CN109580893A - 一种九香虫药材的鉴别方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种九香虫药材的鉴别方法，包括性状鉴别、显微鉴别和药效鉴别，其中药效鉴别包括疼痛甩尾试验、扭体试验和抑菌作用试验。本发明通过外观观察和内部成分药效分析相结合的方法对九香虫药材进行鉴别，提高了九香虫药材的鉴别精确度，方法具有多样性，避免了结果的偶然性；此外，所述的药理学分析试验操作简单，易于理解，便于观察，试验结果可信度高。
Description
技术领域
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种九香虫药材的鉴别方法。
背景技术
九香虫，即半翅目，异翅亚目，蝽科的瓜黑蝽。是一种会飞的青黑色昆虫，指甲般大小，状如水龟，春夏季节，爬在农作物的茎叶上吸食浆液，不留心碰上它，便放出一种奇臭难闻的气体，使人避而远之，因而落个"臭板虫"，"屁巴虫"或"打屁虫"的臭名。屁巴虫含有九香虫油，一经炒熟之后，即是一种香美可口、祛病延年的药用美食，因此，它又赢得了"九香虫"的美称。全虫含脂肪，蛋白质，甲壳(chitin)等，脂肪中有硬脂酸(stearicacid)，棕榈酸(palmiticacid)，油酸(oleicacid)。其特殊臭味来源于醛、酮成分。还含锰、镁等微量元素。九香虫在试管内对金黄色葡萄球菌、伤寒杜菌、甲型副伤寒杆菌及福氏痢疾杆菌有较强的抑制作用。元素分析表明，九香虫的抗癌、抑癌元素锰和镁的含量较高，至癌元素镍、铬、砷、镉、铍的含量较低，似可能有抗癌作用。
目前，对九香虫药材的鉴定并没有明确的方法，大部分还是从其表观性状上进行鉴定，并没有从其成分及药效等方面去鉴定，且方法过于简单，缺乏一定的可信度。因此，设计一种操作简单，易于实施，可信度更高，易于理解的九香虫药材的鉴定方法具有重要的经济、社会和现实意义。
发明内容
本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供一种结构简单，设计合理的一种九香虫药材的鉴别方法。
本发明通过以下技术方案来实现上述目的：
一种九香虫药材的鉴别方法，包括以下步骤：
步骤S1：性状鉴定
取一定数量待鉴定个体，观察个体的外观，包括体表颜色、体长、眼状、质地及气味，若符合九香虫性状的则进行下一步鉴定；
步骤S2：显微鉴别
将步骤S1的待鉴定个体干燥，分别肢解成碎片和粉末状，观察粉末的性状，包括粉末颜色，显微观察碎片外观，包括体壁片性状、横纹肌性状和近壁碎片颜色，若符合九香虫显微性状的则进行下一步鉴定；
步骤S3：药效鉴别
将上述步骤S2获得的粉末溶解于正己烷溶剂中，加热、搅拌、分离，去除正己烷溶剂，得提取液，进行药效鉴别，包括：
测定提取液中的脂肪酸酸值；
通过小鼠热痛甩尾和扭体试验测定提取液的止痛药效；
测定提取液对金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌和福氏痢疾杆菌的抑菌能力；
若所述酸值为100-150mg/g之间、小鼠热痛甩尾的次数及扭体次数均下降至对应的对照组的一半、且对金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌和福氏痢疾杆菌均具有抑菌能力，则该待鉴定个体为具有药用价值的九香虫药材。
作为本发明的进一步优化方案，所述步骤S1中，符合九香虫性状的表现形式包括：表面棕褐色或棕黑色，呈六角状扁椭圆形，长1.6-2cm，宽1cm，复眼突出，单眼一对，触角一对各五节，质脆，气特异味微咸。
作为本发明的进一步优化方案，所述步骤S2中的九香虫显微性状包括：粉末为棕粉色，体壁片呈深棕色，表面有鱼鳞状突起并有黄色凹窝散在，上有长3-4mm的刚毛着生；横纹肌纤维发达，单个或成束，多碎断呈薄片状，有细密横纹，明暗相间呈波状纹理；近壁碎片淡棕色，具棕色螺旋丝，排列呈栅栏状，丝间有淡灰色斑点。
作为本发明的进一步优化方案，所述步骤S3中加热温度为50-70℃，所述分离方法为离心、过滤或超滤，所述搅拌时间为10-30min。
作为本发明的进一步优化方案，所述步骤S3中小鼠热痛甩尾试验具体步骤为：取若干小鼠，喂食步骤S3获得提取液，0.5-1h后，将小鼠依次放置于疼痛甩尾测量仪上，施加激光后，记录小鼠的疼痛反应时间，同时以水代替提取液作为对照组。
