CN110115963A - 一种引物合成用偶联活化剂的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种引物合成用偶联活化剂的制备方法，包括如下步骤：步骤S1、将冰水浴容器的承载底板套设于磁力搅拌器上；步骤S2、向锥形瓶中加入80mL吡啶；步骤S3、往冰水浴槽内加入冰水混合物；步骤S4、将84mL三氟乙酸缓慢滴入锥形瓶；步骤S5、将锥形瓶从安装板的下方取出；步骤S6、冷却；步骤S7、向乙腈中加入N‑甲基咪唑配成溶液；步骤S8、往锥形瓶中倒入少量步骤S7得到的溶液溶解固体，溶解后倒入步骤S7剩余的溶液中，并加入分子筛，封口膜封存；步骤S9、测定水分含量。本发明制得的偶联活化剂含有三氟乙酸吡啶和N‑甲基咪唑等有效活化成分，二者复合具有协同效应，具有偶联效率高、引物突变率低、引物稳定及产量高等优点，适用于内单合成。

Description

一种引物合成用偶联活化剂的制备方法
技术领域
本发明属于生物高分子材料技术领域，具体地，涉及一种引物合成用偶联活化剂的制备方法。
背景技术
目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法，具有高效、快速的偶联以及起始反应物比较稳定的特点，主要原理是溶液中的亚磷酰胺单体通过缩合反应形成3'→5'磷酸二酯键，连接到固相载体(CPG或树脂)上。并由待合成引物的3’端向5’端依次延伸，直到序列的最后一个5'碱基连接上后合成结束。整个合成过程仪器自动完成，每个循环分为脱保护、活化、偶合、盖帽(封闭)、氧化五个步骤。
5-乙硫基四氮唑(5-(Ethylthio)-1H-tetrazole)，分子式C3H6N4S，分子量130.17。是一种医药、农药中间体，常应用于RNA活性剂和DNA合成活性基因的保护剂。在固相亚磷酰胺三酯法合成DNA的活化步骤中：亚磷酰胺单体在缩合之前与5-乙硫基四氮唑混合并进入合成柱，5-乙硫基四氮唑给3’磷酸上二异丙胺基的N原子提供一个质子，质子化的二异丙胺是一个良好的游离基团，与5-乙硫基四氮唑形成核苷亚磷酰胺活性中间体。
5-乙硫基四氮唑作为活性剂在合成引物的过程中，存在偶联效率低、引发物易突变等缺陷，影响产物偶联活化剂的质量。
发明内容
本发明的目的在于提供一种引物合成用偶联活化剂的制备方法，用于替代传统的5-乙硫基四氮唑，不仅具有偶联效率高、引物突变率低、引物稳定及产量高等优点，同时可达到节约成本的目的。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
一种引物合成用偶联活化剂的制备方法，包括如下步骤：
步骤S1、将冰水浴容器的承载底板由上至下套设于磁力搅拌器上，承载底板接触实验台面，调节电动液压推杆，使得支撑板与磁力搅拌器的盘面刚好接触，但不会对盘面造成压力；
步骤S2、向带有磁性转子的锥形瓶中加入80mL吡啶，将锥形瓶从卡盘的下面由第二圆形通孔伸入进去，驱动卡爪在卡盘的表面向中间靠拢，直至卡紧锥形瓶，将四氟恒压滴液漏斗装在锥形瓶上，保持密闭；
步骤S3、往冰水浴槽内加入冰水混合物，先加入一半的高度，旋转螺纹杆上的把手或驱动其连接的电机，使螺纹杆旋转，使安装板上下移动，直至锥形瓶瓶身的4/5处于冰水浴中；
步骤S4、用玻璃漏斗向四氟恒压滴液漏斗中加入84mL的三氟乙酸，启动磁力搅拌器，然后使气球密封锥形瓶上端，旋转活塞，使三氟乙酸缓慢滴入锥形瓶，控制1h滴加完毕，滴完后继续磁力搅拌反应2h；
