CN110507825A - 一种多肽聚合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种多肽聚合物，所述自组装多肽包括二丙烯酸酯类缩聚物构成的聚合物载体模块、功能模块和响应模块，所述功能模块与聚合物载体模块连接，所述响应模块与功能模块连接；本发明所提供的多肽聚合物，可以在弱酸条件下发生自组装，可以以单链形式稳定存在并到达肿瘤部位，凭借较小粒径渗透至肿瘤深层部位，而在肿瘤微环境弱酸刺激下(pH值约为6.5)发生水解，此时多肽聚合物疏水性大幅增加，从而使得多肽聚合物疏水性大幅增加，进而发生自组装聚集，生成的聚集纳米颗粒具有较高的入胞能力和肿瘤细胞杀伤能力，为改善纳米药物在肿瘤部位渗透、入胞以及富集等能力提供新的有效策略。

Description

一种多肽聚合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于纳米材料领域，涉及一种多肽聚合物及其制备方法和应用，尤其涉及一种在弱酸条件下发生自组装的多肽聚合物及其制备方法和应用。
背景技术
目前癌症已经成为全球第二大死因，目前癌症的死亡率高达20.2％。癌症传统治疗手段包括手术以及放化疗，但是由于传统疗法不具备针对肿瘤的特异性，其对于机体的副作用尤为明显。近十年发展起来的聚合物-多肽药物体系可以有效解决传统疗法的这一问题。由于实体肿瘤中血管壁间隙宽、结构不完整，并且缺乏有效的淋巴回流，大分子类物质对于实体肿瘤一般都具有较高的通透性以及滞留性，而且由于聚合物-多肽这类纳米具有的丰富的可修饰性以及更好的生物相容性和更长的血液循环时间，人们能够设计并和合成出特异性富集在肿瘤部分的聚合物-多肽类药物，实现对肿瘤细胞高效杀伤的同时，显著降低毒副作用。但是聚合物-多肽类药物在目前应用的过程中，仍然存在着诸多问题和缺陷，其中这类药物所形成的纳米颗粒对于实体肿瘤的穿透性较差便是亟待解决的问题之一。由于实体肿瘤内部较高的组织液压以及其内部血管的缺失，纳米药物通常很难渗透到肿瘤内部，从而只能够清除血管周围的肿瘤细胞，而肿瘤内部的细胞得以继续生长，很大程度地限制了纳米药物杀伤实体肿瘤的效率，并且往往会导致肿瘤的复发。
CN107412782A公开了一种多肽聚合物纳米材料及其制备方法和应用，所述多肽聚合物纳米材料包括壳聚糖以及连接在壳聚糖上的识别β-淀粉样蛋白的多肽序列以及激活细胞自噬的多肽序列。此申请通过固相合成和Michael加成制备得到的多肽聚合物具有良好的生物兼容性和抗Aβ神经毒性，由其得到的多肽聚合物纳米球能够与Aβ共组装从而有效阻止其聚集，降低Aβ的神经毒性，同时共组装体在进入细胞之后能够激活细胞自噬，通过细胞自噬降解Aβ，从而实现协同治疗阿尔茨海默症，大大提高多肽纳米材料的治疗阿尔茨海默症的效率，具有广泛的应用前景。但是此方法制备的多肽聚合物不具有响应模块，不具有酸响应性，聚合物无法实现聚集。
CN107596385A公开了一种肿瘤靶向性且环境pH刺激响应型药物控释纳米载体及其制备方法，以树枝状大分子纳米高分子材料聚酰胺-胺PAMAM作为结构的主体，连接两亲性嵌段共聚物甲氧基聚乙二醇(PEG)-聚天冬酸(PLA)，阿霉素(DOX)共价缀合到两亲性嵌段共聚物臂的疏水性片段(即，PLA)，并通过pH敏感的腙键连接，使得体系具有在体内智能释药的特点，能够通过体内pH值来控制药物的释放。再通过亲水PEG链段连接F3多肽核仁蛋白靶向配体，在肿瘤特异性摄取和核定位中来实现体系的肿瘤靶向性。此方法制备的纳米材料，通过pH值响应性来达到纳米释放分散的目的，而不是实现聚合物的富集或聚集，无法实现纳米材料的在肿瘤部位的聚集。
