CN109661941A - 快速筛选防治白背飞虱杀虫剂的试剂盒及其方法 - Google Patents

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万虎
李建洪
何顺
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毛凯凯
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Abstract

本发明公开了一种快速筛选防治白背飞虱杀虫剂的试剂盒及其方法,它包括7个检测瓶和对应的7个对照瓶,其中,7个检测瓶的瓶内壁和瓶底面均覆盖有7种药膜,每种药膜都含有一种杀虫剂,分别为烯啶虫胺、呋虫胺、噻虫嗪、噻虫胺、毒死蜱、异丙威或吡虫啉;本试剂盒操作简单,易于向农民推广;可以在田间使用,不需要在室内完成;节省时间,短时间即可检测出白背飞虱对药剂的敏感性;储存条件简单,货架期长。

Description

快速筛选防治白背飞虱杀虫剂的试剂盒及其方法
技术领域
本发明涉及植物保护学农药学领域,具体涉及一种快速筛选防治白背飞虱杀虫剂的试剂盒及其方法。
背景技术
白背飞虱Sogatella furcifera(Horvath),属半翅目飞虱科,广泛分布于南亚、东南亚、太平洋岛屿及日本、朝鲜和澳大利亚,几乎遍及中国所有稻区,是影响水稻稳产、高产的主要害虫之一。针对其爆发性和迁飞性等特点,目前仍以化学防治为主,但由于杀虫剂的长期广泛使用,导致白背飞虱对多种杀虫剂的敏感性逐年降低。近几年的田间白背飞虱抗药性监测结果表明其对一些常用杀虫剂品种已产生了中等水平甚至高水平抗性。
目前,防治白背飞虱的常用杀虫剂有烯啶虫胺、噻虫嗪、噻虫胺、呋虫胺、毒死蜱、异丙威和吡虫啉等。2017年的监测结果表明华中地区白背飞虱田间种群已对毒死蜱、吡蚜酮等产生了高水平抗性;对烯啶虫胺、氟啶虫胺腈等处于低水平至中等水平抗性;对吡虫啉处于低水平抗性;对三氟苯嘧啶敏感(未发表数据)。
监测白背飞虱抗性程度方法一般是需要从田间采虫,在实验室进行试验,且一般需要3~5天才能查结果。此方法需要将白背飞虱从田间带回实验室,路途远,易造成较多数量的试虫死亡,费时费力。因此,需要一种快速筛选防治白背飞虱杀虫剂的试剂盒,对延缓白背飞虱抗药性的发展具有重要的指导作用。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足,提供了一种快速筛选防治白背飞虱杀虫剂的试剂盒及其方法,利用该试剂盒可以60min内快速检测白背飞虱田间种群对烯啶虫胺、噻虫胺、噻虫嗪、呋虫胺、毒死蜱、异丙威和吡虫啉的敏感性,用于检测的药膜玻璃管经改进贮藏期可大于10个月。本发明可以在田间进行,较于常规的生物测定(稻苗浸渍法、点滴法等)方法,减少了必须将田间的虫子转移到室内的过程,减少了工作量,且大大缩短了测定时间。加入成膜剂,延长了用于诊断的药膜玻璃管的货架期,便于保存。
为实现上述目的,本发明所设计一种快速筛选防治白背飞虱杀虫剂的试剂盒,它包括7个检测瓶和对应的7个对照瓶,其中,7个检测瓶的瓶内壁和瓶底面均覆盖有7种药膜,每种药膜都含有一种杀虫剂,分别为烯啶虫胺、呋虫胺、噻虫嗪、噻虫胺、毒死蜱、异丙威或吡虫啉;7个检测瓶中药膜的含药量以及杀虫剂与成膜剂重量比分别为:
吡虫啉298.39~610.01ng/cm2,吡虫啉和成膜剂重量比为1:750;
噻虫嗪53.10~115.34ng/cm2,噻虫嗪和成膜剂重量比为1:3500;