步骤S5、反应结束后，关闭磁力搅拌器，先升高安装板的高度，再松开卡爪，将锥形瓶从安装板的下方取出，缓慢晃动锥形瓶；
步骤S6、继续冷却，待瓶中产物完全凝结，瓶温降至室温；
步骤S7、向4L乙腈中加入40mL的N-甲基咪唑配成溶液，备用；
步骤S8、往步骤S6的锥形瓶中倒入1/5的步骤S7得到的溶液，利用磁力搅拌器，溶解锥形瓶中的固体，溶解后全部倒入步骤S7剩余的溶液中，并加入分子筛，封口膜封存；
步骤S9、利用水分测定仪，测其水分含量，不大于20ppm为合格产物。
进一步地，所述冰水浴容器包括承载装置、冰水浴装置和固定装置，冰水浴装置安装于承载装置上，固定装置安装于冰水浴装置上；
承载装置包括承载底板，承载底板的表面中心位置开有第一圆形通孔，承载底板的上表面四个顶角处固定有弹簧安装筒，弹簧安装筒内安装有弹簧；承载底板的上表面还安装有两个相对设置的电动液压推杆；
冰水浴装置包括支撑板，电动液压推杆的另一端安装于支撑板的下表面，弹簧的另一端也安装于支撑板的下表面；支撑板的上表面中心位置固定有冰水浴槽，冰水浴槽用于盛放冰水，冰水浴槽的两个相对侧壁的相对表面开有限位槽，限位槽沿竖直方向设置；冰水浴槽的底板上表面安装有两根相对设置的螺纹杆，螺纹杆上固定有第一齿轮，其中一根螺纹杆的上端固定有把手或连接有电机；冰水浴槽的底板上表面中心位置通过轴承安装有一轴杆，轴杆上固定有第二齿轮，第二齿轮位于两个第一齿轮之间且与两个第一齿轮啮合；
固定装置包括三爪卡盘，三爪卡盘包括卡盘和安装于卡盘上的三个卡爪，卡盘的表面圆心位置开有第二圆形通孔，卡盘的周侧外表面设有两块安装板，安装板的表面开有螺纹通孔，螺纹通孔与螺纹杆螺纹配合，安装板的端侧表面固定有限位条，限位条与冰水浴槽侧壁开的限位槽滑动配合，固定装置通过安装板安装于冰水浴装置上。
进一步地，所述第一圆形通孔的直径大于磁力搅拌器盘面的直径。
进一步地，所述电动液压推杆的动力杆一端安装于承载底板上，活塞杆一端安装于支撑板的下表面。
进一步地，所述螺纹杆通过轴承安装于冰水浴槽的底板上。
进一步地，所述第二圆形通孔的直径大于锥形瓶瓶身最小直径且小于锥形瓶瓶身最大直径。
本发明的有益效果：
本发明制备得到的偶联活化剂含有三氟乙酸吡啶和N-甲基咪唑等有效活化成分，二者复合具有协同增效效应，具有偶联效率高、引物突变率低、引物稳定及产量高等优点，适用于内单合成；
本发明采用配套的冰水浴装置辅助反应的进行，通过支撑板与磁力搅拌器的盘面刚好接触，但不会对盘面造成压力，由于冰水浴容器内装有冰水混合物，再加上锥形瓶和反应物的质量，如果直接将整个反应体系放置于磁力搅拌器的盘面上，会对盘面造成很大的压力，不仅影响磁力搅拌的效果，而且会影响磁力搅拌器的使用寿命，通过如此设计，既能够保证与盘面接触，又不会对盘面造成过大的压力，可以实现高效磁力搅拌的同时保护好磁力搅拌器；通过旋转把手可实现安装板的上下移动，直至锥形瓶瓶身的4/5处于冰水浴中，能够使得锥形瓶最大限度位于冰水浴内，三爪卡盘夹紧锥形瓶，可使反应稳定进行；按照此进行反应，当需要继续补加冰块的时候，缓缓加入冰块的同时缓缓升高安装板的高度，如此不仅可保证反应物最大程度处于冰浴状态，还可避免冰块的加入使得水位升高，掺进锥形瓶，影响反应的进行；通过冰水浴容器的辅助反应进行，可以快捷调节、最大限度使锥形瓶位于冰水浴中，有利于反应的高效进行，提高产物的质量。
附图说明
为了便于本领域技术人员理解，下面结合附图对本发明作进一步的说明。