作为本发明的进一步优化方案，所述步骤S3中扭体反应试验具体步骤为：取若干小鼠，喂食步骤S3获得的提取液，0.5-1h后，向小鼠体内注射醋酸，观察并记录小鼠扭体反应次数，同时以生理盐水代替提取液作为对照组。
作为本发明的进一步优化方案，所述S3中抑菌试验具体操作为：在涂布有试验菌的琼脂平板上涂布稀释后的提取液，在20-30℃下培养并观察抑菌能力，其中所述的试验菌为金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌或福氏痢疾杆菌。
本发明的有益效果在于：
1)本发明通过外观观察和内部成分药效分析相结合的方法对九香虫药材进行鉴定，提高了九香虫药材的鉴定精确度，方法具有多样性，避免了结果的偶然性；
2)本发明对九香虫内部成分的药理学分析试验操作简单，易于理解，便于观察，试验结果可信度高；
3)本发明成本低，设计合理，便于实现。
具体实施方式
下面对本申请作进一步详细描述，有必要在此指出的是，以下具体实施方式只用于对本申请进行进一步的说明，不能理解为对本申请保护范围的限制，该领域的技术人员可以根据上述申请内容对本申请作出一些非本质的改进和调整。
一种九香虫药材的鉴别方法，包括以下步骤：
步骤S1：性状鉴定
取一定数量待鉴定个体，观察个体的外观，包括体表颜色、体长、眼状、质地及气味，若个体表面棕褐色或棕黑色，呈六角状扁椭圆形，长1.6-2cm，宽1cm，复眼突出，单眼一对，触角一对各五节，质脆，气特异味微咸，则进行下一步鉴定。
步骤S2：显微鉴别
将步骤S1的待鉴定个体干燥，分别肢解成碎片和粉末状，观察粉末的性状，包括粉末颜色，显微观察碎片外观，包括体壁片性状、横纹肌性状和近壁碎片颜色，若粉末为棕粉色，体壁片呈深棕色，表面有鱼鳞状突起并有黄色凹窝散在，上有长3-4mm的刚毛着生；横纹肌纤维发达，单个或成束，多碎断呈薄片状，有细密横纹，明暗相间呈波状纹理；近壁碎片淡棕色，具棕色螺旋丝，排列呈栅栏状，丝间有淡灰色斑点，则进行下一步鉴定。
步骤S3：药效鉴别
将上述步骤S2获得的粉末溶解于正己烷溶剂中，加热至50-70℃、搅拌10-30min、采用离心、过滤或超滤的方式分离，去除正己烷溶剂，得提取液，进行药效鉴别，所述提取液的主要成分应为九香虫油，所述药效鉴别方法包括：
测定提取液中的脂肪酸酸值；
通过小鼠热痛甩尾和扭体试验测定提取液的止痛药效：
小鼠热痛甩尾试验具体步骤为：取若干小鼠，喂食步骤S3获得提取液，0.5-1h后，将小鼠依次放置于疼痛甩尾测量仪上，施加激光后，记录小鼠的疼痛反应时间，同时以水代替提取液作为对照组；
小鼠扭体反应试验具体步骤为：取若干小鼠，喂食步骤S3获得的提取液，0.5-1h后，向小鼠体内注射醋酸，观察并记录小鼠扭体反应次数，同时以生理盐水代替提取液作为对照组；
测定提取液对金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌和福氏痢疾杆菌的抑菌能力，具体操作为：在涂布有试验菌的琼脂平板上涂布稀释后的提取液，在20-30℃下培养并观察抑菌能力，其中所述的试验菌为金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌或福氏痢疾杆菌。
若所述酸值为100-150mg/g之间、小鼠热痛甩尾的次数及扭体次数均下降至对应的对照组的一半、且对金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌和福氏痢疾杆菌均具有抑菌能力，则该待鉴定个体为具有药用价值的九香虫药材。
实施例1
一种九香虫药材的鉴别方法，包括以下步骤：
步骤S1：性状鉴定
取一定数量待鉴定个体，观察个体的外观，包括体表颜色、体长、眼状、质地及气味，若个体表面棕褐色或棕黑色，呈六角状扁椭圆形，长1.6-2cm，宽1cm，复眼突出，单眼一对，触角一对各五节，质脆，气特异味微咸，则进行下一步鉴定。
步骤S2：显微鉴别
