CN110250056A - 一种提高日本沼虾受精卵离体孵化率的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提高日本沼虾受精卵离体孵化率的方法，包括如下步骤：步骤一，挑选沼虾，步骤一中所述捕捞抱卵的沼虾体长大于4cm，抱卵量大于1500粒；步骤二，沼虾的培育，步骤二中所述培育池中放置有塑料水草供沼虾栖息，养殖水每2天换一次，且换水量为总水量的1/3；步骤三，受精卵分离，步骤三中所述受精卵为抱卵沼虾培育至卵粒中出现2个黑色眼点时的受精卵；步骤四，孵化；步骤五，孵化管理。本发明的提高日本沼虾受精卵离体孵化率的方法，能有效缩减受精卵离体孵化周期、减少孵化过程中的繁琐操作，增加孵化过程中管理的便捷性，能有效避免受精卵在离体后以及孵化过程中感染水霉病，从而有效地提高了沼虾受精卵的离体孵化率。
Description
技术领域
本发明涉及水产养殖中虾类人工繁育技术领域，具体的涉及一种提高日本沼虾受精卵离体孵化率的方法。
背景技术
日本沼虾隶属于十足目、长臂虾科、沼虾属，俗称青虾或河虾，在我国淡水水域广泛分布；该虾具有肉质细嫩、味道鲜美、营养丰富等优点，深受广大消费者喜爱，是我国重要经济虾类。沼虾在人工养殖过程中，由于长期沿用“捕大留小”的轮捕上市模式，造成后期用于繁殖的亲本体型不断缩小，无形中形成了沼虾的生长劣势，导致日本沼虾养殖中出现性早熟、生长迟缓、发病率高等种质退化趋势，严重制约了其养殖产业的可持续健康发展，因此，开展日本沼虾优良品种人工选育工作势在必行。
由于日本沼虾受精卵是抱于雌虾腹部孵化，这对其育种工作中的遗传操作及相关育种参数统计造成不便，因此，需将其受精卵在离体条件下孵化。现有日本沼虾受精卵离体孵化技术认为受精卵的离体孵化只需调整好充气，并没有其他特殊条件；但实际上日本沼虾受精卵在离体条件下极易感染水霉病而导致孵化失败。在申请公布号为CN101720684B的专利中公开了一种日本沼虾离体孵化的办法，包括亲虾的选取、交配产卵、孵化水的处理、剥卵、洗卵、孵化和日常管理等步骤。该发明所述的日本沼虾受精卵离体孵化的方法，克服了受精卵依赖母体孵化的生物学特性的难题，为日本沼虾的基因转移、细胞核移植等遗传操作奠定基础，填补了这一领域的研究空白，具有重要的实际应用价值。但是该技术不仅需要对孵化用水进行特别处理，而且孵化时间长达260～650h，孵化过程的日常管理工作较为繁重，长时间的孵化易产生操作失误，从而导致孵化率产生大幅波动；在该技术条件下，离体受精卵的孵化率为65.4％～70.8％，平均67.9％，仍处于较低水平；因此，如何在简化离体孵化操作与日常管理的前提下提高受精卵孵化率，是日本沼虾受精卵离体孵化的技术关键。
发明内容
1.要解决的技术问题
本发明要解决的技术问题在于提供一种提高日本沼虾受精卵离体孵化率的方法，能有效缩短受精卵离体孵化周期、减少孵化过程中的繁琐操作，增加孵化过程中管理的便捷性，能有效避免受精卵感染水霉病，有效提高受精卵的孵化率。
2.技术方案
为解决上述问题，本发明采取如下技术方案：
一种提高日本沼虾受精卵离体孵化率的方法，包括如下步骤：
步骤一，挑选沼虾：每年的5月下旬至6月中旬在规模化养殖池塘、湖泊中批量捕捞抱卵沼虾，或去市场购买抱卵沼虾，挑选出个体大、抱卵多、活力强、无伤病的抱卵沼虾作为苗种繁育母本；
步骤二，沼虾的培育：取20尾抱卵沼虾放置于白色塑料培育池中充气饲养，白色塑料培育池的尺寸为320×70×20cm，且培育池中水深15cm，水温控制在22～25℃，每天投喂螺蛳肉1次，并定时观察一次抱卵沼虾的受精卵发育情况；
步骤三，受精卵分离：将抱卵沼虾从培育池中转移出来，并置于浓度为3～6mg/L甲醛溶液中浸泡5min，采用经浓度为70％的酒精浸泡消毒后的弯头镊子将受精卵从抱卵沼虾腹部小心地剥离，并将剥离的沼虾受精卵置于培养皿中，倒入适量3～6mg/L甲醛溶液对沼虾受精卵浸泡5～10min，再通过浓度为0.9％生理盐水清洗2～4次；
