洗，离心处理，收集上层的黑色溶液，然后用水透析40-50h，除去未反应的水溶性物质。
在步骤6)中，将氟化石墨烯与氢氧化钠、次氯酸钠反应，使氟化石墨烯上的羟基转化为羧基，有利于接下来与叶酸上的氨基发生反应；使用稀盐酸洗涤是为了保证样品始终为中性；透析处理是为了得到浓度和纯度较高的溶液。
7)称取100-150mg氟化石墨烯分散在25-50ml DMSO中，加入50-75ml 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化搅拌反应3-5h，得到活化的氟化石墨烯溶液。
在步骤7)中，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐作为偶联剂，作用为活化氟化石墨烯上的羧基。
8)另称取175-200mg PEI溶解在75-125ml DMSO中，在搅拌下，将所得PEI溶液逐滴加入活化的氟化石墨烯溶液中，在室温条件下超声搅拌反应24-36h，透析除去未反应的杂质，冷冻干燥，得到氟化石墨烯-PEI。
9)称取0.5-0.6g透明质酸溶解在25-50ml水中，并加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺活化搅拌反应3-5h，得到活化的透明质酸溶液。
10)称取60-90mg氟化石墨烯-PEI溶解于15-45ml水中，在搅拌下，将氟化石墨烯-PEI溶液逐滴加入到活化的透明质酸溶液中，在室温条件下搅拌反应24-36h，然后用碳酸氢钠溶液透析处理，每3-5h换一次水，40-50h后完成透析，除去未反应的杂质。
在步骤10)中，氟化石墨烯在经过活化之后与PEI结合，透明质酸通过PEI连接于氟化石墨烯，增加其与受体的结合性；；使用碳酸氢钠作为透析液是为了保证溶液处于中性条件。
11)采用旋转蒸发法去除溶液中的水分，用丙酮反复洗涤，而后于40～50℃下真空干燥，得到透明质酸修饰的氟化石墨烯，备用。
在步骤11)中，采用丙酮反复洗涤是为了降低溶液zeta电位，使其接近合成环境。
12)取64.8～66.8mg透明质酸修饰的氟化石墨烯，将其分散于40-60mL水中，然后加入6.05～6.25mg金丝桃素，2.76～2.96mg 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和0.30～0.32mg 4-二甲氨基吡啶，搅拌反应过夜。
在步骤12)中，透明质酸-氟化石墨烯和金丝桃素的反应中加入了1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和4-二甲氨基吡啶，其中1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐作为多肽缩合剂和交联剂，可实现快速多肽缩合反应；4-二甲氨基吡啶作为一种新型高效催化剂，具有较高的催化能力，明显提高收率。
13)将步骤12)所得溶液使用超滤管过滤，再经冷冻干燥操作，得到成品。
作为优选，步骤4)中，振荡过程为：使用超声波粉碎机，在450-550W功率下超声振荡0.5-1.5h。
作为优选，步骤4)中，离心过程为：使用冷冻高速离心机，12000～13000r/min下离心15～20min。
作为优选，步骤6)中，离心过程为：使用冷冻高速离心机，在8000～10000r/min下离心15～20min。
作为优选，步骤5)中，透析所用透析袋的截留分子量为8000～14000。
作为优选，步骤10)中，所述碳酸氢钠溶液的pH＝7-9。
作为优选，步骤13)中，步骤12)所得溶液在使用前，置于3～5℃的环境中预冷。
作为优选，步骤13)中，超滤管过滤、冷冻干燥的具体条件为：超滤管的规格为90-110kDa，用水多次洗涤所得滤液，最后进行冷冻干燥处理。
与现有技术对比，本发明的有益效果是：