将步骤S1的待鉴定个体干燥，分别肢解成碎片和粉末状，观察粉末的性状，包括粉末颜色，显微观察碎片外观，包括体壁片性状、横纹肌性状和近壁碎片颜色，若粉末为棕粉色，体壁片呈深棕色，表面有鱼鳞状突起并有黄色凹窝散在，上有长3-4mm的刚毛着生；横纹肌纤维发达，单个或成束，多碎断呈薄片状，有细密横纹，明暗相间呈波状纹理；近壁碎片淡棕色，具棕色螺旋丝，排列呈栅栏状，丝间有淡灰色斑点，则进行下一步鉴定。
步骤S3：药效鉴别
将上述步骤S2获得的粉末溶解于正己烷溶剂中，加热至50℃、搅拌30min、采用离心的方式分离，去除正己烷溶剂，得提取液，进行药效鉴别，包括：
测定提取液中的脂肪酸酸值；
通过小鼠热痛甩尾和扭体试验测定提取液的止痛药效；
测定提取液对金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌和福氏痢疾杆菌的抑菌能力。
所述小鼠热痛甩尾试验具体步骤为：取20只体重在18-20g的小鼠，随机等分成两组，一组喂食步骤S3获得提取液，另一组喂食等量水，0.5h后，将两组小鼠分别依次放置于疼痛甩尾测量仪上，施加激光后，记录小鼠的疼痛反应时间。
所述扭体反应试验具体步骤为：取20只体重在18-20g的小鼠，随机均分为两组，一组喂食步骤S3获得的提取液，另一组喂食等量生理盐水，0.5h后，向两组小鼠体内注射醋酸，观察并记录两组小鼠扭体反应次数。
所述抑菌试验具体操作为：在涂布有试验菌的琼脂平板上涂布稀释后的提取液，在20℃下培养并观察抑菌能力，其中所述的试验菌为金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌或福氏痢疾杆菌，同时以只涂布有试验菌的琼脂平板作为对照组。
实施例2
一种九香虫药材的鉴别方法，包括以下步骤：
步骤S1：性状鉴定
取一定数量待鉴定个体，观察个体的外观，包括体表颜色、体长、眼状、质地及气味，若个体表面棕褐色或棕黑色，呈六角状扁椭圆形，长1.6-2cm，宽1cm，复眼突出，单眼一对，触角一对各五节，质脆，气特异味微咸，则进行下一步鉴定。
步骤S2：显微鉴别
将步骤S1的待鉴定个体干燥，分别肢解成碎片和粉末状，观察粉末的性状，包括粉末颜色，显微观察碎片外观，包括体壁片性状、横纹肌性状和近壁碎片颜色，若粉末为棕粉色，体壁片呈深棕色，表面有鱼鳞状突起并有黄色凹窝散在，上有长3-4mm的刚毛着生；横纹肌纤维发达，单个或成束，多碎断呈薄片状，有细密横纹，明暗相间呈波状纹理；近壁碎片淡棕色，具棕色螺旋丝，排列呈栅栏状，丝间有淡灰色斑点，则进行下一步鉴定。
步骤S3：药效鉴别
将上述步骤S2获得的粉末溶解于正己烷溶剂中，加热至60℃、搅拌20min、采用过滤的方式分离，去除正己烷溶剂，得提取液，进行药效鉴别，包括：
测定提取液中的脂肪酸酸值；
通过小鼠热痛甩尾和扭体试验测定提取液的止痛药效；
测定提取液对金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌和福氏痢疾杆菌的抑菌能力。
所述小鼠热痛甩尾试验具体步骤为：取20只体重在18-20g的小鼠，随机等分成两组，一组喂食步骤S3获得提取液，另一组喂食等量水，45min后，将两组小鼠分别依次放置于疼痛甩尾测量仪上，施加激光后，记录小鼠的疼痛反应时间。
所述扭体反应试验具体步骤为：取20只体重在18-20g的小鼠，随机均分为两组，一组喂食步骤S3获得的提取液，另一组喂食等量生理盐水，45min后，向两组小鼠体内注射醋酸，观察并记录两组小鼠扭体反应次数。
所述抑菌试验具体操作为：在涂布有试验菌的琼脂平板上涂布稀释后的提取液，在25℃下培养并观察抑菌能力，其中所述的试验菌为金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌或福氏痢疾杆菌，同时以只涂布有试验菌的琼脂平板作为对照组。
实施例3
一种九香虫药材的鉴别方法，包括以下步骤：
步骤S1：性状鉴定
取一定数量待鉴定个体，观察个体的外观，包括体表颜色、体长、眼状、质地及气味，若个体表面棕褐色或棕黑色，呈六角状扁椭圆形，长1.6-2cm，宽1cm，复眼突出，单眼一对，触角一对各五节，质脆，气特异味微咸，则进行下一步鉴定。
步骤S2：显微鉴别
