CN109789182A - 治疗干眼综合征的方法 - Google Patents

Abstract

提供了使用有效量的胸腺素β4(Tβ4)、Tβ4片段、Tβ4同种型、Tβ4衍生物、肽试剂(包括氨基酸序列LKKTET[SEQ ID NO:1]或LKKTNT[SEQ ID NO:2])或其变体治疗干眼综合征(DES)的方法。本发明公开的主题提供了通过向有需要的受试者递送胸腺素β4或其片段的组合物增加泪液体积、增加泪膜稳定性、减少眼表损伤和减少眼部不适的方法。

Description

治疗干眼综合征的方法

相关申请的交叉引用

本申请根据35U.S.C.§119要求2016年7月18日提交的美国申请序列号62/363,565、2016年7月18日提交的美国申请序列号62/363,592和2016年12月20日提交的美国申请序列号62/436,727,的优先权，所有申请均通过引用整体并入本文。

发明领域

本发明公开的主题涉及治疗或预防干眼综合征和与其相关的症状的方法。具体地，本发明公开的主题涉及增加泪液量、增加泪膜稳定性、减少眼部不适和减少眼表损伤的方法。

序列表

该说明书通过引用进一步并入了2017年7月17日通过EFS提交的序列表。根据37C.F.R.§1.52(e)(5)，序列表文本文件(标识为085089_0102seqlisting)为554字节，且是在2017年7月17日生成。以电子方式提供的序列表不超出本说明书的范围，因此不包含新的内容。

发明背景

干眼症(DES)是一种常见的眼病，在美国影响约有2500万至3000万人，其患病率估计7.8％至约58％。

DES的发病率随着年龄的增长而急剧上升，女性受到的影响比男性多，据称是由于雄激素的病理生理作用和内分泌免疫系统的复杂关系。由泪膜和眼表协会(TFOS)建立的干眼研讨会(DEWS)将干眼重新定义为“眼泪和眼表的多因素疾病，其导致不适、视觉障碍和泪膜不稳定，对眼表有潜在损害，伴有泪膜渗克分子浓度增加和眼表炎症”。参见“Thedefinition and classification of dry eye disease”,Report of the Definitionand Classification Subcommittee of the International Dry Eye WorkShop(2007)”。

治疗方法在过去有所不同。然而，疾病改进通常针对疾病的炎症方面。事实上，对于干眼病目前批准的疗法是使用靶向疾病的炎症应答的环孢菌素眼科乳液或lifitegrast眼科溶液对可以减少炎症反应同时加速角膜上皮愈合的治疗的关注将代表当前治疗方案向前迈出的重要一步。本发明公开的主题通过天然存在的多肽胸腺素β4(Tβ4)解决了这种需要，已发现该多肽引发一系列治疗反应，包括但不限于快速角膜上皮再形成和角膜炎症减少。

胸腺素β4(Tβ4)是一种低分子量的43个氨基酸的蛋白质，由于其在组织修复的不同阶段具有活性的独特、广泛的伤口愈合和抗炎活性，对细胞存活至关重要。参见Sosne等人,FASEB J.2010；24:2144-51。在除红细胞外的所有组织类型中，Tβ4以高浓度存在(在人血清中高达约0.4至2.1μg/ml)，在血小板、白细胞、血浆和伤口液中水平最高。参见Hannappel&van Kampen,1987J Chromatography,397:279-85；Huff等人,2001FASEB J 16:691-6；和Sosne等人,2002Cur.Eye Res.24:268-273。

在I期临床试验中，在4个增加的剂量水平下，连续14天施用促进心肌缺血期间用于细胞存活的Tβ4的可注射溶液。该施用被认为安全且耐受良好。参见Ruff等人,2010AnnN.Y.Acad.Sci.1194:223-229。在另一个I期临床试验中，给予总共20名健康患者(即，无DES)单次静脉内剂量的Tβ4，以评估Tβ4组合物的安全性。参见Ruff等人,2010AnnN.Y.Acad.Sci.1194:223-229。

在II期临床试验中，使用Controlled Adverse Environment(Ora,Inc.)模型在DES患者中评价Tβ4的眼科制剂的安全性和有效性。参见Sosne等人,2015ClinOphthal 9:877-884。给予总共72名受试者0.1％Tβ4或安慰剂治疗总共28天。在第29天测量主要疗效终点。在研究的过程中测量次要终点。尽管缺乏报告不良事件，但主要终点在第29天治疗组和对照组之间没有显示出显著差异。尽管对于次要终点观察到治疗组之间的一些差异，但是用一种治疗方案评估这些疗效终点。因此，期望治疗方案的优化和高程度的个体患者变异性以确认和扩大Tβ4眼科制剂的公开效果的治疗效果。

因此，一直需要用于治疗DES的新方法。本文描述了这种有效治疗DES的方法。

发明概述

本公开提供了用于治疗干眼症的眼科组合物和方法。所述方法能包括向受试者的患病的眼睛递送组合物，其包含胸腺素β4(Tβ4)、Tβ4片段、Tβ4同种型、Tβ4衍生物、肽试剂(包括氨基酸序列LKKTET[SEQ ID NO:1]或LKKTNT[SEQ ID NO:2])或其变体。

在某些方面，本公开提供了在有需要的受试者中增加泪液量的方法，其中所述方法包括向受试者的患病的眼睛递送组合物，其包含Tβ4、Tβ4片段、Tβ4同种型、Tβ4衍生物、肽试剂(包括氨基酸序列LKKTET[SEQ ID NO:1]或LKKTNT[SEQ ID NO:2])或其变体。在特定实施方案中，受试者可患有DES，其特征在于患病的眼中的泪液体积测试评分小于约10mm。

在某些方面，本公开提供了在有需要的受试者中增加泪膜稳定性的方法，其中所述方法包括向受试者的患病的眼睛递送组合物，其包含Tβ4、Tβ4片段、Tβ4同种型、Tβ4衍生物、肽试剂(包括氨基酸序列LKKTET[SEQ ID NO:1]或LKKTNT[SEQ ID NO:2])或其变体。在特定实施方案中，受试者可患有DES，其特征在于在患病的眼中的泪膜破裂时间小于约10秒。

在某些方面，本公开提供了在有需要的受试者中减少眼表损伤的方法，其中所述方法包括向受试者的患病的眼睛递送组合物，其包含Tβ4、Tβ4片段、Tβ4同种型、Tβ4衍生物、肽试剂(包括氨基酸序列LKKTET[SEQ ID NO:1]或LKKTNT[SEQ ID NO:2])或其变体。在特定实施方案中，受试者可患有DES，其特征在于患病的眼中的荧光染色评分为约4或更高。此外，在特定实施方案中，受试者可患有DES，其特征在于在患病的眼中的泪膜破裂时间小于约10秒。

在某些方面，本公开提供了在有需要的受试者中减少眼部不适的方法，其中所述方法包括向受试者的患病的眼睛递送组合物，其包含Tβ4、Tβ4片段、Tβ4同种型、Tβ4衍生物、肽试剂(包括氨基酸序列LKKTET[SEQ ID NO:1]或LKKTNT[SEQ ID NO:2])或其变体。特别地，受试者患有DES，其特征在于患病的眼睛中眼部不适评分为约2或更高。

在某些方面，本公开提供了在有需要的受试者中治疗DES的方法，其中所述方法包括向受试者的患病的眼睛递送组合物，其包含Tβ4、Tβ4片段、Tβ4同种型、Tβ4衍生物、肽试剂(包括氨基酸序列LKKTET[SEQ ID NO:1]或LKKTNT[SEQ ID NO:2])或其变体。DES的特征可以在于泪液量减少、泪膜稳定性降低、眼表损伤增加、眼部不适增加或其组合。

在某些实施方案中，组合物包含约0.05％至约0.1％重量的Tβ4、Tβ4片段、Tβ4同种型、Tβ4衍生物、肽试剂(包括氨基酸序列LKKTET[SEQ ID NO:1]或LKKTNT[SEQ ID NO:2])或其变体。如本文所体现的，组合物可以配制成溶液。例如但不限于，可以将包含Tβ4、Tβ4片段、Tβ4同种型、Tβ4衍生物、肽试剂(包括氨基酸序列LKKTET[SEQ ID NO:1]或LKKTNT[SEQID NO:2])或其变体的溶液以滴眼剂形式递送至受试者。在某些实施方案中，组合物可以与人工泪液组合使用。

在某些实施方案中，方法还可以包括将人工泪液递送至受试者的患病的眼睛。例如但不限于，可以将人工泪液与组合物同时递送。在一些实施方案中，可以依次递送人工泪液和组合物。

在某些实施方案中，组合物可以每天至少一次递送至受试者，但每天不超过四次。例如但不限于，组合物可以每天一次、两次、三次或四次递送至受试者。

在某些实施方案中，本公开提供了眼科组合物，其包含有效量的Tβ4、Tβ4片段、Tβ4同种型、Tβ4衍生物、肽试剂(包括氨基酸序列LKKTET[SEQ ID NO:1]或LKKTNT[SEQ ID NO:2])或其变体，其中组合物可有效治疗有需要的受试者的DES。

根据以下详述、附图和权利要求，本公开的其他特征和优点将显而易见。

附图简述

图1提供了描绘研究设计的流程图，用于评价与安慰剂组合物相比，0.05％Tβ4眼科组合物和0.1％Tβ4眼科组合物的功效和安全性。

图2A和2B提供了(2A)在25％、50％、75％和100％泪膜破裂时间(TFBUT)四分位数组中总角膜荧光染色评分变化的曲线图和(2B)25％TFBUT四分位数组在第8天、第15天和第29天时的总角膜荧光染色评分变化的曲线图。

