CN110248680A - 使用抗体-药物缀合物沙西妥珠单抗戈维替康(immu-132)的用于转移性尿路上皮癌的疗法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及包含连接至抗Trop‑2抗体或抗原结合抗体片段的SN‑38的治疗性ADC。所述ADC可以介于4mg/kg与18mg/kg之间、优选4、6、8、9、10、12、16或18mg/kg、最优选8至10mg/kg的剂量施用。当以指定的剂量和时间表施用时,所述ADC可减小实体肿瘤的大小、减少或消除转移并且有效治疗对标准疗法,如放射疗法、化学疗法或免疫疗法具有抗性的癌症。优选地,所述ADC与一种或多种其他治疗剂,如PARP抑制剂、微管抑制剂、布鲁顿激酶抑制剂或PI3K抑制剂组合施用。最优选地,所述ADC用于治疗表达Trop‑2的癌症,如转移性尿路上皮癌。
Description
相关申请
本申请是2016年3月14日提交的美国专利申请序列号15/069,208的部分继续申请,所述美国专利申请序列号15/069,208是2015年3月25日提交的美国专利申请序列号14/667,982(现已发布的美国专利号9,493,573)的部分继续申请,所述美国专利申请序列号14/667,982是2013年7月23日提交的美国申请号13/948,732(现为美国专利号9,028,833)的分案,其根据美国法典第35篇第119条(e)款要求2012年12月13日提交的美国临时专利申请61/736,684和2013年1月7日提交的美国临时专利申请61/749,548的权益。申请15/069,208根据美国法典第35篇第119条(e)款要求2015年3月16日提交的美国临时专利申请62/133,654、2015年3月16日提交的美国临时专利申请62/133,729、2015年3月25日提交的美国临时专利申请62/138,092、2015年5月4日提交的美国临时专利申请62/156,608以及2015年10月15日提交的美国临时专利申请62/241,881的权益。本申请根据美国法典第35篇第119条(e)款要求2016年12月1日提交的美国临时专利申请62/428,655的权益。各优先权申请的正文以引用的方式整体并入本文。
序列表
本申请含有已通过EFS-Web以ASCII格式提交并且特此以引用的方式整体并入的序列表。所述ASCII副本创建于2017年11月13日,名称为IMM356WO2_SL.txt并且大小为7,835字节。
发明领域
本发明涉及抗体或抗原结合抗体片段和喜树碱(如SN-38)的免疫缀合物的治疗用途,所述免疫缀合物具有改善的靶向人受试者中的各种癌细胞的能力。在优选的实施方案中,所述抗体和治疗部分经由细胞内可裂解的键联连接,所述键联增加治疗功效。在更优选的实施方案中,所述免疫缀合物以优化治疗效果的特定剂量和/或特定给药方案施用。本文公开的用于人治疗用途的SN-38-缀合的抗体的优化的剂量和给药方案显示出可能从动物模型研究无法预测的出人意料的优异功效,从而允许有效治疗对标准抗癌疗法(包括伊立替康(CPT-11),SN-38的母体化合物)有抗性的癌症。最优选地,所述方法和组合物用于使用抗Trop-2hRS7-SN-38免疫缀合物治疗Trop-2阳性癌症,特别是尿路上皮癌。在具体的实施方案中,所述免疫缀合物可以介于3与18mg/kg之间、更优选介于4至12mg/kg之间、最优选介于8与10mg/kg之间的剂量施用至患有Trop-2阳性癌症的人受试者。在其他优选的实施方案中,所述方法和组合物可用于治疗从其他标准抗癌疗法(如化学治疗药物)复发或其他标准抗癌疗法难治的Trop-2阳性癌症。出人意外地,所述抗Trop-2-SN38抗体药物缀合物(ADC)从用标准抗癌剂(包括伊立替康)治疗复发或显示对标准抗癌剂的抗性的患者中有效治疗Trop-2阳性癌症。在其他优选的实施方案中,抗Trop-2-SN-38ADC(如IMMU-132)可与一种或多种可与ADC表现出协同效应的其他治疗剂(如微管抑制剂、PARP抑制剂、布鲁顿激酶抑制剂或PI3K抑制剂)组合施用。
背景技术
多年来,特定靶向药物治疗领域的科学家一直致力于使用单克隆抗体(MAb)将毒性剂特异性递送至人癌症。肿瘤相关MAb和合适毒性剂的缀合物已被开发出,但已经在人癌症的治疗中获得各种成功。毒性剂最常见的是化学治疗药物,但是发射粒子的放射性核素或细菌或植物毒素也与MAb缀合,特别是用于治疗癌症(Sharkey和Goldenberg,CA CancerJ Clin.2006年7月-8月;56(4):226-243)。
使用MAb-化学治疗药物缀合物的优点是(a)化学治疗药物本身在结构上明确地定义;(b)使用非常明确定义的缀合化学将化学治疗药物连接至MAb蛋白,通常在远离MAb的抗原结合区的特定位点;(c)MAb-化学治疗药物缀合物可比涉及MAb和细菌或植物毒素的化学缀合物更可重复地制备并且通常具有更低的免疫原性,并且因此更易于商业开发和监管批准;(d)MAb-化学治疗药物缀合物在系统上比放射性核素MAb缀合物的毒性低几个数量级,特别是对辐射敏感的骨髓而言。
喜树碱(Camptothecin;CPT)及其衍生物是一类有效抗肿瘤剂。伊立替康(也称为CPT-11)和托泊替康是已批准的癌症治疗剂的CPT类似物(Iyer和Ratain,CancerChemother.Phamacol.42:S31-S43(1998))。CPT通过稳定拓扑异构酶I-DNA复合物来抑制拓扑异构酶I酶而起作用(Liu,等人于The Camptothecins:Unfolding Their AnticancerPotential,Liehr J.G.,Giovanella,B.C.和Verschraegen(编辑),NY Acad Sci.,NY 922:1-10(2000)中)。CPT在缀合物的制备中存在特定问题。一个问题是大多数CPT衍生物在水性缓冲液中的不溶性。其次,CPT为用于缀合至大分子的结构修饰提供了特定挑战。例如,CPT本身仅含有环-E中的叔羟基。在CPT的情况下,羟基官能团必须与适于随后的蛋白质缀合的接头偶联;并且在有效的CPT衍生物如SN-38(化学治疗CPT-11的活性代谢物)以及其他含C-10羟基的衍生物如托泊替康和10-羟基-CPT中,在C-10位置处存在酚羟基使必要的C-20羟基衍生化变得复杂。第三,在生理条件下喜树碱的E-环的δ-内酯部分的不稳定性导致抗肿瘤效力大大降低。因此,进行缀合方案以使得其在7或更低的pH下进行以避免内酯开环。然而,具有胺反应性基团的双官能CPT(如活性酯)的缀合通常将需要8或更高的pH。第四,细胞内可裂解部分优选掺入连接CPT和抗体或其他结合部分的接头/间隔区中。
对于更有效的制备和施用抗体-CPT缀合物,如抗体-SN-38缀合物的方法存在需要。优选地,所述方法包括优化的给药和施用方案,所述给药和施用方案使用于人患者的治疗用途的抗体-CPT缀合物的功效最大化并使毒性最小化。
发明内容
如本文所用,除非另外明确说明,否则缩写“CPT”可指喜树碱或其衍生物中的任一种(如SN-38)。本发明通过提供改进的用于制备和施用CPT-抗体免疫缀合物的方法和组合物来解决本领域中未满足的需要。优选地,所述喜树碱是SN-38。所公开的方法和组合物用于治疗各种疾病和疾患,所述疾病和疾患是其他形式的疗法难治的或对其他形式的疗法反应较小并且可包括针对其可开发或可获得或已知用于选择性靶向的合适抗体或抗原结合抗体片段的疾病。可用主题免疫缀合物治疗的优选疾病或疾患包括Trop-2阳性癌症,如转移性尿路上皮癌。
优选地,靶向部分是抗体、抗体片段、双特异性或其他多价抗体、或其他基于抗体的分子或化合物。所述抗体可具有各种同种型,优选地人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4,更优选地包含人IgG1铰链和恒定区序列。所述抗体或其片段可以是嵌合人-小鼠、嵌合人-灵长类动物、人源化(人框架和鼠高变(CDR)区)或完全人抗体,以及其变型,如半IgG4抗体(被称为“单抗体”),如由van der Neut Kolfschoten等人(Science 2007;317:1554-1557)所描述。更优选地,所述抗体或其片段可被设计或选择为包含属于特定同种异型的人恒定区序列,其可在所述免疫缀合物施用至人受试者时导致减小的免疫原性。用于施用的优选同种异型包括非G1m1同种异型(nG1m1),如G1m3、G1m3,1、G1m3,2或G1m3,1,2。更优选地,所述同种异型选自由以下组成的组:nG1m1、G1m3、nG1m1,2和Km3同种异型。
有用的抗体可结合至本领域中已知的任何疾病相关的抗原。在疾病状态是癌症的情况下,例如,由肿瘤细胞表达或以其他方式与肿瘤细胞相关的许多抗原是本领域中已知的,包括但不限于:碳酸酐酶IX、α-胎蛋白(AFP)、α-辅肌动蛋白-4、A3、对A33抗体具有特异性的抗原、ART-4、B7、Ba 733、BAGE、BrE3-抗原、CA125、CAMEL、CAP-1、CASP-8/m、CCL19、CCL21、CD1、CD1a、CD2、CD3、CD4、CD5、CD8、CD11A、CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD29、CD30、CD32b、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD45、CD46、CD52、CD54、CD55、CD59、CD64、CD66a-e、CD67、CD70、CD70L、CD74、CD79a、CD80、CD83、CD95、CD126、CD132、CD133、CD138、CD147、CD154、CDC27、CDK-4/m、CDKN2A、CTLA-4、CXCR4、CXCR7、CXCL12、HIF-1α、结肠特异性抗原p(CSAp)、CEA(CEACAM5)、CEACAM6、c-Met、DAM、EGFR、EGFRvIII、Trop-2、EGP-2、ELF2-M、Ep-CAM、成纤维细胞生长因子(FGF)、Flt-1、Flt-3、叶酸受体、G250抗原、GAGE、gp100、GRO-β、HLA-DR、HM1.24、人绒毛膜促性腺激素(HCG)及其亚基、HER2/neu、HMGB-1、低氧诱导因子(HIF-1)、HSP70-2M、HST-2、Ia、IGF-1R、IFN-γ、IFN-α、IFN-β、IFN-λ、IL-4R、IL-6R、IL-13R、IL-15R、IL-17R、IL-18R、IL-2、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-23、IL-25、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、KC4-抗原、KS-1-抗原、KS1-4、Le-Y、LDR/FUT、巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)、MAGE、MAGE-3、MART-1、MART-2、NY-ESO-1、TRAG-3、mCRP、MCP-1、MIP-1A、MIP-1B、MIF、MUC1、MUC2、MUC3、MUC4、MUC5ac、MUC13、MUC16、MUM-1/2、MUM-3、NCA66、NCA95、NCA90、PAM4抗原、胰腺癌粘蛋白、PD-1受体、胎盘生长因子、p53、PLAGL2、前列腺酸性磷酸酶、PSA、PRAME、PSMA、PlGF、ILGF、ILGF-1R、IL-6、IL-25、RS5、RANTES、T101、SAGE、S100、存活素、存活素-2B、TAC、TAG-72、腱生蛋白、TRAIL受体、TNF-α、Tn抗原、汤姆森-弗里德里希(Thomson-Friedenreich)抗原、肿瘤坏死抗原、VEGFR、ED-B纤连蛋白、WT-1、17-1A-抗原、补体因子C3、C3a、C3b、C5a、C5、血管生成标志物、bcl-2、bcl-6、Kras、致癌基因标志物以及致癌基因产物(参见,例如Sensi等人,Clin Cancer Res 2006,12:5023-32;Parmiani等人,J Immunol 2007,178:1975-79;Novellino等人Cancer ImmunolImmunother 2005,54:187-207)。优选地,所述抗体结合至CEACAM5、CEACAM6、Trop-2、AFP、MUC5ac、CD74、CD19、CD20、CD22或HLA-DR。最优选地,所述抗体结合至Trop-2。
可利用的示例性抗癌抗体包括但不限于hR1(抗IGF-1R,美国专利号9,441,043)、hPAM4(抗MUC-5ac,美国专利号7,282,567)、hA20(抗CD20,美国专利号7,151,164)、hA19(抗CD19,美国专利号7,109,304)、hIMMU31(抗AFP,美国专利号7,300,655)、hLL1(抗CD74,美国专利号7,312,318)、hLL2(抗CD22,美国专利号5,789,554)、hMu-9(抗CSAp,美国专利号7,387,772)、hL243(抗HLA-DR,美国专利号7,612,180)、hMN-14(抗CEACAM5,美国专利号6,676,924)、hMN-15(抗CEACAM6,美国专利号8,287,865)、hRS7(抗Trop-2,美国专利号7,238,785)、hMN-3(抗CEACAM6,美国专利号7,541,440)、Ab124和Ab125(抗CXCR4,美国专利号7,138,496),各引用的专利或申请的实施例部分以引用的方式并入本文。更优选地,所述抗体是IMMU-31(抗AFP)、hRS7(抗Trop-2)、hMN-14(抗CEACAM5)、hMN-3(抗CEACAM6)、hMN-15(抗CEACAM6)、hLL1(抗CD74)、hLL2(抗CD22)、hL243或IMMU-114(抗HLA-DR)、hA19(抗CD19)或hA20(抗CD20)。在特别优选的实施方案中,所述抗体是hRS7(抗Trop-2)。
所用的替代抗体包括但不限于阿昔单抗(抗糖蛋白IIb/IIIa)、阿仑单抗(抗CD52)、贝伐单抗(抗VEGF)、西妥昔单抗(抗EGFR)、吉妥珠单抗(抗CD33)、替伊莫单抗(抗CD20)、帕尼单抗(抗EGFR)、利妥昔单抗(抗CD20)、托西莫单抗(抗CD20)、曲妥珠单抗(抗ErbB2)、兰布罗利珠单抗(抗PD-1受体)、纳武单抗(抗PD-1受体)、伊匹单抗(抗CTLA-4)、阿巴伏单抗(抗CA-125)、阿德木单抗(抗EpCAM)、阿特利珠单抗(抗IL-6受体)、贝那利珠单抗(抗CD125)、奥比妥珠单抗(GA101,抗CD20)、CC49(抗TAG-72)、AB-PG1-XG1-026(抗PSMA,美国专利申请11/983,372,以ATCC PTA-4405和PTA-4406保藏)、D2/B(抗PSMA,WO 2009/130575)、托珠单抗(抗IL-6受体)、巴利昔单抗(抗CD25)、达利珠单抗(抗CD25)、依法利珠单抗(抗CD11a)、GA101(抗CD20;GlycartRoche)、莫罗单抗-CD3(抗CD3受体)、那他珠单抗(抗α4整联蛋白)、奥马珠单抗(抗IgE);抗TNF-α抗体如CDP571(Ofei等人,2011,Diabetes 45:881-85)、MTNFAI、M2TNFAI、M3TNFAI、M3TNFABI、M302B、M303(Thermo Scientific,Rockford,IL)、英夫利昔单抗(Centocor,Malvern,PA)、培化赛妥珠单抗(UCB,Brussels,Belgium)、抗CD40L(UCB,Brussels,Belgium)、阿达木单抗(Abbott,AbbottPark,IL)、Benlysta(Human Genome Sciences);用于阿尔茨海默氏病的疗法的抗体如Alz 50(Ksiezak-Reding等人,1987,J Biol Chem 263:7943-47)、格特鲁单抗(gantenerumab)、索拉珠单抗和英夫利昔单抗;抗纤维蛋白抗体如59D8、T2G1s、MH1;抗CD38抗体如MOR03087(MorphoSys AG)、MOR202(Celgene)、HuMax-CD38(Genmab)或达雷木单抗(Johnson&Johnson)。
在优选的实施方案中,化学治疗部分是选自喜树碱(CPT)及其类似物和衍生物,并且更优选SN-38。然而,可使用的其他化学治疗部分包括紫杉烷(例如,浆果赤霉素III、紫杉醇)、埃坡霉素、蒽环霉素(例如阿霉素(DOX)、表柔比星、吗啉代阿霉素(吗啉代-DOX)、氰基吗啉代-阿霉素(氰基吗啉代-DOX)、2-吡咯啉基阿霉素(2-PDOX)或2-PDOX的前药形式(pro-2-PDOX);参见例如,Priebe W(编辑),ACS研讨会系列574,由American Chemical Society出版,Washington D.C.,1995(第332页)和Nagy等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93:2464-2469,1996)、由格尔德霉素(geldanamycin)作为实例的苯奎类安莎霉素(DeBoer等人,Journal of Antibiotics 23:442-447,1970;Neckers等人,Invest.NewDrugs 17:361-373,1999)等。优选地,所述抗体或其片段连接至至少一个化学治疗部分;优选1至约5个化学治疗部分;更优选6个或更多个化学治疗部分,最优选约6至约12个化学治疗部分。
水溶性CPT衍生物的实例是CPT-11。可获得有关CPT-11的药理学及其体内转化为活性SN-38的广泛临床数据(Iyer和Ratain,Cancer Chemother Pharmacol.42:S31-43(1998);Mathijssen等人,Clin CancerRes.7:2182-2194(2002);Rivory,AnnNYAcadSci.922:205-215,2000))。活性形式SN-38的效力比CPT-11高约2至3个数量级。在具体的优选实施方案中,所述免疫缀合物可以是hMN-14-SN-38、hMN-3-SN-38、hMN-15-SN-38、IMMU-31-SN-38、hRS7-SN-38、hA20-SN-38、hL243-SN-38、hLL1-SN-38或hLL2-SN-38缀合物。
各种实施方案可涉及主题方法和组合物用于治疗癌症的用途,所述癌症包括但不限于非霍奇金淋巴瘤、B细胞急性和慢性淋巴性白血病、伯基特淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、急性大B细胞淋巴瘤、毛细胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、T细胞淋巴瘤和白血病、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、癌、黑素瘤、肉瘤、神经胶质瘤、骨癌以及皮肤癌。癌可包括口腔癌、食管癌、胃肠道癌、肺道癌、肺癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、子宫癌、子宫内膜癌、宫颈癌、膀胱癌、胰腺癌、骨癌、脑癌、结缔组织癌、肝癌、胆囊癌、膀胱癌、肾癌、皮肤癌、中枢神经系统癌以及睾丸癌。优选地,所述癌症是尿路上皮癌,更优选转移性尿路上皮癌,最优选从标准抗癌疗法(如用化学治疗药物治疗)复发或标准抗癌疗法难治的转移性尿路上皮癌。
在涉及治疗癌症的某些实施方案中,所述ADC可与外科手术、放射疗法、化学疗法、使用裸抗体的免疫疗法、放射性免疫疗法、免疫调节剂、疫苗等组合使用。这些组合疗法可允许在此类组合中给与较低剂量的每种治疗剂,由此减少某些严重副作用,并且可能缩短所需的疗程。当没有重叠毒性或存在最小重叠毒性时,也可给与全部剂量的每种治疗剂。出人意外地,使用抗体-SN38免疫缀合物和微管抑制剂或PARP抑制剂的组合疗法显示出出人意料的协同作用。
ADC的优选最佳剂量可包括介于3mg/kg与18mg/kg之间的剂量,优选每周一次、每周两次或每隔一周给与。最佳给药方案可包括以下治疗周期:治疗连续两周、随后停药一周、两周、三周或四周,或交替的治疗周和停药周,或治疗一周、随后停药两周、三周或四周,或治疗三周、随后停药一周、两周、三周或四周,或治疗四周、随后停药一周、两周、三周或四周,或治疗五周、随后停药一周、两周、三周、四周或五周,或每两周一次、每三周一次或每月一次施用。治疗可延长任何数量的周期,优选至少2、至少4、至少6、至少8、至少10、至少12、至少14或至少16个周期。剂量可达24mg/kg。使用的示例性剂量可包括1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg、16mg/kg、17mg/kg以及18mg/kg。优选的剂量是4、6、8、9、10、12、14、16或18mg/kg。普通技术人员将认识到,在选择免疫缀合物的最佳剂量时,可考虑多种因素,如年龄、一般健康状况、特定器官功能或体重以及先前疗法对特定器官系统(例如,骨髓)的影响,并且在治疗过程中可增加或减少施用的剂量和/或频率。可根据需要重复剂量,在少至4至8个剂量后观察到肿瘤缩小的迹象。本文公开的优化的施用剂量和时间表在人受试者中显示出出人意料的优异功效和降低的毒性,这可能是从动物模型研究无法预测的。出人意外地,优异的功效允许治疗先前被发现对一种或多种标准抗癌疗法(包括SN-38在体内源自其的亲本化合物CPT-11)具有抗性的肿瘤。
主题方法可包括使用CT和/或PET/CT或MRI来定期测量肿瘤应答。还可监测肿瘤标志物,如CEA(癌胚抗原)、CA19-9、AFP、CA 15.3或PSA的血液水平。根据成像和/或标志物血液水平的结果,可根据需要调整剂量和/或施用方案。
