CN110559456B - 一种19f-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法 - Google Patents
一种19f-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110559456B CN110559456B CN201911031164.XA CN201911031164A CN110559456B CN 110559456 B CN110559456 B CN 110559456B CN 201911031164 A CN201911031164 A CN 201911031164A CN 110559456 B CN110559456 B CN 110559456B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- preparation
- nanoemulsion
- emulsion
- polyethylene glycol
- nano
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/0474—Organic compounds complexes or complex-forming compounds, i.e. wherein a radioactive metal (e.g. 111In3+) is complexed or chelated by, e.g. a N2S2, N3S, NS3, N4 chelating group
- A61K51/0485—Porphyrins, texaphyrins wherein the nitrogen atoms forming the central ring system complex the radioactive metal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/0493—Steroids, e.g. cholesterol, testosterone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/06—Macromolecular compounds, carriers being organic macromolecular compounds, i.e. organic oligomeric, polymeric, dendrimeric molecules
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/082—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins the peptide being a RGD-containing peptide
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/12—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by a special physical form, e.g. emulsion, microcapsules, liposomes, characterized by a special physical form, e.g. emulsions, dispersions, microcapsules
- A61K51/1217—Dispersions, suspensions, colloids, emulsions, e.g. perfluorinated emulsion, sols
- A61K51/122—Microemulsions, nanoemulsions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明公开了一种19F‑穴番微乳的磁共振成像显影剂的制备方法,步骤是:(1)纳米乳的制备:由磷脂、普朗尼克F‑68、19F‑穴番、19F‑卟啉和1,1,1‑三(全氟叔丁氧基甲基)乙烷经超声乳化法得到纳米乳;(2)19F‑穴番的制备:穴番和F‑聚乙二醇反应得化合物19F‑穴番。(3)19F‑卟啉的制备:卟啉与F‑聚乙二醇反应得到化合物19F‑卟啉。(4)靶向分子的制备:胆固醇‑聚乙二醇2000‑马来酰亚胺与精氨酸‑甘氨酸‑天冬氨酸反应得靶向分子。(5)靶向纳米乳的制备:将胆固醇‑聚乙二醇2000‑精氨酸‑甘氨酸‑天冬氨酸加入到纳米乳液中,振荡得到靶向纳米乳。方法简单高效,显影剂具有高灵敏度、生物相容性好、能靶向肺癌肿瘤进行MR成像及光学成像,应用于肺癌早期诊断和治疗。
Description
技术领域
本发明属于核磁共振成像技术领域,更具体涉及一种19F-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法,应用于肺癌肿瘤的靶向磁共振成像、光学成像以及光动力治疗。
背景技术
在临床疾病诊断中,核磁共振(NMR)具有无辐射、功能多、时间空间分辨率高等优势而被广泛应用。但是传统的1H MRI由于体内的背景信号干扰强烈,灵敏度低。随着磁共振成像技术的不断发展,异核MRI(如31P,13C,19F,129Xe)被广泛的关注和研究。
纳米乳作为一种新型的纳米载体,具有良好的生物相容性、稳定性、易修饰等优点,在肿瘤的诊断及治疗中有着巨大的应用潜力。全氟化碳 (PFCs)纳米乳由于其具有高的19F含量能够提供强的19F信号,而被广泛应用于19F MRI示踪剂。1,1,1-三(全氟叔丁氧基甲基)乙烷是一种无毒性的 PFCs,分子内具有27个对称19F原子,可提供单一、强烈的19F信号,并且19F信号在生物体内没有背景信号干扰,能用于肿瘤细胞以及实体瘤的19F MRI检测。氙气是一种惰性,无毒的气体,可以作为一种理想的介质,在人体内没有背景信号。129Xe的天然丰度为26.4%,通过自制的极化装置产生超极化129Xe气体,可将灵敏度提高10000倍。再将超极化的129Xe与 CEST技术相结合可进一步提高灵敏度100倍,具有超高的灵敏度。穴番分子是一种常用的129Xe MRI造影剂,被广泛用作129Xe MRI探针。