步骤四，孵化：将清洗后的受精卵置于孵化容器中，以淡水作为受精卵的孵化水源，将其注入孵化容器中对受精卵进行孵化，孵化密度为每尾虾的受精卵量配比1L孵化水，并在孵化过程中使用充气泵持续对孵化水充气，控制气流大小，使受精卵刚好可在容器中缓慢翻滚，孵化水温控制在22～25℃，孵化水的pH值控制在7.2～8.2；
步骤五，孵化管理：每隔8～10h对孵化容器中的孵化水进行一次换水，每次换水量为孵化水量的50％，每隔10～12h用浓度为3～6mg/L的甲醛溶液对受精卵进行防水霉处理，孵化24～96h，取出出膜虾苗，统计每尾虾的受精卵所孵化出的幼体数量，得出沼虾受精卵离体孵化率。
具体地，步骤一中所述捕捞抱卵沼虾的体长大于4cm，抱卵量大于1500粒。
具体地，步骤二中所述培育池中放置塑料水草供沼虾栖息，养殖水每2天换一次，且换水量为总水量的1/3。
具体地，步骤三中所述受精卵为抱卵沼虾培育至卵粒中出现2个黑色眼点时的受精卵。
具体地，步骤四中所述充气泵的充气大小为散气石每秒产生气泡20～30个。
具体地，步骤五中所述防水霉处理的方法，具体操作为先将甲醛溶液配制好，然后用80目捞网小心将受精卵捞出，连网一起置于甲醛溶液中浸泡，浸泡结束后，再置于清水中轻轻漂洗，最后将受精卵放回孵化容器继续孵化。
3.有益效果
(1)本发明采用5月下旬至6月中旬的体长大于4cm、抱卵量大于1500粒的抱卵沼虾作为苗种繁育母本，能有效提高沼虾受精卵的存活率，从而便于沼虾受精卵培育出优质的沼虾幼体；
(2)本发明通过采用浓度为3～6mg/L的甲醛溶液对剥离后的沼虾受精卵及孵化过程中的受精卵进行浸泡，有效减少受精卵在离体条件下极易感染水霉病的情况，从而提高受精卵的孵化成功率；
(3)本发明通过将清洗后的沼虾受精卵放入孵化器中进行合理地充气孵化，可使每一粒受精卵获取充足的溶氧，避免结团受精卵无法完全孵化的现象，进一步保证受精卵的孵化率。
(4)本发明通过将抱卵虾培育至受精卵发育至出现眼点时开始离体孵化，简化孵化流程，大幅度缩减受精卵离体孵化周期，有效减少离体孵化期间的繁琐管理与劳动量，提高了孵化过程中管理的便捷性，同时能进一步降低受精卵在孵化过程中感染水霉的风险，保证受精卵充分孵化，从而提高受精卵的孵化率。
综上，本发明所提供的一种提高日本沼虾受精卵离体孵化率的方法，能有效缩减受精卵离体孵化周期、减少孵化过程中的繁琐操作，增加孵化过程中管理的便捷性，能有效避免受精卵在离体后以及孵化过程中感染水霉病，使得沼虾离体受精卵的孵化率达到75.2％～90.1％，平均孵化率达到83.7％，从而有效地提高了沼虾受精卵的离体孵化率。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的说明。
实施例1
一种提高日本沼虾受精卵离体孵化率的方法，包括如下步骤：
步骤一，挑选沼虾：2019年5月20日，在市场购买抱卵沼虾，挑选出体长大于4cm，平均抱卵量大于1500粒、活力强、无伤病的抱卵沼虾作为苗种繁育母本；
步骤二，沼虾的培育：取20尾抱卵沼虾放置于白色塑料培育池中充气饲养，白色塑料培育池的尺寸为320×70×20cm，且培育池中水深15cm，水温控制在25℃，每天投喂螺蛳肉1次，在培育池中放置塑料水草供沼虾栖息，培育池中养殖水每2天换一次，且换水量为总水量的1/3，饲养至6月1日时，部分抱卵沼虾的受精卵中出现2个黑色眼点；
步骤三，受精卵分离：6月3日，将受精卵发育至出现眼点的20只抱卵沼虾从培育池中转移出来，取6只发育最好的抱卵沼虾置于浓度为5mg/L甲醛溶液中浸泡5min，采用经浓度为70％的酒精浸泡消毒后的弯头镊子将受精卵轻轻地从抱卵沼虾腹部剥离，并将剥离的沼虾受精卵置于培养皿中，倒入适量浓度为5mg/L的甲醛溶液对沼虾受精卵浸泡10min，再通过浓度为0.9％的生理盐水清洗4次；
