CN110195058B - 猪神经介素u基因增强子及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种猪神经介素U基因增强子及其应用。本发明提供一种新的猪源的神经介素U基因增强子，利用荧光素酶报告系统发现该增强子能够在肾源细胞或成纤维细胞中显著增强启动子的转录活性，为今后制备转基因猪提供技术支持。

Description

猪神经介素U基因增强子及其应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说，涉及一种猪神经介素U基因增强子及其应用。

背景技术

神经介素U,(neuromedin U,NMU)是神经介素多肽家族中的一员,于1985年首次从猪的脊髓中发现并分离提纯,在人类和其他哺乳动物中都有分布。神经介素U具有多种广泛性的功能,能够控制平滑肌收缩,调节血压,控制食欲,影响骨骼生长等多种功能(Malendowicz,Nussdorfer et al.1994,Hanada,Teranishi et al.2004)。小鼠中的研究表明,NMU敲除的小鼠与正常对照组比较,表现出了明显的肥胖症状(Hanada, Teranishiet al.2004)。

目前的已有的研究并没有对该基因增强子元件以及相关能够影响活性的突变的报道。而通过对于该基因的增强子以及相关突变的研究可以增加人们对于该基因调控机制的了解，更可以根据为人们有目的的调控该基因的表达量提供手段。通过对于相关突变位点进行单碱基的替换，可以在不影响基因整体结构的情况下实现对于该基因表达量的精确调控，并减少可能引起的副作用。此外，由于该基因可以通过影响体脂率进而影响瘦肉含量，因此可以在育种过程中，对该增强子元件对应的突变进行选择，成为猪种改善肉质的选择位点。最后，由于猪种在生理特征、器官形态、代谢机制等方面上比小鼠更接近人类。猪种更适合作为模型动物用于对于人类肥胖和代谢疾病的。因此，在猪中以该增强子元件为基础进行基因修饰，可以为肥胖疾病的模式动物的构建提供理论基础。

综上，NMU基因是潜在的代谢行疾病(如肥胖症、2型糖尿病等)重要基因靶标之一。NMU的表达量能够直接影响个体的代谢，而目前尚未见对该基因增加子元件的相关研究。同时，该基因也是猪育种过程中决定脂肪繁殖等相关性状的重要候选位点。

发明内容

本发明的目的是提供一种猪神经介素U基因增强子及其应用。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供一种猪神经介素U基因增强子，所述增强子为：

i)SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；

ii)SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个核苷酸且具有增强启动子转录活性的核苷酸序列；

iii)在严格条件下与SEQ ID NO:1所示序列杂交且具有增强启动子转录活性的核苷酸序列，所述严格条件为在含0.1％SDS的0.1×SSPE或含0.1％SDS的0.1×SSC溶液中，在65℃下杂交，并用该溶液洗膜；或

iv)与i)、ii)或iii)的核苷酸序列具有90％以上同源性且具有增强启动子转录活性的核苷酸序列。

第二方面，本发明提供含有所述增强子的生物材料，所述生物材料包括聚核苷酸、重组DNA、表达盒、转座子、质粒载体、噬菌体载体、病毒载体或工程菌。

进一步地，本发明提供含有所述增强子的重组质粒，将所述增强子构建到载体pGL3-Promoter的NheⅠ和BglⅡ酶切位点之间构建得到的。

第三方面，本发明提供所述增强子在增强启动子转录活性中的应用。

第四方面，本发明提供所述增强子在增强猪神经介素U基因转录活性中的应用。

第五方面，本发明提供所述增强子在肾源细胞(如IBRS-2)或成纤维细胞中增强启动子转录活性中的应用。

优选地，将上述构建的重组质粒转入肾源细胞或成纤维细胞中。

可选地，所述肾源细胞或成纤维细胞来自猪。

第六方面，本发明提供用于扩增所述增强子的引物对，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:4-5所示。