图3A和3B提供了(3A)在25％、50％、75％和100％TFBUT四分位数组中下部区域荧光染色评分变化的曲线图和(3B)50％TFBUT四分位数组在第8天、第15天和第29天时的下部荧光染色评分变化的曲线图。

图4提供了CAE期间在基线的每个眼部不适的眼部不适图。

发明详述

本文尤其提供了在有需要的受试者中治疗眼科疾病(例如，DES)的方法，其中所述方法涉及包含人Tβ4或其片段的眼科组合物的用途。在详细描述和实施例中更多地讨论了本公开主题的这些和其他方面。

定义

除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本公开所属领域的技术人员通常理解的含义。以下参考文献为技术人员提供了本公开中使用的许多术语的一般定义：The Cambridge Dictionary of Science and Technology(Walker编撰,1988)；TheGlossary of Genetics,第5版,R.Rieger等人(编撰),Springer Verlag(1991)；和Hale&Marham,The Harper Collins Dictionary of Biology(1991)。以下定义某些术语以提供描述所公开主题的组合物和方法以及如何使用它们的额外指导。

如本文所用，除非另有说明，否则以下术语具有下面赋予它们的含义。本文使用的缩写在化学和生物学领域中具有其常规含义。

除非特别说明或从上下文中显而易见，否则如本文所用，术语“或”应理解为包含性的。除非特别说明或从上下文中显而易见，否则如本文所用，术语“一”、“一个”和“该”应理解为单数或复数。

除非特别说明或从上下文中显而易见，否则如本文所用，术语“约”被理解为在本领域的正常公差范围内，例如在平均值的2个标准偏差内。约可以理解为10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％或0.01％的规定值内。除非上下文另有说明，否则本文提供的所有数值均由术语“约”修饰。就本公开的组合物的浓度范围而言，约还指将是有效量或范围的规定量或范围的任何变化。

如本文所用，“添加剂”可包括可添加到如本文所述的组合物中的任何其他组分。可以将一种或多种添加剂添加到组合物中。示例性的添加剂可以包括防腐剂、粘度剂、缓冲剂、高渗剂、等渗剂和pH调节剂。本公开中的添加剂可以以任何合适的量使用。

如本文所用，术语“施用”可以指任何合适的途径，即，通过口服施用，通过局部施用(例如，滴眼剂或喷雾剂)，或眼内施用。

如本文所用，术语“共同施用”是指本文所述的组合物在施用另外的疗法的同时、恰好之前或之后施用。本公开的组合物可以单独施用或者可以与第二组合物/治疗剂共同施用于受试者。共同施用意指包括单独或与第二组合物/治疗剂组合同时或依次施用组合物。另外，第一和第二药剂可以单独配制或一起配制成一种或多种组合物。

如本文所用，“包含”、“包括”、“含有”和“具有”等可以具有美国专利法中赋予它们的含义并且可以表示“包括(includes)”、“包括(including)”等；“基本上由......组成”或“基本由......组成”同样具有美国专利法中赋予的含义，并且该术语是开放式的，允许存在多于所述内容的那些，只要多于所述内容的那些没有改变所述内容基本的或新颖特征，但不包括现有技术实施例。

如本文所用，“同时施用”包括至少部分地在持续时间上重叠。例如，当同时施用两种药剂(例如，本文所述的任何组合物)时，其施用在特定的所需时间内发生。组合物的施用可以在同一天开始和结束。一种组合物的施用也可以在第二种组合物施用前一/数天，只要两种组合物在同一天服用至少一次。类似地，一种组合物的施用可以延长超过第二组合物的施用，只要两种组合物在同一天服用至少一次。组合物不必每天在同一时间服用以包括同时施用。

如本文所用，“保守变体”或其语法变体可表示用另一种生物学上相似的残基替代氨基酸残基。保守变体的实例包括将疏水性残基如异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸或蛋氨酸替代为另一种，将极性残基替代为另一种，如精氨酸替代为赖氨酸，谷氨酸替代为天冬氨酸，或谷氨酰胺替代为天冬酰胺等。

如本文所用，术语“CAE”是指提供用于研究干眼的研究性治疗的标准化方法的临床模型。该模型通过调节CAE室内的湿度、温度、气流、照明条件和视觉任务，以受控的方式加剧干眼的体征和症状(例如，角膜染色和眼部不适)。更多详细信息可在http://www.oraclinical.com/ophthalmic-models/cae获得。

如本文所用，术语“乳膏”能指可用于治疗疾病、综合征或病症(即DES)的浓稠(高粘度)液体或半液体。

术语“剂量”旨在包括以给定时间范围的总量表示的制剂，例如以μg/kg/小时、μg/kg/天、mg/kg/天或mg/kg/小时。剂量是根据特定剂量方案施用的成分的量。“剂”是以单位体积或质量施用于哺乳动物的药剂的量，例如，以mg药剂表示的绝对单位剂量。剂量取决于制剂中药剂的浓度，例如，以每升的摩尔数(M)，每体积的质量(m/v)或每质量的质量(m/m)。这两个术语密切相关，因为特定的剂量来自制剂的一剂或多剂的施用方案。任何情况下的特定含义将从上下文中显而易见。

如本文所用，“干眼症”或“干眼综合征”或“DES”可以指眼科综合征或眼表状况。干眼研讨会(DEWS)将干眼症重新定义为“眼泪和眼表的多因素疾病，其导致不适、视觉障碍和泪膜不稳定，对眼表有潜在损害，伴有泪膜渗克分子浓度增加和眼表炎症”。干眼和泪膜不稳定会损伤眼表。它伴随着泪膜的容积渗克分子浓度增加和眼表炎症。泪膜不稳定性可由多种病因引发，例如干眼症、眼部过敏、局部防腐剂使用和隐形眼镜佩戴。泪膜不稳定性可导致表面渗克分子浓度过高。

如本文所用，“有效量”或“治疗有效量”是足以影响所需生物效应的量，如有益结果，包括临床结果。因此，“有效量”取决于其应用的上下文。有效量可以根据本领域中已知的因素而变化，如疾病状态、年龄、性别和待治疗个体体重。可以每天施用几个分开的剂量，或者可以按照治疗情况的紧急程度按比例减少剂量。此外，本发明的组合物/制剂可以根据需要频繁施用以达到治疗量。

如本文所用，术语“荧光染色”可以指将荧光素染料滴入眼中的方法。荧光素染料可以作为液滴或通过荧光素浸渍的纸条滴注。荧光素可以穿透相邻的鲍曼氏层和基质层，并且染料与碱性间质液接触。由于其pH指示剂特性并且取决于病变程度，流体变为亮绿色。荧光素不能染色完整的角膜上皮，但可以染色角膜基质，从而界定上皮损失的区域。角膜荧光染色可以非特异性地染色所有角膜损伤，无论什么原因(例如，屈光激光手术和药物毒性)。例如但不限于，可以将2％不含防腐剂的荧光素钠溶液滴注到每只眼睛的下结膜穹窿中。为了达到最大荧光，检查者应在评估荧光染色前等待滴注后等待几分钟。黄色滤光片可用于增强级别荧光染色的能力。染色将用荧光染色量表分级。可以采用荧光染色的数字图像进行数字分析。在一些实施方案中，可以将丽丝胺绿溶液滴注到下结膜穹窿中用于染色。

如本文所用，术语“片段”或“肽”或“肽片段”包括具有同源性或氨基酸序列同一性百分比的蛋白质(例如，Tβ4蛋白质)的一部分。肽可以是通过肽(酰胺)键连接的生物学上发生的氨基酸单体短链。

如本文所用，“凝胶”可以指不是易流动液体且不是固体的材料，即半固体凝胶。凝胶可由天然存在的或合成的材料形成。凝胶可以是无序的至略微有序的，显示出一些双折射，液晶特征。半固体凝胶制剂表观粘度可随浓度增加。凝胶可以局部施用。

如本文所用，关于蛋白质(即，Tβ4或其片段)使用“同源性”或“百分比(％)氨基酸序列同一性”。同源性或百分比氨基酸序列同一性可以定义为与特定肽或多肽序列中的氨基酸残基相同的候选序列中的氨基酸残基的百分比，在对齐序列和引入缺口后，如需要，为了实现最大百分比序列同一性，并且不考虑任何保守替代作为序列同一性的一部分(即，在比较窗口或指定区域进行比较和对齐以获得最大对应关系时，在指定区域内的约60％同一性、优选61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性)，如使用具有下述默认参数的BLAST或BLAST 2.0序列比较算法或通过手动比对和目视检查测量的(参见例如NCBI网站等)。然后这些序列被称为“基本相同”。该定义还涉及或可以应用于测试序列的补充。该定义还包括具有缺失和/或添加的序列，以及具有替代的序列。用于确定百分比氨基酸序列同一性的比对可以使用公众可获得的计算机软件如BLAST、BLAST-2或ALIGN软件以本领域技术范围内的各种方式实现。本领域技术人员可以确定用于测量比对的适当参数，包括在所比较的序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。

如本文所用，“间歇施用”包括施用组合物一段时间(可以认为是“第一施用期”)，然后是不服用组合物或以较低维持剂量服用的时间(可以认为是“关闭期”)，随后是再次施用组合物的时期(可以认为是“第二施用期”)。通常，在第二施用期间，组合物的剂量水平将与第一施用期间施用的剂量水平相匹配，但能根据医学需要增加或减少。

如本文所用，“液体”是由液态的组合物组成的剂型。液体是可倾倒的；它在室温下流动并与其容器一致。液体显示牛顿或假塑性流动行为。在某些实施方案中，如本文所用的“半液体”可具有液体和另一种制剂(即混悬液、乳液、溶液、乳膏、凝胶、胶冻等)的性质。

