CN109691597A - 一种缓解肉鸡热应激的肠道线粒体功能保护剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种缓解肉鸡热应激的肠道线粒体功能保护剂，其组成为：银杏叶提取物5～10重量份、绿原酸6～10重量份、甜菜碱5～10重量份、坡缕石10～25重量份。与饲料中单独添加银杏叶提取物、绿原酸、甜菜碱和坡缕石相比，本发明显著缓解了肉鸡的热应激，显著提高肉鸡热应激下肠道线粒体自噬水平，改善了肉鸡热应激下肠道线粒体功能。四种组分在提高肉鸡线粒体功能、线粒体自噬水平上存在显著交互作用，有正的协同组合效应。坡缕石对银杏叶提取物、绿原酸、甜菜碱有控释作用，使之易于与饲料混合，形成均匀分散系，使用方便。本发明通过各成分的协同效应，可显著提高肉鸡热应激下线粒体自噬水平，缓解热应激导致的肠道线粒体功能损伤。

Description

一种缓解肉鸡热应激的肠道线粒体功能保护剂
技术领域
本发明涉及一种缓解肉鸡热应激的肠道线粒体功能保护剂。
背景技术
现代集约化养殖过程中，家禽经常遭受各种各样的应激，这导致家禽发病率升高、生长受阻。在众多应激因素中，环境温度尤为重要。家禽是对热应激敏感的动物，随着家禽养殖业集约化、规模化的程度越来越大，加之全球性的气候变暖，热应激对家禽的危害问题越来越突出。研究表明，过高的温度会引起家禽一系列的症状，如生长性能下降，肠屏障功能受损，轻者生长减缓，抵抗力下降，重者死亡，造成重大的经济损失。
肠道是机体的消化器官，同时还具有内分泌、免疫等功能，是机体抗感染的第一道防线。近年来，人们对肠道研究已逐步从单纯的营养物质消化吸收转移到肠道功能对动物整体病理生理过程的影响。在热应激下长时间缺乏血液供应时，肠道细胞的结构和功能都会受到损害。研究表明，在各种应激时，胃肠道最早发生缺血缺氧，又最迟得到恢复，易较早受损或衰竭。肠道缺血时，供血量减少和供氧降低，肠道摄取和利用氧的能力代偿性提高，肠道氧耗量显著增加，进而引起乏氧代谢等，局部产生大量酸性代谢产物，组织pH降低，导致酸中毒。研究表明，热应激对肉鸡肠道绒毛结构有明显的破坏作用，并降低绒毛高度，增加隐窝深度。
目前生产上主要通过调节肠道形态、肠道屏障、肠道消化吸收以及肠道菌群等方式缓解家禽热应激。戴四发等(2009)发现日粮添加谷氨酰胺能有效改善热应激条件下肉鸡的生产性能、消化酶活和小肠形态结构正常。Lan等(2004)研究发现，饲粮中添加益生菌丰富家禽肠道有益菌多样性，缓解热应激引发的肠道菌群失调。Costa等(2014)试验发现，饲粮添加L-精氨酸可以有效缓解热应激，降低肠上皮的渗透性。我们最近的研究发现，多种应激均会导致线粒体功能损伤，并诱发线粒体自噬。然而应激所导致的代偿性线粒体自噬不足以抵抗各种应激导致的肠道损伤，因此可以通过营养手段调控肠道线粒体自噬水平进而改善肠道线粒体功能。开发线粒体功能保护剂，通过营养调节的手段调控线粒体自噬进而调控线粒体功能，具有现实的应用价值和广阔的市场前景。然而到目前为止，通过营养手段调控线粒体功能的研究很少见，而通过调控线粒体自噬进而改善线粒体功能的研究未见报道。
发明内容
本发明的目的提供一种缓解肉鸡热应激的肠道线粒体功能保护剂。
一种缓解肉鸡热应激的肠道线粒体功能保护剂组成为：银杏叶提取物5～10重量份、绿原酸6～10重量份、甜菜碱5～10重量份、坡缕石10～25重量份。
所述的银杏叶提取物是采用乙醇提取法从银杏叶中提取，其中总黄酮含量为24-26wt.％，萜内酯含量为8-10wt.％。
所述的绿原酸(Chlorogenic acid),分子式C16H18O9。可市场采购，如上禾生物科技有限公司、湖南天下康生物科技有限公司等。
所述的甜菜碱(Betaine)，分子式C5H11NO2。可市场采购，如山东格兰德生物科技有限公司等。
所述的坡缕石为粒度(200目通过率)≥90％，吸蓝量≥15g/100g。坡缕石是一种层链状硅酸盐粘土矿物，晶体形状为细长棒状、纤维状、针状，长约0.5-5微米，宽约10-25纳米，具有巨大比表面积，很强的吸附、离子交换能力，是很好的药物控释载体。
