CN110484512A - 分泌人血清淀粉样蛋白a单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一株杂交瘤细胞株4D4，其保藏编号是CCTCC NO：C2019121，其能够分泌特异性识别人血清淀粉样蛋白A的单克隆抗体SAA‑McAb1，同时公开了该单克隆抗体SAA‑McAb1在检测人血清淀粉样蛋白A上的用途，以及由该单克隆抗体SAA‑McAb1制备的人血清淀粉样蛋白A免疫检测试剂盒。

Description

分泌人血清淀粉样蛋白A单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其 应用

技术领域

本发明涉及免疫检测领域，具体地说是涉及一种能够分泌人血清淀粉样蛋白A的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，由该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体，以及在检测人血清淀粉样蛋白A中的用途，以及由该单克隆抗体制备的人血清淀粉样蛋白A检测试剂盒。

背景技术

血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A，简称SAA)是一种急性相蛋白并与血浆高密度脂蛋白(HDL)结合。与CRP相仿，用以评估急性相反应进程。SAA是个灵敏的参数，它在炎性反应大约8h后开始升高，且超过参考范围上限时间早于CRP，然而CRP在正常人中的中位数值与参考范围上限的差距，大约有10倍。在SAA中仅有5倍。轻微感染，例如，许多病毒感染，SAA升高要比CRP更为常见。在感染性疾病中，SAA的绝对上升要高于CRP，因此SAA测定，尤其对“正常”与微小急性相反应可提供更好的鉴别。

SAA属于载脂蛋白家族中的异质类蛋白质，相对分子量约12000。在急性时限反应中，经IL-1、IL-6和TNF刺激，SAA在肝脏中由被激活的巨噬细胞和纤维母细胞合成，可升高到最初浓度的100-1000倍，但半衰期极短，只有50分钟左右。血清淀粉样蛋白A与高密度脂蛋白(HDL)有关，它能在炎症期间调节高密度脂蛋白的代谢。血清淀粉样蛋白A一个特别重要的特性是其降解产物能以淀粉样蛋白A(AA)原纤维的方式沉积在不同的器官中，在慢性炎症疾病中这是一种严重的并发症。

目前发现人类SAA超家族包括4个成员，均位于11号染色体11p15.1，跨度为150Kb。SAA基因具有4个外显子和3个内含子的结构，这和其它大多数载脂蛋白的基因一样。家族成员在染色体上的排列顺序从着丝粒(een)到短臂末端(pter)依次为cen-SAA1-SAA2-SAA4-SAA3-pter。SAA1和SAA2核苷酸有90％同源性，而SAA3与前两者有70％核苷酸同源性。SAA1和SAA2属急性期基因，编码A-SAAs(Acute-phase SAA)，A-SAAs在多种脊椎动物中都有发现且高度保守，急性期反应时血浆浓度迅速升高，可达正常值的1000倍以上，在宿主防御反应中起一定作用；SAA3是假基因；SAA4编码C-SAAs(Constitutive SAAs)，炎症时其血浆浓度变化不大，只在人和小鼠中发现有C-SAAs。

SAA前端有18个氨基酸的信号肽，成熟的SAA由104个氨基酸组成，其N末端的11个氨基酸是脂质结合部位，敲除或突变会影响SAA与HDL的结合。体外实验表明N末端10～15个氨基酸是淀粉样纤维形成区，重组人的SAA第8位氨基酸的定点突变或敲除前11位氨基酸会减少淀粉样纤维的合成。SAA经蛋白酶解后形成的N末端76个氨基酸即组织淀粉样蛋白A，在淀粉样病变中起重要作用。第77～104位氨基酸是中性粒细胞结合区，有免疫相关的生物学功能。

目前检测SAA的方法主要包括放射免疫、酶联免疫吸附法(ELISA)、免疫化学发光和乳胶增强速率散射比浊法等。SAA在感染性疾病、组织损伤坏死性疾病、动脉粥样硬化性疾病、免疫性疾病和器官移植后排斥反应中，血清浓度均有变化。测定SAA的变化，对临床诊断上述疾病以及监测病情变化和指导临床治疗均有重要意义。