如本文所用，“眼表面”包括角膜和结膜。眼表面由流体或泪膜的薄层覆盖。泪膜不仅负责眼睛的大部分的屈光力和清晰的视力；它还负责滋养眼表面的细胞和预防感染。眼睛的表面可能患有许多种疾病。眼表最常见的疾病之一是DES。

如本文所用，“眼表疾病”、“眼科疾病”、“眼科障碍”等包括但不限于眼睛干涩、上皮缺损、上缘角膜结膜炎、干燥性角结膜炎、神经营养性角膜病变、干燥综合症、Stevens-Johnson综合征、眼瘢痕性类天疱疮、药疹(Medicamentosa)、移植物抗宿主病和角膜溃疡和糜烂。

如本文所用，“软膏”可以指高粘性液体或半液体制剂，其可以用于疾病、综合征或病症(即DES)的治疗性治疗。

如本文所用，“眼科组合物”是指用于施用于眼睛或其相关或周围组织(例如眼睑)或眼睛表面的组合物。该术语还包括旨在用于治疗性治疗眼睛本身或眼睛周围组织的组合物。眼科组合物可以局部施用或通过本领域技术人员已知的其他技术施用，如注射到眼睛。对眼睛进行合适的局部施用的实例包括在滴眼剂中和通过喷雾制剂施用。另一种合适的局部施用途径是通过结膜下注射。

如本文中的使用，“荧光染色量表”是指专门用于干眼分级的量表。例如，可以在角膜的下部、中部和上部区域评估角膜染色。例如，在结膜的颞和鼻区域评估结膜染色。临床医生的分级通常涉及各种角膜区域中点状点的定性估计。角膜和结膜通常被分成几个区域(例如，下部、上部、中央、颞、鼻)，每个区域分别分级。荧光染色量表的范围从0到4(可以使用半级增量)，其中0级＝无，4级＝严重。

如本文所用，“眼部不适量表”是指专门用于测量干眼的眼部不适水平的分级量表。受试者可以根据以下量表对眼部不适评分进行主观分级，每只眼睛分别进行分级。它包括0到4的5分制，其中0级＝没有不适，4级＝严重不适。相对较高的症状受试者可包括眼部不适评分为2或3的受试者，而相对较低的症状受试者可具有0或1的眼部不适评分。

如本文所用，“患者”、“有需要的患者”、“受试者”和“有需要的受试者”可互换使用，指患有或易患可以使用本文提供的方法和组合物通过施用治疗的疾病或病症的动物或生物体(人或非人)。受试者的非限制性实例包括人、其他哺乳动物、牛、大鼠、小鼠、狗、猴、山羊、绵羊、牛、鹿和其他非哺乳动物。在某些实施方案中，受试者是人。

如本文所用，“药学上可接受的载体”包括生理上相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。可以基于预期的施用途径选择载体的种类。药学上可接受的载体包括无菌水溶液或分散液和用于即时制备无菌局部用溶液或分散液的无菌粉末。这些介质和试剂用于药物活性物质的用途是本领域熟知的。除非任何常规介质或试剂与组合物(例如，Tβ4或其片段)不相容，否则考虑将其用于本公开的眼科组合物中。

本文所用的术语“防腐剂”可包括眼科组合物中包含的任何试剂，其目的是抑制产品中微生物(例如，细菌、真菌、病毒和原生动物)的生长，从而有助于在使用期间保持无菌。另外，术语“抗微生物剂”在本文中可用于表示提供抗微生物功效的特定活性剂。示例性防腐剂可包括，例如，苯扎氯铵、硫柳汞、氯丁醇、氯己定、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯乙醇、依地酸二钠山梨酸、Onamer M Polyquat、十六烷基溴、十六烷基氯化吡啶鎓、苄基溴、EDTA、硝酸苯汞、醋酸苯汞、硫柳汞、雷硫汞、乙酸盐和硼酸苯汞、硫酸多粘菌素B、尼泊金甲酯和尼泊金丙酯基、季铵氯化物、苯甲酸钠、丙酸钠以及高硼酸钠、和本领域技术人员已知的其它试剂或其组合。

如本文所用，术语“预防”、“预防性治疗”等是指降低在受试者中发生障碍或病症的可能性，该受试者没有障碍或病症，但是有发展障碍或病症的风险或易患疾病或病症。预防可以是完全的(即，没有可检测的症状)或部分的，因此观察到的症状会少于无治疗可能发生的症状。该术语还包括预防性益处。对于要预防的疾病或病症，可以将组合物施用于有发展特定疾病风险的患者，或施用于报告了疾病的一种或多种生理症状的患者，即使不能已经做出这种疾病的诊断。

范围在本文中可以表示为从“约”一个特定值和/或到“约”另一个特定值。当表达这样的范围时，另一方面包括从一个特定值和/或到另一个特定值。类似地，当通过使用先行词“约”将值表示为近似值时，应理解该特定值形成另一方面。还应理解，每个范围的端点相对于另一个端点都是明显的，并且与另一个端点无关。还应理解，本文公开了许多值，并且每个值在本文中也被公开为“约”该特定值(除该值本身之外)。还应理解，在整个申请中，以多种不同格式提供数据，并且该数据表示端点和起始点以及数据点的任何组合和范围。例如，如果公开了特定数据点“10”和特定数据点“15”，则应理解大于、大于或等于、小于、小于或等于、和等于10和15被认为是公开的，且在10和15之间。还可以理解，还公开了两个特定单元之间的每个单元。例如，如果公开了10和15，则还公开了11、12、13和14。

本文提供的范围被理解为该范围内的所有值的简写。例如，1至50的范围应理解为包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50中的任何数字、数字组合或子范围以及上述整数之间的所有中间小数值，例如，1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8和1.9。关于子范围，特别考虑从该范围的任一端点延伸的“嵌套子范围”。例如，1到50的示例性范围的嵌套子范围可以在在一个方向上包括1至10、1至20、1至30和1至40，或在另一个方向上包括50至40、50至30、50至20和50至10。

如本文所用，“Schirmer测试”是指用于确定眼睛是否产生足够的眼泪以使其保持湿润的测试。例如，Schirmer测试可以根据下面的过程进行：(a)将无菌Schirmer测试条放置在每只眼睛的下颞盖边缘中，使得条带紧密适合。指示受试者闭上眼睛，和(b)在经过5分钟后，移除Schirmer条带。记录每只眼睛湿润区域的长度(mm)。此测试用于经历非常干燥的眼睛或过度的眼睛加水的人，并且对受试者没有任何风险。阴性(5分钟内滤纸上的水分超过10毫米)测试结果是正常的。

如本文所用，“连续施用”包括两种药剂(例如，本文所述的组合物)的施用在同一天分开进行或不在同一天进行(例如，在连续的几天进行)。

如本文所用，“溶液”是透明、均质的液体剂型，其含有溶解在溶剂或相互混溶的溶剂的混合物中的一种或多种化学物质(即，Tβ4或其片段)。溶液是液体制剂，其在合适的溶剂或相互混溶的溶剂的混合物中含有一种或多种溶解的化学物质。因为溶液中的药物分子均匀分散，所以使用溶液作为剂型通常可确保在施用时均匀剂量，并且当溶液稀释或以其它方式混合时具有良好的准确性。例如但不限于，Tβ4可以溶解在由氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁、乙酸钠和柠檬酸钠组成的溶液中，pH约为7.0。

如本文所用，术语“溶剂”是指含水或非含水的液体溶剂。溶剂的选择主要取决于组合物在所述溶剂的溶解度和施用方式。含水溶剂可以仅由水组成，或者可以由水加一种或多种可混溶的溶剂组成，并且能包含溶解的溶质，例如糖、缓冲剂、盐或其他赋形剂。更常用的非含水溶剂是短链有机醇，如甲醇、乙醇、丙醇、短链酮、如丙酮和多元醇如甘油。

如本文所用，“混悬液”是含有分散在液体载体中的固体颗粒的液体剂型。

如本文所用，术语“综合征”可以指一致发生在一起的一组症状或特征为一组相关症状的病症。综合征(例如，DES)可以是与特定疾病相关的一组医学体征和症状。另一方面，疾病可能是一种健康状况，其背后有明确的原因。然而，综合征(来自希腊字意思是“一起运行”)可产生一些没有可识别原因的症状。它们可以显示潜在疾病的可能性，甚至可能发生疾病的可能性。

如本文所用，术语“泪液破裂时间”或“TBUT”或“泪膜破裂时间”或“TFBUT”可以指测量个体的最后完全眨眼和泪膜破裂之间的间隔的临床测试。该测试可用于评估DES。为了测量TBUT，将荧光素滴注到患者的泪膜中，并且要求患者不眨眼，同时在钴蓝光宽束照射下观察泪膜。TBUT记录为最后一次眨眼与泪膜中第一个干点出现之间经过的秒数。

如本文所用，“泪膜”可以指三层结构，包括粘膜基底层、水性组分和表面脂质层。这些组分共同作用以维持泪膜的整体形式。泪膜通过眨眼形成并保持。泪膜的结构可受到全身或眼部药物、一般健康和许多眼部疾病的影响，例如干燥性角结膜炎或DES。泪液也受到年龄的影响，泪液产生量和泪膜稳定性都发生变化。泪膜稳定性相对较低的患者可以指泪膜破裂时间短于总人群中值的患者。泪膜稳定性相对较高的患者可以指泪膜破裂时间长于总人群中值的患者。

如本文所用，“胸腺素β4”或“Tβ4”是指人类蛋白质。Tβ4编码肌动蛋白隔离蛋白，其在肌动蛋白聚合的调节中起作用。该蛋白质还参与细胞增殖、迁移和分化。如果心脏病发作后使用，胸腺素β4肽已被证明能潜在地重新激活心肌祖细胞以修复受损的心脏组织。已经证明局部Tβ4制剂的安全性，无论是在皮肤制剂中还是在眼睛中使用的不含防腐剂的制剂中。基于其在组织再生期间的多功能活性，Tβ4具有在广泛的病理状况(包括眼表疾病)中临床应用的潜力。人Tβ4的NCBI参考序列可以在登录号NP_066932.1获得。