本发明要求保护的组合物和方法的令人惊讶的结果是高剂量的抗体-药物缀合物的出人意料的耐受性,即使重复输注,仅观察到恶心和呕吐的相对低级毒性或可控制的嗜中性粒细胞减少症。另一令人惊讶的结果是与具有与白蛋白、PEG或其他载体缀合的SN-38的其他产品不同,没有抗体-药物缀合物的累积。即使在重复或增加给药后,没有累积也与改善的耐受性和没有严重毒性相关。这些令人惊讶的结果允许优化剂量和递送方案,具有出人意料的高功效和低毒性。所要求保护的方法在患有先前抗性癌症的个体中提供15%或更多、优选20%或更多、优选30%或更多、更优选40%或更多的实体肿瘤大小的缩小(如通过最长直径所测量的)。普通技术人员将认识到肿瘤大小可通过各种不同的技术,如总肿瘤体积、在任意维度上的最大肿瘤大小或在若干维度上的大小测量值的组合来测量。这可用标准放射学程序,如计算机断层摄影术、超声波扫描术和/或正电子发射断层摄影术。测量大小的方式不如观察到在使用免疫缀合物治疗的情况下肿瘤大小减小、优选产生肿瘤消除的趋势重要。
虽然所述免疫缀合物可以周期性推注形式来施用,但是在替代实施方案中,所述免疫缀合物可通过连续输注抗体-药物缀合物来施用。为了增加Cmax并且延长所述免疫缀合物在血液中的PK,连续输注可例如通过留置导管来施用。此类装置是本领域中已知的,如或导管(参见例如,Skolnik等人,Ther Drug Monit 32:741-48,2010)并且可使用任何这类已知留置导管。各种连续输注泵在本领域中也是已知的并且可使用任何这类已知输注泵。连续输注的剂量范围可介于0.1与3.0mg/kg/天之间。更优选地,这些免疫缀合物可通过在2至5小时、更优选2-3小时的相对较短周期内静脉内输注来施用。
在特别优选的实施方案中,所述免疫缀合物和给药方案在对标准疗法具有抗性的患者中可能是有效的。例如,可将抗Trop-2hRS7-SN-38免疫缀合物施用至对使用伊立替康(SN-38的母体剂)的先前疗法无应答的患者。出人意料地,伊立替康抗性患者可能对hRS7-SN-38显著出部分或甚至完全应答。所述免疫缀合物特异性地靶向肿瘤组织的能力可通过治疗剂的改善的靶向和增强的递送来克服肿瘤抗性。所述ADC还可有效治疗对其他治疗剂,如基于铂的抗癌剂具有抗性的癌症。特定的优选受试者可以是转移性结肠癌患者、三阴性乳腺癌患者、HER+、ER+、黄体酮+乳腺癌患者、转移性非小细胞肺癌(NSCLC)患者、转移性胰腺癌患者、转移性肾细胞癌患者、转移性胃癌患者、转移性前列腺癌患者、转移性尿路上皮癌患者或转移性小细胞肺癌患者。
在某些优选的实施方案中,抗体或免疫缀合物(如沙西妥珠单抗戈维替康)可以与至少一种微管抑制剂的组合疗法使用。许多微管抑制剂是本领域中已知的,如长春花生物碱(例如长春新碱、长春碱)、紫杉烷(例如紫杉醇)、美登木素生物碱(例如美登素)和奥瑞斯他汀。其他已知的微管抑制剂包括秋水仙胺、诺考达唑、埃博霉素、多西他赛、圆皮海绵内酯(discodermolide)、秋水仙碱、康普瑞汀、鬼臼毒素、CI-980、苯基阿夕斯丁、五加前胡素、卡拉新、2-甲氧基雌二醇、E7010、甲氧基苯磺酰胺、长春瑞滨、长春氟宁、长春地辛、尾海兔素、海绵抑制素、根霉素、泰斯多汀、软海绵素、哈米特林(hemiasterlin)、念珠藻素52、MMAE以及甲磺酸艾日布林(参见例如,Dumontet&Jordan,2010,NatRev Drug Discov 9:790-803)。任何这种已知的微管抑制剂可与抗体或抗体-药物缀合物(ADC)组合使用。优选地,所述微管抑制剂是当与抗体或ADC组合使用时表现出协同作用的抑制剂。一个有效的实例是SN-38缀合的抗体,如由许多实体癌表达的沙西妥珠单抗戈维替康或拉贝珠单抗戈维替康(labetuzumab govitecan)(靶向CEACAM5)。最优选地,所述微管抑制剂是紫杉醇或甲磺酸艾日布林。
在其他优选的实施方案中,所述抗体或ADC可以与至少一种PARP抑制剂的组合疗法使用。许多PARP抑制剂是本领域中已知的,如奥拉帕尼、他拉唑帕尼(BMN-673)、鲁卡帕尼、维利帕尼、尼拉帕尼、依尼帕尼、CEP 9722、MK4827、BGB-290、ABT-888、AG014699、BSI-201、CEP-8983以及3-氨基苯甲酰胺(参见例如,Rouleau等人,2010,Nat Rev Cancer 10:293-301;Bao等人,2015,Oncotarget[付印前的电子版,2015年9月22日])。任何这种已知的PARP抑制剂可与抗体或ADC,例如像SN-38抗体缀合物组合使用。优选地,所述PARP抑制剂是当与抗体或ADC组合使用时表现出协同作用的抑制剂。当使用SN-38缀合的抗体如沙西妥珠单抗戈维替康时,这已得到验证。最优选地,所述PARP抑制剂是奥拉帕尼或鲁卡帕尼。
在其他实施方案中,抗体或免疫缀合物可与布鲁顿激酶抑制剂或PI3K抑制剂组合使用。示例性布鲁顿激酶抑制剂包括但不限于依鲁替尼(PCI-32765)、PCI-45292、CC-292(AVL-292)、ONO-4059、GDC-0834、LFM-A13或RN486。示例性PI3K抑制剂包括但不限于艾代拉里斯(idelalisib)、渥曼青霉素、去甲氧基绿胶霉素、哌立福辛、PX-866、IPI-145(度维利塞)、BAY 80-6946、BEZ235、RP6530、TGR1202、SF1126、INK1117、GDC-0941、BKM120、XL147、XL765、Palomid 529、GSK1059615、ZSTK474、PWT33597、IC87114、TG100-115、CAL263、PI-103、GNE477、CUDC-907、AEZS-136或LY294002。本领域已知的任何布鲁顿激酶或PI3K抑制剂均可用于要求保护的组合疗法中。
附图说明
图1.用沙西妥珠单抗戈维替康治疗的患有尿路上皮癌的6名患者中的最佳应答的瀑布图。如下文实施例1中所描述进行IMMU-132的临床试验。所使用的缩写是:PD=进行性疾病;PR=部分应答;Pt=患者;RECIST=实体瘤的应答评价标准;SD=稳定疾病。
图2A.在沙西妥珠单抗戈维替康治疗之前和之后,患者(Pt)6中使用实体瘤的应答评价标准(1.1版)评估计算机断层摄影术(CT)扫描上的靶病灶。患者6最初呈现4个靶病灶(2个肝脏,1个乙状结肠,1个骨盆腹膜),最大直径总和为138mm。另外的非靶病灶存在于肝脏和骨盆中的淋巴结中。以8mg/kg的剂量水平开始治疗。白色箭头突出显示在基线处获得的轴向切片中的靶病灶1-3。在沙西妥珠单抗戈维替康治疗的9个周期后,6个月后同一区域的轴向切片展示靶病灶的直径总和减少至86mm(-38%)以及非靶病灶中的稳定疾病。
图2B.从用沙西妥珠单抗戈维替康治疗的三名尿路上皮癌患者(患者3、4和6)获得的Trop-2(TACSTD2)的表达。将对照载玻片与正常山羊IgG一起孵育。与山羊抗Trop-2抗体一起孵育的相应切片展示出强烈的Trop-2表达。表达Trop-2的细胞(患者6)的扩大插图展示Trop-2定位于细胞膜。比例尺=0.1mm。
图3.根据RECIST标准最佳应答的IMMU-132I/II期数据。
图4.在许多先前疗法失败后,用10mg/kg IMMU-132治疗的52名人TNBC患者的应答。
图5.用10mg/kg IMMU-132治疗的TNBC患者的无进展存活。
图6.用8至10mg/kg IMMU-132治疗的29名可评估的人NSCLC患者的最佳应答。
图7.用8-10mg/kg IMMU-132治疗的NSCLC患者的进展时间。
图8.用8或10mg/kg IMMU-132治疗的NSCLC患者的无进展存活。
图9A.组合的IMMU-132和奥拉帕尼在TNBC:BRCA1/2和PTEN缺陷型肿瘤中的肿瘤生长抑制。将携带肿瘤的小鼠(TV约0.3cm3)用奥拉帕尼(1mg;约50mg/kg,腹膜内根据M-F方案中;红色箭头)或IMMU-132(静脉内每周一次,黑色箭头)处理。使用非肿瘤靶向抗CD20SN-38-ADC作为对照。HCC1806是BRCA1/2缺陷型TNBC肿瘤系。单独奥拉帕尼没有显著抗肿瘤作用。与所有对照组相比,单独IMMU-132显著抑制肿瘤生长(P<0.0106,AUC)。与所有组相比,IMMU-132加奥拉帕尼显著进一步改善抗肿瘤应答(P<0.0019;AUC)。组合组中的小鼠尚未达到分别比IMMU-132或奥拉帕尼单一疗法长超过2倍和4倍的中值存活期(>80.5天)(P<0.0083)。
图9B.组合的IMMU-132和奥拉帕尼在TNBC:BRCA1/2和PTEN缺陷型肿瘤中的肿瘤生长抑制。将携带肿瘤的小鼠(TV约0.3cm3)用奥拉帕尼(1mg;约50mg/kg,腹膜内根据M-F方案中;浅色箭头)或IMMU-132(静脉内每周一次,深色箭头)处理。使用非肿瘤靶向抗CD20SN-38-ADC作为对照。在BRCA1/2野生型PTEN缺陷型MDA-MB-468肿瘤中,与所有对照组相比,单独IMMU-132具有显著抗肿瘤作用(P<0.0098;AUC)。然而,IMMU-132加奥拉帕尼的组合抑制肿瘤生长显著优于单独IMMU-132或奥拉帕尼(P=0.004;AUC)。当与所有其他组相比时,这转化为显著存活益处(P<0.045)。
具体实施方式
定义
在以下描述中,使用了许多术语,并且提供以下定义以便于理解所要求保护的主题。本文未明确定义的术语根据其平常和普通的含义使用。
除非另外指明,否则一个/种(a/an)意指一个(种)或多个(种)。
术语约在本文中用于意指数值的加上或减去百分之十(10%)。例如“约100”是指介于90与110之间的任何数字。
如本文使用的抗体是指全长(即,天然存在的或通过正常免疫球蛋白基因片段重组过程形成的)免疫球蛋白分子(例如,IgG抗体)或免疫球蛋白分子的抗原结合部分,如抗体片段。抗体或抗体片段可在要求保护的主题的范围内缀合或以其他方式衍生化。此类抗体包括但不限于IgG1、IgG2、IgG3、IgG4(和IgG4亚型)以及IgA同种型。如下文所用,缩写“MAb”可互换使用来指抗体、抗体片段、单克隆抗体或多特异性抗体。
抗体片段是抗体的一部分,如F(ab′)2、F(ab)2、Fab′、Fab、Fv、scFv(单链Fv)、单结构域抗体(DAB或VHH)等,包括上文引用的IgG4的半分子(van der Neut Kolfschoten等人(Science 2007;317(9月14日):1554-1557)。无论结构如何,所使用的抗体片段与完整抗体所识别的相同抗原结合。术语“抗体片段”还包括通过与特定抗原结合以形成复合物而起抗体作用的合成或遗传工程化的蛋白质。举例来说,抗体片段包括由可变区组成的分离的片段,如由重链和轻链的可变区组成的“Fv”片段,以及其中轻和重可变区由肽接头连接的重组单链多肽分子(“scFv蛋白”)。可以不同方式构建片段以产生多价和/或多特异性结合形式。
裸抗体通常是未与治疗剂缀合的完整抗体。裸抗体可例如通过Fc依赖性功能、如补体结合(CDC)和ADCC(抗体依赖性细胞细胞毒性)表现出治疗和/或细胞毒性作用。然而,其他机制如细胞凋亡、抗血管生成、抗转移活性、抗粘附活性、异型或同型粘附的抑制以及信号传导途径中的干扰也可提供治疗作用。裸抗体包括多克隆和单克隆抗体、天然存在的或重组的抗体,如嵌合、人源化或人抗体及其片段。在一些情况下,“裸抗体”也可指“裸”抗体片段。如本文所定义,“裸的”与“未缀合的”同义,并且意指不与治疗剂连接或缀合。
嵌合抗体是重组蛋白,其含有来源于一种物种的抗体、优选啮齿动物抗体、更优选鼠抗体的重链和轻链抗体链的可变结构域,包括互补决定区(CDR),而抗体分子的恒定结构域来源于人抗体的恒定结构域。对于兽医学应用,嵌合抗体的恒定结构域可来源于其他物种,如灵长类动物、猫或狗的恒定结构域。
人源化抗体是重组蛋白,其中将来自一种物种的抗体、例如鼠抗体的CDR从鼠抗体的可变重链和可变轻链转移到人重链和轻链可变结构域(框架区)中。抗体分子的恒定区来源于人抗体的恒定区。在一些情况下,可修饰人源化抗体的框架区的特定残基,特别是接触或接近CDR序列的那些残基,例如用来自原始鼠、啮齿动物、类人灵长类动物或其他抗体的相应残基置换。
人抗体是例如从转基因小鼠获得的抗体,所述转基因小鼠已被“工程化”以响应于抗原激发而产生人抗体。在这种技术中,将人重链和轻链基因座的元件引入到来源于胚胎干细胞系的小鼠品系中,所述胚胎干细胞系含有内源性重链和轻链基因座的靶向破坏。转基因小鼠可合成对各种抗原具有特异性的人抗体,并且小鼠可用来产生分泌人抗体的杂交瘤。用于从转基因小鼠获得人抗体的方法由Green等人,Nature Genet.7:13(1994);Lonberg等人,Nature 368:856(1994)以及Taylor等人,Int.Immun.6:579(1994)描述。完全人抗体也可通过基因或染色体转染方法以及噬菌体展示技术构建,所有技术都是本领域已知的。参见,例如McCafferty等人,Nature 348:552-553(1990)从来自未免疫供体的免疫球蛋白可变结构域基因库(repertoire)体外产生人抗体及其片段)。在这种技术中,将人抗体可变结构域基因同框克隆到丝状噬菌体的主要或次要外壳蛋白基因中,并在噬菌体颗粒的表面上展示为功能性抗体片段。因为丝状颗粒包含噬菌体基因组的单链DNA拷贝,所以基于抗体的功能性质的选择也导致选择编码表现出这些性质的抗体的基因。以此方式,噬菌体模拟B细胞的一些性质。可以各种形式进行噬菌体展示,对于它们的综述,参见例如Johnson和Chiswell,Current Opinion in StructuralBiology 3:5564-571(1993)。人抗体也可通过体外活化的B细胞来产生。参见美国专利号5,567,610和5,229,275,其各自的实施例部分以引用的方式并入本文。
治疗剂是在疾病的治疗中有用的原子、分子或化合物。治疗剂的实例包括但不限于抗体、抗体片段、免疫缀合物、药物、细胞毒性剂、促凋亡剂、毒素、核酸酶(包括DNA酶和RNA酶)、激素、免疫调节剂、螯合剂、硼化合物、光敏剂或染料、放射性核素、寡核苷酸、干扰RNA、siRNA、RNAi、抗血管生成剂、化学治疗剂、细胞因子、趋化因子、前药、酶、结合蛋白或肽或其组合。
免疫缀合物是与治疗剂缀合的抗体、抗原结合抗体片段、抗体复合物或抗体融合蛋白。缀合可以是共价的或非共价的。优选地,缀合是共价的。其中抗体组分与药物缀合的特定形式的免疫缀合物在本文中称为抗体-药物缀合物(ADC)。
如本文所用,术语抗体融合蛋白是重组产生的抗原结合分子,其中一种或多种天然抗体、单链抗体或抗体片段与另一部分(如蛋白质或肽、毒素、细胞因子、激素等)连接。在某些优选的实施方案中,融合蛋白可包含融合在一起的两种或更多种相同或不同的抗体、抗体片段或单链抗体,其可结合至同一表位、同一抗原上的不同表位或不同的抗原。
免疫调节剂是当存在时改变、抑制或刺激身体的免疫系统的治疗剂。通常,所使用的免疫调节剂刺激免疫细胞在免疫应答级联中增殖或变得活化,如巨噬细胞、树突细胞、B细胞和/或T细胞。然而,在一些情况下,免疫调节剂可抑制免疫细胞的增殖或活化。如本文所述的免疫调节剂的实例是细胞因子,其是在与特定抗原接触时由一种细胞群体(例如,引发的T淋巴细胞)释放的大约5-20kDa的可溶性小蛋白质,并且其充当细胞之间的细胞间介质。如技术人员将理解的,细胞因子的实例包括淋巴因子、单核因子、白细胞介素和若干相关的信号分子,如肿瘤坏死因子(TNF)和干扰素。趋化因子是细胞因子的子集。某些白细胞介素和干扰素是刺激T细胞或其他免疫细胞增殖的细胞因子的实例。示例性干扰素包括干扰素-α、干扰素-β、干扰素-γ和干扰素-λ。
CPT是喜树碱的缩写,且如本申请中所用,CPT表示喜树碱本身或喜树碱的类似物或衍生物,如SN-38。
抗Trop-2抗体
优选地,主题ADC包括结合至Trop-2的至少一种抗体或其片段。在具体的优选实施方案中,抗Trop-2抗体可以是人源化RS7抗体(参见例如,美国专利号7,238,785,其以引用的方式整体并入本文),其包含轻链CDR序列CDR1(KASQDVSIAVA,SEQ ID NO:1)、CDR2(SASYRYT,SEQ ID NO:2)和CDR3(QQHYITPLT,SEQ ID NO:3)以及重链CDR序列CDR1(NYGMN,SEQ ID NO:4)、CDR2(WINTYTGEPTYTDDFKG,SEQ ID NO:5)和CDR3(GGFGSSYWYFDV,SEQ IDNO:6)。
RS7抗体是针对人原发性鳞状细胞肺癌的粗膜制备而产生的鼠IgG1(Stein等人,Cancer Res.50:1330,1990)。RS7抗体识别表征为簇13的46-48kDa糖蛋白。(Stein等人,Int.J.Cancer Supp.8:98-102,1994)。所述抗原被命名为EGP-1(上皮糖蛋白-1),但也称为Trop-2。
Trop-2是I型跨膜蛋白,并且已从人(Fornaro等人,Int J Cancer 1995;62:610-8)和小鼠细胞(Sewedy等人,Int J Cancer 1998;75:324-30)二者克隆。除了作为肿瘤相关钙信号转导蛋白(Ripani等人,Int J Cancer1998;76:671-6)的作用之外,人Trop-2的表达还显示出对于肿瘤发生和结肠癌细胞的侵袭性是必要的,这可有效地减少针对Trop-2的细胞外结构域的多克隆抗体(Wang等人,Mol CancerTher 2008;7:280-5)。Trop-2作为实体癌的治疗靶标的日益增长的兴趣(Cubas等人,BiochimBiophysActa 2009;1796:309-14)由另外的报告证明,所述报告记录了过表达的Trop-2在乳腺癌(Huang等人,Clin CancerRes2005;11:4357-64)、结肠直肠癌(Ohmachi等人,Clin Cancer Res2006;12:3057-63;Fang等人,Int J Colorectal Dis 2009;24:875-84)和口腔鳞状细胞癌(Fong等人,ModernPathol 2008;21:186-91)中的临床意义。表达高水平的Trop-2的前列腺基底细胞被富集以获得体外和体内干细胞活性的最新证据尤其值得注意(Goldstein等人,Proc Natl AcadSci USA2008;105:20882-7)。
流式细胞术和免疫组织化学染色研究已经显示,RS7MAb检测许多肿瘤类型上的抗原,与正常人组织的结合有限(Stein等人,1990)。Trop-2主要由癌,如肺癌、胃癌、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫癌和前列腺癌表达。在动物模型中使用放射性标记的鼠RS7MAb进行的定位和治疗研究已证明肿瘤靶向和治疗功效(Stein等人,1990;Stein等人,1991)。在来自肺、乳腺、膀胱、卵巢、子宫、胃和前列腺的肿瘤中显示出强RS7染色(Stein等人,Int.J.Cancer 55:938,1993)。肺癌病例包括鳞状细胞癌和腺癌两者(Stein等人,Int.J.Cancer 55:938,1993)。两种细胞类型均被强染色,从而表明RS7抗体不能鉴别非小细胞肺癌的组织学分类。
RS7MAb快速内化到靶细胞中(Stein等人,1993)。RS7MAb的内化速率常数介于两种其他快速内化MAb的内化速率常数之间,其已被证明可用于免疫缀合物产生。(同上)已充分证明免疫缀合物的内化是抗肿瘤活性的要求。(Pastan等人,Cell 47:641,1986)药物免疫缀合物的内化一直被描述为抗肿瘤功效中的主要因素(Yang等人,Proc.Nat'lAcad.Sci.USA85:1189,1988)。因此,RS7抗体表现出用于治疗应用的若干重要性质。
虽然hRS7抗体是优选的,但其他抗Trop-2抗体是已知的和/或可公开获得的,并且在替代实施方案中可用于主题ADC中。虽然人源化或人抗体对于降低的免疫原性是优选的,但在替代实施方案中可使用嵌合抗体。如下文所讨论,抗体人源化的方法是本领域熟知的,并且可用于将可用的鼠或嵌合抗体转化为人源化形式。
抗Trop-2抗体可从许多来源商购获得,并且包括LS-C126418、LS-C178765、LS-C126416、LS-C126417(LifeSpan BioSciences,Inc.,Seattle,WA);10428-MM01、10428-MM02、10428-R001、10428-R030(Sino Biological Inc.,Beijing,China);MR54(eBioscience,San Diego,CA);sc-376181、sc-376746,Santa Cruz Biotechnology(SantaCruz,CA);MM0588-49D6(Novus Biologicals,Littleton,CO);ab79976和ab89928(Cambridge,MA)。
其他抗Trop-2抗体公开于专利文献中。例如,美国公布号2013/0089872公开了保藏在日本筑波的国际专利生物保藏中心(International Patent Organism Depositary,Tsukuba,Japan)的抗Trop-2抗体K5-70(登录号FERM BP-11251)、K5-107(登录号FERM BP-11252)、K5-116-2-1(登录号FERM BP-11253)、T6-16(登录号FERM BP-11346)和T5-86(登录号FERM BP-11254)。美国专利号5,840,854公开了抗Trop-2单克隆抗体BR110(ATCC号HB11698)。美国专利号7,420,040公开了以登录号141205-05保藏在IDAC(加拿大国际保藏机构,温尼伯,加拿大)的杂交瘤细胞系AR47A6.4.2产生的抗Trop-2抗体。美国专利号7,420,041公开了以登录号141205-03保藏在IDAC的杂交瘤细胞系AR52A301.5产生的抗Trop-2抗体。美国公布号2013/0122020公开了抗Trop-2抗体3E9、6G11、7E6、15E2、18B1。编码代表性抗体的杂交瘤保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC),登录号PTA-12871和PTA-12872。包含连接至微管蛋白抑制剂单甲基奥瑞斯他汀F(MMAF)的抗5T4(抗Trop-2)抗体的免疫缀合物PF 06263507可从Pfizer,Inc.获得。(Groton,CT)(参见,例如,Sapra等人,2013,MolCancer Ther 12:38-47)。美国专利号8,715,662公开了以保藏号PD 08019、PD 08020和PD08021保藏在AID-ICLC(Genoa,Italy)的杂交瘤产生的抗Trop-2抗体。美国专利申请公布号20120237518公开了抗Trop-2抗体77220、KM4097和KM4590。美国专利号8,309,094(Wyeth)公开了通过序列表鉴定的抗体A1和A3。本段落上述引用的每个专利或专利申请的实施例部分以引用的方式并入本文。非专利公布Lipinski等人(1981,Proc Natl.Acad Sci USA,78:5147-50)公开了抗Trop-2抗体162-25.3和162-46.2。
