CN109790313A - 经等离子体处理的表面上的组合物 - Google Patents

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Abstract

本公开提供粘附于表面(例如经等离子体处理的表面)的固体组合物(例如冻干物)和相关方法、用途、试剂盒、中间体、起始材料和下游产品。

Description

经等离子体处理的表面上的组合物
相关申请的交叉引用
本申请要求2016年9月30日提交的临时申请第62/402,446号的35 U.S.C§119(e)下的优先权；所述申请的全部内容以引用的方式并入本文。
背景技术
固体组合物不一定牢固地粘附于表面。缺乏足够的粘附可能在诸如提供用于进行化学、药物或生物化学反应或分析的固体药物组合物或试剂的领域中成为问题，因为组合物在运输或处理期间可能变得错位或松散。如在仪器中分配固定体积的复原液的情况下，错位或松散的组合物可能使复原复杂化或阻止复原，并且一些或所有组合物不再粘附于其中发生复原的器皿的底部处或其附近。未能将组合物完全复原成液态会对分析性能产生不利影响。
例如，包含填充试剂或用于进行化学或生物化学反应或分析的试剂的组合物以粘附于经等离子体处理的表面的固体组合物形式提供。已发现，表面的等离子体处理可以改进通过干燥液体溶液形成的固体组合物的表面的粘附性，并且等离子体处理可以防止或减少固体组合物从表面如器皿底部或其附近的表面错位或松散的频率。不希望受特定理论束缚，等离子体处理可以增加表面的亲水性并因此增加其可湿性，增强试剂与表面的相互作用，并且强化的相互作用在干燥过程例如冻干之后持续存在。
本公开部分地基于以下认识：在固体组合物与表面接触之前，通过表面的等离子体处理，可以增强固体组合物如冻干颗粒与表面如塑料的粘附性。因此，本文公开的组合物、方法和试剂盒可以提供具有幸存于可能在如运输和处理过程中发生的搅动的改进能力的产品，或至少为公众提供有用的选择。
发明内容
因此，本文公开一种制备粘附于经等离子体处理的表面的固体组合物的方法，所述方法包含在经等离子体处理的表面上干燥溶液并从溶液形成固体组合物，所述固体组合物粘附于经等离子体处理的表面。
在一些实施例中，经等离子体处理的表面是用冷阴极放电、空心阴极放电、DC诱导放电、射频(radio frequency，RF)诱导放电、电晕放电、辉光放电或带电粒子束处理的表面。在一些实施例中，经等离子体处理的表面是经电晕放电处理的表面。在一些实施例中，所述方法包含通过用瓦特密度在以下范围内的电晕放电处理表面来制备经等离子体处理的表面：约25瓦特/分钟/米2至约2000瓦特/分钟/米2、约50瓦特/分钟/米2至约1500瓦特/分钟/米2、约100至约1200瓦特/分钟/米2、约200至约1000瓦特/分钟/米2、约100至约600瓦特/分钟/米2或约200瓦特/分钟/米2至约600瓦特/分钟/米2。在一些实施例中，用瓦特密度在以下范围内的电晕放电来处理表面：约25瓦特/分钟/米2至约2000瓦特/分钟/米2、约50瓦特/分钟/米2至约1500瓦特/分钟/米2、约100至约1200瓦特/分钟/米2、约200至约1000瓦特/分钟/米2、约100至约600瓦特/分钟/米2或约200瓦特/分钟/米2至约600瓦特/分钟/米2。在一些实施例中，(i)经等离子体处理的表面的表面能在约33至约45达因、约35至约42达因或约37至约40达因范围内，任选地其中表面包含聚烯烃；或(ii)经等离子体处理的表面的表面能在约35至约55达因、约37至约53达因或约40至约50达因范围内，任选地其中表面包含聚乙烯或聚丙烯。在一些实施例中，相对于相同组成的未处理表面，经等离子体处理的表面的表面能增加，表面能增加在约3至约20达因、约4至约15达因、约5至约12达因或约6至约10达因范围内。
在一些实施例中，干燥包含蒸发、脱水、除湿、冻干、升华和喷雾干燥中的至少一种。在一些实施例中，在至少部分干燥步骤期间将溶液冷冻。在一些实施例中，所述干燥包含冻干。在一些实施例中，溶液在至少部分干燥步骤期间是液体。在一些实施例中，干燥在真空下进行。在一些实施例中，干燥在高于约30℃的温度下进行。在一些实施例中，在干燥之前，溶液的体积在约5μl至约20ml、约200μl至约20ml、约1ml至约20ml、约5ml至约20ml、约5μl至约1ml、约5μl至约500μl、约5μl至约200μl、约5μl至约100μl、约5μl至约50μl、约5μl至约20μl、约5μl至约10μl、约10μl至约200μl、约20μl至约200μl、约50μl至约200μl或约100μl至约200μl范围内。
在一些实施例中，经等离子体处理的表面是经等离子体处理的器皿的内表面。在一些实施例中，经等离子体处理的表面包含塑料。在一些实施例中，塑料包含聚乙烯、聚对苯二甲酸乙二酯、聚丙烯、聚甲基丙烯酸酯、聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚烯烃、聚碳酸酯、聚氨酯、淀粉衍生的塑料或环烯烃共聚物中的至少一种。在一些实施例中，其中塑料包含环烯烃共聚物。
在一些实施例中，溶液包含水。在一些实施例中，溶液包含极性有机溶剂。根据权利要求20所述的方法，其中所述极性有机溶剂包含乙醇、异丙醇、DMSO或甘油中的至少一种。在一些实施例中，溶液包含非极性有机溶剂。
在一些实施例中，溶液包含增容剂。在一些实施例中，增容剂包含糖类。在一些实施例中，增容剂包含蔗糖、甘露醇、甘氨酸、羟乙基淀粉、棉子糖或海藻糖中的至少一种，或者其中增容剂是选自蔗糖、甘露醇、棉子糖或海藻糖的糖类。
在一些实施例中，溶液包含一种或多种酶。在一些实施例中，一种或多种酶包括DNA聚合酶、RNA聚合酶、连接酶、激酶、磷酸酶、蛋白酶、核酸外切酶和核酸内切酶中的至少一种。在一些实施例中，一种或多种酶包括热稳定DNA聚合酶。在一些实施例中，热稳定DNA聚合酶是热启动热稳定DNA聚合酶或与抗体复合。在一些实施例中，一种或多种酶包括DNA依赖性聚合酶、逆转录酶或其它酶，其以约0.20U/ul至约0.72U/ul或约0.1U/ul至约0.6U/ul的浓度存在于溶液中。
在一些实施例中，溶液包含缓冲剂。在一些实施例中，缓冲剂是有机缓冲剂。
在一些实施例中，溶液的无机盐浓度为约5mM或更低。在一些实施例中，溶液不含无机盐。在一些实施例中，溶液包含盐。
在一些实施例中，溶液包含至少一种可用于进行分子分析的寡核苷酸。在一些实施例中，至少一种寡核苷酸选自扩增寡聚体和探针。在一些实施例中，寡核苷酸包含标记。在一些实施例中，标记是荧光标记、化学发光标记、亲和标记或放射性标记。
在一些实施例中，溶液包含一种或多种核苷三磷酸。在一些实施例中，溶液包含一种或多种脱氧核苷三磷酸。在一些实施例中，溶液包含dATP、dGTP、dCTP，及dTTP和dUTP中的至少一种。在一些实施例中，一种或多种核苷三磷酸中的至少一种在溶液中以在约0.1mM至约0.3mM或约0.2mM至约0.6mM范围内的量存在。在一些实施例中，溶液包含选自捕获探针和水解探针的至少一种探针。
在一些实施例中，溶液包含核糖核酸酶抑制剂。在一些实施例中，核糖核酸酶抑制剂以约0.12U/ul至约0.20U/ul的浓度存在于溶液中。
在一些实施例中，溶液包含螯合剂。在一些实施例中，螯合剂是EDTA、EDDS或MGDA。在一些实施例中，螯合剂以约1.5mM至约2.0mM的浓度存在于溶液中。
在一些实施例中，溶液包含去污剂。在一些实施例中，去污剂是非离子去污剂、阳离子去污剂、阴离子去污剂或两性离子去污剂。
在一些实施例中，溶液含有单一单位剂量的扩增试剂。在一些实施例中，溶液含有单一单位剂量的检测试剂。在一些实施例中，溶液含有药物活性剂。
在一些实施例中，方法包含在干燥步骤之前，将溶液分配到经等离子体处理的表面上。在一些实施例中，方法包含在分配步骤之前，对表面进行等离子体处理以形成经等离子体处理的表面。在一些实施例中，方法包括在干燥步骤之后，将固体组合物密封在包含经等离子体处理的表面的器皿中。
还提供含有在环烯烃共聚物表面的凹面中的液体或冷冻溶液的环烯烃共聚物表面，其中环烯烃共聚物表面的表面能为约35达因至约55达因或接触角为约5°至约50°，并且液体或冷冻溶液包含糖类。
在一些实施例中，液体或冷冻溶液包含水。在一些实施例中，液体或冷冻溶液包含极性有机溶剂。在一些实施例中，极性有机溶剂包含乙醇、异丙醇、DMSO或甘油中的至少一种。在一些实施例中，液体或冷冻溶液包含非极性有机溶剂。
在一些实施例中，液体或冷冻溶液包含一种或多种酶。在一些实施例中，一种或多种酶包括DNA聚合酶、RNA聚合酶、连接酶、激酶、磷酸酶、蛋白酶、核酸外切酶和核酸内切酶中的至少一种。
在一些实施例中，液体或冷冻溶液包含缓冲剂。在一些实施例中，液体或冷冻溶液不含无机盐或无机盐浓度为约5mM或更低。在一些实施例中，液体或冷冻溶液包含盐。
在一些实施例中，液体或冷冻溶液包含至少一种可用于进行分子分析的寡核苷酸。在一些实施例中，液体或冷冻溶液包含一种或多种核苷三磷酸。
在一些实施例中，溶液是液体。在一些实施例中，将溶液冷冻。
还提供粘附于经等离子体处理的环烯烃共聚物表面的固体组合物，其中所述固体组合物在环烯烃共聚物表面的凹面内，所述凹面的壁角为约90度至约60度，所述固体组合物的质量为约600微克至约100mg并且包含糖类，并且其中所述固体组合物在包装性能测试之后充分粘附以保持大体上粘附于所述环烯烃共聚物表面，在所述包装性能测试中使含有所述固体组合物的所述环烯烃共聚物表面从高达480mm的高度跌落到不锈钢表面上。还提供粘附于经等离子体处理的表面的固体组合物，其中通过本文公开的方法制备粘附于经等离子体处理的表面的固体组合物。还提供粘附于经等离子体处理的表面的固体组合物，其中所述固体组合物包含增容剂及酶和寡核苷酸中的至少一种。
在一些实施例中，经等离子体处理的表面包含塑料。在一些实施例中，塑料包含聚乙烯、聚对苯二甲酸乙二酯、聚丙烯、聚甲基丙烯酸酯、聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚烯烃、聚碳酸酯、聚氨酯、淀粉衍生的塑料或环烯烃共聚物中的至少一种。在一些实施例中，塑料包含环烯烃共聚物。
在一些实施例中，增容剂包含糖类、甘氨酸或羟乙基淀粉。在一些实施例中，糖类包含蔗糖、甘露醇、棉子糖或海藻糖中的至少一种。在一些实施例中，固体组合物在包含经等离子体处理的表面的器皿内。
在一些实施例中，器皿包含体积在约10ul至约60ml范围内的管。在一些实施例中，器皿是包含多个孔的多孔板。
在一些实施例中，固体组合物的质量在约5mg至约20g、约200mg至约20g、约1g至约20g、约5g至约20g、约5mg至约1g、约5mg至约500mg、约5mg至约200mg、约5mg至约100mg、约5mg至约50mg、约5mg至约20mg、约5mg至约10mg、约10mg至约200mg、约20mg至约200mg、约50mg至约200mg或约100mg至约200mg范围内。
在一些实施例中，固体组合物包含一种或多种酶。在一些实施例中，一种或多种酶包括DNA聚合酶、RNA聚合酶、连接酶、激酶、磷酸酶、蛋白酶、核酸外切酶和核酸内切酶中的至少一种。
在一些实施例中，固体组合物包含缓冲剂。在一些实施例中，固体组合物包含盐。在一些实施例中，固体组合物不含无机盐或无机盐浓度为约5mM或更低。
在一些实施例中，固体组合物包含至少一种可用于进行分子分析的寡核苷酸。在一些实施例中，固体组合物包含一种或多种核苷三磷酸。在一些实施例中，固体组合物含有单一单位剂量的扩增或检测试剂。在一些实施例中，固体组合物含有药物活性剂。
还提供一种包含复原液和本文公开的固体组合物的试剂盒。还提供一种形成混合物的方法，所述方法包含通过将复原液和本文公开的固体组合物组合来形成复原的组合物。
在一些实施例中，复原液包含水、极性有机溶剂和非极性有机溶剂中的至少一种。在一些实施例中，复原液包含水。在一些实施例中，复原液包含至少一种无机盐。
在一些实施例中，本文公开的方法进一步包含添加核酸，其中所述核酸经历至少一种核酸修饰或杂交反应。在一些实施例中，核酸修饰或杂交反应包含核酸合成或扩增。在一些实施例中，核酸修饰或杂交反应包含使探针与核酸杂交以形成杂交的复合物。
在一些实施例中，本文公开的方法进一步包含检测探针的杂交复合物或核溶解。
提供章节标题是为了方便读者且不应解释为限制本公开。
附图说明
图1是接触角测量的图示，其中θ是接触角，H是液滴高度，且R是液滴宽度的一半。
图2A-2B显示如实例1中所述的未处理和经等离子体处理的孔中的冻干颗粒的跌落测试结果。条高度指示在粘附被破坏之前的跌落数。
图3A-3B显示如实例2中所述的未处理和经等离子体处理的孔中的冻干颗粒的跌落测试结果。条高度指示粘合被破坏前的跌落数。A
具体实施方式
定义
在详细描述本教示之前，应理解本公开不限于具体的组合物或工艺步骤，因为此类可以变化。应注意，除非上下文另有明确指示，否则如本说明书和所附权利要求书中所用，单数形式“一(a/an)”和“所述”包括复数指代。因此，例如，提及“增容剂”包括多种增容剂等。