本发明分别以荣昌猪和杜洛克猪的基因组为模板，扩增NMU基因第二个内含子中长度约3kb的序列片段。利用荧光素酶表达载体来确认该区域是否有调控元件活性以及突变对于调控元件的影响。首先从荣昌猪和杜洛克猪的耳朵样品中提取基因组，并以基因组为模板，扩增荣昌猪和杜洛克猪在第二个内含子对应的序列。结果发现扩增得到的荣昌猪和杜洛克猪的序列同NCBI已经公布的序列并不相同。通过比较发现，NCBI公布的序列(NC_010450.3)存在一个长约900bp的重复片段，而该片段在我荣昌猪和杜洛克猪中并不存在。为进一步确认，我们又从长白和小香猪中克隆了该片段，利用Sanger法测序后进行比较，小香猪和长白猪序列比较的结果与荣昌猪和杜洛克结果相似。这表明，NCBI提供的基因组片段可能存在错误，这一段900bp的重复序列有可能是在最初组装基因组时的错误所导致的。随后，以荣昌猪和杜洛克对应的序列为插入片段，构建增强子活性的荧光素酶表达载体(pGL3-NMU Promoter Vector)，并选取了一段相同长度的(约3kb,SEQ ID NO:3)而且已知没有调控活性的序列作为负对照。将载体转入猪的肾源细胞IBRS-2，通过荧光素酶的活性，评估该区域调控元件的活性。实验结果见图1，与负对照相比(Promoter-3k)，杜洛克对应的序列的载体显示出了增强子活性，而且显著高于荣昌猪对应序列载体的活性。荣昌猪对应序列的载体荧光素酶活性与负对照接近。这表明该区域的突变确实使得增强子的活性发生了变化。同时为了排除该区域具有启动子活性，我们还构建了相应的启动子活性的荧光素酶表达载体，结果显示该区域序列不具有启动子活性。

进一步在猪的胎儿成纤维细胞中也进行了相同的实验，得到了相近的结果，结果见图2。为了进一步评估该区域增强子活性改变造成的可能影响，我们对NMU在荣昌猪和杜洛克的不同组织中的表达情况进行了分析，结果见图3。结果显示在垂体和肾脏中荣昌猪和杜洛克的NMU出现了差异表达，其中，杜洛克在肾脏中NMU的表达的水平显著高于荣昌猪，这与增强子活性的验证结果一致。因此NMU内含子中增强子活性的改变对于NMU在荣昌猪和杜洛克中的差异表达作出贡献。

借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点及有益效果：

本发明提供一种新的猪源的神经介素U基因增强子，利用荧光素酶报告系统发现该增强子能够在肾源细胞或成纤维细胞中显著增强启动子的转录活性，为今后制备转基因猪提供技术支持。

附图说明

图1为本发明在猪肾源细胞中对增强子序列片段的调控功能的验证分析结果。其中，A：猪的肾源细胞(IBRS-2)中NMU内含子序列增强子元件的荧光素酶活性分析结果，Duroc：携带杜洛克增强子元件序列的载体。Rongchang：携带荣昌猪增强子元件序列的载体。Promoter-3K：携带已知不含有增强子活性序列的载体。杜洛克序列片段具有的增强子活性显著高荣昌猪序列片段以及对照序列片段(p<0.05)。B：猪的肾源细胞(IBRS-2)中NMU内含子序列启动子元件的荧光素酶活性分析结果。 Duroc：携带杜洛克增强子的载体；Rongchang：携带荣昌猪增强子的载体； pGL3-Basic：不带有启动子序列的载体；pGL3-Promoter：带有SV-40启动子序列的载体。杜洛克等位基因片段和荣昌猪等位基因片段都不具有启动子活性。

图2为本发明在成纤维细胞中对增强子序列片段的调控功能的验证分析结果。其中，A：猪的成纤维细胞中NMU内含子序列增强子元件的荧光素酶活性分析结果。 Duroc：携带杜洛克增强子元件序列的载体。Rongchang：携带荣昌猪增强子元件序列的载体。Promoter-3K：携带已知不含有增强子活性序列的载体。杜洛克序列片段具有的增强子活性显著高荣昌猪等位基因片段以及对照序列片段(p<0.05)。B：猪成纤维细胞(IBRS-2)中NMU内含子序列启动子元件的荧光素酶活性分析。Duroc：携带杜洛克等位基因的载体；Rongchang：携带荣昌猪等位基因的载体；pGL3-Basic：不带有启动子序列的载体；pGL3-Promoter：带有SV-40启动子序列的载体。杜洛克等位基因片段和荣昌猪等位基因片段都不具有启动子活性。

