CN110339343B - 核受体Rev-erbα在制备抗脓毒症心肌病的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种核受体Rev‑erbα在制备抗脓毒症心肌病的药物中的应用，所述的核受体Rev‑erbα的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明还提供了Rev‑erbα激动剂SR9009在制备抗脓毒症心肌病的药物中的应用。通过实验证明，核受体Rev‑erbα在脓毒症小鼠的心肌组织中表达下调，Rev‑erbα缺失会加重LPS诱导的心肌损伤和心功能不全，Rev‑erbα激动剂SR9009可以改善LPS诱导的心肌损伤和心功能障碍和生存率。Rev‑erbα可以提高脓毒症小鼠生存率，核受体Rev‑erbα通过抑制炎症发挥心肌保护作用，有效地改善脓毒症导致的心肌损伤、心功能障碍和死亡率。

Description

核受体Rev-erbα在制备抗脓毒症心肌病的药物中的应用

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种心血管药物，尤其涉及一种治疗脓毒症心肌病的核受体，具体来说是核受体Rev-erbα在制备抗脓毒症心肌病的药物中的应用。

背景技术

目前我国因心血管病死亡患者占40％以上，远高于肿瘤及其他疾病。然而，其患病率及死亡率仍处于上升阶段，使得心血管病负担日渐加重，面临严峻挑战。除急性心肌梗死等常见的病因外，脓毒症心肌病作为心血管疾病重要的致病因素，日渐受到人们的关注和重视。随着平均寿命的延长和细菌对抗生素耐药性的增加，脓毒症已成为全球十大死亡原因之一，并且其发病率逐年增高。脓毒症之所以有如此高的死亡率，是因为其容易并发心肺肾等重要脏器功能衰竭，而并非原发感染本身。其中以心功能障碍(脓毒症心肌病)最为常见，它是脓毒症患者的主要临床表现和重要死亡预测指标之一。一旦合并心功能障碍，脓毒症患者死亡率从20％显著增高至70-90％。脓毒症心肌病主要表现为内毒素介导的心室收缩功能下降，其主要原因为促炎细胞因子，如肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素1β(IL1β)、IL6的急剧升高。然而目前的治疗方法主要局限于液体复苏、抗生素、器官功能支持等，缺乏特异性和针对性的治疗措施。因此，探索脓毒症心肌病的新型有效治疗方法已成为基础和临床研究的重要课题。

核受体(Nuclearreceptors，NRs)是一类具有多种生理功能的转录因子超家族，也是众多FDA批准药物的分子靶标。它们通过与相应的配体相结合，调控靶基因的转录，在机体生长发育、物质代谢、免疫等方面发挥着关键作用。核受体Rev-erbα，也称为NR1D1(Nuclearreceptorsubfamily1，groupD，member1)，在机体的多种组织器官上广泛分布，其中在心脏、脑、骨骼肌、肝脏以及脂肪等部位含量最为丰富，并且其表达呈出一定的节律性。之前的研究表明Rev-erbα在生物节律、炎症、代谢、发育等病理生理过程中发挥关键作用。后来研究发现，在动脉粥样硬化等炎症性血管疾病中，Rev-erbα以细胞类型特异性的方式调节巨噬细胞、血管平滑肌细胞等细胞的炎症反应。最近有研究指出Rev-erbα在心脏疾病中也发挥差异性的功能性作用，即Rev-erbα减轻心肌肥厚和心肌梗死，但加重围术期心肌缺血再灌注损伤。然而，到目前为止Rev-erbα对脓毒症心肌病的影响仍知之甚少。

Rev-erbα是核受体超家族的成员之一，于1989年首次被Lazar等从大鼠垂体瘤细胞(GH3细胞)中分离获得。发现之初因未能找到其内源性生理性配体，故一直被称为孤儿核受体。直至2007年，Raghuram等发现血红素(Heme)是Rev-erb特异性的生理性配体。后来，研究者们设计并合成了多个外源性的配体，并证明了这些配体能通过Rev-erb有效地调节生物节律与代谢平衡等，说明Rev-erb作为新的药物靶点对未来治疗相关疾病具有重要临床和现实意义。