许多抗Trop-2抗体是本领域已知的和/或可公开获得的。如下文所论述,用于制备针对已知抗原的抗体的方法是本领域常规的。人Trop-2蛋白的序列也是本领域已知的(参见例如,GenBank登录号CAA54801.1)。用于产生人源化、人或嵌合抗体的方法也是已知的。普通技术人员在根据本领域的一般知识阅读本公开时将能够将能够在主题ADC中制造和使用抗Trop-2抗体的种属。
喜树碱缀合物
用于制备包含连接至抗体或抗原结合抗体片段的喜树碱治疗剂的免疫缀合物的非限制性方法和组合物在下文进行了描述。在优选的实施方案中,通过在药物与抗体之间放置限定的聚乙二醇(PEG)部分(即,含有限定数量的单体单元的PEG)来增强药物的溶解度,其中限定的PEG是优选含有1-30个单体单元、更优选含有1-12个单体单元、最优选含有6-8个单体单元的低分子量PEG。
优选地,第一接头在一端连接药物,并且可在另一端用乙炔或叠氮化物基团终止。这种第一接头可包含在一端具有叠氮化物或乙炔基团并且在另一端具有不同的反应性基团(如羧酸或羟基)的限定的PEG部分。所述双官能限定的PEG可连接至氨基醇的胺基团上,并且后者的羟基可连接至呈碳酸酯形式的药物上的羟基。或者,所述限定的双官能PEG的非叠氮化物(或乙炔)部分任选连接至L-氨基酸或多肽的N-末端,其C-末端连接至氨基醇的氨基,并且后者的羟基连接至分别呈碳酸酯或氨基甲酸酯形式的药物的羟基。
包含抗体偶联基团和与第一接头的叠氮化物(或乙炔)基团互补的反应性基团(即乙炔(或叠氮化物))的第二接头可经由乙炔-叠氮化物环加成反应与药物-(第一接头)缀合物反应以提供最终的双官能药物产品,其可用于缀合至靶向疾病的抗体。抗体偶联基团优选地是硫醇或硫醇反应性基团。
下文提供了在涉及CPT类似物如SN-38的药物-接头前体制剂中在C-20碳酸酯存在下选择性再生10-羟基的方法。也可使用药物中的反应性羟基的其他保护基团,如SN-38中的酚羟基,例如叔丁基二甲基甲硅烷基或叔丁基二苯基甲硅烷基,并且在将衍生化的药物连接至抗体偶联部分之前通过四丁基氟化铵对这些进行脱保护。除了‘BOC’之外,CPT类似物的10-羟基可替代地被保护为酯或碳酸酯,以使得双官能CPT与抗体缀合而没有这种保护基团的先前脱保护。在施用生物缀合物后,保护基团在生理pH条件下容易地脱保护。
在称为‘点击化学’的乙炔-叠氮化物偶联中,叠氮化物部分可在L2上,乙炔部分在L3上。或者,L2可含有乙炔,L3含有叠氮化物。‘点击化学’是指乙炔部分与叠氮化物部分之间的铜(+1)催化的环加成反应(Kolb HC和Sharpless KB,DrugDiscov Today 2003;8:1128-37),尽管已知并且可使用替代形式的点击化学。点击化学在近中性pH条件下在水溶液中发生,并且因此适合于药物缀合。点击化学的优点在于它是化学选择性的,并且补充其他众所周知的缀合化学如硫醇-马来酰亚胺反应。
示例性的优选实施方案涉及药物衍生物和抗体的具有以下所示的通式(1)的缀合物。
MAb-[L2]-[L1]-[AA]m-[A’]-药物 (1)
其中MAb是靶向疾病的抗体;L2是包含抗体偶联部分和一个或多个乙炔(或叠氮化物)基团的交联剂的组分;L1包含在一端具有与L2中的乙炔(或叠氮化物)部分互补的叠氮化物(或乙炔)的限定的PEG以及在另一端的反应性基团如羧酸或羟基;AA是L-氨基酸;m是值为0、1、2、3或4的整数;并且A'是选自乙醇胺、4-羟基苄醇、4-氨基苄醇或取代的或未取代的乙二胺的组的另外的间隔基。‘AA’的L氨基酸选自丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸以及缬氨酸。如果A'基团含有羟基,则它连接至分别呈碳酸酯或氨基甲酸酯形式的药物的羟基或氨基。
在式1的优选实施方案中,A'是衍生自L-氨基酸的取代的乙醇胺,其中所述氨基酸的羧酸基团被羟甲基部分置换。A'可衍生自以下L-氨基酸中的任一种:丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸以及缬氨酸。
在式1的优选实施方案的缀合物的实例中,m是0,A'是L-缬氨醇,并且药物由SN-38例示。在式1的另一个实例中,m是1并且由衍生化的L-赖氨酸代表,A'是L-缬氨醇,并且药物由SN-38例示。在此实施方案中,使用赖氨酸氨基的正交保护基团首先在氨基酸如赖氨酸的羧酸与缬氨醇的氨基之间形成酰胺键。除去赖氨酸的N-末端上的保护基团,从而保持赖氨酸的侧链上的保护基团完整,并且N-末端与在另一端具有叠氮化物(或乙炔)的限定的PEG上的羧基偶联。缬氨醇的羟基然后连接至10-羟基保护的SN-38的20-氯甲酸酯衍生物,并且此中间体与携带抗体结合部分的L2组分以及参与点击环加成化学的互补的乙炔(或叠氮化物)基团偶联。最后,除去赖氨酸侧链和SN-38两者处的保护基团得到此实施例的产物。
虽然不希望受理论束缚,但在细胞内蛋白水解后产生的小MW SN-38产物(即缬氨醇-SN-38碳酸酯)具有通过涉及缬氨醇的氨基和碳酸酯的羰基的分子内环化释放完整SN-38的额外途径。
在另一个优选的实施方案中,具有通式1的A'是A-OH,其中A-OH是可塌缩的部分,如4-氨基苄醇或在苄基位置被C1-C10烷基取代的取代的4-氨基苄醇,并且后者经由其氨基连接至L-氨基酸或包含至多4个L-氨基酸部分的多肽;其中N-末端连接至终止于抗体结合基团中的交联剂。
在优选实施方案的另一个实例中,具有通式1的A'的A-OH衍生自取代的4-氨基苄醇,并且‘AA’由通式1中m=1情况下的单个L-氨基酸组成,并且药物以SN-38例示。AA的单个氨基酸可选自以下L-氨基酸中的任一种:丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸以及缬氨酸。4-氨基苄醇部分上的取代基R(A'的A-OH实施方案)是氢或选自C1-C10烷基的烷基。此式的实例(其中单个氨基酸AA是L-赖氨酸并且R=H,并且药物由SN-38例示)被称为MAb-CL2A-SN-38(下文所示)。所述结构与接头MAb-CL2-SN-38的区别在于单个赖氨酸残基取代CL2接头中发现的Phe-Lys二肽。将Phe-Lys二肽设计为溶酶体酶的组织蛋白酶B裂解位点,其被认为对于结合的药物的细胞内释放是重要的。出人意料地,尽管消除组织蛋白酶裂解位点,但包含CL2A接头的免疫缀合物在体内显然比包含CL2接头的那些更有效。
在优选的实施方案中,AA包含可被细胞内肽酶裂解的多肽部分,优选二、三或四肽。实例是:Ala-Leu、Leu-Ala-Leu和Ala-Leu-Ala-Leu(SEQ ID NO:7)(Trouet等人,1982)。
在另一个优选的实施方案中,缀合物的L1组分含有具有1-30个重复单体单元的限定的聚乙二醇(PEG)间隔基。在进一步优选的实施方案中,PEG是具有1-12个重复单体单元的限定的PEG。PEG的引入可涉及使用可商购的异双官能化PEG衍生物。异双官能PEG可含有叠氮化物或乙炔基团。
在优选的实施方案中,L2具有在2-40个、但优选2-20个、并且更优选2-5个范围内的多个乙炔(或叠氮化物)基团和单个抗体结合部分。在代表性实例中,‘L2’组分附加至2个炔属基团,从而导致连接附加两个叠氮化物的SN-38分子。与MAb的键合可涉及琥珀酰亚胺。
在优选的实施方案中,当双官能药物含有硫醇反应性部分作为抗体结合基团时,使用硫醇化试剂在抗体的赖氨酸基团上产生抗体上的硫醇。用于通过修饰MAb的赖氨酸基团将硫醇基团引入到抗体上的方法是本领域熟知的(Wong于Chemistry ofproteinconjugation and cross-linking,CRC Press,Inc.,Boca Raton,FL(1991),第20-22页中)。或者,使用还原剂如二硫苏糖醇(DTT)温和还原抗体上的链间二硫键(Willner等人,Bioconjugate Chem.4:521-527(1993))可在抗体上产生7至10个硫醇;其具有在MAb的远离抗原结合区的链间区域中并入多个药物部分的优点。在更优选的实施方案中,SN-38连接至还原的二硫化物巯基导致形成抗体-SN-38免疫缀合物,其中每个抗体分子共价连接有6个SN-38部分。提供用于连接药物或其他治疗剂的半胱氨酸残基的其他方法是已知的,如使用半胱氨酸工程化的抗体(参见美国专利号7,521,541,其实施例部分以引用的方式并入本文)。
在替代优选的实施方案中,化学治疗部分是选自由以下组成的组:阿霉素(DOX)、表柔比星、吗啉代阿霉素(吗啉代-DOX)、氰基吗啉代-阿霉素(氰基吗啉代-DOX)、2-吡咯啉基-阿霉素(2-PDOX)、Pro-2PDOX、CPT、10-羟基喜树碱、SN-38、托泊替康、勒托替康(lurtotecan)、9-氨基喜树碱、9-硝基喜树碱、紫杉烷、格尔德霉素、安莎霉素和埃博霉素。在更优选的实施方案中,化学治疗部分是SN-38。优选地,在优选实施方案的缀合物中,抗体连接至至少一个化学治疗部分;优选1至约12个化学治疗部分;最优选约6至约12个化学治疗部分。
此外,在优选的实施方案中,接头组分‘L2’包含硫醇基团,所述硫醇基团与在所述抗体的一个或多个赖氨酸侧链氨基处引入的硫醇反应性残基反应。在此类情况下,通过本领域充分描述的程序,将抗体用硫醇反应性基团如马来酰亚胺、乙烯基砜、溴乙酰胺或碘乙酰胺预衍生化。
在这种工作的背景下,出人意料地发现了一种方法,通过所述方法可制备CPT药物-接头,其中CPT另外具有10-羟基。这种方法包括但不限于保护10-羟基作为叔丁氧基羰基(BOC)衍生物,随后制备药物-接头缀合物的倒数第二个中间体。通常,除去BOC基团需要用强酸如三氟乙酸(TFA)处理。在这些条件下,含有待除去的保护基团的CPT 20-O-接头碳酸酯也易于裂解,从而产生未修饰的CPT。事实上,如本领域所阐述的,使用可温和除去的甲氧基三苯甲基(MMT)保护基团用于接头分子的赖氨酸侧链的原理正是为了避免这种可能性(Walker等人,2002)。发现通过进行短持续时间的反应,最佳3至5分钟,可能选择性除去酚BOC保护基团。在这些条件下,主要产物是去除10-羟基位置的‘BOC’、而‘20’位置的碳酸酯为完整的产物。
替代方法涉及用除‘BOC’以外的基团保护CPT类似物的10-羟基位置,以使得最终产物准备好与抗体缀合而不需要使10-OH保护基团脱保护。将10-OH转化为酚碳酸酯或酚酯的10-羟基保护基团易容易地在体内施用缀合物后通过生理pH条件或通过酯酶脱保护。He等人已经描述了在生理条件下在10位置处的酚碳酸酯对比10-羟基喜树碱的20位置处的叔碳酸酯的更快除去(He等人,Bioorganic&Medicinal Chemistry 12:4003-4008(2004))。SN-38上的10-羟基保护基团可以是‘COR’,其中R可以是取代的烷基如“N(CH3)2-(CH2)n”,其中n是1-10并且其中末端氨基任选地呈季盐形式以增强水溶性;或简单的烷基残基如“CH3-(CH2)n”,其中n是0-10;或者它可以是烷氧基部分,如“CH3-(CH2)n-O-”,其中n是0-10,或“N(CH3)2-(CH2)n-O-”,其中n是2-10,或“R1O-(CH2-CH2-O)n-CH2-CH2-O-”,其中R1是乙基或甲基,并且n是具有0-10的值的整数。如果最终衍生物将是碳酸酯,则通过用所选试剂的氯甲酸酯处理容易地制备这些10-羟基衍生物。通常,使用三乙胺作为碱,用摩尔当量的二甲基甲酰胺中的氯甲酸酯处理含有10-羟基的喜树碱如SN-38。在这些条件下,20-OH位置不受影响。为了形成10-O-酯,使用所选试剂的酰基氯。
在制备药物衍生物和抗体的具有通式1的缀合物的优选方法中,其中描述符L2、L1、AA和A-X如前面部分中所描述,首先制备双官能药物部分[L2]-[L1]-[AA]m-[A-X]-药物,随后将双官能药物部分缀合至抗体(在本文中表示为“MAb”)。
在制备药物衍生物和抗体的具有通式1的缀合物的优选方法中,其中描述符L2、L1、AA和A-OH如前面部分中所描述,通过首先经由酰胺键将A-OH连接至AA的C-末端、随后将AA的胺末端偶联至L1的羧酸基团来制备双官能药物部分。如果AA不存在(即m=0),则A-OH经由酰胺键直接连接至L1。交联剂[L1]-[AA]m-[A-OH]连接至药物的羟基或氨基,并且其随后经由点击化学通过借助于L1和L2中叠氮化物(或乙炔)与乙炔(或叠氮化物)基团之间的反应而连接至L1部分。
在一个实施方案中,所述抗体是单克隆抗体(MAb)。在其他实施方案中,所述抗体可以是多价和/或多特异性MAb。抗体可以是鼠、嵌合、人源化或人单克隆抗体,并且所述抗体可以是完整、片段(Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2)或亚片段(单链构建体)、或具有IgG1、IgG2a、IgG3、IgG4、IgA同种型或来自其的亚分子。
在优选的实施方案中,所述抗体结合至在癌细胞或恶性细胞上表达的抗原或抗原的表位。癌细胞优选地是来自造血系统肿瘤、癌、肉瘤、黑素瘤或神经胶质肿瘤的细胞。在最优选的实施方案中,抗体部分是抗Trop-2,并且抗Trop-2-SN-38ADC用于治疗任何表达Trop-2的癌症。在另一个优选的实施方案中,细胞内可裂解部分可在通过MAb-药物缀合物结合至其受体后内化到细胞中后被裂解。
一般抗体技术
用于制备针对实际上任何靶抗原的单克隆抗体的技术是本领域中熟知的。参见例如,和Milstein,Nature 256:495(1975);以及Coligan等人(编辑),CURRENTPROTOCOLS IN IMMUNOLOGY,第1卷,第2.5.1-2.6.7页(John Wiley&Sons 1991)。简言之,单克隆抗体可通过以下步骤获得:用包含抗原的组合物注射小鼠,移除脾脏以获得B淋巴细胞,使B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合以产生杂交瘤,克隆所述杂交瘤,选择产生针对所述抗原的抗体的阳性克隆,培养产生针对所述抗原的抗体的克隆,以及从所述杂交瘤培养物分离所述抗体。普通技术人员将认识到,当抗体被施用至人受试者时,抗体将结合至人抗原。
MAb可通过许多广泛接受的技术从所述杂交瘤培养物分离和纯化。此类分离技术包括使用蛋白-A或蛋白-G Sepharose的亲和色谱法、尺寸排阻色谱法和离子交换色谱法。参见例如,Coligan第2.7.1-2.7.12页和第2.9.1-2.9.3页。此外,参见Baines等人,“Purification of Immunoglobulin G(IgG),”于METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY,第10卷,第79-104页(The HumanaPress,Inc.1992)中。
在针对免疫原的抗体的初始产生之后,可对抗体进行测序,并且随后通过重组技术制备。鼠抗体和抗体片段的人源化和嵌合是本领域的技术人员已知的,如下文所讨论。
技术人员将认识到,要求保护的方法和组合物可使用本领域已知的多种抗体中的任一种。使用的抗体可从各种已知的来源商业获得。例如,许多分泌抗体的杂交瘤系可得自美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection(ATCC,Manassas,VA))。大量针对各种疾病靶标(包括但不限于肿瘤相关抗原)的抗体已保藏于ATCC和/或已公布可变区序列并且可获得以用于所要求保护的方法和组合物中。参见例如,美国专利号7,312,318;7,282,567;7,151,164;7,074,403;7,060,802;7,056,509;7,049,060;7,045,132;7,041,803;7,041,802;7,041,293;7,038,018;7,037,498;7,012,133;7,001,598;6,998,468;6,994,976;6,994,852;6,989,241;6,974,863;6,965,018;6,964,854;6,962,981;6,962,813;6,956,107;6,951,924;6,949,244;6,946,129;6,943,020;6,939,547;6,921,645;6,921,645;6,921,533;6,919,433;6,919,078;6,916,475;6,905,681;6,899,879;6,893,625;6,887,468;6,887,466;6,884,594;6,881,405;6,878,812;6,875,580;6,872,568;6,867,006;6,864,062;6,861,511;6,861,227;6,861,226;6,838,282;6,835,549;6,835,370;6,824,780;6,824,778;6,812,206;6,793,924;6,783,758;6,770,450;6,767,711;6,764,688;6,764,681;6,764,679;6,743,898;6,733,981;6,730,307;6,720,155;6,716,966;6,709,653;6,693,176;6,692,908;6,689,607;6,689,362;6,689,355;6,682,737;6,682,736;6,682,734;6,673,344;6,653,104;6,652,852;6,635,482;6,630,144;6,610,833;6,610,294;6,605,441;6,605,279;6,596,852;6,592,868;6,576,745;6,572;856;6,566,076;6,562,618;6,545,130;6,544,749;6,534,058;6,528,625;6,528,269;6,521,227;6,518,404;6,511,665;6,491,915;6,488,930;6,482,598;6,482,408;6,479,247;6,468,531;6,468,529;6,465,173;6,461,823;6,458,356;6,455,044;6,455,040,6,451,310;6,444,206;6,441,143;6,432,404;6,432,402;6,419,928;6,413,726;6,406,694;6,403,770;6,403,091;6,395,276;6,395,274;6,387,350;6,383,759;6,383,484;6,376,654;6,372,215;6,359,126;6,355,481;6,355,444;6,355,245;6,355,244;6,346,246;6,344,198;6,340,571;6,340,459;6,331,175;6,306,393;6,254,868;6,187,287;6,183,744;6,129,914;6,120,767;6,096,289;6,077,499;5,922,302;5,874,540;5,814,440;5,798,229;5,789,554;5,776,456;5,736,119;5,716,595;5,677,136;5,587,459;5,443,953;5,525,338,其各自的实施例部分以引用的方式并入本文。这些仅仅是示例性的,并且许多其他抗体及其杂交瘤是本领域已知的。熟练技术人员将认识到,针对几乎任何疾病相关抗原的抗体序列或分泌抗体的杂交瘤可通过在ATCC、NCBI和/或USPTO数据库中简单搜索针对目标选定疾病相关靶标的抗体来获得。可使用本领域熟知的标准技术扩增、切除克隆的抗体的抗原结合结构域,连接至表达载体中,转染到适应宿主细胞中并用于蛋白质产生。可使用本文公开的技术将分离的抗体缀合至治疗剂,如喜树碱。
嵌合和人源化抗体
嵌合抗体是其中人抗体的可变区被例如小鼠抗体的可变区,包括小鼠抗体的互补决定区(CDR)置换的重组蛋白。当施用至受试者时,嵌合抗体表现出降低的免疫原性和增加的稳定性。用于构建嵌合抗体的方法是本领域熟知的(例如,Leung等人,1994,Hybridoma13:469)。
嵌合单克隆抗体可通过将来自小鼠免疫球蛋白的可变重链和轻链的小鼠CDR转移到人抗体的相应可变结构域中来进行人源化。嵌合单克隆抗体中的小鼠框架区(FR)也被人FR序列置换。为了保持人源化单克隆的稳定性和抗原特异性,可通过小鼠对应物残基置换一个或多个人FR残基。人源化单克隆抗体可用于受试者的治疗性治疗。用于产生人源化单克隆抗体的技术是本领域熟知的。(参见例如,Jones等人,1986,Nature,321:522;Riechmann等人,Nature,1988,332:323;Verhoeyen等人,1988,Science,239:1534;Carter等人,1992,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA,89:4285;Sandhu,Crit.Rev.Biotech.,1992,12:437;Tempest等人,1991,Biotechnology 9:266;Singer等人,J.Immun.,1993,150:2844.)