应了解，在本公开中所论述的温度、浓度、时间等之前存在隐含的“约”，使得轻微和非实质性偏差在本文的本教示的范围内。通常，术语“约”指示组合物的组分的量的非实质性变化，其对组合物的活性或稳定性没有任何显著影响。而且，“包含(comprise/comprises/comprising)”、“含有(contain/contains/containing)”、“包括(include/includes/including)”的使用并不旨在限制。应理解，前面的一般性描述和详细描述都仅是示例性和解释性的，且并不是对本教示的约束。
除非特别指出，否则说明书中叙述“包含”各种组分的实施例也被认为是“由所述组分组成”或“基本上由所述组分组成”；说明书中叙述“由各种组分组成”的实施例也被认为是“包含”所述组分或“基本上由所述组分组成”；且说明书中叙述“基本上由各种组分组成”的实施例也被认为是“由所述组分组成”或“包含”所述组分(这种可互换性不适用于在权利要求书中使用这些术语)。
如本文所用，如果在表面被搅动例如摇动(例如以约1-3 Hz的频率通过手)或倒置时材料相对于表面没有明显的移动，则认为材料“粘附”于表面。
“增容剂”为在干燥和储存期间沉积蛋白质和其它试剂提供基质。(Carpenter等(2002)《稳定冻干蛋白调配物的合理设计(Rational design of stable lyophilizedprotein formulation)》.Kluwer Academic/Plenum,纽约,第109-133页)。增容剂可用于形成产物“饼”或其它结构，可防止蛋白质或其它试剂在干燥期间从器皿中损失，并可增加蛋白质稳定性。
螯合剂是一种螯合可能为某些酶的活性所需的二价离子如Mg2+或Mn2+的制剂。
“凹面”是表面的适于保持溶液或由溶液形成的固体组合物的凹陷、孔、压痕或其它特征。
“接触角”是衬底的表面与在三相点引出到衬底上的液滴的表面的切线之间的角度。见图1。接触角θ可以根据公式θ＝2(arctan(H/R))计算，其中H是液滴高度且R是液滴宽度的一半。除非另有指示，否则对于本文提及的接触角，液滴是水。接触角测量在ASTM国际标准D5946-04，“使用水接触角测量的针对经电晕处理的聚合物膜的标准测试方法(Corona-Treated Polymer Films Using Water Contact Angle Measurements)”(2004)中详细论述。关于接触角测量方法和设备的论述另见美国专利第5,268,733号。除非另有指示，否则使用一滴水进行接触角测量。如本文中所用，如果在表面与水接触时观察到接触角，则认为表面具有一定值的或在一定范围内的接触角。
如本文所用，参考结构、组合物或方法的要素使用“第一”、“第二”等，而不对关于要素的排序或定位进行任何暗示；因此，除非本领域普通技术人员将从上下文中另外理解，否则“第一”要素可以是“第二”要素的前部、重叠、后部、上方、下方、之前、同时或之后。
术语“冻干”、“冻干的”和“冷冻干燥”是指一种工艺，通过所述工艺首先将待干燥的材料冷冻且然后在真空环境中通过升华除去冰或冷冻溶剂。“冻干物”是指冻干物质。
关于核酸杂交的术语“严格”(包括“严格杂交条件”或“严格条件”)是指特定寡核苷酸能够与靶核酸而不是测试样品中存在的其它核酸杂交的条件。应了解，这些条件可以根据包括GC含量和寡核苷酸的长度、杂交温度、杂交试剂或溶液的组成和所寻求的杂交特异性的程度在内的因素而变化。用于探针、扩增寡核苷酸、靶捕获寡核苷酸、阻断剂和其它寡核苷酸的适当的杂交条件是本领域众所周知的，可以基于序列组成预测，或可以通过使用常规测试方法确定(例如，Sambrook等,《分子克隆(Molecular Cloning)》,《实验室指南(A Laboratory Manual)》,第2版,(冷泉港实验室出版社(Cold Spring HarborLaboratory Press)),纽约冷泉港(Cold Spring Harbor,NY),1989)，§§1.90-1.91、7.37-7.57、9.47-9.51和11.47-11.57，特别是§§9.50-9.51、11.12-11.13、11.45-11.47和11.55-11.57处)。
扩增寡聚体是可以支持模板依赖性复制的引物或启动子-引物。扩增寡聚体对是一对这样的寡聚体，其支持模板的相对链的模板依赖性复制。多重扩增是用多个扩增寡聚体对同时进行的扩增。
探针是可以与扩增产物杂交以揭示扩增产物的存在或量的寡核苷酸。此类探针通常合并产生荧光或其它可检测信号的分子，在这种情况下其被称为可检测标记的探针。
引物-探针组是被配置用于从模板核酸产生和检测扩增产物的引物和探针的组合。
“复原时间”是用溶液对干燥配制物进行再水化以产生肉眼看来无粒子或浑浊的溶液所需的时间。
“单一单位剂量”或“SUD(single unit dose)”是指用于对单个样品进行分析的试剂量。单一单位剂量可以是溶液。作为实例，单一单位剂量可以是含有适于在单个器皿中扩增单个样品的试剂的干燥颗粒。
如本文所用，除非明确相反地指示，如在表述“不超过A或B中的一个”中，否则“或”包括性地使用，即等同于“和/或”。
如本文所用的术语“或其组合”、“……中的至少一个”和“……中的一个或多个”是指该术语之前列出的术语的所有排列和组合。例如，“A、B、C或其组合”旨在包括以下中的至少一个：A、B、C、AB、AC、BC或ABC，并且如果在特定上下文中顺序是重要的，则还有BA、CA、CB、ACB、CBA、BCA、BAC或CAB。继续此实例，还包括含有一个或多个项目或术语的重复的组合，如BB、AAA、AAB、BBC、AAABCCCC、CBBAAA、CABABB等等。本领域技术人员将理解，除非从上下文中另外明显可见，否则通常对任何组合中的项目或术语的数量没有限制。
“包装性能测试”是指其中使粘附有固体组合物的(例如器皿的)表面从一定高度(例如约480mm)下落到衬底(例如不锈钢)上以确定固体组合物与表面的粘附程度的测试。当没有可见部分或小于约10体积％或约5体积％的固体组合物变得松散时(例如，当表面被摇动或倒置时相对于表面移动)，认为固体组合物大体上保持粘附。在一些实施例中，在包装性能测试中使用的高度是在约20mm至1000mm范围内的高度，例如，约20mm、约40mm、约60mm、约80mm、约100mm、约120mm、约140mm、约160mm、约180mm、约200mm、约220mm、约240mm、约260mm、约280mm、约300mm、约320mm、约340mm、约360mm、约380mm、约400mm、约420mm、约440mm、约460mm、约480mm、约500mm、约520mm、约540mm、约560mm、约580mm、约600mm、约620mm、约640mm、约660mm、约680mm、约700mm、约720mm、约740mm、约760mm、约780mm、约800mm、约820mm、约840mm、约860mm、约880mm、约900mm、约920mm、约940mm、约960mm、约980mm、或约1000mm；或约20mm至约60mm、约60mm至约100mm、约100mm至约200mm、约200mm至约300mm、约300mm至约400mm、约500mm至约600mm、约600mm至约700mm、约800mm至约900mm或约900mm至约1000mm。在一些实施例中，衬底是软泡沫，例如聚氨酯，如聚氨酯片材。在一些实施例中，衬底是坚固的衬垫或垫子材料，如抗压缩性在约18至约20磅/英寸2范围内的AF。在一些实施例中，衬底是硬表面，如不锈钢。在一些实施例中，衬底的厚度为约1cm、2cm、3cm、4cm或5cm。
“等离子体”是一种其中带正电荷和负带电荷的粒子未被束缚的物质状态，并且除非封装在容器中，否则其不具有确定的形状或确定的体积。等离子体还可以含有不带电的粒子，其在没有带电粒子的情况下是气体，例如空气、O2、N2等。如在电晕放电的情况下，等离子体可以通过向气体施加电场来产生。产生等离子体的其它方法包括加热气体、电磁辐射(例如射频(RF)诱导放电)和产生带电粒子束，如电子束。
如果表面已暴露于等离子体且相对于未处理的相对物至少一种性质受暴露的影响，例如，接触角减小、表面能增加或对固体组合物的粘附程度增加，则表面“经等离子体处理”。
“糖类”是含有碳、氢和氧的化合物，其中氧与碳的比率为约(但不一定精确)1:1且氢与氧的比率为约2:1(但不一定精确)。糖类包括糖醇如木糖醇(C5H12O5)以及糖如葡萄糖(C6H12O6)和蔗糖(C12H22O11)。
如本文所用，“固体组合物”是指不可流动的物质。除非另有指示，否则固体组合物不指相对于其它维度通常在一个维度上较薄的涂料，例如干燥油漆。固体组合物包括由以产生非涂料残余物的方式干燥溶液而产生的冻干物、颗粒等。固体组合物通常是结晶的或在分子水平上具有晶格结构，尽管固体组合物还包括无定形和准晶体固体。固体组合物不包括在20℃和1atm压力下不是固体的冷冻溶液。在一些实施例中，固体组合物在三个正交维度上是宏观的(例如，其具有可在没有显微镜的帮助下观察到的长度、宽度和高度，例如，大于约1mm)。本文的固体组合物的密度通常在约0.5至约2g/cm3范围内，并且可相应地估计其体积。
如本文所用，“溶液”是包含溶剂和溶解在其中的溶质的组合物，并且不仅包括液体溶液而且还包括冷冻溶液，例如冷冻含有溶解的溶质的溶剂使得溶质保持通常分散在冷冻溶剂内(与从溶剂中沉淀出或以其它方式形成明显不同的固相相反)的结果。
示例性方法、组合物和试剂盒
在一些实施例中，提供制备粘附的固体组合物的方法，其中在经等离子体处理的表面上干燥溶液，形成固体组合物，其粘附于经等离子体处理的表面。在一些实施例中，经等离子体处理的表面是用冷阴极放电、空心阴极放电、DC诱导放电、射频(RF)诱导放电、电晕放电、辉光放电或带电粒子束处理的表面。在一些实施例中，经等离子体处理的表面是用电晕放电处理的表面。
在一些实施例中，提供粘附于经等离子体处理的表面的固体组合物。在一些实施例中，提供环烯烃共聚物表面，其包含至少一个壁角为约90度至约60度的凹面，其中所述环烯烃共聚物表面含有质量为约600微克至约100mg且包含糖类的固体组合物，其中固体组合物粘附于环烯烃共聚物表面，并且其中固体组合物在使含有固体组合物的环烯烃共聚物表面从约480mm的高度跌落到不锈钢表面上的包装性能测试之后保持大体上粘附于环烯烃共聚物表面。在一些实施例中，提供粘附于经等离子体处理的表面的固体组合物，其中所述固体组合物包含增容剂及酶和寡核苷酸中的至少一种。在一些实施例中，提供通过本文公开的方法制备的粘附于经等离子体处理的表面的固体组合物。
还提供包含本文公开的固体组合物如粘附于经等离子体处理的表面的固体组合物的试剂盒，所述试剂盒任选地进一步包含复原液。
还提供一种形成混合物的方法，所述方法包含通过将复原液和本文公开的固体组合物如粘附于经等离子体处理的表面的固体组合物组合来形成复原的组合物。
在一些实施例中，提供含有在环烯烃共聚物表面的凹面中的液体或冷冻溶液的环烯烃共聚物表面，其中相对于未用等离子体处理的环烯烃共聚物，所述环烯烃共聚物的接触角减小或表面能增加。在一些实施例中，提供含有在环烯烃共聚物表面的凹面中的液体或冷冻溶液的环烯烃共聚物表面，其中所述环烯烃共聚物的表面能为约35达因至约55达因或接触角为约5°至约50°。
本文提供的某些实施例的细节，无论是在以下段落、介绍和发明内容、其附图和描述、实例、权利要求书(认为其是本说明书的一部分)或本申请的任何其它部分中，都关于本文公开的任何和所有方法、组合物和试剂盒进行描述，根据本领域技术人员的理解，所述细节可以应用于所述方法、组合物和试剂盒。
据信，随着固体组合物在溶液干燥期间形成，用等离子体处理表面增加了表面与固体组合物的分子有利地相互作用的程度。例如，等离子体处理可以增加表面中的能够与固体组合物的分子进行非共价相互作用如偶极-偶极、氢键合等的部分带电原子或基团的电荷密度或密度。因此，可以使用等离子体处理的一定范围的持续时间和强度，例如，用等离子体源如瓦特密度在以下范围内的电晕放电放电来处理：约25瓦特/分钟/米2至约2000瓦特/分钟/米2、约50瓦特/分钟/米2至约1500瓦特/分钟/米2、约100至约1200瓦特/分钟/米2、约200至约1000瓦特/分钟/米2、约100至约600瓦特/分钟/米2或约200瓦特/分钟/米2至约600瓦特/分钟/米2。
等离子体处理的程度也可以依照表面能或表面能的变化来表示。在一些实施例中，经等离子体处理的表面，如包含聚烯烃的表面的表面能在约33至约45达因、约35至约42达因或约37至约40达因范围内。在一些实施例中，经等离子体处理的表面，如包含聚乙烯或聚丙烯的表面的表面能在约35至约55达因、约37至约53达因或约40至约50达因范围内。在一些实施例中，相对于相同组合物的未处理表面，经等离子体处理的表面的表面能增加，其中表面能增加在约3至约20达因、约4至约15达因、约5至约12达因或约6至约10达因范围内。
