CN110129202A - 活菌剂深层发酵生产工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了活菌剂深层发酵生产工艺，包括以下步骤：S1，菌种的制作；S2，一、二、三级种子制作；S3，一、二、三级种子罐扩繁生产制作；S4，发酵罐生产制作；S5，灌装及包装：将发酵液经过滤收集储罐中，按灌装机标准操作进行分装，每瓶1000ml等不同规格后，进行贴标装箱每箱12瓶规格，放入报告单、合格证封箱打包。本发明应用在农用种植及环保净化污水除菌等方面，能够提高农作物的营养吸收，抑制病虫害的繁殖，降解有害物质，利用深层发酵进行生产，对产品含有的激活有益活菌互补活力成份，活菌总数旺盛，持久性长，对改良土质板结、重芷有明显改善作用。
Description
技术领域
本发明涉及活菌剂技术领域，尤其涉及活菌剂深层发酵生产工艺。
背景技术
目前在对农作物种植时，需要经常对土壤进行浇灌并松土，土壤在一端时间不浇灌松土的情况下，土质很容易出现板结，重芷现象，影响农作物生长，并且营养吸收率不高，产量得不到提高，目前出现了使用活菌剂来进行改善，但是不能使产品中的有益活菌长期的保持，达不到使用效果。
发明内容
基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了活菌剂深层发酵生产工艺。
本发明提出的活菌剂深层发酵生产工艺，包括以下步骤：
S1，菌种的制作：
(1)培养基制备：准备牛肉膏0.02％、酵母膏0.02％、蛋白胨0.03％、食盐0.15％、糖蜜0.4-0.5％、VB0.004％、余量为蒸馏水、琼脂0.5％；
(2)精确称取糖蜜加水进行加热充分溶解，将其他原辅料加入共同混合溶解，分装进灭菌后的空白试管中，密封试管口每支三分之一装量、压力0.8-0.15MPA，在110-121度进行灭菌30-40分钟，取出，摆成斜式冷却固凝备用；
(3)在无菌条件下将保存菌种接种于空白斜面培养基上，接种量为1：10适宜；培养温度25-28度、相对湿度在45-65％条件下培养7-10天，待斜面表面转变透亮、棕褐色，杂菌污染、即可做菌种备用；
S2，一、二、三级种子制作：
(1)培养基制备：准备牛肉膏0.03％、酵母膏0.03％、蛋白胨0.06％、食盐0.2％、糖蜜0.6％、VB0.004％、磷酸二氢钾0.02％、硫酸镁0.15％；
(2)精确称取糖蜜加水进行加热充分溶解，将其他原辅料加入共同混合溶解，灭菌后分装在空白三角摇瓶中，装量三分之二培养基溶液，压力0.8-0.15MPA，在110-121度进行灭菌30-40分钟，冷却备用；
(3)在无菌条件下将培养好斜面菌接种于空白摇瓶培养基中进行扩繁，接种量为5％适宜，在旋转式摇床上培养培养温度20-28度、相对湿度在45-65％条件下，振荡培养周期3-6天，外观表面转变透亮、棕褐色液体，杂菌污染、即可做扩繁生产备用；
S3，一、二、三级种子罐扩繁生产制作：
(1)培养基制备：准备牛肉膏0.04％、酵母膏0.03％、蛋白胨0.06％、食盐0.2％、糖蜜0.6％、VB0.003％、磷酸二氢钾0.03％、硫酸镁0.03％；
(2)精确称取糖蜜加水进行加热充分溶解，将其他原辅料加入共同混合溶解，分装灭菌后的空白一、二、三级种子罐中，装量三分之二培养基溶液，压力0.05MPA，空气压力0.08MPA、在121度进行灭菌30分钟，冷却备用；
(3)实消及培养过程：在火焰保护半无菌条件下将培养好摇瓶菌接种于种子罐培养基中进行扩繁，接种量为10％；接种后快速关闭罐盖，升温培养温度26-28度、罐压0.05MPA、通气搅拌比1：0.6条件下培养周期5-6天，待菌液浓度体积占培养基50％以上，外观表面转变透亮、棕褐色液体，PH4.5左右、杂菌污染、即可转入发酵罐生产备用；