图1为本发明制备过程中三氟乙酸和吡啶的反应方程式；
图2为本发明制备过程中用到的冰水浴容器的结构示意图；
图3为本发明冰水浴装置的承载装置的结构示意图；
图4为图3的局部结构示意图；
图5为本发明冰水浴容器的冰水浴装置的结构示意图；
图6为本发明冰水浴容器的固定装置的结构示意图；
图7为图6的局部结构示意图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
一种引物合成用偶联活化剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)配置前准备工作
a、准备所需的500mL玻璃锥形瓶多个并做好编号，玻璃漏斗，四氟恒压滴液漏斗，冰水浴容器；
b、准备所需的三氟乙酸，吡啶，N-甲基咪唑和乙腈；一个适当量程的电子天平，磁力搅拌器和真空干燥箱，烘箱温度设置在40-45℃，适当的气球(保持锥形瓶上端密封即可，也可使用其他东西替代)，铁架台；
c、清洗所需的锥形瓶，玻璃量筒，四氟恒压滴液漏斗，玻璃漏斗，保证清洁干净，将准备好的锥形瓶中加入一个带有磁性的转子，并记录此时锥形瓶的质量；
(2)配置反应阶段
a、将承载底板11由上至下套设于磁力搅拌器上，承载底板11接触实验台面，调节电动液压推杆15，使得支撑板21与磁力搅拌器的盘面刚好接触，但不会对盘面造成压力；
b、将准备好的带有磁性转子的锥形瓶中加入80mL吡啶，将锥形瓶从卡盘31的下面由第二圆形通孔33伸入进去，驱动卡爪32在卡盘31的表面向中间靠拢，直至卡紧锥形瓶，将四氟恒压滴液漏斗装在锥形瓶上，保持密闭；
c、往冰水浴槽22内加入冰水混合物，先加入一半的高度，旋转螺纹杆24上的把手26或驱动其连接的电机，使螺纹杆24旋转，使安装板34上下移动，直至锥形瓶瓶身的4/5处于冰水浴中；
d、用玻璃漏斗向四氟恒压滴液漏斗中加入84mL的三氟乙酸，启动磁力搅拌器，然后使气球密封锥形瓶上端，旋转活塞，使三氟乙酸缓慢滴入锥形瓶，控制1h滴加完毕，滴完后继续磁力搅拌反应2h；
e、反应结束后，关闭磁力搅拌器，先升高安装板34的高度，再松开卡爪32，将锥形瓶从安装板34的下方取出，缓慢晃动锥形瓶；
f、继续冷却，待瓶中产物完全凝结，瓶温降至室温；
反应方程式(如图1所示)
(3)干燥阶段
将凝结后的锥形瓶，瓶盖打开，放在40-45℃的真空干燥箱内干燥2小时即可(可适量加长干燥时间，看瓶子中固体的形状)，拿出后盖上对应瓶盖，记录质量；
(4)溶解装瓶
a、利用干燥时间，向4L乙腈中加入40mL的N-甲基咪唑，溶解完全后得到N-甲基咪唑-乙腈溶液；
b、往步骤(3)的锥形瓶中倒入1/5的上述N-甲基咪唑-乙腈溶液，利用磁力搅拌器，溶解锥形瓶中的固体，溶解后全部倒入上述剩余的N-甲基咪唑-乙腈溶液中，并加入分子筛(除水)，封口膜封存，继续溶解重复此步骤；
(5)检测阶段
a、水分测定：利用水分测定仪，测其水分含量，不大于20ppm可用；
b、利用之前称量所得数据，将各瓶中固体的净重计算出来，看净重是否有异常，对于异常数据，着重跟进合成质量。
请参阅图2-7所示，冰水浴容器，如图2所示，包括承载装置1、冰水浴装置2和固定装置3，冰水浴装置2安装于承载装置1上，固定装置3安装于冰水浴装置2上；