通过对穴番分子进行19F以及聚乙二醇修饰,克服了其水溶性差的问题,使其可以很好地应用于生物体内。将19F-穴番及1,1,1-三(全氟叔丁氧基甲基)乙烷制备成纳米乳,它稳定性好,生物相容性好,无毒并且可以同时作为129Xe/19F双通道多功能显影剂,用于生物体内的129Xe MRI以及19F MRI成像。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足,是在于提供了一种19F-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法;提供的19F-穴番纳米乳结合了129Xe MRI和19F MRI两种磁共振成像方法,通过引入精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)配体与癌细胞上的受体特异性结合从而具有对肿瘤的靶向诊断功能。通过129Xe MRI和19F MRI技术实现对肺癌肿瘤的靶向诊断。该显影剂有超高灵敏度以及较好的生物相容性,适合用于体内磁共振成像。
为了实现上述的目的,本发明采取以下技术方案:
一种19F-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法,包括如下步骤:
A、纳米乳的制备:先将质量比为40:5:3.1:7.6的磷脂/普朗尼克 F-68/19F-穴番/19F-卟啉溶解在有机溶剂中,室温(20-25℃)下用旋转蒸发仪除去有机溶剂,使原料在烧瓶壁上形成脂膜,然后在40-50℃下真空干燥20-30min使有机溶剂除尽,在烧瓶中加入超纯水使膜溶解,再加入78mg 的1,1,1-三(全氟叔丁氧基甲基)乙烷,使用超声破碎仪(超声波破碎仪 SCQ-900F)超声10-20min,然后再用0.22μm微孔滤膜挤制(津腾聚醚砜滤膜)3-5次,最后得到纳米乳;
所述的有机溶剂为氯仿/甲醇=3/1;
B、19F-穴番的制备:在无水、氮气保护条件下,向反应瓶中加入穴番 (50mg,51μmol)和1-羟基苯并三唑(HOBT)(24.7mg,183μmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(2mL)溶液,在冰浴条件下加入碳二亚胺(EDC)(35mg,183 μmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(2mL)溶液,搅拌反应28-32min后加入F- 聚乙二醇(HFBB)(0.3g,112μmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(1mL)溶液,将反应液加热到48-52℃反应11-13h,反应结束后,反应液减压(0.05-0.1 Mpa)浓缩经柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇=10:1)得化合物19F-穴番。
C、19F-卟啉的制备:在无水、氮气保护条件下,向反应瓶中加入卟啉化合物(182mg,0.3mmol)和1-羟基苯并三唑(HOBT)(243mg,1.8mmol)的 N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(30mL)溶液,在冰浴条件下加入碳二亚胺(EDC) (345mg,1.8mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(30mL)溶液,搅拌反应28-32 min后加入F-聚乙二醇(HFBB)(3.9g,1.8mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(20mL)溶液,将反应液加热到44-46℃反应22-26h,反应结束后,反应液减压(0.05-0.1Mpa)浓缩经柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇=10:1)得化合物19F-卟啉。
D、胆固醇-聚乙二醇2000-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)的制备: 将胆固醇-聚乙二醇2000-马来酰亚胺与精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)按摩尔比10:1-1:1加入1mL磷酸盐缓冲溶液(PBS)中,室温下置于摇床上以300rpm的速度振荡20-24小时。然后用透析袋(普通)在超纯水中透析去除未反应的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)分子,经冷冻干燥机(普通)冻干得到靶向分子胆固醇-聚乙二醇2000-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸 (RGD)。
E、靶向纳米乳的制备:将胆固醇-聚乙二醇2000-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)加入到步骤(1)制备的纳米乳液中,然后置于摇床上以300rpm 的速度振荡1小时左右得到靶向纳米乳。
优选的,所述磷脂为大豆卵磷脂(Lipoid S75)。
优选的,所述微孔滤膜的孔径为0.22μm。
优选的,所述胆固醇-聚乙二醇2000-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD) 的加入量与磷脂的摩尔比为1:20。
优选的,步骤(1)中磷脂与F-68的质量比为8:1。
优选的,所述磷脂与1,1,1-三(全氟叔丁氧基甲基)乙烷的质量比为 1:1.9。
另外,本发明还要求保护由所述方法制备得到的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)-纳米乳MRI显影剂。