现已明确Rev-erbα基因位于17q21.1，基因长度约7.9kb，是由甲状腺素受体α基因(也称作c-erbA癌基因)的反向DNA链编码而成，故被命名为c-erbA的相反链(c-erbAreversestrand，即Rev-erbα)。Bonnelye等研究发现Rev-erbβ(NR1D2)是它的同源异构体，其基因定位于3p24.4，基因长度约5.0kb。两者编码基因高度同源，结构相似。在人体内，Rev-erbα和Rev-erbβ蛋白分别由614和579个氨基酸残基组成，在氨基端(N端)均含有一个氨基酸可变区(A/B域)和一个高度保守的锌指结构区DNA结合域(DBD)，在羧基端(C端)均含有一个配体结合域(LBD)。其中DNA结合域含有核定位序列且富含半胱氨酸，可通过保守的锌指结构与DNA特异序列结合，羧基端的配体结合域可与特异性的配体结合。由于Rev-erbα羧基末端的配体结合域内缺乏转录激活域AF-2，因此不能与辅激活因子结合，故常表现出结构性转录抑制活性。事实上，配体结合域含有一段暴露的疏水结构域，能稳定结合某些核受体辅助抑制因子(N-CoR)，并且Rev-erbα与其主要配体血红素的结合能够使N-CoR的招募增加，进一步稳定Rev-erbα的蛋白构象，随后该复合物能结合到靶基因启动子区的特异性顺式作用元件—RORα反应元件(RORαresponse element，RORE，通常由5’-端富含A/T的序列与核心序列PuGGTCA组成)上，进而由表观修饰酶如组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3，Histonedeacetylase3)来影响染色质的构象，达到对靶基因的转录抑制作用。目前研究已表明，Rev-erbα对靶基因的调节既可以以单体的形式与RORE结合，也可以以同源二聚体形式结合到由两个核苷酸隔开的两个RORE上，后者被称为RevDR2反应元件。

Rev-erbα可通过上述机制参与机体生物钟震荡节律的调节，构成生物钟负反馈环的重要分支，从而在各器官维持正常生物钟节律中发挥关键作用。到目前为止，许多研究表明Rev-erbα不仅是昼夜节律的重要调节基因，而且还可通过上述机制参与调节炎症反应、糖脂代谢、脂肪细胞分化、细胞增殖、以及线粒体功能等。另外，心血管系统多项指标，比如血压、心率、纤溶等，总是表现出了一定的昼夜节律，并且心肌梗塞与中风等也都具有清晨高发的特点，这提示生物钟核受体Rev-erbα可能参与心血系统疾病。确实最近有一些研究证实了Rev-erbα在某些心血管系统疾病中发挥特定的功能，但其发挥有益还是有害的作用主要取决于病理刺激因素的类型。

人Rev-erbα由614个氨基酸残基组成，在心脏中有较高水平的表达。其基因位于人17号染色体反义链上，其位点信息如下：Homo sapiens chromosome 17，GRCh38.p12Primary Assembly，NC_000017.11(40092784..40100725，complement)。其转录本(NM_021724.5)(mRNA)序列如SEQ ID NO.1所示；其蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

发明内容

本发明的目的在于提供一种核受体Rev-erbα在制备抗脓毒症心肌病的药物中的应用，所述的这种核受体Rev-erbα在制备抗脓毒症心肌病的药物中的应用要解决现有技术中对于治疗脓毒症心肌病的药物效果不佳的技术问题。

本发明提供了一种核受体Rev-erbα在制备抗脓毒症心肌病的药物中的应用。

进一步的，所述的核受体Rev-erbα的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明还提供了Rev-erbα激动剂SR9009在制备抗脓毒症心肌病的药物中的应用。

通过实验证明，核受体Rev-erbα在脓毒症小鼠的心肌组织中表达下调，Rev-erbα缺失会加重LPS诱导的心肌损伤和心功能不全，Rev-erbα激动剂SR9009可以改善LPS诱导的心肌损伤和心功能障碍和生存率。Rev-erbα可以提高脓毒症小鼠生存率，核受体Rev-erbα主要通过抑制炎症发挥心肌保护作用。核受体Rev-erbα可有效地改善脓毒症导致的心肌损伤、心功能障碍和死亡率。