本文所用的术语“治疗”和其他语法等同物包括减轻、抑制、改善或预防疾病、病症或症状，预防其他症状，改善或预防症状的潜在的代谢原因，抑制疾病或病症，例如，阻止疾病或病症的发展，缓解疾病或病症，引起疾病或病症消退，缓解疾病或病症引起的病症，或者停止疾病或病症的症状，旨在包括预防。该术语还包括实现治疗益处和/或预防益处。治疗益处是指根除或改善所治疗的潜在疾病。此外，通过根除或改善与潜在病症相关的一种或多种生理症状来实现治疗益处，使得在患者中观察到改善，尽管患者仍然可能患有潜在的疾病。

如本文所用，“粘度”是指流体的流动阻力。可以使用的示例性粘度剂包括例如聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、本领域技术人员已知的其他试剂或其组合。

如本文所用，术语“重量百分比”或“％(w/w)”是指溶液中组分的百分比，其基于组分和溶剂的重量计算。例如，1％(w/w)组分的溶液将具有溶于100g溶剂中的1g组分。术语“体积百分比”或“％(v/v)”是指溶液中组分的百分比，其基于组分和溶剂的体积计算。例如，1％(v/v)组分的溶液将具有溶解在100mL溶剂中的1mL组分。术语“重量/体积百分比”或“％(w/v)”是指溶液中组分的百分比，其基于组分的重量和基于溶剂的体积计算。例如，1.0％(w/v)组分的溶液将具有溶解在100mL的溶剂中的1g组分。

组合物

本公开提供了包含在有需要的受试者中治疗DES及其症状的有效量的Tβ4或其片段的眼科组合物。

在某些实施方案中，眼科组合物可包含约0.05％至约0.1％重量的Tβ4或其片段。人Tβ4是由43个氨基酸组成的多肽，具有4.9kDa，其可以首先从胸腺中分离，后来从各种组织中鉴定。这种蛋白质可以上调角膜上皮细胞的迁移和增殖。在一些实施方案中，眼科组合物可包含Tβ4同种型。Tβ4同种型与Tβ4的已知氨基酸序列具有约70％或约75％或约80％或更高的同源性。此类同种型可包括例如Tβ4^ala、Tβ9、Tβ10、Tβ11、Tβ12、Tβ13、Tβ14和Tβ15。本发明公开的主题的Tβ4也可以是野生型Tβ4的N-末端变体或C-末端变体。

在某些实施方案中，眼科组合物可包含肽试剂，其包含氨基酸序列LKKTET[SEQ IDNO:1]或LKKTNT[SEQ ID NO:2]，或其保守变体。氨基酸序列LKKTET[SEQ ID NO:1]和LKKTNT[SEQ ID NO:2]似乎参与介导肌动蛋白隔离或结合。Tβ4具有抗炎活性，并且还可以调节肌动蛋白聚合(例如β-胸腺素似乎通过隔离游离的G-肌动蛋白来解聚F-肌动蛋白)。Tβ4调节肌动蛋白聚合的能力可归因于其通过LKKTET[SEQ ID NO:1]或LKKTNT[SEQ ID NO:2]序列结合或隔离肌动蛋白的能力。因此，与Tβ4一样，其他抗炎和/或结合或隔离肌动蛋白或调节肌动蛋白聚合的蛋白质，包括具有氨基酸序列LKKTET[SEQ ID NO:1]的Tβ4同种型，可能是有效的，其单独或与如本文所述Tβ4组合。例如但不限于，具有抗炎活性和/或肌动蛋白隔离或结合能力的其他药剂或蛋白质，或可动员肌动蛋白或调节肌动蛋白聚合的其他药剂或蛋白质(如在适当的隔离、结合、动员或聚合测定中所证实的，或通过介导肌动蛋白结合的氨基酸序列的存在所鉴定的，如LKKTET[SEQ ID NO:1]或LKKTNT[SEQ ID NO:2])，例如，可以类似地用于公开的主题中。这些蛋白质可包括凝溶胶蛋白、维生素D结合蛋白(DBP)、肌动蛋白抑制蛋白、丝切蛋白、肌动蛋白蚕食蛋白、Dnasel、vilin、肌动蛋白片段化蛋白、肌动蛋白割切蛋白、加帽蛋白、β-辅肌动蛋白和肌动调解蛋白。

在某些实施方案中，眼科组合物可包括Tβ4的氧化形式，包括Tβ4亚砜或其保守变体。氧化的Tβ4是Tβ4的一种形式，其中甲硫氨酸残基(来自N-末端(Met6)的6个氨基酸)被氧化，使得残基转化为甲硫氨酸亚砜。氧化的Tβ4可以通过使天然Tβ4在氧化条件下反应来获得，例如通过用过氧化氢处理。

尽管本发明主要在下文中针对Tβ4和Tβ4片段进行描述，但应理解以下描述旨在同样适用于氨基酸序列LKKTET[SEQ ID NO:1]或LKKTNT[SEQ ID NO:2]，包含或基本上由LKKTET[SEQ ID NO:1]或LKKTNT[SEQ ID NO:2]组成的肽和片段，其保守变体，和/或Tβ4同种型、类似物或衍生物，包括氧化的Tβ4、Tβ4的N-末端变体和Tβ4的C末端变体。

在某些实施方案中，眼科组合物可包括适合于局部或玻璃体内施用的载体。载体可包括例如但不限于水；水和水混溶性溶剂如C₁-C₇链烷醇的混合物，植物油或矿物油，如约0.5至约5重量％的羟乙基纤维素、油酸乙酯、羧甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮和用于眼科用途的其它无毒水溶性聚合物，例如纤维素衍生物，如甲基纤维素、羧甲基纤维素的碱金属盐、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素和羟丙基纤维素、丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯、如聚丙烯酸(酯)的盐或丙烯酸乙酯、聚丙烯酰胺；天然产物如明胶、藻酸盐、果胶、黄蓍胶、刺梧桐胶、黄原胶、角叉菜胶、琼脂、阿拉伯胶、淀粉衍生物如醋酸淀粉和羟丙基淀粉；和其它合成产品，例如聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯基甲醚、聚环氧乙烷、优选交联的聚丙烯酸如中性聚羧乙烯或上述聚合物的混合物。优选的载体可包括水、纤维素衍生物、例如甲基纤维素、羧甲基纤维素的碱金属盐、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素和羟丙基纤维素、中性聚羧乙烯或其混合物。

在某些实施方案中，眼科组合物可包含一种或多种药学上可接受的赋形剂，包括但不限于稳定剂、缓冲剂、防腐剂、张度剂和粘度增强剂。

在某些实施方案中，眼科组合物可包含稳定剂。根据本发明公开的主题的稳定剂可包括，例如但不限于泰洛沙泊、脂族甘油聚-低级亚烷基二醇酯、脂族聚-低级亚烷基二醇酯、聚乙二醇、甘油醚、乙酸、柠檬酸、抗坏血酸、EDTA/乙二胺四乙酸二钠盐、谷胱甘肽、乙酰半胱氨酸或这些化合物的混合物。这里使用的乙酸是由式CH₃COOH表示的弱酸。在本发明公开的主题中，这能以醋酸盐的形式使用。醋酸盐可包括至少一个水分子。例如但不限于，一、倍半-、二-、三-、四-、五-、六-、七-、八-、九-、十-、十一-或十二水合物形式的乙酸盐可以加入到组合物中。特别地，基于组合物的总体积，乙酸钠三水合物的含量可为约0.01％(w/v)至约1.5％(w/v)。此外，乙酸或其盐的含量可为约0.1％(w/v)至约0.8％(w/v)，优选约0.2％(w/v)至约0.5％(w/v)。本文使用的柠檬酸是由式C₆H₈O₇表示的化合物。在本发明公开的主题中，柠檬酸可以以一种或多种柠檬酸盐的形式使用。柠檬酸盐可以是柠檬酸的衍生物。另外，柠檬酸盐可包括至少一个水分子。例如但不限于，一、倍半-、二-、三-、四-、五-、六-、七-、八-、九-、十-、十一-或十二水合物形式的的柠檬酸盐可以加入到组合物中。特别地，柠檬酸盐可以是柠檬酸钠和柠檬酸钠三水合物。在这种情况下，柠檬酸或其盐的含量可为约0.01％(w/v)至约0.5％(w/v)。此外，柠檬酸或其盐的含量可为约0.05％(w/v)至约0.25％(w/v)，优选约0.1％(w/v)至约0.3％(w/v)。它们通常以足以溶解活性成分的量加入。

在某些实施方案中，眼科组合物可包含缓冲剂。例如，缓冲剂可以包括任何形式的乙酸盐、抗坏血酸盐、硼酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、葡糖酸盐、磷酸盐、丙酸盐、乙酸、柠檬酸和/或氨基丁三醇(TRIS)缓冲液。缓冲剂可以例如以确保和维持生理学上可接受的pH范围的量添加。这种pH通常可以为约5至约9，优选约6至约8.2，更优选约6.8至约8.1。

在其他实施方案中，眼科制剂的pH值可以为约3.5至约9，优选约4.5至约8，最优选约5.5至约7.8，并且可以为约pH 7.0。

根据本发明公开的主题的组合物可以进一步包含选自盐酸、乙酸、磷酸等的酸。该组合物还可以包含选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠等的碱，特别是氢氧化钠。例如但不限于，可以适当地添加盐酸或氢氧化钠以调节组合物的pH。因此，组合物的pH可以为约6.5至约7.5，或约6.8至约7.2。优选地，组合物可具有约7.0的pH。

