CN110161436A - 一种南极磷虾复眼的磁性检测方法 - Google Patents

一种南极磷虾复眼的磁性检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种南极磷虾复眼的磁性检测方法，将南极磷虾复眼或复眼切片放入磁力计中进行磁性检测。磁性检测的温度为270‑275K；发明人发现南极磷虾复眼具有顺磁性，南极磷虾的复眼做成切片后和不进行处理的南极磷虾复眼均具有顺磁性，发现单独的Y标准品和Y2O3标准品均具有顺磁性，通过与Y标准品和Y2O3标准品和单独的载玻片进行对比，证实南极磷虾复眼具有顺磁性。未来南极稀土元素矿藏研究开辟了新的思路。

Description

一种南极磷虾复眼的磁性检测方法
技术领域
本发明属于物理化学技术领域，具体涉及一种南极磷虾复眼的磁性检测方法。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
南极磷虾(Antarctic krill，学名：Euphausia superba)，别名南极大磷虾，属于动物界中的节肢动物门、甲壳亚门软甲纲、磷虾目、磷虾科。南极磷虾主要以群居形式生活在南冰洋的南极洲水域，生活条件比较极端，但是南极磷虾却以极大的生物量生存于南极海域被认为是地球上资源量最大的单种生物之一，南极磷虾作为南极食物链的核心部分，是整个生态系统的基石，并在南极营养和碳循环过程中发挥着非常重要的作用。南极磷虾是地球上最后一个、也是最大一个天然的蛋白质、脂肪、甲壳素及其他多糖、以及活性物质储藏宝库。
南极磷虾复眼的检测方法是必须解决的新技术。目前尚未有南极磷虾复眼的检测方法。
发明内容
针对上述现有技术中存在的问题，本发明的一个目的是提供一种南极磷虾复眼的磁性检测方法。
为了解决以上技术问题，本发明的技术方案为：
一种南极磷虾复眼的磁性检测方法,将南极磷虾复眼或复眼切片放入磁力计中进行磁性检测。
南极磷虾复眼中含有较多的稀土元素，尤其钇元素含量最高，另外含有钪、以及镧系的15种元素，发明人发现南极磷虾复眼具有顺磁性，南极磷虾的复眼做成切片后和不进行处理的南极磷虾复眼均具有顺磁性，通过磁力计检测后可以检测到顺磁性，同时发明人通过对Y标准品和Y2O3标准品进行磁性检测，发现单独的Y标准品和Y2O3标准品均具有顺磁性，通过与Y标准品和Y2O3标准品和单独的载玻片进行对比，证实南极磷虾复眼具有顺磁性。
在一些实施例中，磁性检测的温度为270-275K。
本发明磁性检测的温度为0摄氏度左右，南极海水温度在零下3和零上3摄氏度左右。选择0摄氏度左右符合南极磷虾的生存环境。
在一些实施例中，磁性计为Quantum Design SQUID磁力计。
在一些实施例中，南极磷虾复眼切片的制备方法，所述方法包括将南极磷虾复眼在戊二醛溶液中浸泡、第一次冲洗、解剖、固定液进行固定、第二次冲洗、在乙醇梯度溶液中浸泡、洗涤、包埋、切片。
解剖的目的是去除南极磷虾复眼的角膜和晶椎细胞，使复眼中附着颗粒的部位暴露。然后经过固定使南极磷虾复眼的细胞或组织液保持与正常生活时一致，然后经过洗涤和浸泡除去复眼中杂质，切片、贴片、烤片后进行磁性检测。
在一些实施例中，戊二醛的质量分数为2-3％，在戊二醛溶液中浸泡的时间为9-13h。
在一些实施例中，第一次冲洗的冲洗液为PBS缓冲液。
在一些实施例中，固定的固定液为Bouin′s固定液，Bouin′s固定液由苦味酸、甲醛、冰乙酸组成，苦味酸、甲醛、冰乙酸的体积比为14-16:4-6:1。
在一些实施例中，第二次冲洗利用流水进行冲洗。
所述流水为流动的去离子水。