S4，发酵罐生产制作：
(1)培养基制备：准备牛肉膏0.04％、酵母膏0.03％、蛋白胨0.06％、食盐0.2％、糖蜜0.6-0.8％、VB0.005％、磷酸二氢钾0.03％、硫酸镁0.03％、水量按培养基体积进行补足；
(2)精确称取糖蜜加水进行加热充分溶解，将其他原辅料加入共同混合溶解，通过物料管道打入灭菌后的空白发酵罐中，装量三分之二培养基溶液，压力0.05MPA，空气压力0.08MPA、在121度进行培养基消毒30分钟，冷却26度左右备用；
(3)实消及培养过程：在火焰保护半无菌条件下将培养好的种子罐菌液接种于种子罐，接种量为10％适宜，搅拌20-30分，升温培养温度26-28度、罐压0.05MPA、通气搅拌比1：0.6条件下培养周期5-6天，待菌液浓度体积占培养基5％以上，外观表面转变透亮、深棕褐色液体，PH3.5-4.0左右，检测活菌总数大于或等于2亿
*10/ml、气味刺鼻酸甜、杂菌污染、即可终止培养进行灌装备用；
S5，灌装及包装：将发酵液经过滤收集储罐中，按灌装机标准操作进行分装，每瓶1000ml等不同规格后，进行贴标装箱每箱12瓶规格，放入报告单、合格证封箱打包。
优选地，所述旋转式摇床在培养过程中转数在250转/分钟以上。
优选地，所述容器具、管路、阀门、输液泵应采取优质耐腐蚀材质。
本发明制作方法简单，其应用在农用种植及环保净化污水除菌等方面，能够提高农作物的营养吸收，抑制病虫害的繁殖，降解有害物质，利用深层发酵进行生产，对产品含有的激活有益活菌互补活力成份，活菌总数旺盛，持久性长，对改良土质板结、重芷有明显改善作用。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步解说。
本发明提出的活菌剂深层发酵生产工艺，包括以下步骤：
实施例一：
S1，菌种的制作：
(1)培养基制备：准备牛肉膏0.02％、酵母膏0.02％、蛋白胨0.03％、食盐0.15％、糖蜜0.4-0.5％、VB0.004％、余量为蒸馏水、琼脂0.5％；
(2)精确称取糖蜜加水进行加热充分溶解，将其他原辅料加入共同混合溶解，分装进灭菌后的空白试管中，密封试管口每支三分之一装量、压力0.8MPA，在110度进行灭菌30分钟，取出，摆成斜式冷却固凝备用；
(3)在无菌条件下将保存菌种接种于空白斜面培养基上，接种量为1：10适宜；培养温度25度、相对湿度在45％条件下培养7天，待斜面表面转变透亮、棕褐色，杂菌污染、即可做菌种备用
S2，一、二、三级种子制作：
(1)培养基制备：准备牛肉膏0.03％、酵母膏0.03％、蛋白胨0.06％、食盐0.2％、糖蜜0.6％、VB0.004％、磷酸二氢钾0.02％、硫酸镁0.15％；
(2)精确称取糖蜜加水进行加热充分溶解，将其他原辅料加入共同混合溶解，灭菌后分装在空白三角摇瓶中，装量三分之二培养基溶液，压力0.8MPA，在110度进行灭菌30分钟，冷却备用；
(3)在无菌条件下将培养好斜面菌接种于空白摇瓶培养基中进行扩繁，接种量为5％适宜，在旋转式摇床上培养培养温度20度、相对湿度在45％条件下，振荡培养周期3天，外观表面转变透亮、棕褐色液体，杂菌污染、即可做扩繁生产备用；
S3，一、二、三级种子罐扩繁生产制作：
(1)培养基制备：准备牛肉膏0.04％、酵母膏0.03％、蛋白胨0.06％、食盐0.2％、糖蜜0.6％、VB0.003％、磷酸二氢钾0.03％、硫酸镁0.03％；
(2)精确称取糖蜜加水进行加热充分溶解，将其他原辅料加入共同混合溶解，分装灭菌后的空白一、二、三级种子罐中，装量三分之二培养基溶液，压力0.05MPA，空气压力0.08MPA、在121度进行灭菌30分钟，冷却备用；