免疫学检测由于其灵敏度高，速度快的优势，已经在检测人血清淀粉样蛋白A上得到越来越广泛的应用。血清淀粉样蛋白A免疫学检测试剂盒质量的最主要制约因素就是生物活性原材料的质量。从方法学上来说，血清淀粉样蛋白A检测试剂盒大多采用双抗体夹心法，其生物活性原材料就是血清淀粉样蛋白A单克隆抗体。而市场现有的血清淀粉样蛋白A单克隆抗体质量水平参差不齐，严重限制了试剂盒的质量。

鉴于此，有必要开发出高质量的血清淀粉样蛋白A单克隆抗体，以满足试剂盒的质量要求。

发明内容

本发明的第一目的是提供一种杂交瘤细胞株4D4，其保藏于中国典型培养物保藏中心(China Center for Type CultureCollection，简称CCTCC)，保藏编号是CCTCC NO：C2019121，能够分泌特异性识别人血清淀粉样蛋白A的单克隆抗体SAA-McAb1。

本发明的第二目的是提供一种由杂交瘤细胞株4D4所分泌的特异性识别人血清淀粉样蛋白A的单克隆抗体SAA-McAb1。

本发明的第三目的是提供特异性识别人血清淀粉样蛋白A的单克隆抗体SAA-McAb1在人血清淀粉样蛋白A检测试剂盒中的用途。

本发明的第四目的是提供特异性识别人血清淀粉样蛋白A的单克隆抗体SAA-McAb1制备的人血清淀粉样蛋白A免疫检测试剂盒。

作为优选，所述人血清淀粉样蛋白A免疫检测试剂盒，包含了由杂交瘤细胞株4D4所分泌的特异性识别人血清淀粉样蛋白A的单克隆抗体SAA-McAb1。

细胞保藏：

本发明的一株杂交瘤细胞株4D4是本发明的发明人自行筛选得到的，其保藏编号为CCTCC NO：C2019121，保藏日期为2019年7月19日，保藏单位为CCTCC，地址位于湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内。

术语定义：

本发明所指的人血清淀粉样蛋白A，即serum amyloid A(简称SAA)，其氨基酸序列已公布在UniProt(https://www.uniprot.org/uniprot/P0DJI8)，具体如SEQ ID NO:1所示，其对应的mRNA编码区核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

单克隆抗体(monoclonal antibody)，简称单抗(McAb)，是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。

多克隆抗体(polyclonal antibody)简称多抗(PcAb)，抗原通常是由多个抗原决定簇组成的，由多种抗原决定簇刺激机体，由多个B淋巴细胞接受该抗原刺激所产生的混合抗体称之为多克隆抗体。

人胚肾细胞(Human embryonic kidney 293cells)，简称HEK 293,HEK-293,293细胞，可以用来表达外源蛋白。

人血清淀粉样蛋白A检测试剂盒，其采用免疫学检测方法，利用抗原-抗体特异性反应，用来检测标本中人血清淀粉样蛋白A的含量，根据检测平台分为酶联免疫法、免疫层析法、化学发光法、免疫比浊法等。

为了实现上述目的，按照制备单克隆抗体的一般步骤，首先需要得到人血清淀粉样蛋白A作为免疫原，本发明人发现，采用天然人血清淀粉样蛋白A作为免疫原虽然免疫效价高，但是抗原量太少，价格太贵，而采用大肠杆菌等原核表达系统表达的人血清淀粉样蛋白A，可能是因为原核表达的人血清淀粉样蛋白A构象与天然血清淀粉样蛋白A有差异，其免疫效价偏低，因此免疫原首选真核表达的人血清淀粉样蛋白A，本发明实施例采用的就是自行研制的HEK-293重组表达SAA作为免疫原。但是，其它途径、方法以及表达系统获取的血清淀粉样蛋白A作为免疫原也是可用的，并不局限于HEK-293重组表达。