本发明还可以提供一种包含上述缓解肉鸡热应激的肠道线粒体功能保护剂的饲料。该饲料中肠道线粒体功能保护剂的添加量为0.05wt.％～0.15wt.％。
本发明的缓解肉鸡热应激的肠道线粒体功能保护剂具有以下特点：
(1)与饲料中单独添加银杏叶提取物、绿原酸、甜菜碱和坡缕石相比，本发明的缓解肉鸡热应激的肠道线粒体功能保护剂显著缓解了肉鸡的热应激，显著提高肉鸡热应激下肠道线粒体自噬水平，改善了肉鸡热应激下肠道线粒体功能。
(2)银杏叶提取物、绿原酸、甜菜碱和坡缕石在提高肉鸡线粒体功能、线粒体自噬水平上存在显著交互作用，有正的协同组合效应。
(3)坡缕石对银杏叶提取物、绿原酸、甜菜碱有控释作用，使之易于与饲料混合，形成均匀分散系，使用方便；同时坡缕石有粘滞作用，能增加食糜在消化道内的停留时间，促进营养物质的消化吸收。
(4)本发明的缓解肉鸡热应激的肠道线粒体功能保护剂通过各成分的协同效应，可显著提高肉鸡热应激下线粒体自噬水平，缓解热应激导致的肠道线粒体功能损伤。
具体实施方式
本发明结合以下实例作进一步的说明。
实施例l
预备：下面所用的坡缕石为粒度(200目通过率)92％，吸蓝量18g/100g的坡缕石粉。
取银杏叶提取物5公斤、绿原酸6公斤、甜菜碱5公斤、坡缕石10公斤混合后拌匀，即得一种缓解肉鸡热应激的肠道线粒体功能保护剂(Protective agent of mitochondriafunction relieving heat stress in broilers，PMFB)。在肉鸡饲料中的添加量为0.05wt.％。
试验105羽21日龄的Ross 308肉鸡分为7个处理组，分别为：热中性组、热应激组、银杏叶提取物组(热应激+银杏叶提取物)、绿原酸组(热应激+绿原酸)、甜菜碱组(热应激+甜菜碱)、坡缕石组(热应激+坡缕石)和PMFB组(热应激+PMFB)。每个处理组15羽。其中：热中性组鸡舍温度为22℃，喂食常规的肉鸡饲料；热应激组每天08:00至18:00鸡舍温度为33℃，18:00至次日08:00鸡舍温度为22℃，喂食常规的肉鸡饲料；银杏叶提取物组(热应激+银杏叶提取物)采用与热应激组相同的热应激处理，喂食添加银杏叶提取物的肉鸡饲料；绿原酸组(热应激+绿原酸)采用与热应激组相同的热应激处理，喂食添加绿原酸的肉鸡饲料；甜菜碱组(热应激+甜菜碱)采用与热应激组相同的热应激处理，喂食添加甜菜碱的肉鸡饲料；坡缕石组(热应激+坡缕石)采用与热应激组相同的热应激处理，喂食添加坡缕石的肉鸡饲料；PMFB组(热应激+PMFB)采用与热应激组相同的热应激处理，喂食添加0.05wt.％PMFB的肉鸡饲料；银杏叶提取物组(热应激+银杏叶提取物)、绿原酸组(热应激+绿原酸)、甜菜碱组(热应激+甜菜碱)、坡缕石组(热应激+坡缕石)中所添加组分在饲料中的含量与PMFB组(热应激+PMFB)的饲料中对应组分含量一致。饲养试验持续21d。
与热应激组、银杏叶提取物组、绿原酸组、甜菜碱组和坡缕石组相比，添加PMFB显著提高了血清中四碘甲腺原氨酸含量(P<0.05)，降低了血清和空肠黏膜中MDA含量(P<0.05)。以上结果表明，添加PMFB有效缓解了肉鸡的热应激。
与热应激组、银杏叶提取物组、绿原酸组、甜菜碱组和坡缕石组相比，添加PMFB提高了肉鸡空肠黏膜线粒体自噬水平，表现为线粒体自噬相关蛋白PINK、Parkin表达水平提高(P<0.05)，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ增高(P<0.05)。银杏叶提取物、绿原酸、甜菜碱和坡缕石在增强肉鸡肠道线粒体自噬水平上存在显著交互作用(P<0.05)。以上结果表明，添加PMFB增强了肉鸡肠道线粒体自噬水平。