本发明和已有技术相比，其技术效果是积极和明显的。本发明公开的Rev-erbα可以通过降低心肌炎症水平发挥抗脓毒症心肌病作用。

附图说明

图1为Rev-erbα在LPS诱导的脓毒症心肌病心肌组织中的表达变化规律。

图2为Rev-erbα缺失对脓毒症心肌病的影响。

图3为Rev-erbα激动剂SR9009对脓毒症心肌病的影响。

图4为Rev-erbα对脓毒症小鼠生存率的影响。

图5为核受体Rev-erbα降低脓毒症心肌炎症水平。

具体实施方式

下面参照附图，结合具体的实施例对本发明作进一步的说明，以更好地理解本发明。

以下是本发明的具体实施例，所述的实施例是用来描述本发明，而不是限制本发明。

下述实施例中采用的试剂及实验方法如下：

分子生物化学试剂：脂多糖(LPS)、蛋白酶与磷酸酶抑制剂、β-巯基乙醇、十二烷基硫酸钠、Tris碱等购自Sigma美国，BCA定量试剂盒购自ThermoScientific美国，30％甲叉双丙烯酰胺购自为Bio-Rad美国，三乙醇胺缓冲液(TBS)、吐温-20、磷酸盐缓冲液(PBS)、Rev-erbα引物等购自生工生物中国，辣根过氧化物酶化学发光液购自Millipore美国，异氟烷购自鲁南贝特中国，核糖核酸逆转录试剂盒、脱氧核酸扩增试剂盒购自Takara日本，Rev-erbα抗体购自abcam美国，GAPDH抗体购自CellSignalingTechnology美国，辣根过氧化物酶二抗购自Jackson美国，ELISA试剂盒购自R&Dsystem美国，Rev-erbα激动剂SR9009购自MCE美国。

实施例1

小鼠脓毒症模型的建立：12-14周龄小鼠放入麻醉罐中，经麻醉机持续吸入浓度为2％的异氟烷进行麻醉(通气速率2L/min)。配制含脂多糖(LPS)的生理盐水溶液0.5mg/mL，使用1mL注射器按0.2mL/10g腹腔注射LPS溶液。对照组腹腔注射等量的生理盐水。在注射后不同时间点进行相应的检测。

在C57BL/6J小鼠腹腔注射LPS(10mg/kg)后不同时间点(0小时、1小时、3小时、6小时)，使用免疫印迹和实时荧光定量PCR的方法在转录和翻译水平对Rev-erbα进行检测，发现其表达随LPS刺激时间延长逐渐下调(图1)。其中，图1A为蛋白质免疫印迹检测心肌组织中Rev-erbα表达的代表性图片(上图)及半定量结果(下图)；图1B为实时荧光定量PCR对心肌组织中Rev-erbα的mRNA进行定量分析的统计结果。

实施例2

小动物心脏超声评价：将小鼠用2％异氟烷持续吸入麻醉并仰卧位固定于自带加热功能的超声检查台上，先用脱毛膏脱去其心前区鼠毛，使用VisualSonics公司的VeVo770超声诊断仪和30MHz高频探头在胸壁上采集胸骨旁长轴切面，记录心电图、测量心率。在胸骨旁左室短轴切面二尖瓣下乳头肌水平获得二维超声切面图像，测量左室收缩末内径(LVIDs)、左室舒张末内径(LVIDd)、左室射血分数(LVEF)和缩短分数(LVFS)。各组小鼠检查的仪器参数设置保持相同，并由同一人进行图像采集和计算，每个测量指标均选取4-5个不同心动周期的平均值。