如图3所示，承载装置1包括承载底板11，承载底板11的表面中心位置开有第一圆形通孔12，第一圆形通孔12的直径大于磁力搅拌器盘面的直径；承载底板11的上表面四个顶角处固定有弹簧安装筒13，弹簧安装筒13内安装有弹簧14；承载底板11的上表面还安装有两个相对设置的电动液压推杆15，电动液压推杆15的动力杆一端安装于承载底板11上，活塞杆一端安装于冰水浴装置2上；
如图4、5所示，冰水浴装置2包括支撑板21，电动液压杆15的活塞杆一端安装于支撑板21的下表面，弹簧14的另一端也安装于支撑板21的下表面；支撑板21的上表面中心位置固定有冰水浴槽22，冰水浴槽22用于盛放冰水，冰水浴槽22的两个相对侧壁的相对表面开有限位槽23，限位槽23沿竖直方向设置；冰水浴槽22的底板上表面安装有两根相对设置的螺纹杆24，螺纹杆24通过轴承安装于冰水浴槽22的底板上，螺纹杆24上固定有第一齿轮25，其中一根螺纹杆24的上端固定有把手26或连接有电机，旋转把手26或者启动电机即可驱动螺纹杆24旋转；冰水浴槽22的底板上表面中心位置通过轴承安装有一轴杆，轴杆上固定有第二齿轮27，第二齿轮27位于两个第一齿轮25之间且与两个第一齿轮2啮合；
如图6、7所示，固定装置3包括三爪卡盘，三爪卡盘包括卡盘31和安装于卡盘31上的三个卡爪32，卡盘31的表面圆心位置开有第二圆形通孔33，第二圆形通孔33的直径大于锥形瓶瓶身最小直径且小于锥形瓶瓶身最大直径；卡盘31的周侧外表面设有两块安装板34，安装板34的表面开有螺纹通孔3401，螺纹通孔3401与螺纹杆24螺纹配合，安装板34的端侧表面固定有限位条3402，限位条3402与冰水浴槽22侧壁开的限位槽23滑动配合，固定装置3通过安装板34安装于冰水浴装置2上；
该冰水浴容器的工作原理及方式：
第一步：将承载底板11由上至下套设于磁力搅拌器上，承载底板11接触实验台面，调节电动液压推杆15，使得支撑板21与磁力搅拌器的盘面刚好接触，但不会对盘面造成压力；由于冰水浴容器内装有冰水混合物，再加上锥形瓶和反应物的质量，如果直接将整个反应体系放置于磁力搅拌器的盘面上，会对盘面造成很大的压力，不仅影响磁力搅拌的效果，而且会影响磁力搅拌器的使用寿命，通过如此设计，既能够保证与盘面接触，又不会对盘面造成过大的压力，可以实现高效磁力搅拌的同时保护好磁力搅拌器；
第二步：将盛有反应物的锥形瓶从卡盘31的下面由第二圆形通孔33伸入进去，当伸不动时，驱动卡爪32在卡盘31的表面向中间靠拢，直至卡紧锥形瓶；
第三步，往冰水浴槽22内加入冰水混合物，先加入一半的高度，旋转螺纹杆24上的把手26或驱动其连接的电机，使螺纹杆24旋转，螺纹杆24旋转带动第一齿轮25旋转，通过齿轮之间的啮合传动，另一根螺纹杆24上的第一齿轮25做同向同速旋转运动，进而带动另一根螺纹杆24做同速同向旋转运动，通过螺纹杆24与安装板34上的螺纹通孔3401螺纹配合的过程中，螺纹杆24旋转的过程中，螺纹杆24在限位条3402和限位槽23的限位作用下，安装板34可做上下移动，通过旋转把手26实现安装板34的上下移动，直至锥形瓶瓶身的4/5处于冰水浴中；
按照此进行反应，当水浴锅内的冰块快要融化完，需要继续补加冰块的时候，缓缓加入冰块的同时缓缓升高安装板34的高度，如此不仅可保证反应物最大程度处于冰浴状态，还可避免冰块的加入使得水位升高，掺进锥形瓶，影响反应的进行；
第四步：反应结束后，先升高安装板34的高度，再松开卡爪32，将锥形瓶从安装板34的下方取出，进行后续实验步骤。
实施例1