等离子体处理的程度也可以依照接触角或接触角的变化来表示。在一些实施例中，经等离子体处理的表面，如包含聚烯烃的表面的接触角为约5°至约50°，例如约5°至约40°、约5°至约30°、约5°至约10°、约10°至约20°、约10°至约30°、约10°至约40°、约20°至约30°、约30°至约40°或约40°至约50°。在一些实施例中，接触角为约5°至约25°。在一些实施例中，接触角为约10°至约25°。在一些实施例中，相对于等离子体处理之前的表面的接触角，接触角减小。在一些实施例中，减少的量为在约30°至约95°，例如约40°至约90°、约30°至约40°、约40°至约50°、约50°至约60°、约60°至约70°、约70°至约80°、约80°至约90°或约90°至约95°范围内的值。
在一些实施例中，经等离子体处理的表面是经等离子处理的器皿例如管或多孔板或筒的内表面。在一些实施例中，表面或器皿包含塑料。在一些实施例中，塑料包含聚乙烯、聚对苯二甲酸乙二酯、聚丙烯、聚甲基丙烯酸酯、聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚烯烃、聚碳酸酯、聚氨酯、淀粉衍生的塑料或环烯烃共聚物中的至少一种。
用于等离子体处理的设备、使用此类设备的方法或等离子体处理的一般论述可以在例如WO2002/023960 A1；US2009/0143718 A1；US 6,106,653；US 7,556,845 B2；US 3,870,610；US2013/0017672 A1；US 8,361,565 B2和US 9,005,188 B2中找到。据信，等离子体处理尚未应用于固体组合物如冻干物与表面的粘附环境下。尽管如此，鉴于本公开的指导和一般关于等离子体处理的可用知识，本领域技术人员可以充分实践、制造和使用本文公开的组合物和方法。
在一些实施例中，干燥包含冻干。在一些实施例中，固体组合物是冻干物，如冻干颗粒。在一些实施例中，干燥包含蒸发、脱水、除湿、冻干和喷雾干燥中的至少一种。在一些实施例中，干燥在真空下进行，例如小于或等于约0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0.05或0.01个大气压的压力或大于或等于环境压力约0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0.05或0.01倍的压力下进行。在一些实施例中，干燥在升高的温度，例如比高于环境温度高约1、2、3、4或5℃或高于约30℃，如约30℃至110℃、约30℃至40℃、约40℃至50℃、约50℃至60℃、约60℃至70℃、约70℃至80℃、约80℃至90℃、约90℃至100℃或约100℃至110℃的温度下进行。在一些实施例中，干燥在环境温度或约15℃至30℃、约15℃至25℃、约20℃至30℃、约15℃至20℃、约20℃至25℃或约25℃至30℃的温度下进行。在一些实施例中，干燥在降低的温度，例如比低于环境温度低约1、2、3、4或5℃或低于15℃，如约10℃至约15℃、约5℃至约10℃、约0℃至约5℃、约-5℃至约0℃、约-10℃至约0℃、约-20℃至约-10℃、约-30℃至约-20℃、约-40℃至约-30℃、约-50℃至约-40℃、约-60℃至约-50℃、约-70℃至约-60℃、约-80℃至约-70℃、约-90℃至约-80℃或约-100℃至约-90℃的温度下进行。
在一些实施例中，在至少部分干燥步骤期间将溶液冷冻。在一些实施例中，溶液在至少部分干燥步骤期间是液体。在一些实施例中，在全部或大体上所有干燥步骤期间将溶液冷冻。在一些实施例中，溶液在所有或大体上所有干燥步骤期间是液体。在一些实施例中，溶液在部分干燥步骤期间是液体并且在至少部分干燥步骤期间是固体，如当部分溶剂经历液体到气体转变例如在蒸发期间，接着冷冻且然后使剩余的溶剂在如升华中经历固体到气体的转变例如在冻干期间时。
可以可以使用标准方法和设备将溶液冻干。冷冻干燥器可从例如马里兰州哥伦比亚的GEA工程技术(GEA Process Engineering,Columbia,MD)获得。压缩冷冻干燥服务由例如威尔士汉普郡温彻斯特(Winchester,Hampshire,Great Britain)的BiopharmaTechnology Ltd.和伊利诺伊州迪尔菲尔德(Deerfield,IL)的百特医疗用品公司(BaxterHealthcare Corp)的《生物制药溶液无菌压缩制造(BioPharma Solutions SterileContract Manufacturing)》提供。冻干的指导可从以下获得：例如，L.Rey,J.C.May(编)(2010)《药物和生物产品的冷冻干燥/冻干(Freeze Drying/Lyophilization ofPharmaceuticals and Biological Products)》,第3次编辑,纽约Informa Healthcare或《酶学方法(Methods in Enzymology)》,第22卷,第33-39页,纽约学术出版社(AcademicPress)(1971)；或《冷冻干燥(Freeze-Drying)》,E.W.Flosdorf,Rheinhold,纽约(1949)。任选地，在冷冻干燥期间可以减少氧含量(Phillips等(2001)《生物制剂(Biologics.)》19:219)。
各种容器适合于干燥。当容器密封并在部分真空下储存时，容器应能够承受外部压力。容器应由允许从外部向内部合理传递热量的材料制成。容器的尺寸优选使得待干燥的溶液占总体积的不超过20％以避免溢出。
样品可以在分开的器皿或多试样器皿中干燥。多试样器皿意指可以含有至少两个试样的连续器皿，使得其可以并行但分开地储存和操作。多试样器皿例如多孔板或筒的标准形式包括具有6、24、96、384或1536个凹面的形式，例如孔。96孔形式的实例中每个孔的体积为约300-400微升，其中工作体积为约75-200微升。体积通常与孔的数量成反比，对于每个孔通常在1nL与10mL之间的范围内，尽管也考虑了其它尺寸。示例性的孔和凹面可具有平底、圆底或V形底部等。另外，孔有时进一步称为反应孔。术语反应孔不要求在反应孔中实际发生任何反应。相反，该术语用于指含有试剂的器皿或孔，其中可能没有反应，其中发生部分反应或其中有完全反应。
如上所述，在本文的一些实施例中，多孔板可经历冻干以由溶液形成固体组合物。冻干可以在巢式装置中进行(参见共同未决的国际申请第PCT/US2016/045166号)。巢是用于板的容器，其具有可以通过可从密封的冻干室外部操作的机构来关闭的通气孔。将含有多孔板的巢放置在冻干室内，其中一个或多个通气孔处于开放位置。然后将腔室密封并在包括巢内空间在内的整个腔室中施加冻干气氛。然后关闭一个或多个通气孔，从而密封巢。随后释放对冻干室的密封，并取出含有多孔板的巢。然后可将巢重新定位并与位于其中的多孔板一起储存，直到操作者准备好使用位于其中的冻干组合物或重新密封含有冻干试样的多孔板以进一步储存或销售。然后可以密封多孔板的孔，大体上抑制水分从环境空气中进入。在一些实施例中，将密封的多孔板储存在含有干燥剂的小袋中。类似地，分开的器皿可以经历冻干，并且可以在巢中经历冻干。以此方式可以防止少量水分进入密封的多孔板中。
最佳冻干条件取决于产品。在一些实施例中，冻干程序可包含例如在约-30℃至约-10℃的温度下的热处理步骤。热处理步骤可具有例如30分钟至6小时的持续时间。例如，热处理步骤可在约-20℃下持续约2小时。在一些实施例中，冻干程序可包含例如在约-50℃至约-10℃的温度下的初级干燥步骤。初级干燥步骤可具有例如约10小时至约75小时的持续时间。在一些实施例中，冻干程序可包含例如在约-10℃至约40℃的温度下的二级干燥步骤。初级干燥步骤可具有例如约1小时至约24小时的持续时间。在冻干期间，施加真空使得冻干室中的压力低于大气压，例如，在约10毫托至约250毫托的范围内。
其它干燥方法包括喷雾干燥、流化床干燥、减湿机、除湿和干燥滤饼(参见NPCheremisinoff(2000)《(Handbook of Chemical Preocessing Equipment)》,巴特沃思-海涅曼(butterworth Heinemann),马萨诸塞州波士顿(Boston,MA))。减湿机可从俄亥俄州森伯里的百瑞空气工程有限公司(Bry Air,Inc.,Sunbury,Ohio)和宾夕法尼亚州怀奥米辛的迪思特西部技研(DST Seibu Giken,Wyomissing,PA)获得。可获得旋转干燥器、锥形干燥器和架式干燥器(McGill AirPressure LLC，俄亥俄州哥伦布(Columbus,Ohio))。在一个实施例中，真空干燥器通过将材料暴露于降低的压力来除去水分，其中通过蒸发损失的热量被来自热源或其中器皿含有材料的储存器如水浴的热量替代，例如，市售的旋转干燥器。示例性干燥剂包括硅胶干燥剂、分子筛干燥剂如铝硅酸盐和合成沸石及膨润土干燥剂。
在一些实施例中，将反应混合物在与其将被复原以使用的器皿相同的器皿中干燥。
冻干的或其它固体或干燥的组合物具有低含水量，例如，低于5重量％、低于4重量％、低于3重量％、低于2重量％、低于1.0重量％、低于0.5重量％、低于0.2重量％、低于0.1重量％、低于0.05重量％、低于0.02重量％、低于0.01重量％等等的水。在一些实施例中，固体组合物的质量在约5mg至约20g、约200mg至约20g、约1g至约20g、约5g至约20g、约5mg至约1g、约5mg至约500mg、约5mg至约200mg、约5mg至约100mg、约5mg至约50mg、约5mg至约20mg、约5mg至约10mg、约10mg至约200mg、约20mg至约200mg、约50mg至约200mg或约100mg至约200mg范围内。
冻干的或其它固体或干燥的组合物在使用前经受储存。储存期可包括干燥组合物在室温下暴露于环境空气而储存的时间段。此类时段可以长达3小时，或者长达1.0小时、长达1.5小时、长达2.0小时、长达2.5小时、长达3.5小时、长达4.0小时、长达5.0小时、长达6.0小时、长达8.0小时，或在任何时间范围内，如90分钟至180分钟。在此类储存期间的绝对湿度可以是每立方米空气至少2.3g水，或者，每立方米空气大于1.8、2.0、2.2、2.4、2.6、2.8、3.0克水，直至在储存条件下对应于约95％相对湿度的绝对湿度。或者，相对湿度可以是例如约40％至约95％相对湿度，如约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或约95％相对湿度。
储存还可以包括其中干燥或固体组合物大体上被密封以防止与密封外的环境空气接触的更长的时段。此储存期可以是长时间，例如，至少一周、至少一个月、至少六个月、至少一年或至少两年。从一个月到两年的时段是示例性的。
长期储存或长期或短期稳定性研究的储存温度范围包括，例如，0-2℃、0-4℃、2-4℃、2-6℃、20℃、25℃、30℃、40℃、50℃、60℃，以及零下的温度，如在液氮下-4至-2℃、-6至-2℃、-8至-2℃、-10至-2℃、-20℃、-40℃、-60℃、-80℃。优选地，在冰点以上且在约4-8℃的范围内储存。加速降解研究可在约25℃、约30℃、约35℃、约40℃下进行一段时间，例如一小时、两小时、三时、24小时、两天、四天、八天、一个月、三个月、100天等等。储存或者稳定性测试的条件可以是温度波动的条件，如从高于冰点到低于冰点的波动。
在一些实施例中，溶液包含水。在一些实施例中，溶液包含至少10重量％、20重量％、30重量％、40重量％、50重量％、55重量％、60重量％、65重量％、70重量％、75重量％、80重量％、85重量％、90重量％、95重量％、96重量％、97重量％、98重量％、99重量％、99.5重量％、99.6重量％、99.7重量％、99.8重量％或99.9重量％的水。在一些实施例中，溶液包含至少10体积％、20体积％、30体积％、40体积％、50体积％、55体积％、60体积％、65体积％、70体积％、75体积％、80体积％、85体积％、90体积％、95体积％、96体积％、97体积％、98体积％、99体积％、99.5体积％、99.6体积％、99.7体积％、99.8体积％或99.9体积％的水。
在一些实施例中，溶液包含极性有机溶剂。在一些实施例中，溶液包含至少10重量％、20重量％、30重量％、40重量％、50重量％、55重量％、60重量％、65重量％、70重量％、75重量％、80重量％、85重量％、90重量％、95重量％、96重量％、97重量％、98重量％、99重量％、99.5重量％、99.6重量％、99.7重量％、99.8重量％或99.9重量％的极性有机溶剂。在一些实施例中，溶液包含至少10体积％、20体积％、30体积％、40体积％、50体积％、55体积％、60体积％、65体积％、70体积％、75体积％、80体积％、85体积％、90体积％、95体积％、96体积％、97体积％、98体积％、99体积％、99.5体积％、99.6体积％、99.7体积％、99.8体积％或99.9体积％的极性有机溶剂。在一些实施例中，极性有机溶剂包含乙醇。在一些实施例中，极性有机溶剂包含异丙醇。在一些实施例中，极性有机溶剂包含DMSO。在一些实施例中，极性有机溶剂包含甘油。