C57BL/6J背景的Rev-erbα缺失(KO)小鼠由上海南方模式生物科技有限公司构建。12-14周龄SPF级KO小鼠及其同窝野生型对照小鼠(WT)随机分到LPS组和生理盐水(Saline)组。于LPS注射后6小时进行形态学和功能学检测，发现KO小鼠心肌细胞坏死和凋亡显著增加，小动物心脏超声和血流动力学检查提示Rev-erbα缺失心功能恶化加剧(图2)。其中，图2A为各组小鼠心肌组织H&E染色代表性的图片，箭头指示坏死或凋亡的心肌细胞，可以看到Rev-erbα敲除后心肌细胞的坏死和凋亡增多；图2B为小动物心脏超声评估各组小鼠左室缩短分数的统计结果，Rev-erbα敲除后小鼠心功能明显受损；图2C为血流动力学评估各组小鼠左室内压最大上升速率的统计结果，结果提示Rev-erbα敲除后小鼠心脏收缩功能显著降低；图2D血流动力学评估左室内压最大下降速率的统计结果，结果提示Rev-erbα敲除后小鼠心脏舒张功能显著降低。

实施例3

血流动力学检测：小鼠采用水合氯醛腹腔注射麻醉后，酒精消毒后行右侧颈部皮肤切口，分离皮下组织并暴露右侧颈动脉，采用双线在血管的远心端结扎，随后在近心端使用活结结扎，在远心端剪一个小口，体式显微镜直视下插入1.4FMillar导管，用缝线将导管和血管结扎固定后打开近心端活结，将导管经右颈总动脉、主动脉送入左心室，最后连接Powerlab生物信号采集处理系统，根据记录仪上的波形调整导管使波形图清晰、稳定后记录各血流动力学指标。

给予C57BL/6J野生型小鼠腹腔注射Rev-erbα激动剂SR9009，增强Rev-erbα活性。12-14周龄SPF级WT小鼠随机分到LPS组和生理盐水(Saline)组。于LPS刺激后6小时进行一系列相关检测，发现Rev-erbα激动剂SR9009显著减轻心肌细胞坏死和凋亡，明显改善脓毒症小鼠心功能(图3)。其中，图3A为各组小鼠心肌组织H&E染色代表性的图片，箭头指示坏死或凋亡的心肌细胞，可以看到药物激动Rev-erbα后心肌细胞的坏死和凋亡减轻；图3B为小动物心脏超声评估各组小鼠左室缩短分数的统计结果，Rev-erbα激活后小鼠心功能明显改善；图3C为血流动力学评估各组小鼠左室内压最大上升速率的统计结果，结果提示药物激活Rev-erbα后小鼠心脏收缩功能显著增强；图3D血流动力学评估各组小鼠左室内压最大下降速率的统计结果，结果提示Rev-erbα激活后小鼠心脏舒张功能显著改善。

实施例4

H&E染色：脓毒症小鼠心脏于10％甲醛室温固定24小时后包埋。包埋的样品放置于石蜡切片机上切片，并在60摄氏度烤箱内烘片60分钟(防止脱片)。取出后浸入二甲苯中脱蜡5分钟×3次，然后依次放入100％、95％、70％酒精各1分钟，水合后双蒸水清洗数分钟。甩去玻片上的水分，苏木素染色5分钟后自来水洗去浮色，在1％盐酸酒精中快速分化。自来水洗后浸入Scott液返蓝1分钟。甩去玻片上的水分，伊红染色3分钟。蒸馏水洗去浮色，依次放入70％、95％和100％酒精中各30秒。最后放入二甲苯中2分钟×3次，用树脂封片，平放静置于切片盒内，待吹干后拍照。于光学显微镜下拍照并存储。

腹腔注射大剂量LPS(20mg/kg)后观察Rev-erbα缺失和Rev-erbα激动剂SR9009对小鼠生存率的影响，结果发现Rev-erbα缺失显著增加脓毒症小鼠的死亡率，而激动Rev-erbα能提高脓毒症小鼠的生存率(图4)。其中，图4A为给予大剂量LPS后Rev-erbα缺失小鼠和WT小鼠的生存曲线，结果提示Rev-erbα缺失明显加速脓毒症小鼠的死亡；图4B为给予大剂量LPS注射后激动剂SR9009组和对照组小鼠的生存曲线，结果提示药物激活Rev-erbα能显著改善脓毒症小鼠生存率。