与热应激组、银杏叶提取物组、绿原酸组、甜菜碱组和坡缕石组相比，添加PMFB显著改善了肉鸡线粒体功能，表现为空肠线粒体膜电位提高(P<0.05)，线粒体内ROS水平降低(P<0.05)，提高了线粒体ATP含量(P<0.05)，线粒体呼吸链复合物Ⅳ活性提高(P<0.05)。银杏叶提取物、绿原酸、甜菜碱和坡缕石在提高肉鸡肠道线粒体功能上存在显著交互作用(P<0.05)。以上结果表明，添加PMFB增强了肉鸡肠道线粒体功能。
由上述结果可知，肉鸡在热应激状态下，添加本发明的PMFB，可显著提高肉鸡肠黏膜线粒体自噬水平，保护线粒体功能，从而缓解肉鸡的热应激。
实施例2
预备：所用的坡缕石为粒度(200目通过率)94％，吸蓝量18g/100g的坡缕石粉。
取银杏叶提取物2公斤、绿原酸2公斤、甜菜碱2公斤、坡缕石5公斤混合后拌匀，即得一种缓解肉鸡热应激的肠道线粒体功能保护剂(Protective agent of mitochondriafunction relieving heat stress in broilers，PMFB)。在肉鸡饲料中的添加量为0.15wt.％。
试验将105羽14日龄AA肉鸡分为7个处理组，分别为：热中性组、热应激组、银杏叶提取物组(热应激+银杏叶提取物)、绿原酸组(热应激+绿原酸)、甜菜碱组(热应激+甜菜碱)、坡缕石组(热应激+坡缕石)和PMFB组(热应激+PMFB)。每个处理组15羽。其中：热中性组鸡舍温度为22℃，喂食常规的肉鸡饲料；热应激组每天08:00至18:00鸡舍温度为33℃，18:00至次日08:00鸡舍温度为22℃，喂食常规的肉鸡饲料；银杏叶提取物组(热应激+银杏叶提取物)采用与热应激组相同的热应激处理，喂食添加银杏叶提取物的肉鸡饲料；绿原酸组(热应激+绿原酸)采用与热应激组相同的热应激处理，喂食添加绿原酸的肉鸡饲料；甜菜碱组(热应激+甜菜碱)采用与热应激组相同的热应激处理，喂食添加甜菜碱的肉鸡饲料；坡缕石组(热应激+坡缕石)采用与热应激组相同的热应激处理，喂食添加坡缕石的肉鸡饲料；PMFB组(热应激+PMFB)采用与热应激组相同的热应激处理，喂食添加0.15wt.％PMFB的肉鸡饲料；银杏叶提取物组(热应激+银杏叶提取物)、绿原酸组(热应激+绿原酸)、甜菜碱组(热应激+甜菜碱)、坡缕石组(热应激+坡缕石)中所添加组分在饲料中的含量与PMFB组(热应激+PMFB)的饲料中对应组分含量一致。饲养试验持续21d。
与热应激组、银杏叶提取物组、绿原酸组、甜菜碱组和坡缕石组相比，添加PMFB显著提高了血清中四碘甲腺原氨酸含量(P<0.05)，降低了血清和空肠黏膜中MDA含量(P<0.05)。以上结果表明，添加PMFB有效缓解了肉鸡的热应激。
与热应激组、银杏叶提取物组、绿原酸组、甜菜碱组和坡缕石组相比，添加PMFB提高了肉鸡空肠黏膜线粒体自噬水平，表现为线粒体自噬相关蛋白PINK、Parkin表达水平提高(P<0.05)，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ增高(P<0.05)。银杏叶提取物、绿原酸、甜菜碱和坡缕石在增强肉鸡肠道线粒体自噬水平上存在显著交互作用(P<0.05)。以上结果表明，添加PMFB增强了肉鸡肠道线粒体自噬水平。
与热应激组、银杏叶提取物组、绿原酸组、甜菜碱组和坡缕石组相比，添加PMFB显著改善了肉鸡线粒体功能，表现为空肠肠黏膜线粒体DNA含量和线粒体氧化呼吸链复合物IV活性显著增加(P<0.05)，线粒体内ROS水平降低(P<0.05)。银杏叶提取物、绿原酸、甜菜碱和坡缕石在提高肉鸡肠道线粒体功能上存在显著交互作用(P<0.05)。以上结果表明，添加PMFB增强了肉鸡肠道线粒体功能。
由上述结果可知，肉鸡在热应激状态下，添加本发明的PMFB，可显著提高肉鸡肠黏膜线粒体自噬水平，保护线粒体功能，从而有效缓解了肉鸡的热应激。
实施例3
预备：所用的坡缕石为粒度(200目通过率)97％，吸蓝量24g/100g的坡缕石粉。
