CN110221050A - 圈养林麝肠道健康状况的非损伤诊断及评价方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了圈养林麝肠道健康状况的非损伤诊断及评价方法。本发明提供了用于检测林麝粪便外观、便隐血、粪便中免疫球蛋白A含量、粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白含量的物质在制备用于评估林麝肠道健康状况和/或肠道疾病类型的产品中的应用。本发明分别对粪便健康和粪便异常的林麝林麝的粪便外观、便隐血及免疫球蛋白(如IgA、乳铁蛋白和钙卫蛋白)含量进行了测定，探索得到圈养林麝粪便便隐血和免疫球蛋白等生理指标的参考常值，为圈养林麝肠道健康状况及肠道炎症性疾病临床诊断等提供一定依据。

Description

圈养林麝肠道健康状况的非损伤诊断及评价方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域中圈养林麝肠道健康状况的非损伤诊断及评价方法。
背景技术
林麝(Moschus berezovskii)饲养繁育是缓解野生麝资源压力，保障麝香资源可持续利用的重要途径，也是实施重引入重建野生种群的种源基础(Sheng&Liu,2007；He etal.,2014；Yang et al.,2003；Wang et al.,2016)。我国林麝的人工养殖始于1958年，经多年探索已在很多方面取得显著进展(Xue et al.,2008；Liu et al.,2010)。然而，其饲养种群长期受到健康状况不稳定和疾病高发的困扰，严重制约着种群的发展(Xu et al.,2003；He et al.,2014；Wei et al.,2016)。林麝的驯化期尚短，且其生性机警胆怯，应激反应强(Meng et al.，2006；Sheng&Liu,2007)，由野生变为人工驯养后，生态环境和饲养管理均发生变化，对其生理机能及代谢状况均会产生一定的影响。加之其不易近人的天性，患病后常不易被发现(Meng et al.,2006；Jiang et al.,2007)。消化道疾病(肠胃炎、腹泻等)是造成饲养林麝死亡的主要疾病之一(罗茜，2014；何迟酩等，2011)，属当前亟待防控的林麝疾病种类。早期诊断是疾病有效防治的前提，目前对林麝肠道疾病的研究刚刚开始，早期诊断的技术方法还不够全面完善。因此，探索林麝肠道健康状况监测的诊断标准，寻求疾病早期诊断的途径与方法，无疑对林麝的肠道疾病临床诊断和提升林麝养殖业的科学管护水平具有重要意义。
SIgA是机体黏膜防御感染的重要因素，王毅花(2011)对母、幼林麝在哺乳期的免疫球蛋白水平和应激水平进行了研究，分析了幼麝免疫系统建立以及其生存过程中的脆弱期。安天怡(2016)通过测定哺乳期母梅花鹿和幼鹿粪便中IgA、IgM、IgG的含量来对处于哺乳期的饲养母鹿及其幼崽的免疫健康状况进行评估,以探讨母幼之间免疫球蛋白的关系。Tress et al.(2006)建立了从犬粪便中提取免疫球蛋白A及测定粪便IgA浓度的ELISA方法，确定了犬粪便IgA浓度的参考范围。Sang et al.(2016)的研究发现猪粪便IgA的ELISA检测法可将野猪粪便与其他野生动物粪便有效地区分开来。粪便IgA水平能够有效的反映动物机体的免疫能力的状态，因此粪便免疫球蛋白可以用于检验野生动物身体健康状况，尤其是肠道的免疫能力，为野生动物管护人员对动物进行补饲以及动物疾病的防控提供管理依据。
乳铁蛋白是中性粒细胞的主要成分(Roseth AG et al.,1997)，是近年来新发现的急性炎症标志物，且理化性质稳定，在炎症性疾病时，特异性地在中性粒细胞和巨噬细胞中表达(刘文斌等，2005)，根据这一原理，测定粪便中乳铁蛋白的含量可以间接反映组织的炎症程度。粪便乳铁蛋白在炎症性肠病中的作用引起广泛重视，大量研究证实粪便乳铁蛋白是判断炎症性肠病炎症活动程度的可靠指标(Hardt PD et al.,2000，Kane SV et al.,2003；Langhorst J.et al.,2008；Walker T.R.et al.,2007；Pfefferkorn M.D.et al.,2010；Buderus S.et al.,2004)。
钙卫蛋白是一种急性炎症的标志物，也用于评价肠道的炎症情况(Manz M etal.,2012)。有研究表明在急性炎症反应期，钙卫蛋白表达量上升(Schlepfer AM et al.,2010)，且它是一种杂合性的钙结合蛋白，因其具备抗蛋白酶的活性，可以在肠腔和外界环境中长期保持稳定而不被各种酶和细菌破坏，在粪便中极其稳定，优于其他粪标志物，因此，粪钙卫蛋白可能成为肠道炎症的监测指标(Montalto M et al.,2007)。
便隐血(feces occult blood，亦称便潜血)是指消化道少量出血，红细胞被消化破坏，夹裹在粪便中，肉眼和显微镜下均不能证实的出血。肠道出血是一种常见的肠道疾病，诱因有很多，比如消化性肠道溃疡、肠寄生虫(如钩虫、阿米巴)、肠道炎症性病变(如慢性溃疡结肠炎等)。临床上出现隐血非常重要，因为它可提示肠道的健康状况(蔡宏等，2005；Parente F et al.,2009；Mandel JS et al.,1993)。
发明内容
本发明的目的是提供一种圈养林麝肠道健康状况的非损伤诊断及评价方法。
第一方面，本发明要求保护一种用于检测林麝粪便外观、便隐血、粪便中免疫球蛋白A含量、粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白含量的物质在制备用于评估林麝肠道健康状况和/或肠道疾病类型的产品中的应用。
第二方面，本发明要求保护一种用于检测林麝粪便外观、便隐血和粪便中免疫球蛋白A含量的物质在制备用于评估林麝肠道健康状况和/或肠道疾病类型的产品中的应用。
