CN109793892A - 一种抗pd-1抗体在制备治疗食管癌的药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种抗PD‑1抗体在制备治疗食管癌的药物中的用途。具体而言，一种抗PD‑1抗体或其抗原结合片段在制备治疗食管癌的药物中的用途，所述食管癌为晚期或者转移性食管癌。

Description

一种抗PD-1抗体在制备治疗食管癌的药物中的用途

技术领域

本发明涉及一种抗PD-1抗体或其抗原结合片段在制备治疗食管癌的药物中的用途。

背景技术

食管癌(Esophageal cancer)是由食管引起的癌症，食管是在咽喉和胃之间的食物管道。食管癌的两种主要的亚型是食管鳞状细胞癌(ESCC)和食管腺癌(EAC)，前者在发展中国家较为常见，后者在发达国家更为常见，也出现了一些不太常见的类型。ESCC起源于食道的上皮细胞，EAC是由食道下游三分之一的腺体细胞引起的，通常是它们已经转化为Barrett's食管。ESCC的产生的原因包括烟草、酒精、非常热的饮料、不良的饮食和嚼槟榔等。EAC的最常见的原因则包括吸烟、肥胖和胃酸倒流。

手术治疗是食管癌的首选治疗方式，对于Ⅰ期和T_2-3N₀M₀的Ⅱ期患者，一旦确诊，可以直接考虑手术切除，根治性手术切除术后无须辅助放疗或化疗。但在临床，大部分患者就诊时，已经属于中晚期，肿瘤外侵和淋巴结转移很常见，对于这些患者，直接进行手术治疗，不但切除率低，而且术后很容易复发转移，预后不良。目前多数研究显示手术、放疗、化疗等有效手段合理结合起来的综合治疗模式，对局部中晚期食管癌提高疗效有积极的作用。顺铂(DDP)、氟尿嘧啶(5-Fu)为基础的术前联合化疗方案，目前为推荐方案，有效率为40％～58％，病理完全缓解(pCR)率为2.5％～5.0％。随着紫杉醇(PTX)、多西他赛(TXT)、伊立替康(CPT-11)、奈达铂等新一代化疗药物的开发应用，食管癌的新辅助化疗方案逐渐增多，目前最常用的化疗方案为PTX+DDP，其客观有效率优于5-FU+DDP。(《中国合理用药探索》杂志2017年9月第14卷第9期)

随着对肿瘤分子生物学和免疫逃逸机制的深入研究，靶向及免疫治疗已成为不少恶性肿瘤的主要治疗手段。目前关于食管癌的免疫治疗页有报道，细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)的抗体ipilimumab，它目前已经成为二线或更后期的治疗不可切除或转移性黑色素瘤的标准，并且已经针对各种类型的癌症进行了临床II期及III期的试验，但是仍然没有其单药治疗食管癌的临床证据；程序性死亡受体1(PD1)的抗体Pembrolizumab以及Nivolumab单用来治疗晚期或转移性食管癌的临床研究正在进行中。

WO2015085847公开了一种新的抗PD-1抗体，目前该PD-1抗体正处于国内临床研究阶段。但是WO2015085847中仅认为在乳腺癌、肺癌、胃癌、肠癌、肾癌、黑素瘤等特定的肿瘤中检测到高PD-L1的表达，可能通过其提供的PD-1抗体治疗，但未能研究PD-1抗体对于食管癌是否具有治疗作用。

发明内容

本发明提供一种抗PD-1抗体或其抗原结合片段在制备治疗食管癌的药物中的用途。

本发明中所述的食管癌可选食管鳞状细胞癌、食管腺癌、未分化癌。

在一个优选的实施方案中本发明中所述食管癌是指经组织学或细胞学确诊的食管鳞状细胞癌，且局部晚期不可切除、局部复发或伴远处转移。

在一个优选的实施方案中，本发明中所述的晚期或者转移性食管癌是指患者接受一线化疗已经失败或者接受放疗失败。具体的接受一线系统化疗(可以包括以铂类、紫衫类或氟尿嘧啶类为基础)进展或不耐受的患者(一线化疗后维持治疗进展也可纳入)，术后复发或转移接受的同步放化疗算为一线治疗，对于根治性同步放化疗、新辅助/辅助治疗(化疗或放化疗)，如果在治疗期间或停止治疗后6个月内发生疾病进展，应将其算作一线治疗失败。