因此，期望得到一种能够实现聚合物的聚集，从而渗透至实体肿瘤的深部，并且同时能够有效杀伤肿瘤细胞的多肽聚合物类药物，从而提高针对实体肿瘤的治疗效果的纳米药物。
发明内容
本发明的目的在于提供一种在弱酸条件下发生自组装的多肽聚合物及其制备方法和应用。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供了一种多肽聚合物，所述自组装多肽包括二丙烯酸酯类缩聚物构成的聚合物载体模块、功能模块和响应模块，所述功能模块与聚合物载体模块连接，所述响应模块与功能模块连接。
本发明通过共价键将响应模块与功能模块中的多肽进行连接，并将修饰后的多肽共价连接到由二丙烯酸酯类缩聚物构成的聚合物载体模块上，得到可以在弱酸条件下发生自组装的多肽聚合物，该多肽聚合物可以以单链形式稳定存在并到达肿瘤部位，凭借较小粒径渗透至肿瘤深层部位，而在肿瘤微环境弱酸刺激下(pH值约为6.5)发生水解，此时多肽聚合物疏水性大幅增加，从而使得多肽聚合物疏水性大幅增加，进而发生自组装聚集。而传统的聚合物纳米药物载体往往在肿瘤微环境弱酸条件的刺激下发生解组装，从而实现药物的可控释放，而释放的药物则主要以小分子形式通过自由扩散的方式进入肿瘤细胞，效率较低。与传统的载药体系相反，本发明在微环境刺激下发生聚集，生成的聚集纳米颗粒主要以胞吞的方式进入细胞，具有较高的入胞能力和肿瘤细胞杀伤能力，为改善纳米药物在肿瘤部位渗透、入胞以及富集等能力提供新的有效策略。
相比于目前的纳米递送材料，均在病理部位发生分散作用，本发明提供的多肽聚合物则是产生聚集效应，更有利于对肿瘤部位的渗透。
优选地，所述二丙烯酸酯类缩聚物为二丙烯酸酯类化合物与氨基化合物的缩聚物或二丙烯酸酯类化合物与巯基化合物的缩聚物。
优选地，所述二丙烯酸酯类化合物包括聚乙二醇二丙烯酸酯、四乙二醇二丙烯酸酯、二乙二醇二丙烯酸酯、1,6-己二醇二丙烯酸酯、1,5-戊二醇二丙烯酸酯、1,4-丁二醇二丙烯酸酯、1,3-丙二醇二丙烯酸酯、1,2-乙二醇二丙烯酸酯、烷氧化二丙烯酸酯、四甘醇二丙烯酸酯、二甘醇二丙烯酸酯或N,N'-亚甲基双丙烯酰胺中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述二丙烯酸酯类化合物为聚乙二醇二丙烯酸酯、四乙二醇二丙烯酸酯、二乙二醇二丙烯酸酯中的任意一种。
优选地，所述聚乙二醇二丙烯酸酯的重均分子量为700或575。
优选地，所述二丙烯酸酯类化合物为重均分子量为700的聚乙二醇二丙烯酸酯或四乙二醇二丙烯酸酯。
优选地，所述氨基化合物包括氨基聚乙二醇、炔丙胺、正丁胺、3-(二丁氨基)丙胺或乙二胺中的任意一种。
优选地，所述巯基化合物包括二硫苏糖醇、1,2-乙二硫醇或巯基聚乙二醇中的任意一种。
优选地，所述二丙烯酸酯类缩聚物构成的聚合物载体模块由线性逐步缩聚反应制备得到。
优选地，所述线性逐步缩聚反应为迈克尔加成反应。
由二丙烯酸酯类与含氨基化合物的缩聚物或二丙烯酸酯类与巯基化合物的缩聚物，先与丙烯酰氯进行反应，将缩聚物主链的羟基修饰为丙烯酰基，之后利用多肽上巯基与丙烯酰基双键的迈克尔加成进行反应，从而将含多肽的功能模块修饰到聚合物载体模块上。
优选地，所述二丙烯酸酯类缩聚物构成的聚合物载体模块具有如式I所示的结构：
其中，m＝2-13(例如可以是2、3、4、5、6、7、8、9、10或13等)，n＝2-13(例如可以是2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13等)，p＝10-100(例如可以是10、20、30、40、50、60、70、80、90或100)，q＝10-100(例如可以是10、20、30、40、50、60、70、80、90或100)，且p与q的比值为0.25-4(例如可以是0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3或4等)。