图3为本发明脂肪型猪和瘦肉型猪在不同组织中NMU的表达情况。利用定量PCR 分别对3个荣昌猪(Rongchang)和3个杜洛克(Duroc)个体7种组织中的NMU基因的表达量进行了分析。纵坐标为NMU基因相对于GAPDH的表达量,横坐标为组织名称, 七个组织包括：hypothalamus:下丘脑；hypophysis：垂体；muscle：肌肉；liver：肝脏；spleen：脾脏；lung：肺；kidney：肾脏。其中,NMU基因在垂体和肾脏中差异表达,其中在肾脏组织中差异表达显著(p<0.05)。

图4为本发明实施例1中插入杜洛克(瘦肉型猪)片段的增强子活性的荧光素酶表达载体示意图。

图5为本发明实施例1中插入荣昌猪(脂肪型猪)片段的增强子活性的荧光素酶表达载体示意图。

图6为本发明实施例1中插入确定没有增强子活性对照序列的荧光素酶表达载体示意图。

图7为本发明实施例1中插入杜洛克片段的启动子活性的荧光素酶表达载体示意图。

图8为本发明实施例1中插入荣昌猪片段的启动子活性的荧光素酶表达载体示意图。

其中，图1和图2中纵坐标表示相对的荧光素酶表达活性值，空白对照默认为1。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例均按照常规实验条件，如Sambrook等分子克隆实验手册(Sambrook J&Russell DW,Molecular Cloning:a Laboratory Manual,2001)，或按照制造厂商说明书建议的条件。

实施例1NMU内含子序列增强子的克隆及活性分析

分别从荣昌猪和杜洛克的基因组DNA上PCR扩增其NMU第二个内含子的序列。为了确保序列的准确性，进一步对小香猪和长白猪的相应区域进行了扩增。随后，利用NheⅠ/BglⅡ酶切位点将荣昌猪和杜洛克的序列转入带有SV40启动子的荧光素酶报告载体(pGL3-Promoter Vector,购自Promega公司)。PCR扩增使用的引物 NMU-F/NMU-R见表1。同时，由于插入片段的长度为3.19kb，我们选取了一段等长的(约3kb,SEQ ID NO:3)确定不含有增强子活性的序列作为对照，插入荧光素酶报告载体中，插入片段序列见附录。随后将构建好的载体(pGL3-NMUPromoter Vector) 分别转染到猪的IBRS-2细胞和成纤维细胞中，同时转入的还有內源对照载体 pRL-TK。转染48小时后，使用

Luciferase Assay System(Promega)试剂盒，按其说明书进行检测。

表1载体构建与定量分析中使用的引物

注：qNMU-F和qNMU-R的序列见SEQ ID NO:4-5。

NMU内含子序列启动子活性分析：将荣昌猪和杜洛克对应的序列插入到不具有启动子活性的荧光素酶报告载体中(pGL3-Basic Vector)。不带有插入片段的空载体 pGL3-Basic Vector作为负对照。带有自带启动子活性的载体(pGL3-Promoter Vector)，作为正对照。将载体分别转染猪的IBRS-2和成纤维细胞，孵育48小时后，使用

Luciferase Assay System(Promega)试剂盒，按其说明书进行检测。

杜洛克猪具有增强子活性片段对应的序列见SEQ ID NO:1，荣昌猪具有增强子活性片段对应的序列见SEQ ID NO:2，确定没有增强子活性的对照序列见SEQ ID NO:3。

插入杜洛克(瘦肉型猪)片段的增强子活性的荧光素酶表达载体示意图见图4。

插入荣昌猪(脂肪型猪)片段的增强子活性的荧光素酶表达载体示意图见图5。

插入确定没有增强子活性对照序列的荧光素酶表达载体示意图见图6。

插入杜洛克片段的启动子活性的荧光素酶表达载体示意图见图7。

插入荣昌猪片段的启动子活性的荧光素酶表达载体示意图见图8。

NMU基因在不同突变类型调控元件环境下的表达量分析：本发明利用实时定量PCR分别对3个荣昌猪(Rongchang)和3个杜洛克(Duroc)个体的7种组织中的NMU基因表达量进行了分析。具体方法如下：