本发明中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段的轻链可变区包含分别如SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；重链可变区包含分别如SEQID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3。

其中，前面所述的各CDR序列如下表所示：

名称	序列	编号
			HCDR1	SYMMS	SEQID NO：1
HCDR2	TISGGGANTYYPDSVKG	SEQID NO：2
			HCDR3	QLYYFDY	SEQID NO：3
LCDR1	LASQTIGTWLT	SEQID NO：4
			LCDR2	TATSLAD	SEQID NO：5
LCDR3	QQVYSIPWT	SEQID NO：6

优选的，本发明中所述的PD-1抗体为人源化抗体。

优选的人源化抗体轻链可变区序列为如SEQ ID NO:10所示的序列或其变体；所述的变体优选在轻链可变区有0-10的氨基酸变化；更优选为A43S的氨基酸变化。所述人源化抗体重链可变区序列为如SEQ ID NO:9所示的序列或其变体；所述变体优选在重链可变区有0-10的氨基酸变化；更优选为G44R的氨基酸变化。

前述的人源化抗体重、轻链的可变区序列如下所示：

重链可变区

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYMMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGANTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQLYYFDYWGQGTTVTVSS

SEQID NO：9

轻链可变区

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCLASQTIGTWLTWYQQKPGKAPKLLIYTATSLADGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVYSIPWTFGGGTKVEIK

SEQID NO：10

优选的人源化抗体轻链序列为如SEQ ID NO:8所示的序列或其变体；所述的变体优选在轻链可变区有0-10的氨基酸变化；更优选为A43S的氨基酸变化。所述人源化抗体重链序列为如SEQ ID NO:7所示的序列或其变体；所述变体优选在重链可变区有0-10的氨基酸变化；更优选为G44R的氨基酸变化。

在本发明一个优选的实施方案中，人源化抗体轻链序列为如SEQ ID NO:8所示的序列，重链序列为如SEQ ID NO:7所示的序列。

前述的人源化抗体重、轻链的序列如下所示：

重链

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYMMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGANTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQLYYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK

SEQID NO：7

轻链

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCLASQTIGTWLTWYQQKPGKAPKLLIYTATSLADGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVYSIPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQID NO：8

本发明一提供的实施方案中，所述的PD-1抗体或其抗原结合片段单次给药剂量选自0.1-20mg/kg，优选1-10mg/kg，具体的包括1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg。

在本发明一个优选的实施方案中，其中所述的PD-1抗体或其抗原结合片段单次剂量选自50-600mg，优选100-300mg，更优选150-250mg。具体的可选剂量为50mg、60mg、70mg、75mg、100mg、125mg、150mg、175mg、200mg、225mg、250mg、375mg、400mg、425mg、450mg、475mg、500mg、600mg。

本发明提供的抗PD-1抗体或其抗原结合片段在制备治疗食管癌的药物中的用途，特征在于所述的PD-1抗体或其抗原结合片段的给药周期为一周、二周、三周、一月、两月，优选两周或者三周。

本发明提供的抗PD-1抗体或其抗原结合片段在制备治疗食管癌的药物中的用途，其特征在于每个给药周期给药一次或两次，优选一次，给药方式为每个给药周期的第一天给药。

在本发明的一个优选的实施方案中，抗PD-1抗体或其抗原结合片段在制备治疗食管癌的药物中的用途，特征在于给药的方式为每两周给予200mg PD-1抗体一次，并于每个周期的第一天给药。

在本发明一个优选的实施方案中，所述的PD-1抗体以注射的方式给药，例如皮下或静脉注射，注射前需将PD-1抗体配制成可注射的形式。特别优选的PD-1抗体的可注射形式是注射液或冻干粉针，其包含PD-1抗体、缓冲剂、稳定剂，任选地还含有表面活性剂。缓冲剂可选自醋酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、以及磷酸盐中的一种或几种。稳定剂可选自糖或氨基酸，优选二糖，例如蔗糖、乳糖、海藻糖、麦芽糖。表面活性剂选自聚氧乙烯氢化蓖麻油、甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯，优选所述聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯为聚山梨酯20、40、60或80，最优选聚山梨酯20。最为优选的PD-1抗体的可注射形式包含PD-1抗体、醋酸盐缓冲剂、海藻糖和聚山梨酯20。

