CN109884305A - 均相化学发光微流控芯片及其检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种均相化学发光微流控芯片及其检测方法。本发明将空间邻近化学发光技术和微流控芯片技术结合起来，采用的试剂包括酶标记物、发光标记物、触发辅助剂、触发剂和校准品；酶标记物、发光标记物和触发辅助剂采用囊滴包埋或冷冻干燥技术包埋在微流控芯片中；酶标记物含HRP标记的IL‑6单克隆抗体和磷酸盐缓冲液；发光标记物含9，10‑二氢吖啶标记的IL‑6单克隆抗体和Tris缓冲液；触发辅助剂含发光辅助剂和枸橼酸盐缓冲液；触发剂为Tris‑HCl缓冲液；校准品含IL‑6校准品和磷酸盐缓冲液。该均相化学发光微流控芯片可有效用于检测样本中的抗原或抗体，整个检测过程不需包被、洗涤，使其用于临床快速检测更易实现。

Description

均相化学发光微流控芯片及其检测方法

技术领域

本发明涉及生物技术、医药、食品安全、兽医检疫等领域，具体涉及一种均相化学发光微流控芯片及其检测方法，其是将空间邻近化学发光技术和微流控芯片技术结合起来，形成独特的检测系统。

背景技术

微流控芯片技术(Microfluidics)是把生物、化学、医学分析过程的样品制备、反应、分离、检测等基本操作单元集成到一块微米尺度的芯片上，自动完成分析的全过程。由于在生物、化学、医学等领域的巨大潜力，其已经发展成为一个生物、化学、医学、流体、电子、材料、机械等学科交叉的崭新研究领域。

微流控分析芯片最初在美国被称为“芯片实验室”(lab-on-a-chip)，在欧洲被称为“微整合分析芯片”(Micrototal Analytical Systems)。随着材料科学、微纳米加工技术和微电子学所取得的突破性进展，微流控芯片也得到了迅速发展。今天，阻碍微流控技术发展的瓶颈仍然是早期限制其发展的制造加工和应用方面的问题；芯片与任何远程的东西交互存在一定问题，更不用说将具有全功能样品前处理、检测和微流控技术都集成在同一基质中。上世纪80年代末至90年代末，且尤其是在研究芯片衬底的材料科学和微通道的流体移动技术得到发展后，微流控技术也取得了较大的进步。

美国Caliper Life Sciences公司Andrea Chow博士认为：微流控技术的成功取决于联合、技术和应用，这三个因素是相关的。进一步开发的芯片可用于酶和细胞的检测，在开发新药方面很有用。更进一步的产品是可集成样品前处理的基因鉴定，例如基于芯片的链式聚合反应(PCR)。由于具有高度重复和低消耗样品或试剂的特性，这种自动化和半自动化的微流控芯片在早期的药物研发中，得到了广泛应用。为适应时代的需求，现今的研究集中在集成方面，特别是生物传感器的研究，开发制造具有超强运行能力的多功能芯片。

此外，白介素6(IL-6)是细胞因子网络中的重要成员，在急性炎症反应中处于中心地位，可介导肝脏的急性期反应，刺激C反应蛋白(CRP)和纤维蛋白原的生成。多种感染性疾病可导致血清IL-6水平升高，而且IL-6水平与患者预后密切相关。全身性感染是危重患者死亡的主要原因之一，但其临床表现缺乏特异性。且病原体检测需要一定时间，由于长期使用抗生素，细菌培养阳性率低，易影响感染性疾病的诊断和治疗，造成严重不良后果。研究表明PCT和IL-6血清中水平与细菌感染密切相关，检测血清中PCT和IL-6血清中含量是诊断细菌性败血症的良好指标。

目前临床上常用的IL-6检测方法为ELISA和磁微粒化学发光法。ELISA法线性范围窄，灵敏度较低，变异系数大，检测过程用时长；磁微粒化学发光法需要包被，且反应完成后均需要对反应复合物进行清洗，以去除未结合的游离成分。其存在操作复杂，影响因素多，导致检测结果不稳定，重复性不佳等缺点。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明目的在于提供一种均相化学发光微流控芯片及其检测方法。本发明首次将空间邻近化学发光技术和微流控芯片技术结合起来，形成独特的检测系统(简称均相化学发光微流控芯片)，进而有效用于检测样本中的抗原或抗体。此外，本发明基于空间邻近化学发光技术整个检测过程不需包被、洗涤，使得微流控芯片用于临床快速检测更易实现。