提取不同组织样品的总RNA，反转录成cDNA。将cDNA稀释一倍,作为模板,按以下反应体系加入到定量PCR 96孔板中，放入定量PCR仪中进行反应。

反应体系：

类型	体系
		2×Master Mix	10μL
上游引物F(10μM)	0.3μL
		上游引物R(10μM)	0.3μL
ddH<sub>2</sub>O	9.4μL
		Total	20μL

PCR反应条件：95℃预变性5分钟；95℃变性10秒，60℃退火10秒，72℃延伸10 秒，40个循环。

融解曲线阶段：95℃10秒，65℃1分钟，以0.1℃/s速率从97℃缓慢降至40℃】， 40℃5秒。

实验结果显示，与负对照相比(Promoter-3k)，杜洛克对应序列的载体显示出了增强子活性,而且显著高于荣昌猪对应序列载体的活性。荣昌猪对应序列的载体荧光素酶活性与负对照接近。表明该区域含有增强子，而且荣昌猪种对应的突变使得增强子的活性降低。启动子活性的荧光素酶基因表达载体的结果均与负对照相近,显示该区域序列不具有启动子活性。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

参考文献

[1]Hanada,R.,H.Teranishi,J.T.Pearson,M.Kurokawa,H.Hosoda,N.Fukushima,Y.Fukue,R.Serino,H.Fujihara,Y.Ueta,M. Ikawa,M.Okabe,N.Murakami,M.Shirai,H.Yoshimatsu,K.Kangawa and M.Kojima(2004)."Neuromedin U has a novelanorexigenic effect independent of the leptin signaling pathway."Nat Med 10(10):1067-1073.

[2]Malendowicz,L.K.,G.G.Nussdorfer,A.Markowska,C.Tortorella,M.Nowakand J.B.Warchol(1994)."Effects of neuromedin U(NMU)-8on the rat hypothalamo-pituitary-adrenal axis.Evidence of a direct effect of NMU-8on the adrenalgland."Neuropeptides 26(1):47-53。

序列表

<110> 中国农业大学

<120> 猪神经介素U基因增强子及其应用

<130> KHP191111771.9

<160> 5

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 3199

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

caacaaactg aagtttatat aatggcaaat gttagcaagg ttgtggggtg tatgggccct 60

catgcactgc tgatgagact gccaactggt ggagccatct ggaaaaccac ctaggtatcc 120

tcatggccta gcatcccctc tcgtgggtct agagcctgaa catgttctcc ctcaagacca 180

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gagcaacaca ctaggtgtat ccagaaacac ggagagctct caaagtacag tgttaagtaa 360

gaaaatactg cacattcaca caaagcaaca gtacagatcc gacaagaata taaacagagg 420

ctacatgtca aatacattag aaaagtctgt gggagaatga aataggaaat ggaaatataa 480

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aataaggtcc tactgcacag cacagggaac tctatccagt ctcttggggt agaccatgat 600

gaaagataat ataagaagag gaatatatat aaaagaatag agtcccatca tgatactgat 660

taggaactga gaagaataca ctttataact aagccacctc taacataatt cataaaggaa 720

aaggtaagat caatgataag ggccaaaaac taaagagtcc ttaatagcac agtctatttt 780

aagggtctct gccttagtat atcataatac aactagaaat ctataaacaa gatgaagaat 840

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aaagatattt aaggaagcat tgagaaccta caagttaagc tttctgctgg aggttttaaa 1020

aattacagag ctattcagac acaggaaaaa cagttttcaa accttatata cggagactta 1080

accactttct aatggattca ccaatggact ctacagagtt ctcaaaagca attagtggca 1140

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gcaattttaa ttaaaaaata ttgattgaac atttatttgg ggcatgttag tcctgtcctt 1680

aagaagtttt cccgtgtgtg agtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtttgtg tatgtgtgag 1740

tgtgccttgt gtgagtgaat tgtgagtgtg tgtgtgtatt tgtacccgtg attctgggct 1800

tgtgtggtct agaaaagaga ggaggtggtt ggacacaagg acaagtagaa taaaccaaat 1860

tccccaatat ttgtgataca tcaagaagat gacaagttct gtgaacataa aaaggagaca 1920

tatattttct ataatactct atacctttct tattctcaaa gtagagaatc atacatttta 1980

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<210> 2

<211> 3199

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

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catgcactgc tgatgagact gccaactggt ggagccatct ggaaaaccac ctaggtatcc 120