在一个优选的实施方案中，抗PD-1抗体或其抗原结合片段以1小时静脉内输注的形式给药。

本发明中，所述的PD-1抗体可以单独给药，也可以联合其它化疗药物或靶向治疗药物联合给药，优选单独给药。

发明详述

一、术语

为了更容易理解本发明，以下具体定义了某些技术和科学术语。除显而易见在本文件中的它处另有明确定义，否则本文使用的所有其它技术和科学术语都具有本发明所属领域的一般技术人员通常理解的含义。

术语“人源化抗体(humanized antibody)”，也称为CDR移植抗体(CDR-graftedantibody)，是指将小鼠的CDR序列移植到人的抗体可变区框架，即不同类型的人种系抗体构架序列中产生的抗体。可以克服嵌合抗体由于携带大量小鼠蛋白成分，从而诱导的强烈的抗体可变抗体反应。此类构架序列可以从包括种系抗体基因序列的公共DNA数据库或公开的参考文献获得。如人重链和轻链可变区基因的种系DNA序列可以在“VBase”人种系序列数据库(在因特网www.mrccpe.com.ac.uk/vbase可获得)，以及在Kabat，E.A.等人，1991Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版中找到。在本发明一个优选的实施方案中，所述的PD-1人源化抗体的CDR序列选自SEQ ID NO:1，2，3，4，5，6。

术语“抗原结合片段”，指具有抗原结合活性的Fab片段，Fab‘片段，F(ab’)2片段，以及与人PD-1结合的Fv片段sFv片段；包含本发明所述抗体的选自SEQ ID NO:1至SEQ IDNO:6中的一个或多个CDR区。Fv片段含有抗体重链可变区和轻链可变区，但没有恒定区，并具有全部抗原结合位点的最小抗体片段。一般地，Fv抗体还包含在VH和VL结构域之间的多肽接头，且能够形成抗原结合所需的结构。也可以用不同的连接物将两个抗体可变区连接成一条多肽链，称为单链抗体(single chain antibody)或单链Fv(sFv)。本发明的术语“与PD-1结合”，指能与人PD-1相互作用。本发明的术语“抗原结合位点”指抗原上不连续的，由本发明抗体或抗原结合片段识别的三维空间位点。

术语“免疫疗法”指免疫疗法是利用免疫系统来治疗疾病，在本发明中主要指通过提高肿瘤细胞的免疫原性和对效应细胞杀伤的敏感性，激发和增强机体抗肿瘤免疫应答，并应用免疫细胞和效应分子输注宿主体内，协同机体免疫系统杀伤肿瘤、抑制肿瘤生长。

具体实施方式

以下结合实施例用于进一步描述本发明，但这些实施例并非限制本发明的范围。

实施例1开放标签、单中心、非随机、剂量-升级Ⅰ期临床研究，评估抗PD-1抗体在患有晚期实体肿瘤的受试者中的安全性和耐受性

一、受试抗体

PD-1抗体其重、轻链的序列如本发明中SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。200mg/支，配成20mg/ml备用。

二、给药方法

符合条件的患者接受60mg剂量的静脉内抗PD-1抗体，升高至200mg和400mg(首次给药后4周间隔，然后是2周的时间间隔)，直至疾病进展或不可耐受的毒性。

三、研究终点

主要终点是PD-1抗体的的安全性和耐受性，次要的终点是客观反应率(ORR)，PFS和候选生物标志物(PD-L1和外显子组序列)和PD-1抗体的功效之间的关联。

ORR是研究期间任何时间的完整或部分响应的百分比，如由独立的放射学审查委员会评估。

PFS被定义为从第一剂研究药物的日期到首次记录的疾病进展日期或任何原因导致的死亡日期的时间。

四、入组标准

年龄在18至75岁之间的男性和女性；

有组织学证实转移性ESCC；

曾经历疾病进展或复发至少一次全身治疗晚期或转移性疾病；

至少有一个根据实体瘤反应评估标准(RECIST)测量可变损伤(1.1版)；

东部肿瘤协作组(ECOG)的表现状态为0或1；

具有足够的血液，肝和肾功能。

脑部患者只有在病变稳定至少3个月后才能进行转移。

排除标准包括自身免疫性疾病或活动性自身免疫性疾病的病史，伴随的第二种疾病

癌症，器官移植史或PD-1/PD-L1疗法，活动性乙型肝炎或丙型肝炎病毒感染，或正在进行的全身免疫抑制治疗。

以前的癌症治疗，放射治疗或放射外科治疗必须在入组前至少4周完成。

五、数据分析

患者接受随访进行分析，直至2017年5月2日。所有接受至少一剂抗PD-1抗体的患者均纳入疗效分析(完整的分析集合人口)。通过独立放射学评估评估总体反应。

所有接受至少一剂抗PD-1抗体的患者都包括在安全性分析中。使用Fisher精确检验比较速率的差异。针对响应率和相关的95％CIs生成Clopper-Pearson精确置信区间(CIs)。通过Kaplan-Meier方法估计PFS和总生存期(OS)。