从胎盘组织中提取RNA，反转录得到SAA的cDNA，再以cDNA为模板，用PCR法得到SAA基因片段，PCR酶在片段两个3’端加上碱基“A”，再将该片段连接到T载体上，挑选出阳性克隆进行DNA序列测定，由此即得到SAA基因，也可以在RT-PCR引物两端带上酶切位点，PCR产物直接酶切，连接到同样酶切之后的载体上，挑选阳性克隆进行测序。采用全基因合成的方法，将SAA基因交给商业化基因合成公司进行合成，也是可行的。获得的SAA基因，采用酶切或者非酶切的基因克隆方法，将其连接到表达载体上。

表达载体和表达系统是对应的，本领域的技术人员所周知的表达系统，有原核表达系统，包括大肠杆菌表达系统；还有真核表达系统，包括酵母表达系统、昆虫细胞表达系统、哺乳动物表达系统，都可以用来表达SAA蛋白。将连接了SAA基因的表达载体导入相应表达系统的宿主细胞中，其中原核表达系统对应的导入技术是转化，真核表达系统对应的导入技术是转染。转化或者转染需要加入相应的抗生素进行选择性筛选，选出携带有SAA基因的重组子细胞，进行表达鉴定，挑选SAA表达量大的细胞株，进行扩大培养。离心收集培养的细胞(胞内表达时)，或收集上清(分泌表达时)，经过纯化，得到重组SAA蛋白。

用天然或者重组SAA蛋白免疫小鼠数次，ELISA测定小鼠血清效价，选择值高者取脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合，筛选阳性单克隆细胞株，将其扩增培养之后注射到小鼠腹腔生产腹水，也可采用体外培养法生产培养物。收集富含抗体的腹水或者培养物，经过纯化，得到SAA单克隆抗体。将这些单克隆抗体进行亚型鉴定。

同时，用天然或者重组SAA抗原免疫兔，8周后采兔血检测血清抗SAA效价，选取效价高者，大量采血提取血清，纯化出其中的兔多克隆抗体，得到多克隆抗体称为SAA-PcMb1。

将SAA单克隆抗体包被，与SAA-PcAb1标记HRP配对，进行ELISA检测不同梯度稀释的SAA，以考察其灵敏度、特异性、线性范围等性能指标，挑选性能最好的一株SAA单抗，进行更进一步的性能验证。最终选定了一株单克隆抗体SAA-McAb1，由杂交瘤细胞株4D4所分泌。

用单克隆抗体SAA-McAb1用来包被，用多克隆抗体SAA-PcMb1标记，免疫检测标本中的人血清铁蛋白含量，检测平台包括酶联免疫法、免疫层析法、免疫比浊法、化学发光法等都具有较好效果。

有益效果：

本发明的杂交瘤细胞株4D4所分泌的单克隆抗体SAA-McAb1，用来检测标本中的人血清血清淀粉样蛋白A含量，具有灵敏度高，特异性好，线性范围宽，不同检测平台通用性好的优点，能够替代现有试剂盒中的SAA单克隆抗体。

附图说明

图1：重组表达SAA纯化后的SDS-PAGE电泳图。

图2：SAA单克隆抗体SAA-McAb1纯化后的SDS-PAGE电泳图。

图3：SAA免疫层析检测结果与西门子试剂临床相关性。

图4：SAA化学发光检测结果与西门子试剂临床相关性。

图5：SAA免疫比浊法检测结果与西门子试剂临床相关性。

具体实施方式

实施例1：SAA抗原制备

首先以SAA的mRNA编码区(序列如SEQ ID NO:2所示)为模板，去掉信号肽，设计一对引物(序列分别如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4)。

取人胎盘组织，用赛默飞世尔Trizol一步法提取RNA，用AMV反转录试剂盒把RNA逆转录为cDNA，再以cDNA为模板，用上述引物进行PCR扩增。PCR条件是：94℃5分钟；94℃30秒，55℃30秒，72℃30秒，扩增30个循环；72℃延伸10分钟。

PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，确认分子量正确之后，切下目的条带，用AXYGEN胶回收试剂盒进行回收，即得到SAA基因片段。

扩增得到的SAA基因片段，其3’末端都带有一个碱基“A”，将其连接到TaKaRa的pMD-18T载体上，PCR鉴定阳性的克隆，进行测序，经过序列比对与SEQ ID NO:2有100％的同源性，证明基因获取成功，得到pMD-18T-SAA克隆。

用AXYGEN质粒提取试剂盒提取pMD-18T-SAA质粒，用NEB的BamHI和EcoRI酶，切下SAA基因片段，连接到经过同样酶切过的质粒载体pcDNA3.1(+)上，连接物转化DH5α菌株，挑选经过PCR鉴定阳性的单克隆进行测序验证，证明pcDNA3.1(+)-SAA质粒构建成功。

预先培养HEK-293细胞至对数生长期，接种24孔培养至80-90％密度，用其转染PEI/pcDNA3.1(+)-SAA的转染试剂/质粒混合物，用抗生素G418筛选转染了基因的细胞。

对阳性细胞进行传代，用ELISA法检测上清进行高表达筛选(如表1所示)，成功获得一株能够稳定高表达SAA的细胞株pcDNA3.1(+)-SAA(HEK-293)8A1,其上清中SAA浓度达到12mg/L。

经过多次转瓶扩增培养8A1细胞，收集到5L的细胞上清，用Superdex75以及DEAE纯化，最终得到44.2mg重组SAA蛋白，纯度达到95％以上。

表1：SAA单克隆抗体ELISA检测结果。

实施例2 SAA抗体制备

将实施例1制备的SAA重组抗原用20mM Tris-HCl pH8.0透析，并用透析液稀释到1mg/ml，与佐剂按照1：1比例混合，乳化。

乳化后的SAA抗原免疫8周龄Balb/c小鼠，每只小鼠免疫100ug，初次免疫用弗氏完全佐剂，加强免疫用弗氏不完全佐剂。

免疫三针后，采尾静脉血，测定效价，选择效价超过100万者进行细胞融合。

融合前72小时冲击免疫，向腹腔内注射30-50ug SAA抗原。

将待融合的小鼠处死，取脾，在200目筛网中碾磨，同时用RPMI1640培养基洗，将细胞悬液转移到50ml离心管中，用RPMI1640培养基洗4遍，每次15000rpm离心5min。

将骨髓瘤细胞用RPMI1640培养基洗4遍，每次15000rpm离心5min，最后1遍和脾细胞一起洗。

将混合后的脾细胞和骨髓瘤细胞1500rpm离心5min，弃去上清，轻弹管底，将细胞弹起；缓慢加入1ml提前预温至37℃的PEG1450，边加边混匀，60s内加完；随即加入40ml提前预温至37℃的RPMI 1640培养基终止融合反应，1500rpm离心5min；将细胞弹起，转移至RPMI1640HAT细胞培养基中，混匀后铺板。

铺板之后定时换液并检测上清，挑选高值阳性孔进行亚克隆，3次亚克隆之后，最终选定15株杂交瘤单克隆细胞，其上清对HEK-293表达的人血清淀粉样蛋白A和天然血清淀粉样蛋白A都有较高反应(OD值>1.0)。

将15株杂交瘤细胞分别注射小鼠腹腔，收集产生的腹水，离心去掉沉淀物，上清用饱和硫酸铵初纯，Protein A柱亲和层析精纯，再透析到PBS缓冲液，最终得到了15株单抗，浓度都在5.0mg/ml以上，纯度都在95％以上。