利用粪便外观、便隐血和粪便中免疫球蛋白A含量三项指标可以初步评估林麝肠道健康状况和/或肠道疾病类型。利用粪便外观、便隐血、粪便中免疫球蛋白A含量、粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白含量五项指标可以最终评估林麝肠道健康状况和/或肠道疾病类型。
进一步地，第一方面所述应用为：用于检测林麝粪便外观、便隐血和粪便中免疫球蛋白A含量的物质和记载有如下(A1)的可读性载体在制备用于评估林麝肠道健康状况和/或肠道疾病类型的产品中的应用：
(A1)利用粪便外观、便隐血和粪便中免疫球蛋白A含量三项指标评估林麝肠道健康状况和/或肠道疾病类型。
进一步地，第二方面所述应用为：用于检测林麝粪便外观、便隐血、粪便中免疫球蛋白A含量、粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白含量的物质和记载有如下(A2)的可读性载体在制备用于评估林麝肠道健康状况和/或肠道疾病类型的产品中的应用：
(A2)利用粪便外观、便隐血、粪便中免疫球蛋白A含量、粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白含量五项指标评估林麝肠道健康状况和/或肠道疾病类型。
更进一步地，所述粪便外观的生理常值为“正常”；所述便隐血的生理常值为“阴性”；所述粪便中免疫球蛋白A含量的生理常值为4251～5583μg/g；所述粪便中钙卫蛋白含量的生理常值为8223～10478μg/g；所述粪便中乳铁蛋白含量的生理常值为5000～7511μg/g。上述各含量为每g干粪便中的含量。相应的，各指标不落入生理常值则判定该指标异常。
在本发明中，当所述粪便外观满足如下条件时，视为粪便外观“正常”：粪便外观赋值为100分。相应的，粪便外观赋值低于100分视为粪便外观“异常”。
其中，粪便外观赋值得分＝(形状赋值+颜色赋值+气味赋值)/3。赋值标准为本领域公知。具体可参照猪、奶牛等物种的研究方法执行(易贤明,雷宣会,廖新俤,等.饲喂杂交狼尾草对妊娠母猪粪便形态特性与成分的影响[J].养猪,2009,(3):15-16；毛春瑕,石显亮,何余湧,等.补饲发酵芦笋下脚料对母猪粪便形态和乳汁质量的影响[J].动物营养学报,2016,28(6),1867-1876.；胡红莲,于朝晖,孙海洲,等.奶牛粪便检测试验[J].畜牧与饲料科学,2006,27(3):1-2.)。其中，形状按成形程度和粘连状态划分等级，颜色按深浅和区别划分等级，气味按异常程度划分等级(孙晓宁.圈养林麝消化道健康状况的非损伤诊断及评价[D].北京林业大学，2018.)。更加具体的，如表1所示。
更进一步地，在(A1)中，具体可按照如下利用粪便外观、便隐血和粪便中免疫球蛋白A含量A三项指标初步评估林麝肠道健康状况和/或肠道疾病类型：
(a1)若待测林麝的粪便外观、便隐血和粪便中免疫球蛋白A含量三项指标均为生理常值，则所述待测林麝肠道功能正常；
(a2)若待测林麝的粪便外观正常，便隐血阴性，粪便中免疫球蛋白A含量高于生理常值，则所述待测林麝为生理性免疫球蛋白A升高或者患有非损伤性肠道炎症疾病；
(a3)若待测林麝的粪便外观正常，便隐血阳性，粪便中免疫球蛋白A含量高于生理常值，则所述待测林麝患有损伤溃疡性肠道疾病；
(a4)若待测林麝的粪便外观异常，便隐血阴性，粪便中免疫球蛋白A含量高于生理常值，则所述待测林麝患有肠易综合症(IBS)；
(a5)若待测林麝的粪便外观异常，便隐血阳性，粪便中免疫球蛋白A含量高于生理常值，则所述待测林麝患有炎症性肠炎(IBD)、痢疾或者肠道内有寄生虫。
更进一步地，在(A2)中，具体可按照如下利用粪便外观、便隐血、粪便中免疫球蛋白A含量、粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白含量五项指标终极评估林麝肠道健康状况和/或肠道疾病类型：
(b1)若待测林麝的粪便外观、便隐血、粪便中免疫球蛋白A含量、粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白含量五项指标均为生理常值，则所述待测林麝肠道功能正常；
(b2)若待测林麝的粪便外观正常，便隐血阴性，粪便中免疫球蛋白A含量高于生理常值，粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白两项指标中至少一项高于生理常值，则所述待测林麝患有非损伤性肠道炎症疾病；
(b3)若待测林麝的粪便外观正常，便隐血阳性，粪便中免疫球蛋白A含量高于生理常值，粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白两项指标中至少一项高于生理常值，则所述待测林麝患有损伤溃疡性肠道疾病；
(b4)若待测林麝的粪便外观正常，便隐血阴性，粪便中免疫球蛋白A含量高于生理常值，粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白两项指标均为生理常值，则所述待测林麝为生理性免疫球蛋白A升高；
(b5)若待测林麝的粪便外观正常，便隐血阳性，粪便中免疫球蛋白A含量高于生理常值，粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白两项指标均为生理常值，则所述待测林麝患有损伤性非炎症性肠道疾病(如肠道内有寄生虫)；
(b6)若待测林麝的粪便外观异常，便隐血阴性，粪便中免疫球蛋白A含量高于生理常值，粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白两项指标中至少一项高于生理常值，则所述待测林麝患有炎症性非损伤肠道疾病(如肠道菌群紊乱)；
(b7)若待测林麝的粪便外观异常，便隐血阳性，粪便中免疫球蛋白A含量高于生理常值，粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白两项指标中至少一项高于生理常值，则所述待测林麝患有炎症性肠道疾病(IBD)；