在某些实施方案中，眼科组合物可包含防腐剂。防腐剂可包括，例如季铵盐、如溴化十六烷基三甲铵、苯扎氯铵或苯佐氯铵；硫柳酸的烷基汞盐、如硫柳汞、硝酸苯汞、醋酸苯汞或硼酸苯汞、对羟基苯甲酸酯如对羟基苯甲酸苯酯或对羟苯甲酸丙酯、醇如氯丁醇、苯甲醇或苯基乙醇、胍衍生物如氯己定或聚六亚甲基双胍或山梨酸。优选的防腐剂可以包括溴化十六烷基三甲铵、苯扎氯铵、苯佐氯铵和对羟苯甲酸酯类。可以加入足够量的防腐剂以防止在使用过程中由细菌和真菌引起的二次污染。

在某些实施方案中，眼科组合物可包含张度剂以使组合物更接近等渗性(例如，0.9％盐水)。例如但不限于，可以将任何形式的氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁、右旋糖和/或甘露糖醇加入到包含根据本发明公开的主题的胸腺素β4的组合物中。张度剂可包含至少一个水分子。例如但不限于，一、倍半-、二-、三-、四-、五-、六-、七-、八-、九-、十-、十一-或十二水合物形式的氯化钠、氯化钾、氯化钙和/或氯化镁可以加入到组合物中。张度剂的量取决于要加入的活性剂的种类。通常，本发明公开主题的特定组合物可在其中包含张度剂以使最终组合物具有眼科使用可接受的重量渗克分子浓度，即优选在约150至约450mOsm的范围内，更优选在约250至约350mOsm的范围内。优选的张度剂可包括例如钠盐和钾盐，特别是氯化钠和氯化钾。最优选地，张度剂可以是氯化钠。此外，氯化钠的浓度可以为约0.1至约1.2％(w/v)或约0.3至约1.0％(w/v)。优选地，其范围为约0.5至约0.7％(w/v)。此外，氯化钾的浓度可以为约0.01至约0.15％(w/v)或约0.03至约0.12％(w/v)。优选地，其范围为约0.05至约0.09％(w/v)。此外，氯化钙二水合物的浓度可以为约0.01至约0.12％(w/v)或约0.03至约0.09％(w/v)。优选地，其范围为约0.03至约0.06％(w/v)。此外，氯化镁六水合物的浓度可以为约0.01至约0.12％(w/v)，优选为约0.01至约0.05％(w/v)。虽然本文主要针对调节眼科组合物的张力来描述张度剂，但所公开的张度剂也可用作电解质。

在某些实施方案中，眼科组合物可包含粘度增强剂。眼科制剂中合适的粘度增强剂及其在某些本发明组合物中使用的浓度范围可包括但不限于：(a)单体多元醇，例如泰洛沙泊(约0.1至约1％)、甘油(约0.2至约1％)、丙二醇(约0.2至约1％)、乙二醇(约0.2至约1％)；(b)聚合多元醇，例如聚乙二醇(例如，PEG 300、PEG 400)(约0.2至约1％)；(c)纤维素衍生物(纤维素家族聚合物)，如羟乙基纤维素(约0.2至约2.5％)、羟丙甲纤维素(约0.2至约2.5％)、羟丙基甲基纤维素(约0.2至约2.5％)、甲基纤维素(约0.2至约2.5％)、羧甲基纤维素钠(约0.2至约2.5％)、羟丙基纤维素(约0.2约2.5％)；(d)葡聚糖，例如葡聚糖70(当与另一种聚合物缓和剂一起使用时为约0.1％)；(e)水溶性蛋白质，如明胶(约0.01％)；(f)乙烯基聚合物，如聚乙烯醇(约0.1至约4％)，聚乙烯基吡咯烷(约0.1至约4％)；(g)其他多元醇，例如聚山梨醇酯80(约0.2至约1％)，聚维酮(约0.1至约2％)；(h)卡波姆、例如卡波姆934P、卡波姆941、卡波姆940和卡波姆974P，和(i)多糖/糖胺聚糖，例如透明质素(透明质酸/透明质酸盐)(约0.1至约3％)，硫酸软骨素(约0.1至约3％)。

在某些实施方案中，添加的赋形剂的量和类型可以根据具体要求而变化，赋形剂通常以约0.0001至约90重量％的范围使用，并且在眼科领域常用的范围内。

在某些实施方案中，将眼科组合物配制成溶液、混悬液、半液体、半固体凝胶、凝胶、软膏或乳膏。在具体的实施方案中，眼科组合物可以配制成在单个单位滴管中的不含防腐剂的无菌滴眼液。根据一个实施方案，含有活性化合物的局部制剂还可以含有生理学上相容的载体，如眼科领域的技术人员可以使用常规标准进行选择。

在某些实施方案中，所述眼科组合物以滴眼剂的形式施用。在适当的情况下，可以将眼科组合物调节和/或缓冲至所需的pH，并且在适当的情况下，可以加入稳定剂或张力增强剂。在适当的情况下，可以将防腐剂和/或其他赋形剂添加到眼科组合物中。

在某些实施方案中，眼科组合物可以配制成单位剂型，以提供约0.08至约2.0ml的总日剂量，并且可以适当地填充在用于眼科用途的容器中，这可以实现组合物的定量施用。为此目的，可将组合物配制成剂量为约0.01至约10ml剂量的单位剂型，其可使用一次或数次。此外，为了适当地提供总日剂量为约0.08至约2.0ml的药物组合物，该组合物可以包含在每滴液滴约0.01至约2.0ml的滴眼容器中。

在某些实施方案中，眼科组合物可包含约0.05至约0.1％重量的Tβ4或其片段。眼科组合物可以是由氯化钠、氯化钾、氯化钙二水合物、氯化镁六水合物、乙酸钠三水合物和柠檬酸钠三水合物组成的溶液。组合物的pH可以使用酸或碱调节至约6.5至约7.5。所述酸可选自盐酸、乙酸、磷酸等。碱可选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠等。

方法

本公开尤其提供了在需要治疗的受试者中治疗DES或其体征或症状的方法。所述方法包括向受试者的眼睛施用有效治疗DES或其体征或症状的量的包含人Tβ4或其片段的眼科组合物。

本发明公开的主题提供了有效解决DES的至少两个方面的方法，包括但不限于炎症反应和角膜上皮愈合。在某些实施方案中，将包含Tβ4或其片段的眼科组合物递送至干眼可减少或预防炎症并改善或加速角膜上皮愈合。DES可包括各种体征和症状，包括但不限于泪液产生不足，泪膜稳定性降低，眼表损伤增加和眼部不适增加。患有DES的受试者可表现出一种或多种体征或症状。本发明公开的主题通过施用有效量的包含Tβ4或其片段的眼科组合物有效地治疗炎症反应和增加角膜上皮愈合。这些方法成功地增加了泪液量，增加了泪膜稳定性，减少了眼表损伤并减少了眼部不适。

在某些实施方案中，治疗DES的方法包括治疗与治疗眼表、泪腺或结膜的炎症相关或由其引起的干眼；与改变眼泪成分的任何病变过程相关的干眼；与眼睛表面增加(如眼睛向前突出时的甲状腺疾病)有关的干眼；和/或与整容手术相关的干眼，例如，如果眼睑在手术过程中开得太宽；与眼矫正手术相关的干眼，如激光辅助原位角膜磨削术(LASIK)或激光辅助上皮下角膜切除术(LASEK)。容积渗克分子浓度过高可通过激活一连串的炎症事件和释放炎症介质进入眼泪引起表面上皮损伤。炎症介质可导致细胞死亡、杯状细胞损失、粘液分泌减少和泪膜不稳定。在某些实施方案中，将包含Tβ4或其片段的眼科组合物递送至泪液不足的干眼可改善泪膜稳定性和/或增加泪液量。本文的方法可以改善分泌泪膜水层的泪腺的特性。

本发明公开的主题提供了使用本发明的组合物治疗泪液缺乏性干眼的方法，所述干眼是一种其中泪腺不能产生足够的泪液水样成分以维持健康的眼睛表面的疾病。缺乏含水泪液的干眼可通过各种评估来表征，包括但不限于泪液体积测试。泪液量测试可用于确定眼睛是否产生足够的眼泪以保持其湿润。例如但不限于，泪液体积测试可以根据以下程序进行：(a)可以将无菌测试条放置在每只眼睛的下颞盖边缘中，使得条带紧密适合。指示受试者闭上眼睛，和(b)在经过适当的时间(例如，约5分钟)之后，可以移除条带。可以记录每只眼睛的湿润区域的长度(mm)。当人经历非常干燥的眼睛或眼睛过度加水时可以使用该测试，并且对受试者没有风险。阴性测试结果是正常的，其中例如记录滤纸上大于约10mm的水分。

或者，含水泪液不足的干眼可以通过酚红线试验表征。例如但不限于，浸渍有酚红染料的棉线的卷曲末端可以放置在颞侧的下结膜囊中。酚红是一种pH值指示剂，由于泪液的碱性(pH7.4)，它会在被泪液润湿时显示从黄色到红色的逐渐过渡。可以指示受试者闭上眼睛，并且可以在15秒后移除线。线程上颜色变化的长度表示由泪液润湿的线的长度，可以毫米为单位测量。润湿长度通常应在约9mm和约20mm之间。已显示小于约9mm的值与干燥的主观症状相关。