为实现上述目的，本发明提供的技术方案为：

第一方面，本发明提供一种均相化学发光微流控芯片，均相化学发光微流控芯片包括是将空间邻近化学发光技术和微流控芯片技术结合起来形成的检测系统；其中，空间邻近化学发光技术中：当待测样本中抗原与标记有过氧化物酶的抗体和标记有9,10-二氢吖啶的抗体形成复合物时，在空间上相互接近，加入触发剂辅助剂和触发剂，产生闪光型化学发光；微流控芯片技术中：将化学发光试剂包埋在微流控芯片中，当待测样本加入时，与包埋在芯片中的试剂完成化学发光发应，发光强度与待测样本中待测物含量正相关。

本发明提供一种均相化学发光微流控芯片，均相化学发光微流控芯片采用的试剂包括：酶标记物、发光标记物、触发辅助剂、触发剂和校准品；酶标记物、发光标记物和触发辅助剂是采用囊滴包埋技术或冷冻干燥技术包埋在微流控芯片中；其中，酶标记物的原料组分包括过氧化物酶标记的抗体，发光标记物的原料组分包括9,10-二氢吖啶标记的抗体。

优选地，酶标记物的原料组分还包括0.05M磷酸盐缓冲液；酶标记物的制备方法包括：称取5mg过氧化物酶溶解于1mL蒸馏水中，之后加入0.2mL新配的0.1M过碘酸钠溶液，室温下避光搅拌20min，将上述溶液装入透析袋中，对1mM pH 4.4的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜；加入20μL 0.2M pH 9.5碳酸盐缓冲液，然后立即加入抗体室温避光轻轻搅拌2h，加新配的4mg/mL硼氢化钠液，混匀，于4℃放置2h，将上述液装入透析袋中，对0.15M pH 7.4PBS透析，4℃过夜；取出透析物，加适量甘油后置于-20℃冰箱保存。

优选地，发光标记物的原料组分还包括0.05M Tris缓冲液；发光标记物的制备方法包括：将发光底物Acridan用500μL的DMF溶解；吸取溶解的Acridan 41.3μL，加入0.05M硼酸钠缓冲液708.7μL，再加入抗体，翻转混匀4～5次，室温静置30min；将标记反应管置于摇床上，于2～8℃下混合过夜，取出加入适量甘油后置于-20℃冰箱保存。

优选地，触发辅助剂的组分包括发光辅助剂和pH 6.0的枸橼酸盐缓冲液；触发辅助剂的制备方法包括：称取枸橼酸1.82g，枸橼酸钠10.45g，加纯水溶解并定容至1000mL，在枸橼酸盐缓冲液中加入发光辅助剂，混匀后分装，置于4℃冰箱保存备用；其中，更优选每瓶装10mL。

优选地，触发剂选用0.05M pH 8.0Tris-HCl缓冲液；触发剂的制备方法包括：称取Tris 6.06g、氯化钠9g，加适量纯水溶解，再加入浓HCl 2.1mL混匀；之后加入吐温-20 2mL，混匀后定容至1000mL，分装，置于4℃冰箱保存备用；其中，更优选每瓶装200mL。

优选地，抗体选用单克隆抗体，优选为IL-6单克隆抗体。

优选地，校准品包括IL-6校准品和0.1M校准品稀释液；校准品的制备方法包括：配制校准品稀释液：称取磷酸二氢钾14.1g，NaH₂PO₄·2H₂O 3.0g，加超纯水溶解，Proclin-3000.5～1mL，混匀后，加超纯水定容至1000mL，得到校准品稀释液，2～8℃储存备用；配制校准品：采用校准品稀释液将纯化IL-6校准品稀释至目标浓度，2～8℃储存备用；其中，目标浓度包括：0、10pg/mL、50pg/mL、200pg/mL、500pg/mL、1000pg/mL。