一种引物合成用偶联活化剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤S1、将冰水浴容器的承载底板(11)由上至下套设于磁力搅拌器上，承载底板(11)接触实验台面，调节电动液压推杆(15)，使得支撑板(21)与磁力搅拌器的盘面刚好接触，但不会对盘面造成压力；
步骤S2、向带有磁性转子的锥形瓶中加入80mL吡啶，将锥形瓶从卡盘(31)的下面由第二圆形通孔(33)伸入进去，驱动卡爪(32)在卡盘(31)的表面向中间靠拢，直至卡紧锥形瓶，将四氟恒压滴液漏斗装在锥形瓶上，保持密闭；
步骤S3、往冰水浴槽(22)内加入冰水混合物，先加入一半的高度，旋转螺纹杆(24)上的把手(26)或驱动其连接的电机，使螺纹杆(24)旋转，使安装板(34)上下移动，直至锥形瓶瓶身的4/5处于冰水浴中；
步骤S4、用玻璃漏斗向四氟恒压滴液漏斗中加入84mL的三氟乙酸，启动磁力搅拌器，然后使气球密封锥形瓶上端，旋转活塞，使三氟乙酸缓慢滴入锥形瓶，控制1h滴加完毕，滴完后继续磁力搅拌反应2h；
步骤S5、反应结束后，关闭磁力搅拌器，先升高安装板(34)的高度，再松开卡爪(32)，将锥形瓶从安装板(34)的下方取出，缓慢晃动锥形瓶；
步骤S6、继续冷却，待瓶中产物完全凝结，瓶温降至室温；
步骤S7、向4L乙腈中加入40mL的N-甲基咪唑配成溶液，备用；
步骤S8、往步骤S6的锥形瓶中倒入1/5的步骤S7得到的溶液，利用磁力搅拌器，溶解锥形瓶中的固体，溶解后全部倒入步骤S7剩余的溶液中，并加入分子筛，封口膜封存；
步骤S9、利用水分测定仪，测其水分含量，不大于20ppm为合格产物。
实施例2
一种引物合成用偶联活化剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤S1、将冰水浴容器的承载底板(11)由上至下套设于磁力搅拌器上，承载底板(11)接触实验台面，调节电动液压推杆(15)，使得支撑板(21)与磁力搅拌器的盘面刚好接触，但不会对盘面造成压力；
步骤S2、向带有磁性转子的锥形瓶中加入100mL吡啶，将锥形瓶从卡盘(31)的下面由第二圆形通孔(33)伸入进去，驱动卡爪(32)在卡盘(31)的表面向中间靠拢，直至卡紧锥形瓶，将四氟恒压滴液漏斗装在锥形瓶上，保持密闭；
步骤S3、往冰水浴槽(22)内加入冰水混合物，先加入一半的高度，旋转螺纹杆(24)上的把手(26)或驱动其连接的电机，使螺纹杆(24)旋转，使安装板(34)上下移动，直至锥形瓶瓶身的4/5处于冰水浴中；
步骤S4、用玻璃漏斗向四氟恒压滴液漏斗中加入105mL的三氟乙酸，启动磁力搅拌器，然后使气球密封锥形瓶上端，旋转活塞，使三氟乙酸缓慢滴入锥形瓶，控制1.25h滴加完毕，滴完后继续磁力搅拌反应2.5h；
步骤S5、反应结束后，关闭磁力搅拌器，先升高安装板(34)的高度，再松开卡爪(32)，将锥形瓶从安装板(34)的下方取出，缓慢晃动锥形瓶；
步骤S6、继续冷却，待瓶中产物完全凝结，瓶温降至室温；
步骤S7、向5L乙腈中加入50mL的N-甲基咪唑配成溶液，备用；
步骤S8、往步骤S6的锥形瓶中倒入1/5的步骤S7得到的溶液，利用磁力搅拌器，溶解锥形瓶中的固体，溶解后全部倒入步骤S7剩余的溶液中，并加入分子筛，封口膜封存；
步骤S9、利用水分测定仪，测其水分含量，不大于20ppm为合格产物。
实施例3