本发明公开的主题还提供了改善泪膜稳定性的方法。可以通过本领域的各种评估来评价泪膜稳定性，包括但不限于TFBUT分析。例如但不限于，可以将2％不含防腐剂的荧光素钠溶液施用到每只患病的眼睛的下结膜穹窿中。为了获得最大荧光，在评估TFBUT之前，滴注后实施适当的等待期。借助于裂隙灯，可以通过记录从眼睛睁开时形成胶束所花费的时间来监测泪膜的完整性。使用秒表和数字图像记录系统可以在几秒钟内对一只眼睛测量TFBUT，然后是第二只眼睛。阴性测试结果是正常的，其中记录超过约10秒的TFBUT。

或者，可以通过非侵入性破裂时间(NIBUT)分析来评估泪膜稳定性。在NIBUT分析期间，可以在不施用荧光素溶液的情况下观察从之前泪液表面反射的照射网格图案。在NIBUT分析期间，可以要求受试者停止眨眼，直到被告知重新启动。可以使用秒表记录最后一次完全眨眼和第一次图案分解指示之间的时间。

此外，本发明公开的主题提供了改善受损眼表区域的方法。干眼的受损眼表区域可以通过本领域的各种评估表征，包括但不限于荧光染色分析。在荧光染色分析期间，受损的眼表面可以用荧光素化合物染色。例如但不限于，可以将2％不含防腐剂的荧光素钠溶液滴注到每眼的下结膜穹窿中。为了获得最大荧光，在评估荧光染色之前，滴注后实施等待期。分级可涉及对各种角膜区域中点状点的定性估计。角膜和结膜通常被分成几个区域(例如，下部、上部、中央、颞、鼻)，每个区域分别分级。量表的范围从0到4(可以使用半级增量)，其中0级＝无，4级＝严重)。在某些实施方案中，荧光素化合物可包含用于荧光染色分析的玫瑰红。

或者，干眼的受损眼表区域可以通过丽丝胺绿染色分析来表征。丽丝胺绿可以染色不受粘蛋白或糖萼保护的眼表上皮细胞。在丽丝胺绿染色分析期间，可以将丽丝胺绿溶液滴注到每只眼睛的下结膜穹窿中。可指示受试者眨眼数次以分布丽丝胺绿。该染色将使用与荧光染色分析相同的染色量表进行分级。也可以使用本领域的替代染色技术，包括例如Rose Bangal。

本发明公开的主题还提供了在有需要的受试者中通过施用包含Tβ4或其片段的眼科组合物来减轻眼睛不适的方法。在某些实施方案中，该方法包括改善症状，其包括但不限于眼睛刺痛或灼热感；仿佛有什么东西在眼睛里的沙质或砂砾感觉；在非常干燥的眼睛周期之后出现过量眼泪；来自眼睛的粘稠排出物；眼睛疼痛和发红；视力模糊发作；眼睑沉重；情绪紧张时无法哭泣；不舒服的隐形眼镜；阅读、在计算机上工作或任何需要持续视觉注意的活动的耐受降低；和/或眼睛疲劳。眼部不适的适应症可以通过本领域已知的各种评估来表征和量化。例如但不限于，在暴露于不利环境之前、之后或期间，受试者可以主观地评定眼部不适分数。在暴露于不利环境期间，通过调节湿度、温度、气流、照明条件和视觉任务，以受控方式加剧干眼的体征和症状(例如，角膜染色和眼部不适)。不适量表可以包括5分量表，范围从0到4，其中0级＝没有不适，4级＝严重不适。相对较高的症状受试者可包括眼部不适评分为2或3的受试者，而相对较低的症状受试者可具有0或1的眼部不适评分。

如前所述，本发明公开的主题提供DES和相关的体征和症状的有效治疗，所述DES和相关的体征和症状通过各种评估表征，其包括但不限于Schirmer试验、TFBUT试验、荧光素染色试验、泪膜稳定性降低、眼表损伤增加、眼部不适增加、眼部不适分析及其组合。在某些实施方案中，目标受试者可患有DES，其特征在于患病的眼中的泪液体积测试评分小于约10mm。在某些实施方案中，目标受试者可患有DES，其特征在于患病的眼中的泪膜破裂时间小于约10秒。在某些实施方案中，目标受试者可患有DES，其特征在于患病的眼睛中的总角膜荧光素染色评分为约4或更高。在某些实施方案中，目标受试者可患有DES，其特征在于患病的眼睛中的眼部不适评分为约2或更高。

在某些实施方案中，本公开提供了用于增加泪液量和泪膜稳定性的方法。在某些实施方案中，本公开提供了用于减少眼表损伤的方法。在某些实施方案中，本公开提供了用于减轻眼部不适的方法。本文提供的所有方法包括向有需要的受试者的一只或两只眼睛施用包含Tβ4或其片段的眼科组合物。

共同施用

在某些实施方案中，治疗DES的方法可以作为持续状况进行管理。在某些实施方案中，如果有潜在的疾病，则同时治疗该疾病。

在某些实施方案中，组合物可以在施用另外的疗法的同时、恰好之前或之后进行施用。本公开的组合物可以单独施用或者可以与第二组合物/治疗剂共同施用于受试者。

共同施用可以包括单独地或与第二组合物/治疗剂组合同时或依次施用组合物。

在某些实施方案中，该方法包括用本发明的组合物与人工泪液组合治疗DES。人工泪液可包括本领域已知的任何眼软膏、滴剂或喷雾剂等。示例性人工泪液可包括例如Celluvisc,Clear Eyes CLR,GenTeal,Hypotears,Isopto Tears、Lacri-Lube S.O.P.、Liquitears、Moisture Drops、Oasis Tears、Opti-Free Rewetting Drops、optive、Refresh、Soothe、Systane、TheraTears、Ultra Fresh、Visine Tears等。

剂量方案

例如但不限于，该方法可以包括使眼睛或眼组织与有效量的作为活性成分的包含Tβ4或其片段的组合物接触。施用可以是局部或玻璃体内施用。局部施用的实例可包括将组合物以例如溶液、洗剂、膏药、凝胶、乳膏、糊剂、喷雾剂、混悬剂、分散剂、水凝胶、软膏、油或发泡剂的形式直接施用于受试者以将其与眼组织接触。

在某些实施方案中，在有需要的受试者中治疗DES的方法包括向受试者的眼睛施用包含人Tβ4或其片段的眼科组合物，其配制为溶液、混悬液、半固体凝胶、凝胶、乳液、半液体、软膏、乳膏、泡沫凝胶或控释/缓释载体。例如，组合物可以是隐形眼镜溶液、洗眼液、滴眼剂、眼用凝胶、眼用软膏等形式。

以下剂量方案通过施用有效量的包含Tβ4或其片段的眼科组合物通常可用于治疗DES，并且可用于治疗炎症反应和增加角膜上皮愈合。本文提供的剂量方案可用于增加泪液量，增加泪膜稳定性，减少眼表损伤和/或减少眼部不适。

在一个特定实施方案中，该组合物是溶液形式，其可以作为滴眼剂施用。该组合物可局部施用于眼睛以治疗DES，其剂量范围为约5μg至约150μg每眼、或约5μg至约100μg每眼、或约5μg至约50μg每眼、或约5μg至约25μg每眼。在其他实施方案中，组合物可以局部施用于眼睛以治疗DES，其剂量范围为约5μg至约150μg每眼、或约25μg至约150μg每眼、或约50μg至约150μg每眼、或约100μg至约150μg每眼。

在某些实施方案中，一只眼睛的剂量可以是约1至约5滴溶液。在某些实施方案中，一只眼睛的剂量可以是1、2滴或3滴溶液。溶液形式的每滴眼科组合物可以对应于约10μL至约150μL的眼科组合物。优选地，溶液形式的每滴眼科组合物可以对应于约20μL至约70μL的眼科组合物。

在某些实施方案中，可以通过在每只眼睛中放置一至两滴或更多滴、每天1至24次，将眼科组合物施用于眼睛以治疗DES。例如，眼科组合物可以每天施用1、2、3、4、8、12、18或24次或更多次。在某些实施方案中，眼科组合物可通过在每只眼睛中放置一滴或两滴、每日一次或每日两次、或每日三次、或每日四次来施用。例如但不限于，可以通过每天四次在每只眼睛中放置一滴来施用组合物，包括例如在早晨、中午、下午和晚上。

在某些实施方案中，治疗DES的方法包括将组合物人Tβ4或其片段以任何适合的或治疗有效的量施用于受试者，例如，约0.001％重量至约90％重量的组合物、约0.001％重量至约1％重量、约0.001％重量至约10％重量、约0.001％重量至约20％重量、约0.001％重量至约30％重量、约0.001％重量至约40％重量、约0.001％重量至约50％重量、约0.001％重量至约60％重量、约0.001％重量至约70％重量、约0.001％重量至约80％重量、约0.01％重量至约90％重量、约0.01％重量至约1％重量、约0.01％重量至约10％重量、约0.01％重量至约20％重量、约0.01％重量至约30％重量、约0.01％重量至约40％重量、约0.01％重量至约50％重量、约0.01％重量至约60％重量、约0.01％重量至约70％重量、约0.01％重量至约80％重量、约0.1％重量至约90％重量、约0.1％重量至约1％重量、约0.1％重量至约10％重量、约0.1％重量至约20％重量、约0.1％重量至约30％重量、约0.1％重量至约40％重量、约0.1％重量至约50％重量、约0.1％重量至约60％重量、约0.1％重量至约70％重量、约0.1％重量至约80％重量或之间的任何范围的组合物。在某些实施方案中，治疗DES的方法包括以约0.05％重量向受试者施用组合物人Tβ4或其片段。在某些实施方案中，治疗DES的方法包括以约0.1％重量向受试者施用组合物人Tβ4或其片段。