(3)实消及培养过程：在火焰保护半无菌条件下将培养好摇瓶菌接种于种子罐培养基中进行扩繁，接种量为10％；接种后快速关闭罐盖，升温培养温度26-28度、罐压0.05MPA、通气搅拌比1：0.6条件下培养周期5-6天，待菌液浓度体积占培养基50％以上，外观表面转变透亮、棕褐色液体，PH4.5左右、杂菌污染、即可转入发酵罐生产备用；
S4，发酵罐生产制作：
(1)培养基制备：准备牛肉膏0.04％、酵母膏0.03％、蛋白胨0.06％、食盐0.2％、糖蜜0.6-0.8％、VB0.005％、磷酸二氢钾0.03％、硫酸镁0.03％、水量按培养基体积进行补足；
(2)精确称取糖蜜加水进行加热充分溶解，将其他原辅料加入共同混合溶解，通过物料管道打入灭菌后的空白发酵罐中，装量三分之二培养基溶液，压力0.05MPA，空气压力0.08MPA、在121度进行培养基消毒30分钟，冷却至26度备用；
(3)实消及培养过程：在火焰保护半无菌条件下将培养好的种子罐菌液接种于种子罐，接种量为10％适宜，搅拌20-30分，升温培养温度26-28度、罐压0.05MPA、通气搅拌比1：0.6条件下培养周期5-6天，待菌液浓度体积占培养基5％以上，外观表面转变透亮、深棕褐色液体，PH3.5-4.0左右，检测活菌总数大于或等于2亿
*10/ml、气味刺鼻酸甜、杂菌污染、即可终止培养进行灌装备用；
S5，灌装及包装：将发酵液经过滤收集储罐中，按灌装机标准操作进行分装，每瓶1000ml等不同规格后，进行贴标装箱每箱12瓶规格，放入报告单、合格证封箱打包。
实施例二：S1，菌种的制作：
(1)培养基制备：准备牛肉膏0.02％、酵母膏0.02％、蛋白胨0.03％、食盐0.15％、糖蜜0.4-0.5％、VB0.004％、余量为蒸馏水、琼脂0.5％；
(2)精确称取糖蜜加水进行加热充分溶解，将其他原辅料加入共同混合溶解，分装进灭菌后的空白试管中，密封试管口每支三分之一装量、压力0.11MPA，在115度进行灭菌35分钟，取出，摆成斜式冷却固凝备用；
(3)在无菌条件下将保存菌种接种于空白斜面培养基上，接种量为1：10适宜；培养温度26度、相对湿度在55％条件下培养8天，待斜面表面转变透亮、棕褐色，杂菌污染、即可做菌种备用；
S2，一、二、三级种子制作：
(1)培养基制备：准备牛肉膏0.03％、酵母膏0.03％、蛋白胨0.06％、食盐0.2％、糖蜜0.6％、VB0.004％、磷酸二氢钾0.02％、硫酸镁0.15％；
(2)精确称取糖蜜加水进行加热充分溶解，将其他原辅料加入共同混合溶解，灭菌后分装在空白三角摇瓶中，装量三分之二培养基溶液，压力0.11MPA，在115度进行灭菌35分钟，冷却备用；
(3)在无菌条件下将培养好斜面菌接种于空白摇瓶培养基中进行扩繁，接种量为5％适宜，在旋转式摇床上培养培养温度25度、相对湿度在55％条件下，振荡培养周期4天，外观表面转变透亮、棕褐色液体，杂菌污染、即可做扩繁生产备用；
S3，一、二、三级种子罐扩繁生产制作：
(1)培养基制备：准备牛肉膏0.04％、酵母膏0.03％、蛋白胨0.06％、食盐0.2％、糖蜜0.6％、VB0.003％、磷酸二氢钾0.03％、硫酸镁0.03％；
(2)精确称取糖蜜加水进行加热充分溶解，将其他原辅料加入共同混合溶解，分装灭菌后的空白一、二、三级种子罐中，装量三分之二培养基溶液，压力0.05MPA，空气压力0.08MPA、在121度进行灭菌30分钟，冷却备用；
(3)实消及培养过程：在火焰保护半无菌条件下将培养好摇瓶菌接种于种子罐培养基中进行扩繁，接种量为10％；接种后快速关闭罐盖，升温培养温度26-28度、罐压0.05MPA、通气搅拌比1：0.6条件下培养周期5-6天，待菌液浓度体积占培养基50％以上，外观表面转变透亮、棕褐色液体，PH4.5左右、杂菌污染、即可转入发酵罐生产备用；