通过上述的技术措施,获得的磁共振成像显影剂,在制备治疗或预防肺癌肿瘤的早期MRI药物中的应用(诊断和治疗)。
本发明与现有技术相比,具有以下明显的优点和有益效果:
(1)本发明制备的聚乙二醇修饰的穴番分子解决了其水溶性水溶性差的问题,使129Xe MRI造影剂可以很好地应用于生物体内,并具有良好的生物相容性;
(2)本发明制备的19F-穴番纳米乳,将19F引入到穴番分子中,使其同时作为129XeMRI和19F MRI显影剂。卟啉化合物的引入使该纳米乳可以作为光学成像显影剂,是一种129Xe/19F双通道、双模态MRI显影剂;
(3)该纳米乳具有超高的灵敏度,可在纳摩尔浓度下对肺癌细胞进行 MRI成像。也通过129Xe MRI和19F MRI以及光学成像证明了该纳米乳对肺癌肿瘤具有较好的特异性识别,并且对肿瘤细胞有较好的光动力治疗效果。该显影剂可以应用于肺癌肿瘤的早期MRI诊断和治疗。
附图说明
图1为一种19F-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法的19F-穴番纳米乳动态光散射图。
制备的纳米乳粒径分布均一。
图2为一种19F-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法的19F-穴番纳米乳的透射电镜图。
从透射电镜图像可以看出纳米乳粒径在100nm左右,与动态光散射粒径相符。
图3为一种19F-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法的19F-穴番纳米乳紫外吸收波谱图。
RGD修饰的纳米乳在275nm处有特征紫外吸收峰,表明RGD分子成功修饰到纳米乳表面。
图4为一种19F-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法的19F-穴番纳米乳的荧光发射光谱图,
该纳米乳的荧光发射在655nm和722nm。
图5为一种19F-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法的19F-穴番纳米乳的19F NMR谱图。
该纳米乳的19F信号在-72ppm处。
图6为一种19F-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法的19F-穴番纳米乳的129Xe Hyper CEST谱图。
该纳米乳的129Xe Hyper CEST信号在72ppm附近,并且具有超高的灵敏度。
图7为一种19F-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法的19F-穴番纳米乳分别与A549细胞以及MCF7细胞孵育之后的荧光共聚焦图像。
该结果显示靶向纳米乳对肺癌细胞A549具有很好的特异靶向性。
图8为一种19F-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法的19F-穴番纳米乳分别与A549细胞以及MCF7细胞孵育之后的129Xe MRI及19F MRI 谱图。
从磁共振成像结果也可以看出靶向纳米乳对肺癌细胞A549具有很好的靶向性。
图9为一种19F-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法的19F-穴番纳米乳对A549细胞的光动力治疗效果图。
该纳米乳进入肿瘤细胞后经过激光照射后可以明显的杀死肿瘤细胞,具有很好的光疗效果。
图10为一种19F-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法的19F-穴番纳米乳对A549肿瘤鼠的活体19F MRI和荧光成像图。
该纳米乳通过尾静脉注射进小鼠体内后可以很好的靶向肿瘤进行19F MRI以及荧光成像。
图11为一种19F-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法的19F-穴番纳米乳的动态光散射图。
纳米乳平均水合粒径为120nm。
图12为一种19F-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法的19F-穴番纳米乳的动态光散射图。
纳米乳平均水合粒径为134nm。
图13为一种19F-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法的19F-穴番纳米乳的动态光散射图。
纳米乳平均水合粒径为128nm。
具体实施方式
下面以具体实施例进一步阐述本发明。下述实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
实施例1
一种19F-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法,包括如下步骤:
(1)纳米乳的制备:将40mg磷脂,5mg普朗尼克F-68,3.1mg 19F- 穴番和7.6mg 19F-卟啉溶解在2mL混合有机溶剂(氯仿/甲醇=3/1)中,室温下用旋转蒸发仪除去有机溶剂,使原料在烧瓶壁上形成脂膜,然后在 45℃下真空干燥30min使有机溶剂除尽,在烧瓶中加入1mL超纯水使膜溶解,再加入78mg的1,1,1-三(全氟叔丁氧基甲基)乙烷,使用超声破碎仪超声20min,然后将纳米乳用0.22μm微孔滤膜挤制3次,最后得到纳米乳。
(2)19F-穴番的制备:在无水、氮气保护条件下,向反应瓶中加入穴番(50mg,51μmol)和1-羟基苯并三唑(HOBT)(24.7mg,183μmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(2mL)溶液,在冰浴条件下加入碳二亚胺(EDC)(35mg, 183μmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(2mL)溶液,搅拌反应30min后加入 F-聚乙二醇(HFBB)(0.3g,112μmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(1mL)溶液,将反应液加热到50℃反应12h,反应结束后,反应液减压(0.1Mpa)浓缩经柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇=10:1)得化合物19F-穴番。