在一些实施例中，乙醇梯度溶液的体积浓度依次为35％、50％、75％、85％、95％、100％，每个梯度浸泡的时间为0.8-1.2h。
在一些实施例中，洗涤的过程为先在二甲苯和乙醇的混合溶液中洗涤，然后在纯二甲苯溶液中洗涤，然后在二甲苯和石蜡的混合溶液中洗涤，最后在石蜡中洗涤。
优选的，二甲苯和乙醇的混合溶液中二甲苯和乙醇的体积比为0.8-1.2：1，在二甲苯和乙醇的混合溶液中室温的条件下，洗涤的时间为1.5-2.5h；优选的，在纯二甲苯溶液中室温的条件下，洗涤的时间为1.5-2.5h；优选的，二甲苯和石蜡的混合溶液中二甲苯和石蜡的体积比为0.8-1.2：1，在二甲苯和石蜡的混合溶液中55-65℃条件下，洗涤1.5-2.5h；优选的，在石蜡中55-65℃条件下洗涤的时间为2.5-3.5h。
发明人通过不断的试验选择上述的复眼处理过程，发现上述处理过程不影响复眼的磁性检测结果。
本发明的有益效果：
本发明证明了南极磷虾复眼及复眼的内部结构与Y和Y2O3都具有顺磁性，这进一步佐证了南极磷虾复眼的颗粒中稀土元素的存在，而都具有顺磁性的共同特征也可能是复眼中颗粒形成的因素之一；
本发明的发现标志着南极稀土元素矿藏丰富的可能。为未来南极稀土元素矿藏研究开辟了新的思路。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本申请的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为实施例1南极磷虾复眼的磁性检测曲线；
图2为实施例2中南极磷虾复眼切片的显微镜观察结果；
图3为实施例2南极磷虾复眼的磁性检测曲线；
图4为对比例1的Y标准品的磁性检测曲线；
图5为对比例2的Y2O3标准品的磁性检测曲线；
图6为对比例3的单独的载玻片的磁性检测曲线。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
Y标准品(纯度≥99％)和Y2O3标准品(纯度≥99％)购自于上海麦克林生化科技有限公司。
下面结合实施例对本发明进一步说明
实施例1
取新鲜的零下80℃冰箱中的南极磷虾解冻(冰冻的南极磷虾购买于辽宁市大连海洋渔业集团公司，捕捞于中国南极长城站附近(48.1区)。摘取适量的南极磷虾复眼。取南极磷虾复眼50-120mg用干净的保鲜膜包裹备用。然后将做好备用的样品分别插入不同的全新的市售透明吸管中，依次编好顺序后通过黄铜转移棒将其插入磁力计中进行磁力检测，设置检测温度为273K，对样品的磁性检测使用Quantum Design SQUID磁力计。磁性检测结果见图1所示，由图1可得，南极磷虾复眼整体具有顺磁性。
实施例2
(1)玻片处理：新的载玻片在无水乙醇中浸泡过夜干净纱布擦干后放入(3-氨基丙基)三乙氧基硅烷(APES)和丙酮按照体积比为1：50混匀的溶液中浸泡5min，再用灭菌蒸馏水冲洗3遍后放在55℃恒温箱中烘烤过夜即可。
(2)解剖与固定：取新鲜的零下80℃冰箱中的南极磷虾解冻(冰冻的南极磷虾购买于辽宁市大连海洋渔业集团公司，捕捞于中国南极长城站附近(48.1区)。，摘取适量的南极磷虾复眼，放于2.5％戊二醛固定液中浸泡过夜，放于4℃冰箱中保存，后用PBS缓冲液冲洗后在解剖镜下进行解剖。去除南极磷虾复眼的角膜和晶椎细胞，使复眼中附着颗粒的部位暴露，然后将解剖完全的南极磷虾复眼放入Bouin’s固定液(Bouin’s固定液配制：将苦味酸、甲醛、冰乙酸按照体积比为15:5:1混合均匀)中固定过夜。
(3)脱水：首先将固定好的样品用流水冲洗，后依次放入35％的乙醇、50％的乙醇、75％的乙醇、85％的乙醇、95％的乙醇中分别浸泡1小时，最后移入100％的乙醇中浸泡1h，并重复两次。其中4℃下，75％的乙醇可用来保存样品。