在一些实施例中，溶液包含非极性有机溶剂。在一些实施例中，溶液包含至少10重量％、20重量％、30重量％、40重量％、50重量％、55重量％、60重量％、65重量％、70重量％、75重量％、80重量％、85重量％、90重量％、95重量％、96重量％、97重量％、98重量％、99重量％、99.5重量％、99.6重量％、99.7重量％、99.8重量％或99.9重量％的非极性有机溶剂。在一些实施例中，溶液包含至少10体积％、20体积％、30体积％、40体积％、50体积％、55体积％、60体积％、65体积％、70体积％、75体积％、80体积％、85体积％、90体积％、95体积％、96体积％、97体积％、98体积％、99体积％、99.5体积％、99.6体积％、99.7体积％、99.8体积％或99.9体积％的非极性有机溶剂。
在一些实施例中，溶液中溶质的总量为约0.01％至约50％(w/v)、约0.05％至约50％(w/v)、约0.1％至约50％(w/v)、约0.2％至约50％(w/v)、约0.5％至约50％(w/v)、约1％至约50％(w/v)、约2％至约50％(w/v)、约5％至约50％(w/v)、约10％至约50％(w/v)、约0.01％至约25％(w/v)、约0.01％至约10％(w/v)、约0.01％至约5％(w/v)、约0.01％至约2％(w/v)、约0.01％至约1％(w/v)、约0.01％至约0.1％(w/v)、约0.1％至约1％(w/v)、约1％至约2％(w/v)、约2％至约5％(w/v)、约5％至约10％(w/v)、约10％至约20％(w/v)或约20％至约50％(w/v)。在一些实施例中，溶液中溶质的总量为约0.01％至约50％(w/w)、约0.05％至约50％(w/w)、约0.1％至约50％(w/w)、约0.2％至约50％(w/w)、约0.5％至约50％(w/w)、约1％至约50％(w/w)、约2％至约50％(w/w)、约5％至约50％(w/w)、约10％至约50％(w/w)、约0.01％至约25％(w/w)、约0.01％至约10％(w/w)、约0.01％至约5％(w/w)、约0.01％至约2％(w/w)、约0.01％至约1％(w/w)、约0.01％至约0.1％(w/w)、约0.1％至约1％(w/w)、约1％至约2％(w/w)、约2％至约5％(w/w)、约5％至约10％(w/w)、约10％至约20％(w/w)或约20％至约50％(w/w)。在一些实施例中，溶液中溶质的总量为约0.01％至约50％(v/v)、约0.05％至约50％(v/v)、约0.1％至约50％(v/v)、约0.2％至约50％(v/v)、约0.5％至约50％(v/v)、约1％至约50％(v/v)、约2％至约50％(v/v)、约5％至约50％(v/v)、约10％至约50％(v/v)、约0.01％至约25％(v/v)、约0.01％至约10％(v/v)、约0.01％至约5％(v/v)、约0.01％至约2％(v/v)、约0.01％至约1％(v/v)、约0.01％至约0.1％(v/v)、约0.1％至约1％(v/v)、约1％至约2％(v/v)、约2％至约5％(v/v)、约5％至约10％(v/v)、约10％至约20％(v/v)或约20％至约50％(v/v)。
溶液的示例性体积包括约1ul、约5ul、约10ul、约20ul、约24ul、约50ul、约100ul、约200ul、约300ul、约400ul、约500ul、600ul、约700ul、约800ul、约900ul、约1,000ul(1mL)、约2mL、约5mL、约10mL、约20mL、约50mL等等。与干燥前的溶液相比，可以相同的体积、更小的体积或更大的体积形成复原的组合物。相对于本体试剂，较低的体积可以是约90％、约80％、约60％、约40％、约20％、约10％或约5％。更大的体积可以是本体试剂的约120％、140％、160％、180％、200％(2倍)、约4倍、约6倍、约8倍、约10倍、约20倍。
在一些实施例中，溶液包含增容剂。在一些实施例中，溶液包含一种或多种酶。在一些实施例中，溶液包含至少一种可用于进行分子分析的寡核苷酸。在一些实施例中，溶液包含缓冲剂。在一些实施例中，溶液包含盐。在一些实施例中，溶液包含一种或多种核苷三磷酸。在一些实施例中，溶液包含一种或多种脱氧核苷三磷酸。在一些实施例中，溶液包含dATP、dGTP、dCTP，及dTTP和dUTP中的至少一种。
在一些实施例中，溶液不含无机盐。在一些实施例中，溶液含有约5mM至0mM无机盐。溶液中无机盐的额外的示例性浓度范围为约4mM至0mM、约3mM至0mM、约2mM至0mM、约1mM至0mM或约500μM至0mM。用于扩增和检测反应混合物的额外常见无机盐包括仅举几例的钠、钾、锰、镁和氯化物中的一种或多种。
在一些实施例中，溶液包含5mM或更少的无机盐，且：无机盐以0.373ug/ul或更少、或0.332ug/ul或更少、或0.292ug/ul或更少的每微升质量存在；氯化钠以0.292ug/ul或更少、0.146ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在；钠以0.115ug/ul或更少、0.057ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在；氯化钾以0.373ug/ul或更少、0.186ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在；钾以0.196ug/ul或更少、0.098ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在；或氯化物以0.355ug/ul或更少、0.178ug/ul或更少、0.089ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在。
在一些实施例中，溶液包含4mM或更少的无机盐，且：无机盐可以0.298ug/ul或更少、或0.266ug/ul或更少、或0.234ug/ul或更少的每微升质量存在；氯化钠以0.234ug/ul或更少、0.117ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在；钠以0.092ug/ul或更少、0.046ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在；氯化钾以0.298ug/ul或更少、0.149ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在；钾以0.156ug/ul或更少、0.078ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在；或氯化物以0.284ug/ul或更少、0.142ug/ul或更少、0.071ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在。
在一些实施例中，溶液包含3mM或更少的无机盐，且：无机盐以0.224ug/ul或更少、或0.199ug/ul或更少、或0.175ug/ul或更少的每微升质量存在；氯化钠以0.175ug/ul或更少、0.088ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在；钠以0.069ug/ul或更少、0.034ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在；氯化钾以0.224ug/ul或更少、0.112ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在；钾以0.117ug/ul或更少、0.059ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在；或氯化物以0.213ug/ul或更少、0.107ug/ul或更少、0.053ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在。
在一些实施例中，溶液包含2mM或更少的无机盐，且：无机盐以0.149ug/ul或更少、或0.133ug/ul或更少、或0.117ug/ul或更少的每微升质量存在；氯化钠以0.117ug/ul或更少、0.058ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在；钠以0.046ug/ul或更少、0.023ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在；氯化钾以0.149ug/ul或更少、0.075ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在；钾以0.078ug/ul或更少、0.039ug/ul或更少、或0.0μg/μl的每微升质量存在；或氯化物以0.142ug/ul或更少、0.071ug/ul或更少、0.036ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在。
在一些实施例中，溶液包含1mM或更少的无机盐，且：无机盐以0.075ug/ul或更少、或0.066ug/ul或更少、或0.058ug/ul或更少的每微升质量存在；氯化钠以0.058ug/ul或更少、0.029ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在；钠以0.023ug/ul或更少、0.011ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在；氯化钾以0.075ug/ul或更少、0.037ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在；钾以0.039ug/ul或更少、0.020ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在；或氯化物以0.071ug/ul或更少、0.036ug/ul或更少、0.018ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在。
在一些实施例中，溶液包含500uM或更少的无机盐，且：无机盐以0.037ug/ul或更少、或0.033ug/ul或更少、或0.029ug/ul或更少的每微升质量存在；氯化钠以0.029ug/ul或更少、0.015ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在；钠以0.011ug/ul或更少、0.006ug/ul或更少、或0.0μg/μl的每微升质量存在；氯化钾以0.037ug/ul或更少、0.019ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在；钾以0.020ug/ul或更少、0.010ug/ul或更少、或0.0μg/μl的每微升质量存在；或氯化物以0.036ug/ul或更少、0.018ug/ul或更少、0.009ug/ul或更少、或0.0ug/ul的每微升质量存在。
在一些实施例中，溶液包含约5mM至约500uM的无机盐，且：无机盐以约0.373ug/ul至约0.029ug/ul的每微升质量存在；氯化钠以0.292ug/ul至约0.029ug/ul的每微升质量存在；钠以0.115ug/ul至约0.006ug/ul的每微升质量存在；氯化钾以约0.373ug/ul至约0.019ug/ul的每微升质量存在；钾以0.196ug/ul至约0.010ug/ul的每微升质量存在；氯化物以0.355ug/ul至约0.009ug/ul的每微升质量存在；无机盐以约0.373ug/ul至约0.029ug/ul的每微升质量存在；且氯化钠可以约0ug/ul的每微升质量存在；或无机盐以约0.373ug/ul至约0.029ug/ul的每微升质量存在；且氯化钾以约0ug/ul的每微升质量存在。
在一些实施例中，一种或多种核苷三磷酸中的至少一种在溶液中以约0.1mM至约0.3mM或约0.2mM至约0.6mM范围内的量存在。
在一些实施例中，溶液包含药物活性剂，例如一种或多种单一单位剂量的药物活性剂。在一些实施例中，溶液进一步包含药学上可接受的盐。
在一些实施例中，溶液包含足以进行核酸合成或扩增分析的试剂。“足以进行核酸合成或扩增分析的试剂”意指除了溶剂和样品或模板核酸之外的可用于进行核酸合成的一组试剂，如聚合酶、适当的二价阳离子盐和核苷三磷酸。可以通过选择酶和其它组分来定制此类试剂组以用于不同类型的扩增，包括PCR、RT-PCR和转录介导的扩增。
在一些实施例中，溶液包含捕获探针或水解探针。在一些实施例中，溶液包含核糖核酸酶抑制剂。在一些实施例中，核糖核酸酶抑制剂以约0.12U/ul至约0.20U/ul的浓度存在于溶液中。在一些实施例中，溶液包含螯合剂。在一些实施例中，螯合剂以1.5mM至2.0mM的浓度存在于溶液中。在一些实施例中，溶液包含去污剂。