实施例5

ELISA检测IL1β和TNFα含量：按照R&D公司相应的ELISA试剂盒说明书进行操作，取出液氮内保存的心肌组织，加入适量配好的蛋白裂解液，用电动研磨器充分研磨成匀浆。离心后吸取上清，并用BCA法测定各蛋白样品浓度。用双蒸水把10×标本稀释液稀释成1×工作液，把洗涤液按1:40稀释，然后置于室温备用。配制浓度梯度标准品。加样并在酶标仪上读取波长为450nm和560nm的吸光值。依据标准品的浓度和吸光度数值制作标准曲线。根据标准曲线计算出待测样品的浓度。

使用ELISA方法检测各组小鼠心肌组织中IL1β和TNFα含量，实验结果提示Rev-erbα缺失增加心肌IL1β和TNFα的表达水平，而激动Rev-erbα则可抑制IL1β和TNFα的表达(图5)。其中，图5A为腹腔注射LPS或生理盐水后，Rev-erbα缺失小鼠和WT小鼠心肌组织中IL1β含量，结果提示Rev-erbα缺失显著增加心肌组织中IL1β蛋白含量；图5B为腹腔注射LPS或生理盐水后，Rev-erbα缺失小鼠和WT小鼠心肌组织中TNFα含量，结果提示Rev-erbα缺失显著增加心肌组织中TNFα蛋白含量；图5C为腹腔注射LPS或生理盐水后，激动剂SR9009组和对照组小鼠心肌组织中IL1βmRNA水平，结果提示Rev-erbα激活显著抑制心肌组织中IL1β转录；图5A为腹腔注射LPS或生理盐水后，激动剂SR9009组和对照组小鼠心肌组织中TNFαmRNA水平，结果提示Rev-erbα激活显著抑制心肌组织中TNFα转录。