(b8)若待测林麝的粪便外观异常，便隐血阴性，粪便中免疫球蛋白A含量高于生理常值，粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白两项指标均为生理常值，则所述待测林麝患有肠易激综合征(IBS)；
(b9)若待测林麝的粪便外观异常，便隐血阳性，粪便中免疫球蛋白A含量高于生理常值，粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白两项指标均为生理常值，则所述待测林麝患有肠易激综合征(IBS)或者肠道内有寄生虫。
第三方面，本发明要求保护一种用于评估林麝肠道健康状况和/或肠道疾病类型的产品。
本发明所提供的用于评估林麝肠道健康状况和/或肠道疾病类型的产品，可含如下(A)或(B)：
(A)用于检测林麝粪便外观、便隐血和粪便中免疫球蛋白A含量的物质，以及前文所述的记载有(A1)的可读性载体；
(B)用于检测林麝粪便外观、便隐血、粪便中免疫球蛋白A含量、粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白含量的物质，以及前文所述的记载有(A2)的可读性载体。
第四方面，本发明要求保护一种用于评估林麝肠道健康状况和/或肠道疾病类型的方法。
本发明所提供的用于评估林麝肠道健康状况和/或肠道疾病类型的方法，可包括前文第一方面中所述(A1)或所述(A2)所示的步骤。
所述方法既可以为非疾病诊断治疗方法，也可以为疾病诊断治疗方法。
在上述各方面中，所述林麝具体可为圈养林麝。在本发明的一个实施例中，所述林麝具体为年龄3-7岁的圈养林麝。
对于应激性高的林麝而言，粪便外观、便隐血和免疫球蛋白分泌量的检测可以在不打扰其正常生命活动的前提下辅助监测动物种群和个体的生理机能、健康状况和繁殖状态，为野生动物疾病监测、防控及管护提供参考。
本发明采用非损伤方式采集林麝粪便，通过观察粪便性状、便隐血(FOB)检查和非侵入性ELISA检测法检测林麝粪便中免疫球蛋白IgA、乳铁蛋白和钙卫蛋白含量，探究筛选出各项指标的正常值的参考范围。再通过本发明筛选出的检测指标，结合目前对林麝肠道疾病的诊断技术和方法，探讨出一套对林麝肠道健康的初步诊断方法。本发明为圈养林麝的肠道健康状况进行科学合理地评估，并为林麝的健康监测及疾病临床诊断等提供一定的科学依据。
附图说明
图1为圈养林麝正常与异常粪样的对比。
图2为圈养林麝便隐血检测阴性(—)和阳性(2+)对比：A为阴性(—)；B为阳性(2+)。
图3为粪便IgA、乳铁蛋白和钙卫蛋白数据系统聚类分析树形图以及含量测定结果。A为粪便IgA数据系统聚类分析树形图；B为粪便IgA含量测定结果；C为钙卫蛋白数据系统聚类分析树形图；D为粪便钙卫蛋白含量测定结果；E为乳铁蛋白数据系统聚类分析树形图；F为粪便乳铁蛋白含量测定结果。图中不同字母(a,b)表示差异性显著，相同字母表示差异性未达到显著水平。
图4为林麝消化道健康状况评价体系流程图。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、圈养林麝肠道健康状况的非损伤诊断及评价方法的建立
一、材料与方法
1、试验动物的选择及粪样的采集
2016年7-8月间，于陕西凤县片仔癀养麝场和达吉康养麝场选取年龄3-7岁的共79头，其中。每天早上6—8点间采集试验个体粪便，取新鲜粪样10g左右放入自封袋内，标记样本编号、采集日期，排尽袋内空气后封口，然后立即放入-20℃冰箱保存备用。
2、传统方法检测林麝肠道健康状况
粪便一般性状的观测，粪样采集后在2h以内，对粪便外观(包括形状、颜色、状态)、气味和粪便内容物的观察，并详细记录每份粪样的一般性状。在观测粪便颜色时要用漆膜颜色标准样卡(GSB05-1426-2001)进行比对，进而辅助判断。观察所有粪便样品必须由同一个人完成，避免因每人色差的不同而导致实验观测结果的偏差。
将记录的每份粪样的一般性状进行赋值(易贤明,雷宣会,廖新俤,等.饲喂杂交狼尾草对妊娠母猪粪便形态特性与成分的影响[J].养猪,2009,(3):15-16；毛春瑕,石显亮,何余湧,等.补饲发酵芦笋下脚料对母猪粪便形态和乳汁质量的影响[J].动物营养学报,2016,28(6),1867-1876.；胡红莲,于朝晖,孙海洲,等.奶牛粪便检测试验[J].畜牧与饲料科学,2006,27(3):1-2.)。其中，形状按成形程度和粘连状态划分等级，颜色按深浅和区别划分等级，气味按异常程度划分等级；孙晓宁.圈养林麝消化道健康状况的非损伤诊断及评价[D].北京林业大学，2018.)。其中，形状按成形程度和粘连状态划分等级，颜色按深浅和区别划分等级，气味按异常程度划分等级。根据赋值结果计算出每份粪样的得分：
每份粪便外观赋值平均值＝(形状赋值+颜色赋值+气味赋值)/3
连续三天得分低于100分的即初步判定为患肠道疾病(或肠道功能异常)个体。
林麝粪样的性状等级划分及赋值具体见表1。
表1 林麝粪样的性状等级划分及赋值
3、便隐血的测定
(1)从采集瓶中取样，取样时直接打开匹拉米洞法试纸(贝索BASO便隐血检测试纸，BA-2020B，试纸法，(台资)珠海贝索生物技术有限公司，中国)正面的盖子，并利用取样木棒挖取不同部位的粪便检体10-50mg(相当于火柴头大小)涂抹在测试卡A窗，然后合上盖子。
(2)将测试卡背面朝上，并打开印有“Development Window”的封盖。在方格内左右两侧各滴一滴显色剂A，待试剂完全渗透之后，在各滴一滴显色剂B。
(3)当加入显色剂B后，与2min内判读完毕。
(4)结果判定：当加入显色剂B后，立即产生紫蓝色，报告为(4+)；当加入显色剂B后，10s内产生紫红色，报告为(3+)；当加入显色剂B后，1min内产生紫红色，报告为(2+)；当加入显色剂B后，1～2min内产生紫红色，报告为(1+)；当加入显色剂B后，于判读时间内无任何紫蓝或紫红的颜色反应，报告为(—)。