其他实施方案可涉及非人灵长类动物抗体。用于在狒狒中产生治疗上有用的抗体的一般技术可例如在Goldenberg等人,WO 91/11465(1991)和Losman等人,Int.J.Cancer46:310(1990)中找到。在另一个实施方案中,抗体可以是人单克隆抗体。如下文所论述,此类抗体可从转基因小鼠获得,所述转基因小鼠已进行工程化以响应于抗原激发产生特异性人抗体。
人抗体
使用组合方法或用人免疫球蛋白基因座转化的转基因动物来产生完全人抗体的方法是本领域已知的(例如,Mancini等人,2004,New Microbiol.27:315-28;Conrad和Scheller,2005,Comb.Chem.High Throughput Screen.8:117-26;Brekke和Loset,2003,Curr.Opin.Phamacol.3:544-50;其各自以引用的方式并入本文)。预期此类完全人抗体表现出比嵌合或人源化抗体甚至更少的副作用并且在体内起基本上内源性人抗体的作用。在某些实施方案中,所要求保护的方法和程序可使用由此类技术产生的人抗体。
在一个替代方案中,可使用噬菌体展示技术来产生人抗体(例如,Dantas-Barbosa等人,2005,Genet.Mol.Res.4:126-40,以引用的方式并入本文)。人抗体可从正常人或从表现出特定疾病状态如癌症的人产生(Dantas-Barbosa等人,2005)。从患病个体构建人抗体的优点在于循环抗体谱系可偏向针对疾病相关抗原的抗体。
在这种方法的一个非限制性实例中,Dantas-Barbosa等人(2005)构建了来自骨肉瘤患者的人Fab抗体片段的噬菌体展示库。一般来说,从循环血液淋巴细胞获得总RNA(同上)。从μ、γ和κ链抗体谱系克隆重组Fab并插入噬菌体展示文库中(同上)。将RNA转化成cDNA并用于使用针对重链和轻链免疫球蛋白序列的特异性引物制备Fab cDNA文库(Marks等人,1991,J.Mol.Biol.222:581-97,其以引用的方式并入本文)。根据Andris-Widhopf等人(2000,于:Phage Display Laboratory Manual,Barbas等人(编辑),第1版,Cold SpringHarbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY第9.1至9.22页中,其以引用的方式并入本文)进行文库构建。将最终Fab片段用限制性核酸内切酶消化,并插入噬菌体基因组中,以制备噬菌体展示库。此类文库可通过标准噬菌体展示方法来筛选。熟练的技术人员将认识到这种技术仅是示例性的,并且可使用用于通过噬菌体展示制备和筛选人抗体或抗体片段的任何已知方法。
在另一个替代方案中,使用如上文论述的标准免疫实验方案,已进行遗传工程化以产生人抗体的转基因动物可用来产生针对基本上任何免疫原性靶标的抗体。用于从转基因小鼠获得人抗体的方法由Green等人,Nature Genet.7:13(1994);Lonberg等人,Nature368:856(1994)以及Taylor等人,Int.Immun.6:579(1994)描述。这种系统的非限制性实例是来自(Fremont,CA),其中)的(例如,Green等人,1999,J.Immunol.Methods 231:11-23,以引用的方式并入本文)。在和类似动物中,已使小鼠抗体基因失活并置换为功能性人抗体基因,而小鼠免疫系统的其余部分保持完整。
用含有人IgH和Igκ基因座的部分的种系构型YAC(酵母人工染色体)转化转基因小鼠,所述基因座部分包括大部分可变区序列连同辅助基因和调控序列。人可变区谱系可用于获得产生抗体的B细胞,所述B细胞可通过已知的技术加工成杂交瘤。用靶抗原免疫的将通过正常免疫应答产生人抗体,其可通过上文论述的标准技术收获和/或产生。可获得遗传工程化的小鼠的多种品系,所述品系各自能够产生不同类别的抗体。转基因产生的人抗体已证明具有治疗潜能,同时保留正常人抗体的药物动力学性质(Green等人,1999)。熟练的技术人员将认识到,所要求保护的组合物和方法不限于使用系统,而是可利用已进行遗传工程化以产生人抗体的任何转基因动物。
抗体片段的产生
所要求保护的方法和/或组合物的一些实施方案可涉及抗体片段。此类抗体片段可例如通过常规方法通过全长抗体的胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化来获得。例如,抗体片段可通过用胃蛋白酶酶促裂解抗体来产生以提供称为F(ab')2的5S片段。此片段可使用硫醇还原剂和任选地用于由二硫键联裂解产生的巯基的阻断基团进行进一步裂解以产生3.5SFab'单价片段。或者,使用木瓜蛋白酶进行酶促裂解产生两个单价Fab片段和一个Fc片段。两个Fab片段可共价缀合以产生F(ab)2抗体片段。用于产生抗体片段的示例性方法公开于美国专利号4,036,945;美国专利号4,331,647;Nisonoff等人,1960,Arch.Biochem.Biophys.,89:230;Porter,1959,Biochem.J.,73:119;Edelman等人,1967,METHODS IN ENZYMOLOGY,第422页(Academic Press)以及Coligan等人(编辑),1991,CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY,(JohnWiley&Sons)。
还可使用裂解抗体的其他方法,如分离重链以形成单价轻链-重链片段、进一步裂解片段,或其他酶促、化学或遗传技术,只要所述片段结合至由完整抗体识别的抗原即可。例如,Fv片段包含VH和VL链的缔合。这种缔合可以是非共价的,如Inbar等人,1972,Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA,69:2659中所描述。或者,可变链可通过分子间二硫键连接或通过化学品如戊二醛交联。参见Sandhu,1992,Crit.Rev.Biotech.,12:437。
优选地,所述Fv片段包含通过肽接头连接的VH和VL链。通过构建包含编码通过寡核苷酸接头序列连接的VH和VL结构域的DNA序列的结构基因来制备这些单链抗原结合蛋白(scFv)。将结构基因插入表达载体中,所述表达载体随后被引入宿主细胞,如大肠杆菌中。重组宿主细胞合成单个多肽链,其具有桥接两个V结构域的接头肽。用于产生scFv的方法是本领域熟知的。参见Whitlow等人,1991,Methods:A Companion to Methods inEnzymology2:97;Bird等人,1988,Science,242:423;美国专利号4,946,778;Pack等人,1993,Bio/Technology,11:1271以及Sandhu,1992,Crit.Rev.Biotech.,12:437。
另一种形式的抗体片段是单结构域抗体(dAb),有时被称为单链抗体。用于产生单结构域抗体的技术是本领域熟知的(参见例如,Cossins等人,Protein Expression andPurification,2007,51:253-59;Shuntao等人,Molec Immunol 2006,43:1912-19;Tanha等人,J.Biol.Chem.2001,276:24774-780)。其他类型的抗体片段可包含一个或多个互补决定区(CDR)。可通过构建编码目标抗体的CDR的基因来获得CDR肽(“最小识别单元”)。此类基因例如通过使用聚合酶链反应以合成来自产生抗体的细胞的RNA的可变区来制备。参见Larrick等人,1991,Methods:A Companion to Methods in Enzymology 2:106;Ritter等人(编辑),1995,MONOCLONAL ANTIBODIES:PRODUCTION,ENGINEERING AND CLINICALAPPLICATION,第166-179页(Cambridge University Press);Birch等人,(编辑),1995,MONOCLONAL ANTIBODIES:PRINCIPLES AND APPLICATIONS,第137-185页(Wiley-Liss,Inc.)
抗体变化
在某些实施方案中,可改变抗体的序列(如抗体的Fc部分)以优化缀合物的生理特征,如血清中的半衰期。取代蛋白质中的氨基酸序列的方法是本领域中广泛已知的,如通过定点诱变(例如Sambrook等人,Molecular Cloning,A laboratorymanual,第2版,1989)。在优选的实施方案中,变化可涉及在Fc序列中添加或除去一个或多个糖基化位点(例如,美国专利号6,254,868,所述专利的实施例部分以引用的方式并入本文)。在其他优选的实施方案中,可制备Fc序列中的特定氨基酸取代(例如,Hornick等人,2000,JNuclMed41:355-62;Hinton等人,2006,J Immunol 176:346-56;Petkova等人2006,Int Immunol18:1759-69;美国专利号7,217,797;各自以引用的方式并入本文)。
靶抗原和示例性抗体
在一个优选的实施方案中,使用识别和/或结合至抗原的抗体,所述抗原以高水平表达于靶细胞上并且主要或仅表达于患病细胞上而非正常组织上。更优选地,所述抗体在结合后迅速内化。示例性快速内化抗体是LL1(抗CD74)抗体,内化速率为每个细胞每天大约8x106个抗体分子(例如,Hansen等人,1996,Biochem J.320:293-300)。因此,“快速内化”抗体可以是内化速率为每个细胞每天约1x 106至约1x 107个抗体分子的抗体。要求保护的组合物和方法中使用的抗体可包括具有如上所述性质的MAb。用于治疗例如癌症的示例性抗体包括但不限于LL1(抗-CD74)、LL2或RFB4(抗-CD22)、维妥珠单抗(hA20,抗-CD20)、利妥昔单抗(抗-CD20)、奥比妥珠单抗(GA101,抗-CD20)、兰布罗利珠单抗(抗PD-1受体)、纳武单抗(抗PD-1受体)、伊匹单抗(抗CTLA-4)、RS7(抗Trop-2)、PAM4或KC4(两者均为抗粘蛋白)、MN-14(抗癌胚抗原(CEA,也称为CD66e或CEACAM5))、MN-15或MN-3(抗CEACAM6)、Mu-9(抗结肠特异性抗原-p)、Immu31(抗α-胎蛋白)、R1(抗IGF-1R)、A19(抗CD19)、TAG-72(例如,CC49)、Tn、J591或HuJ591(抗PSMA(前列腺特异性膜抗原))、AB-PG1-XG1-026(抗PSMA二聚体)、D2/B(抗PSMA)、G250(抗碳酸酐酶IXMAb)、L243(抗HLA-DR)、阿仑单抗(抗CD52)、贝伐单抗(抗VEGF)、西妥昔单抗(抗EGFR)、吉妥珠单抗(抗CD33)、伊图莫单抗(ibritumomab tiuxetan)(抗-CD20);帕木单抗(抗EGFR);替伊莫单抗(抗CD20);帕尼单抗(抗EGFR);托西莫单抗(抗CD20);PAM4(又名克伐珠单抗,抗MUC5ac)和曲妥珠单抗(抗ErbB2)。此类抗体是本领域已知的(例如,美国专利号5,686,072;5,874,540;6,107,090;6,183,744;6,306,393;6,653,104;6,730.300;6,899,864;6,926,893;6,962,702;7,074,403;7,230,084;7,238,785;7,238,786;7,256,004;7,282,567;7,300,655;7,312,318;7,585,491;7,612,180;7,642,239;以及美国专利申请公布号20050271671;20060193865;20060210475;20070087001;各自的实施例部分以引用的方式并入本文)。所用的具体已知的抗体包括hPAM4(美国专利号7,282,567)、hA20(美国专利号7,151,164)、hA19(美国专利号7,109,304)、hIMMU-31(美国专利号7,300,655)、hLL1(美国专利号7,312,318)、hLL2(美国专利号5.789,554)、hMu-9(美国专利号7,387,772)、hL243(美国专利号7,612,180)、hMN-14(美国专利号6,676,924)、hMN-15(美国专利号8,287,865)、hR1(美国专利号9,441,043)、hRS7(美国专利号7,238,785)、hMN-3(美国专利号7,541,440)、AB-PG1-XG1-026(美国专利申请11/983,372,其保藏为ATCC PTA-4405和PTA-4406)以及D2/B(WO 2009/130575),关于附图和实施例部分,每一个列举的专利或申请的文本以引用的方式并入本文。在特别优选的实施方案中,抗体是hRS7。
可使用所描述的缀合物进行靶向的其他有用的抗原包括碳酸酐酶IX、B7、CCL19、CCL21、CSAp、HER-2/neu、BrE3、CD1、CD1a、CD2、CD3、CD4、CD5、CD8、CD11A、CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、CD20(例如,C2B8、hA20、1F5MAbs)、CD21、CD22、CD23、CD25、CD29、CD30、CD32b、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD45、CD46、CD52、CD54、CD55、CD59、CD64、CD67、CD70、CD74、CD79a、CD80、CD83、CD95、CD126、CD133、CD138、CD147、CD154、CEACAM5、CEACAM6、CTLA-4、α-胎蛋白(AFP)、VEGF(例如,贝伐单抗、纤连蛋白剪接变体)、纤连蛋白的ED-B(例如,L19)、Trop-2、EGP-2(例如17-1A)、EGF受体(ErbB1)(例如,西妥昔单抗)、ErbB2、ErbB3、因子H、FHL-1、Flt-3、叶酸受体、Ga 733、GRO-β、HMGB-1、缺氧诱导因子(HIF)、HM1.24、HER-2/neu、胰岛素样生长因子(ILGF)、IFN-γ、IFN-α、IFN-β、IFN-λ、IL-2R、IL-4R、IL-6R、IL-13R、IL-15R、IL-17R、IL-18R、IL-2、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-25、IP-10、IGF-1R、Ia、HM1.24、神经节苷脂、HCG、L243所结合的HLA-DR抗原、CD66抗原即CD66a-d或其组合、MAGE、mCRP、MCP-1、MIP-1A、MIP-1B、巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)、MUC1、MUC2、MUC3、MUC4、MUC5ac、胎盘生长因子(PlGF)、PSA(前列腺特异性抗原)、PSMA、PAM4抗原、PD-1、PD-L1、NCA-95、NCA-90、A3、A33、Ep-CAM、KS-1、Le(y)、间皮素、S100、腱生蛋白、TAC、Tn抗原、汤姆森-弗里德里希抗原、肿瘤坏死抗原、肿瘤血管生成抗原、TNF-α、TRAIL受体(R1和R2)、Trop-2、VEGFR、RANTES、T101,以及癌症干细胞抗原、补体因子C3、C3a、C3b、C5a、C5和致癌基因产物。
如通过流式细胞术展示并且可作为选择用于药物缀合的免疫疗法的合适抗体的指导的造血恶性细胞上的合适抗原(群集指定,或CD)靶标的综合分析是于2008年1月15日在线预公布的Craig和Foon,Blood;DOL 10.1182/blood-2007-11-120535。
CD66抗原由具有类似结构的五种不同糖蛋白CD66a-e组成,其分别由癌胚抗原(CEA)基因家族成员BCG、CGM6、NCA、CGM1和CEA编码。这些CD66抗原(例如,CEACAM6)主要表达于粒细胞、消化道的正常上皮细胞和各种组织的肿瘤细胞中。作为癌症的合适靶标还包含癌症睾丸抗原,如NY-ESO-1(Theurillat等人,Int.J.Cancer2007;120(11):2411-7)以及骨髓性白血病(Kozlov等人,Cancer Genet.Cytogenet.2005;163(1):62-7)和B-细胞疾病中的CD79a,和非霍奇金淋巴瘤的CD79b(Poison等人,Blood 110(2):616-623)。许多前述抗原公开于2002年11月15日提交的题为“Use of Multi-specific,Non-covalent Complexesfor Targeted Delivery of Therapeutics”的美国临时申请序列号60/426,379中。归因于更具治疗耐受性前体恶性细胞群体的癌症干细胞(Hill和Perris,J.Natl.CancerInst.2007;99:1435-40)具有可在某些癌症类型中靶向的抗原,诸如前列腺癌(Maitland等人,Ernst Schering Found.Sympos.Proc.2006;5:155-79)、非小细胞肺癌(Donnenberg等人,J.Control Release 2007;122(3):385-91)和成胶质细胞瘤(Beier等人,Cancer Res.2007;67(9):4010-5)中的CD133,以及结肠直肠癌(Dalerba等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2007;104(24)10158-63)、胰腺癌(Li等人,Cancer Res.2007;67(3):1030-7)和头颈部鳞状细胞癌(Prince等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2007;104(3)973-8)中的CD44。乳腺癌治疗的另一个有用靶标是Taylor等人(Biochem.J.2003;375:51-9)描述的LIV-1抗原。CD47抗原是癌症干细胞的另一有用靶标(参见,例如,Naujokat等人,2014,Immunotherapy 6:290-308;Goto等人,2014,Eur J Cancer 50:1836-46;Unanue,2013,Proc Natl Acad Sci USA 110:10886-7)。
对于多发性骨髓瘤治疗,已经描述了针对例如CD38和CD138(Stevenson,Mol Med2006;12(11-12):345-346;Tassone等人,Blood2004;104(12):3688-96)、CD74(Stein等人,同上)、CS1(Tai等人,Blood 2008;112(4):1329-37)以及CD40(Tai等人,2005;CancerRes.65(13):5898-5906)的合适的靶向抗体。
检查点抑制剂抗体已用于癌症治疗。免疫检查点是指在免疫系统中负责维持自身耐受性和调节免疫系统应答的程度,以尽量减少外周组织损伤的抑制途径。然而,肿瘤细胞也可活化免疫系统检查点,以减少针对肿瘤组织的免疫应答的有效性。针对细胞毒性T-淋巴细胞抗原4(CTLA4,也称为CD152)、程序性细胞死亡蛋白1(PD1,也称为CD279)和程序性细胞死亡1配体1(PD-L1,也称为CD274)的示例性检查点抑制剂抗体可与一种或多种其他剂组合使用,以增加针对患病细胞、组织或病原体的免疫应答的有效性。示例性抗PD1抗体包括兰布罗利珠单抗(MK-3475,MERCK)、纳武单抗(BMS-936558,BRISTOL-MYERS SQUIBB)、AMP-224(MERCK)和匹地利珠单抗(CT-011,CURETECH LTD.)。抗PD-1抗体可例如从(AB137132)、(EH12.2H7、RMP1-14)和AFFYMETRIX EBIOSCIENCE(J105、J116、MIH4)商购获得。示例性抗PD-L1抗体包括MDX-1105(MEDAREX)、MEDI4736(MEDIMMUNE)、MPDL3280A(GENENTECH)和BMS-936559(BRISTOL-MYERS SQUIBB)。抗PD-L1抗体也可例如从AFFYMETRIX EBIOSCIENCE(MIH1)商购获得。示例性抗CTLA4抗体包括伊匹单抗(Bristol-Myers Squibb)和曲美木单抗(PFIZER)。抗PD1抗体可例如从(AB134090)、SINO BIOLOGICAL INC.(11159-H03H、11159-H08H)和THERMO SCIENTIFICPIERCE(PA5-29572、PA5-23967、PA5-26465、MA1-12205、MA1-35914)商购获得。伊匹单抗最近被FDA批准用于转移性黑素瘤的治疗(Wada等人,2013,J Transl Med11:89)。
巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)是先天性和适应性免疫和细胞凋亡的重要调控因子。据报道,CD74是MIF的内源性受体(Leng等人,2003,JExpMed 197:1467-76)。拮抗性抗CD74抗体对MIF介导的细胞内途径的治疗作用可用于治疗广泛范围的疾病状态,如膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌和慢性淋巴细胞白血病(例如,Meyer-Siegler等人,2004,BMC Cancer 12:34;Shachar&Haran,2011,Leuk Lymphoma 52:1446-54);自身免疫性疾病,如类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮(Morand&Leech,2005,FrontBiosci 10:12-22;Shachar&Haran,2011,Leuk Lymphoma 52:1446-54);肾病如肾同种异体移植排斥(Lan,2008,Nephron Exp Nephrol.109:e79-83);和许多炎性疾病(Meyer-Siegler等人,2009,MediatorsInflamm电子版3月22日,2009;Takahashi等人,2009,RespirRes 10:33;米拉珠单抗(hLL1)是用于治疗MIF介导的疾病的治疗性用途的示例性抗CD74抗体。
抗TNF-α抗体是本领域已知的,并且可用于治疗各种疾病。已知的针对TNF-α的抗体包括人抗体CDP571(Ofei等人,2011,Diabetes45:881-85);鼠抗体MTNFAI、M2TNFAI、M3TNFAI、M3TNFABI、M302B以及M303(Thermo Scientific,Rockford,IL);英夫利昔单抗(Centocor,Malvern,PA);赛妥珠单抗(UCB,Brussels,Belgium);以及阿达木单抗(Abbott,AbbottPark,IL)。这些和许多其他已知的抗TNF-α抗体可用于所要求保护的方法和组合物中。
在另一个优选的实施方案中,使用快速内化并且然后在细胞表面上重新表达、加工并呈递的抗体,从而使细胞能够连续摄取和积聚循环缀合物。最优选的抗体/抗原对的实例是LL1(一种抗CD74MAb)(不变链,II类特异性伴侣蛋白,Ii)(参见,例如,美国专利号6,653,104;7,312,318;各自的实施例部分以引用的方式并入本文)。CD74抗原高度表达于B-细胞淋巴瘤(包括多发性骨髓瘤)和白血病、某些T-细胞淋巴瘤、黑素瘤、结肠癌、肺癌和肾癌、成胶质细胞瘤和某些其他癌症中(Ong等人,Immunology 98:296-302(1999))。CD74抗体在癌症中的使用的综述包括于Stein等人,Clin CancerRes.2007年9月15日;13(18Pt2):5556s-5563s,以引用的方式并入本文。