实施例

以下实施例仅用于说明本发明公开的主题，并且它们不应被视为以任何方式限制所公开主题的范围。

实施例1:0.05％和0.1％Tβ4眼科组合物的安全性和功效

研究目标

本研究的目的是比较0.05％Tβ4眼科组合物和0.1％Tβ4眼科组合物与安慰剂用于治疗干眼症的体征和症状的安全性和有效性。

材料和方法

该研究是一项多中心、随机、双盲研究，旨在评估0.05％和0.1％Tβ4眼科溶液在干眼症受试者中与安慰剂相比的功效和安全性。317名年龄至少为18岁的男性和女性受试者，具有双眼干燥眼报告史并符合所有其他研究资格标准，随机接受0.05％Tβ4、0.1％Tβ4或安慰剂治疗，比例1：1：1(各治疗组受试者分别为105：107：105)。

该研究包括两个时期：7天的磨合期和28天的治疗期。该研究的流程图如图1所示。

CAE是一种临床模型，为研究干眼症的研究性治疗提供标准化方法。该模型通过调节CAE室内的湿度、温度、气流、照明条件和视觉任务，以受控的方式加剧干眼的体征和症状(例如，角膜染色和眼部不适)。

患者和选择标准

符合条件的患者年龄为18岁或以上，在入组前至少有6个月有干眼病史，并且在过去6个月内有干眼症状的眼药水使用史。患者的泪膜破裂时间(TFBUT)必须≤10秒，无麻醉Schirmer眼泪试验(mm/5分钟)≥1且≤10，基于角膜的中央、上部和下部区域的总和使用荧光染色量表(以0-4级报道每个区域)，角膜荧光染色评分≥4。

如果满足初始筛选要求，则要求患者在CAE中暴露后显示荧光染色增加。此外，患者在暴露于CAE期间必须报告眼部不适评分恶化(5分[0-4]量表，其中0＝无，4＝严重)。所有患者双眼矫正视敏度必须≥最小分辨角度(logMAR)+0.7的对数。在第1次访问时符合选择标准的患者开始自我施用安慰剂溶液7天直至第2次访问(第1天)。在该磨合期后，在第2次访问时，符合条件的患者需要满足上述在第1次访问所述的所有评估。

措施

Tβ4眼科溶液和安慰剂眼科溶液的临床剂型和包装是相同的无菌低密度聚乙烯单位剂量非保存瓶。它们被包装在铝箔包装药袋中以防止曝光，每个都包含一次性瓶。在整个研究中，在第1天和第29天之间，指示患者每天四次向每只眼睛滴入一滴研究药物，早晨、中午、下午和晚上睡觉前各一次。使用由独立生物统计学家生成的代码，以严格的数字顺序为患者分配随机化试剂盒编号。所有研究者、研究和现场人员以及患者都被隐藏了治疗分配。

结果评价

在施用期间的第8天(第3次访问)、第15天(第4次访问)和第29天(第5次访问)评估患者。在第14天和第28天暴露于CAE。在每次研究访问时，评估一组干眼体征和症状以及安全措施(包括暴露前[CAE前]和暴露后[CAE后]。

在CAE前后每次访问时评估的体征终点，包括荧光染色(在三个区域：角膜下部、上部和中央，在单个区域和三个区域的总和中提供评分)、TFBUT和无麻醉Schirmer测试(在CAE前和/或CAE后测量)。

在每次访问时(CAE前后)评估的症状终点是眼部不适(眼部不适量表，使用五点[0-4]量表，其中0＝无，4＝严重)。在曝露于CAE期间，也对眼部不适分级。

研究结果

总角膜区域荧光染色评分

使用0.05％和0.1％Tβ4的28天治疗(第5次访问)引起受试者的总角膜染色的改善。根据在基线(CAE前)TFBUT的严重程度对受试者进行分组，并分析每个亚组的总角膜的荧光染色评分从基线的变化。例如，如图2A所示，受试者被分组为100％、75％、50％和25％四分位数组。如图2A所示，在所有四分位数组中使用0.05％和0.1％Tβ4的28天治疗(第5次访问)后，Tβ4治疗组和安慰剂治疗组之间的荧光染色评分存在差异。例如，在所有25％四分位数组中，当与基线(第2次访问)至第5次访问比较时，安慰剂组的总角膜区荧光染色评分变化为0.83，0.05％Tβ4治疗组为0.075，0.1％Tβ4治疗组为0.10。较低的荧光染色评分变化表明角膜缺陷较少，而高荧光染色变化表明缺陷恶化。

图2B提供了在不同时间点的总角膜区中荧光染色评分的变化图。在第8天(第3次访问)、第15天(第4次访问)和第29天(第5次访问)测量约25％亚群组的总角膜区域中荧光染色评分的变化。如图2B所示，使用0.05％Tβ4治疗的7天、14天和28天治疗引起受试者的总角膜染色的显著改善。此外，使用0.1％Tβ4的14天和28天治疗引起受试者的总角膜染色的显著改善。

这些结果表明Tβ4治疗对减轻DES患者眼表损伤的治疗效果。特别地，这些结果表明Tβ4治疗在泪膜稳定性降低的患者组中可以更有效。

下部区域荧光染色评分

使用0.05％和0.1％Tβ4的28-天治疗(第5次访问)引起对下部区域的角膜染色的显著改善。如上所述，通过在基线(CAE前)TFBUT的严重程度对受试者进行分组，并分析每个亚组的角膜下部区域的荧光染色评分从基线的变化。如图3A所示，在75％、50％和25％四分位数组中使用0.05％和0.1％Tβ4的28天治疗(第5次访问)后，Tβ4治疗组和安慰剂治疗组之间的下部区域的荧光染色评分存在差异。例如，在25％亚群中，当与基线(第2次访问)至第5次访问比较时，安慰剂组的下部区域的荧光染色评分变化为0.39，0.05％Tβ4治疗组中为0.20，0.1％Tβ4治疗组中为-0.04。

图3B提供了在不同时间点的下角膜区域中荧光染色评分的变化图。在第8天(第3次访问)、第15天(第4次访问)和第29天(第5次访问)测量50％亚群组的下角膜区域中荧光染色评分的变化。如图3B所示，使用0.05％和0.1％Tβ4的7天、14天和28天治疗引起了受试者中角膜染色的显著改善。

将受试者分组为较低泪膜稳定性组和较高泪膜稳定性组。在较低泪膜稳定性的受试者组(患者的泪膜破裂时间短于总人群的中值)中，在基线时，用0.05％和0.1％Tβ4的28天治疗后(第5次访问)，Tβ4治疗组和安慰剂治疗组之间存在差异。当与基线(第2次访问)至第5次访问比较时，在安慰剂组中下部区域的荧光染色评分变化为0.400，0.05％Tβ4治疗组中为0.120，且0.1％Tβ4治疗组中为0.009。患者中存在较低的荧光染色评分表明角膜缺陷较少，而高荧光染色改变表明缺陷恶化。

然而，在较高泪膜稳定性组(患者的泪膜破裂时间大于总人群的中值)中，在基线时，在安慰剂组中下部区域开始荧光染色评分从基线开始的变化为0.094，0.05％Tβ4-治疗组中为0.444，且0.1％Tβ4-治疗组中为0.245。

当比较Tβ4治疗组和安慰剂组之间的平均差异时，Tβ4治疗组在较低泪液膜稳定性组中的缺陷恶化程度低于安慰剂组(负评分意味着比安慰剂组恶化更少)。但在较高泪膜稳定性组中，Tβ4治疗组和安慰剂组之间的平均差异显示出正值，即眼损伤的恶化程度更高。

这些结果表明，Tβ4治疗的低泪膜稳定性患者的降低眼泪表面损伤效果显著。

表1.下部区域的荧光染色评分–从第2次访问(基线)至第5次访问的变化

泪膜破裂时间

在泪液膜稳定性较低的受试者组(患者的泪膜破裂时间短于总人群的中值，例如1-9秒的中值)中，在基线时，使用0.05％和0.1％Tβ4的28-天治疗(第5次访问)后，Tβ4-治疗组和安慰剂-治疗组之间存在差异。当与基线(第2次访问)至第5次访问比较时，泪膜破裂时间变化在安慰剂组中为0.54秒，且在Tβ4-治疗组中为0.74秒。患者中存在的泪膜破裂时间越长，表明泪膜稳定性越好。

然而，在较高泪膜稳定性组(患者的泪膜破裂时间长于总群体的中值)中，在基线时，安慰剂组中的泪膜破裂时间与基线的变化为0.05秒，在Tβ4治疗组中为0.14秒。

当比较所有Tβ4治疗组和安慰剂组之间的平均差时，Tβ4治疗组和安慰剂组之间的平均差异显示Tβ4治疗组具有更好的泪膜稳定性(Tβ4治疗组vs.安慰剂＝0.20vs.0.09)。

这些结果表明，具有低泪膜稳定性的Tβ4治疗患者的泪膜稳定性效果增加显著。

表2.泪膜破裂时间–从第2次访问(基线)至第5次访问的变化

暴露于CAE期间眼部不适评分变化

使用0.05％和0.1％Tβ4的28天治疗(访问5)引起干眼症患者眼部不适的改善。受试者通过在基线(CAE开始)眼部不适的严重程度分组，并分析暴露于每个亚组的CAE室期间的眼部不适的变化。例如，如图4所示，将受试者分为ITT、>0、>1和>2亚群组。ITT亚群组包括每个随机化的受试者。>0亚群组中的受试者在第2次访问时的眼部不适评分大于约0。>1亚组中的受试者在第2次访问时的眼部不适评分大于约1。>2亚组中的受试者在第2次访问时的眼部不适评分大于约2。如图4所示，在用0.05％和0.1％Tβ4治疗28天后，所有亚群中活性剂和安慰剂治疗组之间存在差异。特别是，在>2亚群的安慰剂组中，从CAE开始到结束的眼部不适评分变化为1.7。然而，0.05％Tβ4治疗组中眼部不适评分变化仅为1.34，而0.1％Tβ4治疗组中眼部不适评分变化为1.39。变化比较显示相比于安慰剂治疗的受试者，0.1％和0.05％Tβ4治疗的受试者显示更低的增加。