(1)本发明首先通过氧化石墨烯分散液和氟化氢的水热反应合成氟化石墨烯，并对其进行提纯；然后通过PEI将透明质酸修饰在经过1-乙基-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺、氮-羟基琥珀酰亚胺活化过的氟化石墨烯上，得到透明质酸-氟化石墨烯；最后通过透明质酸-氟化石墨烯和金丝桃素、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和4-二甲氨基吡啶反应过夜得到目标产物。该方法所得纳米复合材料可实现靶向治疗，肿瘤热疗和化疗的协同效应，增加聚合物纳米材料的稳定性，可用于癌细胞治疗；同时该方法不会在后期的实验过程中对细胞产生显著影响，实验操作过程简单、无毒、无害、绿色环保。
(2)在步骤2)中，通过氟化反应釜对氧化石墨烯进行改性处理得到氟化石墨烯，氟化石墨烯具有表面能低、疏水性强、带隙宽、稳定的顺磁性等特点，其自带荧光效果，光热效应显著增强。
(3)在步骤5)中，通过超声、离心、透析等处理对氟化石墨烯进行提纯，得到均匀分散的小尺寸氟化石墨烯。
(4)在步骤6)中，通过氟化石墨烯与氢氧化钠、次氯酸钠发生反应使氟化石墨烯上的羟基转化为羧基，保证其与透明质酸充分反应。
(5)在步骤10)中，通过PEI将透明质酸连接于氟化石墨烯表面，增加其与受体的结合性，使负载药物的聚合物微粒大量聚集于对象细胞表面，从而增大作用部位的药物浓度，减少对正常细胞的毒副作用。
(6)在步骤12)中，将制备的溶液置于3～5℃的环境中预冷，避免了对后续实验的影响，提高了实验的成功率。
(7)在步骤13)中，将金丝桃素与透明质酸修饰的氟化石墨烯反应后可得到一种纳米复合材料，其中金丝桃素作为一种光敏剂，具有光动活性，能够通过破坏组织和细胞中的细胞器，最终引起癌细胞的死亡，达到治疗癌症的目的。
(8)在发明中，通过制备聚合物纳米材料可实现高效的肿瘤热疗和化疗协同效应，增加药物的稳定性，实现主动靶向性，增加与受体的结合能力，从而大大提升对癌细胞的治疗效果。
(9)发明通过构建一种安全，无毒性，并且能够高效运输光敏剂的药物载体，能够提高药物的稳定性，便于贮存。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述。
实施例1
1)通过超声处理将40mL浓度为1mg/mL的氧化石墨烯分散液和0.5mL浓度为35w％的氢氟酸混合1min，得到混合液，备用；
2)将步骤1)得到的混合液转移到聚四氟乙烯内衬高压釜中，并在180℃下保持30h，而后待高压釜自然冷却至室温，备用；
3)使用微孔膜过滤步骤2)得到的产物，经过反复洗涤，离心过滤使溶液最终呈中性，然后经冷冻干燥得到氟化石墨烯，备用；
4)取氟化石墨烯，加入去离子水，在冰浴条件下超声振荡1h，氟化石墨片层剥落，获得棕黄色的分散液，离心去除沉淀物得到氟化石墨烯水溶液；
5)将氟化石墨烯水溶液于截留分子量为8000的透析袋中透析2d，得到纯化后的氟化石墨烯分散液，经冷冻干燥处理得到纯化的氟化石墨烯，备用；
6)称取100mg氟化石墨烯，并分散在80mL去离子水中，超声分散均匀，然后加入5g氢氧化钠、5g次氯酸钠，超声浴2h，使氟化石墨烯片层上的羟基转化为羧基；反应完全后，用稀盐酸中和并反复漂洗，离心处理，收集上层的黑色溶液，然后用去离子水透析40h，除去未反应的水溶性物质；
7)称取100mg氟化石墨烯分散在25ml DMSO中，加入50ml 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化搅拌反应3h；
8)另称取175mg PEI溶解在75ml DMSO中，在搅拌的情况下，将PEI溶液逐滴加入已活化的氟化石墨烯溶液中，在室温条件下超声搅拌反应24h，透析除去未反应的杂质，冷冻干燥；
9)称取0.5g透明质酸溶解在25ml蒸馏水中，并加入适量1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺活化搅拌反应3h；