优选地用抗CD74抗体治疗的疾病包括但不限于非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏疾病、黑素瘤、肺癌、肾癌、结肠癌、多形性成胶质细胞瘤、组织细胞瘤、骨髓性白血病和多发性骨髓瘤。CD74抗原在靶细胞表面上短时间段的连续表达、随后抗原内化以及抗原的重新表达使得靶向LL1抗体能够与它所携带的任何化学治疗部分一起内化。这允许高和治疗浓度的LL1-化学治疗药物缀合物在此类细胞内部累积。内化的LL1-化学治疗药物缀合物循环通过溶酶体和内体,并且化学治疗部分以活性形式在靶细胞内释放。
在要求保护的方法和组合物的实践中,上文论述的抗体和针对疾病相关抗原的其他已知抗体可用作CPT-缀合物,更优选SN-38-缀合物。在最优选的实施方案中,药物缀合的抗体是抗Trop-2-SN-38(例如,hRS7-SN-38)缀合物。
双特异性和多特异性抗体
双特异性抗体可用于许多生物医学应用中。例如,具有用于肿瘤细胞表面抗原和用于T细胞表面受体的结合位点的双特异性抗体可指导通过T细胞的特异性肿瘤细胞的溶解。识别神经胶质瘤和T细胞上的CD3表位的双特异性抗体已经成功用于治疗人患者的脑肿瘤(Nitta,等人Lancet.1990;355:368-371)。优选的双特异性抗体是抗CD3X抗Trop-2抗体。在替代实施方案中,抗CD3抗体或其片段可连接至针对B细胞相关抗原的抗体或片段,如抗CD3X抗CD19、抗CD3X抗CD20、抗CD3X抗CD22、抗CD3X抗HLA-DR或抗CD3X抗CD74。在某些实施方案中,本文公开的用于治疗剂递送的技术和组合物可与作为靶向部分的双特异性或多特异性抗体一起使用。
用于产生双特异性或多特异性抗体的许多方法是已知的,如例如美国专利号7,405,320所公开,所述专利的实施例部分以引用的方式并入本文。双特异性抗体可通过四源杂交瘤方法产生,所述方法包括使各自产生识别不同抗原位点的单克隆抗体的两种不同杂交瘤的融合(Milstein和Cuello,Nature,1983;305:537-540)。
用于产生双特异性抗体的另一种方法使用异双官能交联剂来化学系栓两种不同的单克隆抗体(Staerz,等人Nature,1985;314:628-631;Perez,等人Nature,1985;316:354-356)。双特异性抗体也可通过将两种亲本单克隆抗体中的每种还原成相应半分子,然后将其混合并使其再氧化以获得杂合体结构(Staerz和Bevan.Proc Natl Acad Sci U SA.1986;83:1453-1457)。另一替代方案涉及使用适当接头使两种或三种单独纯化的Fab'片段化学交联。(参见例如,欧洲专利申请0453082)。
其他方法包括通过经由逆转录病毒来源的穿梭载体将独特的选择性标记基因转移至相应的亲本杂交瘤中,随后将它们融合(DeMonte,等人Proc NatlAcadSci USA.1990,87:2941-2945);或使用含有不同抗体的重链和轻链基因的表达质粒转染杂交瘤细胞系来提高产生杂合体杂交瘤的效率。
可将同源VH和VL结构域与具有适当组成和长度(通常由多于12个氨基酸残基组成)的肽接头接合以形成具有结合活性的单链Fv(scFv)。制造scFv的方法公开于美国专利号4,946,778和美国专利号5,132,405中,所述专利各自的实施例部分以引用的方式并入本文。肽接头长度减小至小于12个氨基酸残基防止了相同链上VH和VL结构域的配对,并且迫使VH和VL结构域与其他链上的互补结构域的配对,从而形成功能多聚体。与3与12个氨基酸残基之间的接头接合的VH和VL结构域的多肽链主要形成二聚体(称为双抗体)。使用0与2个氨基酸残基之间的接头,有助于形成三聚体(称为三抗体)和四聚体(称为四抗体),但除接头长度之外,寡聚化的准确模式似乎取决于V结构域(VH-接头-VL或VL-接头-VH)的组成以及取向。
用于产生多特异性或双特异性抗体的这些技术就低收率、纯化的必要性、低稳定性或技术的劳动密集性而言表现出许多困难。最近,已经利用称为“对接锁定(dock andlock)”的技术来产生几乎任何所需抗体、抗体片段和其他效应分子的组合(参见例如,美国专利号7,521,056;7,527,787;7,534,866;7,550,143;7,666,400;7,858,070;7,871,622;7,906,121;7,906,118;8,163,291;7,901,680;7,981,398;8,003,111以及8,034,352,所述专利各自的实施例部分以引用的方式并入本文。所述技术利用称为锚定结构域(AD)和二聚化与对接结构域(DDD)的互补蛋白质结合结构域,其彼此结合并且允许组装范围为二聚体、三聚体、四聚体、五聚体和六聚体的复杂分子。这些以高产率形成稳定复合物而不需要广泛纯化。技术允许组装单特异性、双特异性或多特异性抗体。本领域已知的用于制备双特异性或多特异性抗体的任何技术可用于实施本发明要求保护的方法。
抗体同种异型
治疗性抗体的免疫原性与输注反应的风险增加和治疗性应答的持续时间减少相关(Baert等人,2003,NEnglJMed 348:602-08)。治疗性抗体在宿主中诱导免疫应答的程度可部分地通过抗体的同种异型来确定(Stickler等人,2011,Genes andImmunity 12:213-21)。抗体同种异型涉及抗体的恒定区序列中特定位置处的氨基酸序列变型。含有重链γ-型恒定区的IgG抗体的同种异型被命名为Gm同种异型(1976,J Immunol 117:1056-59)。
对于常见的IgG1人抗体而言,最普遍的同种异型是G1m1(Stickler等人,2011,Genes andImmunity 12:213-21)。然而,G1m3同种异型也频繁地出现在白种人中(同上)。已经报告了当向非G1m1(nG1m1)接受者(如G1m3患者)施用时,G1m1抗体含有倾向于诱导免疫应答的同种异型序列(同上)。当向G1m1患者施用时,非G1m1同种异型抗体不是作为免疫原性的(同上)。
人G1m1同种异型包含重链IgG1的CH3序列中Kabat位置356处的氨基酸天冬氨酸和Kabat位置358处的氨基酸亮氨酸。nG1m1同种异型包含Kabat位置356处的氨基酸谷氨酸和Kabat位置358处的氨基酸甲硫氨酸。G1ml和nG1ml同种异型二者包含Kabat位置357处的谷氨酸残基,并且所述同种异型有时称为DEL和EEM同种异型。针对示例性抗体利妥昔单抗(SEQ ID NO:8)和维妥珠单抗(SEQ ID NO:9),示出G1m1和nG1m1同种异型抗体的重链恒定区序列的非限制性实例。
利妥昔单抗重链可变区序列(SEQ ID NO:8)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKAEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
维妥珠单抗重链可变区(SEQ ID NO:9)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
Jefferis和Lefranc(2009,mAbs 1:1-7)综述了为IgG同种异型的特征的序列变型和它们对免疫原性的影响。他们报道了与G1m17同种异型中的Kabat 214处的赖氨酸残基相比,G1m3同种异型的特征在于Kabat位置214处的精氨酸残基。nG1m1,2同种异型的特征在于Kabat位置356处的谷氨酸、Kabat位置358处的甲硫氨酸和Kabat位置431处的丙氨酸。G1m1,2同种异型的特征在于Kabat位置356处的天冬氨酸、Kabat位置358处的亮氨酸和Kabat位置431处的甘氨酸。除重链恒定区序列变体之外,Jefferis和Lefranc(2009)报告了κ轻链恒定区中的同种异型变体,其中Km1同种异型的特征在于Kabat位置153处的缬氨酸和Kabat位置191处的亮氨酸,Km1,2同种异型的特征在于Kabat位置153处上的丙氨酸和Kabat位置191处的亮氨酸,并且Km3同种异型的特征在于Kabat位置153处的丙氨酸和Kabat位置191处的缬氨酸。
关于治疗性抗体,维妥珠单抗和利妥昔单抗分别是对治疗各种各样的血液恶性肿瘤有用的、针对CD20的人源化和嵌合IgG1抗体。表1比较了利妥昔单抗与维妥珠单抗的同种异型序列。如在表1中所示,利妥昔单抗(G1m17,1)是DEL同种异型IgG1,在利妥昔单抗中的赖氨酸相对维妥珠单抗中的精氨酸在Kabat位置214(重链CH1)处具有额外序列变化。已经报告了在受试者中维妥珠单抗比利妥昔单抗的免疫原性小(参见例如,Morchhauser等人,2009,J Clin Oncol27:3346-53;Goldenberg等人,2009,Blood 113:1062-70;Robak&Robak,2011,BioDrugs 25:13-25),所述作用已经被归因于人源化抗体与嵌合抗体之间的差异。然而,EEM与DEL同种异型之间的同种异型的差异可能也解释了维妥珠单抗的较低免疫原性。
表1.利妥昔单抗对维妥珠单抗的同种异型
为了减小治疗性抗体在nG1m1基因型个体中的免疫原性,希望选择的抗体同种异型对应于G1m3同种异型,其特征在于Kabat214处的精氨酸;和nG1m1,2无效同种异型,其特征在于Kabat位置356处的谷氨酸、Kabat位置358处的甲硫氨酸以及Kabat位置431处的丙氨酸。出人意外地,发现在长时间段内重复皮下施用G1m3抗体不会产生显著免疫应答。在替代实施方案中,与G1m3同种异型有共同之处的人IgG4重链具有Kabat214处的精氨酸、Kabat356处的谷氨酸、Kabat 359处的甲硫氨酸和Kabat431处的丙氨酸。由于免疫原性似乎至少部分与这些位置处的残基相关,人IgG4重链恒定区序列用于治疗抗体也是优选的实施方案。G1m3IgG1抗体与IgG4抗体的组合也可用于治疗剂施用。
缀合方案
抗体或其片段可缀合至一种或多种治疗剂或诊断剂。治疗剂不需要相同但是可不同,例如药物和放射性同位素。举例来说,131I可并入抗体或融合蛋白的酪氨酸中并且药物连接至赖氨酸残基的ε氨基。治疗剂和诊断剂还可例如连接至还原的SH基团和/或碳水化合物侧链。用于制备治疗剂或诊断剂与抗体或融合蛋白的共价或非共价缀合物的许多方法在本领域中是已知的并且可利用任何这种已知方法。
治疗剂或诊断剂可经由二硫键形成而连接在还原抗体组分的铰链区。或者,此类剂可使用异双官能交联剂,如3-(2-吡啶基二硫代)丙酸N-琥珀酰基酯(SPDP)连接。Yu等人,Int.J.Cancer 56:244(1994)。这种缀合的一般技术是本领域熟知的。参见例如,Wong,CHEMISTRY OF PROTEIN CONJUGATION AND CROSS-LINKING(CRC Press1991);Upeslacis等人,“Modification of Antibodies by Chemical Methods,”于MONOCLONAL ANTIBODIES:PRINCIPLES AND APPLICATIONS,Birch等人(编辑),第187-230页(Wiley-Liss,Inc.1995)中;Price,“Production and Characterization ofSynthetic Peptide-DerivedAntibodies,”于MONOCLONAL ANTIBODIES:PRODUCTION,ENGINEERING AND CLINICALAPPLICATION,Ritter等人(编辑),第60-84页(Cambridge UniversityPress 1995)中。或者,治疗剂或诊断剂可经由抗体Fc区中的碳水化合物部分缀合。碳水化合物基团可用于增加结合至硫醇基的相同剂的负载,或碳水化合物部分可用于结合不同的治疗剂或诊断剂。
用于经由抗体碳水化合物部分将肽缀合至抗体组分的方法是本领域的技术人员熟知的。参见例如,Shih等人,Int.J.Cancer 41:832(1988);Shih等人,Int.J.Cancer 46:1101(1990);以及Shih等人,美国专利号5,057,313,其以引用的方式整体并入本文。一般方法涉及使具有氧化碳水化合物部分的抗体与具有至少一个游离胺官能的载体聚合物反应。这种反应产生初始席夫碱(亚胺)键联,所述键联可通过还原成仲胺来稳定,以形成最终缀合物。
如果用作免疫缀合物的抗体组分的抗体是抗体片段,则可能不存在Fc区。然而,有可能将碳水化合物部分引入全长抗体或抗体片段的轻链可变区中。参见例如,Leung等人,J.Immunol.154:5919(1995);Hansen等人,美国专利号5,443,953(1995);Leung等人,美国专利号6,254,868,其以引用的方式整体并入本文。使用工程化的碳水化合物部分来连接治疗剂或诊断剂。
优选的缀合方案是基于硫醇-马来酰亚胺、硫醇-乙烯基砜、硫醇-溴乙酰胺或在中性或酸性pH下易于进行的硫醇-碘乙酰胺反应。这消除了对缀合的更高pH条件的需要,例如在使用活性酯时将是必需的。以下在实施例部分中描述了示例性缀合方案的进一步细节。
治疗性治疗
在另一方面,本发明涉及一种治疗受试者的方法,所述方法包括向受试者施用治疗有效量的如本文所述的抗体-药物缀合物(ADC)。可用本文所述的ADC治疗的疾病包括但不限于B细胞恶性肿瘤(例如,非霍奇金淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、霍奇金淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病),使用例如针对另一种CD22表位(hRFB4)的抗CD22抗体如hLL2MAb(依帕珠单抗,参见美国专利号6,183,744)或针对其他B细胞抗原如CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD37、CD40、CD40L、CD52、CD74、CD80或HLA-DR的抗体。其他疾病包括但不限于内胚层来源的消化系统上皮细胞的腺癌,诸如乳腺癌和非小细胞肺癌的癌症,以及其他癌、肉瘤、神经胶质肿瘤、骨髓性白血病等。特别地,有利地使用针对由恶性实体瘤或造血系统赘瘤(例如胃肠肿瘤、胃肿瘤、结肠肿瘤、食道肿瘤、肝肿瘤、肺肿瘤、乳腺肿瘤、胰腺肿瘤、肝脏肿瘤、前列腺肿瘤、卵巢肿瘤、睾丸肿瘤、脑肿瘤、骨肿瘤、尿路上皮或淋巴肿瘤、肉瘤或黑素瘤)产生或与其相关的抗原(例如癌胚抗原)的抗体。所述治疗剂可根据疾病状态和缀合物的耐受性给予一次或重复给予,并且还可任选地与其他治疗模态组合使用,所述其他治疗模态如外科手术、外部辐射、放射性免疫疗法、免疫疗法、化学疗法、反义疗法、干扰RNA疗法、基因疗法等。各组合将适于肿瘤类型、分期、患者病状和先前疗法,和由管理医师考虑的其他因素。
如本文所用,术语“受试者”是指任何动物(即,脊椎动物和无脊椎动物),包括但不限于哺乳动物,包括人。并不希望所述术语限于特定年龄或性别。因此,成年和新生受试者以及胎儿,无论是男性还是女性,都由所述术语涵盖。本文给出的剂量用于人类,但可根据体重或平方米大小调整至其他哺乳动物以及儿童的大小。
在一个优选的实施方案中,包含抗Trop-2抗体如hRS7MAb的治疗性缀合物可用于治疗癌,如食道癌、胰腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌和直肠癌、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、肾癌和前列腺癌,如美国专利号7,238,785;7,517,964和8,084,583中所公开,其实施例部分以引用的方式并入本文。hRS7抗体是包含轻链互补决定区(CDR)序列CDR1(KASQDVSIAVA,SEQ ID NO:1)、CDR2(SASYRYT,SEQ ID NO:2)和CDR3(QQHYITPLT,SEQ ID NO:3)以及重链CDR序列CDR1(NYGMN,SEQ ID NO:4)、CDR2(WINTYTGEPTYTDDFKG,SEQ ID NO:5)和CDR3(GGFGSSYWYFDV,SEQ ID NO:6)的抗体。
在优选的实施方案中,用于治疗人疾病的抗体是抗体的人或人源化(CDR移植)型式;但是也可使用抗体的鼠类和嵌合型式。与递送剂相同物种的IgG分子对于使免疫应答最小化是最优选的。此情形在考虑重复治疗时特别重要。对于人,人或人源化IgG抗体由患者产生抗IgG免疫应答的可能性较低。诸如hLL1和hLL2的抗体在结合至靶细胞上的内化抗原后快速内化,这意指所携带的化学治疗性药物快速内化至细胞中。然而,具有较慢内化速率的抗体也可用于实施选择性疗法。
在另一个优选的实施方案中,与本发明的喜树碱缀合物组合使用的治疗剂可包含一种或多种同位素。适用于治疗患病组织的放射性同位素包括但不限于111In、177Lu、212Bi、213Bi、211At、62Cu、67Cu、90Y、125I、131I、32P、33P、47Sc、111Ag、67Ga、142Pr、153Sm、161Tb、166Dy、166Ho、186Re、188Re、189Re、212Pb、223Ra、225Ac、59Fe、75Se、77As、89Sr、99Mo、105Rh、109Pd、143Pr、149Pm、169Er、194Ir、198Au、199Au、227Th以及211Pb。治疗性放射性核素优选地具有在20至6,000keV范围内、优选地在60至200keV的范围内(对于俄歇发射体)、在100-2,500keV的范围内(对于β发射体)和在4,000-6,000keV的范围内(对于α发射体)的衰变能。可用的β粒子发射核素的最大衰变能为优选地20-5,000keV、更优选地100-4,000keV以及最优选地500-2,500keV。另外优选的是基本上随俄歇发射粒子而衰变的放射性核素。例如,Co-58、Ga-67、Br-80m、Tc-99m、Rh-103m、Pt-109、In-111、Sb-119、I-125、Ho-161、Os-189m和Ir-192。可用的β粒子发射核素的衰变能优选地<1,000keV、更优选地<100keV并且最优选地<70keV。另外优选的是基本上随α粒子的产生而衰变的放射性核素。此类放射性核素包括但不限于:Dy-152、At-211、Bi-212、Ra-223、Rn-219、Po-215、Bi-211、Ac-225、Fr-221、At-217、Bi-213、Th-227和Fm-255。可用的α粒子发射放射性核素的衰变能优选地是2,000-10,000keV、更优选地3,000-8,000keV并且最优选地4,000-7,000keV。所用的另外潜在放射性同位素包括11C、13N、15O、75Br、198Au、224Ac、126I、133I、77Br、113mIn、95Ru、97Ru、103Ru、105Ru、107Hg、203Hg、121mTe、122mTe、125mTe、165Tm、167Tm、168Tm、197Pt、109Pd、105Rh、142Pr、143Pr、161Tb、166Ho、199Au、57Co、58Co、51Cr、59Fe、75Se、201Tl、225Ac、76Br、169Yb等。
放射性核素和其他金属可例如使用连接至抗体或缀合物的螯合基团递送。如NOTA、DOTA以及TETA的巨环螯合剂可与各种金属和放射性金属一起使用,最特别地分别与放射性核素镓、钇和铜一起使用。可通过根据目标金属调整环大小而使此类金属螯合物复合物变得非常稳定。可使用其他环型螯合物,如用于络合223Ra的大环聚醚。
与本文所述的喜树碱缀合物组合使用的治疗剂还包括,例如,化学治疗药物,如长春花生物碱、蒽环霉素、表鬼臼毒素、紫杉烷、抗代谢物、酪氨酸激酶抑制剂、烷化剂、抗生素、Cox-2抑制剂、抗有丝分裂剂、抗血管生成剂和促凋亡剂,特别是阿霉素、甲氨蝶呤、紫杉醇、其他喜树碱以及来自这些和其他类别的抗癌剂的其他等。其他癌症化学治疗药物包括氮芥、烷基磺酸酯、亚硝基脲、三氮烯、叶酸类似物、嘧啶类似物、嘌呤类似物、铂配位络合物、激素等。合适的化学治疗剂描述于REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES,第19版(Mack Publishing Co.1995)和GOODMAN AND GILMAN’S THE PHARMACOLOGICAL BASIS OFTHERAPEUTICS,第7版(MacMillan Publishing Co.1985)以及这些出版物的修订版所描述。其他合适化学治疗剂(如实验性药物)为本领域的技术人员所已知。
所使用的示例性药物包括但不限于5-氟尿嘧啶、阿法替尼、阿普立定、阿扎立平、阿那曲唑、蒽环霉素、阿西替尼、AVL-101、AVL-291、苯达莫司汀、博来霉素、硼替佐米、博舒替尼、苔藓抑素-1、白消安、刺孢霉素、喜树碱、卡铂、10-羟基喜树碱、卡莫司汀、塞来昔布、苯丁酸氮芥、顺铂(CDDP)、Cox-2抑制剂、伊立替康(CPT-11)、SN-38、卡铂、克拉屈滨、喜树碱、克唑替尼、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、达沙替尼、地尼西宝、多西他赛、更生霉素、柔红霉素、阿霉素、2-吡咯啉并阿霉素(2P-DOX)、氰基-吗啉代阿霉素、阿霉素葡糖苷酸、表阿霉素葡糖苷酸、埃罗替尼、雌莫司汀、表鬼臼毒素、埃罗替尼、恩替诺特、雌激素受体结合剂、依托泊苷(VP16)、依托泊苷葡糖苷酸、磷酸依托泊苷、依西美坦、芬戈莫德、氟尿苷(FUdR)、3',5'-O-二油酰基-FudR(FUdR-dO)、氟达拉滨、氟他胺、法尼基-蛋白转移酶抑制剂、夫拉平度、福他替尼、吉尼替彼、GDC-0834、GS-1101、吉非替尼、吉西他滨、羟基脲、依鲁替尼、伊达比星、艾代拉里斯、异环磷酰胺、伊马替尼、L-天冬酰胺酶、拉帕替尼、来那度胺、亚叶酸、LFM-A13、洛莫司汀、氮芥、美法仑、巯基嘌呤、6-巯基嘌呤、甲氨蝶呤、米托蒽醌、光辉霉素、丝裂霉素、米托坦、诺维本、来那替尼、尼洛替尼、亚硝基脲、奥拉帕尼、普卡霉素、丙卡巴肼、紫杉醇、PCI-32765、喷司他丁、PSI-341、雷洛昔芬、司莫司汀、索拉非尼、链脲霉素、SU11248、舒尼替尼、它莫西芬、替莫唑胺(DTIC的水性形式)、反铂、沙利度胺、硫鸟嘌呤、塞替派、替尼泊苷、托泊替康、尿嘧啶氮芥、瓦他拉尼、长春瑞滨、长春碱、长春新碱、长春花生物碱以及ZD1839。此类剂可以是本文所述的缀合物的一部分,或者可在缀合物之前、同时或之后与所述缀合物组合施用。或者,可将本领域已知的一种或多种治疗性裸抗体与所描述的缀合物组合使用。示例性治疗性裸抗体如上所述。
在优选的实施方案中,与DNA断裂抗体缀合物(例如,SN-38-ADC)组合使用的治疗剂是微管抑制剂,如长春花生物碱、紫杉烷、美登木素生物碱或奥瑞斯他汀。示例性的已知微管抑制剂包括紫杉醇、长春新碱、长春碱、美登素、埃博霉素、多西他赛、圆皮海绵内酯、康普瑞汀、鬼臼毒素、CI-980、苯基阿夕斯丁、五加前胡素、卡拉新、2-甲氧基雌二醇、E7010、甲氧基苯磺酰胺、长春瑞滨、长春氟宁、长春地辛、尾海兔素、海绵抑制素、根霉素、泰斯多汀、软海绵素、哈米特林、念珠藻素52、MMAE以及甲磺酸艾日布林。
