CN109966475B - 融合蛋白抗特应性皮炎的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种融合蛋白抗特应性皮炎的用途，还公开了对应的抗特应性皮炎的药物组合物，其可含有药学上可接受的载体，剂型可为注射剂。本发明的贡献在于，提供了一种全新的抗特应性皮炎药。

Description

融合蛋白抗特应性皮炎的用途
技术领域
本发明属于生物技术领域。
背景技术
特应性皮炎(atopic dermatitis，简称AD)是一种慢性、炎症性皮肤疾病。AD病情易反复，不易治愈，导致患者的身体健康和生活质量都受到严重影响。AD的发病是基因遗传、环境因素、皮肤屏障功能缺陷及免疫异常等多个方面共同作用的结果,到目前为止对其发病机制尚未完全阐明。近些年，AD的发病率逐年升高，AD的治疗成为备受关注的重要课题。当前AD的治疗多使用抗组胺和类固醇激素等激素类药物，长期使用会产生耐药性和皮肤萎缩等副作用。
幽门螺杆菌的毒力因子有幽门螺杆菌-中性粒细胞激活蛋白(Helicobacterpylori neutrophil-activating protein，Hp-NAP)、CagA、CagPAI、VacA、OipA、BabA等，均可引起炎症反应，经本课题组研究发现Hp-NAP是幽门螺杆菌的重要毒力因子。本实验室在中国第一个提交了HP-NAP的编码基因序列(Genebank登录号AY366361)，还利用基因工程技术将麦芽糖结合蛋白(MBP)与幽门螺杆菌-中性粒细胞激活蛋白(HP-NAP)进行融合得到rMBP-NAP融合蛋白，对该蛋白的研究有：
Wang,T.,et al.International Immunopharmacology 29.2(2015):876-83。
但目前，rMBP-NAP对于特应性皮炎治疗作用，尚未见相关研究。
发明内容
本发明公开了rMBP-NAP融合蛋白抗特应性皮炎的用途，还对应公开了含该蛋白的抗特应性皮炎药物组合物，该药物组合物含有药学上可接受的载体，剂型可为注射剂，如粉针剂或注射液，给药方式可为腹腔注射。
本申请人通过恶唑酮诱导的AD模型发现，rMBP-NAP可有效治疗AD，并研究了其作用机制，为AD治疗领域提供了一种全新的药物。
附图说明
图1为各实验组对AD小鼠耳厚影响的分析；
图2A为各实验组小鼠耳部组织表皮层厚度的统计分析；
图2B为各实验组小鼠耳部肥大细胞数的统计分析；
图2C为各实验组给药后小鼠肝脏重量的统计分析；
以上各图可能涉及的图示的统一含义：*表示p<0.05,**表示p<0.01,***表示P＜0.001。
具体实施方式
rMBP-NAP蛋白对OXA诱导的特应性皮炎模型小鼠的治疗作用
实验方法：
(1)AD小鼠模型给药
a.将7周龄的BALB/C小鼠背部剃毛约2cm2，12小时后用5％恶唑酮致敏液20μL于BALB/c小鼠背部致敏,空白对照组小鼠背部涂抹20μL丙酮橄榄油溶液。
b.一周后，将0.3％的恶唑酮Oxazolone溶液20μL涂于小鼠耳部内侧，用于耳部激发(空白对照组用丙酮：橄榄油4：1代替)，每周三次。
c.将小鼠随机分为4组——空白对照组、致敏组、rMBP-NAP融合蛋白给药组、地塞米松给药组(每组各6只)，放在独立通风笼盒中饲养，并做好标记。
d.rMBP-NAP融合蛋白给药方案：在建模后第0天起开始腹腔给药，每周三次，共十次，每次给药200ug/0.2ml。在0-21天时，每次耳部激发一小时后，对各组小鼠分别给药：致敏组于腹腔注射200μL PBS溶液；rMBP-NAP融合蛋白给药组于腹腔注射200μg/0.2mL rMBP-NAP融合蛋白溶液；地塞米松给药组于腹腔注射200μg/0.2mL地塞米松(DEX)溶液。每周三次给药，在实验22天时处死小鼠。
(2)AD小鼠皮损严重程度
在-7-22天时，每天用测厚规测量小鼠耳廓部位厚度，测量在致敏或激发之前完成，观察AD模型各实验组小鼠皮损情况并拍照。
(3)AD小鼠的病理组织学检测
a.在AD模型的小鼠发病高峰期(第16天)时，麻醉剂处死小鼠，剪下BALB/c小鼠发病的耳部组织，并将其置于4％多聚甲醛固定液中固定24h以上。
b.对小鼠耳部组织进行石蜡包埋处理后，将其切割制成6μm切片，耳部组织均进行H&E染色，并于显微镜下观察耳部组织的病理学形态。
c.耳部H&E切片拍照后，并使用ImageJ软件分析照片，统计耳部组织中炎症细胞的浸润情况。
实验结果：
1、rMBP-NAP蛋白对特应性皮炎小鼠症状的改善
致敏组：小鼠耳朵肿胀程度增加，开始逐渐形成结痂，发生苔藓样硬化。在第15-22天时，耳厚增加，耳部红肿程度严重，出现明显结痂现象。
rMBP-NAP治疗组：小鼠的特应性皮炎耳部红胀明和结痂现象明显得到抑制，耳厚减轻。在16天发病高峰期时，与致敏组相比，rMBP-NAP组耳部红肿和结痂情况得到显著改善(详见图1)。
2、AD小鼠的病理组织学检测
H&E染色分析表明，致敏组出现皮肤角质层遭到破坏，真皮层增厚，大量炎症细胞浸润，血管扩张的现象；而在rMBP-NAP给药组中没有明显的炎症细胞的渗出，表皮呈轻微增厚，角质层完整，血管无明显扩张，即rMBP-NAP融合蛋白给药组治疗效果较为显著(详见图2A)。
对耳部组织进行甲苯胺蓝染色，观察致敏组耳部组织中肥大细胞浸润情况。结果表明，致敏组耳部表皮层附近有大量被染成紫色或紫红色颗粒，即肥大细胞。而rMBP-NAP给药组耳部甲苯胺蓝染色分析表明，耳部表皮附近肥大细胞数目减少，肥大细胞浸润的现象减轻(详见图2B)。

Claims (5)

1.rMBP-NAP融合蛋白用于制备抗特应性皮炎药物的用途。
2.如权利要求1所述的用途，其特征是，该药物包含rMBP-NAP融合蛋白及药学上可接受的载体。
3.如权利要求2所述的用途，其特征是，所述药物的剂型为注射剂。
4.如权利要求3所述的用途，其特征是，所述药物的剂型为粉针剂或注射液。
5.如任一在先权利要求所述的用途，其特征是，所述药物的给药方式为腹腔注射。
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Antitumor and immunomodulatory effects of recombinant fusion protein rMBP-NAP through TLR-2 dependent mechanism in tumor bearing mice;Wang t等;《International Immunopharmacology》;20151231;第29卷(第2期);876-883 *
Recombinant protein rMBP-NAP restricts tumor progression by triggering antitumor immunity in mouse metastatic lung cance;Wang t等;《Canadian Journal of Physiology and Pharmacology》;20181231;第96卷(第2期);113-119 *
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特应性皮炎患者外周血IL-4、IFN-γ、IL-2水平的检测;陈保疆;《中国热带医学》;20111231;第11卷(第10期);1267-1268 *
王小龙等.rMBP-NAP依赖IL-12/IL-23轴对肝癌H22荷瘤小鼠的抑瘤作用研究.《河南医学研究》.2015,第24卷(第8期),5-8. *

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