噻虫胺60.55~118.62ng/cm2,噻虫胺和成膜剂重量比为1:3500;
烯啶虫胺53.30~129.86ng/cm2,烯啶虫胺和成膜剂重量比为1:3500;
呋虫胺32.02~60.06ng/cm2,呋虫胺和成膜剂重量比为1:10500;
异丙威5.17~15.01ng/cm2,异丙威和成膜剂重量比为1:10500;
毒死蜱41.26~103.61ng/cm2,毒死蜱和成膜剂重量比为1:5250;
对照瓶的瓶内壁和瓶底面均覆盖有成膜剂。
进一步地,所述试剂盒还包括吸虫器、白纸板和毛笔。
再进一步地,所述成膜剂选自聚醋酸乙烯酯、水性丙烯酸树脂和壳聚糖。
再进一步地,所述成膜剂为壳聚糖,使用将其制备成壳聚糖水溶液,其质量分数为1.00~1.50%,pH值为4。
再进一步地,所述试剂盒包括吸虫器、白纸板、毛笔、7个检测瓶和对应的7个对照瓶,其中,7个检测瓶的瓶内壁和瓶底面均覆盖有7种药膜,每种药膜都含有一种杀虫剂,分别为烯啶虫胺、呋虫胺、噻虫嗪、噻虫胺、毒死蜱、异丙威或吡虫啉;7个检测瓶中药膜的含药量以及杀虫剂与成膜剂重量比分别为:
吡虫啉400.02ng/cm2,吡虫啉和成膜剂重量比为1:750;
噻虫嗪70.21ng/cm2,噻虫嗪和成膜剂重量比为1:3500;
噻虫胺80.55ng/cm2,噻虫胺和成膜剂重量比为1:3500;
烯啶虫胺70.30ng/cm2,烯啶虫胺和成膜剂重量比为1:3500;
呋虫胺42.02ng/cm2,呋虫胺和成膜剂重量比为1:10500;
异丙威7.17ng/cm2,异丙威和成膜剂重量比为1:10500;
毒死蜱61.26ng/cm2,毒死蜱和成膜剂重量比为1:5250;
对照瓶的瓶内壁和瓶底面均覆盖有成膜剂。
再进一步地,所述检测瓶由以下方法制备而成:
1)根据不同检测瓶中的药膜含药量、以及杀虫剂和成膜剂重量比称取称取杀虫剂和成膜剂,备用;其中,
吡虫啉298.39~610.01ng/cm2,吡虫啉和成膜剂重量比为1:750;
噻虫嗪53.10~115.34ng/cm2,噻虫嗪和成膜剂重量比为1:3500;
噻虫胺60.55~118.62ng/cm2,虫胺和成膜剂重量比为1:3500;
烯啶虫胺53.30~129.86ng/cm2,烯啶虫胺和成膜剂重量比为1:3500;
呋虫胺32.02~60.06ng/cm2,呋虫胺和成膜剂重量比为1:10500;
异丙威5.17~15.01ng/cm2,异丙威和成膜剂重量比为1:10500;
毒死蜱41.26~103.61ng/cm2,毒死蜱和成膜剂重量比为1:5250;
2)杀虫剂置于离心管中,加入丙酮稀释得到稀释液;
3)然后加入丙酮、成膜剂和水;混匀均匀,得到药液,并将药液在瓶底和瓶壁上涂抹均匀,成膜晾干,即得到检测瓶,其中,每个检测瓶的药膜中含有一种杀虫剂,其杀虫剂为烯啶虫胺、呋虫胺、噻虫嗪、噻虫胺、毒死蜱、异丙威和吡虫啉中任意一种。
本发明还提供了一种上述试剂盒筛选杀虫剂的方法,包括以下步骤:
1)向不同检测瓶中吸入15~20头健康的白背飞虱(待检测田间品系)3龄若虫,培养55~65min后检查死亡率;记录活虫数,对照组死亡率≤5%,计算检测瓶中白背飞虱的校正死亡率,公式如下:
2)诊断结果判断标准:当某个检测瓶的校正死亡率大于等于90%时,即认为白背飞虱田间种群对该检测瓶的对应药剂比较敏感,田间推荐继续使用该药剂对白背飞虱进行防治。
本发明的有益效果:
本试剂盒操作简单,易于向农民推广;可以在田间使用,不需要在室内完成;节省时间,短时间即可检测出白背飞虱对药剂的敏感性;储存条件简单,货架期长。