匹拉米洞法试纸(贝索BASO便隐血检测试纸)主要技术参数：林麝便隐血(FOB)：灵敏度≤0.05μg/g(表2)。
表2 匹拉米洞法试纸(贝索BASO便隐血检测试纸)敏感性范围
敏感性范围(单位：μg/g) 检测结果
<0.05 —
0.05～0.3 1+
0.3～4.0(不含0.3) 2+
4.0～15.0(不含4) 3+
>15.0 4+
4、粪便免疫球蛋白的提取与测定
待测免疫球蛋白为IgA、乳铁蛋白和钙卫蛋白三种。
林麝粪便蛋白类物质的提取方法参照Peters等(2004)、Carlsson等(2007)、王毅花(2011)的方法。
配制PBST缓冲溶液：称取8.50g氯化钠、0.30g磷酸氢二钠、2.20g磷酸二氢钠于1000ml容量瓶内，加1000ml微孔水溶解，在加入50ml Tween-20，上下翻转容量瓶，使溶液混匀，最后调节pH为7.20，即得所需缓冲溶液。
提取方法：将采集后冻存30天内的粪便样本取出，放置在室温(19～26℃)条件下自然解冻。解冻后取20粒左右的粪便粒放到组织研磨仪中进行研磨，研磨过程中尽可能的将粪便颗粒研磨粉末状。称取1.00g新鲜研磨的湿粪混合均匀后置于15ml塑料离心管中，加入10.0ml pH7.2的PBS缓冲液，用涡旋仪低速震荡10min使样品和缓冲液混匀，震荡后在2000rad/min低速离心机中常温离心20min。取2ml上清液于2ml塑料离心管中，10000rad/min普通高速离心机超低温冷冻离心20min。取1.5ml上清液于2ml塑料离心管中，在塑料离心管上标好样本的编号和采样日期后，放置-20℃以下保存待测。
林麝粪便免疫球蛋白IgA、钙卫蛋白和乳铁蛋白的测定，采用的酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒(Cat.CK-E925200B,96T，北京冬歌博业生物科技有限公司，中国)。试剂盒主要性能如下：(1)免疫球蛋白A(IgA)：最低检测浓度＜1.0μg/ml；钙卫蛋白：最低检测浓度＜1.0ug/ml；乳铁蛋白：最低检测浓度＜1.0μg/ml。(2)所有试剂盒批内、批间的变异系数＜7％，板内、板间变异系数均＜15％；(3)不与其它可溶性结构类似物产生交叉反应；(4)2-8℃，避光防潮保存。(5)标准品线性回归与预期浓度相关系数R值≥0.9900。
检测步骤：
(1)将标准品稀释，分别稀释成浓度为0、25、50、100、200、400μg/mL的标准品。
(2)20×洗涤缓冲液：蒸馏水按1:20进行稀释，即25mL的20×洗涤缓冲液中加入475mL的蒸馏水。
(3)将保存在2-8℃的试剂盒放置在室温中，平衡20min。若浓缩洗涤液有结晶，则水浴加热使结晶完全溶解后在使用。
(4)从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条。
(5)设置标准品孔和样本孔，标准品孔内分别加浓度为0、25、50、100、200、400μg/mL的标准品50μL。
(6)样本孔先加待测样本10μL，再加入样本稀释液40μL；空白孔内不加。
(7)除空白孔外，标准品孔和样品孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板摸封住反应孔，37℃水域温育60min。
(8)弃掉液体，用吸水纸排干；再用洗板机每孔注入洗液350μL，浸泡1min，重复洗板5次，最后一次洗板后用吸水纸排干。
(9)每孔加入底物A、B各50μL，37℃条件下，恒温避光孵育15min。
(10)每孔加入终止液50μL，在15min内，用酶标仪测定各孔的OD值，酶标仪根据吸光度自动生成提取液中样品的含量。
(11)称取5g左右采得的湿粪(M)样品置于烘箱，60℃烘干至恒重，再称量粪样干重(m)，按照公式计算每份粪样含水量：WC＝M-m。
(12)将检测的提取液中粪便蛋白的含量和粪便含水量相结合，最终得到每克干粪中蛋白的含量。
每克干粪中的含量W(μg/g)＝提取液浓度×稀释倍数/干粪重量
5、数据分析
粪便正常和异常个体含水量差异很大，每克新鲜粪便中的含量差异较大，故比较每克干粪中的含量更有意义。采用IBM SPSS Statistics 20.0对检测得到的结果数据进行统计分析，所测得的每只个体数据首先用迭代法(Mean±1.5SE)将极值去除，然后用剩余的数据计算每只个体的平均值。所有数据均通过单一样本K-S检验(one-sample Kolmogorov-Smirnov test)，检验数据是否符合正态分布。将不符合正态分布的数据进行数据处理和转换，处理转换后的仍然不符合正态分布的数据在用非参数U检验(Mann-Whitney U test)分析；符合正态分布的数据，多组间数据使用单因素方差分析(one-way ANOVA)检验，进行差异性检验和分析，两组间比较采用独立样本T检验(independent-samples T test)，两种检验的使用均进行了方差齐性检验。以上所有检验的显著水平设置为α＝0.01，蛋白含量均以“Mean±SE”形式表示。使用Pearson两两相关分析成麝粪便的各项生理指标。用Excel 2010和SigmaPlot 12.5软件对处理完的数据进行整合作图。
二、结果与分析
1、粪便性状赋值后的初步归类
统计来源于78头林麝的518份粪便样品中每份粪样在形状、颜色和气味上的得分，按等权值平均得每份粪样的得分，即每份粪便外观赋值平均值＝(形状赋值+颜色赋值+气味赋值)/3。
经观测，林麝粪样在形态、颜色和气味这三个性状上存在明显差异(图1)。
根据传统判定方法，将连续三天得分低于100分的即初步判定为患肠道疾病(或肠道功能异常)个体。在78头个体粪便的赋值得分中，筛选出连续三天或三天以上得分低于100分的林麝个体(共18头个体)，每只林麝所得有3-7份粪样，采用平均数表示为该个体的得分。连续三天粪便性状异常林麝个体及赋值见表3。