优选地，m＝13，n＝4，且p与q的比值为3。
优选地，所述二丙烯酸酯类缩聚物构成的聚合物载体模块的分子量为50-100kDa，例如可以是50kDa、60kDa、70kDa、80kDa、90kDa或100kDa等，优选100kDa。
在本发明中将缩聚物骨架链长控制在适当的范围内可以有利于调节本发明弱酸条件下发生自组装的多肽聚合物在中性条件下单链形式的粒径大小。
在本发明中将缩聚物中亲疏水性能不同的丙烯酸酯类单体的比例控制在适当的范围内可以有利于调节本发明所述弱酸条件下发生自组装的多肽聚合物的其发生自组装的的pH响应区间。
优选地，所述功能模块为具有抑制肿瘤细胞增殖的多肽。
在本发明中，功能模块为具有特定的氨基酸序列的多肽，这些多肽序列均能够特异性地靶向线粒体，并对线粒体膜结构进行破坏，从而诱导肿瘤细胞的凋亡。
优选地，所述多肽的氨基酸序列为CGGGKLAKLAKKLAKLAK、CGGGKALKALKKALKALK、CGGGKLAKKLAKLAKKLA、CGGGHLAHLAHHALHLAH、CGGGKFAKFAKKFAKFAK、CGGGKLGKKLGKLGKKLG或CGGGKAAKKAAKAAKKAA中的任意一种，优选为CGGGKLAKLAKKLAKLAK。
优选地，所述响应模块包括顺式乌头酸酐、二甲基马来酸酐、甲基马来酸酐或马来酸酐中的任意一种，优选为顺式乌头酸酐。
在本发明中，优选使用顺式乌头酸酐，此酸酐在修饰前后聚合物的亲水性能相差最大，其可以使得合成的多肽聚合物实现在更窄的pH范围内(pH 7.4-6.5)发生刺激响应，引起多肽聚合物的聚集；并且由于其修饰后的残基结构与RGD肽段中天冬氨酸残基结构相似，这就使得修饰后的多肽聚合物具有了类似RGD靶向整合素的靶向能力，能够一定程度上提高多肽聚合物的特异性和治疗效果。
第二方面，本发明提供了如第一方面所述的多肽聚合物的制备方法，所述制备方法为：通过多肽固相合成法合成功能模块，而后将响应模块与功能模块进行连接反应，将得到的产物与二丙烯酸酯类缩聚物构成的聚合物载体模块发生迈克尔加成反应得到所述多肽聚合物。
优选地，所述连接反应的溶剂为二甲基亚砜。
优选地，所述连接反应的时间为10-15小时，例如可以是10小时、11小时、12小时、13小时、14小时或15小时。
优选地，所述迈克尔加成反应在氮气保护下进行。
优选地，所述迈克尔加成反应的温度为40-70℃，例如可以是40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃或70℃。
优选地，所述迈克尔加成反应的时间为36-72小时，例如可以是36小时、40小时、50小时、55小时、60小时、65小时、70小时或72小时。
第三方面，本发明提供了一种如第一方面所述的多肽聚合物作为药物递送材料的用途。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
本发明提供的多肽聚合物，通过共价键将响应模块与功能模块中的多肽进行连接，并将修饰后的多肽共价连接到由二丙烯酸酯类缩聚物构成的聚合物载体模块上，得到可以在弱酸条件下发生自组装的多肽聚合物，该多肽聚合物可以以单链形式稳定存在并到达肿瘤部位，凭借较小粒径渗透至肿瘤深层部位，而在肿瘤微环境弱酸刺激下(pH值约为6.5)发生水解，此时多肽聚合物疏水性大幅增加，从而使得多肽聚合物疏水性大幅增加，进而发生自组装聚集，生成的聚集纳米颗粒具有较高的入胞能力和肿瘤细胞杀伤能力，为改善纳米药物在肿瘤部位渗透、入胞以及富集等能力提供新的有效策略。
附图说明
图1为本发明实施例1制备弱酸条件下发生自组装的多肽聚合物结构示意图.