10)称取60mg氟化石墨烯-PEI溶解于15ml蒸馏水中，在搅拌的情况下，将氟化石墨烯-PEI溶液逐滴加入到活化过的透明质酸溶液中，在室温条件下搅拌反应24h。然后使用pH＝7的碳酸氢钠溶液透析处理，每3h换一次水，40h后完成透析，除去未反应的杂质；
11)采用旋转蒸发法去除溶液中的水分，用丙酮反复洗涤，而后于40℃下真空干燥，得到透明质酸修饰的氟化石墨烯，备用；
12)取64.8mg透明质酸修饰的氟化石墨烯，将其分散于40mL去离子水中，然后加入6.05mg金丝桃素，2.76mg 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和0.304-二甲氨基吡啶，搅拌反应过夜；
13)将步骤12)得到的溶液使用超滤管过滤，再经冷冻干燥操作，得到成品。
对实施例1过程中所得的氟化石墨烯进行电镜扫描，可以明显观察到大片的单层氟化石墨烯片层，由此说明氟化石墨层与层之间的作用力很弱，仅仅通过简单插层-超声处理就可达到层与层之间的分离。在局部地方观察到少数片层之间有重叠和堆积，所以颜色较单层略深一些。仔细观察片层周围有一些非常细小的碎片，是由于氟化石墨烯片层在超声过程中受到破坏造成的。
氟化石墨烯是一种二维碳材料，碳原子是以sp2和部分sp3结构存在的，因此可理解为氟化石墨烯是石墨烯部分或者全部氟化的结果。我们对氟化石墨烯进行FTIR检测后观察到，1642cm-1处对应的峰为六元环中C＝C的振动峰，1212cm-1和1084cm-1处为氟化石墨烯中C-F键所对应的振动吸收峰。说明氧化石墨烯到氟化石墨烯的转变是成功的。
实施例2
1)通过超声处理将50mL浓度为2mg/mL的氧化石墨烯分散液和0.63mL浓度为40w％的氢氟酸混合1.5min，得到混合液，备用；
2)将步骤1)得到的混合液转移到聚四氟乙烯内衬高压釜中，并在190℃下保持35h，而后待高压釜自然冷却至室温，备用；
3)使用微孔膜过滤步骤2)得到的产物，经过反复洗涤，离心过滤使溶液最终呈中性，然后经冷冻干燥得到氟化石墨烯，备用；
4)取氟化石墨烯，加入去离子水，在冰浴条件下超声振荡1.5h，氟化石墨片层剥落，获得棕黄色的分散液，离心去除沉淀物得到氟化石墨烯水溶液；
5)将氟化石墨烯水溶液于截留分子量为11000的透析袋中透析2.5d，得到纯化后的氟化石墨烯分散液，经冷冻干燥处理得到纯化的氟化石墨烯，备用；
6)称取125mg氟化石墨烯，并分散在100mL去离子水中，超声分散均匀，然后加入6g氢氧化钠、6g次氯酸钠，超声浴2.5h，使氟化石墨烯片层上的羟基转化为羧基；反应完全后，用稀盐酸中和并反复漂洗，离心处理，收集上层的黑色溶液，然后用去离子水透析45h，除去未反应的水溶性物质；
7)称取125mg氟化石墨烯分散在38ml DMSO中，加入63ml 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化搅拌反应4h；
8)另称取189mg PEI溶解在100ml DMSO中，在搅拌的情况下，将PEI溶液逐滴加入已活化的氟化石墨烯溶液中，在室温条件下超声搅拌反应30h，透析除去未反应的杂质，冷冻干燥；
9)称取0.55g透明质酸溶解在38ml蒸馏水中，并加入适量1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺活化搅拌反应4h；
10)称取75mg氟化石墨烯-PEI溶解于30ml蒸馏水中，在搅拌的情况下，将氟化石墨烯-PEI溶液逐滴加入到活化过的透明质酸溶液中，在室温条件下搅拌反应30h。然后使用pH＝8的碳酸氢钠溶液透析处理，每4h换一次水，45h后完成透析，除去未反应的杂质；
11)采用旋转蒸发法去除溶液中的水分，用丙酮反复洗涤，而后于45℃下真空干燥，得到透明质酸修饰的氟化石墨烯，备用；
12)取65.8mg透明质酸修饰的氟化石墨烯，将其分散于50mL去离子水中，然后加入6.15mg金丝桃素，2.86mg 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和0.31mg 4-二甲氨基吡啶，搅拌反应过夜；