表3 连续三天粪便性状异常林麝个体及赋值
外观异常个体耳号 粪便性状赋值均值
4496 66.66666667
5749 87.5
9470 69.44444444
9485 79.16666667
10015 91.66666667
10068 91.66666667
10073 87.5
10093 91.66666667
10094 88.88888889
10095 75
10102 90
10108 91.66666667
12035 85.71428571
A2 91.66666667
A6 91.66666667
B1 83.33333333
B5 79.16666667
B6 71.66666667
2、便隐血的测定
遴选两个麝厂的雌麝、雄麝，分别测定其粪便便隐血。78头林麝的518份粪便检测结果显示大部分个体粪便未检测到便隐血，检测结果为阴性(—)；检测出便隐血的个体，检测结果大部分为阳性(1+)，仅有一个个体在第三天出现阳性(2+)的检测结果(表4；图2)。对照匹拉米洞法试纸(贝索BASO便隐血检测试纸)敏感性范围(表2)，检测为“1+”的便隐血范围在0.05～0.3μg/ml，检测为“2+”的便隐血范围在0.3～4.0μg/ml(不含0.3μg/ml)。
表4 林麝粪便隐血(FOB)检测结果
3、圈养林麝粪便IgA、乳铁蛋白和钙卫蛋白含量的检测
遴选两个麝厂的雌麝、雄麝，分别测定其粪便免疫球蛋白IgA、钙卫蛋白和乳铁蛋白的含量。
粪便免疫球蛋白IgA测定结果先用系统聚类分析后将受检个体大致分为粪便免疫球蛋白IgA含量低个体和含量高个体这两类(图3中A)。进一步通过K-Means cluster初步分析出每类的粪便免疫球蛋白IgA的参考范围。其中雌性个体粪便免疫球蛋白IgA低浓度为4769±2003.94μg/g(25头)，高浓度为7030±2111.42μg/g(4头)，雄性个体粪便免疫球蛋白IgA低浓度4979±2701.86μg/g(42头)，高浓度为7373±1935.35μg/g(7头)。但两组的粪便免疫球蛋白IgA均没有显著的性别差异(F＝0.099，P＝0.437>0.01)。因此，分别将两组雌雄个体粪便免疫球蛋白IgA含量合并，进一步分析后得出林麝粪便免疫球蛋白IgA低含量的范围参考值为4917±666.05μg/g，高含量范围参考值为7369±1327.69μg/g(图3中B，表5)。
粪便钙卫蛋白测定结果用系统聚类分析后将受检个体大致分为粪便钙卫蛋白含量低个体和含量高个体这两类(图3中C)。进一步通过K-Means cluster初步分析出每类的粪便钙卫蛋白的参考范围。其中雌性个体粪便钙卫蛋白低浓度为8863±816.50μg/g(22头)，高浓度为11842±1232.42μg/g(7头)，雄性个体粪便钙卫蛋白低浓度9581±1110.23μg/g(43头)，高浓度为15483±5027.30μg/g(6头)。但两组的粪便钙卫蛋白均没有显著的性别差异(F＝0.099，P＝0.437>0.01)。因此，分别将两组雌雄个体粪便钙卫蛋白含量合并，进一步分析后得出林麝粪便钙卫蛋白低含量的范围参考值为9351±1127.66μg/g，高含量范围参考值为14200±2473.37μg/g(图3中D，表5)。
粪便中乳铁蛋白检测数据，用系统聚类分析后将受检个体大致分为粪便乳铁蛋白含量低个体和含量高个体这两类(图3中E)。进一步通过K-Means cluster初步分析出每类的粪便乳铁蛋白的参考范围。其中雌性个体粪便乳铁蛋白低浓度为5719.87±3353.76μg/g(18头)，高浓度为10300.27±1990.42μg/g(11头)，雄性个体粪便乳铁蛋白低浓度6581.55±3934.20μg/g(39头)，高浓度为12148.12±4107.17μg/g(11头)。但两组的粪便乳铁蛋白均没有显著的性别差异(F＝0.098，P＝0.451>0.05)。因此，分别将两组雌雄个体粪便乳铁蛋白含量合并，进一步分析后得出林麝粪便乳铁蛋白低含量的范围参考值为6255.9±1255.15μg/g，高含量范围参考值为10758.2±1414.14μg/g(图3中F，表5)。
表5 林麝粪便IgA、乳铁蛋白和钙卫蛋白含量的比较
注：N表示对应组的个体数，*表示有显著性差异(P<0.01)。
4、粪便中各检测蛋白含量的正常水平参考范围
免疫球蛋白IgA、钙卫蛋白和乳铁蛋白广泛存在于身体的各个部位(Lin WC、WongJM等，2015；Levay PF、Viljoen M，1995)，当肠道发生炎症损伤后，中性粒细胞脱颗粒排放至肠腔，并可抵制肠道细菌的降解作用稳定存在于粪便中，其浓度与迁移至肠黏膜中的中性粒细胞数量成正比(Nancey S、Boschetti G等，2013；CHEN Li-ya、YUAN Bo-si等，2018；Baceye S、Elass E等，1999；Dai J、Liu WZ等，2006)。故聚类分析后的低浓度组的参考范围在理论上可以代表林麝粪便蛋白含量的正常水平参考范围。粪便免疫球蛋白正常水平参考范围是4251～5583μg/g，钙卫蛋白的范围是8223～10478μg/g，乳铁蛋白的范围是5000～7511μg/g。
5、圈养林麝肠道健康状况评价指标的筛选
为了对圈养林麝肠道健康状况进行有效评估，本发明分别测定了78头林麝粪便外观、便隐血以及免疫球蛋白IgA、乳铁蛋白和钙卫蛋白的含量。将粪便性状赋值进行进一步处理分析，即个体粪样的最终得分＝100-个体粪便外观赋值平均值。将林麝粪便外观、便隐血以及免疫球蛋白IgA、乳铁蛋白和钙卫蛋白的含量这五项指标进行相关性分析。结果表明：林麝粪便外观、便隐血以及免疫球蛋白IgA这三项指标间有明显的相关性，对林麝肠道功能异常初期筛选有显著的指示作用(P<0.01)。钙卫蛋白和乳铁蛋白作为肠道急性炎症的标志物，两者之间存在着明显的相关性，对林麝肠道炎症性疾病诊断有显著的指示性作用(P<0.01)。林麝粪便外观、便隐血以及免疫球蛋白IgA这三项和指示炎症性疾病的指标乳铁蛋白和钙卫蛋白之间没有明显的相关性(P>0.01)(表6)。将粪便外观、便隐血以及免疫球蛋白IgA这三项指标均处在异常范围最大的5个体筛选出来，对其五项指标的相关性进行分析，结果表明五项指标间存在着明显的相关性(P>0.01)(表7)。