(3)19F-卟啉的制备:在无水、氮气保护条件下,向反应瓶中加入卟啉化合物(182mg,0.3mmol)和1-羟基苯并三唑(HOBT)(243mg,1.8mmol) 的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(30mL)溶液,在冰浴条件下加入碳二亚胺(EDC) (345mg,1.8mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(30mL)溶液,搅拌反应30min 后加入F-聚乙二醇(HFBB)(3.9g,1.8mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(20 mL)溶液,将反应液加热到45℃反应24h,反应结束后,反应液减压(0.1Mpa)浓缩经柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇=10:1)得化合物19F-卟啉。
(4)胆固醇-聚乙二醇2000-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)的制备: 将15.8mg胆固醇-聚乙二醇2000-马来酰亚胺和3.7mg精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)加入1mL磷酸盐缓冲溶液(PBS)中,室温下置于摇床上以 300rpm的速度振荡20小时。然后用截留分子量为1000Da透析袋在超纯水中透析24小时去除未反应的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)分子,经冷冻干燥机冻干得到靶向分子胆固醇-聚乙二醇2000-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)。
(5)靶向纳米乳的制备:将8.2mg胆固醇-聚乙二醇2000-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)加入到1mL步骤(1)制备的纳米乳液中,然后置于摇床上以300rpm的速度振荡2小时得到靶向纳米乳;
将本实施例1制备的靶向纳米乳进行动态光散射检测,所得的动态光散射图如图1所示,平均水合粒径为130nm。
将本实施例1制备的靶向纳米乳进行透射电镜扫描,所得的透射电镜图如图2所示,图中可以看出,本实施例制备的靶向分散性好,粒径均一。
将本实施例1制备的靶向纳米乳进行紫外吸收检测,所得的紫外吸收光谱图如图3所示,在275nm处检测到RGD分子特征吸收峰,说明RGD 分子成功修饰到纳米乳表面。
将本实施例1制备的靶向纳米乳进行荧光发射光谱检测,从图4中可以看出最大发射波长为655nm和722nm。
将本实施例1制备的靶向纳米乳进行氟谱检测,所得的氟谱如图5所示,该纳米乳具有单一且强烈的19F信号。
将本实施例1制备的靶向纳米乳进行129Xe Hyper CEST谱检测,如图6 所示,72ppm附近有一个较强的CEST信号,归属于129Xe在穴番分子笼内的信号。
将本实施例1制备的靶向纳米乳分别与A549细胞以及MCF7细胞孵育之后做激光共聚焦成像。如图7所示,肺癌细胞A549观察到很强的荧光信号,乳腺癌细胞MCF7内荧光信号很弱。该结果表明靶向对肺癌细胞A549 具有较好的靶向性。
将本实施例1制备的靶向纳米乳分别与A549细胞以及MCF7细胞孵育之后测19F MRI图像,如图8A所示,肺癌细胞A549显示出较强的19F信号,而乳腺癌细胞MCF7内19F信号很弱,说明了靶向对肺癌细胞有特异性靶向作用。129Xe MRI成像结果也证明了靶向纳米乳能对肺癌细胞进行靶向的 MRI成像,如图8B所示,肺癌细胞A549内有较强的CEST信号,而乳腺癌细胞MCF7内信号很弱。
将本实施例1制备的靶向纳米乳与A549细胞共孵育2小时后,经 650nm激光照射10分钟,再用钙黄绿素(CA)和碘化丙啶(PI)分别染色。如图9所示,被光照后,光照区域大量细胞被杀死而呈现红色。
将本实施例1制备的靶向纳米乳经尾静脉注射到A549肿瘤鼠体内做19F MRI以及荧光成像,如图10所示,靶向纳米乳对A549肿瘤具有很好的靶向性,显示出明亮的19F信号和荧光信号。
实施例2
一种19F-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法,包括如下步骤:
(1)纳米乳的制备:将40mg磷脂,5mg普朗尼克F-68,3.1mg 19F- 穴番和5.3mg 19F-卟啉溶解在2mL混合溶剂(氯仿/甲醇=3/1)中,室温下用旋转蒸发仪除去有机溶剂,使原料在烧瓶壁上形成脂膜,然后在45℃下真空干燥1小时使有机溶剂除尽,在烧瓶中加入1mL超纯水使膜溶解,再加入78mg的1,1,1-三(全氟叔丁氧基甲基)乙烷,使用超声破碎仪超声20min,然后将纳米乳用0.22μm微孔滤膜挤制5次,最后得到纳米乳。
(2)19F-穴番的制备:在无水、氮气保护条件下,向反应瓶中加入穴番(30mg,31μmol)和1-羟基苯并三唑(HOBT)(14.8mg,110μmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(2mL)溶液,在冰浴条件下加入碳二亚胺(EDC)(21mg,110 μmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(2mL)溶液,搅拌反应30min后加入F-聚乙二醇(HFBB)(0.18g,67μmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(1mL)溶液,将反应液加热到50℃反应12h,反应结束后,反应液减压(0.08Mpa)浓缩经柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇=10:1)得化合物19F-穴番。