序列表

<110> 上海交通大学医学院附属仁济医院

<120> 核受体Rev-erbα在制备抗脓毒症心肌病的药物中的应用

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 2630

<212> DNA/RNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 1

agagtgaaat attactgccg agggaacgta gcagggcaca cgtctcgcct ctttgcgact 60

cggtgccccg tttctcccca tcacctactt acttcctggt tgcaacctct cttcctctgg 120

gacttttgca ccgggagctc cagattcgcc accccgcagc gctgcggagc cggcaggcag 180

aggcaccccg tacactgcag agacccgacc ctccttgcta ccttctagcc agaactactg 240

caggctgatt ccccctacac actctctctg ctcttcccat gcaaagcaga actccgttgc 300

ctcaacgtcc aacccttctg cagggctgca gtccggccac cccaagacct tgctgcaggg 360

tgcttcggat cctgatcgtg agtcgcgggg tccactcccc gcccttagcc agtgcccagg 420

gggcaacagc ggcgatcgca acctctagtt tgagtcaagg tccagtttga atgaccgctc 480

tcagctggtg aagacatgac gaccctggac tccaacaaca acacaggtgg cgtcatcacc 540

tacattggct ccagtggctc ctccccaagc cgcaccagcc ctgaatccct ctatagtgac 600

aactccaatg gcagcttcca gtccctgacc caaggctgtc ccacctactt cccaccatcc 660

cccactggct ccctcaccca agacccggct cgctcctttg ggagcattcc acccagcctg 720

agtgatgacg gctccccttc ttcctcatct tcctcgtcgt catcctcctc ctccttctat 780

aatgggagcc cccctgggag tctacaagtg gccatggagg acagcagccg agtgtccccc 840

agcaagagca ccagcaacat caccaagctg aatggcatgg tgttactgtg taaagtgtgt 900

ggggacgttg cctcgggctt ccactacggt gtgcacgcct gcgagggctg caagggcttt 960

ttccgtcgga gcatccagca gaacatccag tacaaaaggt gtctgaagaa tgagaattgc 1020

tccatcgtcc gcatcaatcg caaccgctgc cagcaatgtc gcttcaagaa gtgtctctct 1080

gtgggcatgt ctcgagacgc tgtgcgtttt gggcgcatcc ccaaacgaga gaagcagcgg 1140

atgcttgctg agatgcagag tgccatgaac ctggccaaca accagttgag cagccagtgc 1200

ccgctggaga cttcacccac ccagcacccc accccaggcc ccatgggccc ctcgccaccc 1260

cctgctccgg tcccctcacc cctggtgggc ttctcccagt ttccacaaca gctgacgcct 1320

cccagatccc caagccctga gcccacagtg gaggatgtga tatcccaggt ggcccgggcc 1380

catcgagaga tcttcaccta cgcccatgac aagctgggca gctcacctgg caacttcaat 1440

gccaaccatg catcaggtag ccctccagcc accaccccac atcgctggga aaatcagggc 1500

tgcccacctg cccccaatga caacaacacc ttggctgccc agcgtcataa cgaggcccta 1560

aatggtctgc gccaggctcc ctcctcctac cctcccacct ggcctcctgg ccctgcacac 1620

cacagctgcc accagtccaa cagcaacggg caccgtctat gccccaccca cgtgtatgca 1680

gccccagaag gcaaggcacc tgccaacagt ccccggcagg gcaactcaaa gaatgttctg 1740

ctggcatgtc ctatgaacat gtacccgcat ggacgcagtg ggcgaacggt gcaggagatc 1800

tgggaggatt tctccatgag cttcacgccc gctgtgcggg aggtggtaga gtttgccaaa 1860

cacatcccgg gcttccgtga cctttctcag catgaccaag tcaccctgct taaggctggc 1920

acctttgagg tgctgatggt gcgctttgct tcgttgttca acgtgaagga ccagacagtg 1980

atgttcctaa gccgcaccac ctacagcctg caggagcttg gtgccatggg catgggagac 2040

ctgctcagtg ccatgttcga cttcagcgag aagctcaact ccctggcgct taccgaggag 2100

gagctgggcc tcttcaccgc ggtggtgctt gtctctgcag accgctcggg catggagaat 2160

tccgcttcgg tggagcagct ccaggagacg ctgctgcggg ctcttcgggc tctggtgctg 2220

aagaaccggc ccttggagac ttcccgcttc accaagctgc tgctcaagct gccggacctg 2280

cggaccctga acaacatgca ttccgagaag ctgctgtcct tccgggtgga cgcccagtga 2340

cccgcccggc cggccttctg ccgctgcccc cttgtacaga atcgaactct gcacttctct 2400

ctcctttacg agacgaaaag gaaaagcaaa ccagaatctt atttatattg ttataaaata 2460

ttccaagatg agcctctggc cccctgagcc ttcttgtaaa tacctgcctc cctcccccat 2520

caccgaactt cccctcctcc cctatttaaa ccactctgtc tcccccacaa ccctcccctg 2580