附图说明
图1为不加成膜剂与加入成膜剂的货架期时长示意图。说明加入成膜剂可以延长货架期。
图2为白背飞虱田间种群在烯啶虫胺诊断剂量下的死亡率与其抗性倍数的相关性示意图。说明白背飞虱田间种群在烯啶虫胺诊断剂量下的死亡率与其抗性倍数显著相关(p<0.001,在0.01水平显著相关)。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细描述,以便本领域技术人员理解。
实施例1烯啶虫胺检测瓶中药膜的含药量选择:
1)称取一定量烯啶虫胺原药和成膜剂,备用;
2)杀虫剂原药置于离心管中,加入丙酮稀释得到梯度稀释液,设置5个浓度梯度:0.1mg/L、0.2mg/L、0.4mg/L、0.8mg/L、1.6mg/L,并设置空白对照组,同时均加入成膜剂;
3)将梯度浓度药液在瓶底和瓶壁上涂布均匀,成膜晾干,即得到梯度浓度烯啶虫胺玻璃瓶;
4)向不同浓度玻璃瓶中吸入15~20头健康的白背飞虱(室内敏感品系)3龄若虫,培养55~65min后检查死亡率,记录活虫数,对照组死亡率≤5%,计算检测瓶中白背飞虱的校正死亡率,公式如下:
5)使用Probit-MSChart软件处理,得到烯啶虫胺对白背飞虱室内敏感种群的LC90和95%置信区间,将LC90值作为考察田间白背飞虱种群敏感性的诊断剂量;根据药剂加入量和玻璃瓶内表面积(侧面积+底面积),将其转化为实际检测瓶中含药量使用范围和最优选用量:
其中,烯啶虫胺的含量为53.30~129.86ng/cm2,最优选用量为70.30ng/cm2
其它检测瓶与烯啶虫胺检测瓶的制备相同,从而得到其它农药的试用的检测浓度:
吡虫啉的含量为298.39~610.01ng/cm2,最优选用量为400.02ng/cm2
噻虫嗪的含量为53.10~115.34ng/cm2,最优选用量为70.21ng/cm2
噻虫胺的含量为60.55~118.62ng/cm2,最优选用量为80.55ng/cm2
呋虫胺的含量为32.02~60.06ng/cm2,最优选用量为42.02ng/cm2
异丙威的含量为5.17~15.01ng/cm2,最优选用量为7.17ng/cm2
毒死蜱的含量为41.26~103.61ng/cm2,最优选用量为61.26ng/cm2
实施例2利用实施例1的方法和检测瓶优选用量制备试剂盒
快速筛选防治白背飞虱杀虫剂的试剂盒包括吸虫器、白纸板、毛笔、烯啶虫胺检测瓶、呋虫胺检测瓶、噻虫嗪检测瓶、噻虫胺检测瓶、毒死蜱检测瓶、异丙威检测瓶、吡虫啉检测瓶和对应的对照瓶;7个检测瓶中药膜的含药量以及杀虫剂与成膜剂重量比分别为:
吡虫啉400.02ng/cm2,吡虫啉和成膜剂重量比为1:750;
噻虫嗪70.21ng/cm2,噻虫嗪和成膜剂重量比为1:3500;
噻虫胺80.55ng/cm2,噻虫胺和成膜剂重量比为1:3500;
烯啶虫胺70.30ng/cm2,烯啶虫胺和成膜剂重量比为1:3500;
呋虫胺42.02ng/cm2,呋虫胺和成膜剂重量比为1:10500;
异丙威7.17ng/cm2,异丙威和成膜剂重量比为1:10500;
毒死蜱61.26ng/cm2,毒死蜱和成膜剂重量比为1:5250;
对照瓶的瓶内壁和瓶底面均覆盖有成膜剂。
其它检测瓶也按实施例1的方法制备,对应的对照瓶铺有成膜剂。
实施例3检验上述试剂盒的货架期
选取上述试剂盒中任意一种检测瓶与对应的不加成膜剂制备的药膜玻璃管放在室内干燥避光处保存,每隔一个月进行一次检测。