S4，发酵罐生产制作：
(1)培养基制备：准备牛肉膏0.04％、酵母膏0.03％、蛋白胨0.06％、食盐0.2％、糖蜜0.6-0.8％、VB0.005％、磷酸二氢钾0.03％、硫酸镁0.03％、水量按培养基体积进行补足；
(2)精确称取糖蜜加水进行加热充分溶解，将其他原辅料加入共同混合溶解，通过物料管道打入灭菌后的空白发酵罐中，装量三分之二培养基溶液，压力0.05MPA，空气压力0.08MPA、在121度进行培养基消毒30分钟，冷却26度左右备用；
(3)实消及培养过程：在火焰保护半无菌条件下将培养好的种子罐菌液接种于种子罐，接种量为10％适宜，搅拌20-30分，升温培养温度26-28度、罐压0.05MPA、通气搅拌比1：0.6条件下培养周期5-6天，待菌液浓度体积占培养基5％以上，外观表面转变透亮、深棕褐色液体，PH3.5-4.0左右，检测活菌总数大于或等于2亿*10/ml、气味刺鼻酸甜、杂菌污染、即可终止培养进行灌装备用；
S5，灌装及包装：将发酵液经过滤收集储罐中，按灌装机标准操作进行分装，每瓶1000ml等不同规格后，进行贴标装箱每箱12瓶规格，放入报告单、合格证封箱打包。
实施例三：
S1，菌种的制作：
(1)培养基制备：准备牛肉膏0.02％、酵母膏0.02％、蛋白胨0.03％、食盐0.15％、糖蜜0.4-0.5％、VB0.004％、余量为蒸馏水、琼脂0.5％；
(2)精确称取糖蜜加水进行加热充分溶解，将其他原辅料加入共同混合溶解，分装进灭菌后的空白试管中，密封试管口每支三分之一装量、压力0.15MPA，在121度进行灭菌40分钟，取出，摆成斜式冷却固凝备用；
(3)在无菌条件下将保存菌种接种于空白斜面培养基上，接种量为1：10适宜；培养温度28度、相对湿度在65％条件下培养10天，待斜面表面转变透亮、棕褐色，杂菌污染、即可做菌种备用；
S2，一、二、三级种子制作：
(1)培养基制备：准备牛肉膏0.03％、酵母膏0.03％、蛋白胨0.06％、食盐0.2％、糖蜜0.6％、VB0.004％、磷酸二氢钾0.02％、硫酸镁0.15％；
(2)精确称取糖蜜加水进行加热充分溶解，将其他原辅料加入共同混合溶解，灭菌后分装在空白三角摇瓶中，装量三分之二培养基溶液，压力0.15MPA，在121度进行灭菌40分钟，冷却备用；
(3)在无菌条件下将培养好斜面菌接种于空白摇瓶培养基中进行扩繁，接种量为5％适宜，在旋转式摇床上培养培养温度28度、相对湿度在65％条件下，振荡培养周期6天，外观表面转变透亮、棕褐色液体，杂菌污染、即可做扩繁生产备用；
S3，一、二、三级种子罐扩繁生产制作：
(1)培养基制备：准备牛肉膏0.04％、酵母膏0.03％、蛋白胨0.06％、食盐0.2％、糖蜜0.6％、VB0.003％、磷酸二氢钾0.03％、硫酸镁0.03％；
(2)精确称取糖蜜加水进行加热充分溶解，将其他原辅料加入共同混合溶解，分装灭菌后的空白一、二、三级种子罐中，装量三分之二培养基溶液，压力0.05MPA，空气压力0.08MPA、在121度进行灭菌30分钟，冷却备用；
(3)实消及培养过程：在火焰保护半无菌条件下将培养好摇瓶菌接种于种子罐培养基中进行扩繁，接种量为10％；接种后快速关闭罐盖，升温培养温度26-28度、罐压0.05MPA、通气搅拌比1：0.6条件下培养周期5-6天，待菌液浓度体积占培养基50％以上，外观表面转变透亮、棕褐色液体，PH4.5左右、杂菌污染、即可转入发酵罐生产备用；
S4，发酵罐生产制作：
(1)培养基制备：准备牛肉膏0.04％、酵母膏0.03％、蛋白胨0.06％、食盐0.2％、糖蜜0.6-0.8％、VB0.005％、磷酸二氢钾0.03％、硫酸镁0.03％、水量按培养基体积进行补足；