图2为实施例1制备的功能模块多肽CGGGKLAKLAKKLAKLAK的MALDI-TOF谱图。
图3为实施例1制备的功能多肽以及响应模块修饰后的核磁共振氢谱图。
图4为实施例1制备的弱酸条件下发生自组装的多肽聚合物的核磁共振氢谱图。
图5为利用实施例1中制备的弱酸条件下发生自组装的多肽聚合物和未修饰响应模块的多肽聚合物在中性磷酸缓冲溶液中临界聚集浓度的测定曲线图。
图6为实施例1制备得到的弱酸条件下发生自组装的多肽聚合物在中性磷酸缓冲溶液中的水合粒径，以及在弱酸性(pH＝6.5)磷酸缓冲溶液中水合粒径的变化曲线图。
图7为实施例1制备得到的弱酸条件下发生自组装的多肽聚合物以及未修饰响应模块的多肽聚合物在与体外三维肿瘤细胞团模型培育6小时后的激光扫描共聚焦显微镜图，图中标尺均为200微米。
图8为实施例1制备得到的弱酸条件下发生自组装的多肽聚合物、未修饰响应模块的多肽聚合物、聚合物载体和生理盐水对荷瘤小鼠治疗后的肿瘤大小随时间的变化图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
实施例1
本实施例制备的功能模块的多肽序列为CGGGKLAKLAKKLAKLAK。
在本实施例中，多肽聚合物的合成方法如下：
1)功能多肽的合成：
合成顺序是从多肽的C端开始逐个合成，首先选用0.35mM负载量的Wang树脂，其中第一个氨基酸(蛋氨酸)的N端被Fmoc保护，C端固定于树脂上。首先将Wang树脂于DMF中溶胀2小时，结束后用20％(v/v)的六氢吡啶的DMF溶液脱去N端的Fmoc保护，然后用茚三酮测试法检测脱保护结果。然后将下一个氨基酸的羧基用0.4M的N-甲基吗啉(NMM)和10倍于氨基酸的苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)的DMF溶液活化，并加入到脱去保护的树脂中反应1小时。按此方法，将剩余的所有氨基酸都通过缩合反应连接上去，形成固定于树脂的连接多肽。然后用含有2.5％水和2.5％三异丙基硅烷的三氟乙酸溶液将合成好的多肽从树脂上脱除，同时脱除氨基酸的侧链保护；将三氟乙酸用旋转蒸发法去除，然后多肽的粗产物用无水乙醚沉淀，洗涤并干燥。
2)响应模块的修饰
将1mmol多肽CGGGKLAKLAKKLAKLAK分子和7mmol响应模块顺式乌头酸酐分子分别溶于二甲基亚砜溶液(DMSO)中，之后在搅拌下向乌头酸酐的DMSO溶液中逐滴滴加多肽溶液，室温下反应过夜。反应结束后，对反应溶液进行透析(透析袋截留分子量MWCO为1000Da)除去反应溶剂以及未反应的顺式乌头酸酐。透析后冻干产物得到淡黄色固体。
3)丙烯酸酯类与含巯基化合物的缩聚物的合成：
首先分别称取数均分子量为700的聚乙二醇二丙烯酸酯0.525g(0.75mmol)、数均分子量为300的聚乙二醇二丙烯酸酯0.075g(0.25mmol.)以及0.154g二硫苏糖醇(1mmol)，称取后分别将三种物质分别溶于1mL除水后的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶剂中。溶解后，在搅拌下向聚乙二醇二丙烯酸酯DMF溶液中滴加二硫苏糖醇溶液，并将混合物转移至单口瓶中，加入60μL三乙胺(0.2％,v/v)。之后反应液在搅拌下通入氮气，除去溶液中的氧气和水等。15分钟后，将单口瓶密封并处于黑暗中，在50℃条件下反应2天。反应结束后，将反应溶液冷却到室温，并在超纯水中进行透析24小时(MWCO：2000Da)。透析结束后将产物冻干，得到白色粘稠状固体。在聚合物与多肽偶联之前还需要将其进行丙烯酰化，步骤如下。称取该聚合物0.56g(2mmol)溶于2mL除水后的DMF中，加入5.016mL三乙胺(18mmol)，充分搅拌后将反应物混合液置于冰域中冷却至0℃，之后在剧烈搅拌下缓慢滴加974μL丙烯酰氯(6mmol)，加入后室温反应过夜。反应结束后反应产物在超纯水中透析24小时(MWCO：2000)，之后将产物冻干，得到棕黄色固体，通过核磁及凝胶渗透色谱确定聚合物结构及分子量。