在一些实施例中，根据本公开的溶液(有时称为预冻干混合物)包含聚合酶；用于扩增和检测反应的核苷酸；有机缓冲剂，例如Tris；和增容剂如海藻糖或棉子糖或其组合中的一种、两种、三种或全部。溶液还可以包括或不包括一种或多种核酸。溶液可额外包括逆转录酶、螯合剂和核糖核酸酶抑制剂。
用于并入扩增反应中的核苷酸通常作为dNTP提供。dNTP的示例性浓度为0.1至0.3mM的dATP；0.1至0.3mM的dGTP；0.1至0.3mM的dCTP；0.2至0.6mM的dTTP；0.2至0.6mM的dUTP；且优选约0.2mM的dATP；约0.2mM的dGTP；约0.2mM的dCTP和0.4mM的dTTP或dUTP。
示例性溶液具有0.1-0.3mM且更优选0.2mM dATP、dGTP和dCTP，以及0.2-0.6mM且更优选0.4mM dUTP或dTTP，及0.3-0.8U/μL聚合酶。在一些组合物中，聚合酶是热启动Taq聚合酶。在一些组合物中，聚合酶是MDx热启动聚合酶。一些组合物还包括0.12-0.20U/μL的RNAasinTMRNAase抑制剂。一些组合物还包括EDTA，任选地为1.5-2.0mM。此类组合物还包括0.16-0.32M的海藻糖、1.5-2.0mM的EDTA和0.3-0.45U/μL的聚合酶Taq。
本公开提供用于包括实时PCR反应的PCR反应的试剂。(《实时PCR指南(Real-timePCR Handbook)》,《生命科技(Life Technologies)》(2014)；Kutyavin等(2000)《核酸研究(Nucleic Acids Res.)》28:655；Afonina等(2002)《生物技术(Biotechniques.)》32:940)。在实时PCR中，镁盐通常以约3-6mM的终浓度使用(《实时PCR指南》，同上)。在一些实施例中，本公开提供用于多重PCR反应的试剂，即其中提供多个引物对以用于扩增和检测多个靶标。本公开提供用于PCR反应的引物和探针。引物和/或探针包含靶杂交序列，并且可以进一步包含非靶杂交序列、核苷酸类似物、可检测部分和非核苷酸连接子(linker)中的一种或多种(参见例如WO 2010/151566和WO 2013/126793)。在一些实施例中，一种或多种引物或探针适于杂交或在严格条件下确实与靶标、模板或样品核酸杂交。可获得热循环仪(应用生物系统(AppliedBiosystems)PCR系统和热循环仪)。可获得用于定量PCR产物的凝胶扫描仪(2100密度计)。
在形成溶液后，可以在干燥之前将其在室温下放置一段相当长的时段。在干燥步骤开始之前，所述时段可以长达8小时，或者，在干燥步骤开始前长达1小时、长达2小时、长达4小时、长达6小时、长达10小时、长达12小时或长达14小时。在此温育时段期间，在溶液中包括相当大量的盐以及其它试剂例如PCR试剂可导致不希望的杂交产物和其它副产物。通过形成基本上没有无机盐，例如小于约5mM无机盐的溶液可以减少或消除此类不希望的杂交和副产物。
取决于溶液的其它组分，溶液中无机盐的存在可导致以下不希望的性质中的一种或多种。核酸可以杂交在一起，所述杂交通过来自盐如钾、钠、锰、镁和/或氯化物的无机离子的存在来刺激。同样在存在无机二价阳离子如锰离子和镁离子的情况下，可能发生不希望的酶活性，如聚合酶持续合成能力。非热启动酶和热启动酶可发生此类不希望的活性。由于在盐存在下的核酸杂交和酶活性，可能开始形成不希望的副产物。另外，无机盐是吸湿的并且可以将大气水分吸收到固体组合物中。固体组合物的再水化可降低储存稳定性、酶稳定性，并允许形成额外的假副产物。
在一些实施例中，通过干燥根据本公开的溶液形成固体组合物。因此，根据本公开的固体组合物可含有根据本公开的溶液可含有的溶质中的任一种。例如，在一些实施例中，固体组合物包含增容剂。在一些实施例中，固体组合物包含一种或多种酶。在一些实施例中，固体组合物包含至少一种可用于进行分子分析的寡核苷酸。在一些实施例中，固体组合物包含缓冲剂。在一些实施例中，固体组合物包含盐。在一些实施例中，固体组合物不含无机盐。在一些实施例中，固体组合物包含一种或多种核苷三磷酸。在一些实施例中，固体组合物包含一种或多种脱氧核苷三磷酸。在一些实施例中，固体组合物包含dATP、dGTP、dCTP，及dTTP和dUTP中的至少一种。在一些实施例中，固体组合物包含捕获探针或水解探针。在一些实施例中，固体组合物包含核糖核酸酶抑制剂。在一些实施例中，固体组合物包含螯合剂。在一些实施例中，固体组合物包含去污剂。
在一些实施例中，固体组合物包含足以进行核酸合成或扩增分析的试剂。在一些实施例中，固体组合物包含聚合酶；用于扩增和检测反应的核苷酸；有机缓冲剂，例如Tris；和增容剂如海藻糖或棉子糖或其组合中的一种、两种、三种或全部。溶液还可以包括或不包括一种或多种核酸。溶液可额外包括逆转录酶、螯合剂和核糖核酸酶抑制剂。
固体组合物可含有试剂以提供单一单位剂量(SUD)，或任选地，两种或更多种SUD。单一单位剂量是对不超过单个样品进行扩增和/或检测反应所必需的试剂的集合。单一单位剂量可以指液体试剂或干燥的颗粒。值得注意的是，如本文所提及的单一单位剂量不需要含有对单个样品进行扩增和/或检测反应所必需的所有试剂。单一单位剂量可能缺乏进行扩增和/或检测反应所需的试剂。类似地，单一单位剂量可含有不足量的用于进行扩增和/或检测反应的试剂。仅举例来说，干燥的单一单位剂量颗粒可包含足够的Taq聚合酶单元以进行扩增反应，但可不含镁。在诸如此类的实例中，可以将镁加入干燥的单一单位剂量颗粒中，如通过复原液的方式。也仅举例来说，干燥的单一单位剂量可包含不足量的用于进行扩增反应的dNTP。在诸如此类的实例中，可以将dNTP的剩余物加入干燥的单一单位剂量颗粒中，如通过复原液的方式。本公开所属领域的普通技术人员将容易地生成具有不同组成的SUD和干燥颗粒SUD，因为这些实例都是非限制性的。如本文所用，短语“含有单一单位剂量”及其其它语法形式限于无限量，即含有单一单位剂量的溶液、组合物或凹面(例如孔)不含两种或更多SUD。
在一些实施例中，固体组合物包含药物活性剂，例如一种或多种单一单位剂量的药物活性剂。在一些实施例中，固体组合物进一步包含药学上可接受的盐。
在一些实施例中，固体组合物由干燥包含5mM或更少的无机盐的溶液来制备，并且无机盐的质量相对于固体组合物的质量的百分比为0.311％或更低、0.277％或更低或0.244％或更低。例如，溶液可包含4mM或更少的无机盐，并且无机盐的质量相对于固体组合物的质量的百分比为0.249％或更低、0.222％或更低或0.195％或更低。溶液可包含3mM或更少的无机盐，并且无机盐的质量相对于固体组合物的质量的百分比为0.186％或更低、0.166％或更低或0.146％或更低。溶液可包含2mM或更少的无机盐，并且无机盐的质量相对于固体组合物的质量的百分比为0.124％或更低、0.111％或更低或0.097％或更低。溶液可包含1mM或更少的无机盐，并且无机盐的质量相对于固体组合物的质量的百分比为0.062％或更低、0.055％或更低或0.049％或更低。溶液可包含500uM或更少的无机盐，并且无机盐的质量相对于固体组合物的质量的百分比为0.031％或更低、0.028％或更低或0.024％或更低。溶液可包含5mM至500μM的无机盐，并且无机盐的质量相对于固体组合物的质量的百分比为约0.311％至0.024％。在一些实施例中，氯化钠的质量相对于固体组合物的质量的百分比为约0％，或氯化钾的质量相对于固体组合物的质量的百分比为约0％。还提供一种含有干燥的单一单位剂量的前述固体组合物之一的器皿。还提供一种包含两个或更多个孔的多孔板，其中至少两个、三个、四个、五个、六个、十个、十二个或所有孔含有干燥的单一单位剂量的前述固体组合物之一。
在一些实施例中，使用或提供复原液。例如，可将复原液加入例如在经等离子体处理的表面上的固体组合物中。在一些实施例中，在试剂盒中提供复原液。
在一些实施例中，复原液包含水。在一些实施例中，复原液包含至少10重量％、20重量％、30重量％、40重量％、50重量％、55重量％、60重量％、65重量％、70重量％、75重量％、80重量％、85重量％、90重量％、95重量％、96重量％、97重量％、98重量％、99重量％、99.5重量％、99.6重量％、99.7重量％、99.8重量％或99.9重量％的水。在一些实施例中，复原液包含至少10体积％、20体积％、30体积％、40体积％、50体积％、55体积％、60体积％、65体积％、70体积％、75体积％、80体积％、85体积％、90体积％、95体积％、体积％、96体积％、97体积％、98体积％、99体积％、99.5体积％、99.6体积％、99.7体积％、99.8体积％或99.9体积％的水。
在一些实施例中，复原液包含极性有机溶剂。在一些实施例中，复原液包含至少10重量％、20重量％、30重量％、40重量％、50重量％、55重量％、60重量％、65重量％、70重量％、75重量％、80重量％、85重量％、90重量％、95重量％、96重量％、97重量％、98重量％、99重量％、99.5重量％、99.6重量％、99.7重量％、99.8重量％或99.9重量％的极性有机溶剂。在一些实施例中，复原液包含至少10体积％、20体积％、30体积％、40体积％、50体积％、55体积％、60体积％、65体积％、70体积％、75体积％、80体积％、85体积％、90体积％、95体积％、96体积％、97体积％、98体积％、99体积％、99.5体积％、99.6体积％、99.7体积％、99.8体积％或99.9体积％的极性有机溶剂。在一些实施例中，极性有机溶剂包含乙醇。在一些实施例中，极性有机溶剂包含异丙醇。在一些实施例中，极性有机溶剂包含DMSO。在一些实施例中，极性有机溶剂包含甘油。
在一些实施例中，复原液包含非极性有机溶剂。在一些实施例中，复原液包含至少10重量％、20重量％、30重量％、40重量％、50重量％、55重量％、60重量％、65重量％、70重量％、75重量％、80重量％、85重量％、90重量％、95重量％、96重量％、97重量％、98重量％、99重量％、99.5重量％、99.6重量％、99.7重量％、99.8重量％或99.9重量％的非极性有机溶剂。在一些实施例中，复原液包含至少10体积％、20体积％、30体积％、40体积％、50体积％、55体积％、60体积％、65体积％、70体积％、75体积％、80体积％、85体积％、90体积％、95体积％、96体积％、97体积％、98体积％、99体积％、99.5体积％、99.6体积％、99.7体积％、99.8体积％或99.9体积％的非极性有机溶剂。
在一些实施例中，复原液包含增容剂。在一些实施例中，复原液包含一种或多种酶。在一些实施例中，复原液包含至少一种可用于进行分子分析的寡核苷酸。在一些实施例中，复原液包含缓冲剂。在一些实施例中，复原液包含盐。在一些实施例中，复原液不含无机盐。在一些实施例中，复原液包含一种或多种核苷三磷酸。在一些实施例中，复原液包含一种或多种脱氧核苷三磷酸。在一些实施例中，复原液包含dATP、dGTP、dCTP，及dTTP和dUTP中的至少一种。
在一些实施例中，复原液包含足以进行核酸合成或扩增分析的试剂。
在一些实施例中，复原液包含捕获探针或水解探针。在一些实施例中，复原液包含核糖核酸酶抑制剂。在一些实施例中，复原液包含螯合剂。在一些实施例中，复原液包含去污剂。
在一些实施例中，复原液不含或大体上不含有机溶质。在一些实施例中，复原液不含或大体上不含分子量大于约1kDa的有机溶质。在一些实施例中，复原液不含或大体上不含分子量大于约10kDa的有机溶质。“大体上不含”意指所提及的物质(如果存在的话)处于足够低的水平，以便不影响为适当目的，例如复原、检测、扩增等，所提及的物质出现在其中的组合物的适合性。
在一些实施例中，复原液提供含于水中的3.8-4.4mM MgCl2和50-80mM KCl。复原液还可以含有0.012-0.020％对羟基苯甲酸甲酯、0.006-0.010％对羟基苯甲酸丙酯和/或0.26％无水乙醇及其它组分。
在一些实施例中，复原液包含药学上可接受的盐。在一些实施例中，将复原液和固体组合物(例如包含药物活性剂的固体组合物)组合以提供药学上可接受的组合物，例如包含单一单位剂量的药物活性剂。
在适合于固体组合物的预期用途的水溶液与固体组合物接触之后，复原时间可以短于1秒、短于2秒、短于5秒、短于10秒、短于15秒、短于20秒、短于50秒或短于60秒(1分钟)，任选地通过摇动、轻敲涡流、晃动、抽入和抽出移液管尖端或折叠或挤压可延展小瓶中的任何一种来促进接触。示例性复原时间是2-10秒。复原时间可以用在任何冰箱温度(约4℃)下的复原液体、约23℃的环境温度溶液或用在约37℃下的温热溶液来测量。通常，干燥的组合物已从冰箱中取出并在加入复原液中之前是冷的。这些程序中的任一种的环境(房间)通常是环境温度或约21℃-25℃，例如23℃。确定对物质进行复原的时间可以是，例如，确定将物质完全溶解的时间。完全溶解可以通过目视检查来确定，例如，其中没有浑浊或没有纹影图案是完全溶解的量度。或者，完全溶解可以通过光学仪器如测量光散射的机器的方式来确定。