(2)精确称取糖蜜加水进行加热充分溶解，将其他原辅料加入共同混合溶解，通过物料管道打入灭菌后的空白发酵罐中，装量三分之二培养基溶液，压力0.05MPA，空气压力0.08MPA、在121度进行培养基消毒30分钟，冷却26度左右备用；
(3)实消及培养过程：在火焰保护半无菌条件下将培养好的种子罐菌液接种于种子罐，接种量为10％适宜，搅拌20-30分，升温培养温度26-28度、罐压0.05MPA、通气搅拌比1：0.6条件下培养周期5-6天，待菌液浓度体积占培养基5％以上，外观表面转变透亮、深棕褐色液体，PH3.5-4.0左右，检测活菌总数大于或等于2亿
*10/ml、气味刺鼻酸甜、杂菌污染、即可终止培养进行灌装备用；
S5，灌装及包装：将发酵液经过滤收集储罐中，按灌装机标准操作进行分装，每瓶1000ml等不同规格后，进行贴标装箱每箱12瓶规格，放入报告单、合格证封箱打包
本发明中，所述旋转式摇床在培养过程中转数在250转/分钟以上，与菌液直接接触的设备，容器具、管路、阀门、输液泵应采取优质耐腐蚀材质，管道的安装应尽量减少焊接处，设备的选型应符合生产要求，易于清洗、消毒或灭菌后于生产操作和维护保养，能防止差错和减少污染；与菌液直接接触的设备表面应光洁，平整、易清洁或耐腐蚀，过滤器材质不应吸附液体组合和释放物，禁止使用含有石棉的过滤器材质，设备所有的润滑剂，冷却剂不应对液体菌液造成污染。
本发明制作方法简单，其应用在农用种植及环保净化污水除菌等方面，能够提高农作物的营养吸收，抑制病虫害的繁殖，降解有害物质，利用深层发酵进行生产，对产品含有的激活有益活菌互补活力，活菌总数旺盛，持久性长，对改良土质板结、重芷有明显改善作用。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.活菌剂深层发酵生产工艺，其特征在于，包括以下步骤：
S1，菌种的制作：
(1)培养基制备：准备牛肉膏0.02％、酵母膏0.02％、蛋白胨0.03％、食盐0.15％、糖蜜0.4-0.5％、VB0.004％、余量为蒸馏水、琼脂0.5％；
(2)精确称取糖蜜加水进行加热充分溶解，将其他原辅料加入共同混合溶解，分装进灭菌后的空白试管中，密封试管口每支三分之一装量、压力0.8-0.15MPA，在110-121度进行灭菌30-40分钟，取出，摆成斜式冷却固凝备用；
(3)在无菌条件下将保存菌种接种于空白斜面培养基上，接种量为1：10适宜；培养温度25-28度、相对湿度在45-65％条件下培养7-10天，待斜面表面转变透亮、棕褐色，杂菌污染、即可做菌种备用；
S2，一、二、三级种子制作：
(1)培养基制备：准备牛肉膏0.03％、酵母膏0.03％、蛋白胨0.06％、食盐0.2％、糖蜜0.6％、VB0.004％、磷酸二氢钾0.02％、硫酸镁0.15％；
(2)精确称取糖蜜加水进行加热充分溶解，将其他原辅料加入共同混合溶解，灭菌后分装在空白三角摇瓶中，装量三分之二培养基溶液，压力0.8-0.15MPA，在110-121度进行灭菌30-40分钟，冷却备用；
(3)在无菌条件下将培养好斜面菌接种于空白摇瓶培养基中进行扩繁，接种量为5％适宜，在旋转式摇床上培养培养温度20-28度、相对湿度在45-65％条件下，振荡培养周期3-6天，外观表面转变透亮、棕褐色液体，杂菌污染、即可做扩繁生产备用；
S3，一、二、三级种子罐扩繁生产制作：
(1)培养基制备：准备牛肉膏0.04％、酵母膏0.03％、蛋白胨0.06％、食盐0.2％、糖蜜0.6％、VB0.003％、磷酸二氢钾0.03％、硫酸镁0.03％；
(2)精确称取糖蜜加水进行加热充分溶解，将其他原辅料加入共同混合溶解，分装灭菌后的空白一、二、三级种子罐中，装量三分之二培养基溶液，压力0.05MPA，空气压力0.08MPA、在121度进行灭菌30分钟，冷却备用；