在替代优选的实施方案中,与DNA断裂ADC(如SN-38抗体缀合物)组合使用的治疗剂是PARP抑制剂,如奥拉帕尼、他拉唑帕尼(BMN-673)、鲁卡帕尼、维利帕尼、CEP 9722、MK4827、BGB-290、ABT-888、AG014699、BSI-201、CEP-8983或3-氨基苯甲酰胺。
在另一个替代方案中,与抗体或免疫缀合物组合使用的治疗剂是布鲁顿激酶抑制剂,如依鲁替尼(PCI-32765)、PCI-45292、CC-292(AVL-292)、ONO-4059、GDC-0834、LFM-A13或RN486。
在另一个替代方案中,与抗体或免疫缀合物组合使用的治疗剂是PI3K抑制剂,如艾代拉里斯、渥曼青霉素、去甲氧基绿胶霉素、哌立福辛、PX-866、IPI-145(度维利塞)、BAY80-6946、BEZ235、RP6530、TGR1202、SF1126、INK1117、GDC-0941、BKM120、XL147、XL765、Palomid 529、GSK1059615、ZSTK474、PWT33597、IC87114、TG100-115、CAL263、PI-103、GNE477、CUDC-907、AEZS-136或LY294002。
可与喜树碱缀合物一起使用的治疗剂还可包含与靶向部分缀合的毒素。在此方面可使用的毒素包括蓖麻毒素、相思豆毒素、核糖核酸酶(RNA酶)、DNA酶I、葡萄球菌肠毒素A、美洲商陆抗病毒蛋白、白树毒素(gelonin)、白喉毒素、假单胞菌外毒素和假单胞菌内毒素。(参见例如,Pastan.等人,Cell(1986),47:641以及Sharkey和Goldenberg,CACancerJClin.2006年7月-8月;56(4):226-43。)适合用于在本文使用的另外毒素是本领域的技术人员已知的,并且在美国专利号6,077,499中公开。
另一类治疗剂可包含一种或多种免疫调节剂。所使用的免疫调节剂可选自细胞因子、干细胞生长因子、淋巴毒素、造血因子、集落刺激因子(CSF)、干扰素(IFN)、促红细胞生成素、血小板生成素以及其组合。特别有用的是淋巴毒素,如肿瘤坏死因子(TNF);造血因子,如白细胞介素(IL);集落刺激因子,如粒细胞集落刺激因子(G-CSF)或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF);干扰素,如干扰素-α、-β、-γ或-λ;以及干细胞生长因子,如命名为“S1因子”的干细胞生长因子。包括在细胞因子之中的是:生长激素,如人生长激素、N-甲硫氨酰基人生长激素以及牛生长激素;甲状旁腺激素;甲状腺素;胰岛素;胰岛素原;松弛素;松弛素原;糖蛋白激素,如促卵泡激素(FSH)、促甲状腺激素(TSH)以及促黄体激素(LH);肝细胞生长因子;前列腺素、成纤维细胞生长因子;催乳素;胎盘催乳素、OB蛋白;肿瘤坏死因子-α和-β;苗勒抑制物质;小鼠促性腺激素相关的肽;抑制素;活化素;血管内皮生长因子;整联蛋白;促血小板生成素(TPO);神经生长因子,如NGF-β;血小板生长因子;转化生长因子(TGF),如TGF-α和TGF-β;胰岛素样生长因子-I和-II;促红细胞生成素(EPO);骨诱导因子;干扰素,如干扰素-α、-β、-γ以及-λ;集落刺激因子(CSF),如巨噬细胞-CSF(M-CSF);白细胞介素(IL),如IL-1、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-21、IL-25、LIF、kit配体或FLT-3、血管抑素、血小板反应蛋白、内皮抑素、肿瘤坏死因子以及淋巴毒素(LT)。如本文所用,术语细胞因子包括来自天然来源或来自重组细胞培养物的蛋白质和天然序列细胞因子的生物活性等效物。
所用的趋化因子包括RANTES、MCAF、MIP1-α、MIP1-β以及IP-10。
本领域普通技术人员将认识到,包含与抗体或抗体片段缀合的喜树碱的主题免疫缀合物可单独使用或与一种或多种其他治疗剂组合使用,所述其他治疗剂如第二抗体、第二抗体片段、第二免疫缀合物、放射性核素、毒素、药物、化学治疗剂、放射疗法、趋化因子、细胞因子、免疫调节剂、酶、激素、寡核苷酸、RNAi或siRNA。此类另外的治疗剂可单独施用、与主题抗体-药物免疫缀合物组合施用或连接至主题抗体-药物免疫缀合物。
制剂和施用
缀合物的合适施用途径包括但不限于口服、肠胃外、皮下、直肠、经粘膜、肠内施用、肌内、髓内、鞘内、直接心室内、静脉内、玻璃体内、腹膜内、鼻内或眼内注射。优选的施用途径是肠胃外。或者,可局部而非全身方式施用化合物,例如经由将化合物直接注射到实体瘤中。
免疫缀合物可根据已知方法进行配制以制备药学上有用的组合物,由此将所述免疫缀合物与药学上合适的赋形剂组合成混合物。无菌磷酸盐缓冲盐水是药学上合适的赋形剂的一个实例。其他合适的赋形剂是本领域熟知的。参见例如,Ansel等人,PHARMACEUTICALDOSAGEFORMS AND DRUGDELIVERY SYSTEMS,第5版(Lea&Febiger 1990),和Gennaro(编辑),REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES,第18版(MackPublishing Company1990)以及它们的修订版。
在一个优选的实施方案中,在Good氏生物缓冲液(pH 6-7)中,使用选自由以下组成的组的缓冲液配制免疫缀合物:N-(2-乙酰胺基)-2-氨基乙磺酸(ACES)、N-(2-乙酰胺基)亚氨基二乙酸(ADA)、N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸(BES)、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙磺酸(HEPES)、2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES)、3-(N-吗啉代)丙磺酸(MOPS)、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸(MOPSO)以及哌嗪-N,N’-双(2-乙磺酸)[Pipes]。更优选的缓冲液是MES或MOPS,优选地在20至100mM的浓度范围内,更优选地约25mM。最优选的是25mM MES,pH 6.5。制剂还可包含25mM海藻糖和0.01%v/v聚山梨醇酯80作为赋形剂,由于添加的赋形剂而使最终缓冲液浓度变为22.25mM。优选的储存方法是以缀合物的冻干制剂储存在-20℃至2℃的温度范围内,最优选地储存在2℃至8℃的温度范围下。
主题免疫缀合物可被配制用于经由例如推注、缓慢输注或连续输注进行静脉内施用。优选地,本发明的抗体在少于约4小时的时间内,并且更优选地在少于约3小时的时间内输注。例如,前25-50mg可在30分钟,优选地甚至15分钟内输注,并且其余的部分在接下来的2-3小时内输注。用于注射的制剂可以单位剂型提供,例如在安瓿瓶或多剂量容器中,并添加防腐剂。组合物可采取诸如悬浮液、溶液或于油性或水性媒介物中的乳液的形式,并且可含有配制剂,如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。或者,活性成分可以是在使用前与合适的媒介物(例如不含热原的无菌水)一起复原的粉末形式。
另外的制药方法可用于控制治疗缀合物的作用持续时间。可通过使用聚合物来复合或吸附免疫缀合物来制备控释制剂。例如,生物相容性聚合物包括聚(乙烯-共-乙酸乙烯酯)的基质以及硬脂酸二聚体和癸二酸的聚酸酐共聚物的基质。Sherwood等人,Bio/Technology 10:1446(1992)。从这种基质释放免疫缀合物的速率取决于免疫缀合物的分子量、基质内的免疫缀合物的量以及分散颗粒的大小。Saltzman等人,Biophys.J.55:163(1989);Sherwood等人,同上。其他固体剂型在Ansel等人,PHARMACEUTICAL DOSAGE FORMSAND DRUG DELIVERY SYSTEMS,第5版(Lea&Febiger 1990),和Gennaro(编辑),REMINGTON’SPHARMACEUTICAL SCIENCES,第18版(Mack Publishing Company 1990)以及它们的修订版中描述。
一般而言,用于人的施用的免疫缀合物的剂量将根据诸如患者年龄、体重、身高、性别、一般医学病状和先前病史的因素而变化。期望为接受者提供在约1mg/kg至24mg/kg范围内的作为单次静脉输注的免疫缀合物的剂量,但如情况需要也可施用较低或较高的剂量。对于70kg患者1-20mg/kg的剂量例如是70-1,400mg,或对于1.7-m患者是41-824mg/m2。剂量可在需要时重复,例如每周一次持续4-10周、每周一次持续8周或每周一次持续4周。还可根据维持治疗的需要以更低的频率给与,诸如每隔一周一次持续若干个月或每月一次或每季度一次持续许多个月。优选的剂量可包括但不限于1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg、16mg/kg、17mg/kg、18mg/kg、19mg/kg、20mg/kg、22mg/kg和24mg/kg。可使用在1至24mg/kg范围内的任何量。所述剂量优选地多次、每周一次或两次施用。可使用4周、更优选8周、更优选16周或更长的最小剂量方案。施用时间表可包括按选自由以下组成的组的周期每周一次或两次施用:(i)每周;(ii)每隔一周;(iii)治疗一周,随后停药两周、三周或四周;(iv)治疗两周,随后停药一周、两周、三周或四周;(v)治疗三周,然后停药一周、两周、三周、四周或五周;(vi)治疗四周,随后停药一周、两周、三周、四周或五周;(vii)治疗五周,随后停药一周、两周、三周、四周或五周;以及(viii)每月。所述周期可重复4、6、8、10、12、16或20次或更多次。
或者,可每2周或3周一次剂量施用免疫缀合物,总共重复至少3次剂量。或者,每周两次,持续4-6周。如果使剂量降至大约200-300mg/m2(对于1.7-m患者为每剂量340mg,或者对于70kg患者为4.9mg/kg),那么其可每周施用一次或甚至两次持续4至10周。或者,可减少剂量时程,即每2周或每3周持续2-3个月。然而已经确定,甚至可通过缓慢静脉内输注,根据重复给药循环施用甚至更高的剂量,如12mg/kg每周一次或每2-3周一次。给药时程可任选地以其他时间间隔重复,并且剂量可在对剂量和时程进行适当调整下通过各种胃肠外途径给与。
在优选的实施方案中,所述免疫缀合物用于治疗癌症。癌症的实例包括但不限于癌、淋巴瘤、成胶质细胞瘤、黑素瘤、肉瘤和白血病、骨髓瘤或淋巴恶性肿瘤。此类癌症的更特定实例如下所述并且包括:鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)、尤因氏肉瘤(Ewingsarcoma)、韦尔姆斯氏瘤(Wilms tumor)、星形细胞瘤、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状癌)、腹膜癌、胃部癌或胃癌(包括胃肠癌)、胰腺癌、多形性成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤、肝细胞癌、神经内分泌肿瘤、甲状腺髓样癌、甲状腺分化癌、乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾脏癌或肾癌、前列腺癌、外阴癌、肛门癌、阴茎癌以及头颈癌。术语“癌症”包括原发性恶性细胞或肿瘤(例如细胞未迁移至受试者体内原始恶性肿瘤或肿瘤部位以外的部位的肿瘤)和继发性恶性细胞或肿瘤(例如由转移产生的肿瘤,恶性细胞或肿瘤细胞迁移至与原始肿瘤部位不同的次级部位)。
癌症或恶性肿瘤的其他实例包括但不限于:急性儿童成淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、肾上腺皮质癌、成人(原发性)肝细胞癌、成人(原发性)肝癌、成人急性淋巴细胞性白血病、成人急性骨髓性白血病、成人霍奇金氏淋巴瘤、成人淋巴细胞性淋巴瘤、成人非霍奇金氏淋巴瘤、成人原发性肝癌、成人软组织肉瘤、AIDS相关性淋巴瘤、AIDS相关性恶性疾病、肛门癌、星形细胞瘤、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑干神经胶质瘤、脑瘤、乳癌、肾盂和输尿管癌、中枢神经系统(原发性)淋巴瘤、中枢神经系统淋巴瘤、小脑星形细胞瘤、大脑星形细胞瘤、宫颈癌、儿童(原发性)肝细胞癌、儿童(原发性)肝癌、儿童急性成淋巴细胞性白血病、儿童急性骨髓性白血病、儿童脑干神经胶质瘤、儿童小脑星形细胞瘤、儿童大脑星形细胞瘤、儿童颅外胚细胞瘤、儿童霍奇金氏病、儿童霍奇金氏淋巴瘤、儿童下丘脑和视通路神经胶质瘤、儿童成淋巴细胞性白血病、儿童成神经管细胞瘤、儿童非霍奇金氏淋巴瘤、儿童松果体和幕上原始神经外胚层瘤、儿童原发性肝癌、儿童横纹肌肉瘤、儿童软组织肉瘤、儿童视通路和下丘脑神经胶质瘤、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、结肠癌、皮肤T细胞淋巴瘤、内分泌胰岛细胞癌、子宫内膜癌、室管膜瘤、上皮癌、食道癌、尤因氏肉瘤和相关肿瘤、外分泌胰腺癌、颅外胚细胞瘤、性腺外胚细胞瘤、肝外胆管癌、眼癌、女性乳癌、戈谢氏病(Gaucher's Disease)、胆囊癌、胃部癌、胃肠道良性肿瘤、胃肠道肿瘤、胚细胞瘤、妊娠性滋养层细胞瘤、毛细胞白血病、头颈癌、肝细胞癌、霍奇金氏淋巴瘤、高丙种球蛋白血症、下咽癌、肠癌、眼内黑素瘤、胰岛细胞癌、胰岛细胞胰腺癌、卡波济氏肉瘤(Kaposi's Sarcoma)、肾癌、喉癌、唇口腔癌、肝癌、肺癌、淋巴增生性病症、巨球蛋白血症、男性乳癌、恶性间皮瘤、恶性胸腺瘤、成神经管细胞瘤、黑素瘤、间皮瘤、原发灶隐匿的转移性鳞状颈癌、转移性原发性鳞状颈癌、转移性鳞状颈癌、多发性骨髓瘤、多发性骨髓瘤/浆细胞赘瘤、骨髓发育不良综合症、髓细胞性白血病、骨髓性白血病、骨髓增生性病症、鼻腔和副鼻窦癌、鼻咽癌、成神经细胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、非黑素瘤皮肤癌、非小细胞肺癌、原发灶隐匿性转移性鳞状颈癌、口咽癌、骨肉瘤/恶性纤维肉瘤、骨肉瘤/恶性纤维组织细胞瘤、骨肉瘤/骨骼的恶性纤维组织细胞瘤、卵巢上皮癌、卵巢胚细胞瘤、卵巢低恶性潜能肿瘤、胰腺癌、病灶蛋白血症、真性红细胞增多症、副甲状腺癌、阴茎癌、嗜铬细胞瘤、垂体肿瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、原发性肝癌、前列腺癌、直肠癌、肾细胞癌、肾盂和输尿管癌、成视网膜细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、肉状瘤病肉瘤、塞扎里综合症(Sezary Syndrome)、皮肤癌、小细胞肺癌、小肠癌、软组织肉瘤、鳞状颈癌、胃癌、幕上原始神经外胚层和松果体瘤、T细胞淋巴瘤、睾丸癌、胸腺瘤、甲状腺癌、肾盂和输尿管的移行细胞癌、移行肾盂和输尿管癌、滋养层细胞瘤、输尿管和肾盂细胞癌、输尿管癌、子宫癌、子宫肉瘤、阴道癌、视通路和下丘脑神经胶质瘤、阴门癌、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、韦尔姆斯氏瘤,以及除赘瘤以外位于上列器官系统中的任何其他过度增生性疾病。
本文所述和要求保护的方法和组合物可用于治疗恶性或癌变前病症,并且用于防止进展为赘生性或恶性状态,包括但不限于上述那些疾病。此类用途表明了已知或怀疑先前进展为赘瘤或癌症的疾患,特别是在已发生包括增生、化生或最特别地发育异常的非赘生性细胞生长的情况下(关于此类异常生长疾患的综述,参见Robbins和Angell,BasicPathology,第2版,W.B.Saunders Co.,Philadelphia,第68-79页(1976))。
发育异常通常是癌症的预兆,并且主要可见于上皮中。其是非赘生性细胞生长的最无序形式,涉及个别细胞一致性和细胞结构取向的丧失。在存在慢性刺激或炎症的情况下,发育异常特征性地发生。可治疗的发育异常病症包括但不限于:无汗性外胚层发育不良、前面部发育不良、窒息性胸廓发育不良、心房-手指发育不良、支气管肺发育不良、大脑发育不良、宫颈发育不良、软骨外胚层发育不良、锁骨颅骨发育不良、先天性外胚层发育不良、颅骨干发育不良、颅腕跗发育不良、颅骨干骺端发育不良、牙本质发育异常、骨干结构不良、外胚层发育不良、牙釉质发育不良、脑性眼球发育不全、偏侧骨骺发育不良、多发性骨骺发育不良、点状骨骺发育不良、上皮异常增生、面指生殖器发育异常、家族性颌骨纤维性发育异常、家族性白色皱褶性发育异常、纤维肌肉发育异常、骨纤维性结构不良、旺盛骨性发育不良、遗传性肾视网膜发育不良、有汗性外胚层发育不良、少汗性外胚层发育不良、淋巴细胞减少性胸腺发育不良、乳腺发育不良、下颌骨颜面发育不良、干骺端发育不良、蒙蒂尼氏发育异常(Mondini dysplasia)、单骨纤维性骨发育不良、粘液上皮发育异常、多发性骨骺发育不良、眼耳脊椎发育不良、眼齿指发育不良、眼椎骨发育不全、牙原性发育不良、眼下颌骨发育不良、根尖周牙骨质结构不良、多骨纤维性结构不良、假性软骨发育不全性脊椎骨骺发育不良、视网膜发育不良、中隔-眼发育不良、脊椎骨骺发育不良和脑室径向发育不良。
可治疗的另外赘生前病症包括但不限于良性异常增生性病症(例如良性肿瘤、纤维囊性疾患、组织肥大、肠息肉或腺瘤以及食道异常增生)、粘膜白斑病、角化病、博文氏病(Bowen's disease)、慢性光化性皮炎(Farmer's Skin)、日光性唇炎以及日光性角化病。
在优选的实施方案中,本发明的方法用于抑制癌症,特别是上文列出的那些癌症的生长、进展和/或转移。
其他过度增生性疾病、病症和/或疾患包括但不限于恶性肿瘤和相关病症的进展和/或转移,如白血病(包括急性白血病;例如急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞性白血病[包括成髓细胞性、早幼粒细胞性、骨髓单核细胞性、单核细胞性和红白血病])和慢性白血病(例如,慢性髓细胞性[粒细胞性]白血病和慢性淋巴细胞性白血病)、真性红细胞增多症、淋巴瘤(例如,霍奇金氏病和非霍奇金氏病)、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、重链病和实体瘤,包括但不限于肉瘤和癌,如纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨原性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝细胞瘤、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎癌、韦尔姆斯氏瘤、宫颈癌、睾丸癌、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、脑脊膜瘤、黑素瘤、成神经细胞瘤以及成视网膜细胞瘤。
可用免疫缀合物治疗的自身免疫性疾病可包括急性和慢性免疫血小板减少症、皮肌炎、西登哈姆氏舞蹈病、重症肌无力、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎、风湿热、多腺性综合症、大疱性类天包疮、青少年糖尿病、过敏性紫癜、链球菌感染后肾炎、结节性红斑、高安氏动脉炎、ANCA相关血管炎、爱迪生氏病、类风湿性关节炎、多发性硬化症、肉状瘤病、溃疡性结肠炎、多形性红斑、IgA肾病、结节性多动脉炎、强直性脊柱炎、古德帕斯丘综合症、血管闭塞性脉管炎、干燥综合症、原发性胆汁性肝硬化、桥本氏甲状腺炎、甲状腺素症、硬皮病、慢性活动性肝炎、多肌炎/皮肌炎、多软骨炎、寻常型天疱疮、韦格纳氏肉芽肿病、膜性肾病、肌萎缩性侧索硬化、脊髓痨、巨细胞性动脉炎/多肌痛、恶性贫血、急进性肾小球肾炎、银屑病或纤维性肺泡炎。
药盒
各种实施方案可涉及药盒,所述药盒含有适用于治疗患者的癌症的组分。示例性药盒可含有至少一种如本文所述的药物-缀合的抗体。如果含有用于施用的组分的组合物未配制成经由消化道递送,如通过口服递送,那么可包括能够通过一些其他途径递送药盒部件的装置。用于诸如胃肠外递送的应用的一种类型的装置是注射器,其用于将组合物注射至受试者体内。还可使用吸入装置。
药盒部件可包装在一起或分成两个或更多个容器。在一些实施方案中,所述容器可以是含有适用于复原的组合物的无菌冻干制剂的小瓶。药盒也可含有一种或多种适用于其他试剂的复原和/或稀释的缓冲液。可使用的其他容器包括但不限于小袋、托盘、盒、管等。药盒部件可包装并且无菌保持在容器内。可以包括的另一种组件是提供给药盒使用者的说明书。
实施例
以下实施例说明本发明的各种实施方案,而不限制其范围。
实施例1.沙西妥珠单抗戈维替康(IMMU-132)用于转移性尿路上皮癌的临床研究
患有转移性铂耐药性尿路上皮癌(PRUC)的患者没有FDA批准的疗法。对二线化学疗法的应答率总体上一直<20%,中值总体存活期<1年。在本文报告了用新颖的抗体-药物缀合物沙西妥珠单抗戈维替康(IMMU-132)重度预治疗的6名晚期PRUC患者(临床试验标识符NCT01631552)的经验。这种抗体-药物缀合物包含与抗Trop-2抗体(hRS7)缀合的伊立替康的活性代谢物SN-38。
Trop-2在≤83%的尿路上皮癌中广泛表达。在6名患者中,3名具有临床显著应答(无进展存活期,6.7至8.2个月;总体存活期,7.5+至11.4+个月)。沙西妥珠单抗戈维替康耐受性良好。由于这些结果,已开始II期试验。本报告证明了抗Trop-2抗体-药物缀合物如沙西妥珠单抗戈维替康作为治疗PRUC的新颖治疗策略的效用。
引言
膀胱尿路上皮癌(UC)是第六种最常见形式的癌症(例如,Sharma等人,2009,AmFam Physician 80:717-23)。基于顺铂的组合化学疗法是对晚期疾病患者展现存活益处的唯一已知的治疗(Logothetis等人,1990,J Clin Oncol 8:1050-55;Loehrer等人,1992,JClin Oncol10:1066-73)。然而,只有一小部分将获得长期存活。对于参与临床试验的那些来说,中值总体存活期为15个月,并且5年存活率仅为15%(von der Maase等人,2005,JClin Oncol 23:4602-8)。在基于铂的化学疗法(铂耐药性尿路上皮癌[PRUC])的6至12个月内进展后,无论在围手术期还是晚期环境递送,对于符合入选临床试验标准的受试者,存活期仅为4至9个月。在美国没有批准二线化疗药物,并且在欧洲只有长春氟宁可用(Bellmunt等人,2009,J Clin Oncol 27:4454-61)。开发用于晚期尿路上皮癌的有效二线疗法代表了重要的未满足的医学需求(Faltas等人,2015,Expert Opin TherTargets 19:515-25)。