因此，林麝粪便外观、便隐血以及免疫球蛋白IgA可作为评估肠道功能异常的初期诊断指标，乳铁蛋白和钙卫蛋白的含量这两项指标作可作为评估林麝肠道炎症性疾病的指标。这五项指标对林麝肠道健康状况的评估有高诊断价值。
进一步对所有林麝粪便外观、便隐血(FOB)以及免疫球蛋白IgA、乳铁蛋白和钙卫蛋白的含量聚类分析为低值的个体进行K-中心聚类分析，得出正常生理状况下各指标的参考常值(表8)。
表6 圈养林麝粪便五项指标间的相关矩阵
注：**.相关性在0.01水平(2-tailed)显著。
表7 圈养林麝粪便外观、便隐血以及免疫球蛋白IgA指标异常个体间的五项指标相关矩阵
注：**.相关性在0.01水平(2-tailed)显著。
表8 圈养林麝粪便中各检测指标参考常值
6、圈养林麝肠道健康状况评价指标对林麝消化道功能健康的诊断参考
由传统诊断方法根据粪便外观的观察将个体分为粪便正常和异常两组，检测两组粪便中免疫球蛋白IgA含量，筛选出IgA含量高的个体(即IgA含量超出表8中的生理常值范围)，再结合钙卫蛋白、乳铁蛋白和便隐血四项指标对腹泻个体进行分类，分为两类：(1)生理性腹泻，如肠易激综合征(IBS)和寄生虫引起的腹泻；(2)病理性腹泻，如损伤溃疡性肠道疾病、炎症性非损伤肠道疾病、炎症性肠病(IBD)。具体见表9。
表9 圈养林麝消化道健康状况诊断参考
注：图中用灰色背景标注的是理论上存在，但在实际中存在性很小的情况。
7、圈养林麝消化道功能健康的诊断体系参考
传统方法对对林麝消化道健康的评估准确性不高，受到检测人员自身因素限制，其诊断价值较低。分泌性免疫球蛋白IgA是机体粘膜防御系统的主要成分，消化道内就广泛分布着分泌性免疫球蛋白IgA，检测林麝粪便中免疫球蛋白IgA含量，可以了解林麝消化道免疫功能的状态。两项指标相结合可以从消化道免疫功能和粪便外观这两方面方面综合考量，对林麝消化道健康状态进行初步的诊断。
FOB是诊断消化道是否出血的关键性指示物，对消化道出血有着高灵敏度和高准确的判断。传统方法和免疫球蛋白IgA两项指标判肠道功能定生理免疫功能异常(偏高)的个体进行便隐血的检测，初步评估林麝消化道健康状况(表10，图4)
粪便中钙卫蛋白和乳铁蛋白是消化道炎症性疾病的指示物，对林麝消化道炎症反应有着明显的指示性作用，具有较高诊断价值的指标。消化道免疫功能，消化道出血情况和粪便外观这三方面综合检测考量后，再结合粪便中钙卫蛋白和乳铁蛋白的含量，进而对林麝消化道炎症性反应进行最终的诊断。(表11，图4)
表10 消化道免疫功能，消化道出血情况和粪便外观三方面初步评估结果
表11 消化道免疫功能，消化道出血情况、粪便外观和炎症反应四方面初步评估结果
注：表中乳铁蛋白/钙卫蛋白此列表示的“高”，其含义是乳铁蛋白和钙卫蛋白这两项指标至少有一项指标的含量高于正常值范围；乳铁蛋白/钙卫蛋白此列表示的“正常”代表两项指标均处于正常范围。
本发明采用非损伤方式采集林麝粪便，通过观察粪便性状、便隐血(FOB)检查和非侵入性ELISA检测法检测林麝粪便中免疫球蛋白IgA、乳铁蛋白和钙卫蛋白含量。探究筛选出指标的正常值的参考范围，IgA含量生理常值参考范围为4251～5583μg/g，钙卫蛋白Cal含量生理常值参考范围为8223～10478μg/g，乳铁蛋白Fac含量生理常值参考范围为5000～7511μg/g，便隐血FOB生理常值为阴性(—)，粪便外观赋值生理常值参考范围为100。五项指标的相关性分析显示，粪便外观生理赋值、便隐血和免疫球蛋白IgA存在着明显的相关性(P<0.01)，可初步判断林麝肠道功能的健康状况，但无法判断出是否患有炎症性疾病。钙卫蛋白和乳铁蛋白两项炎症性指标相关性明显(P<0.01)，并呈现明显正相关，对初步诊断为肠道功能健康状况异常的个体有进一步诊断是否患有炎症性肠道疾病有着重要的诊断价值。
进一步通过本发明筛选出的检测指标，结合目前对林麝肠道疾病的诊断技术和方法，探讨出一套对林麝肠道健康的初步诊断方法。初步诊断后将林麝肠道功能异常病因分为两类：(1)生理性腹泻，如肠易激综合征(IBS)和寄生虫引起的腹泻；(2)病理性腹泻，如损伤溃疡性肠道疾病、炎症性非损伤肠道疾病、炎症性肠病(IBD)。
本发明采用非损伤方式采集林麝粪便，通过观察粪便性状、便隐血(FOB)检查和非侵入性ELISA检测法检测林麝粪便中免疫球蛋白IgA、乳铁蛋白和钙卫蛋白含量，探究筛选出各项指标的正常值的参考范围。再通过本发明筛选出的检测指标，结合目前对林麝肠道疾病的诊断技术和方法，探讨出一套对林麝肠道健康的初步诊断方法。为圈养林麝的肠道健康状况进行科学合理地评估，并为林麝的健康监测及疾病临床诊断等提供一定的科学依据。
实施例2、圈养林麝肠道健康状况的非损伤诊断及评价方法的实际应用
一、74头圈养林麝消化道功能健康的诊断结果
依照实施例1建立的评价体系流程对74头实验个体进行肠道健康状况的评估诊断。消化道免疫功能进行初筛，结果显示共有10头个体IgA含量低于正常范围，耳号分别是B3、B2、B8、B9、A7、A3、A8、D6、D2和D5；48头个体IgA含量正常；16头IgA含量高于正常范围(表12)。消化道免疫功能，消化道出血情况和粪便外观三方面初步评估结果表明共有16头个体异常，其中5头个体初判为炎症性肠炎(IBD)、痢疾、寄生虫(初期)，3头为肠易综合症(IBS)，8头为生理性IgA高或非损伤性肠道炎症疾病(表13)。消化道免疫功能，消化道出血情况，粪便外观和炎症反应四方面初步评估结果表明，3头个体为炎症性肠炎，其中耳号为4496的个体因为长期便隐血，故为炎症性肠炎中期；耳号为12035和B5的个体为炎症性肠病(IBD)(初、末期)。1头(耳号为9470)为肠易激综合征(IBS)或寄生虫(初、末期)，2头(耳号为9485和10015)为炎症性非损伤肠道疾病(如肠道菌群紊乱)，2头(耳号为10095和B6)为肠易激综合征(IBS)，4头(耳号为5780、10094、A2和10102)为生理性IgA高，4头(耳号为C7、C10、D4和008)为非损伤性肠道炎症疾病(初期)(表14)。