本发明采用双抗体夹心法检测人血清(浆)中IL-6的含量。酶标记物(试剂1)、发光标记物(试剂2)、触发辅助剂(试剂3)包埋在微流控芯片的不同部位，当加入样本时，样本中IL-6将与酶标记物(试剂1)、发光标记物(试剂2)形成抗原抗体复合物，当酶标记物(试剂1)上辣根过氧化物酶(HRP)和发光标记物(试剂2)上9,10-二氢吖啶(Acridan)在空间上得以相互接近，在触发剂辅助剂及触发剂的作用下，产生闪光型化学发光。而未结合的游离的HRP标记抗体和Acridan标记抗体则不发光。样本中IL-6含量越高，测定的发光值(RLU)越大。对校准品的浓度和发光值进行logistic四参数拟合，通过样本发光值计算样本浓度。

第二方面，本发明还保护均相化学发光微流控芯片在检测人血清或人血浆中IL-6含量中的应用。

第三方面，本发明提供的上述均相化学发光微流控芯片在检测人血清或人血浆中IL-6含量时的方法，包括步骤：S1：进样孔中加入25～50μL校准品/样本；S2：校准品/样本、酶标记物、发光标记物分别流入混匀池，于37℃孵育10min；S3：校准品/样本、酶标记物、发光标记物流经触发辅助剂，混合后流入检测区，加入触发剂50～75μL，立即检测，读取信号值；S4：根据校准品的浓度和样本发光值进行logistic四参数拟合，通过样本发光值计算样本浓度。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：微流控芯片发展非常迅速，目前临床应用的有基因芯片、基于芯片的链式聚合反应(PCR)等；化学发光技术由于其高度灵敏性和特异性，已成为目前体外诊断的主流技术。本发明首次将空间邻近化学发光技术和微流控芯片技术结合起来，形成独特的检测系统(简称均相化学发光微流控芯片)。所以本发明既保留了化学发光技术由于其高度灵敏性和特异性，又体现了微流控芯片的高度集成性。

本发明有如下特点：

(1)灵敏度高，特异性强：由于本发明反应体系应用化学发光技术，所以灵敏度很高，可以检测pg/mL级水平；而抗原、抗体反应有着高度特异性。

(2)操作简单：由于微流控芯片高度集成，操作过程只需加样步骤。

(3)快速定量：检测试剂包埋在芯片中且反应过程均在芯片中完成，10～15分钟即可出结果，并能作出定量分析。

(4)全血检测：全血样本不需离心处理，直接加样即可检测。

(5)检测范围广：由于抗原、抗体免疫发应的特点，均相化学发光微流控芯片可以检测各类抗原或抗体。

(6)适用范围广：用于体外诊断的均相化学发光微流控芯片检测高度敏感性和特异性，高度集成操作简单，快速定量，所以本发明可用于医院门诊、急诊、医生护士工作站、社区服务中心等检测；同时本发明也用于生物工程、食品安全、兽医检疫等领域。

(7)本发明提供的技术是一种真正意义上的均相化学发光技术。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

图1为本发明提供的微流控芯片的设计示意图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，因此只是作为示例，而不能以此来限制本发明的保护范围。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，数据为三次重复实验的平均值或平均值±标准差。

本发明提供一种均相化学发光微流控芯片，采用的试剂包括：酶标记物、发光标记物、触发辅助剂、触发剂和校准品；酶标记物、发光标记物和触发辅助剂是采用囊滴包埋技术或冷冻干燥技术包埋在微流控芯片中。如图1所示，将酶标记物(试剂1)10～50μL、发光标记物(试剂2)10～50μL、触发辅助剂(试剂3)5～25μL用囊滴包埋技术或冷冻干燥技术，分别包埋在微流控芯片中。

其中，酶标记物的组分包括过氧化物酶(HRP)标记的IL-6单克隆抗体和0.05M磷酸盐缓冲液；发光标记物的组分包括9,10-二氢吖啶标记的IL-6单克隆抗体和0.05M Tris缓冲液；触发辅助剂的组分包括发光辅助剂和pH 6.0枸橼酸盐缓冲液；触发剂选用0.05M pH8.0Tris-HCl缓冲液；校准品包括IL-6校准品和0.1M磷酸盐缓冲液。

一、校准品的制备

(1)配制校准品稀释液：称取磷酸二氢钾14.1g，磷酸二氢钠(2H₂O)3.0g，加适量超纯水溶解，Proclin-300 0.5～1mL，混匀后，加超纯水定容至1000mL，即校准品稀释液，2～8℃储存备用。