对15株单抗进行亚型鉴定，其中12株是IgG，另外3株是IgM。

同时，将实施例1的重组SAA抗原，以1mg/只的剂量免疫成年新西兰大白兔，以0.5mg/只的剂量加强免疫3次，2周后采兔血检测血清抗SAA效价，选取效价高者，大量采血提取血清，离心收集抗血清，用饱和硫酸铵初纯，Protein A柱亲和层析精纯，再透析到PBS缓冲液，得到多克隆抗体称为SAA-PcMb1。

实施例3单克隆抗体与SAA-PcAb1配对

将SAA兔多抗SAA-PcAb1采用过碘酸钠法进行标记，取5mg HRP溶于0.5ml水中，加入新鲜0.06M NaIO₄水溶液0.5ml，混匀，4℃放置30min。

取出后加入0.16M乙二醇水溶液0.5ml，室温放置30min后，加入含5mg纯化抗体的水溶液1毫升，混匀并装透析袋对0.05M，pH9.51的碳酸盐缓冲液透析过夜。

取出后加入NaBH₄溶液(5mg/ml)0.2ml，置冰箱2h。

加入等体积饱和硫酸铵，冰箱放置30min后，离心，沉淀用2.5ml 20mM PBS重悬，加等体积甘油，混匀，保存。

将12株单克隆抗体用20mM PB7.4稀释至0.5-4ug/ml，每孔加100ul包被于96孔酶标板，37℃包被2h。

取出酶标板，弃去包被液，用PBST洗1遍，每孔加入200ul封闭液，37℃封闭2h。

取出酶标板，弃去封闭液，将稀释好的血清淀粉样蛋白A样品加入板中，每孔100ul，37℃反应30min。

取出酶标板，弃去样品，用PBST洗5遍，每孔加入酶标兔多抗SAA-PcAb1-HRP100ul，37℃反应30min。

取出酶标板，弃去SAA-PcAb1-HRP，用PBST洗5遍，每孔加入四甲基联苯胺和过氧化氢各50ul，37℃反应15min。

取出酶标板，每孔加入2M硫酸终止反应，将酶标板放入酶标仪中读值。

选定一株性能最佳的单抗做包被，即SAA-McAb1，由杂交瘤细胞株4D4所分泌。

实施例4免疫层析法检测

(1)胶体金制备：在锥形瓶中加入100ml超纯水，磁力加热搅拌器上加热至沸腾，加入1ml 1％氯金酸(Sigma-Aldrich公司，货号：16961-25-4)溶液，沸腾后立刻加入1ml 1％柠檬酸三钠(Sigma-Aldrich公司，货号：6132-04-3)水溶液，继续沸腾10分钟，然后自然冷却即可。

(2)胶体金标记：取10ml上述胶体金放入烧杯中，搅拌中加入0.1M K₂CO₃调节pH至7.0，继续搅拌5分钟；加入一定量的单抗SAA-McAb1，继续搅拌15-30分钟；加入0.1ml 10％BSA，继续搅拌15-30分钟；8000g离心59分钟，弃上清，将沉淀用胶体金稀释液(20mM PB，250mM NaCl，2％BSA，1％Sucrose，0.01％Proclin300)重悬，定容至1ml，充分混匀后放4℃保存。

(3)金标垫制备：将上述金标复合物用胶体金稀释液10倍稀释后浸泡玻璃纤维(Watman公司)，37℃烘2小时，即制成金标垫，干燥密封保存备用。

(4)硝酸纤维素膜(NC)膜包被：用检测线稀释液(10mM PBS+2％蔗糖)稀释兔多抗SAA-PcAb1至1mg/ml制成检测线工作液，用同一稀释液稀释羊抗鼠单抗至0.5mg/ml制成对照线工作液，用点膜仪将这两种工作液划到硝酸纤维素膜(Millipore公司，货号：HF135002)的相应位置上，37℃干燥8小时。