任选的其它组分(例如，在溶液、固体组合物或复原液中)包括但不限于PCR试剂、表面活性剂、引物、探针、模板、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯。对羟基苯甲酸甲酯的示例性浓度为0.01-0.024重量％，例如约0.016％，或者，约0.010％、约0.014％、约0.016％、约0.020％、约0.024％，或由这些值界定的任何范围。对羟基苯甲酸丙酯的示例性浓度范围为0.002-0.016％或0.008％，或者，约0.002％、约0.004％、约0.006％、约0.008％、约0.010％、约0.012％、约0.014％、约0.016％，或由这些值界定的任何范围。
在一些实施例中，增容剂(例如，存在于溶液或固体组合物中)包含糖类。示例性增容剂是海藻糖或棉子糖或其组合。可以使用的其它增容剂包括蔗糖、甘露醇、海藻糖加甘露醇、蔗糖加甘露醇、蔗糖加甘氨酸和羟乙基淀粉。参见Cleland等(2001)《药物科学杂志(J.Pharm.Sci.)》90:310；Meyer等(2009)《欧洲药物科学杂志(Eur.J.Pharm.Sci.)》38:29；Webb等(2003)《药物科学杂志》92:715；Garzon Rodrigues等(2004)《药物科学杂志》93:684；Qiu等(2012)《国际制药学杂志(Int.J.Pharmaceuticals.)》437:51)；Van Dijk-Wolthuis等(1997)《聚合物(Polymer.)》38:6235 6242。羟乙基淀粉分类为羟乙基淀粉、六聚淀粉(hexastarch)、五聚淀粉(pentastarch)和四聚淀粉(tetrastarch)(参见例如Chow的WO2014/099198)。增容剂优选以0.16M至0.32M，或者，0.04至0.12M、0.08至0.16M、0.12至0.20M、0.16至0.24M、0.20至0.28M、0.24至0.32M、0.28至0.36M、0.32至0.40M，或所述范围的任何组合，如0.08至0.24M的浓度存在。在一些实施例中，增容剂包含蔗糖、甘露醇、甘氨酸、羟乙基淀粉、棉子糖或海藻糖中的至少一种。在一些实施例中，增容剂包含海藻糖。
在一些实施例中，一种或多种酶(例如，存在于溶液、固体组合物或复原液中)包括DNA聚合酶、RNA聚合酶、连接酶、激酶、磷酸酶、蛋白酶、核酸外切酶和核酸内切酶中的至少一种。在一些实施例中，一种或多种酶包括热稳定DNA聚合酶。在一些实施例中，热稳定DNA聚合酶是热启动热稳定DNA聚合酶或与抗体复合。在一些实施例中，一种或多种酶包括DNA依赖性聚合酶、逆转录酶或其它酶，其以约0.20U/ul至约0.72U/ul或约0.1U/ul至约0.6U/ul的浓度存在于溶液中。
DNA聚合酶可商购获得或可由用户制备。聚合酶的一个实例是可从凯杰(Qiagen)(马里兰州日耳曼敦(Germantown,MD)，目录号201203)商购获得的Taq聚合酶。Taq聚合酶的另一实例可作为G2 Flexi DNA聚合酶(威斯康星州威斯康星州的普洛麦格(Promega,Madison,WI)，目录号M7801)商购获得。市售的其它DNA聚合酶包括但不限于TthDNA聚合酶(例如，密苏里州圣路易斯的西格玛-奥德里奇(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)，目录号11480022001)和嵌合DNA聚合酶，如高保真DNA聚合酶(马萨诸塞州伊普斯威奇的NEB(NEB,Ipswich,MA)，目录号M0530S)。市售的还有热启动DNA聚合酶。例如，Taq聚合酶可作为热启动聚合酶(普洛麦格，目录号M5001)商购获得。热启动聚合酶是一种抗体介导的热启动酶，其中Taq聚合酶与阻断聚合酶活性的抗体结合。使用高热量使阻断抗体变性，因此在PCR反应的初始加热步骤期间，抗体变性且聚合酶活性恢复。各种抗体可以与热启动方法一起使用，例如，TAQSTART抗体(Clontech Laboratories，加利福尼亚州芒廷维尤(Mountain View,CA)，目录号R028A)。类似地，可获得其它热启动聚合酶，包括化学介导的热启动聚合酶。等价聚合酶和抗体可从各种商业来源获得，并且或者，可由用户制备。
逆转录酶可商购获得或可由用户制备。市售逆转录酶的实例包括但不限于MMLV(莫洛尼鼠白血病病毒(Maloney Murine Leukemia Virus))逆转录酶和III逆转录酶(例如，加利福尼亚州卡尔斯巴德的赛默飞费舍尔(ThermoFisher Scientific,Carlsbad,CA)，目录号28025-013和18080-044)，MMLV RT(西格玛-奥德里奇，目录号M1302)，AMV逆转录酶(马萨诸塞州伊普斯威奇的NEB，目录号M0277S)及GoScriptTM逆转录酶(普洛麦格，目录号A50003)。GoScript逆转录酶包括逆转录酶和一组用于合成经优化以定量PCR扩增的第一链cDNA的试剂。等价逆转录酶和试剂可从各种商业来源获得，并且或者，可由用户制备。
单一单位剂量中的DNA聚合酶的示例性浓度为0.01-1.0U/ul。例如0.32U/ul，或0.4U/ul或0.72U/ul，或0.32-0.4U/ul，或0.4-0.72U/ul，或0.05-0.3U/ul，或0.8-1.0U/ul。一个单位的DNA聚合酶定义为在74℃下在30分钟内催化并入酸不溶性物质中的10纳摩尔dNTP所需的酶量。单一单位剂量中的逆转录酶的示例性浓度为0.01U/ul-1.0U/ul。一个单位的逆转录酶定义为在37℃下在10分钟内催化转移到酸可沉淀物质中的1nmol脱氧核苷酸所需的酶量。
在一些实施例中，寡核苷酸(例如，存在于溶液、固体组合物或复原液中)是一种或多种扩增寡聚体(例如，引物、启动子-引物)、捕获探针、检测探针Taqman探针、阳性对照模板和阴性对照模板。在一些实施例中，寡核苷酸中的至少一种包含标记。在一些实施例中，标记是荧光标记、化学发光标记、亲和标记或放射性标记。在一些实施例中，标记不是核苷酸、不是磷酸盐、不是碳水化合物或不是核碱基。
在一些实施例中，足以进行核酸合成或扩增分析的试剂(例如，存在于溶液、固体组合物或复原液中)进一步包含引物、启动子-引物或引物对(任选地包括启动子-引物)。在一些实施例中，足以进行核酸合成或扩增分析的试剂进一步包含缓冲剂、稳定剂、防腐剂或其它辅助物质中的一种或多种。
在一些实施例中，缓冲剂(例如，存在于溶液、固体组合物或复原液中)是有机缓冲剂。在一些实施例中，缓冲剂是无机缓冲剂。
示例性有机缓冲剂是Tris。可掺入本公开的溶液、固体组合物或复原液中的替代有机缓冲剂包括磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、CHES、组氨酸和Good's缓冲剂，如HEPES、MES、MOPS、两性离子缓冲剂和甘氨酰胺，以及缓冲剂组合。其它有机缓冲剂包括琥珀酸盐、柠檬酸盐、葡糖酸盐、磷酸盐等。在一些实施例中，缓冲剂在约5.5至约7.0或约6.0至约7.5的pH范围内，例如约6.5的pH下有效。控制pH在此范围内的缓冲剂的实例包括琥珀酸盐(如琥珀酸钠)、葡糖酸盐、组氨酸、柠檬酸盐和其它有机酸缓冲剂。
在一些实施例中，螯合剂(例如，存在于溶液、固体组合物或复原液中)是EDTA(乙二胺四乙酸)、EGTA(乙二醇四乙酸)、EDDS(乙二胺-N,N'-二琥珀酸)、MGDA(甲基甘氨酸二乙酸)或DTPA(二乙烯三胺五乙酸)中的一种或多种。螯合剂的示例性浓度为约1mM至2.5mM。
在一些实施例中，去污剂(例如，存在于溶液、固体组合物或复原液中)是非离子、阳离子、阴离子或两性离子去污剂。去污剂包括可从许多商业供应商(例如，GenoTechnology,Inc.，密苏里州圣路易斯)获得的离子(阳离子或阴离子)、非离子和两性离子去污剂。实例包括但不限于月桂基硫酸锂、盐酸氨丙啉、苯扎氯铵、胆碱对甲苯磺酸盐、十二烷基三甲基氯化铵、3-[(3-胆酰胺丙基)二甲氨基]-1-丙磺酸盐、十六烷基二甲基乙基溴化铵、氯化十六烷基吡啶鎓、氯化十六烷基三甲铵、十二烷基硫酸钠、十六烷基三甲基对甲苯磺酸盐、luviquatTM、甲苄索氯铵、肉豆蔻基三甲基溴化铵、N,N′,N′-聚氧乙烯(10)-N-牛脂-1,3-二氨基丙烷液、奥芬溴铵(oxyphenonium bromide)、四庚基溴化铵、四(癸基)溴化铵、甲基三辛基氯化铵、氨基磺基甜菜碱-16、三十二烷基甲基氯化铵、十八烷基三甲基溴化铵非离子去污剂
核糖核酸酶抑制剂蛋白包括通过以1:1比率与核糖核酸酶非共价结合来抑制核糖核酸酶A家族和人胎盘核糖核酸酶的天然和重组50kDa蛋白(威斯康星州威斯康星州的普洛麦格公司)。参见Botella-Estrada等(2001)《癌症基因治疗(Cancer Gene Ther.)》8:278；Polakowski等(1992)EXS.61:428。核糖核酸酶抑制剂的示例性浓度为约0.04U/ul至约0.4U/ul。一个单位定义为将5ng核糖核酸酶A的活性抑制50％所需的核糖核酸酶抑制剂的量。通过核糖核酸酶A抑制胞苷2',3'-环一磷酸的水解来测量活性。
在一些实施例中，在干燥步骤之前，将溶液分配到表面上。在一些实施例中，在分配步骤之前，对表面进行等离子体处理以形成经等离子体处理的表面。
在一些实施例中，固体组合物在经等离子体处理的表面的凹面内。在一些实施例中，固体组合物在包含经等离子体处理的表面的器皿内。在一些实施例中，器皿包含管。在一些实施例中，器皿是包含多个孔的多孔板。在一些实施例中，器皿、管或孔的容积在约40ul至约60ml范围内。在一些实施例中，在干燥步骤之后，将固体组合物密封在包含经等离子体处理的表面的器皿中。
如上所述，某些实施例涉及包含两个或更多个孔的多孔板。在一些实施例中，两个或更多个孔包含由包含低水蒸气透过率、热导率、光学透明度、低自发荧光或其组合的材料构成的壁。在一个方面，一个或多个孔包含锥形壁。在一些实施例中，两个或更多个孔包含被配置成适合用于对包含在孔内的反应混合物进行PCR扩增反应的PCR热循环仪的壁。在一些实施例中，两个或更多个孔包含被配置成适合用于进行PCR、TMA或其它核酸扩增反应的装置的导热管接收区的壁。在一些实施例中，两个或更多个孔包含用于进入孔的腔室的开口。在一些实施例中，两个或更多个孔各自包含盖子以密封相关孔的开口。在一些实施例中，两个或更多个孔中的每一个的开口用盖子密封，所述盖子是低水蒸气透过率的箔。在一些实施例中，两个或更多个孔中的每一个的开口用盖子密封，所述盖子是低水蒸气透过率的弹性体物质。在一个方面，多孔板包含如本文所述的两个或更多个孔，其中两个或更多个孔中的每一个的腔室含有干燥的包含聚合酶和无机盐的单一单位剂量组合物，其中无机盐的质量相对于颗粒的质量的百分比为约0.311％至0.024％。在一个方面，多孔板包含如本文所述的两个或更多个孔，其中两个或更多个孔中的每一个的腔室含有干燥的包含逆转录酶和无机盐的单一单位剂量组合物，其中无机盐的质量相对于颗粒的质量的百分比为约0.311％至0.024％。在一个方面，多孔板包含如本文所述的两个或更多个孔，并且其中两个或更多个孔中的每一个的腔室含有干燥的包含聚合酶、逆转录酶和无机盐的单一单位剂量组合物，其中无机盐的质量相对于颗粒的质量的百分比为约0.311％至0.024％。
此处提供的固体组合物可以用如上所述的复原液复原，且然后用于一个或多个其它步骤中。可以在复原之前、在复原的同时或在复原之后将待分析的样品加入固体组合物中。在一些实施例中，将复原后的整个组合物用于与样品组合，并且此处复原液/样品的相对体积可以是例如约9.9/0.1、9.8/0.2、9.5/0.5、9/1、8/2、7/3、6/4、5/5等等。
例如，在一些实施例中，添加核酸并使核酸经历至少一种核酸修饰或杂交反应。在一些实施例中，核酸修饰或杂交反应包含核酸合成或扩增。在一些实施例中，核酸修饰或杂交反应包含使探针与核酸杂交以形成杂交的复合物。在一些实施例中，所述方法进一步包含检测探针的杂交复合物或核溶解。
除非另有规定，否则溶液或复原的组合物中的试剂的浓度可以是例如，0.0％(省略的试剂)、0.001％、0.004％、0.008％、0.0012％、0.0016％、0.0020％、0.0030％、0.0040％、0.0050％、0.0060％、0.0080％、0.01％、0.02％、0.04％、0.06％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.8％、1％、2％、3％、4％、5％等。还提供了“约”在上述浓度、低于上述浓度、高于上述浓度、涉及上述浓度中的任两种的范围下的试剂。
可使用自动取样处理设备以进行上述步骤，如将复原液加入经等离子体处理的表面上的固体组合物中。在一些实施例中，使用自动取样处理设备与复原同时或依次在复原后添加额外物质如样品或模板、酶或盐。可以聚集反应混合物，并且可以在自动取样处理设备中进行反应。在一些实施例中，自动取样处理设备是具有移液器、混合器、培养器和洗涤站的机器人装置，如能够同时进行多种分析，例如PCR反应、转录介导的扩增和靶捕获杂交的装置，如Panther仪器(马萨诸塞州的豪洛捷公司(Hologic,Inc.,MA))。