3)可在弱酸条件下发生自组装的多肽聚合物的合成：
首先称取丙烯酰化的共聚物8mg(1mmol)、修饰响应模块后的功能多肽25mg(1mmol)于单口瓶中，并加入1mL 0.1mol L-1的NaHCO3溶液。待反应物全部溶解后，将反应物溶液在搅拌下通入氮气除去水中的氧气。15分钟后将单口瓶密封并置于黑暗中，在50℃条件下反应2天。反应结束后，将产物在超纯水中透析24小时(MWCO：2000)。透析结束后将产物冻干，得到黄色粉末状固体。
得到的多肽聚合物的结构如下所示：
本实施例制备的多肽聚合物的模型示意图为图1所示。
在本实施例中制备得到的功能多肽CGGGKLAKLAKKALKLAK的MALDI-TOF谱图如图2所示，由图可以看出，多肽的分子量为1798。
利用核磁氢谱对得到的功能多肽、修饰响应模块后的多肽结构进行表征，结果如图3所示(图中结构式的数字标号与核磁图铺中峰面积的标号相对应)，由图可以看出，化学位移值δ＝8.3-7.8ppm对应多肽中肽键上的-NH-；化学位移值δ＝2.8ppm对应多肽链中赖氨酸侧链上与氨基相连亚甲基上的-CH2-；而当修饰响应模块后，化学位移值δ＝6.2ppm对应响应模块中碳碳双键上的氢原子峰，且出现在化学位移值δ＝3.2ppm处的峰对应多肽链中赖氨酸与酰胺键相连的亚甲基上的氢原子。
利用核磁氢谱对得到弱酸条件下发生自组装的多肽聚合物的表征，结果如图4所示，由图可以看出，化学位移值δ＝8.3-7.8ppm对应多肽中肽键上的-CONH-，而化学位移值δ＝6.2ppm对应响应模块中碳碳双键上的氢原子峰。
实施例2
本实施例将实施例1制备的多肽聚合物进行性能测试
将实施例1制备得到的弱酸条件下发生自组装的多肽聚合物进行能够在弱酸条件下发生自组装行为的测试，首先对修饰了响应模块的多肽聚合物以及未修饰的多肽聚合物测定了临界胶束浓度，方法如下：
测定过程中利用芘作为荧光探针，对加入芘的多肽聚合物溶液荧光值进行测定。芘是一种极性淬灭的荧光分子，对多肽聚合物溶液中加入芘之后，如果多肽聚合物未形成聚集结构，则芘处于极性环境荧光淬灭。而随着多肽聚合物溶液浓度增大，当开始形成聚集结构时，芘分子会因疏水左右包裹在形成的聚集结构中，从而荧光点亮。因此对加入了芘分子的不同浓度的多肽聚合物溶液进行荧光值的测定，当荧光值开始增加时对应的浓度即为临界聚集浓度。具体方法为，首先称取多肽聚合物并配置一系列不同浓度的多肽聚合物溶液各1mL，并加入50μL芘的丙酮溶液(4.8×10-4M)。将配置好的混合液放置过夜蒸发掉其中的丙酮，最终芘的浓度控制在6×10-6M。之后测定这一系列溶液的荧光光谱，参数设置是将发生波长固定在393nm，而对溶液的激发波长在320-370nm范围内进行扫描。最终根据溶液在339nm和337nm两处激发下的荧光强度比值对溶液溶度进行作图，计算得到该多肽聚合物的临界聚集浓度，结果如图5所示。由此可知，在中性生理盐水PBS溶液中未修饰响应模块的多肽聚合物临界聚集浓度是30μg mL-1。而修饰上响应模块的多肽聚合物的临界胶束浓度增大到了250μg mL-1，增大了近8倍之多。也就是说，假设该响应模块在弱酸条件下会发生水解，而如果该修饰了响应模块的多肽聚合物处于30-250μg mL-1这个浓度范围内，则其就会在弱酸条件下发生聚集。而该较宽的浓度范围覆盖了肿瘤治疗中的大多数材料所需的治疗浓度。