(4)透明与透蜡：在室温下将样品放于二甲苯：乙醇＝1:1的混合溶液中洗涤2h后，放于100％二甲苯中洗涤2h，然后在60℃下将样品放于二甲苯：石蜡＝1:1的混合溶液中洗涤2h后，在相同的温度下放于100％国产石蜡中1h，并重复两次，再放于100％进口石蜡1h。
(5)包埋与修蜡：将处理好的南极磷虾的复眼置入融化的蜡液中央，待包埋组织的蜡液凝结成块后将蜡块修成1cm3大小的正方体(上下底平行，左右两边贴组织修)，然后将其固着于木块上。
(6)切片：将木块固定在切片机上，调节刀片和蜡块的距离以及角度；试切，当切到组织块的时候调节到10μm，用毛笔轻轻取下蜡带。
(7)贴片与烤片：将蜡带切成适当长度，然后用小镊子将蜡片贴于APES处理过的载玻片上；将载玻片放于37℃的展片台上展片，待完全展平后将切片位置拨正，倾去多余水，烘干备用。
(8)将已经做好的带有南极磷虾复眼的石蜡切片和同样的载玻片切成1×2cm2的长方形小块，并用干净的保鲜膜包裹备用。然后将做好备用的样品分别插入不同的全新的市售透明吸管中，依次编好顺序后通过黄铜转移棒将其插入磁力计中进行磁力检测，设置检测温度为273K，对样品的磁性检测使用Quantum Design SQUID磁力计。
南极磷虾复眼的石蜡切片的显微镜图如图2所示，由图2中可清晰的观察到南极磷虾复眼整体呈圆形，结构完整，由外到内的结构清晰，具备作为磁性检测实验样本的条件。磁性检测结果见图3所示，由图3可以得到复眼的内部结构具有顺磁性。
实施例3
(1)玻片处理：新的载玻片在无水乙醇中浸泡过夜干净纱布擦干后放入(3-氨基丙基)三乙氧基硅烷(APES)和丙酮按照体积比为1：50混匀的溶液中浸泡5min，再用灭菌蒸馏水冲洗3遍后放在55℃恒温箱中烘烤过夜即可。
(2)解剖与固定：取新鲜的零下80℃冰箱中的南极磷虾解冻(冰冻的南极磷虾购买于辽宁市大连海洋渔业集团公司，捕捞于中国南极长城站附近(48.1区)。，摘取适量的南极磷虾复眼，放于2.5％戊二醛固定液中浸泡过夜，放于4℃冰箱中保存，后用PBS缓冲液冲洗后在解剖镜下进行解剖。去除南极磷虾复眼的角膜和晶椎细胞，使复眼中附着颗粒的部位暴露，然后将解剖完全的南极磷虾复眼放入Bouin’s固定液(Bouin’s固定液配制：将苦味酸、甲醛、冰乙酸按照体积比为16:6:1混合均匀)中固定过夜。
(3)脱水：首先将固定好的样品用流水冲洗，后依次放入35％的乙醇、50％的乙醇、75％的乙醇、85％的乙醇、95％的乙醇中分别浸泡1小时，最后移入100％的乙醇中浸泡1h，并重复两次。其中4℃下，75％的乙醇可用来保存样品。
(4)透明与透蜡：在室温下将样品放于二甲苯：乙醇＝1.2:1的混合溶液中洗涤2.5h后，放于100％二甲苯中洗涤2h，然后在60℃下将样品放于二甲苯：石蜡＝1.2:1的混合溶液中洗涤2.5h后，在相同的温度下放于100％国产石蜡中1.2h，并重复两次，再放于100％进口石蜡1.2h。
(5)包埋与修蜡：将处理好的南极磷虾的复眼置入融化的蜡液中央，待包埋组织的蜡液凝结成块后将蜡块修成1cm3大小的正方体(上下底平行，左右两边贴组织修)，然后将其固着于木块上。
(6)切片：将木块固定在切片机上，调节刀片和蜡块的距离以及角度；试切，当切到组织块的时候调节到10μm，用毛笔轻轻取下蜡带。
(7)将已经做好的带有南极磷虾复眼的石蜡切片和同样的载玻片切成1×2cm2的长方形小块，并用干净的保鲜膜包裹备用。然后将做好备用的样品分别插入不同的全新的市售透明吸管中，依次编好顺序后通过黄铜转移棒将其插入磁力计中进行磁力检测，设置检测温度为273K，对样品的磁性检测使用Quantum Design SQUID磁力计。