当存在一种或多种酶时，基本上不存在无机盐可以减少在干燥之前储存本体试剂期间、在密封之前短期储存干燥的组合物期间和密封之后长期储存期间，酶活性的损失和副产物的形成。在一些实施例中，所有储存后的酶活性是在即将开始储存之前的值的至少99％、至少98％、至少95％、至少90％、至少80％、至少75％、至少70％、至少60％、至少50％、至少40％、至少30％、至少20％，及由这些百分比界定的，在开始储存之前的值，或者，至在最佳条件下储存的比较样品的值的范围。
组合物的稳定性可以在复原干燥产物之后进行评估，例如，从活性(即扩增的速率或产率)或副产物的形成。缺乏稳定性可能是由于在干燥之前或之后储存期间活性损失或副产物形成而导致的。活性或副产物的形成可以是绝对或相对的量度。如果是相对的，则用于比较的基线可以是干燥和复原之前的本体试剂混合物，或是以限定的方式(例如，存在Mg2+盐或另一种盐)与所述本体试剂混合物不同的对照复原混合物。可以通过实时扩增速率或扩增产物的最终产率或命中率来评估活性。副产物可以通过凝胶电泳、凝胶扫描仪、琼脂糖凝胶、毛细管电泳等等中的一个或多个来分析。
复原的扩增混合物的活性(如果由于不同的复原体积导致的任何差异需要，则进行校正)优选在75、80、85、90或95％内，或在实验误差内与干燥前的本体试剂的实验误差难以区分。存在于复原的扩增混合物中的副产物(如果由于不同的复原体积导致任何差异需要进行校正)按在干燥前存在于本体试剂中的原始化合物的重量或平均摩尔数计优选小于20、15、10、5、4、3、2或1％。有时副产物低于检测限。
上述固体组合物可以提供于试剂盒中。此类试剂盒可以在器皿如管中含有干燥的组合物。在一些实施例中，试剂盒含有包含两个或更多个孔的多孔板。一些试剂盒含有供应于分开的器皿中的多种干燥组合物。一些试剂盒包括一个或多个多孔板，其包括在多孔板的两个或更多个密封孔构件中的多种干燥组合物。
一些试剂盒还包括在与干燥的组合物分开的器皿中的复原液。复原液可以批量形式提供以将等分试样分配到含有固体组合物的单个器皿中，或可以一个或多个单位剂量的形式提供，每个单位剂量用于与含有固体组合物的单个器皿组合。
任选地，含有固体组合物的器皿和含有复原液的器皿可以通过易碎材料分离。易碎材料可包含铝箔、聚丙烯、聚酯、聚氯乙烯(PVC)或聚乙烯。易碎材料可包括一层、两层、三层或更多层，每层具有相同的组成，或每层具有不同的组成，如与PVC层接触的箔层。膜可以从例如密歇根州密德兰的陶氏化学公司(Dow Chemical Co.,Midland,MI)或宾夕法尼亚州普鲁士国王的阿科玛公司(Inc.,King of Prussia,PA)获取。易碎材料的穿透允许复原液与固体(例如冻干的)组合物接触。
可以将试剂盒设计成适合热循环仪或培养器，使得酶促反应直接在试剂盒的隔室中发生，以避免需要将组合物转移到不同的反应器皿或容纳此类器皿的容器中。
可以使试剂盒适用于例如，通过端口、软管、刺穿隔膜的注射器(参见US2014/0121515和US2014/0276356)的方式将用户供应的试剂引入试剂盒内的器皿中，或者，可将用户供应的试剂，如核酸模板，在用户供应的容器中与本公开的试剂混合。试剂盒的隔室中的一个或多个可以空状态供应并用作混合室。
所有范围都包括所述范围的全部数和部分数，应理解部分数是指其中部分数是有意义的范围。仅举例来说，一类寡核苷酸的核碱基长度范围将不包括部分数，因为提及部分核苷酸单元是没有意义的，其中温度长度范围将包括部分数，因为温度测量值可以是部分值。此外，范围包括定义所述范围的值。
实例
材料和方法
使用商业等离子体处理设备如IoN140等离子体室，在空气或O2中使用电晕放电使多孔塑料筒经受等离子体处理。通过接触角测量监测等离子体处理的程度。未处理的微孔板的接触角通常在75°至100°范围内。经处理的微孔板通常显示出在11°至22°范围内的接触角。因此，等离子体处理使接触角减小约55°至90°。筒中的塑料类型是环烯烃共聚物。
将含有海藻糖(约0.15M至约0.40M)的水溶液以每孔约15至约50μl的体积分配到未处理的和经等离子体处理的筒孔中。在不同的试验中，使用不同的循环时长冻干溶液，例如，与上面提供的参数一致。通常优选较短的循环，以便提供较高的通量，除非如溶质浓度或被冻干的产物的不稳定性的考虑因素有利于更长的循环。如上所述，最佳冻干参数取决于产物。在微孔板和筒的孔中形成冻干海藻糖的固体组合物(颗粒)。
通过如下进行跌落测试来评价颗粒对未处理的和经等离子体处理的筒孔表面的粘附性。
将待测试的每个筒放在软泡沫上的保持在120mm高度下的雪橇上。释放雪橇并使其落到泡沫上。检查筒孔是否有任何颗粒变松。对于跌落2-4，在连续增加的高度240、360和440mm下重复这些步骤。在跌落440mm到软泡沫上后，用坚固的衬垫替换软泡沫，并从120、240、360和440mm的高度进行5-8跌落，并观察每次跌落后是否有任何颗粒变得松散。在跌落440mm到坚固衬垫上后，用坚硬的表面(混凝土或钢)替换坚固的衬垫，并根据公式h＝20mm×(d–8)在高度h下进行9-32跌落，其中d是跌落数。例如，跌落9为从20mm，跌落10为从40mm，且依此类推直到从480mm的跌落32。跌落33-98各自从480mm进行，到硬表面上。
实例1.用短循环冻干法进行等离子体处理
图2A-2B显示条形图，其中每个条的高度指示在每个未处理的筒(“无”)或四个经等离子体处理的筒(“等离子体1”至“等离子体4”)的十二个孔中的颗粒变得松散之前所经受的跌落数。使用较短的循环进行冻干。
在经等离子体处理的孔中，颗粒与孔的粘附明显更强。在未处理的孔中，颗粒在平均9.1次跌落后变得松散，而对于经等离子体1、等离子体2、等离子体3和等离子体4处理的孔，颗粒分别在平均46.6、62.2、55.7和59.4次跌落后变得松散。
在空气和O2中使用经等离子体处理的筒进行额外的实验。在这些实验中，颗粒在74与88之间的平均跌落数后变得松散(数据未显示)。
实例2.用长循环冻干法进行等离子体处理
图3A-3B显示条形图，其中每个条的高度指示在每个未处理的筒(“无”)、在空气中经等离子体处理的两个筒(“等离子体/空气1”和“等离子体/空气2”)和在O2中经等离子体处理的两个筒(“等离子体/O2 1”和“等离子体/O2 2”)的十二个孔中的颗粒变得松散之前所经受的跌落数。使用较长的循环进行冻干。
在经等离子体处理的孔中，颗粒与孔的粘附明显更强。在未处理的孔中，颗粒在平均12.5次跌落后变得松散，而对于经等离子体/空气1、等离子体/空气2、等离子体/O2 1、等离子体/O2 2处理的孔，颗粒分别在平均36.9、48.2、38.8和45.0次跌落后变得松散。
如实例1中经受等离子体1、等离子体2、等离子体3和等离子体4处理的筒用海藻糖溶液填充并使用较长循环进行冻干。颗粒在35与41之间的平均跌落数后变得松散(数据未显示)。
实例3.储存经等离子处理的筒
如实例1中那样使筒经受等离子体处理。在等离子体处理后，将筒在含氧环境中储存1天、30天、90天或100天的时段。在储存期结束时，用含糖类的PCR反应溶液填充筒中的孔，并将溶液冻干。未经等离子体处理的对照筒也用糖类溶液进行填充，冻干并储存达1天、30天、90天和100天中的每一者。
冻干后，使所有含有冻干物质的筒经受被设计成模拟运输和处理条件的包装性能测试。进行的单独测试为(i)初始手动操作，ASTM D5276-98标准，附录A，(ii)堆积振动，ASTM D4728-06标准，附录D，(iii)松散载荷振动，ASTM D999-08标准，附录F，(iv)集中冲击，ASTM D6344-04标准，附录J和(v)最终手动处理，ASTM D5276-98标准，附录A。测试后，目视检查每个含有冻干物质的筒并将其用于PCR分析(复原、与靶核酸组合，并经受扩增和检测条件)。无论储存时间如何，经等离子体处理的筒都含有粘附于筒孔底部的均匀成形的干燥组合物，而未处理的筒含有破碎和移位的组合物。针对经等离子体处理的筒中的物质的PCR分析性能提供了稳健、均匀的靶检测结果而没有任何假阴性，而针对未处理的筒中的物质的PCR分析性能是不一致的并且包括许多假阴性。
储存在非惰性气氛中(如在氧气存在下储存)达至少100天的经等离子体处理的筒在运输和分配后保留完整且完全活性的冻干物质，而未处理的筒则不然。
本公开不受本公开的组合物、试剂、方法、诊断、实验室数据等的限制，并且本公开不受本文公开的任何特定或优选实施例的限制。
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Claims (101)

1.一种制备粘附于经等离子体处理的表面的固体组合物的方法，所述方法包含将所述经等离子体处理的表面上的溶液干燥以及由所述溶液形成固体组合物，所述固体组合物粘附于所述经等离子体处理的表面。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述经等离子体处理的表面是用冷阴极放电、空心阴极放电、DC诱导放电、射频(radio frequency，RF)诱导放电、电晕放电、辉光放电或带电粒子束处理的表面。
3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述经等离子体处理的表面是经电晕放电处理的表面。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述方法包含通过用瓦特密度在以下范围内的电晕放电处理表面来制备所述经等离子体处理的表面：约25瓦特/分钟/米2至约2000瓦特/分钟/米2、约50瓦特/分钟/米2至约1500瓦特/分钟/米2、约100至约1200瓦特/分钟/米2、约200至约1000瓦特/分钟/米2、约100至约600瓦特/分钟/米2或约200瓦特/分钟/米2至约600瓦特/分钟/米2。
5.根据权利要求3所述的方法，其中用瓦特密度在以下范围内的电晕放电来处理所述表面：约25瓦特/分钟/米2至约2000瓦特/分钟/米2、约50瓦特/分钟/米2至约1500瓦特/分钟/米2、约100至约1200瓦特/分钟/米2、约200至约1000瓦特/分钟/米2、约100至约600瓦特/分钟/米2或约200瓦特/分钟/米2至约600瓦特/分钟/米2。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中(i)所述经等离子体处理的表面的表面能在约33至约45达因、约35至约42达因或约37至约40达因范围内，任选地其中所述表面包含聚烯烃；或(ii)所述经等离子体处理的表面的表面能在约35至约55达因、约37至约53达因或约40至约50达因范围内，任选地其中所述表面包含聚乙烯或聚丙烯。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中相对于相同组成的未处理表面，所述经等离子体处理的表面的表面能增加，所述表面能增加在约3至约20达因、约4至约15达因、约5至约12达因或约6至约10达因范围内。
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述干燥包含蒸发、脱水、除湿、冻干、升华和喷雾干燥中的至少一种。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在干燥步骤的至少一部分期间将所述溶液冷冻。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述干燥包含冻干。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述溶液在所述干燥步骤的至少一部分期间是液体。
12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述干燥在真空下进行。
13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述干燥在高于约30℃的温度下进行。
14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在干燥之前，所述溶液的体积在约5μl至约20ml、约200μl至约20ml、约1ml至约20ml、约5ml至约20ml、约5μl至约1ml、约5μl至约500μl、约5μl至约200μl、约5μl至约100μl、约5μl至约50μl、约5μl至约20μl、约5μl至约10μl、约10μl至约200μl、约20μl至约200μl、约50μl至约200μl或约100μl至约200μl范围内。
15.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述经等离子体处理的表面是经等离子体处理的器皿的内表面。