结果表明,不加成膜剂制备的药膜玻璃管的货架期为2个月,加入成膜剂制备的药膜玻璃管货架期为10个月。如图1所示:加入成膜剂制备试剂盒中检测瓶货架期要长于不加成膜剂制备的药剂玻璃管。
实施例4检测方法的准确性验证
以烯啶虫胺检测瓶为例,检验湖北荆门、湖北赤壁、湖南长沙、河南信阳、安徽六安5个地区白背飞虱田间种群对烯啶虫胺的敏感性,再与监测数据中其抗性倍数进行相关性分析,
结果如下:长沙地区白背飞虱抗性倍数3.51,药膜检测死亡率80.00%;六安地区白背飞虱抗性倍数3.35,药膜检测死亡率70.00%;荆门地区白背飞虱抗性倍数1.13,药膜检测死亡率91.67%;信阳地区白背飞虱抗性倍数6.80,药膜检测死亡率61.67%;赤壁地区白背飞虱抗性倍数1.00,药膜检测死亡率88.33%。结果表明,烯啶虫胺检测瓶测得的田间种群白背飞虱矫正死亡率与其抗性倍数显著相关(如图2所示)。
实施例5利用上述试剂盒检测田间中白背飞虱的抗药性选药
以湖北荆门为例,对检测湖北荆门某田间白背飞虱的抗药性选药:
1)用试剂盒内自带吸虫器分别向烯啶虫胺、噻虫胺、噻虫嗪、吡虫啉、毒死蜱、异丙威、呋虫胺7个检测瓶和对照瓶中加入20头健康的白背飞虱田间种群3龄若虫,培养55~65min后将瓶内白背飞虱倒出置于白纸板上,用毛笔轻轻拨动虫体检查死亡率;记录活虫数,对照组死亡率≤5%,计算药剂的校正死亡率;
2)通过计算得知7个检测瓶死亡率分别为:
烯啶虫胺检测瓶中死亡率为91.67%,
噻虫嗪检测瓶中死亡率为91.67%,
噻虫嗪检测瓶中死亡率为93.33%,
吡虫啉检测瓶中死亡率为91.67%,
毒死蜱检测瓶中死亡率为78.33%,
呋虫胺检测瓶中死亡率为65.00%,
异丙威检测瓶中死亡率为61.67%。
当检测瓶中的校正死亡率大于等于90%时,即认为白背飞虱田间种群对该检测瓶的对应药剂比较敏感,田间推荐继续使用该药剂对白背飞虱进行防治。
结果说明该地区白背飞虱对烯啶虫胺、噻虫嗪、噻虫胺、吡虫啉敏感,推荐使用这些药剂。
其它未详细说明的部分均为现有技术。尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述,但它仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部实施例,人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例,这些实施例都属于本发明保护范围。

Claims (7)

1.一种快速筛选防治白背飞虱杀虫剂的试剂盒,其特征在于:它包括7个检测瓶和对应的7个对照瓶,其中,7个检测瓶的瓶内壁和瓶底面均覆盖有7种药膜,每种药膜都含有一种杀虫剂,分别为烯啶虫胺、呋虫胺、噻虫嗪、噻虫胺、毒死蜱、异丙威或吡虫啉;7个检测瓶中药膜的含药量以及杀虫剂与成膜剂重量比分别为:
吡虫啉298.39~610.01ng/cm2,吡虫啉和成膜剂重量比为1:750;
噻虫嗪53.10~115.34ng/cm2,噻虫嗪和成膜剂重量比为1:3500;
噻虫胺60.55~118.62ng/cm2,噻虫胺和成膜剂重量比为1:3500;
烯啶虫胺53.30~129.86ng/cm2,烯啶虫胺和成膜剂重量比为1:3500;
呋虫胺32.02~60.06ng/cm2,呋虫胺和成膜剂重量比为1:10500;
异丙威5.17~15.01ng/cm2,异丙威和成膜剂重量比为1:10500;
毒死蜱41.26~103.61ng/cm2,毒死蜱和成膜剂重量比为1:5250;