将步骤S1的待鉴定个体干燥，分别肢解成碎片和粉末状，观察粉末的性状，包括粉末颜色，显微观察碎片外观，包括体壁片性状、横纹肌性状和近壁碎片颜色，若粉末为棕粉色，体壁片呈深棕色，表面有鱼鳞状突起并有黄色凹窝散在，上有长3-4mm的刚毛着生；横纹肌纤维发达，单个或成束，多碎断呈薄片状，有细密横纹，明暗相间呈波状纹理；近壁碎片淡棕色，具棕色螺旋丝，排列呈栅栏状，丝间有淡灰色斑点，则进行下一步鉴定。
步骤S3：药效鉴别
将上述步骤S2获得的粉末溶解于正己烷溶剂中，加热至70℃、搅拌10min、采用超滤的方式分离，去除正己烷溶剂，得提取液，进行药效鉴别，包括：
采用铜皂比色法测定提取液中的脂肪酸酸值；
通过小鼠热痛甩尾和扭体试验测定提取液的止痛药效；
测定提取液对金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌和福氏痢疾杆菌的抑菌能力。
所述小鼠热痛甩尾试验具体步骤为：取20只体重在18-20g的小鼠，随机等分成两组，一组喂食步骤S3获得提取液，另一组喂食等量水，1h后，将两组小鼠分别依次放置于疼痛甩尾测量仪上，施加激光后，记录小鼠的疼痛反应时间。
所述扭体反应试验具体步骤为：取20只体重在18-20g的小鼠，随机均分为两组，一组喂食步骤S3获得的提取液，另一组喂食等量生理盐水，1h后，向两组小鼠体内注射醋酸，观察并记录两组小鼠扭体反应次数。
所述抑菌试验具体操作为：在涂布有试验菌的琼脂平板上涂布稀释后的提取液，在30℃下培养并观察抑菌能力，其中所述的试验菌为金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌或福氏痢疾杆菌，同时以只涂布有试验菌的琼脂平板作为对照组。
上述实施例1-3中，对于九香虫药材中的脂肪酸酸值的检测结果如下表1所示：
表1：三组实施例提取液脂肪酸酸值测定结果
| 脂肪酸酸值(mg/g) | |
| 实施例1 | 127 |
| 实施例2 | 136 |
| 实施例3 | 101 |
| 九香虫油脂肪酸 | 100-150 |
上表结果表明：在对经过表面性状鉴定合格后的九香虫药材提取液进行酸度检测后，实施例1和2中的待鉴定样品中的脂肪酸酸值均在100-150mg/g的范围内，基本符合九香虫油脂肪酸酸值的范围，表明待鉴定样品的脂肪酸含量与九香虫药材提取液脂肪酸含量匹配，可能是九香虫药材，但实施例3的酸值较低，需要进一步鉴定。
上述实施例1-3中，取脂肪酸酸值测定合格后的待鉴定样品提取液进行小鼠疼痛甩尾试验，其结果如下表2，表2中的小鼠疼痛反应时间为各组的平均值，且取整数：
| 疼痛反应时间值(s) | |
| 实施例1 | 29 |
| 对照组1 | 5 |
| 实施例2 | 33 |
| 对照组2 | 7 |
| 实施例3 | 18 |
| 对照组3 | 15 |
上述结果表明：实施例1和2的待鉴定的九香虫油对于小鼠具有止痛作用，可在一定程度上抑制疼痛，与九香虫的止痛的医用效果相一致，进一步确定实施例1和2的待鉴定样品可能是真正的九香虫药材，而实施例3的待鉴定样品提取液则没有止痛作用，可能不是九香虫药材，为排除偶然因素，需要再次进行其他鉴定。
为了进一步鉴定该待鉴定样品为九香虫药材，取酸值检测合格和具有止痛效果的待鉴定样品的提取液进行小鼠扭体试验，其结果如下表3，表3中的小鼠疼痛反应时间为各组的平均值，且取整数：
| 扭体次数(次/20min) | |
| 实施例1 | 17 |
| 对照组1 | 33 |
| 实施例2 | 21 |
| 对照组2 | 45 |
| 实施例3 | 28 |
| 对照组3 | 31 |
上述结果进一步表明：实施例1和2的待鉴定的九香虫油对于小鼠具有一定的止痛作用，可在一定程度上抑制疼痛，缓解疼痛感受，减少小鼠的扭体次数，与九香虫的医用效果相一致，实施例1和2为具有药用价值的九香虫药材，而实施例3的止痛效果不明显。
上述实施例1-3中，取酸值检测合格和具有止痛效果的待鉴定样品进行抑菌作用试验，其结果如下表4：
注：“+”表示出现抑菌圈，且抑菌圈数量较多，直径较大，“-”表示未出现抑菌圈。