16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述经等离子体处理的表面包含塑料。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述塑料包含聚乙烯、聚对苯二甲酸乙二酯、聚丙烯、聚甲基丙烯酸酯、聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚烯烃、聚碳酸酯、聚氨酯、淀粉衍生的塑料或环烯烃共聚物中的至少一种。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述塑料包含环烯烃共聚物。
19.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述溶液包含水。
20.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述溶液包含极性有机溶剂。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述极性有机溶剂包含乙醇、异丙醇、DMSO或甘油中的至少一种。
22.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述溶液包含非极性有机溶剂。
23.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述溶液包含增容剂。
24.根据权利要求23所述的方法，其中所述增容剂包含糖类。
25.根据权利要求23或24所述的方法，其中所述增容剂包含蔗糖、甘露醇、甘氨酸、羟乙基淀粉、棉子糖或海藻糖中的至少一种，或者其中所述增容剂是选自蔗糖、甘露醇、棉子糖或海藻糖的糖类。
26.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述溶液包含一种或多种酶。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述一种或多种酶包括DNA聚合酶、RNA聚合酶、连接酶、激酶、磷酸酶、蛋白酶、核酸外切酶和核酸内切酶中的至少一种。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述一种或多种酶包括热稳定DNA聚合酶。
29.根据权利要求28所述的方法，其中所述热稳定DNA聚合酶是热启动热稳定DNA聚合酶或与抗体复合。
30.根据权利要求26或27所述的方法，其中所述一种或多种酶包括DNA依赖性聚合酶、逆转录酶或其它酶，其以约0.20U/ul至约0.72U/ul或约0.1U/ul至约0.6U/ul的浓度存在于所述溶液中。
31.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述溶液包含缓冲剂。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述缓冲剂是有机缓冲剂。
33.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述溶液的无机盐浓度为约5mM或更低。
34.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述溶液不含无机盐。
35.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述溶液包含盐。
36.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述溶液包含至少一种可用于进行分子分析的寡核苷酸。
37.根据权利要求36所述的方法，其中所述至少一种寡核苷酸选自扩增寡聚体和探针。
38.根据权利要求36或37所述的方法，其中所述寡核苷酸包含标记。
39.根据权利要求38所述的方法，其中所述标记是荧光标记、化学发光标记、亲和标记或放射性标记。
40.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述溶液包含一种或多种核苷三磷酸。
41.根据权利要求40所述的方法，其中所述溶液包含一种或多种脱氧核苷三磷酸。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述溶液包含dATP、dGTP、dCTP，及dTTP和dUTP中的至少一种。
43.根据权利要求40至42中任一项所述的方法，其中所述一种或多种核苷三磷酸中的至少一种在所述溶液中以约0.1mM至约0.3mM或约0.2mM至约0.6mM范围内的量存在。
44.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述溶液包含选自捕获探针和水解探针的至少一种探针。
45.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述溶液包含核糖核酸酶抑制剂。
46.根据权利要求45所述的方法，其中所述核糖核酸酶抑制剂以约0.12U/ul至约0.20U/ul的浓度存在于所述溶液中。
47.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述溶液包含螯合剂。
48.根据权利要求47所述的方法，其中所述螯合剂是EDTA、EDDS或MGDA。
49.根据权利要求47或48所述的方法，其中所述螯合剂以约1.5mM至约2.0mM的浓度存在于所述溶液中。
50.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述溶液包含去污剂。
51.根据权利要求50所述的方法，其中所述去污剂是非离子、阳离子、阴离子或两性离子去污剂。
52.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述溶液含有单次单位剂量的扩增试剂。
53.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述溶液含有单次单位剂量的检测试剂。
54.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述溶液含有药物活性剂。
55.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法包含在所述干燥步骤之前，将所述溶液分配到所述经等离子体处理的表面上。
56.根据权利要求55所述的方法，其中所述方法包含在所述分配步骤之前，对表面进行等离子体处理以形成所述经等离子体处理的表面。
57.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包含在所述干燥步骤之后，将所述固体组合物密封在包含所述经等离子体处理的表面的器皿中。
58.一种环烯烃共聚物表面，所述环烯烃共聚物表面的凹面中含有液体或冷冻溶液，其中所述环烯烃共聚物表面的表面能为约35达因至约55达因或接触角为约5°至约50°，并且所述液体或冷冻溶液包含糖类。
59.根据权利要求58所述的表面，其中所述液体或冷冻溶液包含水。
60.根据权利要求58或59所述的表面，其中所述液体或冷冻溶液包含极性有机溶剂。
61.根据权利要求60所述的表面，其中所述极性有机溶剂包含乙醇、异丙醇、DMSO或甘油中的至少一种。
62.根据权利要求58至61中任一项所述的表面，其中所述液体或冷冻溶液包含非极性有机溶剂。
63.根据权利要求58至62中任一项所述的表面，其中所述液体或冷冻溶液包含一种或多种酶。
64.根据权利要求63所述的表面，其中所述一种或多种酶包括DNA聚合酶、RNA聚合酶、连接酶、激酶、磷酸酶、蛋白酶、核酸外切酶和核酸内切酶中的至少一种。
65.根据权利要求58至64中任一项所述的表面，其中所述液体或冷冻溶液包含缓冲剂。
66.根据权利要求58至65中任一项所述的表面，其中所述液体或冷冻溶液不含无机盐或无机盐浓度为约5mM或更低。
67.根据权利要求58至66中任一项所述的表面，其中所述液体或冷冻溶液包含盐。
68.根据权利要求58至67中任一项所述的表面，其中所述液体或冷冻溶液包含至少一种可用于进行分子分析的寡核苷酸。
69.根据权利要求58至68中任一项所述的表面，其中所述液体或冷冻溶液包含一种或多种核苷三磷酸。
70.根据权利要求58至69中任一项所述的表面，其中所述溶液是液体。
71.根据权利要求58至69中任一项所述的表面，其中所述溶液是冷冻的。
72.一种粘附于经等离子体处理的环烯烃共聚物表面的固体组合物，其中所述固体组合物处于所述环烯烃共聚物表面的凹面内，所述凹面的壁角为约90度至约60度，所述固体组合物的质量为约600微克至约100mg并且包含糖类，并且其中依据包装性能测试，所述固体组合物充分粘附以保持实质上附着于所述环烯烃共聚物表面，在所述包装性能测试中使含有所述固体组合物的所述环烯烃共聚物表面从高达约480mm的高度降落到不锈钢表面上。
73.一种粘附于经等离子体处理的表面的固体组合物，其中粘附于所述经等离子体处理的表面的所述固体组合物通过根据权利要求1至53中任一项所述的方法产生。
74.一种粘附于经等离子体处理的表面的固体组合物，其中所述固体组合物包含增容剂及酶和寡核苷酸中的至少一种。
75.根据权利要求73至74中任一项所述的固体组合物，其中所述经等离子体处理的表面包含塑料。
76.根据权利要求75所述的固体组合物，其中所述塑料包含聚乙烯、聚对苯二甲酸乙二酯、聚丙烯、聚甲基丙烯酸酯、聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚烯烃、聚碳酸酯、聚氨酯、淀粉衍生的塑料或环烯烃共聚物中的至少一种。
77.根据权利要求75至76中任一项所述的固体组合物，其中所述塑料包含环烯烃共聚物。
78.根据权利要求73至77中任一项所述的固体组合物，其中所述增容剂包含糖类、甘氨酸或羟乙基淀粉。
79.根据权利要求72或78中任一项所述的固体组合物，其中所述糖类包含蔗糖、甘露醇、棉子糖或海藻糖中的至少一种。
80.根据权利要求72至79中任一项所述的固体组合物，其中所述固体组合物处于包含所述经等离子体处理的表面的器皿内。
81.根据权利要求80所述的固体组合物，其中所述器皿包含体积在约40ul至约60ml范围内的管。
82.根据权利要求80所述的固体组合物，其中所述器皿是包含多个孔的多孔板。
83.根据权利要求72至82中任一项所述的固体组合物，其中所述固体组合物的质量在约5mg至约20g、约200mg至约20g、约1g至约20g、约5g至约20g、约5mg至约1g、约5mg至约500mg、约5mg至约200mg、约5mg至约100mg、约5mg至约50mg、约5mg至约20mg、约5mg至约10mg、约10mg至约200mg、约20mg至约200mg、约50mg至约200mg或约100mg至约200mg范围内。
84.根据权利要求72至83中任一项所述的固体组合物，其中所述固体组合物包含一种或多种酶。
85.根据权利要求84所述的固体组合物，其中所述一种或多种酶包括DNA聚合酶、RNA聚合酶、连接酶、激酶、磷酸酶、蛋白酶、核酸外切酶和核酸内切酶中的至少一种。
86.根据权利要求72至85中任一项所述的固体组合物，其中所述固体组合物包含缓冲剂。
87.根据权利要求72至86中任一项所述的固体组合物，其中所述固体组合物包含盐。
88.根据权利要求72至87中任一项所述的固体组合物，其中所述固体组合物不含无机盐或无机盐浓度为约5mM或更低。
89.根据权利要求72至88中任一项所述的固体组合物，其中所述固体组合物包含至少一种可用于进行分子分析的寡核苷酸。
90.根据权利要求72至89中任一项所述的固体组合物，其中所述固体组合物包含一种或多种核苷三磷酸。
91.根据权利要求72至90中任一项所述的固体组合物，其中所述固体组合物含有单次单位剂量的扩增或检测试剂。
92.根据权利要求72至91中任一项所述的固体组合物，其中所述固体组合物含有药物活性剂。
93.一种试剂盒，其包含复原液和根据权利要求72至92中任一项所述的固体组合物。
94.一种形成混合物的方法，所述方法包含通过将复原液和根据权利要求72至92中任一项所述的固体组合物合并来形成复原的组合物。
95.根据权利要求93至94中任一项所述的试剂盒或方法，其中所述复原液包含水、极性有机溶剂和非极性有机溶剂中的至少一种。
96.根据权利要求95所述的试剂盒或方法，其中所述复原液包含水。
97.根据权利要求93至96中任一项所述的试剂盒或方法，其中所述复原液包含至少一种无机盐。
98.根据权利要求94至97中任一项所述的方法，其进一步包含添加核酸，其中所述核酸经历至少一种核酸修饰或杂交反应。
99.根据权利要求98所述的方法，其中所述核酸修饰或杂交反应包含核酸合成或扩增。
100.根据权利要求99所述的方法，其中所述核酸修饰或杂交反应包含使探针与所述核酸杂交以形成杂交复合物。
101.根据权利要求100所述的方法，其中所述方法进一步包含检测所述探针的所述杂交复合物或核溶解。
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