六、实验结果

2016年5月11日至2016年12月9日期间，共招募了30名晚期食管癌患者。中位年龄为63岁(范围48至75)。27名患者(90.0％)的ECOG表现状态为0，而3名患者(10.0％)的ECOG表现状态评分为1，大部分患者已经进行了广泛的预处理，其中21/30(70.0％)接受了两次或更多次在先的化疗，19/30(63.3％)有过放疗，14/30(46.7％)有过食管切除手术。最常用的在先化疗方案是铂加紫杉醇，其中26例患者(86.7％)按此方式给药。

数据的截止日期为2017年5月2日，中位治疗时间为18.1周(范围，2.0至38.1)，11名患者仍在研究治疗。共19位(63.3％)患者停用抗PD-1抗体，治疗中止的最常见原因是疾病进展(17/19)，除AE的两个例外(一例上消化道)出血和一例疲劳)，疾病进展与研究治疗无关。

所有30名患者均纳入应答分析，通过独立放射学评估评估的ORR为33.3％(10/30，95％CI：17.9％-54.3％)，(DCR)疾病控制率为56.7％(17/30，95％CI：35.7％-73.6％)。观察到一个完整的响应。在9名部分缓解的患者中，1名患者接受过3次全身或辅助化疗，3名患者接受过两次在先治疗，5名接受过一次治疗。总体而言，响应发生的中位数为治疗开始后第56天。

在数据截止时，21名患者(70.0％)有疾病进展。通过独立评估评估的中位PFS为3.6个月(95％CI：0-7.2)。Kaplan-Meier分析得出的估计6个月PFS率为31.5％(95％CI：14.2-48.7)。

实施例2PD-1抗体对照研究者选择化疗治疗晚期或转移性食管癌的随机、开放、阳性药对照、多中心III期临床研究

一、研究目的

评价PD-1抗体与研究者选择化疗相比治疗一线化疗失败的晚期或转移性食管癌患者的有效性。

二、受试抗体及阳性对照药

PD-1抗体其重、轻链的序列如本发明中SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。200mg/支，配成20mg/ml备用。阳性对照药：市售的多西他赛注射液(艾素)、注射用盐酸伊立替康(艾力)。

三、给药方法

试验组：PD-1抗体，200mg/次，静脉滴注30min(不得少于20min且不得超过60min)，每周期第1天给药，每2周为一个给药周期，连续给药直至出现确证的PD、毒性不可耐受、受试者主动要求退出和研究者判断受试者需要退出研究。

对照组：研究者选择的化疗药(若前期治疗方案中使用过，则不能选择)。选择一种。

多西他赛：75mg/m²，静脉滴注约1h(可根据临床实践调整滴速)，每周期第1天给药，每3周为一个给药周期。连续给药直至出现PD、毒性不可耐受、受试者主动要求退出和研究者判断受试者需要退出研究。

伊立替康：180mg/m²，静脉滴注约1h(可根据临床实践调整滴速)，每周期第1天给药，每2周为一个给药周期。连续给药直至出现PD、毒性不可耐受、受试者主动要求退出和研究者判断受试者需要退出研究。

四、研究终点

主要研究终点

1.总生存期(OS)；

次要研究终点

2.无进展生存期(PFS)；

3.客观缓解率(ORR)；

4.生活质量评分(EORTC QLQ-C30，EORTC QLQ-OES18)；

安全性

不良事件、实验室指标。

五、入组标准

患者必须满足以下所有入选标准才可入组本研究：

1.年龄18岁-75岁，男女均可；

2.经组织学或细胞学确诊的食管鳞癌，且局部晚期不可切除、局部复发或伴远处转移；

3.接受一线系统化疗(可以包括以铂类、紫衫类或氟尿嘧啶类为基础)进展或不耐受的患者(一线化疗后维持治疗进展也可纳入)，术后复发或转移接受的同步放化疗算为一线治疗，对于根治性同步放化疗、新辅助/辅助治疗(化疗或放化疗)，如果在治疗期间或停止治疗后6个月内发生疾病进展，应将其算作一线治疗失败。