一种引物合成用偶联活化剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤S1、将冰水浴容器的承载底板(11)由上至下套设于磁力搅拌器上，承载底板(11)接触实验台面，调节电动液压推杆(15)，使得支撑板(21)与磁力搅拌器的盘面刚好接触，但不会对盘面造成压力；
步骤S2、向带有磁性转子的锥形瓶中加入60mL吡啶，将锥形瓶从卡盘(31)的下面由第二圆形通孔(33)伸入进去，驱动卡爪(32)在卡盘(31)的表面向中间靠拢，直至卡紧锥形瓶，将四氟恒压滴液漏斗装在锥形瓶上，保持密闭；
步骤S3、往冰水浴槽(22)内加入冰水混合物，先加入一半的高度，旋转螺纹杆(24)上的把手(26)或驱动其连接的电机，使螺纹杆(24)旋转，使安装板(34)上下移动，直至锥形瓶瓶身的4/5处于冰水浴中；
步骤S4、用玻璃漏斗向四氟恒压滴液漏斗中加入63mL的三氟乙酸，启动磁力搅拌器，然后使气球密封锥形瓶上端，旋转活塞，使三氟乙酸缓慢滴入锥形瓶，控制1h滴加完毕，滴完后继续磁力搅拌反应2h；
步骤S5、反应结束后，关闭磁力搅拌器，先升高安装板(34)的高度，再松开卡爪(32)，将锥形瓶从安装板(34)的下方取出，缓慢晃动锥形瓶；
步骤S6、继续冷却，待瓶中产物完全凝结，瓶温降至室温；
步骤S7、向3L乙腈中加入30mL的N-甲基咪唑配成溶液，备用；
步骤S8、往步骤S6的锥形瓶中倒入1/5的步骤S7得到的溶液，利用磁力搅拌器，溶解锥形瓶中的固体，溶解后全部倒入步骤S7剩余的溶液中，并加入分子筛，封口膜封存；
步骤S9、利用水分测定仪，测其水分含量，不大于20ppm为合格产物。
对比例1
实施例1在进行反应的过程中采用普通冰水浴锅进行反应。
对比例2
去掉实施例1中的N-甲基咪唑原料。
将实施例1-3、对比例1-2得到的产物做如下性能测试，检测实施例1-3和对比例1制得的偶联活化剂的产率和纯度；检测实施例1-3和对比例2对引物合成所起的催化效率，包括引物合成的得率、速度；
可知，实施例1-3制备得到的偶联活化剂中三氟乙酸吡啶的产率为85.6-87.5％，纯度为89.9-90.1％，相较于对比例1，说明采用特制的冰水浴容器有利于反应的高效进行，提高产物的质量；实施例1-3制得的偶联活化剂在用于引物合成过程中，最终产得率为72.6-73.5％，引物合成突变率为0.072-0.088％，相较于对比例2，说明三氟乙酸吡啶和N-甲基咪唑联合使用时，具有协同增效作用，能够有效提高引物合成的产率并且降低引物突变率。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。

Claims (6)

1.一种引物合成用偶联活化剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤S1、将冰水浴容器的承载底板(11)由上至下套设于磁力搅拌器上，承载底板(11)接触实验台面，调节电动液压推杆(15)，使得支撑板(21)与磁力搅拌器的盘面刚好接触，但不会对盘面造成压力；
步骤S2、向带有磁性转子的锥形瓶中加入80mL吡啶，将锥形瓶从卡盘(31)的下面由第二圆形通孔(33)伸入进去，驱动卡爪(32)在卡盘(31)的表面向中间靠拢，直至卡紧锥形瓶，将四氟恒压滴液漏斗装在锥形瓶上，保持密闭；
步骤S3、往冰水浴槽(22)内加入冰水混合物，先加入一半的高度，旋转螺纹杆(24)上的把手(26)或驱动其连接的电机，使螺纹杆(24)旋转，使安装板(34)上下移动，直至锥形瓶瓶身的4/5处于冰水浴中；