取银杏叶提取物8公斤、绿原酸9公斤、甜菜碱8公斤、坡缕石15公斤混合后拌匀，即得一种缓解肉鸡热应激的肠道线粒体功能保护剂(Protective agent of mitochondriafunction relieving heat stress in broilers，PMFB)。在肉鸡饲料中的添加量为0.10wt.％。
试验将105羽21日龄Avian肉鸡分为7个处理组，分别为：热中性组、热应激组、银杏叶提取物组(热应激+银杏叶提取物)、绿原酸组(热应激+绿原酸)、甜菜碱组(热应激+甜菜碱)、坡缕石组(热应激+坡缕石)和PMFB组(热应激+PMFB)。每个处理组15羽。其中：热中性组鸡舍温度为22℃，喂食常规的肉鸡饲料；热应激组每天08:00至18:00鸡舍温度为33℃，18:00至次日08:00鸡舍温度为22℃，喂食常规的肉鸡饲料；银杏叶提取物组(热应激+银杏叶提取物)采用与热应激组相同的热应激处理，喂食添加银杏叶提取物的肉鸡饲料；绿原酸组(热应激+绿原酸)采用与热应激组相同的热应激处理，喂食添加绿原酸的肉鸡饲料；甜菜碱组(热应激+甜菜碱)采用与热应激组相同的热应激处理，喂食添加甜菜碱的肉鸡饲料；坡缕石组(热应激+坡缕石)采用与热应激组相同的热应激处理，喂食添加坡缕石的肉鸡饲料；PMFB组(热应激+PMFB)采用与热应激组相同的热应激处理，喂食添加0.10wt.％PMFB的肉鸡饲料；银杏叶提取物组(热应激+银杏叶提取物)、绿原酸组(热应激+绿原酸)、甜菜碱组(热应激+甜菜碱)、坡缕石组(热应激+坡缕石)中所添加组分在饲料中的含量与PMFB组(热应激+PMFB)的饲料中对应组分含量一致。饲养试验持续21d。
与热应激组、银杏叶提取物组、绿原酸组、甜菜碱组和坡缕石组相比，添加PMFB显著提高了血清中四碘甲腺原氨酸含量(P<0.05)，降低了血清和空肠黏膜中MDA含量(P<0.05)。以上结果表明，添加PMFB缓解了肉鸡的热应激。
与热应激组、银杏叶提取物组、绿原酸组、甜菜碱组和坡缕石组相比，添加PMFB提高了肉鸡空肠黏膜线粒体自噬水平，表现为线粒体自噬相关蛋白PINK、Parkin表达水平提高(P<0.05)，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ增高(P<0.05)。银杏叶提取物、绿原酸、甜菜碱和坡缕石在增强肉鸡肠道线粒体自噬水平上存在显著交互作用(P<0.05)。以上结果表明，添加PMFB增强了肉鸡肠道线粒体自噬水平。
与热应激组、银杏叶提取物组、绿原酸组、甜菜碱组和坡缕石组相比，添加PMFB显著改善了肉鸡线粒体功能，表现为空肠肠黏膜线粒体DNA含量和线粒体氧化呼吸链复合物IV活性显著增加(P<0.05)。银杏叶提取物、绿原酸、甜菜碱和坡缕石在提高肉鸡肠道线粒体功能上存在显著交互作用(P<0.05)。以上结果表明，添加PMFB增强了肉鸡肠道线粒体功能。
由上述结果可知，肉鸡在热应激状态下，添加本发明的PMFB，可显著提高肉鸡肠黏膜线粒体自噬水平，保护线粒体功能，从而缓解肉鸡热应激。

Claims (5)

1.一种缓解肉鸡热应激的肠道线粒体功能保护剂，其特征在于其组成为：银杏叶提取物5～10重量份、绿原酸6～10重量份、甜菜碱5～10重量份、坡缕石10～25重量份。
2.根据权利要求1所述的一种缓解肉鸡热应激的肠道线粒体功能保护剂，其特征在于，所述的银杏叶提取物是采用乙醇提取法从银杏叶中提取，其中总黄酮含量为24-26wt.％，萜内酯含量为8-10wt.％。
3.根据权利要求1所述的一种缓解肉鸡热应激的肠道线粒体功能保护剂，其特征在于，以200目通过率计，所述的坡缕石为粒度≥90％，吸蓝量≥15g/100g的坡缕石粉。
4.一种含有如权利要求1～3任一所述缓解肉鸡热应激的肠道线粒体功能保护剂的饲料。
5.如权利要求4所述的饲料，其特征在于，饲料中肠道线粒体功能保护剂的添加量为0.05wt.％～0.15wt.％。
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