对照瓶的瓶内壁和瓶底面均覆盖有成膜剂。
2.根据权利要求1所述快速筛选防治白背飞虱杀虫剂的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒还包括吸虫器、白纸板和毛笔。
3.根据权利要求1所述快速筛选防治白背飞虱杀虫剂的试剂盒,其特征在于:所述成膜剂选自聚醋酸乙烯酯、水性丙烯酸树脂和壳聚糖。
4.根据权利要求1所述快速筛选防治白背飞虱杀虫剂的试剂盒,其特征在于:所述成膜剂为壳聚糖。
5.根据权利要求2所述快速筛选防治白背飞虱杀虫剂的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒包括吸虫器、白纸板、毛笔、7个检测瓶和对应的7个对照瓶,其中,7个检测瓶的瓶内壁和瓶底面均覆盖有7种药膜,每种药膜都含有一种杀虫剂,分别为烯啶虫胺、呋虫胺、噻虫嗪、噻虫胺、毒死蜱、异丙威或吡虫啉;7个检测瓶中药膜的含药量以及杀虫剂与成膜剂重量比分别为:
吡虫啉400.02ng/cm2,吡虫啉和成膜剂重量比为1:750;
噻虫嗪70.21ng/cm2,噻虫嗪和成膜剂重量比为1:3500;
噻虫胺80.55ng/cm2,噻虫胺和成膜剂重量比为1:3500;
烯啶虫胺70.30ng/cm2,烯啶虫胺和成膜剂重量比为1:3500;
呋虫胺42.02ng/cm2,呋虫胺和成膜剂重量比为1:10500;
异丙威7.17ng/cm2,异丙威和成膜剂重量比为1:10500;
毒死蜱61.26ng/cm2,毒死蜱和成膜剂重量比为1:5250;
对照瓶的瓶内壁和瓶底面均覆盖有成膜剂。
6.根据权利要求1所述快速筛选防治白背飞虱杀虫剂的试剂盒,其特征在于:所述检测瓶由以下方法制备而成:
1)根据不同检测瓶中的药膜含药量、以及杀虫剂和成膜剂重量比称取称取杀虫剂和成膜剂,备用;其中,
吡虫啉298.39~610.01ng/cm2,吡虫啉和成膜剂重量比为1:750;
噻虫嗪53.10~115.34ng/cm2,噻虫嗪和成膜剂重量比为1:3500;
噻虫胺60.55~118.62ng/cm2,虫胺和成膜剂重量比为1:3500;
烯啶虫胺53.30~129.86ng/cm2,烯啶虫胺和成膜剂重量比为1:3500;
呋虫胺32.02~60.06ng/cm2,呋虫胺和成膜剂重量比为1:10500;
异丙威5.17~15.01ng/cm2,异丙威和成膜剂重量比为1:10500;
毒死蜱41.26~103.61ng/cm2,毒死蜱和成膜剂重量比为1:5250;
2)杀虫剂置于离心管中,加入丙酮稀释得到稀释液;
3)然后加入丙酮、成膜剂和水;混匀均匀,得到药液,并将药液在瓶底和瓶壁上涂抹均匀,成膜晾干,即得到检测瓶,其中,每个检测瓶的药膜中含有一种杀虫剂,其杀虫剂为烯啶虫胺、呋虫胺、噻虫嗪、噻虫胺、毒死蜱、异丙威和吡虫啉中任意一种。
7.一种权利要求1所述试剂盒筛选杀虫剂的方法,其特征在于:包括以下步骤:
1)向不同检测瓶中吸入15~20头健康的白背飞虱(待检测田间品系)3龄若虫,培养55~65min后检查死亡率;记录活虫数,对照组死亡率≤5%,计算检测瓶中白背飞虱的校正死亡率,公式如下:
2)诊断结果判断标准:当某个检测瓶的校正死亡率大于等于90%时,即认为白背飞虱田间种群对该检测瓶的对应药剂比较敏感,田间推荐继续使用该药剂对白背飞虱进行防治。
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