表12 74头林麝免疫功能初筛分类结果
表13 74头林麝消化道免疫功能，消化道出血情况和粪便外观三方面初步评估结果(只列举疑似患病个体)
注：“高”其含义是相应指标的含量高于正常值范围；“正常”代表处于正常范围。
表14 74头林麝消化道免疫功能，消化道出血情况，粪便外观和炎症反应四方面初步评估结果(只列举疑似患病个体)
注：“高”其含义是相应指标的含量高于正常值范围；“正常”代表处于正常范围。
二、林麝消化道功能健康的诊断新老方法的比较
采用传统的方法诊断步骤一中74头林麝个体消化道功能的健康发现，共有16头个体赋值结果连续三天以上小于100，诊断为患有消化道疾病，耳号分别为4496、5749、9470、9485、10015、10068、10073、10094、10095、10102、10108、12035、A2、B1、B5和B6(表3)。
采用本发明的免疫功能，消化道出血情况，粪便外观和炎症反应四位一体的林麝消化道健康功能评估体系进行诊断，结果发现共有10头个体其IgA含量低于正常参考范围，故自身消化道免疫功能偏低，耳号为A7、A3、B9、A8、B3、B2、D5、B8、D6、D2(表12)；有12头林麝患有不同种类和程度的消化道疾病，耳号为4496、9470、9485、10015、10095、12035、B5、B6、C10、C7、D4、008(表14)。
传统方法只根据粪便外观来进行诊断，判断标准单一；而且无法进一步诊断疾病类型。本发明的四位一体的检测方法可以更加准确的对病情进行分类诊断，可以快速的诊断出是否患有炎症性疾病和消化道是否出血等。两者相比较，本发明的四位一体的林麝消化道健康评估体系在病情的诊断和对后续治疗的指导意义与参考价值明显优于传统方法，不仅能最大限度的避免误诊和过度治疗，而且为林麝的人工养殖提供了一个较为系统的消化道健康状况的检测方法，并为林麝的健康监测及疾病临床诊断等提供一定的科学依据。

Claims (10)

1.用于检测林麝粪便外观、便隐血、粪便中免疫球蛋白A含量、粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白含量的物质在制备用于评估林麝肠道健康状况和/或肠道疾病类型的产品中的应用。
2.用于检测林麝粪便外观、便隐血和粪便中免疫球蛋白A含量的物质在制备用于评估林麝肠道健康状况和/或肠道疾病类型的产品中的应用。
3.用于检测林麝粪便外观、便隐血和粪便中免疫球蛋白A含量的物质和记载有如下(A1)的可读性载体在制备用于评估林麝肠道健康状况和/或肠道疾病类型的产品中的应用：
(A1)利用粪便外观、便隐血和粪便中免疫球蛋白A含量三项指标评估林麝肠道健康状况和/或肠道疾病类型。
4.用于检测林麝粪便外观、便隐血、粪便中免疫球蛋白A含量、粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白含量的物质和记载有如下(A2)的可读性载体在制备用于评估林麝肠道健康状况和/或肠道疾病类型的产品中的应用：
(A2)利用粪便外观、便隐血、粪便中免疫球蛋白A含量、粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白含量五项指标评估林麝肠道健康状况和/或肠道疾病类型。
5.根据权利要求1-4中任一所述的应用，其特征在于：所述粪便外观的生理常值为“正常”；所述便隐血的生理常值为“阴性”；所述粪便中免疫球蛋白A含量的生理常值为4251～5583μg/g。
6.根据权利要求1-5中任一所述的应用，其特征在于：所述粪便中钙卫蛋白含量的生理常值为8223～10478μg/g；所述粪便中乳铁蛋白含量的生理常值为5000～7511μg/g。
7.根据权利要求3或5所述的应用，其特征在于：在(A1)中，是按照如下利用粪便外观、便隐血和粪便中免疫球蛋白A含量三项指标初步评估林麝肠道健康状况和/或肠道疾病类型的：
(a1)若待测林麝的粪便外观、便隐血和粪便中免疫球蛋白A含量三项指标均为生理常值，则所述待测林麝肠道功能正常；
(a2)若待测林麝的粪便外观正常，便隐血阴性，粪便中免疫球蛋白A含量高于生理常值，则所述待测林麝为生理性免疫球蛋白A升高或者患有非损伤性肠道炎症疾病；
(a3)若待测林麝的粪便外观正常，便隐血阳性，粪便中免疫球蛋白A含量高于生理常值，则所述待测林麝患有损伤溃疡性肠道疾病；
(a4)若待测林麝的粪便外观异常，便隐血阴性，粪便中免疫球蛋白A含量高于生理常值，则所述待测林麝患有肠易综合症；
(a5)若待测林麝的粪便外观异常，便隐血阳性，粪便中免疫球蛋白A含量高于生理常值，则所述待测林麝患有炎症性肠炎、痢疾或者肠道内有寄生虫。
8.根据权利要求4-6中任一所述的应用，其特征在于：在(A2)中，是按照如下利用粪便外观、便隐血、粪便中免疫球蛋白A含量、粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白含量五项指标终极评估林麝肠道健康状况和/或肠道疾病类型的：
(b1)若待测林麝的粪便外观、便隐血、粪便中免疫球蛋白A含量、粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白含量五项指标均为生理常值，则所述待测林麝肠道功能正常；
(b2)若待测林麝的粪便外观正常，便隐血阴性，粪便中免疫球蛋白A含量高于生理常值，粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白两项指标中至少一项高于生理常值，则所述待测林麝患有非损伤性肠道炎症疾病；