(5)将上述金标垫、包被好的硝酸纤维素膜以及吸水纸、聚酯板、样品垫等辅料组装成血清淀粉样蛋白A金标检测试剂盒。

(6)检测方法：加100ul待测样品(例如：血清)到样品垫处，室温放置5分钟之后，判定结果，判定标准如下，

①仅质控区出现一条带，在测试区内无条带出现，为阴性(-)；

②有两条条带出现，其中一条位于质控区，另一条位于测试区，表示阳性(+)；

③质控区未出现条带，表明不正确的操作过程或检测卡已变质损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试纸条重新测试。

(7)对比检测：依照上述胶体金试纸条制备工艺，将本发明的血清淀粉样蛋白A多克隆抗体SAA-PcAb1进行包被，将本发明所涉及的血清淀粉样蛋白A单克隆抗体SAA-McAb1进行标记，然后配对组装成试纸条，检测61份西门子公司血清淀粉样蛋白A检测检测试剂盒检测后的临床标本，结果表明，试纸条检测灵敏度可以达到2mg/L,线性范围2-200mg/L,与西门子检测结果相关性R²＝0.96(如图3为SAA免疫层析检测结果与西门子试剂临床相关性)

由此可见，本发明所涉及的血清淀粉样蛋白A单克隆抗体制备的免疫层析试纸条性能优异。

实施例5化学发光法检测

(1)磁珠包被抗体：取2mg PM3-008磁珠到1.5ml离心管中，用500ul MEST(10mMMES，pH6.0，0.05％Tween 20)洗涤2次，弃上清。加入200ul新配制的EDC(5mg/ml)和200ulNHS(5mg/ml)，混匀，37℃活化30min，弃上清。加入500ul BST(5mM boric acid，0.05％Tween 20，pH9.0)，混匀，弃上清，再用500ul BST洗涤2次。加入100ug单抗SAA-McAb1到磁珠，翻滚混匀，弃上清，再用1ml BST洗涤2次，用5ml磁珠保存液重悬。

(2)吖啶酯标记抗体：取兔多克隆抗体SAA-PcAb1，200ul加入600ul 0.1M PBS(pH8.0)中，加入150ul 0.5mM的AE(溶于甲基甲酰胺中)，混匀，室温避光反应20min。加赖氨酸溶液(8mg赖氨酸溶于200ul pH8.0的PBS)放置15min，对10mM pH6.5的PBS透析过夜，次日用葡聚糖凝胶G50纯化。

(3)化学发光法检测：向封闭好的微孔板中加入50ul磁珠包被的抗体SAA-McAb1、25ul抗原或待测标本、50ul分析缓冲液，室温孵育15min，洗涤液200ul每次小心洗涤3次，吸干。每孔加入用分析缓冲液按照1：100倍稀释的吖啶酯标记抗体SAA-McAb1 50ul，室温反应10min，洗涤液200ul每次小心洗涤5次，吸干。每孔加入200ul洗涤液，用移液器吹匀，转移到2ml发光管中，磁力架上吸干上清。加入100ul预激发液A液，上机检测再加入100ul激发液B液，检测发光值。

(4)用本发明单抗配对检测西门子试剂盒检测过的129份临床标本，从校准曲线中可以看出，用单克隆抗体SAA-McAb1包被磁珠，用SAA-PcAb1标记吖啶酯，这株单克隆抗体建立的人血清淀粉样蛋白A化学发光检测试剂灵敏度为0.5mg/L，线性范围为1-400mg/L,与西门子检测结果相关性R²＝0.97(图4为SAA化学发光检测结果与西门子试剂临床相关性)。

实施例6免疫比浊法检测

(1)聚苯乙烯微球的活化：选择微球粒径307nm，浓度100mg/ml(10％)，羧基密度59，用50mM pH6.0MES-HCl将微球稀释20倍，加入NHS之后再加入EDC，其中EDC：COOH＝2:1，NHS：COOH＝3.4:1，活化20分钟。

(2)配制偶联用抗体：以每管75ug抗体/1mg微球的比例，用50mM pH6.0MES稀释抗体SAA-McAb1和SAA-PcAb1。

(3)微球偶联抗体：活化完成后的微球16000rpm/min离心15分钟，弃上清，用稀释抗体的MES复溶微球(超声75s)；复溶之后，微球加入抗体中并超声(75s)，微球：抗体＝250:500。将每管偶联物置于翻转仪上，室温翻转2h。