靶向细胞表面抗原的抗体-药物缀合物(ADC)代表了化学疗法难治性肿瘤(包括PRUC)的有吸引力的治疗策略(Cardillo等人,2015,Bioconjug Chem 26:919-31)。沙西妥珠单抗戈维替康(IMMU-132)是第二代ADC,其包含与伊立替康的活性代谢物SN-38缀合的人源化抗Trop-2单克隆抗体(hRS7)(Goldenberg等人,2015,Oncotarget6:22496-5120)。它在临床前和临床上已在若干实体瘤中展现可接受的毒性和优异的治疗活性(Cardillo等人,2015,Bioconjug Chem26:919-31;Starodub等人,2015,Clin CancerRes 21:3870-78),并且是用于靶向UC的理性选择。已知Trop-2(TACSTD2)蛋白在正常尿路上皮中表达(Stepan等人,2011,J Histochem Cytochem 59:701-10)并且在≤83%的尿路上皮癌中表达(Faltas等人,2016,Clin Genitourin Cancer14:e75-9)。在PRUC患者中使用伊立替康的II期临床试验展现仅5%的总体应答率(95%置信区间,1%-17%),包括持续33个月的完全应答和5.4个月的总体存活期(Beer等人,2008,Clin Genitourin Cancer 6:36-9)。\伊立替康也已与其他药物组合使用(Chaudhary等人,2014,Am J Clin Oncol 37:188-93)。
作为评价沙西妥珠单抗戈维替康(临床试验标识符NCT01631552)的扩展试验的一部分,最初研究了6名PRUC患者,其中3名实现了临床显著应答。本实施例描述这种临床经验,其证明这种ADC是治疗PRUC的有吸引力的候选物。
材料和方法
如美国专利号7,238,785中所描述产生人源化RS7(hRS7)抗Trop-2抗体,所述专利的附图和实施例部分以引用的方式并入本文。根据美国专利7,999,083(其实施例10和12以引用的方式并入本文)产生连接至CL2A接头的SN-38并与hRS7(抗Trop-2)缀合。缀合方案使得每个抗体分子连接介于约6至8个之间的SN-38分子的比例。
如果患者患有晚期PRUC、东部肿瘤协作组行为状态为0至1以及完整的器官功能,则所述患者符合使用IMMU-132的临床试验(Starodub等人,2015,Clin CancerRes 21:3870-78)。所有患者都提供了知情同意书。所有实验程序均按照批准的指南进行。在21天周期的第1天和第8天静脉内施用沙西妥珠单抗戈维替康,所述周期重复直至发展剂量限制性毒性或进展。使用实体瘤的应答评价标准1.1版评估应答。当可用时,如先前所描述(Starodub等人,2015,Clin Cancer Res21:3870-78)进行从治疗的患者获得的存档肿瘤活检标本的免疫组织化学染色。
结果
中值患者年龄是72.5岁(范围42-80岁)。所有患者均患有转移性疾病,并且先前用含铂方案和其他线疗法进行了治疗(先前疗法的中值数目,3;表2)。根据接受挽救全身疗法的UC患者的预后模型,在6名患者中,5名处于较差或中等风险组(Sonpavde等人,2015,JClin Oncol 33(摘要311)。所有6名PRUC患者均可用于应答评估。两人实现了部分应答,其中最佳应答者具有靶病灶(包括肝脏转移)的38%减少,(图1)。一名患者患有稳定疾病,靶病灶减少28%,并且3名患者患有进行性疾病,包括由于新病灶而使用实体瘤的应答评估标准1.1版被认为患有进行性疾病的1名患者,尽管使用治疗后他的靶病灶减少12%(表2)。对于具有临床显著应答的3名患者,无进展存活期使6.7至8.2个月,并且总体存活期是7.5+至11.4+个月。
沙西妥珠单抗戈维替康通常耐受性良好。两名患者经历了3级毒性(侧腹疼痛和菌血症)。未观察到4级非血液毒性。来自用沙西妥珠单抗戈维替康治疗的患者的存档PRUC肿瘤组织的免疫组织化学分析显示Trop-2蛋白的显著细胞表面表达(图2)。
表2.基线特征和临床结果。
缩写:BCG=卡介苗;Hb=血红蛋白;LDH=乳酸脱氢酶;M=男性;OS=总体存活期;PD=进行性疾病;PFS=无进展存活期;PR=部分应答;Pt.No.=患者编号;RECIST 1.1=实体瘤的应答评价标准,1.1版;RPLN=腹膜后淋巴结;SCV=锁骨上;SD=稳定疾病;UC=尿路上皮癌。
论述
虽然长春花生物碱长春氟宁可在欧洲使用,但是因为来自III期试验的结果将其与二线环境中的最佳支持护理进行比较,其功效微不足道,无总体存活优势(Bellmunt等人,2009,J Clin Oncol 27:4454-61)。用诸如长春氟宁或其他剂(包括紫杉烷和培美曲塞)的二线疗法治疗的患者的总体应答率通常<20%,中值总体存活期仅为4至9个月(Bellmunt等人,2009,J Clin Oncol 27:4454-61;Sweeney等人,2006,J Clin Oncol 24:3451-57;Galsky等人,2007,Invest New Drugs25:265-70)。最近提出的有或没有雷莫芦单抗或依库单抗的多西他赛的阳性II期随机化试验显示,单独多西他赛对照组的应答率为5%且无进展存活期为10.4周(Petrylak等人,2012,J Clin Oncol 30(摘要TPS4675)。对经常使用的二线剂培美曲塞的大型机构审查显示,目标应答率为5%(95%置信区间,1%-9%)并且中值无进展存活期为2.4个月(Bambury等人,2015,Oncologist 20:50-15)。因此,目前,患有PRUC的患者具有有限的治疗选择。
在参加I/II期试验的这第一组PRUC患者中,沙西妥珠单抗戈维替康在这一重度预治疗的组中显示显著临床活性的早期信号。如先前在UC细胞系和患者来源的PRUC肿瘤中观察到的,在来自用沙西妥珠单抗戈维替康治疗的患者的肿瘤活检中检测到高水平的Trop-2蛋白表达(图2)。样品大小不允许Trop-2表达水平与临床应答之间的关联。然而,在这一小部分PRUC患者中观察到的活性与良好总体耐受性与临床前结果一致,从而表明ADC选择性地将显著比例的有效药物递送至肿瘤细胞而非正常细胞(Sharkey等人,2015,Clin CancerRes21:3870-78)。上文提供的数据证明IMMU-132用于转移性尿路上皮癌的安全性和功效。
实施例2.转移性尿路上皮癌中关于IMMU-132的进一步研究
在实施例1之后,对用含铂化学疗法预治疗的mUC患者进行进一步研究。此类患者的治疗选择有限,少数患者具有检查点-抑制剂免疫疗法(IO)应答。提供了沙西妥珠单抗戈维替康(IMMU-132)作为化学疗法预治疗的mUC患者的疗法的安全性和活性的进一步证据(ClinicalTrials.gov,NCT01631552)。
方法
招募了32名患有mUC且ECOGPS 0-1的患者,其失败>1种先前标准疗法(中值=3;范围,1-5)。IMMU-132在每21天的第1天和第8天以8或10mg/kg施用,持续直至疾病进展(PD)或不可接受的毒性。应答可评价的患者接受≥2个剂量,并且具有≥1次基线后应答评估。
结果
二十五名患者[中值年龄68岁(范围:50-91),24名男性]可评估安全性和应答;23名具有先前含铂疗法;46%具有>2种先前疗法;4名还具有IO剂。转移部位包括肝脏(N=4;16%)、肺(N=7;28%)、骨骼(N=4;16%)和淋巴结(N=16;64%)。患者接受IMMU-132的7个周期(范围,2-23)的中值。ORR是36%(9/25)[1例完全应答(CR)和8例部分应答(PR)];44%(11/25)患有稳定疾病(SD)。此外,使用1线先前化学疗法的患者具有53.8%(7/13)的ORR,而对于使用2至5种先前治疗线的患者为16.7%。所有患者的中值PFS是7.2个月(95%CI,4.9-10.7);尚未达到中值存活期。在先前IO后进展的4名患者中,使用IMMU-132存在1例PR和2例SD。CR/PR患者的应答持续时间目前是5.1个月(95%CI,4.1-12.9)并且10/11患者(5名≥20%肿瘤减小)患有稳定疾病>4个月。4级嗜中性粒细胞减少症(16%)持续<7天,并且非血液学3级AE包括疲劳(12%)和低磷血症(8%)。未观察到治疗相关的死亡。对Trop-2表达的分析揭示,在19个存档患者标本的95%中,1+至3+阳性染色。
结论
在重度预治疗的群体中ORR为36%并且中值PFS为7.2个月,这些中期结果显示IMMU-132作为用于铂或IO预治疗的mUC患者的2线或以后治疗的功效和耐受性。
实施例3.多种Trop-2+癌症中使用IMMU-132抗Trop-2ADC的临床试验
概述
本实施例报告来自I期临床试验和正在进行的IMMU-132的II期扩展的结果,IMMU-132是通过pH敏感接头缀合至SN-38的内化人源化hRS7抗Trop-2抗体的ADC(平均药物-抗体比率=7.6)。Trop-2是很多人恶性肿瘤以高密度(~1×105)、频率和特异性表达的I型跨膜钙转导蛋白,而正常组织表达有限。携带Capan-1人胰腺肿瘤异种移植物的裸小鼠的临床前研究揭示,IMMU-132能够将SN-38递送至肿瘤,比来源于最大耐受伊立替康疗法的递送多120倍。
所示的结果在多次先前疗法失败的25名患者的初始I期试验(一些包括拓扑异构酶-I/II抑制性药物)过程期间获得,并且正在进行的II期扩展现在报告69名患者,包括结肠直肠癌(CRC)、小细胞和非小细胞肺癌(分别为SCLC、NSCLC)、三阴性乳腺癌(TNBC)、胰腺癌(PDC)、食道癌和其他癌症。
如下文所详细论述,血清中未检测到Trop-2,但在大部分存档的肿瘤中强烈表达(≥2+免疫组织化学染色)。在3+3试验设计中,在重复21天周期的第1天和第8天给与IMMU-132,以8mg/kg/剂量开始,然后12和18mg/kg,直到剂量限制性嗜中性粒细胞减少症。为优化最小延迟的累积处理,II期集中于8和10mg/kg(n分别=30和14)。此时在49名报告相关AE的患者中,28%中出现嗜中性粒细胞减少症≥3级(4%4级)。最初在这些患者中的最常见的非血液毒性是疲劳(55%;≥G3=9%)、恶心(53%;≥G3=0%)、痢疾(47%;≥G3=9%)、脱发(40%)和呕吐(32%;≥G3=2%);脱发也频繁发生。在6名患者中发现纯合UGT1A1*28/*28,其中2名具有较严重的血液和GI毒性。
在I期和扩展期中,目前有48名患者(不包括PDC)可根据RECIST/CT评估为最佳应答。七名(15%)患者具有部分应答(PR),包括CRC患者(N=1)、TNBC患者(N=2)、SCLC患者(N=2)、NSCLC患者(N=1)和食道癌患者(N=1),并且另外27名患者(56%)患有稳定的疾病(SD),总共38名患者(79%)具有疾病应答;13名CT可评估的PDC患者中的8名(62%)患有SD,在他们最后一次先前治疗中,与8.0周相比,中值进展时间(TTP)为12.7周。剩余48名患者的TTP为12.6+周(6.0至51.4周的范围)。血浆CEA和CA19-9与血液中这些抗原的滴度升高的应答相关。尽管给药达数月,但未检测到抗hRS7或抗SN-38抗体。
在3天内从血清清除缀合物,符合其中每天释放50%的SN-38的体内动物研究,血清中>95%的SN-38结合至非葡萄糖醛酸形式的IgG,并且浓度比给与伊立替康的患者中报告的SN-38高100倍。这些结果显示,含有hRS7-SN-38的ADC在转移性实体癌中具有治疗活性,具有可控制的痢疾和嗜中性粒细胞减少。
药代动力学
将两种ELISA方法用于测量IgG(使用抗hRS7个体基因型抗体捕获)和完整的缀合物(使用抗SN-38IgG/具有抗hRS7个体基因型抗体的探针捕获)的清除。通过HPLC测量SN-38。总IMMU-132级分(完整的缀合物)的清除比IgG(未示出)更快,从而反映SN-38从缀合物的已知逐渐释放。SN-38(未结合和总体)的HPLC测定显示出血清中>95%的SN-38结合至IgG。低浓度的SN-38G暗示,结合至IgG的SN-38受到保护,免于葡萄糖醛酸化。缀合物的ELISA和SN-38HPLC的比较揭示二者重叠,从而暗示ELISA是用于监测SN-38清除的替代。
给药方案和患者池的总结提供于表3中。
表3.临床试验参数
临床试验状态
报告了总共69名各种转移性癌症患者(包括25名I期患者),它们具有3次先前疗法的中值。八名患者在CT评估之前具有临床进展和撤除。十三名CT可评估的胰腺癌患者单独报告。PDC患者中的中值TTP(进展时间)是11.9周(2至21.4周的范围),相比之下之前最后治疗的中值TTP为8周。
总共48名患有各种癌症的患者具有至少1次CT评估,由此确定最佳应答(图3)和进展时间(TTP;未示出)。为了总结最佳应答数据,在8名可评估TNBC(三阴性乳腺癌)患者中,有2例PR(部分应答)、4例SD(稳定疾病)和2例PD(进行性疾病),总计应答[PR+SD]为6/8(75%)。对于SCLC(小细胞肺癌),在4名可评估患者中,有2例PR、0例SD和2例PD,总计应答为2/4(50%)。对于CRC(结肠直肠癌),在18名可评估患者中,有1例PR、11例SD和6例PD,总计应答为12/18(67%)。对于食道癌,在4名可评估患者中,有1例PR、2例SD和1例PD,总计应答为3/4(75%)。对于NSCLC(非小细胞肺癌),在5名可评估患者中,有1例PR、3例SD和1例PD,总计应答为4/5(80%)。在所有治疗的患者内,在48名可评估患者中,有7例PR、27例SD和14例PD,总计应答为34/48(71%)。这些结果证明,抗TROP-2ADC(hRS7-SN-38)显示出针对一系列广泛的人患者实体瘤的显著临床功效。
所报告的治疗副作用(不良事件)总结于表4中。如从表4的数据显而易见,hRS7-SN-38的治疗功效以ADC的剂量实现,显示可接受的低水平的不利副作用。
表4.
表4中报告的研究继续,目前已招募261名患者。结果(未示出)通常沿着表4中所示的线跟踪,仅嗜中性粒细胞减少症显示超过10%的测试的患者中出现3级或更高的不良事件。对于所有其他不良事件,3级或更高级别应答的发生率低于10%。这将本发明的免疫缀合物与绝大多数ADC区分开来,并且在某些实施方案中,要求保护的方法和组合物涉及在各种实体瘤中显示功效的抗Trop-2ADC,对于除嗜中性粒细胞减少症以外的所有不良事件,在少于10%的患者中发生3级或更高级别的不良事件。在随访研究中,在来自121名基线患者的总计421份样品和至少一份可用的随访样品中,尽管重复治疗周期,仍未检测到抗hRS7或抗SN-38抗体应答。
对抗Trop-2ADC的示例性部分应答通过CT数据(未示出)确认。作为CRC的示例性PR,初诊为CRC的62岁妇女经历初次半结肠切除。四个月后,由于肝脏转移她经历了肝脏切除,并接受7个月的FOLFOX治疗和1个月的5FU。她出现多个病灶,主要位于肝脏中(通过免疫组织分析3+Trop-2)在初始诊断后,以8mg/kg的起始剂量进入hRS7-SN-38试验约1年。在她首次CT评估时,实现PR,靶病灶减少37%(未示出)。患者继续治疗,在10个月治疗后实现最大减少65%(未示出),CEA从781ng/mL减少至26.5ng/mL,之后稍后进展3个月。
作为NSCLC的示例性PR,65岁男性被诊断为IIIB级NSCLC(鳞状细胞癌)。碳铂/依托泊苷(3mo)以及7000cGyXRT的初始治疗使得应答持续10mo。然后除经历腰椎板切除术之外,他从Tarceva维持治疗开始,继续直到他被考虑进入IMMU-132试验。他在5个月的Tarceva之后接受第一剂量的IMMU-132,此时右肺出现5.6cm病灶以及大量胸膜腔积液。他在两个月后正好完成第6个剂量,此时首次CT显示主要靶病灶减小至3.2cm(未示出)。
作为SCLC的示例性PR,65岁妇女被诊断为低分化SCLC。在2个月之后终止的接受卡铂/依托泊苷(拓扑异构酶-II抑制剂)后,无应答,然后是2个月之后终止的托泊替康(拓扑异构酶-I抑制剂),也无应答,她接受1个月后终止的局部XRT(3000cGy)。然而,在接下来一个月内进展继续。患者下个月从IMMU-132开始(12mg/kg;减少至6.8mg/kg;Trop-2表达3+),并且在两个月的IMMU-132之后,靶病灶减少38%,包括主要肺病灶中出现大量减少(未示出)。在接受12个剂量之后,患者进展3个月。
这些结果的意义在于,它们显示抗Trop-2ADC是有效的,即使在多次先前治疗之后失效或进展的患者中也是如此。总之,在所用的剂量下,主要毒性是可控制的嗜中性粒细胞减少症,3级毒性很少。IMMU-132显示了三阴性乳腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、结肠直肠癌和食道癌的复发/难治患者中活性(PR和持久性SD)的证据,包括具有拓扑异构酶-I抑制剂治疗的复发既往史的患者。这些结果示出抗Trop-2ADC在一系列广泛的耐受现有疗法的癌症中的功效。
实施例4.用抗Trop-2ADC治疗患有晚期转移性胰腺癌的患者
概述
Trop-2是在许多上皮癌(包括胰腺导管腺癌)中以高密度、频率和特异性表达的I型跨膜钙转导蛋白,具有有限的正常组织表达。通过免疫组织化学,所测试的所有29个胰腺肿瘤微阵列标本均为Trop-2阳性,并且发现人胰腺癌细胞系在细胞膜上表达115k-891kTrop-2拷贝。
上文报告了来自IMMU-132I期研究的结果,所述研究使用3+3设计招募了具有13种不同肿瘤类型的患者。I期剂量限制性毒性是嗜中性粒细胞减少症。本研究中24名可评估患者中超过80%患有长期稳定疾病,在结肠直肠癌(CRC)、三阴性乳腺癌(TNBC)、小细胞和非小细胞肺癌(SCLC、NSCLC)以及食道癌(EAC)患者中观察到部分应答(RECIST)。本实施例报告患有转移性PDC的患者的IMMU-132I/II期研究组的结果。向中值为2次先前治疗失败(范围1-5)的PDC患者在重复21天周期的第1天和第8天给与IMMU-132。
在PDC患者亚组(N=15)中,14名接受了先前含吉西他滨的方案。来自9名患者的初始毒性数据发现嗜中性粒细胞减少症[9名中的3名≥G3,33%;和1例G4发热性嗜中性粒细胞减少症),其导致剂量推迟或剂量减少。2名患者具有3级腹泻;没有患者具有3-4级恶心或呕吐。9名患者中的5名出现脱发(1-2级)。14名患者中的13名中可评估最佳应答,其中8名疾病稳定持续8至21.4周(中值12.7周;所有14名患者为11.9周)。一名正在继续治疗的患者尚未进行首次CT评估。五名根据RECIST患有进行性疾病;由于临床进展,在仅1个剂量后1例退出并且无法评估。患有稳定疾病的患者中的3名血清CA19-9滴度下降23%至72%。尽管多次施用,但没有患者发展对IMMU-132或SN-38的抗体应答。峰值和谷值血清样品显示IMMU-132比IgG更快地清除,这是基于肿瘤细胞内SN-38的已知局部释放而预期的。来自给与12mg/kgIMMU-132的一名患者的峰值样品中与IgG结合的SN-38的浓度显示约4000ng/mL的水平,其比给与伊立替康疗法的患者中报告的SN-38滴度高40倍。
得出结论,IMMU-132在62%(8/13)的PDC患者中是活性的(长期稳定疾病),所述患者在多种先前疗法中失败、具有可控的嗜中性粒细胞减少症和很少的GI毒性。可向晚期PDC患者给与在21天周期的第1天和第8天8-10mg/kg IMMU-132的重复治疗周期(>6),在随后的治疗周期中针对嗜中性粒细胞减少症进行一些剂量调整或生长因子支持。这些结果与晚期CRC、TNBC、SCLC、NSCLC、EAC患者中的发现一致,所述患者在IMMU-132施用时显示部分应答和长期稳定疾病。总之,单一疗法IMMU-132对于PDC患者是新颖、有效的治疗方案,包括先前对用于PDC的其他治疗方案具有抗性的肿瘤患者。
方法和结果
Trop-2表达-使用PE珠通过流式细胞术测定Trop-2在各种癌细胞系表面上的表达。在不同细胞系中检测到的Trop-2分子数目的结果是:BxPC-3胰腺癌(891,000);NCI-N87胃癌(383,000);MDA-MB-468乳房癌(341,000);SK-MES-1鳞状细胞肺癌(27,000);Capan-1胰腺癌(115,000);AGS胃癌(78,000)COLO 205结肠癌(52,000)。在29个胰腺癌组织微阵列中的29个(100%)中也观察到Trop-2表达(未示出)。
SN-38累积-在携带Capan-1人胰腺癌异种移植物(约0.06-0.27g)的裸鼠中测定SN-38累积。用伊立替康40mg/kg(773μg;总SN-38当量=448μg)静脉内注射小鼠。此剂量是小鼠中的MTD。人剂量当量=3.25mg/kg或约126mg/m2。或者用IMMU-1321.0mg静脉内注射小鼠(SN-38:抗体比率=7.6;SN-38当量=20μg)。此剂量远低于小鼠中的MTD。人等效剂量约4mg/kg IMMU-132(约80μg/kg SN-38当量)。在注射伊立替康的小鼠中在5分钟、1小时、2小时、6小时和24小时或在注射IMMU-132的小鼠中在1、6、24、48和72小时,每个间隔对3只动物进行尸检。提取组织并通过SN-38、SN-38G和伊立替康的反相HPLC分析进行分析。来自IMMU-132处理的动物的提取物还进行酸水解以从缀合物释放SN-38(即SN-38(总计])。结果(未示出)表明,与伊立替康相比,IMMU-132ADC具有向肿瘤递送多120倍的SN-38的潜力,尽管与ADC一起施用的SN-38当量低22倍。
IMMU-132临床方案-I/II期研究中使用的方案在以下表5中指示。
根据上文概述的方案向患者施用IMMU-132。示例性病例研究如下。最初诊断为转移性胰腺癌(肝脏)的34岁y/o白人男性在引入IMMU-132(在21天周期的第1天和第8天给与的8mg/kg剂量)之前在多种化疗方案(包括吉西他滨/埃罗替尼/FG-3019、FOLFIRINOX和GTX)中进展。患者接受药物持续4个月,症状耐受性良好,疼痛改善,CA19-9最大下降72%(从15885U/mL降至4418U/mL),以及根据CT RECIST标准稳定疾病伴有肿瘤坏死证据。由于肝脓肿,治疗必须暂停;患者在治疗开始后6个月,约6周后到期。
对14名在2次先前治疗的中值之后复发的晚期PDC患者的研究显示,CT确认的抗肿瘤活性包括8/13(62%)患有稳定疾病。与从上一次先前治疗估计的8.0周相比,13名CT可评估患者的TTP的中值持续时间是12.7周。这种ADC(具有纳摩尔毒性的已知药物)通过在肿瘤部位提供裂解的接头缀合至靶向许多上皮癌中普遍存在的Trop-2的抗体,代表了用ADC进行胰腺癌治疗的新的有效策略。与目前胰腺癌患者的护理标准相比,胰腺癌患者的进展时间延长(特别是对多种先前疗法具有抗性的那些患者)是出人意料的并且无法预测。
实施例5.来自I/II期临床研究的其他结果
三阴性乳腺癌(TNBC)
上述实施例中论述的I/II期临床试验(NCT01631552)仍在继续,累计56名用10mg/kg治疗的TNBC患者。在开始IMMU-132治疗之前,患者群体先前已被广泛治疗,其中包括紫杉烷治疗的至少2个先前治疗线。先前治疗包括环磷酰胺、阿霉素、卡铂、吉西他滨、卡培他滨、艾日布林、顺铂、阿那曲唑、长春瑞滨、贝伐单抗和他莫昔芬。尽管这种广泛的治疗史,但TNBC患者对IMMU-132应答良好,其中2例确认完全应答(CR),13例部分应答(PR)以及25例稳定疾病(SD),目标应答率为29%(15/52)(图4)。加上CR加PR加SD的发生率,TNBC的治疗使得IMMU-132治疗患者的有利应答率为71%(未示出)。在这一重度预治疗的TNBC患者群体中,进展时间中值是9.4个月,迄今为止范围为2.9至14.2个月。然而,所述研究中72%的患者仍在进行治疗。此组患者中的无进展存活在图5中示出。
转移性NSCLC
对于患有转移性非小细胞肺癌(NSCLC)的患者,临床试验也在进行中,迄今为止累计有29名可评估的患者,所述患者用8或10mg/kg IMMU-132治疗。通过RESIST 1.1标准的最佳应答在图6中示出。在29名患者中,有8例PR和13例SD。NSCLC患者的进展时间在图7中示出,其显示21/33(64%)的NSCLC患者表现出PR或SD。进展时间的中值是9/4个月,范围为1.8至15.5+个月,并且47%的患者仍在接受治疗。用8或10mg/kg IMMU-132治疗的NSCLC患者的无进展存活在图8中示出。中值PFS是在8mg/kg下3.4个月并且在10mg/kg下3.8个月。然而,研究仍在进行中,并且无进展存活数目中值可能有所改善。