为了验证实施例1制备得到的弱酸条件下发生自组装的多肽聚合物能够在中性环境下以聚合物单链形式稳定存在，而在弱酸条件下发生自组装行为，测定了多肽聚合物在中性条件以及弱酸条件下(pH＝6.5)水合粒径的变化，方法如下：
称取制备的多肽聚合物并分别利用中性PBS溶液和弱酸性PBS溶液(pH＝6.5)配置样品浓度至0.2mg·mL-1，利用动态光散射对聚合物粒径进行测量，测量条件是在37℃下采取173°的背散射，且使用塑料比色皿。结果如图6所示：在中性条件下多肽聚合物能够以单链形式存在，具有较小的粒径，在15nm左右。而多肽聚合物在pH 6.5缓冲液中存在一个粒径增大的过程，在12小时内，PT-K-CAA粒径从18nm增大到约90nm，验证了多肽聚合物由于其具有的响应模块在弱酸条件下发生响应水解，从而会引起多肽聚合物临界聚集浓度的改变，进而引起其发生聚集组装。
为了验证实施例1制备得到的弱酸条件下发生自组装的多肽聚合物具有更高的穿透能力，构建了体外三维肿瘤细胞团模型，并对修饰响应模块以及未修饰响应模块的多肽聚合物渗透性能进行了评价，方法如下：
首先在体外利用B16F10细胞构建了三维肿瘤细胞团模型，将琼脂糖溶于无血清的DMEM培养基中并将浓度控制在2％(w/v)，将混合溶液加热到80℃并均匀搅拌，之后将热溶液加入至96孔板中(50μL/孔)并冷却至室温，用以阻止细胞粘附。将覆盖琼脂糖凝胶的96孔板在紫外灯下照射30分钟以上，之后将B16F10细胞以每孔约2000个细胞的密度加入至该96孔板中，并在37℃5％CO2条件培养7天。培养结束后可以观察到形成的三维肿瘤细胞团模型。之后分别加入Cy5荧光标记的具有响应模块的多肽聚合物以及不具有响应模块的多肽聚合物，并培育6小时。结束后，将细胞团用PBS缓冲液洗涤三次，并转移至共聚焦培养皿中在激光扫描共聚焦显微镜下进行观察。
由图7可知，对于修饰响应模块的多肽聚合物来说，在六小时的处理后其已经可以渗透到细胞团的中央，在各深度处的切片上，均可以收集到该材料的荧光信号。而未修饰响应模块的多肽聚合物则相反，在靠近细胞团中心附近的切片荧光照片中，只有细胞团外周能够观察到荧光信号，这表明修饰了响应模块的多肽聚合物具有的卓越渗透能力。
为了验证实施例1制备得到的弱酸条件下发生自组装的多肽聚合物能够增强肿瘤治疗效果，测定了荷瘤小鼠注射生理盐水、修饰响应模块的多肽聚合物、未修饰响应模块的多肽聚合物以及单独聚合物载体后，不同时间肿瘤体积的变化，方法如下：
向每只小鼠皮下注射十万个B16F10细胞，6天后肿瘤生成，将小鼠随机分成4组，分别注射200μL生理盐水，200μL浓度为400μM(多肽的摩尔浓度)的修饰响应模块的多肽聚合物、未修饰响应模块的多肽聚合物以及单独聚合物载体，注射频率为两天一次，并每两天测量一次肿瘤大小。12天后处死小鼠结束实验。
由图8可知，聚合物载体与生理盐水大致相同，无显著治疗效果。未修饰响应模块的多肽聚合物的治疗效果比生理盐水的治疗效果略有提升，而修饰了响应模块的多肽聚合物治疗后的肿瘤体积约为生理盐水治疗组的四分之一。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的多肽聚合物及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述工艺步骤，即不意味着本发明必须依赖上述工艺步骤才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种多肽聚合物，其特征在于，所述自组装多肽包括二丙烯酸酯类缩聚物构成的聚合物载体模块、功能模块和响应模块，所述功能模块与聚合物载体模块连接，所述响应模块与功能模块连接。
2.根据权利要求1所述的多肽聚合物，其特征在于，所述二丙烯酸酯类缩聚物为二丙烯酸酯类化合物与氨基化合物的缩聚物或二丙烯酸酯类化合物与巯基化合物的缩聚物；