(3)实消及培养过程：在火焰保护半无菌条件下将培养好摇瓶菌接种于种子罐培养基中进行扩繁，接种量为10％；接种后快速关闭罐盖，升温培养温度26-28度、罐压0.05MPA、通气搅拌比1：0.6条件下培养周期5-6天，待菌液浓度体积占培养基50％以上，外观表面转变透亮、棕褐色液体，PH4.5左右、杂菌污染、即可转入发酵罐生产备用；
S4，发酵罐生产制作：
(1)培养基制备：准备牛肉膏0.04％、酵母膏0.03％、蛋白胨0.06％、食盐0.2％、糖蜜0.6-0.8％、VB0.005％、磷酸二氢钾0.03％、硫酸镁0.03％、水量按培养基体积进行补足；
(2)精确称取糖蜜加水进行加热充分溶解，将其他原辅料加入共同混合溶解，通过物料管道打入灭菌后的空白发酵罐中，装量三分之二培养基溶液，压力0.05MPA，空气压力0.08MPA、在121度进行培养基消毒30分钟，冷却26度左右备用；
(3)实消及培养过程：在火焰保护半无菌条件下将培养好的种子罐菌液接种于种子罐，接种量为10％适宜，搅拌20-30分，升温培养温度26-28度、罐压0.05MPA、通气搅拌比1：0.6条件下培养周期5-6天，待菌液浓度体积占培养基5％以上，外观表面转变透亮、深棕褐色液体，PH3.5-4.0左右，检测活菌总数大于或等于2亿*10/ml、气味刺鼻酸甜、杂菌污染、即可终止培养进行灌装备用；
S5，灌装及包装：将发酵液经过滤收集储罐中，按灌装机标准操作进行分装，每瓶1000ml等不同规格后，进行贴标装箱每箱12瓶规格，放入报告单、合格证封箱打包。
2.根据权利要求1所述的活菌剂深层发酵生产工艺，其特征在于，所述旋转式摇床在培养过程中转数在250转/分钟以上。
3.根据权利要求1所述的活菌剂深层发酵生产工艺，其特征在于，所述容器具、管路、阀门、输液泵应采取优质耐腐蚀材质。
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Citations (3)
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|---|---|---|---|---|
| GB819336A (en) * | 1956-11-21 | 1959-09-02 | Roland Frank Beers Jr | Submerged fermentation process |
| CN1651568A (zh) * | 2004-02-03 | 2005-08-10 | 李勇 | 一种食用菌液体菌种深层发酵工艺 |
| WO2017197887A1 (zh) * | 2016-05-17 | 2017-11-23 | 河南巨龙生物工程股份有限公司 | 大肠埃希氏菌JLTrp及其在生产L-色氨酸中的应用 |
-
2019
- 2019-05-23 CN CN201910435570.6A patent/CN110129202A/zh active Pending
Patent Citations (3)
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|---|---|---|---|---|
| GB819336A (en) * | 1956-11-21 | 1959-09-02 | Roland Frank Beers Jr | Submerged fermentation process |
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|---|
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