转移性SCLC
在转移性SCLC患者中获得了可比较的结果。对于用8或10mg/kg IMMU-132治疗的转移性SCLC患者,根据RECIST 1.1的最佳应答显示25名可评估患者中有6例PR和8例SD(未示出)。进展时间显示中值为4.9个月,范围为1.8至15.7+个月,并且7名患者仍在接受IMMU-132治疗(未示出)。无进展存活期显示中值PFS在8mg/kg下为2.0个月并且在10mg/kg下为3.6个月(未示出)。中值OS是8mg/kg下8.1个月,并且对于10mg/kg尚无法确定。
总之,持续I/II期临床试验显示,当以所述ADC剂量施用时,IMMU-132在至少TNBC、NSCLC、SCLC和尿路上皮癌中具有优异的功效。在这些重度预治疗和抗性转移性癌症中发生了优异的治疗作用,而没有诱导可能阻止临床使用的严重毒性。IMMU-132在重度预治疗的患有各种实体癌并且中值为2-5种先前治疗的患者中显示出可接受的安全性概况。对于3级或更高级别的不良反应,只有嗜中性粒细胞减少症显示大于20%的患者群体的发病率。所述研究进一步证明,重复剂量的IMMU-132可以治疗剂量施用至人患者,而不会引起干扰宿主抗IMMU-132抗体。这些结果证明了IMMU-132用于治疗人患者的各种Trop-2阳性癌症的安全性和效用。
实施例6.使用ADC IMMU-132和微管抑制剂或PARP抑制剂的组合疗法
合成致死性是一种概念,其中含有两种可能的基因或蛋白质缺陷中的一种的细胞是存活的,而含有两种缺陷的细胞是不可存活的。BRCA1/2突变与DNA修复的缺陷有关,并且与TNBC相关。其他修复机制涉及聚(腺苷二磷酸核糖)聚合酶(PARP),其可被癌细胞用于克服BRACA1/2的损失。用IMMU-132或紫杉醇处理TNBC细胞导致PARP的裂解和失活,而小分子奥拉帕尼直接抑制PARP。因此,在TNBC异种移植物中研究了将IMMU-132与紫杉醇或奥拉帕尼组合以有效敲除PARP活性的基本原理,以确定这些组合是否将导致合成致死率。
此研究的目的是确定在癌症(例如,携带TNBC异种移植物的裸鼠)中将诱导DNA链断裂的抗体-药物缀合物(如沙西妥珠单抗戈维替康(也称为IMMU-132,抗Trop-2hRS7-CL2A-SN-38))与微管抑制剂(例如,紫杉醇或甲磺酸艾日布林)或聚(腺苷二磷酸核糖)聚合酶(PARP)抑制剂(例如,奥拉帕尼)组合是否改善抗肿瘤作用。普通技术人员将认识到抗体-SN-38缀合物与PARP或微管抑制剂的组合的出人意料的优异作用不限于特定的示例性抗体、药物、PARP抑制剂或微管抑制剂,而是针对抗肿瘤相关抗原(TAAs)的抗体类别、诱导DNA链断裂的药物、PARP抑制剂和微管抑制剂的特征。
实验程序
在非限制性实例中,将携带人TNBC(三阴性乳腺癌)异种移植物(MDA-MB-468或HCC1806;约0.3cm3)的小鼠在第1、8、22和29天用最大耐受剂量的紫杉醇(15mg/kg每周x 5周)和10mg/kg或12.5mg/kg的IMMU-132处理。将携带HCC1806肿瘤(约0.28cm3)的小鼠在21天的周期每周用IMMU-132(12.5mg/kg)和0.5mg/kg甲磺酸艾日布林(相当于1.4mg/m2的人剂量)持续两周处理2个周期。检查PARP抑制的研究使用用奥拉帕尼(50mg/kg,qdx5d,x 4周;等于每天800mg的人剂量的33%)和IMMU-132(10mg/kg,每周两次x 4周)处理的携带MDA-MB-468肿瘤(约0.32cm3)的小鼠。奥拉帕尼作为腹膜内注射每天施用持续5天,休息两天,然后重复(qdx5)。这进行四周。每周两次腹膜内施用IMMU-132持续四周。对照动物单独或与奥拉帕尼组合接受非肿瘤靶向抗CD20ADC hA20-CL2A-SN-38。主要终点是中值存活时间(MST),其被定义为肿瘤进展至1.0cm3的时间。
在替代实施方案中,可通过体外测定确定用于协同作用的测定。集落形成测定可用于确定细胞的存活分数(Ibrahim等人,2012,Cancer Discovery 2:1036-47)。简言之,将350-800个细胞一式两份接种在6孔平底细胞培养板中。在接种后24小时,洗涤细胞并在存在或不存在增加剂量的单独和组合的ADC和/或PARP或微管抑制剂(例如奥拉帕尼)的情况下添加新鲜培养基。含有药物和/或的培养基在第4天更新。将集落固定并在用1.5ml 6.0%戊二醛和0.5%结晶紫处理7天后染色,并通过标准程序计数集落。细胞的存活分数(SF)计算如下:
其中
使用Chou和Talalay(1984,Adv Enzyme Regul 22:27-55)的多药物作用分析方法评估ADC与PARP或微管抑制剂之间的相互作用。这种方法定量地描述了两种或更多种药物之间的相互作用,其中小于1的值表示协同相互作用,大于1的值表示拮抗相互作用,并且等于1的值表示相加的相互作用。
结果
给与IMMU-132和紫杉醇的组合的具有MDA-MB-468肿瘤的小鼠表现出优异的抗肿瘤作用(未示出),肿瘤缩小>11倍,相比之下单独IMMU-132组缩小1.4倍(P=0.0003;曲线下面积,AUC)或单独用紫杉醇处理的小鼠的肿瘤大小增加11.4倍(P<0.0001;AUC)。
在MDA-MB-468中,200μg IMMU-132加紫杉醇的组合当与所有其他组相比时就曲线下面积(AUC)而言具有优异的抗肿瘤作用(表6,P<0.0013)。将与紫杉醇一起施用的IMMU-132的量降低至100μg与用单独紫杉醇、单独IMMU-132(100μg)处理的小鼠或未处理的动物相比同样产生显著抗肿瘤作用(表7,P<0.0328)。紫杉醇或未处理的对照组不能进行生长曲线之间的进一步比较,因为到治疗第49天各自由于疾病进展而开始失去小鼠(即TV>1.0cm3)。
在快速进展的HCC1806异种移植物中(图9A-9B),当与IMMU-132单一疗法相比时,IMMU-132加紫杉醇的组合证明具有优异的抗肿瘤作用(P=0.0195,AUC17天)。这是非常具有侵袭性的肿瘤,对于未处理的对照动物(肿瘤细胞接种后18天),治疗开始后仅10天的中值存活时间(MST)。就存活而言,当与所有其他疗法相比时,达到期38天的MST的组合提供了显著存活益处(P<0.017;对数秩)。应注意,这是在仅0.25mg的低剂量下实现的,所述剂量将是仅1mg/kg的人等效剂量。
用IMMU-132加甲磺酸艾日布林(未示出)的组合处理的小鼠表现出比所有其他单一疗法组显著更高的抗肿瘤应答(P<0.0432;配对t检验)。当与艾日布林或IMMU-132单一疗法(MST分别=18天和14天;P<0.0044;对数秩)相比时,这产生组合(MST=23天)的显著存活益处。
同样,将IMMU-132疗法与奥拉帕尼组合在携带MDA-MB-468肿瘤的小鼠中优于单一剂治疗(P<0.0032;AUC)。结果总结于表8中。所有IMMU-132组合治疗都良好耐受。
药物-抗体比率(DAR)测定。通过疏水相互作用HPLC(HIC-HPLC)评价了五个临床批次的IMMU-132,其解析代表DAR为6、7和8的物种的三个峰,其中最大部分包含DAR=8(未示出)。IMMU-132通过这种制造工艺一致地生产,在五个临床批次中具有7.60±0.03的总DAR(DARAVE)。通过液相色谱-质谱(LC-MS)确认HIC-HPLC结果。分析显示8个可用的巯基中>99%与CL2A接头偶联,有或没有SN-38(未示出)。未检测到未取代的(或N-乙基马来酰亚胺封端的)重链或轻链。因此,物种之间DAR的差异是由于制造过程中SN-38从接头释放而不是由于较低的初始取代比。一旦制备并冻干,IMMU-132一直稳定持续数年。
DAR对小鼠体内药代动力学和抗肿瘤作用的影响。携带Trop-2+人胃癌异种移植物(NCI-N87)的小鼠间隔7天给与2次治疗,每次用等量蛋白质(0.5mg)剂量的DAR为6.89、3.28或1.64的IMMU-132。与给与3.38或1.64DAR的ADC的小鼠相比,用DAR为6.89的ADC处理的动物具有显著改善的中值存活时间(MST)(MST=39天对比分别25和21天;P<0.0014)(未示出)。用3.28或1.64DAR缀合物处理的组与盐水对照组之间没有差异。
为了进一步阐明更高DAR的重要性,向携带NCI-N87胃肿瘤的小鼠施用0.5mg DAR为6.89的IMMU-132,每周两次,持续两周(未示出)。另一组接受两倍蛋白质(1mg)剂量的DAR为3.28的IMMU-132缀合物。虽然在各自给药方案下两组均接受相同的SN-38总量(36μg),但用6.89DAR缀合物处理的那些比用3.28DAR缀合物处理的携带肿瘤的动物显著更多地抑制肿瘤生长(P=0.0227;AUC)(未示出)。另外,用较低DAR处理与未处理的对照没有显著差异。总的来说,这些研究表明较低的DAR降低功效。
在给与0.2mg的每种缀合物、未缀合的hRS7IgG或还原且然后用N-乙基马来酰亚胺封端的hRS7IgG的非肿瘤携带小鼠中进行以这些不同比例制备的缀合物的药代动力学行为的检查。从0.5至168小时以5个间隔取得血清,并通过ELISA测定hRS7IgG。与未缀合的IgG(未示出)相比,这些缀合物的清除率没有显著差异。因此,取代水平不影响缀合物的药代动力学,并且同样重要的是,链间二硫键的减少似乎不会使抗体不稳定。
IMMU-132在TNBC中的作用机制。在TNBC细胞系MDA-MB-468和HER2+SK-BR-3细胞系中检查IMMU-132所用的凋亡途径,以便确认ADC基于其并入的SN-38起作用。将细胞暴露于1μM SN-38(IMMU-132的SN-38等效物,或hRS7的蛋白质等效物)。收获细胞并进行蛋白质印迹。单独SN-38和IMMU-132在MDA-MB-468中在24小时内介导p21WAF1/Cip1的>2倍上调,并且到第48小时,这些细胞中p21WAF1/Cip1的量开始减少(在SN-38或IMMU-132情况下分别为31%和43%)(未示出)。令人感兴趣的是,在HER2+SK-BR-3肿瘤系中,SN-38和IMMU-132均不介导p21WAF1/Cip1上调高于最初24小时内的组成性水平,但如在48小时暴露于SN-38或IMMU-132后在MDA-MB-468细胞中观察到,p21WAF1/Cip1的量减少>57%(未示出)。SN-38和IMMU-132两者均在24小时内导致半胱天冬酶原-3裂解成其活性片段,但在暴露48小时后观察到更大程度的活性片段。值得注意的是,在两种细胞系中,当与暴露于SN-38的细胞相比时,IMMU-132介导更大程度的半胱天冬酶原-3裂解,在48小时后观察到最高水平(未示出)。最后,SN-38和IMMU-132两者均在24小时开始介导聚ADP核糖聚合酶(PARP)裂解,在48小时后几乎完全裂解(未示出)。总之,这些结果证实IMMU-132在体外施用时具有与游离SN-38类似的作用机制。
在人肿瘤异种移植物模型中通过IMMU-132对伊立替康递送SN-38。源自伊立替康或IMMU-132的组成型产物在施用伊立替康(773μg;SN-38当量=448μg)和IMMU-132(1.0mg;SN-38当量=16μg)的皮下植入人胰腺癌异种移植物(Capan-1)的小鼠的血清和肿瘤中测定。在施用后,以5个间隔对来自每组的3只动物实施安乐死,提取血清以获得目标产物。
伊立替康从血清中非常迅速地清除,在5分钟内转化为SN-38和SN-38G(未示出)。在第24小时未检测到任何产物。对于伊立替康、SN-38和SN-38G,在6小时内AUC分别为21.0、2.5和2.8μg/mL·h(小鼠中SN-38转化=[2.5+2.8)/21=25.2%])。给与IMMU-132的动物在血清中具有低得多的游离SN-38浓度,但是它在48小时内检测到(未示出)。仅在第1小时和第6小时检测到游离SN-38G,并且比游离SN-38低3至7倍(未示出)。
在从伊立替康处理的动物切除的Capan-1肿瘤中,伊立替康水平在6小时内高,但在第24小时不可检测(AUC5min-6h=48.4μg/g·h)。SN-38低得多并且仅在2小时内检测到(即,AUC5min-2h=0.4μg/g·h),SN-38G值几乎高3倍(AUC=1.1μg/g·h)(未示出)。从给与IMMU-132的动物取得的肿瘤没有任何可检测的游离SN-38或SN-38G,而是肿瘤中的所有SN-38都与IMMU-132结合。重要的是,由于在肿瘤中未检测到SN-38G,这表明与IMMU-132结合的SN-38未葡糖醛酸化。在这些肿瘤中与IMMU-132结合的SN-38的AUC是54.3μg/g·h,其比可检测到SN-38的在2小时时期内用伊立替康处理的动物的肿瘤中SN-38的量高135倍,即使给与伊立替康的小鼠比施用IMMU-132接受多28倍的SN-38当量(即,分别448对16μg SN-38当量)
结论
IMMU-132是与7.6个SN-38分子缀合的人源化抗Trop-2抗体,SN-38是伊立替康(一种拓扑异构酶I抑制剂)的活性代谢物。临床上,IMMU-132在患有复发/难治性TNBC患者中表现出可控的毒性和令人鼓舞的应答(ClinicalTrials.gov,NCT01631552)。单独IMMU-132疗法在比临床使用的剂量(即10mg/kg)低5倍的人等效剂量下在人TNBC异种移植物中表现出显著抗肿瘤作用。由于临床前研究表明IMMU-132可与两种不同的微管抑制剂或PARP抑制剂组合,具有显著增强的抗肿瘤活性,所以这些数据支持IMMU-132和其他导致DNA断裂的抗体-药物缀合物(ADC)通常与微管抑制剂和/或PARP抑制剂组合以及通过微管抑制或DNA修复机制靶向细胞分裂的其他化学治疗剂组合使用。在Trop-2阳性癌症(包括但不限于TNBC、转移性结肠癌、SCLC、NSCLC和尿路上皮癌)患者中,优选的ADC类别由抗Trop-2抗体缀合物代表,因为这是在大量癌症中大量表达的靶标,并且位于细胞表面和癌细胞中的细胞质中。
当在具有BRCA1/2缺陷以及野生型表达(包括仅具有PTEN缺陷的一种)的TNBC肿瘤细胞系中将IMMU-132与PARP抑制剂(例如奥拉帕尼)组合时实现了协同作用。这表明IMMU-132可与在DNA同源重组途径中具有任何类型的破坏的任何肿瘤协同作用。与奥拉帕尼组合,IMMU-132疗法实现了显著抗肿瘤作用,高于使用每种的单一疗法所观察到的作用,从而产生显著存活益处。与使用每种剂的单一疗法相比,与微管抑制剂(例如,紫杉醇或甲磺酸艾日布林)组合的IMMU-132也显著增强了功效。
总体而言,这些数据证明与靶向癌细胞并诱导DNA链断裂的抗体-药物缀合物(ADC)如IMMU-132和微管抑制剂或PARP抑制剂的组合疗法的出人意料的显著优点。通过将IMMU-132疗法与紫杉醇或奥拉帕尼组合靶向BRCA1/2突变型TNBC肿瘤中的PARP DNA修复途径在这种疾病模型中实现了合成致死率,没有可观察到的毒性。在示例性实施方案中,IMMU-132和PARP或微管抑制剂的组合用于治疗Trop-2阳性癌症,如尿路上皮癌。这些数据提供了IMMU-132与其他化学治疗剂组合使用的基本原理,所述化学治疗剂同样靶向患有尿路上皮或类似肿瘤的患者的DNA修复机制。
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根据以上描述,本领域的技术人员可容易地确定本发明的基本特征,并且在不悖离本发明的精神和范围的情况下,无需进行过度实验即可对本发明进行各种改变和修改以使其适于各种用法和条件。本文引用的所有专利、专利申请和公布以引用的方式并入本文。
Claims (30)
1.一种治疗尿路上皮癌的方法,所述方法包括向患有尿路上皮癌的人患者施用抗体-药物缀合物(ADC),所述抗体-药物缀合物包含与抗Trop-2 hRS7抗体或其抗原结合片段缀合的SN-38,其中所述ADC以介于3 mg/kg与18 mg/kg之间的剂量施用。
2.如权利要求1所述的方法,其中所述患者在用所述ADC治疗之前未能对至少一种其他疗法有反应。
3.如权利要求1所述的方法,其中所述剂量选自由以下组成的组:3 mg/kg、4 mg/kg、6mg/kg、8 mg/kg、9 mg/kg、10 mg/kg、12 mg/kg、16 mg/kg和18 mg/kg。
4.如权利要求1所述的方法,其中所述剂量介于4与16 mg/kg之间。
5.如权利要求1所述的方法,其中所述剂量介于6与12 mg/kg之间。
6.如权利要求1所述的方法,其中所述治疗使得肿瘤大小减小至少15%、至少20%、至少30%或至少40%。
7.如权利要求1所述的方法,其中所述癌症是转移性的。
8.如权利要求7所述的方法,其还包括减小大小或消除转移。
9.如权利要求1所述的方法,其中所述癌症是其他疗法难治的,但对所述ADC有反应。
10.如权利要求1所述的方法,其中所述患者在用所述ADC治疗之前未能对使用喜树碱的疗法有反应。
11.如权利要求10所述的方法,其中所述喜树碱选自由以下组成的组:伊立替康、托泊替康和SN-38。
12.如权利要求1所述的方法,其中在所述SN-38与所述抗体之间存在接头。
13.如权利要求12所述的方法,其中所述接头是CL2A,并且所述ADC的结构是MAb-CL2A-SN-38
MAb-CL2A-SN-38。
14.如权利要求13所述的方法,其中MAb-CL2A-SN-38中SN-38的10-羟基位置是使用‘COR’部分的10-O-酯或10-O-碳酸酯衍生物,其中“CO”是羰基,并且“R”基团选自(i) N,N-二取代的氨基烷基“N(CH3)2-(CH2)n-”,其中n是1-10,并且其中末端氨基任选地呈季盐形式;(ii)烷基残基“CH3-(CH2)n-”,其中n是0-10;(iii)烷氧基部分“CH3-(CH2)n-O-”,其中n是0-10;(iv)“N(CH3)2-(CH2)n-O-”,其中n是2-10;或(v)“R1O-(CH2-CH2-O)n-CH2-CH2-O-”,其中R1是乙基或甲基,并且n是具有0-10的值的整数。
15.如权利要求1所述的方法,其中存在连接至每个抗体分子的至少6个SN-38分子。
16.如权利要求1所述的方法,其中存在连接至每个抗体分子的6至8个SN-38分子。
17.如权利要求1所述的方法,其中所述抗体是IgG1或IgG4抗体。
18.如权利要求1所述的方法,其中所述抗体具有选自由以下组成的组的同种异型:G1m3、G1m3,1、G1m3,2、G1m3,1,2、nG1m1、nG1m1,2以及Km3同种异型。
19.如权利要求1所述的方法,其中所述ADC剂量以具有选自由以下组成的组的周期的时间表每周一次或两次施用至所述人患者:(i)每周;(ii)每隔一周;(iii)治疗一周,随后停药两周、三周或四周;(iv)治疗两周,随后停药一周、两周、三周或四周;(v)治疗三周,然后停药一周、两周、三周、四周或五周;(vi)治疗四周,随后停药一周、两周、三周、四周或五周;(vii)治疗五周,随后停药一周、两周、三周、四周或五周;以及(viii)每月。
20.如权利要求19所述的方法,其中所述周期重复4次、6次、8次、10次、12次、16次或20次。
21.如权利要求1所述的方法,其中所述ADC与选自由以下组成的组的一种或多种治疗剂组合施用:抗体、抗原结合抗体片段、药物、毒素、酶、激素、免疫调节剂、反义寡核苷酸、光敏剂、放射性同位素、PARP抑制剂、微管抑制剂、布鲁顿激酶抑制剂以及PI3K抑制剂。
22.如权利要求21所述的方法,其中所述药物或毒素选自由以下组成的组:5-氟尿嘧啶、阿法替尼、阿普立定、阿扎立平、阿那曲唑、蒽环类药物、阿西替尼、AVL-101、AVL-291、苯达莫司汀、博来霉素、硼替佐米、博舒替尼、苔藓抑素-1、白消安、刺孢霉素、喜树碱、卡铂、10-羟基喜树碱、卡莫司汀、塞来昔布、苯丁酸氮芥、顺铂(CDDP)、Cox-2抑制剂、伊立替康(CPT-11)、SN-38、卡铂、克拉屈滨、喜树碱、环磷酰胺、克唑替尼、阿糖胞苷、达卡巴嗪、达沙替尼、地尼西宝、多西他赛、更生霉素、柔红霉素、阿霉素、2-吡咯啉并阿霉素(2P-DOX)、氰基-吗啉代阿霉素、阿霉素葡糖苷酸、表柔比星葡糖苷酸、埃罗替尼、雌莫司汀、表鬼臼毒素、埃罗替尼、恩替诺特、雌激素受体结合剂、依托泊苷(VP16)、依托泊苷葡糖苷酸、磷酸依托泊苷、依西美坦、芬戈莫德、夫拉平度、氟尿苷(FUdR)、3',5'-O-二油酰基-FudR (FUdR-dO)、氟达拉滨、氟他胺、法尼基-蛋白转移酶抑制剂、福他替尼、吉尼替彼、GDC-0834、GS-1101、吉非替尼、吉西他滨、羟基脲、依鲁替尼、伊达比星、艾代拉里斯、异环磷酰胺、伊马替尼、L-天冬酰胺酶、拉帕替尼、来那度胺、亚叶酸、LFM-A13、洛莫司汀、氮芥、美法仑、巯基嘌呤、6-巯基嘌呤、甲氨蝶呤、米托蒽醌、光辉霉素、丝裂霉素、米托坦、诺维本、来那替尼、尼洛替尼、亚硝基脲、奥拉帕尼、普卡霉素、丙卡巴肼、紫杉醇、PCI-32765、喷司他丁、PSI-341、雷洛昔芬、司莫司汀、索拉非尼、链脲霉素、SU11248、舒尼替尼、它莫西芬、替莫唑胺、反铂、沙利度胺、硫鸟嘌呤、塞替派、替尼泊苷、托泊替康、乌拉莫司汀、瓦他拉尼、长春瑞滨、长春碱、长春新碱、长春花生物碱以及ZD1839。
23.如权利要求21所述的方法,其中所述PARP抑制剂选自由以下组成的组:奥拉帕尼、他拉唑帕尼(BMN-673)、鲁卡帕尼、维利帕尼、CEP 9722、MK 4827、BGB-290、ABT-888、AG014699、BSI-201、CEP-8983以及3-氨基苯甲酰胺。
24.如权利要求21所述的方法,其中所述PARP抑制剂是奥拉帕尼。
25.如权利要求21所述的方法,其中所述微管抑制剂选自由以下组成的组:长春花生物碱、紫杉烷、美登木素生物碱、奥瑞斯他汀、长春新碱、长春碱、紫杉醇、美登素、秋水仙胺、诺考达唑、埃博霉素、多西他赛、圆皮海绵内酯、秋水仙碱、康普瑞汀、鬼臼毒素、CI-980、苯基阿夕斯丁、五加前胡素、卡拉新、2-甲氧基雌二醇、E7010、甲氧基苯磺酰胺、长春瑞滨、长春氟宁、长春地辛、尾海兔素、海绵抑制素、根霉素、泰斯多汀、软海绵素、哈米特林、念珠藻素52、MMAE以及甲磺酸艾日布林。
26.如权利要求21所述的方法,其中所述微管抑制剂是紫杉醇或甲磺酸艾日布林。
27.如权利要求21所述的方法,其中所述布鲁顿激酶抑制剂是选自由以下组成的组:依鲁替尼(PCI-32765)、PCI-45292、CC-292 (AVL-292)、ONO-4059、GDC-0834、LFM-A13以及RN486。
28.如权利要求21所述的方法,其中所述布鲁顿激酶抑制剂是依鲁替尼。
29.如权利要求21所述的方法,其中所述PI3K抑制剂是选自由以下组成的组:艾代拉里斯、渥曼青霉素、去甲氧基绿胶霉素、哌立福辛、PX-866、IPI-145 (度维利塞)、BAY 80-6946、BEZ235、RP6530、TGR1202、SF1126、INK1117、GDC-0941、BKM120、XL147、XL765、Palomid529、GSK1059615、ZSTK474、PWT33597、IC87114、TG100-115、CAL263、PI-103、GNE477、CUDC-907、AEZS-136以及LY294002。
30.如权利要求21所述的方法,其中所述PI3K抑制剂是艾代拉里斯。
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