对比例1
取Y标准品50-120mg，用干净的保鲜膜包裹备用。然后将做好备用的样品分别插入不同的全新的市售透明吸管中，依次编好顺序后通过黄铜转移棒将其插入磁力计中进行磁力检测，设置检测温度为273K，对样品的磁性检测使用Quantum Design SQUID磁力计。磁性检测结果见图4，由图4可以得到Y标准品具有顺磁性。
对比例2
取Y2O3标准品50-120mg，用干净的保鲜膜包裹备用。然后将做好备用的样品分别插入不同的全新的市售透明吸管中，依次编好顺序后通过黄铜转移棒将其插入磁力计中进行磁力检测，设置检测温度为273K，对样品的磁性检测使用Quantum Design SQUID磁力计。磁性检测结果见图5，由图5可以得到Y2O3标准品具有顺磁性。
对比例3
取载玻片切成1×2cm2的长方形小块，并用干净的保鲜膜包裹备用。然后将做好备用的样品分别插入不同的全新的市售透明吸管中，依次编好顺序后通过黄铜转移棒将其插入磁力计中进行磁力检测，设置检测温度为273K，对样品的磁性检测使用Quantum DesignSQUID磁力计。磁性检测结果见图6，由图6可以得到载玻片不具有顺磁性。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种南极磷虾复眼的磁性检测方法，其特征在于：将南极磷虾复眼或复眼切片放入磁力计中进行磁性检测。
2.根据权利要求1所述的南极磷虾复眼的磁性检测方法，其特征在于：磁性检测的温度为270-275K。
3.根据权利要求1所述的南极磷虾复眼的磁性检测方法，其特征在于：磁性计为Quantum Design SQUID磁力计。
4.根据权利要求1所述的南极磷虾复眼的磁性检测方法，其特征在于：南极磷虾复眼切片的制备方法，所述方法包括将南极磷虾复眼在戊二醛溶液中浸泡、第一次冲洗、解剖、固定液进行固定、第二次冲洗、在乙醇梯度溶液中浸泡、洗涤、包埋、切片。
5.根据权利要求4所述的南极磷虾复眼的磁性检测方法，其特征在于：戊二醛的质量分数为2-3％，在戊二醛溶液中浸泡的时间为9-13h。
6.根据权利要求4所述的南极磷虾复眼的磁性检测方法，其特征在于：第一次冲洗的冲洗液为PBS缓冲液。
7.根据权利要求4所述的南极磷虾复眼的磁性检测方法，其特征在于：固定的固定液为Bouin′s固定液，Bouin′s固定液由苦味酸、甲醛、冰乙酸组成，苦味酸、甲醛、冰乙酸的体积比为14-16:4-6:1。
8.根据权利要求4所述的南极磷虾复眼的磁性检测方法，其特征在于：第二次冲洗利用流水进行冲洗。
9.根据权利要求4所述的南极磷虾复眼的磁性检测方法，其特征在于：乙醇梯度溶液的体积浓度依次为35％、50％、75％、85％、95％、100％，每个梯度浸泡的时间为0.8-1.2h。
10.根据权利要求1所述的南极磷虾复眼的磁性检测方法，其特征在于：洗涤的过程为先在二甲苯和乙醇的混合溶液中洗涤，然后在纯二甲苯溶液中洗涤，然后在二甲苯和石蜡的混合溶液中洗涤，最后在石蜡中洗涤；
优选的，二甲苯和乙醇的混合溶液中二甲苯和乙醇的体积比为0.8-1.2：1，在二甲苯和乙醇的混合溶液中室温的条件下，洗涤的时间为1.5-2.5h；优选的，在纯二甲苯溶液中室温的条件下，洗涤的时间为1.5-2.5h；优选的，二甲苯和石蜡的混合溶液中二甲苯和石蜡的体积比为0.8-1.2：1，在二甲苯和石蜡的混合溶液中55-65℃条件下，洗涤1.5-2.5h；优选的，在石蜡中55-65℃条件下洗涤的时间为2.5-3.5h。
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