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tgtgtggtct agaaaagaga ggaggtggtt gaacacaagg acaagtagaa taaaccaaat 1860

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catctttata tctaatgatc cctactgact attaacggga atgtgtacct ctgtggctgg 3000

gggtgaatct tggggaaatt ccagttctag gatttaggaa gtttaaaagg ttcaaaaaaa 3060

gtttataaga ctccaaagtt cagcatcctt aatggtcatg catcttcagt taatactaca 3120

gaggtaactt gactttataa aatctgcttt tcattttttg ctatttcttc tgtttccaag 3180

atgtaactgg gatttttgc 3199

<210> 3

<211> 3181

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

agagtgtata caggactggt actttgctaa atgcaattat agtcccttct attagtctag 60

gatcccatcc ccacctaaat ccctttacat tatcacaggg gatagataca agggactgtt 120

gtgcttaaat gtaggtacag cccccccccc ccttttaacc ctaagatatc tttcccacat 180

aaatgccttt gcatgactgc agaggatact tgggactgtt aatgggcttt attgtagcca 240

cagtctcttt ccatagtctg ggatcccatc ccctcttaaa tgatttacat tactcgcaga 300

gggcgcaagg aactgcaaag gtgcttaaat gcaggtagtt ggtttttaaa cctaggatcc 360

cattcccagc ctgacttgct ttgaattact aaagaggcta caagggactc ttatgtgttt 420

aagtgcaggt acagtgcctt ttgttaacct caaaatccat tcccacctaa ctcccttttc 480

ctgactgcaa agggtaattg ggactgttaa cgggctgtac tgcagccaca ttcctctcat 540

agtctaggat cccattccct cctatttgat ttgcattacc ccagagggta caagggactt 600

ttaaagtgct taagtgggag ttcctgtcat ggcaccgcgg aaacgaaacc aactaagaac 660

catgaggttt ggggttcaat ccctggcctt gctcagtggg ttcaggatcc agcgttgccc 720

tgggctgtgg tgtaggtcgc agacgctgct cggatctggc attgctgtgg ctgtggtgta 780

ggctggcagc tgtagctcca attcgacccc tagcctggga acttcatatg ccacaggtgt 840

ggccctaaaa aaaaaagaca aaaaaaacca aaaaaaacaa aaaaaccaaa gtgcttaagt 900

ggcactatag tcccttatgt tatctaggac cccattccca tctaactttt catgactgca 960

gagtgtactt gggactgtaa atgtacttaa ctgcctatac agtctcacct cttagtccag 1020

attacatgcc ctcctacttg aattgtatta taacagaggg tacaagggac ttttaatgtg 1080

cttttttaaa agcagctaaa tttccttacc ataacctgaa aatccatttc catctcaaaa 1140

tccactccca cctaactccc tttccatcac agcagagggt acttgggact gttaataggc 1200

ttaattaaag ctattctccc ttctgttggt ctagatttcc tttcccgcct ctatttggat 1260

tgtacctcag tgtacaatgg actgttaact gtgcttaaat gcaggtacag tccttttttt 1320

aaaacctagg atcctattcc cacctaactc cctttgcttt actgcagagg gtacttgggg 1380

cttgttaata ggcttagttg gactacagtc ctttctgtta gtctaggatc ccatcccctc 1440

ctacgtgatt tgcatttcca caaaggctat aagggactgt taaggtgctt attaaatgca 1500

aatacagtcc cttatgttaa cctgggatcc cattcccacc tatctccctt tgcatgactg 1560

caaaggtatt tgagaccttt aaagtagtta atggctgctg tagcctcttc cattataagt 1620

gtactttccc aagcactcca gctccatgta acctgggagc acatttgggg ctgttaatgt 1680

gctcattttt agctgtggtc ccttttataa ttctaggatc acatcccttt ctgcttcttt 1740