(2)配制校准品：采用校准品稀释液将IL-6校准品稀释至浓度为0、10pg/mL、50pg/mL、200pg/mL、500pg/mL、1000pg/mL，2～8℃储存备用。

二、酶标记物的制备

(1)称取5mg HRP溶解于1mL蒸馏水中，于上液中加入0.2mL新配的0.1M过碘酸钠溶液，室温下避光搅拌20min，将上述溶液装入透析袋中，对1mM pH 4.4的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜。

(2)加20μL 0.2M pH 9.5碳酸盐缓冲液，然后立即加入适量IL-6单克隆抗体室温避光轻轻搅拌2h，加新配的4mg/mL硼氢化钠液，混匀，于4℃放置2h，将上述液装入透析袋中，对0.15M pH 7.4PBS透析，4℃过夜。

(3)取出透析物，加适量甘油置-20℃冰箱保存。

三、发光标记物的制备

(1)将发光底物Acridan用500μL的DMF溶解。

(2)吸取溶解的Acridan 41.3μL，加入0.05M硼酸钠缓冲液708.7μL，再加入适量单克隆抗体，翻转混匀4～5次，在室温下静置30min。

(3)将标记反应管置于摇床上，在2～8℃下混合过夜，取出加入适量甘油置-20℃冰箱保存。

四、触发辅助剂的制备

称取枸橼酸1.82g，枸橼酸钠10.45g，加纯水溶解并定容至1000mL，在枸橼酸盐缓冲液中加入发光辅助剂，混匀后分装，每瓶10mL置于4℃冰箱保存备用。

五、触发剂的制备

称取Tris 6.06g，氯化钠9g，加适量纯水溶解，再加入浓HCl 2.1mL混匀；之后加入吐温-20 2mL，混匀后定容至1000mL，分装，每瓶200mL置于4℃冰箱保存备用。

本发明还提供了一种采用均相化学发光微流控芯片在检测人血清或人血浆中IL-6含量时的方法，包括步骤：

S1(加样)：进样孔中加入25～50μL校准品/样本；

S2(反应)：校准品/样本、酶标记物(试剂1)、发光标记物(试剂2)分别流入混匀池，于37℃孵育10min；

S3(检测)：校准品/样本、酶标记物(试剂1)、发光标记物(试剂2)流经触发辅助剂(试剂3)，混合后流入检测区，加入触发剂(试剂4)50～75μL，立即检测，读取信号值；检测结束后，液体流入废液池；

S4(计算)：根据校准品的浓度和样本发光值进行logistic四参数拟合，通过样本发光值计算样本浓度。

下面结合具体实施例对本发明提供的技术方案作进一步说明。

实施例一

本实施例提供一种均相化学发光微流控芯片，采用的试剂包括：酶标记物、发光标记物、触发辅助剂、触发剂和校准品；酶标记物、发光标记物和触发辅助剂是采用囊滴包埋技术包埋在微流控芯片中。如图1所示，将酶标记物(试剂1)30μL、发光标记物(试剂2)30μL、触发辅助剂(试剂3)5μL用囊滴包埋技术，分别包埋在微流控芯片中。

其中，酶标记物的组分包括过氧化物酶(HRP)标记的IL-6单克隆抗体和0.05M磷酸盐缓冲液；发光标记物的组分包括9,10-二氢吖啶标记的IL-6单克隆抗体和0.05M Tris缓冲液；触发辅助剂的组分包括发光辅助剂和pH 6.0枸橼酸盐缓冲液；触发剂选用0.05M pH8.0Tris-HCl缓冲液；校准品包括IL-6校准品和0.1M磷酸盐缓冲液。

一、校准品的制备

(1)配制校准品稀释液：称取磷酸二氢钾14.1g，磷酸二氢钠(2H₂O)3.0g，加适量超纯水溶解，Proclin-300 0.8mL，混匀后，加超纯水定容至1000mL，即校准品稀释液，4℃储存备用。

(2)配制校准品：采用校准品稀释液将IL-6校准品稀释至浓度为0、10pg/mL、50pg/mL、200pg/mL、500pg/mL、1000pg/mL，4℃储存备用。