(3)19F-卟啉的制备:在无水、氮气保护条件下,向反应瓶中加入卟啉化合物(73mg,0.12mmol)和1-羟基苯并三唑(HOBT)(97mg,0.72mmol)的 N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(15mL)溶液,在冰浴条件下加入碳二亚胺(EDC) (138mg,0.72mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(15mL)溶液,搅拌反应30 min后加入F-聚乙二醇(HFBB)(1.6g,0.72mmol)的N,N-二甲基甲酰胺 (DMF)(10mL)溶液,将反应液加热到45℃反应24h,反应结束后,反应液减压(0.08Mpa)浓缩经柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇=10:1)得化合物19F- 卟啉。
(4)胆固醇-聚乙二醇2000-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)的制备: 将17mg胆固醇-聚乙二醇2000-马来酰亚胺和4mg精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸 (RGD)加入1mL磷酸盐缓冲溶液(PBS)中,室温下置于摇床上以300rpm 的速度振荡20小时。然后用截留分子量为1000Da透析袋在超纯水中透析 24小时去除未反应的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)分子,经冷冻干燥机冻干得到靶向分子胆固醇-聚乙二醇2000-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)。
(5)靶向纳米乳的制备:将16.5mg胆固醇-聚乙二醇2000-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)加入到2mL步骤(1)制备的纳米乳液中,然后置于摇床上以300rpm的速度振荡2小时得到靶向纳米乳;
将本实施例2制备的靶向纳米乳进行动态光散射检测,所得的动态光散射图如图11所示,平均水合粒径为120nm。
实施例3
一种19F-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法,包括如下步骤:
(1)纳米乳的制备:将40mg磷脂,5mg普朗尼克F-68,3.1mg 19F- 穴番和8.8mg 19F-卟啉溶解在2mL混合溶剂(氯仿/甲醇=3/1)中,室温下用旋转蒸发仪除去有机溶剂,使原料在烧瓶壁上形成脂膜,然后在45℃下真空干燥1小时使有机溶剂除尽,在烧瓶中加入1mL超纯水使膜溶解,再加入156mg的1,1,1-三(全氟叔丁氧基甲基)乙烷,使用超声破碎仪超声20min,然后将纳米乳用0.22μm微孔滤膜挤制3次,最后得到纳米乳。
(2)19F-穴番的制备:在无水、氮气保护条件下,向反应瓶中加入穴番(20mg,20μmol)和1-羟基苯并三唑(HOBT)(9.9mg,73μmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(1mL)溶液,在冰浴条件下加入碳二亚胺(EDC)(14mg,73 μmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(1mL)溶液,搅拌反应30min后加入F-聚乙二醇(HFBB)(0.12g,44.8μmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(1mL)溶液,将反应液加热到50℃反应12h,反应结束后,反应液减压(0.07Mpa)浓缩经柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇=10:1)得化合物19F-穴番。
(3)19F-卟啉的制备:在无水、氮气保护条件下,向反应瓶中加入卟啉化合物(109.2mg,0.18mmol)和1-羟基苯并三唑(HOBT)(145.8mg,1.1 mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(20mL)溶液,在冰浴条件下加入碳二亚胺 (EDC)(207mg,1.1mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(20mL)溶液,搅拌反应30min后加入F-聚乙二醇(HFBB)(2.3g,1.1mmol)的N,N-二甲基甲酰胺 (DMF)(15mL)溶液,将反应液加热到45℃反应24h,反应结束后,反应液减压(0.07Mpa)浓缩经柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇=10:1)得化合物19F- 卟啉。
(4)胆固醇-聚乙二醇2000-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)的制备: 将13mg胆固醇-聚乙二醇2000-马来酰亚胺和3mg精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸 (RGD)加入1mL磷酸盐缓冲溶液(PBS)中,室温下置于摇床上以300rpm 的速度振荡20小时。然后用截留分子量为1000Da透析袋在超纯水中透析24小时去除未反应的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)分子,经冷冻干燥机冻干得到靶向分子胆固醇-聚乙二醇2000-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)。