gtgttacttg ttggtatttg ggacagaaaa gtacttaaat gcagctgtga tctaacttag 1800

gctcccagcc ctctaacttt ttacattacc ccagtgtata tttgggactg ttaaagtgct 1860

taattgcagc tgtggtcccc tctgttagtc taatttccta agctcaccaa ttccctttgt 1920

attacagcag agggtacttg ggactgttaa agtgtttatt tgcagctctg gtcccttctc 1980

ttagtctggg gtccatgccc ccagctttgt ttgcattacc acagagggta cttggaactg 2040

tgaatgtgct taaattcagg tgtggtccct tttaatttag gattcctcaa ctccttttac 2100

cagggagggc atttgggact gtcaaggtgg taagggcacc tgcgttcctt tctttctgtt 2160

catctaggat cccattccct cctactccct ttgtattgca tgggaggatt tggggggctc 2220

ttaaggtgct taactgcagc tgtggtccct cctattagtt tccaatccct ttctactccc 2280

tttgcattac cacagagggt acttgggact gttgtagtac atcccattct ctcatgcctg 2340

ttagcattac agcacaaggt cctgaacacc acggcccttt cttttgcact gttaatgcac 2400

aatttcattt gtccctcatc ttctgcagta tttatagacc tcactcattt cccttgtatt 2460

tagtggtgaa tgccctttac tcaagacctg tgtactagga tagttaaagt gagccatggt 2520

aattgacccc aaataatgtc tttcacttaa gtcccttgta ttctttgttt tacaagaaga 2580

tgtattaatt acctcagtta cttccttctg ggagtgttta catgcaaaat tccagtgttc 2640

atggcccctt tctttaaact aatacccctc cttttttata ttcaggggat gttagtgacc 2700

caaagtccct ctcttgggat tctaatgtgc atgtgccctc gtgataagct aatacgttga 2760

gttcagggat tactgactac ccaagtcttt ttttggtggg ggtgggggac agttaatgtg 2820

caaaattata ctaggatccc atcctatccc accccttttg catttggggt gctgaccaac 2880

tgtggctgct tctcctgtac agtttaaatg cacataattt cagtaatcca tgctccctta 2940

tgttagacta gaatcccatt ttcttgcccc atttacatta ctttgggagc ttctgaatag 3000

ccaagattca ttttcttgga ctgttaatgt gtatactgcc atttgctcct gtacatcagg 3060

taaggaccct ctccattcta tttatatttc agcaggaggt gcctacttct taagatttat 3120

atacttctgc agttaatctg cataatctta gttgtcctgt acacattctc aattgtccac 3180

a 3181

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

gcactggagg agctttgtct 20

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

cggatgcagg acagatgaca 20

Claims (10)

1.猪神经介素U基因增强子，其特征在于，所述增强子的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.含有权利要求1所述增强子的生物材料，其特征在于，所述生物材料为聚核苷酸、重组DNA、表达盒、转座子、质粒载体、病毒载体或工程菌。

3.根据权利要求2所述的生物材料，其特征在于，所述病毒载体为噬菌体载体。

4.含有权利要求1所述增强子的重组质粒，其特征在于，将所述增强子构建到载体pGL3-Promoter的NheⅠ和BglⅡ酶切位点之间构建得到的。

5.权利要求1所述增强子在增强启动子转录活性中的应用。

6.权利要求1所述增强子在增强猪神经介素U基因转录活性中的应用。

7.权利要求1所述增强子在肾源细胞或成纤维细胞中增强启动子转录活性中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，将权利要求4所述的重组质粒转入肾源细胞或成纤维细胞中。

9.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于，所述肾源细胞或成纤维细胞来自猪。

10.用于扩增权利要求1所述增强子的引物对，其特征在于，所述引物对的核苷酸序列如下：

NMU-F：5'-taccgagctcttacgcgtgctagccaacaaactgaagtttatataatgg-3'

NMU-R：5'-ccaagcttacttagatcgcagatctctggagaaagcaaaaatgccagtt-3'。

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