二、酶标记物的制备

(1)称取5mg HRP溶解于1mL蒸馏水中，于上液中加入0.2mL新配的0.1M过碘酸钠溶液，室温下避光搅拌20min，将上述溶液装入透析袋中，对1mM pH 4.4的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜。

(2)加20μL 0.2M pH 9.5碳酸盐缓冲液，然后立即加入适量IL-6单克隆抗体室温避光轻轻搅拌2h，加新配的4mg/mL硼氢化钠液，混匀，于4℃放置2h，将上述液装入透析袋中，对0.15M pH 7.4PBS透析，4℃过夜。

(3)取出透析物，加适量甘油置-20℃冰箱保存。

三、发光标记物的制备

(1)将发光底物Acridan用500μL的DMF溶解。

(2)吸取溶解的Acridan 41.3μL，加入0.05M硼酸钠缓冲液708.7μL，再加入适量单克隆抗体，翻转混匀4次，在室温下静置30min。

(3)将标记反应管置于摇床上，在4℃下混合过夜，取出加入适量甘油置-20℃冰箱保存。

四、触发辅助剂的制备

称取枸橼酸1.82g，枸橼酸钠10.45g，加纯水溶解并定容至1000mL，在枸橼酸盐缓冲液中加入发光辅助剂，混匀后分装，每瓶10mL置于4℃冰箱保存备用。

五、触发剂的制备

称取Tris 6.06g，氯化钠9g，加适量纯水溶解，再加入浓HCl 2.1mL混匀；之后加入吐温-20 2mL，混匀后定容至1000mL，分装，每瓶200mL置于4℃冰箱保存备用。

实施例二

本实施例提供一种采用均相化学发光微流控芯片在检测人血清或人血浆中IL-6含量时的方法，包括步骤(如图1)：

S1(加样)：进样孔中加入40μL校准品/样本；

S2(反应)：校准品/样本、酶标记物(试剂1)、发光标记物(试剂2)分别流入混匀池，于37℃孵育10min；

S3(检测)：校准品/样本、酶标记物(试剂1)、发光标记物(试剂2)流经触发辅助剂(试剂3)，混合后流入检测区，加入触发剂(试剂4)75μL，立即检测，读取信号值；检测结束后，液体流入废液池；

S4(计算)：根据校准品的浓度和样本发光值进行logistic四参数拟合，通过样本发光值计算样本浓度。

本发明首次将空间邻近化学发光技术和微流控芯片技术结合起来，形成独特的检测系统，简称“均相化学发光微流控芯片”；其是可应用于任何不同抗原、抗体的检测技术；本发明应用均相化学发光微流控芯片检测IL-6，微流控芯片高度集成，无需清洗、均相反应，操作方便简单，适合医院门诊、急诊、医生护士工作站、社区服务中心等检测；同时该技术也用于生物工程、食品安全、兽医检疫等领域。

当然，除了实施例一和实施例二列举的情况，制备过程中的其他条件和参数等也是可以的。

需要注意的是，除非另有说明，本申请使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域技术人员所理解的通常意义。除非另外具体说明，否则在这些实施例中阐述的部件和步骤的相对步骤、数字表达式和数值并不限制本发明的范围。在这里示出和描述的所有示例中，除非另有规定，任何具体值应被解释为仅仅是示例性的，而不是作为限制，因此，示例性实施例的其他示例可以具有不同的值。

在本发明的描述中，需要理解的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是两个以上，除非另有明确具体的限定。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围，其均应涵盖在本发明的保护范围当中。

Claims (10)

1.一种均相化学发光微流控芯片，其特征在于：所述均相化学发光微流控芯片是将空间邻近化学发光技术和微流控芯片技术结合起来形成的检测系统；

其中，所述空间邻近化学发光技术中：当待测样本中抗原与标记有过氧化物酶的抗体和标记有9,10-二氢吖啶的抗体形成复合物时，在空间上相互接近，加入触发剂辅助剂和触发剂，产生闪光型化学发光；

所述微流控芯片技术中：将化学发光试剂包埋在微流控芯片中，当待测样本加入时，与包埋在芯片中的试剂完成化学发光发应，发光强度与待测样本中待测物含量正相关。

2.一种均相化学发光微流控芯片，其特征在于，所述均相化学发光微流控芯片采用的试剂包括：酶标记物、发光标记物、触发辅助剂、触发剂和校准品；所述酶标记物、所述发光标记物和所述触发辅助剂是采用囊滴包埋技术或冷冻干燥技术包埋在微流控芯片中；