基于预定的眼部不适评分，将受试者分为较高症状受试者组和较低症状受试者组。在较高症状的受试者组(受试者的眼部不适评分为2或3)中，在基线时，观察到在用Tβ4治疗28天(第5次访问)后Tβ4治疗组和安慰剂治疗组之间的区别。当与基线(第2次访问)至第5次访问比较时，安慰剂组中CAE开始至结束的眼部不适评分变化为0.50，0.05％Tβ4治疗组中为0.23，0.1％Tβ4治疗组中为0.06。较低的眼部不适评分表示不适，并且低眼部不适变化表明对恶化状况具有高抑制效果(保护效果)。

较低症状受试者组(受试者眼部不适评分0和1)在基线(第2次访问)时，当与基线(第2次访问)至第5次访问比较时，在安慰剂组中从CAE开始到结束的眼部不适评分变化为-0.86，在0.05％Tβ4治疗组中为-0.05，在0.1％Tβ4治疗组中为-0.61。

这些结果表明，Tβ4治疗引起Tβ4对CAE的作用的显著抑制，即对CAE期间眼部不适变化的不良刺激的保护作用。在Tβ4滴眼剂与安慰剂治疗的眼睛中从第2次访问到第5次访问的响应的变化显著不同，其中Tβ4治疗的患者减轻了攻击效应。

表3.CAE期间的眼部不适评分变化–从第2次访问(基线)至第5次访问的变化

泪液量

在该研究中观察到泪液产生的增加。Schirmer试验结果表明：在安慰剂组中从基线的变化为0.26，0.05％Tβ4治疗组中为0.88，且0.1％Tβ4治疗组中为0.67。该结果表明Tβ4增加了干眼患者的泪液量。低的Schirmer测试结果表明患者的泪液量小。因此，Schirmer试验中的大的正变化表明泪液量增加，负变化表明泪液量减少。

而且，在较高的角膜荧光染色组(即，患者的一个总角膜荧光染色评分超过5)中，在基线时，使用0.05％和0.1％Tβ4的28-天治疗(第5次访问)后，活性剂和安慰剂治疗组之间有区别。当与基线至第5次访问相比时，Schirmer测试结果在安慰剂组中为-1.00，在0.05％Tβ4-治疗组中为1.59，且在0.1％Tβ4-治疗组中为0.65(下表4)。

然而，在较低的角膜荧光染色组(即，角膜荧光染色评分不超过5的患者)中基线时，Schirmer试验结果与基线的变化在安慰剂组中为1.08，在0.05％Tβ4治疗组中为0.45，且在0.1％Tβ4处理组中为0.65(下表4)。

该结果表明Tβ4增加了严重干眼患者组的泪液量。

表4.使用Schirmer测试从第2次访问(基线)至第5次访问的泪液量变化

实施例2:0.05％和0.1％Tβ4眼科组合物与人工泪液组合的安全性和功效

研究目标

本研究的目的是比较0.05％Tβ4眼科组合物与人工泪液的组合、0.1％Tβ4眼科组合物与人工泪液的组合与安慰剂治疗干眼的症状和体征的安全性和有效性。

材料和方法

该研究是一项多中心、随机、双盲研究，旨在评估0.05％和0.1％Tβ4眼科溶液与人工泪液的组合与安慰剂相比在干眼症患者中的有效性和安全性。

患者和选择标准

符合条件的患者年龄为18岁或以上，在入组前至少有6个月有干眼病史，并且在过去6个月内有干眼症状的眼药水使用史。

Tβ4眼科溶液与人工泪液的组合和安慰剂眼科溶液的临床剂型和包装是相同的无菌低密度聚乙烯单位剂量非保存瓶。它们被包装在铝箔包装药袋中以防止曝光，每个都包含一次性瓶。在整个研究中，在第1天和第29天之间，指示患者每天四次向每只眼睛滴入一滴研究药物，早晨、中午、下午和晚上睡觉前各一次。使用由独立生物统计学家生成的代码，以严格的数字顺序为患者分配随机化试剂盒编号。所有研究者、研究和现场人员以及患者都被隐藏了治疗分配。

结果表明，Tβ4与人工泪液组合增加了泪膜稳定性，并减少了Tβ4治疗的低泪膜稳定性的患者的眼表损伤，以及对更严重的症状性干眼患者的不良刺激的保护作用。此外，Tβ4与人工泪液组合的治疗增加了严重干眼患者的泪液量。

***

本说明书中引用的所有专利、专利申请、出版物、产品描述和方案均通过引用整体并入本文。在术语冲突的情况下，以本公开为准。

虽然显而易见的是，本文所述的主题被很好地推算以实现上述益处和优点，但是本发明公开的主题不限于本文所述的具体实施方案的范围。应当理解，在不脱离本发明的精神的情况下，所公开的主题易于修改、变化和改变。本领域技术人员将认识到或者能够使用不超过常规的实验确定本文所述具体实施方案的许多等同物。这些等同物旨在由以下权利要求涵盖。

序列表

<110> 雷根特里有限责任公司

<120> 治疗干眼综合征的方法

<130> 085089.0102

<150> 62/436,727

<151> 2016-12-20

<150> 62/363,592

<151> 2016-07-18

<150> 62/363,565

<151> 2016-07-18

<160> 2

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<400> 1

Leu Lys Lys Thr Glu Thr

1 5

<210> 2

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<400> 2

Leu Lys Lys Thr Asn Thr

1 5

Claims (22)

1.在有需要的受试者中增加泪液量的方法，其中所述方法包括向受试者的患病的眼睛递送组合物，其包含胸腺素β4(Tβ4)、Tβ4片段、Tβ4同种型、Tβ4衍生物、包括氨基酸序列LKKTET或LKKTNT的肽试剂或其变体。

2.权利要求1的方法，其中受试者患有干眼综合征(DES)，其特征为患病的眼中的泪液体积测试评分小于约10mm。

3.在有需要的受试者中增加泪膜稳定性的方法，其中所述方法包括向受试者的患病的眼睛递送组合物，其包含Tβ4、Tβ4片段、Tβ4同种型、Tβ4衍生物、包括氨基酸序列LKKTET或LKKTNT的肽试剂或其变体。

4.权利要求3的方法，其中受试者患有DES，其特征为在患病的眼中的泪膜破裂时间小于约10秒。

5.在有需要的受试者中减少眼表损伤的方法，其中所述方法包括向受试者的患病的眼睛递送组合物，其包含Tβ4、Tβ4片段、Tβ4同种型、Tβ4衍生物、包括氨基酸序列LKKTET或LKKTNT的肽试剂或其变体。

6.权利要求5的方法，其中受试者患有DES，其特征为患病的眼中的荧光染色评分为约4或更高。

7.权利要求5的方法，其中受试者患有DES，其特征为在患病的眼中的泪膜破裂时间小于约10秒。

8.在有需要的受试者中减少眼部不适的方法，其中所述方法包括向受试者的患病的眼睛递送组合物，其包含Tβ4、Tβ4片段、Tβ4同种型、Tβ4衍生物、包括氨基酸序列LKKTET或LKKTNT的肽试剂或其变体。

9.权利要求8的方法，其中受试者患有DES，其特征为患病的眼睛中的眼部不适评分为约2或更高。

10.权利要求9的方法，其中在暴露于不利环境期间，患病的眼睛的眼部不适量表为约3或更高。

11.在有需要的受试者中治疗DES的方法，其中所述方法包括向受试者的患病的眼睛递送组合物，其包含Tβ4、Tβ4片段、Tβ4同种型、Tβ4衍生物、包括氨基酸序列LKKTET或LKKTNT的肽试剂或其变体，其中DES特征为泪液量减少、泪膜稳定性降低、眼表损伤增加、眼部不适增加或其组合。

12.前述权利要求中任一项的方法，其中组合物包含约0.05％-约0.1％重量的Tβ4或其片段。

13.前述权利要求中任一项的方法，其中将组合物配制为溶液、混悬液、半液体、半固体凝胶、凝胶、油膏或乳膏。

14.前述权利要求中任一项的方法，其中将溶液以滴眼剂的形式递送至受试者。

15.前述权利要求中任一项的方法，其中所述方法还包括将人工泪液递送至受试者的患病的眼睛。

16.前述权利要求中任一项的方法，其中将人工泪液与所述组合物同时递送。

17.前述权利要求中任一项的方法，其中将人工泪液和所述组合物依次递送。

18.前述权利要求中任一项的方法，其中组合物还包含人工泪液。

19.前述权利要求中任一项的方法，其中将组合物至少每天一次但每天不超过四次递送至受试者。

20.前述权利要求中任一项的方法，其中将组合物每天一次、两次、三次或四次递送至受试者。

21.包含有效量的Tβ4、Tβ4片段、Tβ4同种型、Tβ4衍生物、包括氨基酸序列LKKTET或LKKTNT的肽试剂或其变体的眼科组合物在制备药物中的用途，所述药物用于在有需要的受试者中治疗DES，其中所述DES特征为泪液量减少、泪膜稳定性降低、眼表损伤增加、眼部不适增加及其组合。

22.包含有效量的Tβ4、Tβ4片段、Tβ4同种型、Tβ4衍生物、包括氨基酸序列LKKTET或LKKTNT的肽试剂或其变体的眼科组合物，或用于在治疗有需要的受试者的DES的方法，其中所述DES特征为泪液量减少、泪膜稳定性降低、眼表损伤增加、眼部不适增加及其组合。