步骤四，孵化：每尾虾取1000粒受精卵用于孵化，将清洗后的受精卵置于孵化容器中，以淡水作为受精卵的孵化水源，将其注入孵化容器中对受精卵进行孵化，孵化水的水量为1L，并在孵化过程中使用充气泵持续对孵化水充气，控制气流大小，使得充气泵的充气大小为散气石每秒产生气泡约30个，使受精卵刚好可在容器中缓慢翻滚，孵化水温控制在25℃，孵化水的pH值为7.5；
步骤五，孵化管理：每隔8h对孵化容器中的孵化水进行一次换水，每次换水量为孵化水量的50％，每隔12h用浓度为5mg/L的甲醛溶液对受精卵进行防水霉处理，再将经防水霉处理后的受精卵放回孵化容器中继续孵化，待虾苗完全孵化出膜后，取出出膜虾苗，统计每尾虾的受精卵所孵化出的幼体数量。
该实施例中6尾虾的受精卵所孵化出的幼体数量以及孵化率和孵化时间之间的关系见表1
表1 6尾抱卵沼虾受精卵离体孵化情况
经统计得该方法的孵化条件下，每尾沼虾离体受精卵的孵化率在75.2％～90.1％，平均为83.7％，远大于现有技术条件下沼虾的离体孵化率，因此，该方法能有效提高沼虾受精卵的离体孵化率，适合推广使用。
本技术领域中的普通技术人员应当认识到，以上的实施例仅是用来说明本发明，而并非用作为对本发明的限定，只要在本发明的实质精神范围内，对以上所述实施例的变化、变型都将落在本发明的权利要求范围内。
Claims (6)
1.一种提高日本沼虾受精卵离体孵化率的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一，挑选沼虾：每年的5月下旬至6月中旬在规模化养殖池塘、湖泊中批量捕捞抱卵沼虾，或去市场购买抱卵沼虾，挑选出个体大、抱卵多、活力强、无伤病的抱卵沼虾作为苗种繁育母本；
步骤二，沼虾的培育：取20尾抱卵沼虾放置于白色塑料培育池中充气饲养，白色塑料培育池的尺寸为320×70×20cm，且培育池中水深15cm，水温控制在22～25℃，每天投喂螺蛳肉1次，并定时观察一次抱卵沼虾的受精卵发育情况；
步骤三，受精卵分离：将抱卵沼虾从培育池中转移出来，并置于浓度为3～6mg/L甲醛溶液中浸泡5min，采用经浓度为70％的酒精浸泡消毒后的弯头镊子将受精卵从抱卵沼虾腹部小心地剥离，并将剥离的沼虾受精卵置于培养皿中，倒入适量3～6mg/L甲醛溶液对沼虾受精卵浸泡5～10min，再通过浓度为0.9％生理盐水清洗2～4次；
步骤四，孵化：将清洗后的受精卵置于孵化容器中，以淡水作为受精卵的孵化水源，将其注入孵化容器中对受精卵进行孵化，孵化密度为每尾虾的受精卵量配比1L孵化水，并在孵化过程中使用充气泵持续对孵化水充气，控制气流大小，使受精卵刚好可在容器中缓慢翻滚，孵化水温控制在22～25℃，孵化水的pH值控制在7.2～8.2；
步骤五，孵化管理：每隔8～10h对孵化容器中的孵化水进行一次换水，每次换水量为孵化水量的50％，每隔10～12h用浓度为3～6mg/L的甲醛溶液对受精卵进行防水霉处理，孵化24～96h，取出出膜虾苗，统计每尾虾的受精卵所孵化出的幼体数量，得出沼虾受精卵离体孵化率。
2.根据权利要求1所述的提高日本沼虾受精卵离体孵化率的方法，其特征在于，步骤一中所述捕捞抱卵沼虾的体长大于4cm，抱卵量大于1500粒。
3.根据权利要求1所述的提高日本沼虾受精卵离体孵化率的方法，其特征在于，步骤二中所述培育池中需放置塑料水草供沼虾栖息，养殖水每2天换一次，且换水量为总水量的1/3。
4.根据权利要求1所述的提高日本沼虾受精卵离体孵化率的方法，其特征在于，步骤三中所述受精卵为抱卵沼虾培育至卵粒中出现2个黑色眼点时的受精卵。
5.根据权利要求1所述的提高日本沼虾受精卵离体孵化率的方法，其特征在于，步骤四中所述充气泵的充气大小为散气石每秒产生气泡20～30个。
6.根据权利要求1所述的提高日本沼虾受精卵离体孵化率的方法，其特征在于，步骤五中所述防水霉处理的方法，具体操作为先将甲醛溶液配制好，然后用80目捞网小心将受精卵捞出，连网一起置于甲醛溶液中浸泡，浸泡结束后，再置于清水中轻轻漂洗，最后将受精卵放回孵化容器继续孵化。
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