上述结果进一步表明：实施例1和2的待鉴定样品提取液对金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌和福氏痢疾杆菌均具有抑制作用，与九香虫的抑菌医用效果相一致，实施例1和2为九香虫药材，而实施例3仅对副伤寒杆菌具有抑菌效果，结合各鉴定试验结果，确定实施例3的待鉴定样品并不是真正具有药用价值的九香虫药材。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种九香虫药材的鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤S1：性状鉴定
取一定数量待鉴定个体，观察个体的外观，包括体表颜色、体长、眼状、质地及气味，若符合九香虫性状的则进行下一步鉴定；
步骤S2：显微鉴别
将步骤S1的待鉴定个体干燥，分别肢解成碎片和粉末状，观察粉末的性状，包括粉末颜色，显微观察碎片外观，包括体壁片性状、横纹肌性状和近壁碎片颜色，若符合九香虫显微性状的则进行下一步鉴定；
步骤S3：药效鉴别
将上述步骤S2获得的粉末溶解于正己烷溶剂中，加热、搅拌、分离，去除正己烷溶剂，得提取液，进行药效鉴别，包括：
测定提取液中的脂肪酸酸值；
通过小鼠热痛甩尾和扭体试验测定提取液的止痛药效；
测定提取液对金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌和福氏痢疾杆菌的抑菌能力；
若所述酸值为100-150mg/g之间，小鼠热痛甩尾的次数及扭体次数均下降至对照组的一半，且对金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌和福氏痢疾杆菌均具有抑菌能力，则该待鉴定个体为具有药用价值的九香虫药材。
2.根据权利要求1所述的一种九香虫药材的鉴别方法，其特征在于，所述步骤S1中，符合九香虫性状的表现形式包括：表面棕褐色或棕黑色，呈六角状扁椭圆形，长1.6-2cm，宽1cm，复眼突出，单眼一对，触角一对各五节，质脆，气特异味微咸。
3.根据权利要求1所述的一种九香虫药材的鉴别方法，其特征在于，所述步骤S2中的九香虫显微性状包括：粉末为棕粉色，体壁片呈深棕色，表面有鱼鳞状突起并有黄色凹窝散在，上有长3-4mm的刚毛着生；横纹肌纤维发达，单个或成束，多碎断呈薄片状，有细密横纹，明暗相间呈波状纹理；近壁碎片淡棕色，具棕色螺旋丝，排列呈栅栏状，丝间有淡灰色斑点。
4.根据权利要求1所述的一种九香虫药材的鉴别方法，其特征在于：所述步骤S3中加热温度为50-70℃，所述分离方法为离心、过滤或超滤，所述搅拌时间为10-30min。
5.根据权利要求1所述的一种九香虫药材的鉴别方法，其特征在于，所述步骤S3中小鼠热痛甩尾试验具体步骤为：取若干小鼠，喂食步骤S3获得提取液，0.5-1h后，将小鼠依次放置于疼痛甩尾测量仪上，施加激光后，记录小鼠的疼痛反应时间，同时以水代替提取液作为对照组。
6.根据权利要求1所述的一种九香虫药材的鉴别方法，其特征在于，所述步骤S3中扭体反应试验具体步骤为：取若干小鼠，喂食步骤S3获得的提取液，0.5-1h后，向小鼠体内注射醋酸，观察并记录小鼠扭体反应次数，同时以生理盐水代替提取液作为对照组。
7.根据权利要求1所述的一种九香虫药材的鉴别方法，其特征在于，在涂布有试验菌的琼脂平板上涂布稀释后的提取液，在20-30℃下培养并观察抑菌能力，其中所述的试验菌为金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌或福氏痢疾杆菌。
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|---|---|---|---|---|
| CN110632240A (zh) * | 2019-11-08 | 2019-12-31 | 亳州职业技术学院 | 一种中药土鳖虫的鉴定试剂盒及其鉴定方法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110632240A (zh) * | 2019-11-08 | 2019-12-31 | 亳州职业技术学院 | 一种中药土鳖虫的鉴定试剂盒及其鉴定方法 |
| CN110632240B (zh) * | 2019-11-08 | 2021-11-02 | 亳州职业技术学院 | 一种中药土鳖虫的鉴定试剂盒及其鉴定方法 |
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