(5)靶向纳米乳的制备:将4.1mg胆固醇-聚乙二醇2000-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)加入到0.5mL步骤(1)制备的纳米乳液中,然后置于摇床上以300rpm的速度振荡2小时得到靶向纳米乳;
将本实施例3制备的靶向纳米乳进行动态光散射检测,所得的动态光散射图如图12所示,平均水合粒径为134nm。
实施例4
一种19F-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法,包括如下步骤:
(1)纳米乳的制备:将200mg磷脂,25mg普朗尼克F-68,15.9mg 19F -穴番和38mg19F-卟啉溶解在4mL混合溶剂(氯仿/甲醇=3/1)中,室温下用旋转蒸发仪除去有机溶剂,使原料在烧瓶壁上形成脂膜,然后在45℃下真空干燥1小时使有机溶剂除尽,在烧瓶中加入5mL超纯水使膜溶解,再加入472mg的1,1,1-三(全氟叔丁氧基甲基)乙烷,使用超声破碎仪超声20min,然后将纳米乳用0.22μm微孔滤膜挤制4次,最后得到纳米乳。
(2)19F-穴番的制备:在无水、氮气保护条件下,向反应瓶中加入穴番(40mg,40.8μmol)和1-羟基苯并三唑(HOBT)(19.7mg,146.4μmol)的N,N- 二甲基甲酰胺(DMF)(2mL)溶液,在冰浴条件下加入碳二亚胺(EDC)(28mg, 146.4μmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(2mL)溶液,搅拌反应30min后加入 F-聚乙二醇(HFBB)(0.24g,89.6μmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(1mL)溶液,将反应液加热到50℃反应12h,反应结束后,反应液减压(0.09Mpa) 浓缩经柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇=10:1)得化合物19F-穴番。
(3)19F-卟啉的制备:在无水、氮气保护条件下,向反应瓶中加入卟啉化合物(145.6mg,0.24mmol)和1-羟基苯并三唑(HOBT)(194.4mg,1.4 mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(30mL)溶液,在冰浴条件下加入碳二亚胺 (EDC)(276mg,1.4mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(30mL)溶液,搅拌反应30min后加入F-聚乙二醇(HFBB)(3.1g,1.4mmol)的N,N-二甲基甲酰胺 (DMF)(20mL)溶液,将反应液加热到45℃反应24h,反应结束后,反应液减压(0.09Mpa)浓缩经柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇=10:1)得化合物19F- 卟啉。
(4)胆固醇-聚乙二醇2000-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)的制备: 将21mg胆固醇-聚乙二醇2000-马来酰亚胺和5mg精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸 (RGD)加入1mL磷酸盐缓冲溶液(PBS)中,室温下置于摇床上以300rpm 的速度振荡20小时。然后用截留分子量为1000Da透析袋在超纯水中透析 24小时去除未反应的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)分子,经冷冻干燥机冻干得到靶向分子胆固醇-聚乙二醇2000-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)。
(5)靶向纳米乳的制备:将41mg胆固醇-聚乙二醇2000-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)加入到5mL步骤(1)制备的纳米乳液中,然后置于摇床上以300rpm的速度振荡2小时得到靶向纳米乳;
将本实施例3制备的靶向纳米乳进行动态光散射检测,所得的动态光散射图如图13所示,平均水合粒径为128nm。
上述实施例只是为了说明本发明的技术构思及特点,其目的是在于让本领域内的普通技术人员能够了解本发明的内容并据以实施,并不能以此限制本发明的保护范围。凡是根据本发明内容的实质所作出的等效的变化或修饰,都应涵盖在本发明的保护范围内。
Claims (5)
1.一种19F-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法,其步骤是:
(1)纳米乳的制备:将质量比为40:5:3.1:7.6的磷脂/普朗尼克F-68/19F-穴番/19F-卟啉溶解在有机溶剂中,室温下用旋转蒸发仪除去有机溶剂,使原料在烧瓶壁上形成脂膜,然后在40-50℃下真空干燥20-30min使有机溶剂除尽,在烧瓶中加入超纯水使膜溶解,再加入78mg的1,1,1-三(全氟叔丁氧基甲基)乙烷,使用超声破碎仪超声10-20min,然后再用0.22μm微孔滤膜挤制3-5次,得到纳米乳;
所述的有机溶剂为氯仿/甲醇=3/1;
(2)19F-穴番的制备:在无水、氮气保护条件下,向反应瓶中加入穴番50mg,51μmol和1-羟基苯并三唑24.7mg,183μmol的N,N-二甲基甲酰胺2mL溶液,在冰浴条件下加入碳二亚胺35mg,183μmol的N,N-二甲基甲酰胺2mL溶液,搅拌反应28-32min后加入F-聚乙二醇0.3g,112μmol的N,N-二甲基甲酰胺1mL溶液,将反应液加热到48-52℃反应11-13h,反应结束后,反应液减压0.05-0.1Mpa浓缩经柱层析纯化:二氯甲烷/甲醇=10:1得化合物19F-穴番;