优选地，所述二丙烯酸酯类化合物包括聚乙二醇二丙烯酸酯、四乙二醇二丙烯酸酯、二乙二醇二丙烯酸酯、1,6-己二醇二丙烯酸酯、1,5-戊二醇二丙烯酸酯、1,4-丁二醇二丙烯酸酯、1,3-丙二醇二丙烯酸酯、1,2-乙二醇二丙烯酸酯、烷氧化二丙烯酸酯、四甘醇二丙烯酸酯、二甘醇二丙烯酸酯或N,N'-亚甲基双丙烯酰胺中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述二丙烯酸酯类化合物为聚乙二醇二丙烯酸酯、四乙二醇二丙烯酸酯、二乙二醇二丙烯酸酯中的任意一种；
优选地，所述聚乙二醇二丙烯酸酯的重均分子量为700或575；
优选地，所述二丙烯酸酯类化合物为重均分子量为700的聚乙二醇二丙烯酸酯或四乙二醇二丙烯酸酯。
3.根据权利要求1或2所述的多肽聚合物，其特征在于，所述氨基化合物包括氨基聚乙二醇、炔丙胺、正丁胺、3-(二丁氨基)丙胺或乙二胺中的任意一种；
优选地，所述巯基化合物包括二硫苏糖醇、1,2-乙二硫醇或巯基聚乙二醇中的任意一种。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的多肽聚合物，其特征在于，所述二丙烯酸酯类缩聚物构成的聚合物载体模块由线性逐步缩聚反应制备得到；
优选地，所述线性逐步缩聚反应为迈克尔加成反应。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的多肽聚合物，其特征在于，所述二丙烯酸酯类缩聚物构成的聚合物载体模块具有如式I所示的结构：
其中，m＝2-13，n＝2-13，p＝10-100，q＝10-100，且p与q的比值为0.25-4；
优选地，m＝13，n＝4，且p与q的比值为3；
优选地，所述二丙烯酸酯类缩聚物构成的聚合物载体模块的分子量为50-100kDa。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的多肽聚合物，其特征在于，所述功能模块为具有抑制肿瘤细胞增殖的多肽；
优选地，所述多肽的氨基酸序列为CGGGKLAKLAKKLAKLAK、CGGGKALKALKKALKALK、CGGGKLAKKLAKLAKKLA、CGGGHLAHLAHHALHLAH、CGGGKFAKFAKKFAKFAK、CGGGKLGKKLGKLGKKLG或CGGGKAAKKAAKAAKKAA中的任意一种，优选为CGGGKLAKLAKKLAKLAK。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的多肽聚合物，其特征在于，所述响应模块包括顺式乌头酸酐、二甲基马来酸酐、甲基马来酸酐或马来酸酐中的任意一种，优选为顺式乌头酸酐。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的多肽聚合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法为：通过多肽固相合成法合成功能模块，而后将响应模块与功能模块进行连接反应，将得到的产物与二丙烯酸酯类缩聚物构成的聚合物载体模块发生迈克尔加成反应得到所述多肽聚合物。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述连接反应的溶剂为二甲基亚砜；
优选地，所述连接反应的时间为10-15小时；
优选地，所述迈克尔加成反应在氮气保护下进行；
优选地，所述迈克尔加成反应的温度为40-70℃；
优选地，所述迈克尔加成反应的时间为36-72小时。
10.根据权利要求1-7中任一项所述的多肽聚合物作为药物递送材料的用途。
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