步骤S4、用玻璃漏斗向四氟恒压滴液漏斗中加入84mL的三氟乙酸，启动磁力搅拌器，然后使气球密封锥形瓶上端，旋转活塞，使三氟乙酸缓慢滴入锥形瓶，控制1h滴加完毕，滴完后继续磁力搅拌反应2h；
步骤S5、反应结束后，关闭磁力搅拌器，先升高安装板(34)的高度，再松开卡爪(32)，将锥形瓶从安装板(34)的下方取出，缓慢晃动锥形瓶；
步骤S6、继续冷却，待瓶中产物完全凝结，瓶温降至室温；
步骤S7、向4L乙腈中加入40mL的N-甲基咪唑配成溶液，备用；
步骤S8、往步骤S6的锥形瓶中倒入1/5的步骤S7得到的溶液，利用磁力搅拌器，溶解锥形瓶中的固体，溶解后全部倒入步骤S7剩余的溶液中，并加入分子筛，封口膜封存；
步骤S9、利用水分测定仪，测其水分含量，不大于20ppm为合格产物。
2.根据权利要求1所述的一种引物合成用偶联活化剂的制备方法，其特征在于，所述冰水浴容器包括承载装置(1)、冰水浴装置(2)和固定装置(3)，冰水浴装置(2)安装于承载装置(1)上，固定装置(3)安装于冰水浴装置(2)上；
承载装置(1)包括承载底板(11)，承载底板(11)的表面中心位置开有第一圆形通孔(12)，承载底板(11)的上表面四个顶角处固定有弹簧安装筒(13)，弹簧安装筒(13)内安装有弹簧(14)；承载底板(11)的上表面还安装有两个相对设置的电动液压推杆(15)；
冰水浴装置(2)包括支撑板(21)，电动液压推杆(15)的另一端安装于支撑板(12)的下表面，弹簧(14)的另一端也安装于支撑板(21)的下表面；支撑板(21)的上表面中心位置固定有冰水浴槽(22)，冰水浴槽(22)用于盛放冰水，冰水浴槽(22)的两个相对侧壁的相对表面开有限位槽(23)，限位槽(23)沿竖直方向设置；冰水浴槽(22)的底板上表面安装有两根相对设置的螺纹杆(24)，螺纹杆(24)上固定有第一齿轮(25)，其中一根螺纹杆(24)的上端固定有把手(26)或连接有电机；冰水浴槽(22)的底板上表面中心位置通过轴承安装有一轴杆，轴杆上固定有第二齿轮(27)，第二齿轮(27)位于两个第一齿轮(25)之间且与两个第一齿轮(25)啮合；
固定装置(3)包括三爪卡盘，三爪卡盘包括卡盘(31)和安装于卡盘(31)上的三个卡爪(32)，卡盘(31)的表面圆心位置开有第二圆形通孔(33)，卡盘(31)的周侧外表面设有两块安装板(34)，安装板(34)的表面开有螺纹通孔(3401)，螺纹通孔(3401)与螺纹杆(24)螺纹配合，安装板(34)的端侧表面固定有限位条(3402)，限位条(3402)与冰水浴槽(22)侧壁开的限位槽(23)滑动配合，固定装置(3)通过安装板(34)安装于冰水浴装置(2)上。
3.根据权利要求2所述的一种引物合成用偶联活化剂的制备方法，其特征在于，所述第一圆形通孔(12)的直径大于磁力搅拌器盘面的直径。
4.根据权利要求2所述的一种引物合成用偶联活化剂的制备方法，其特征在于，所述电动液压推杆(15)的动力杆一端安装于承载底板(11)上，活塞杆一端安装于支撑板(21)的下表面。
5.根据权利要求2所述的一种引物合成用偶联活化剂的制备方法，其特征在于，所述螺纹杆(24)通过轴承安装于冰水浴槽(22)的底板上。
6.根据权利要求2所述的一种引物合成用偶联活化剂的制备方法，其特征在于，所述第二圆形通孔(33)的直径大于锥形瓶瓶身最小直径且小于锥形瓶瓶身最大直径。
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