(3)19F-卟啉的制备:在无水、氮气保护条件下,向反应瓶中加入卟啉化合物182mg,0.3mmol和1-羟基苯并三唑243mg,1.8mmol的N,N-二甲基甲酰胺30mL溶液,在冰浴条件下加入碳二亚胺345mg,1.8mmol的N,N-二甲基甲酰胺30mL溶液,搅拌反应28-32min后加入F-聚乙二醇3.9g,1.8mmol的N,N-二甲基甲酰胺20mL溶液,将反应液加热到44-46℃反应22-26h,反应结束后,反应液减压0.05-0.1Mpa浓缩经柱层析纯化:二氯甲烷/甲醇=10:1得化合物19F-卟啉;
(4)胆固醇-聚乙二醇2000-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸的制备:将胆固醇-聚乙二醇2000-马来酰亚胺与精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸按摩尔比10:1-1:1加入1mL磷酸盐缓冲溶液中,室温下置于摇床上以300rpm的速度振荡20-24小时,然后用透析袋在超纯水中透析去除未反应的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸分子,经冷冻干燥机冻干得到靶向分子胆固醇-聚乙二醇2000-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸;
(5)靶向纳米乳的制备:将胆固醇-聚乙二醇2000-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸加入到步骤(1)制备的纳米乳液中,然后置于摇床上以300rpm的速度振荡一小时得到靶向纳米乳。
2.根据权利要求1所述的一种19F-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法,其特征在于:所述的磷脂为大豆卵磷脂Lipoid S75。
3.根据权利要求1所述的一种19F-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法,其特征在于:所述的胆固醇-聚乙二醇2000-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸的加入量与磷脂的摩尔比为1:20。
4.根据权利要求1所述的一种19F-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法,其特征在于:步骤(1)中磷脂与F-68的质量比为8:1。
5.根据权利要求1所述的一种19F-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法,其特征在于:所述的磷脂与1,1,1-三(全氟叔丁氧基甲基)乙烷的质量比为1:1.9-1:4。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201911031164.XA CN110559456B (zh) | 2019-10-28 | 2019-10-28 | 一种19f-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201911031164.XA CN110559456B (zh) | 2019-10-28 | 2019-10-28 | 一种19f-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN110559456A CN110559456A (zh) | 2019-12-13 |
CN110559456B true CN110559456B (zh) | 2021-07-23 |
Family
ID=68786137
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201911031164.XA Active CN110559456B (zh) | 2019-10-28 | 2019-10-28 | 一种19f-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN110559456B (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115925746B (zh) * | 2022-10-19 | 2024-04-12 | 中山大学 | 一种基于卟啉的可还原降解的含氟表面活性剂及其制备与应用 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE60140863D1 (de) * | 2001-06-10 | 2010-02-04 | Noxxon Pharma Ag | Verwendung von L-Polynukleotiden zur diagnostischen Bilderzeugung |
TWI675669B (zh) * | 2018-03-05 | 2019-11-01 | 白金科技股份有限公司 | 放射微球及其製備方法 |
CN108434464A (zh) * | 2018-04-17 | 2018-08-24 | 中国科学院武汉物理与数学研究所 | 一种rgd-全氟化碳纳米乳磁共振成像显影剂及其制备方法和应用 |
-
2019
- 2019-10-28 CN CN201911031164.XA patent/CN110559456B/zh active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN110559456A (zh) | 2019-12-13 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Cheng et al. | Renal‐clearable PEGylated porphyrin nanoparticles for image‐guided photodynamic cancer therapy | |
CN108864106B (zh) | 近红外二区有机小分子荧光探针的制备与应用 | |