gccctctgat ttgttctgtt cctgtctcaa atccaatagt tcacagctga 2630

<210> 2

<211> 614

<212> PRT

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 2

Met Thr Thr Leu Asp Ser Asn Asn Asn Thr Gly Gly Val Ile Thr Tyr

1 5 10 15

Ile Gly Ser Ser Gly Ser Ser Pro Ser Arg Thr Ser Pro Glu Ser Leu

20 25 30

Tyr Ser Asp Asn Ser Asn Gly Ser Phe Gln Ser Leu Thr Gln Gly Cys

35 40 45

Pro Thr Tyr Phe Pro Pro Ser Pro Thr Gly Ser Leu Thr Gln Asp Pro

50 55 60

Ala Arg Ser Phe Gly Ser Ile Pro Pro Ser Leu Ser Asp Asp Gly Ser

65 70 75 80

Pro Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Phe Tyr Asn

85 90 95

Gly Ser Pro Pro Gly Ser Leu Gln Val Ala Met Glu Asp Ser Ser Arg

100 105 110

Val Ser Pro Ser Lys Ser Thr Ser Asn Ile Thr Lys Leu Asn Gly Met

115 120 125

Val Leu Leu Cys Lys Val Cys Gly Asp Val Ala Ser Gly Phe His Tyr

130 135 140

Gly Val His Ala Cys Glu Gly Cys Lys Gly Phe Phe Arg Arg Ser Ile

145 150 155 160

Gln Gln Asn Ile Gln Tyr Lys Arg Cys Leu Lys Asn Glu Asn Cys Ser

165 170 175

Ile Val Arg Ile Asn Arg Asn Arg Cys Gln Gln Cys Arg Phe Lys Lys

180 185 190

Cys Leu Ser Val Gly Met Ser Arg Asp Ala Val Arg Phe Gly Arg Ile

195 200 205

Pro Lys Arg Glu Lys Gln Arg Met Leu Ala Glu Met Gln Ser Ala Met

210 215 220

Asn Leu Ala Asn Asn Gln Leu Ser Ser Gln Cys Pro Leu Glu Thr Ser

225 230 235 240

Pro Thr Gln His Pro Thr Pro Gly Pro Met Gly Pro Ser Pro Pro Pro

245 250 255

Ala Pro Val Pro Ser Pro Leu Val Gly Phe Ser Gln Phe Pro Gln Gln

260 265 270

Leu Thr Pro Pro Arg Ser Pro Ser Pro Glu Pro Thr Val Glu Asp Val

275 280 285

Ile Ser Gln Val Ala Arg Ala His Arg Glu Ile Phe Thr Tyr Ala His

290 295 300

Asp Lys Leu Gly Ser Ser Pro Gly Asn Phe Asn Ala Asn His Ala Ser

305 310 315 320

Gly Ser Pro Pro Ala Thr Thr Pro His Arg Trp Glu Asn Gln Gly Cys

325 330 335

Pro Pro Ala Pro Asn Asp Asn Asn Thr Leu Ala Ala Gln Arg His Asn

340 345 350

Glu Ala Leu Asn Gly Leu Arg Gln Ala Pro Ser Ser Tyr Pro Pro Thr

355 360 365

Trp Pro Pro Gly Pro Ala His His Ser Cys His Gln Ser Asn Ser Asn

370 375 380

Gly His Arg Leu Cys Pro Thr His Val Tyr Ala Ala Pro Glu Gly Lys

385 390 395 400

Ala Pro Ala Asn Ser Pro Arg Gln Gly Asn Ser Lys Asn Val Leu Leu

405 410 415

Ala Cys Pro Met Asn Met Tyr Pro His Gly Arg Ser Gly Arg Thr Val

420 425 430

Gln Glu Ile Trp Glu Asp Phe Ser Met Ser Phe Thr Pro Ala Val Arg

435 440 445

Glu Val Val Glu Phe Ala Lys His Ile Pro Gly Phe Arg Asp Leu Ser

450 455 460

Gln His Asp Gln Val Thr Leu Leu Lys Ala Gly Thr Phe Glu Val Leu

465 470 475 480

Met Val Arg Phe Ala Ser Leu Phe Asn Val Lys Asp Gln Thr Val Met

485 490 495

Phe Leu Ser Arg Thr Thr Tyr Ser Leu Gln Glu Leu Gly Ala Met Gly

500 505 510

Met Gly Asp Leu Leu Ser Ala Met Phe Asp Phe Ser Glu Lys Leu Asn

515 520 525

Ser Leu Ala Leu Thr Glu Glu Glu Leu Gly Leu Phe Thr Ala Val Val

530 535 540

Leu Val Ser Ala Asp Arg Ser Gly Met Glu Asn Ser Ala Ser Val Glu

545 550 555 560

Gln Leu Gln Glu Thr Leu Leu Arg Ala Leu Arg Ala Leu Val Leu Lys

565 570 575

Asn Arg Pro Leu Glu Thr Ser Arg Phe Thr Lys Leu Leu Leu Lys Leu

580 585 590

Pro Asp Leu Arg Thr Leu Asn Asn Met His Ser Glu Lys Leu Leu Ser

595 600 605

Phe Arg Val Asp Ala Gln

610

Claims (1)

1.Rev-erbα激动剂SR9009在制备抗脓毒症心肌病的药物中的应用。

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