序列表

<110> 江苏恒瑞医药股份有限公司

苏州盛迪亚生物医药有限公司

<120> 一种抗PD-1抗体在制备治疗食管癌的药物中的用途

<160> 10

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> 鼠源(Mus musculus)

<400> 1

Ser Tyr Met Met Ser

1 5

<210> 2

<211> 17

<212> PRT

<213> 鼠源(Mus musculus)

<400> 2

Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ala Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 3

<211> 7

<212> PRT

<213> 鼠源(Mus musculus)

<400> 3

Gln Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr

1 5

<210> 4

<211> 11

<212> PRT

<213> 鼠源(Mus musculus)

<400> 4

Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp Leu Thr

1 5 10

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 鼠源(Mus musculus)

<400> 5

Thr Ala Thr Ser Leu Ala Asp

1 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 鼠源(Mus musculus)

<400> 6

Gln Gln Val Tyr Ser Ile Pro Trp Thr

1 5

<210> 7

<211> 443

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(443)

<223> 重链序列

<400> 7

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Met Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ala Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gln Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro

210 215 220

Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro

225 230 235 240

Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr

245 250 255

Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn

260 265 270

Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg

275 280 285

Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val

290 295 300

Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser

305 310 315 320

Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

325 330 335

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu

340 345 350

Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

355 360 365

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

370 375 380

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

385 390 395 400

Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly

405 410 415

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

420 425 430

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440

<210> 8

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(214)

<223> 轻链序列

<400> 8

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp

20 25 30

Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Thr Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Ser Ile Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 9

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(116)

<223> 重链可变区

<400> 9

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Met Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ala Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gln Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 10

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(10)

<223> 轻链可变区

<400> 10

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp

20 25 30

Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Thr Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Ser Ile Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

Claims (14)

1.一种抗PD-1抗体或其抗原结合片段在制备治疗食管癌的药物中的用途。

2.根据权利要求1所述用途，其特征在于所述的食管癌是食管鳞状细胞癌。

3.根据权利要求1所述用途，其特征在于所述的食管癌是食管腺癌。

4.根据权利要求1-3任一项所述的用途，其特征在于所述的食管癌是晚期或者转移性食管癌。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于所述晚期或者转移性食管癌是经过一线化疗已经失败或放疗失败的食管癌。

6.根据权利要求1所述的用途，其中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段的轻链可变区包含分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述的PD-1抗体的重链可变区包含分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3。

7.根据权利要求6所述的用途，其中所述抗PD-1抗体为人源化抗体。

8.根据权利要求7所述的用途，其中所述人源化抗体的轻链可变区序列为如SEQ IDNO:10所示的序列或其变体；所述的变体优选在轻链可变区有0-10的氨基酸变化；更优选为A43S的氨基酸变化。重链可变区序列为如SEQ ID NO:9所示的序列或其变体；所述变体优选在重链可变区有0-10的氨基酸变化；更优选为G44R的氨基酸变化。

9.根据权利要求8所述的用途，其中所述人源化抗体轻链序列为如SEQ ID NO:8所示的序列或其变体；所述的变体优选在轻链可变区有0-10的氨基酸变化；更优选为A43S的氨基酸变化。重链序列为如SEQ ID NO:7所示的序列或其变体；所述变体优选在重链可变区有0-10的氨基酸变化；更优选为G44R的氨基酸变化。

10.根据权利要求9所述的用途，其中所述的人源化抗体轻链序列为如SEQ ID NO:8所示的序列，重链序列为如SEQ ID NO:7所示的序列。

11.根据权利要求1-10任一项所述的用途，其特征在于所述的PD-1抗体或其抗原结合片段单次剂量选自0.1-20mg/kg，优选1-10mg/kg。

12.根据权利要求1-10任一项所述的用途，其特征在于所述的PD-1抗体或其抗原结合片段单次剂量选自50-600mg，优选100-300mg，最优选150-250mg。

13.根据权利要求11、12任一项所述的用途，其特征在于所述的PD-1抗体或其抗原结合片段的给药周期为一周、二周、三周、一月，优选两周或者三周。

14.根据权利要求13所述的用途，其特征在于每个给药周期给药一次，给药方式为每个给药周期的第一天给药。