(4)终止：加入5ul/ml乙醇胺终止30分钟。

(5)封闭：离心终止后的偶联物(16000rpm/min,15min)，弃上清，用R2(封闭液，20mM pH8.0Gly-Tris，3％海藻糖，2％BSA，0.1％Tween-20，0.05％proclin)复溶，37℃烘箱一夜，第二天上机检测。

(6)检测结果：检测71份西门子试剂盒测过的临床标本，灵敏度0.5mg/L，线性范围1-400mg/L，与西门子检测结果相关性R²＝0.965(图5为SAA免疫比浊法检测结果与西门子试剂临床相关性)。

综上所述：通过实施例1、2、3得到杂交瘤细胞株4D4所分泌的特异性识别人血清淀粉样蛋白A的单克隆抗体SAA-McAb1，通过实施例4、5、6不同的检测平台检测，标本中的人血清淀粉样蛋白A含量，均具有灵敏度高，特异性好，线性范围宽，不同检测平台通用性好的优点，能够替代现有试剂盒中的SAA单克隆抗体。

序列表

<120> 分泌人血清淀粉样蛋白A单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 104

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 1

Arg Ser Phe Phe Ser Phe Leu Gly Glu Ala Phe Asp Gly Ala Arg Asp

1 5 10 15

Met Trp Arg Ala Tyr Ser Asp Met Arg Glu Ala Asn Tyr Ile Gly Ser

20 25 30

Asp Lys Tyr Phe His Ala Arg Gly Asn Tyr Asp Ala Ala Lys Arg Gly

35 40 45

Pro Gly Gly Ala Trp Ala Ala Glu Val Ile Ser Asp Ala Arg Glu Asn

50 55 60

Ile Gln Arg Phe Phe Gly His Gly Ala Glu Asp Ser Leu Ala Asp Gln

65 70 75 80

Ala Ala Asn Glu Trp Gly Arg Ser Gly Lys Asp Pro Asn His Phe Arg

85 90 95

Pro Ala Gly Leu Pro Glu Lys Tyr

100

<210> 3

<211> 247

<212> RNA

<213> Nucleotide sequence of coding region

<400> 3

cgaagcccgc cggcgaggcg aggggccggg acagggagag ccaccgacag agagaagcca 60

aacacggcca gacaaaaccc agccggggga acagagcgcc aaaaggggac cggggggccg 120

ggcgcagaag gacagcgagc cagagagaaa ccagagacgg ccagggcgga ggaccgcggc 180

gacaggcgcc aagaaggggc aggagggcaa agaccccaac acccgaccgc ggccgccgag 240

aaaacaa 247

<210> 4

<211> 3

<212> DNA

<213> amplified polymorphic

<400> 4

<210> 5

<211> 21

<212> DNA

<213> amplified polymorphic

<400> 5

ggggaacaga ccaggcaggc c 21

Claims (5)

1.一株分泌人血清淀粉样蛋白A单克隆抗体的杂交瘤细胞株4D4，其特征在于，其保藏于CCTCC，保藏编号是CCTCC NO:C2019121。

2.一种由权利要求书1所述的杂交瘤细胞株4D4所分泌的特异性识别人血清淀粉样蛋白A的单克隆抗体SAA-McAb1。

3.一种权利要求书2所述的特异性识别人血清淀粉样蛋白A的单克隆抗体SAA-McAb1在检测人血清淀粉样蛋白A中的应用。

4.一种运用权利要求书2所述的特异性识别人血清淀粉样蛋白A的单克隆抗体SAA-McAb1制备的人血清淀粉样蛋白A免疫检测试剂盒。

5.根据权利要求4所述的人血清淀粉样蛋白A免疫检测试剂盒，其特征在于，包含了权利要求2所述的单克隆抗体SAA-McAb1。