其中，所述酶标记物的原料组分包括过氧化物酶标记的抗体，所述发光标记物的原料组分包括9,10-二氢吖啶标记的抗体。

3.根据权利要求2所述的均相化学发光微流控芯片，其特征在于：所述酶标记物的原料组分还包括0.05M磷酸盐缓冲液；

优选地，所述酶标记物的制备方法包括：

称取5mg过氧化物酶溶解于1mL蒸馏水中，之后加入0.2mL新配的0.1M过碘酸钠溶液，室温下避光搅拌20min，将上述溶液装入透析袋中，对1mM pH 4.4的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜；

加入20μL 0.2M pH 9.5碳酸盐缓冲液，然后立即加入抗体室温避光轻轻搅拌2h，加新配的4mg/mL硼氢化钠液，混匀，于4℃放置2h，将上述液装入透析袋中，对0.15M pH 7.4PBS透析，4℃过夜；

取出透析物，加适量甘油后置于-20℃冰箱保存。

4.根据权利要求2所述的均相化学发光微流控芯片，其特征在于：所述发光标记物的原料组分还包括0.05M Tris缓冲液；

优选地，所述发光标记物的制备方法包括：

将发光底物Acridan用500μL的DMF溶解；

吸取溶解的Acridan 41.3μL，加入0.05M硼酸钠缓冲液708.7μL，再加入抗体，翻转混匀4～5次，室温静置30min；

将标记反应管置于摇床上，于2～8℃下混合过夜，取出加入适量甘油后置于-20℃冰箱保存。

5.根据权利要求2所述的均相化学发光微流控芯片，其特征在于：所述触发辅助剂的组分包括发光辅助剂和pH 6.0的枸橼酸盐缓冲液；

优选地，所述触发辅助剂的制备方法包括：

称取枸橼酸1.82g，枸橼酸钠10.45g，加纯水溶解并定容至1000mL，在枸橼酸盐缓冲液中加入发光辅助剂，混匀后分装，置于4℃冰箱保存备用；其中，更优选每瓶装10mL。

6.根据权利要求2所述的均相化学发光微流控芯片，其特征在于：所述触发剂选用0.05M pH 8.0Tris-HCl缓冲液；

优选地，所述触发剂的制备方法包括：

称取Tris 6.06g、氯化钠9g，加适量纯水溶解，再加入浓HCl 2.1mL混匀；之后加入吐温-20 2mL，混匀后定容至1000mL，分装，置于4℃冰箱保存备用；其中，更优选每瓶装200mL。

7.根据权利要求2～6任一项所述的均相化学发光微流控芯片，其特征在于：所述抗体选用单克隆抗体，优选为IL-6单克隆抗体。

8.根据权利要求7所述的均相化学发光微流控芯片，其特征在于：所述校准品包括IL-6校准品和0.1M校准品稀释液；

优选地，所述校准品的制备方法包括：

配制校准品稀释液：称取磷酸二氢钾14.1g，NaH₂PO₄·2H₂O 3.0g，加超纯水溶解，Proclin-300 0.5～1mL，混匀后，加超纯水定容至1000mL，得到校准品稀释液，2～8℃储存备用；

配制校准品：采用所述校准品稀释液将纯化IL-6校准品稀释至目标浓度，2～8℃储存备用；其中，所述目标浓度包括：0、10pg/mL、50pg/mL、200pg/mL、500pg/mL、1000pg/mL。

9.权利要求1～8任一项所述的均相化学发光微流控芯片在检测人血清或人血浆中IL-6含量中的应用。

10.权利要求1～8任一项所述的均相化学发光微流控芯片在检测人血清或人血浆中IL-6含量时的方法，其特征在于，包括步骤：

S1：进样孔中加入25～50μL校准品/样本；

S2：校准品/样本、酶标记物、发光标记物分别流入混匀池，于37℃孵育10min；

S3：校准品/样本、酶标记物、发光标记物混合物流经触发辅助剂，混合后流入检测区，加入触发剂50～75μL，立即检测，读取信号值；

S4：根据校准品的浓度和样本发光值进行logistic四参数拟合，通过样本发光值计算样本浓度。