Wang et al. | A theranostic nanoplatform: magneto-gold@ fluorescence polymer nanoparticles for tumor targeting T 1 & T 2-MRI/CT/NIR fluorescence imaging and induction of genuine autophagy mediated chemotherapy | |
Tian et al. | Construction of lanthanide-doped upconversion nanoparticle-Uelx Europaeus Agglutinin-I bioconjugates with brightness red emission for ultrasensitive in vivo imaging of colorectal tumor | |
Liu et al. | Photosensitizer-conjugated redox-responsive dextran theranostic nanoparticles for near-infrared cancer imaging and photodynamic therapy | |
CN106390143B (zh) | 肿瘤靶向核磁共振/荧光双模态成像造影剂及其制备和应用 | |
JP6230443B2 (ja) | 近赤外色素結合ヒアルロン酸誘導体およびそれを有する光イメージング用造影剤 | |
CN107551279B (zh) | 具有近红外光热效应和多模态成像功能的超小蛋白复合纳米粒及其制备方法和应用 | |
CN106267241A (zh) | 一种多功能多模态肿瘤特异性靶向相变型纳米微球光声造影剂及其应用 | |
CN105012970B (zh) | 用于肿瘤早期诊断与光学治疗的多功能纳米胶束及其应用 | |
CN101031811A (zh) | 肿瘤成像方法 | |
CN111518545B (zh) | 高稳定性近红外二区纳米荧光探针及其制备方法和应用 | |
Xia et al. | Multimodality imaging of naturally active melanin nanoparticles targeting somatostatin receptor subtype 2 in human small-cell lung cancer | |
Jiang et al. | Self-assembly of peptide nanofibers for imaging applications | |
Li et al. | Dendron‐grafted Polylysine‐based dual‐modal Nanoprobe for ultra‐early diagnosis of pancreatic Precancerosis via targeting a Urokinase‐type plasminogen activator receptor | |
Yin et al. | A biodegradable nanocapsule for through-skull NIR-II fluorescence imaging/magnetic resonance imaging and selectively enhanced radio-chemotherapy for orthotopic glioma | |
US20180161461A1 (en) | Rare Earth Oxide Particles and Use Thereof in Particular In Imaging | |
CN112494663A (zh) | 一种新型多模态纳米诊疗试剂及其制备方法和应用 | |
Zhang et al. | Versatile gadolinium (III)-phthalocyaninate photoagent for MR/PA imaging-guided parallel photocavitation and photodynamic oxidation at single-laser irradiation | |
EP2996677B1 (en) | Photosensitizer particles for medical imaging and/or photodynamic therapy | |
Qiu et al. | Liver injury long-term monitoring and fluorescent image-guided tumor surgery using self-assembly amphiphilic donor-acceptor NIR-II dyes | |
Shang et al. | Synergistic effect of oxygen-and nitrogen-containing groups in graphene quantum dots: Red emitted dual-mode magnetic resonance imaging contrast agents with high relaxivity | |
Yang et al. | Theranostic nanoparticles with aggregation-induced emission and MRI contrast enhancement characteristics as a dual-modal imaging platform for image-guided tumor photodynamic therapy | |
CN110559456B (zh) | 一种19f-穴番纳米乳的磁共振成像显影剂的制备方法 | |
Zheng et al. | Recent progress of molecular imaging probes based on gadofullerenes |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |