CN110420129A - 一种天然产物组合物、美白祛斑用途和在化妆品中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种天然产物组合物、美白祛斑用途和在化妆品中的应用。本发明表明，商陆皂苷B或商陆皂苷C均具有优异的美白祛斑活性，且二者存在协同美白效应，商陆皂苷B、商陆皂苷C对皮肤安全性也高。因此，商陆皂苷B、商陆皂苷C单独或联合可以用于制备美白祛斑化妆品，如作为美白祛斑霜、美白祛斑乳液的活性美白成分。

Description

一种天然产物组合物、美白祛斑用途和在化妆品中的应用
技术领域
本发明属于化学领域，涉及天然产物组合物的美白祛斑用途及产业化应用，具体涉及一种天然产物组合物、美白祛斑用途和在化妆品中的应用。
背景技术
化妆品常根据用途不同添加不同功能的添加剂，如美白祛斑添加剂，抗衰老添加剂，保湿补水添加剂，抗紫外线添加剂等。俗话说，“一白遮百丑”，美白祛斑化妆品是众多化妆品中的重要类目。目前应用较为广泛的天然美白祛斑添加剂如熊果苷。
发明内容
本发明第一目的在于提供一种天然产物组合物，第二目的在于提供该天然产物组合物的美白祛斑用途，第三目的在于提供该天然产物组合物用于制备美白祛斑化妆品的用途。
本发明上述目的通过如下技术方案实现：
一种天然产物组合物，由商陆皂苷B和商陆皂苷C组成。
优选地，所述商陆皂苷B和商陆皂苷C的物质的量之比为2:1或2.5:1。
上述天然产物组合物的美白祛斑用途。
上述天然产物组合物在制备美白祛斑化妆品中的应用。
商陆皂苷B或商陆皂苷C在制备美白祛斑化妆品中的应用。
进步效果：
本发明表明，商陆皂苷B或商陆皂苷C均具有优异的美白祛斑活性，且二者存在协同美白效应，商陆皂苷B、商陆皂苷C对皮肤安全性也高。因此，商陆皂苷B、商陆皂苷C单独或联合可以用于制备美白祛斑化妆品，如作为美白祛斑霜、美白祛斑乳液的活性美白成分。
附图说明
图1为商陆皂苷B对酪氨酸酶的抑制率曲线；
图2为商陆皂苷C对酪氨酸酶的抑制率曲线；
图3为商陆皂苷B、C联用的金正均q值分布。
具体实施方式
下面结合实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。
实施例1：商陆皂苷B和商陆皂苷C的美白及协同作用
按照文献方法测试样品的酪氨酸酶抑制活性(任红荣、单承莺、姜洪芳、张卫明，香水莲花提取物抑制酪氨酸酶活性的研究，天然产物研究与开发，2011，23:1122-1126)。
具体步骤如下：
一、试剂配制
1、磷酸钠缓冲液(1/15M，pH＝6.8)
精确称取1.0001g磷酸二氢钠，1.1860g磷酸氢二钠，加入少量去离子水溶解后，定容至500mL，4℃冰箱保存备用。
2、L-酪氨酸溶液(7.5mmol/L)
精确称取L-酪氨酸0.2721g，先加入数滴浓盐酸，加去离子水约50mL，微热完全溶解后，用氢氧化钠溶液调pH至7.0，加去离子水定容至200mL。
3、受试液
商陆皂苷B待测液：精确称取商陆皂苷B用去离子水(含有体积百分浓度为10％的二甲基亚砜)溶解配制成浓度为40mM、20mM、10mM、5mM、2mM的系列溶液；
商陆皂苷C待测液：精确称取商陆皂苷C用去离子水(含有体积百分浓度为10％的二甲基亚砜)溶解配制成浓度为25mM、10mM、5mM、2mM、1mM的系列溶液；
商陆皂苷B和C混合待测液：精确称取商陆皂苷B、商陆皂苷C用去离子水(含有体积百分浓度为10％的二甲基亚砜)溶解配制成浓度为20mM商陆皂苷B+10mM商陆皂苷C、10mM商陆皂苷B+5mM商陆皂苷C、5mM商陆皂苷B+2mM商陆皂苷C、2mM商陆皂苷B+1mM商陆皂苷C的系列溶液。
4、阳性对照
精确称取熊果苷用去离子水(含有体积百分浓度为10％的二甲基亚砜)溶解并稀释成浓度为40mM、20mM、10mM、5mM、2mM的系列溶液。
5、酪氨酸酶液的制备
以新鲜完好的马铃薯制取酪氨酸酶液，具体操作为：
将马铃薯洗净，于4℃预冷4h左右。去皮，切成约1×1×1cm3丁状，于-20℃冷冻过夜。称重，按1:1(w:v)的比例加入4℃预冷的磷酸钠缓冲液，用组织捣碎机制成匀浆，3层纱布过滤，滤液于4000r/min离心10min，上清即为酪氨酸酶粗酶液，4℃保存，2h内用完。
二、样品对酪氨酸酶活性的抑制作用
总反应体系为5mL，具体设计见表1。其中，用分光光度计测量吸光值时，“受试液”、“标准对照”、“阳性对照”分别以“阴性对照1”、“阴性对照2”和“阴性对照3”调零。
表1试验体系设计
在此体系中：
商陆皂苷B的终浓度为4mM、2mM、1mM、0.5mM、0.2mM；
商陆皂苷C的终浓度为2.5mM、1mM、0.5mM、0.2mM、0.1mM；
商陆皂苷B+C的终浓度为2+1mM、1+0.5mM、0.5+0.2mM、0.2+0.1mM；
熊果苷的终浓度为4mM、2mM、1mM、0.5mM、0.2mM。
实验时，向试管中依次加入磷酸盐缓冲液、不同浓度梯度的受试液或熊果苷和酶液，于30℃水浴10min。然后加入底物L-酪氨酸，立即开始计时。测定反应20min时475nm波长下的吸光值。测定时以相应的阴性对照为参比，用下列公式计算受试液或熊果苷对酪氨酸酶的抑制率，并依据浓度-酶抑制率曲线估算半数抑制浓度(IC50)的近似值。
抑制率(％)＝(A-B)÷A×100％
其中，“A”为标准对照的吸光值，“B”为受试液或熊果苷的吸光值。每个实验做3个平行。抑制率高表明其对酪氨酸酶活性的抑制强度高。
三、测试结果
商陆皂苷B、C对酪氨酸酶的抑制率和IC50值如表2、图1～2所示。熊果苷的IC50值为1.1mM，商陆皂苷B和商陆皂苷C对酪氨酸酶的抑制活性与熊果苷接近。
表2商陆皂苷B、C单独及联合对酪氨酸酶的抑制率
金正均q值用来评价两种不同抑制剂之间是否存在协同作用，计算公式为：
q＝Ea+b/(Ea+Eb－Ea×Eb)；
其中，Ea、Eb为两种抑制剂单独作用的抑制率，Ea+b为两种抑制剂联合作用的抑制率(即合并用药抑制率)，式中分子代表“实测合并效应”，分母代表“期望合并效应”；
q＜0.85，代表两种抑制剂的抑制作用存在拮抗效应；
0.85≤q＜1.15，代表两种抑制剂的抑制作用为简单的相加效应；
q≥1.15，代表两种抑制剂的抑制作用存在协同效应。
测试的4组合并用药结果均显示商陆皂苷B、C对酪氨酸酶的抑制作用存在协同效应，金正均q值如表2和图3所示。
实施例2：过敏性测试(斑贴试验)
受试物为商陆皂苷B和商陆皂苷C的混合物。参照《化妆品安全技术规范》(2015版)选取30名健康志愿者作为受试者，其中男15名，女15名。沐浴后，取受试物商陆皂苷B或商陆皂苷C 0.025g分别置于斑试器小室，将加有受试物的斑试器用低致敏胶带贴敷于受试者的背部或前臂曲侧，用手掌轻压使之均匀地贴敷于皮肤上，持续24h。
分别于去除受试物斑试器后30min(待压痕消失后)、24h和48h按表3标准观察皮肤反应，并记录观察结果并参考表3进行评价。
表3皮肤封闭型斑贴试验皮肤反应分级标准
结果30名志愿者经商陆皂苷B或商陆皂苷C接触后皮肤反应均为阴性，阴性率100％。
实验结果说明，商陆皂苷B或商陆皂苷C均具有优异的美白祛斑活性，且二者存在协同美白效应，商陆皂苷B、商陆皂苷C对皮肤安全性也高。因此，商陆皂苷B、商陆皂苷C单独或联合可以用于制备美白祛斑化妆品，如作为美白祛斑霜、美白祛斑乳液的活性美白成分。

Claims (5)

1.一种天然产物组合物，其特征在于：由商陆皂苷B和商陆皂苷C组成。
2.根据权利要求1所述的天然产物组合物，其特征在于：所述商陆皂苷B和商陆皂苷C的物质的量之比为2:1或2.5:1。
3.权利要求1或2所述天然产物组合物的美白祛斑用途。
4.权利要求1或2所述天然产物组合物在制备美白祛斑化妆品中的应用。
5.商陆皂苷B或商陆皂苷C在制备美白祛斑化妆品中的应用。
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