13)将步骤12)得到的溶液使用超滤管过滤，再经冷冻干燥操作，得到成品。
实施例3
1)通过超声处理将60mL浓度为3mg/mL的氧化石墨烯分散液和0.75mL浓度为45w％的氢氟酸混合2min，得到混合液，备用；
2)将步骤1)得到的混合液转移到聚四氟乙烯内衬高压釜中，并在200℃下保持40h，而后待高压釜自然冷却至室温，备用；
3)使用微孔膜过滤步骤2)得到的产物，经过反复洗涤，离心过滤使溶液最终呈中性，然后经冷冻干燥得到氟化石墨烯，备用；
4)取氟化石墨烯，加入去离子水，在冰浴条件下超声振荡2h，氟化石墨片层剥落，获得棕黄色的分散液，离心去除沉淀物得到氟化石墨烯水溶液；
5)将氟化石墨烯水溶液于截留分子量为14000的透析袋中透析3d，得到纯化后的氟化石墨烯分散液，经冷冻干燥处理得到纯化的氟化石墨烯，备用；
6)称取150mg氟化石墨烯，并分散在120mL去离子水中，超声分散均匀，然后加入7g氢氧化钠、7g次氯酸钠，超声浴3h，使氟化石墨烯片层上的羟基转化为羧基；反应完全后，用稀盐酸中和并反复漂洗，离心处理，收集上层的黑色溶液，然后用去离子水透析50h，除去未反应的水溶性物质；
7)称取150mg氟化石墨烯分散在50ml DMSO中，加入75ml 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化搅拌反应5h；
8)另称取200mg PEI溶解在125ml DMSO中，在搅拌的情况下，将PEI溶液逐滴加入已活化的氟化石墨烯溶液中，在室温条件下超声搅拌反应36h，透析除去未反应的杂质，冷冻干燥；
9)称取0.6g透明质酸溶解在50ml蒸馏水中，并加入适量1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺活化搅拌反应5h；
10)称取90mg氟化石墨烯-PEI溶解于45ml蒸馏水中，在搅拌的情况下，将氟化石墨烯-PEI溶液逐滴加入到活化过的透明质酸溶液中，在室温条件下搅拌反应36h。然后使用pH＝9的碳酸氢钠溶液透析处理，每5h换一次水，50h后完成透析，除去未反应的杂质；
11)采用旋转蒸发法去除溶液中的水分，用丙酮反复洗涤，而后于50℃下真空干燥，得到透明质酸修饰的氟化石墨烯，备用；
12)取66.8mg透明质酸修饰的氟化石墨烯，将其分散于60mL去离子水中，然后加入6.25mg金丝桃素，2.96mg 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和0.32mg 4-二甲氨基吡啶，搅拌反应过夜；
13)将步骤12)得到的溶液使用超滤管过滤，再经冷冻干燥操作，得到成品。
本发明中所用原料、设备，若无特别说明，均为本领域的常用原料、设备；本发明中所用方法，若无特别说明，均为本领域的常规方法。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变换，均仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims (8)

1.一种以透明质酸修饰氟化石墨烯为载体的金丝桃素纳米复合材料的制备方法，其特征在于，以mL和mg、g计，包括以下步骤：
1)通过超声处理将40～60mL浓度为1-3mg/mL的氧化石墨烯分散液和0.5～0.75mL浓度为35-45wt％的氢氟酸混合1～2min，得到混合液，备用；
2)将步骤1)所得混合液转移到聚四氟乙烯内衬高压釜中，并在180～200℃下保持30～40h，而后待聚四氟乙烯内衬高压釜自然冷却至室温，备用；
3)使用微孔膜过滤步骤2)所得产物，经过反复洗涤，离心过滤使溶液最终呈中性，然后经冷冻干燥得到氟化石墨烯，备用；
4)取氟化石墨烯，加入水，在冰浴条件下超声振荡1～2h，氟化石墨片层剥落，获得棕黄色的分散液，离心去除沉淀物得到氟化石墨烯水溶液；
5)将氟化石墨烯水溶液透析2～3d，得到纯化后的氟化石墨烯分散液，经冷冻干燥处理得到纯化的氟化石墨烯，备用；
6)称取100～150mg氟化石墨烯，并分散在80-120mL去离子水中，超声分散均匀，然后加入5～7g氢氧化钠、5～7g次氯酸钠，超声浴2～3h，使氟化石墨烯片层上的羟基转化为羧基；反应完全后，用稀盐酸中和并反复漂洗，离心处理，收集上层的黑色溶液，然后用水透析40-50h，除去未反应的水溶性物质；
7)称取100-150mg氟化石墨烯分散在25-50ml DMSO中，加入50-75ml 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化搅拌反应3-5h，得到活化的氟化石墨烯溶液；
8)另称取175-200mg PEI溶解在75-125ml DMSO中，在搅拌下，将所得PEI溶液逐滴加入活化的氟化石墨烯溶液中，在室温条件下超声搅拌反应24-36h，透析除去未反应的杂质，冷冻干燥，得到氟化石墨烯-PEI；
9)称取0.5-0.6g透明质酸溶解在25-50ml水中，并加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺活化搅拌反应3-5h，得到活化的透明质酸溶液；
10)称取60-90mg氟化石墨烯-PEI溶解于15-45ml水中，在搅拌下，将氟化石墨烯-PEI溶液逐滴加入到活化的透明质酸溶液中，在室温条件下搅拌反应24-36h，然后用碳酸氢钠溶液透析处理，每3-5h换一次水，40-50h后完成透析，除去未反应的杂质；
11)采用旋转蒸发法去除溶液中的水分，用丙酮反复洗涤，而后于40～50℃下真空干燥，得到透明质酸修饰的氟化石墨烯，备用；
12)取64.8～66.8mg透明质酸修饰的氟化石墨烯，将其分散于40-60mL水中，然后加入6.05～6.25mg金丝桃素，2.76～2.96mg 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和0.30～0.32mg 4-二甲氨基吡啶，搅拌反应过夜；
13)将步骤12)所得溶液使用超滤管过滤，再经冷冻干燥操作，得到成品。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4)中，振荡过程为：使用超声波粉碎机，在450-550W功率下超声振荡0.5-1.5h。
3.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤4)中，离心过程为：使用冷冻高速离心机，12000～13000r/min下离心15～20min。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤6)中，离心过程为：使用冷冻高速离心机，在8000～10000r/min下离心15～20min。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤5)中，透析所用透析袋的截留分子量为8000～14000。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤10)中，所述碳酸氢钠溶液的pH＝7-9。
7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤13)中，步骤12)所得溶液在使用前，置于3～5℃的环境中预冷。
8.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤13)中，超滤管过滤、冷冻干燥的具体条件为：超滤管的规格为90-110kDa，用水多次洗涤所得滤液，最后进行冷冻干燥处理。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN116041168A (zh) * 2023-04-03 2023-05-02 中国农业大学 一种金丝桃素的处理方法及获得的金丝桃素碳点和应用

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