(b3)若待测林麝的粪便外观正常，便隐血阳性，粪便中免疫球蛋白A含量高于生理常值，粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白两项指标中至少一项高于生理常值，则所述待测林麝患有损伤溃疡性肠道疾病；
(b4)若待测林麝的粪便外观正常，便隐血阴性，粪便中免疫球蛋白A含量高于生理常值，粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白两项指标均为生理常值，则所述待测林麝为生理性免疫球蛋白A升高；
(b5)若待测林麝的粪便外观正常，便隐血阳性，粪便中免疫球蛋白A含量高于生理常值，粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白两项指标均为生理常值，则所述待测林麝患有损伤性非炎症性肠道疾病；
(b6)若待测林麝的粪便外观异常，便隐血阴性，粪便中免疫球蛋白A含量高于生理常值，粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白两项指标中至少一项高于生理常值，则所述待测林麝患有炎症性非损伤肠道疾病；
(b7)若待测林麝的粪便外观异常，便隐血阳性，粪便中免疫球蛋白A含量高于生理常值，粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白两项指标中至少一项高于生理常值，则所述待测林麝患有炎症性肠道疾病；
(b8)若待测林麝的粪便外观异常，便隐血阴性，粪便中免疫球蛋白A含量高于生理常值，粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白两项指标均为生理常值，则所述待测林麝患有肠易激综合征；
(b9)若待测林麝的粪便外观异常，便隐血阳性，粪便中免疫球蛋白A含量高于生理常值，粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白两项指标均为生理常值，则所述待测林麝患有肠易激综合征或者肠道内有寄生虫。
9.用于评估林麝肠道健康状况和/或肠道疾病类型的产品，含有如下(A)或(B)：
(A)用于检测林麝粪便外观、便隐血和粪便中免疫球蛋白A含量的物质，以及权利要求3或5或7中所述的记载有(A1)的可读性载体；
(B)用于检测林麝粪便外观、便隐血、粪便中免疫球蛋白A含量、粪便中钙卫蛋白含量和粪便中乳铁蛋白含量的物质，以及权利要求4或5或6或8中所述的记载有(A2)的可读性载体。
10.评估林麝肠道健康状况和/或肠道疾病类型的方法，包括权利要求3或5或7中所述(A1)或权利要求4或5或6或8中所述(A2)所示的步骤。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112634982A (zh) * 2020-11-23 2021-04-09 上海欧易生物医学科技有限公司 一种筛选与研究目的相关的关键基因、关键蛋白集的方法
CN117607461A (zh) * 2023-12-06 2024-02-27 陕西省动物研究所 一种s100a8蛋白的检测方法及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20150160210A1 (en) * 2010-10-11 2015-06-11 Genova Diagnostics, Inc. Compositions and methods for assessing gastrointestinal health
CN107942043A (zh) * 2017-11-23 2018-04-20 北京林业大学 圈养林麝粪便性状的等级赋值及其在检测消化道疾病中的应用
CN109682979A (zh) * 2019-01-30 2019-04-26 珠海市银科医学工程股份有限公司 一种钙卫蛋白联合乳铁蛋白抗原检测试纸条及其制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20150160210A1 (en) * 2010-10-11 2015-06-11 Genova Diagnostics, Inc. Compositions and methods for assessing gastrointestinal health
CN107942043A (zh) * 2017-11-23 2018-04-20 北京林业大学 圈养林麝粪便性状的等级赋值及其在检测消化道疾病中的应用
CN109682979A (zh) * 2019-01-30 2019-04-26 珠海市银科医学工程股份有限公司 一种钙卫蛋白联合乳铁蛋白抗原检测试纸条及其制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
李晓光: "粪便钙卫蛋白检测在大肠慢性器质与非器质性疾病诊断和鉴别诊断中的意义", 《万方学位论文数据库》 *
王龙 等: "粪便检测在炎症性肠病评估中的价值", 《实用医学杂志》 *
韩渤 等: "SIgA表达功能及其在肠道疾病的作用", 《世界华人消化杂志》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112634982A (zh) * 2020-11-23 2021-04-09 上海欧易生物医学科技有限公司 一种筛选与研究目的相关的关键基因、关键蛋白集的方法
CN117607461A (zh) * 2023-12-06 2024-02-27 陕西省动物研究所 一种s100a8蛋白的检测方法及其应用

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